Laboratorio

La membrana y el transporte celular

Objetivos
Al finalizar este laboratorio el estudiante podr:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Describir los componentes de las membranas biolgicas.

Identificar factores que afectan la integridad de las membranas.
Explicar cmo la difusin y la osmosis son importantes para las clulas.
Mencionar factores que afectan la velocidad de difusin.
Explicar qu son soluciones hipotnicas, hipertnicas e isotnicas.
Explicar las diferencias en osmolaridad en los tejidos animales y vegetales.

INTRODUCCIN

as membranas celulares son barreras selectivas que separan las clulas y forman
compartimientos intracelulares. Entre sus funciones estn:
Regular el transporte de molculas que entran o salen de la clula o del
organelo.
Generar seales para modificar el metabolismo.
Adherir clulas para formar tejidos.

La membrana celular est formada por una capa doble de fosfolpidos, protenas y carbohidratos. (Fig; 7.1).
Cada fosfolpido est compuesto por glicerol, cidos grasos y fosfato, que en conjunto crean una barrera
hidrofbica entre los compartimientos acuosos de la clula. Las protenas permiten el paso de molculas
hidroflicas a travs de la membrana, determinan las funciones especficas de sta e incluyen bombas,
canales, receptores, molculas de adhesin, transductores de energa y enzimas. Las protenas perifricas
estn asociadas con las superficies, mientras que las integrales estn incrustadas en la membrana y pueden
atravesar completamente la capa doble. La funcin de los carbohidratos adheridos a las protenas
(glucoprotenas) o a los fosfolpidos (glucolpidos) es la de adhesin y comunicacin intercelular. El
colesterol, que es un esteroide (lpido), determina la fluidez de la membrana.

Glicoprotena
Protena
Protena
perifrica
Periferal

Canal de
Transporte

Colesterol
Fosfolpidos

Figura

Protena
Integral

7.1

Estructura bsica de la membrana.

TRANSPORTE CELULAR: DIFUSIN Y OSMOSIS

Para que la clula funcione eficientemente, debe mantenerse en la misma un ambiente estable conocido
como homeostasis. Para mantener este equilibrio existen mecanismos para el transporte selectivo de
materiales hacia el interior o exterior de la clula. Las membranas de la clula son selectivamente
permeables, permitiendo el paso de algunas sustancias o partculas (molculas, tomos, o iones), e
impidiendo el paso de otras. Esta selectividad se debe a la capa doble de fosfolpidos de la membrana. La
forma en que las molculas pasan por la membrana depende en parte de la polaridad de las mismas. Las
molculas hidrofbicas, o no polares, pasan con relativa libertad a travs de la capa de lpidos, mientras que
molculas hidroflicas, o polares, incluyendo el agua, y las molculas de mayor tamao, pasan a travs de
canales formados por protenas transportadoras. La regulacin del transporte de las molculas, o la
direccin en que se mueven depende de su gradiente de concentracin (diferencia en concentracin entre
dos lugares).
Las molculas se mueven constantemente debido a su energa cintica y se esparcen uniformemente en el
espacio disponible. Este movimiento, llamado movimiento browniano, es la fuerza motriz de la difusin.
Difusin se define como el movimiento natural de las partculas de un rea de mayor concentracin a un
rea de menor concentracin hasta alcanzar un equilibrio dinmico, en el cual el movimiento neto de
partculas es cero. La difusin no requiere gasto de energa por parte de la clula y por lo tanto es un
movimiento pasivo. Cuando la clula transporta sustancias en contra de un gradiente de concentracin (de
un rea de menor concentracin a un rea de mayor concentracin) se requiere energa (ATP) y sucede
movimiento activo.

Figura 7.2
Osmosis. Difusin de molculas de agua. El
movimiento del agua ser de un lugar de mayor
concentracin de molculas de agua a un lugar con
menos concentracin de molculas de agua hasta llegar a
un equilibrio dinmico. Los hexgonos rojos en el
diagrama representan solutos y los puntos azules
molculas de agua.

