1- Introduction :

Microbiologie, est un domaine dtudes sintressant aux organismes de taille

microscopique, en particulier aux bactries, aux protozoaires, aux virus ainsi
qu certains champignons (levures) et algues unicellulaires de petite taille.
Types de micro-organismes On groupe sous le nom de micro-organismes les
tres vivants constitus d'une seule cellule et, dans la majorit des cas, invisibles
l'il nu. Au sens strict, cette dfinition rassemble les bactries, les algues, les
champignons unicellulaires et les protozoaires ( animaux unicellulaires ). Par
extension, on y ajoute les virus qui, incapables de se reproduire seuls (sans
parasiter une cellule vivante), ne font pas proprement parler partie du monde
vivant. Par commodit, et bien qu'ils n'appartiennent pas au vivant, on peut
galement ranger dans le groupe des micro-organismes les prions, de simples
protines dfectueuses, ainsi que les virodes (non illustrs dans ce tableau),
composs de matriel gntique (ARN) dpourvu de protines.
La microbiologie englobe lensemble des disciplines biologiques qui concernent
ces micro-organismes, notamment la bactriologie, la virologie et la
parasitologie. La microbiologie, qui sest dveloppe de concert avec la
microscopie, tudie non seulement la morphologie des micro-organismes, mais
galement leur mode de vie, leur mtabolisme, leur structure molculaire, leurs
ventuelles proprits pathognes et leurs caractristiques antigniques (propres
susciter une rponse du systme immunitaire).
La naissance de la microbiologie correspond la dcouverte, grce au
microscope, de lexistence dune vie minuscule, notamment dans des gouttes
deau ou autres surfaces : cest le naturaliste hollandais Antonie Van
Leeuwenhoek qui, le premier, en 1683, observe de tels micro-organismes
(bactries et protozoaires), quil baptise animalcules .

2- But :
Lisolement de micro-organismes partir du sol.

3- Principe :
Lisolement consiste raliser a partir dun chantillon des suspensions dilution.
Ces dernires sont ensemences sur milieu de culture solide. Au terme de
lincubation, les germes contenus dans le sol seront dvelopps. Chaque germe
sera lorigine dune colonie, le comptage des colonies permet par mthode de
calcul simple destimer la quantit de germes contenue dans le sol tudi.

4- Mode opratoire :
Prcautions gnrales de travail :
-

Tous les objets utiliss doivent tre striles.

Les mains laves a lalcool.
La paillasse doit tre lave leau de javel.
Le travail doit seffectuer dans la zone de protection du bec benzne,
labri des courants dair.
- Il faut flamber les goulots des tubes et flacons aprs leur ouverture et
avant leur fermeture.
- Les boites de ptri doivent tre ouvertes en maintenant le couvercle a
loblique avec ouverture du cot de la flamme.
On prenne deux chantillons diffrents de sol le premier est de sol cultiv (E1)
et le deuxime de sol nu (E2) et on faire pour tous les deux manipulations
suivantes :

a- Dilution :
Le sol est trs riche en micro-organismes cest pour a on faire cette dilution
pour facilit le comptage de ces micro-organismes, lorsque la dilution augmente
le pourcentage de colonies diminu.
- 10g de sol tamis est pes et mlang 90ml deau distill la dilution 10
1
est ainsi ralise.
- 1ml de cette dilution est prlev et mlang 9ml deau distill strile, la
dilution 10 2 est ainsi ralise jusqu' la dilution 10 8 .

b- Ensemencement :
- Lensemencement a 0.1ml de chaque dilution de10 1 ,10 4 et 10 8 est
prlev a laide dune pipette et dpose dans une boite de ptri. Le milieu de
culture maintenu en surfusion a ltat liquide a 70c est refroidie et coul dans la
boite de ptri. Aprs solidification du milieu les boites sont retourns et mises a
incuber a 27c pendant une semaine.

Pour chaque tube on fait deux rptitions.

5- Calculs et rsultats :
1- la concentration du sol en germes :
Le comptage :
Nome internationale : 300 > nombre de colonie >30
Dilution
Echantillon 1 Echantillon 2
1
10
164 colonies >300 limin
2
10
<30 limin
>300 limin
3
10
<30 limin
>300 limin
4
10
<30 limin
>300 limin
5
10
<30 limin
>300 limin
6
10
<30 limin
>300 limin
7
10
<30 limin
>300 limin
8
10
<30 limin
262 colonies
Calcul de la concentration :
Echantillon 1 :
0.1ml
164 colonies
10ml
X1 colonies
X1 =

10 164
0.1

= 16400 colonies dans la dilution 10 1

Il y a 16400 colonies dans 1g de sol.

16400 10 6 = 164 10 8 germes dans 1g de sol.
Donc il y a 164 10 8 germes dans 1g de sol (164 10 8 germes/1g de
sol).
Echantillon 2 :
0.1ml
262 colonies
10ml
X2 colonies
X2 =

10 262
0.1

= 26200 colonies dans la dilution 10 8

26200 colonies
Y colonies
Y=

10 1 26200
10 8

10 8
10 1
= 262 10 9 colonies

Il y a 262 10 9 colonies dans 1g de sol.

262 10 9 10 6 = 262 10 15 germes dans 1g de sol.
Donc il y a 262 10 15 germes dans 1g de sol (262 10 15 germes/1g de
sol).

2 La description macromorphologique :
Critres
Colonie

La couleur

N : 01
N : 02

Blanc cass circulaire

Jaune clair irrgulire

N : 03

Blanc cass En dent de

pus
Vert dartre Irrgulire

N : 04

La forme

Laspect

La taille

Llvation

lisse
A centre
plisse
A bord
plisse
plisse

0.65cm
0.9cm
0.7cm
1cm
0.7cm
0.2cm
0.5cm

convexe
Plate
Cartes
forme
Crates
forme

6- Interprtation :
Lorsquon observer les boites de ptri aprs une semaine on a trouve que :
Les deux chantillons sont riches en micro-organismes.
Les diffrents dilutions divers au nombre des colonies (germes).
Les bactries se dveloppent plus que les champignons.
Le sol nu contient des micro-organismes beaucoup plus que le sol
cultiv.

7- Conclusion :
Malgr les deux chantillons ayant une activit biologique mais le sol nu est le
plus riche en micro-organismes que le sol cultiv c'est--dire quil y a une
fertilit du sol au sol nu par contre le sol cultiv est moins fertile cest quon doit
conclue quil y a une utilisation des engrais qui influes au vie du microorganismes et au biologie du sol .