El componente principal de la clula es el agua, que acta como solvente (el agente que disuelve) de
solutos (molculas orgnicas e inorgnicas suspendidas en la solucin). El movimiento de agua a travs de
las membranas (que son selectivamente permeables) se llama osmosis (difusin de agua) y sucede siempre
del rea de mayor concentracin de agua (con menor concentracin de soluto) al rea de menor
concentracin de agua (con mayor concentracin de soluto) (Figura 7.2). El agua se mover, entonces, a
favor de un gradiente de concentracin hacia el rea de mayor concentracin de soluto (donde hay una
menor concentracin de molculas de agua libres). Cuando la clula contiene una concentracin de solutos
mayor que su ambiente externo, se dice que la clula est hipertnica a su ambiente y externo que este
ambiente es hipotnico, y como consecuencia, el agua entra a la clula causando que sta se expanda (Fig.
7.3a). Si la concentracin de solutos es mayor fuera de la clula, se dice que la clula est hipotnica a su
ambiente y que el ambiente externo es hipertnico; y la clula pierde agua y se encoge (Fig. 7.3c). Si las
concentraciones de soluto son iguales en ambos lados de la membrana, se dice que la clula y su ambiente
externo estn isotnicos, donde el movimiento neto de molculas es cero (Figura 7.3b).
Las clulas animales funcionan ptimamente en ambientes isotnicos. En las clulas vegetales, sin embargo,
cuando la vacuola se llena de agua, sta ejerce presin contra la pared celular hasta llegar a un punto donde se
impide que entre ms agua (por presin de turgencia) y la clula se pone trgida (firme), lo cual es el estado
ideal de estas clulas. Por otra parte, si la clula vegetal pierde agua, la clula sufre plasmlisis al separarse la
membrana celular de la pared celular, lo cual suele ser letal para la clula.

(a)

(b)

H2O

Solucin hipotnica
Figura

(c)

H2O

Solucin isotnica

H2O

Solucin hipertnica

7.3

Osmosis: transporte de agua a travs de una membrana permeable. En el diagrama la bolsa representa una
membrana selectivamente permeable y el lquido en el envase es una solucin en la cual el soluto es sal (cloruro
de sodio). (a) La concentracin de sal en la solucin del envase es ms baja (solucin hipotnica) que la
concentracin de sal dentro de la bolsa. (b) La concentracin de sal en las soluciones dentro de la bolsa y fuera
en el envase son iguales (solucin isotnica). (c) La concentracin de sal en la solucin del envase es ms alta
(solucin hipertnica) que la concentracin de sal dentro de la bolsa.

EJERCICIO 7.1

PROPIEDADES

DE

LAS

MEMBRANAS

En los ejercicios que siguen a continuacin se estudiar cmo algunos factores afectan el
funcionamiento de las membranas celulares.

A. Efecto de la temperatura
En este ejercicio se usar la planta de remolacha (Beta vulgaris), cuyas clulas almacenan en la vacuola
central el pigmento violeta betacianina.
M A T E R I A L E S

Por laboratorio:
Agua destilada
Bao de agua a 70 C
Bao de agua a 37 C
Por mesa:
Gradilla para tubos de ensayo
Dos vasos de 150 a 200 ml
Una remolacha
Seis tubos de ensayo
Vaso con hielo
Sacabocado
Termmetro
Regla
Marcador de cera

Hielo
Nevera

Navaja
Agarradera de tubo de ensayo
Plato para calentar
Aguja de diseccin
Probetas o pipetas de 5 ml
Envase con hielo
Plato para calentar u hornilla

P R O C E D I M I E N T O

1. Corte seis pedazos de remolacha (15 mm de largo) con un sacabocado y colquelos en tubos
de ensayo rotulados del 1 al 6.

2. Aada 5 ml de agua al tubo 6 y colquelo en el congelador por 30 min.

3. Aada 5 ml de agua al tubo 5 y colquelo en el bao de hielo por 30 min.

4. Aada 5 ml de agua al tubo 1 y colquelo en un bao de agua caliente a 70 C durante 1 min.

Despus de 20 min, remueva el pedazo de remolacha del tubo.
5. Deje que la temperatura del bao baje a 55 C y haga lo mismo con el tubo 2.
6. Repita el procedimiento de arriba con el tubo 3 a 37 C y con el tubo 4 a 20 C.
7. Compare la intensidad de color de las soluciones en los tubos.
8. Coloque los resultados (intensidad de color vs. temperatura) en la Tabla 7.1.
Tabla 7.1
Tubo

Temperatura

1
2
3
4
5
6

70 C
55 C
37 C
20 C
En bao de hielo
En congelador

Efecto de temperatura
Intensidad de color
(1 = menos intenso; 6 = ms intenso)

9. Qu tubo mostr ms intensidad de color?

10. Qu indica la intensidad del color?
11. Cmo afectan las temperaturas altas a las membranas celulares?
12. Qu le pasa a las clulas en temperaturas bajas?

TRANSPORTE

EJERCICIO 7.2

CELULAR:

DIFUSIN

OSMOSIS

A. Difusin
A.1. Difusin de molculas en agua
En este ejercicio, se estudiar el movimiento browniano de las molculas y el efecto de la temperatura
sobre dicho movimiento.
M A T E R I A L E S

Por mesa:
Dos vasos de precipitacin (beakers)
Agua fra

Agua a temperatura ambiente

Colorante vegetal

P R O C E D I M I E N T O

1.
2.
3.
4.

Aada agua a temperatura ambiente a un vaso y al otro vaso aada agua fra.
Deje los vasos reposar por 10-15 min para que no haya movimiento del agua.
Aada cuidadosamente una gota de colorante a cada envase y observe la dispersin de la gota.
Afect la temperatura la difusin del tinte? Explica tu observacin.

A.2. Difusin a travs de una membrana selectivamente permeable (dilisis)

En este ejercicio se usar una membrana de dilisis que posee poros de un tamao determinado y
que acta como una membrana selectivamente permeable.
M A T E R I A L E S

Por mesa:
Un vaso de precipitacin (beaker) de
500 ml
Una bolsa de dilisis y cordn o
bandas de goma
Rejilla y tubos de ensayo pequeos
Bao de mara y matraz
pequeo con agua

Agarradera de tubo de ensayo

Reactivo de Benedict
Solucin de yodo
Cilindro graduado

Por laboratorio:
Solucin de glucosa 30 % y solucin de almidn 1 %. Se usarn aproximadamente 25 ml de
cada una por mesa (150 ml de cada solucin por laboratorio).
P R O C E D I M I E N T O

1. Corte la bolsa de dilisis a 25 cm de largo y pngala en agua por unos minutos para abrirla.
2. Aada a la bolsa aproximadamente la mitad de la solucin de glucosa y la mitad de la solucin
de almidn.
3. Cierre la bolsa con un cordn o con una banda de goma, de forma que luego pueda abrirla
(Fig. 7.4 a).
4. Mezcle la solucin dentro de la bolsa y enjuague con agua la superficie externa de la bolsa;
anote el color inicial de la solucin dentro de la bolsa.
5. Aada varias gotas de la solucin de yodo a un vaso (beaker) con 300 ml de agua hasta obtener
un color dorado.
6. Coloque la bolsa de dilisis dentro del agua por 30 min (Figura 7.4 b).

(a)

Figura

(b)

7.4

7. Saque la bolsa del agua y colquela en un vaso (beaker) vaco. Anote el color de la solucin
dentro de la bolsa y comprela con la solucin en el primer vaso.
8. Realice la prueba de Benedict para las dos soluciones contenidas en las bolsas.
9. Cules son los resultados de este experimento para las pruebas de yodo y de Benedict?
Explique.
10. Qu indican estos resultados?
11. Qu caracterstica tiene la membrana de dilisis que afecta los resultados?

B. Osmosis en clulas animales y vegetales

En los siguientes ejercicios se observar qu ocurre al poner clulas animales y vegetales en soluciones
con concentraciones diferentes de solutos.

B.1. Clulas animales

Cuando los eritrocitos (clulas rojas) se encuentran en un ambiente hipotnico el agua les entra por
difusin y sucede hemlisis (el rompimiento de una clula roja). Cuando la clula roja est en un
ambiente hipertnico pierde agua, se encoge y sucede crenacin. En este experimento se observar el
comportamiento de las clulas rojas de la sangre en soluciones hipotnicas e hipertnicas.

M A T E R I A L E S

( P A R T E S

B . 1

B . 2 )

Por mesa:
Botellas con soluciones hipertnicas e
hipotnicas)
Botella con sangre de vaca (mantener
en nevera)
Elodea fresca
Gradilla para tubos de ensayo
Tubos de ensayo pequeos
Goteros

Laminillas y cubreobjetos
Agujas de diseccin
Microscopio compuesto
Lpiz de cera
Papel toalla
Papel de lente

P R O C E D I M I E N T O

1. Rotule tres tubos de ensayo: 1, 2 y 3

2. Prepare los tubos como sigue:
Tubo 1: 3 ml de solucin hipotnica + 3 ml de sangre de vaca
Tubo 2: 3 ml de sangre de vaca
Tubo 3: 3 ml de solucin hipertnica + 3 ml de sangre de vaca
3. Deje cada tubo reposar por dos minutos y observe la apariencia de la mezcla.
4. Rotule y prepare cuatro laminillas:
Laminilla 1: Gota de la mezcla del tubo 1, coloque el cubreobjeto, observe bajo el
microscopio.
Laminilla 2: Gota de la mezcla del tubo 2, coloque el cubreobjeto, observe bajo el
microscopio.
Laminilla 3: Gota de la mezcla del tubo 3, coloque el cubreobjeto, observe bajo el
microscopio.
5. Qu le pas a las clulas al entrar en contacto con cada una de las soluciones? Por qu?

6. En qu solucin sucedi hemlisis de los eritrocitos y por qu?

7. Por qu ocurri la crenacin?

8. Qu indican los resultados acerca de la concentracin de solutos en el plasma sanguneo?

B. 2. Clulas vegetales
P R O C E D I M I E N T O

1. Rotule dos vasos: 1, 2 y 3

2. Prepare los vasos como sigue:
Vaso 1: 25 ml de solucin hipotnica + un pedazo de Elodea
Vaso 2: 25 ml de solucin hipertnica + un pedazo de Elodea
1. Rotule y prepare tres laminillas segn se indica a continuacin. Coloque un cubreobjetos y
observe con el microscopio:
Laminilla 1: Hoja de Elodea con una gota de agua de estanque.
Laminilla 2: Gota de la solucin hipotnica y una hoja de Elodea
Laminilla 3: Gota de la solucin hipertnica y una hoja de Elodea
2. Qu le pas a las clulas al entrar en contacto con cada una de las soluciones?

3. Por qu ocurri plasmlisis en una de las soluciones?

5. Cul es la diferencia entre plasmlisis y crenacin?

6. Por qu no ocurre lisis (rompimiento de la clula) en la clula vegetal?

7. En qu tipo de solucin ocurri turgencia?

C. Estimar la osmolaridad en las clulas vegetales

En los siguientes ejercicios se observar cmo soluciones con diferentes molaridades1 afectan el
equilibrio y el funcionamiento de las clulas vegetales. La osmolaridad se expresa como moles de soluto
por litro de solucin; mientras ms alta es la osmolaridad, mayor es la concentracin de soluto.
Deseamos saber cul es la osmolaridad ideal en las clulas de papas. Esto se har comparando la
diferencia en el peso de las muestras de papa para determinar si las clulas adquieren o pierden agua en
soluciones de diferentes molaridades y por consiguiente determinar en qu osmolaridad las clulas
vegetales se encuentran en homeostasis o equilibrio.
1

Para ms informacin acerca de molaridad, ver el Apendice IV.

M A T E R I A L E S

Por mesa:
Una papa mediana o grande
Sacabocado
Vasos desechables o beakers
Papel toalla
Pedazo de cartn
Navaja

100 ml de solucin de sacarosa de 0.1,

0.2, 0.3, 0.4, 0.5 y 0.6 M
Agua destilada (solucin 0.0 M)
Balanza y papel para pesar

P R O C E D I M I E N T O

1. Rotule seis vasos para cada solucin de sacarosa (0.1 a 0.6 M) y un vaso para agua destilada
(0.0 M).
2. Aada 100 ml de la solucin correspondiente a cada uno (Fig. 7.5a).
3. Con el sacabocado obtenga siete cilindros de papa (Fig. 7.5b) de aproximadamente 5 cm de
largo.
(a)

Figura

(b)

7.5

4. Pese los cilindros de papa, anote en la Tabla 7.2 el peso inicial para cada uno.y transfiralos
inmediatamente a los vasos rotulados.
5. Deje los cilindros en los vasos durante 2 horas.
6. Saque los cilindros de los vasos y remueva el exceso de agua con papel toalla. Asegrese de
mantener separados los cilindros correspondientes a cada vaso.
7. Anote si hubo cambios en textura y anote en la Tabla 7.2 el peso final de los cilindros.
8. Con los datos de la Tabla 7.2, calcule el cambio en peso para cada cilindro y prepare una
grfica sealando los cambios en peso.
Cambio en peso (%) =

peso final peso inicial

peso inicial

10

X 100

Nota: Seleccione una escala apropiada para el eje Y de la grfica (el cero ya est colocado en el
centro del eje). El aumento en peso se grafica sobre el cero y la disminucin en peso se grafica
debajo del cero.
Tabla 7.2

Resultados del experimento.

Molaridades de la soluciones
0.0
0.1
0.2
0.3
Peso final (g)

0.4

0.5

0.6

Peso inicial (g)

Cambio en peso (%)

Cambio
en
peso
(%)

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

Osmolaridad

9. Se observ diferencia en la textura de los cilindros antes y despus del experimento? Por qu?

10. Cul es la variable independiente en este experimento?

11. A qu molaridad de sacarosa se observa un cambio en la grfica (dnde la curva va de

negativo a positivo o viceversa)?

11

12. Qu significan los resultados con respecto a la osmolaridad de la papa?

13. Variar este resultado con un cambio en temperatura?

12

LABORATORIO 7: LA MEMBRANA Y EL TRANSPORTE CELULAR

PLAN DE ENSEANZA

PARA LOS

INSTRUCTORES

Destrezas que el estudiante adquirir a partir de este laboratorio:

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Trabajo individual y grupal; debe enfatizarse la divisin ptima de tareas por grupos.
Tcnicas de laboratorio y conceptos qumicos bsicos.
Aplicaciones qumicas y matemticas a la biologa.
Comunicacin escrita.
Conceptos bsicos de la investigacin cientfica.
Discusin oral.

Manejo del laboratorio:

El instructor debe introducir el tema y dar las instrucciones, asegurndose de mencionar

los trminos que el estudiante debe conocer: Solvente, soluto, membrana selectivamente
permeable, difusin, movimiento browniano, osmosis, solucin hipertnica, solucin
hipotnica, solucin isotnica, osmolaridad, presin de turgencia y plasmlisis.
Debe guiarse la introduccin para que el estudiante participe y conteste preguntas.
Tambin debe repasarse el modelo de las membranas biolgicas y sus componentes
principales.
El orden de los ejercicios debe alterarse para optimizar el uso del tiempo; prepare el
ejercicio 7.2.c primero, ya que requiere una incubacin de 2 horas.
A cada estudiante se le asignar un informe corto, para entregarse la prxima semana,
acerca de los resultados de Ejercicio 7.2c (incluyendo tablas y grficas).

Manejo del tiempo:

1. Introduccin ...............................................................................10 minutos
2. Preparar el ejercicio de osmolaridad de la papa
(Ejercicio 7.2c) ............................................. 20 minutos
3. Preparar el ejercicio sobre el efecto de la temperatura en la remolacha
(Ejercicio 7.1a) 15 minutos
4. Realizar el experimento de difusin en agua (Ejercicio 7.2 a.1).10 minutos
4. Comenzar el ejercicio de difusin de la membrana selectivamente
permeable (Ejercicio 7.2 a.2) ............................................... 15 minutos
7. Observar las laminillas de sangre (Ejercicio 7.2 b.1) ....................... 15 minutos
8. Preparar la prueba de Benedict (Ejercicio 7.2 a.2) ........................ 10 minutos
9. Resultados del Ejercicio 7.2 a.2 ....................................................... 15 minutos
10. Resultados del ejercicio con remolacha (Ejercicio 7.1 a)..... 10 minutos
11. Observar laminillas de Elodea (Ejercicio 7.2 b.2) ...................... 15 minutos
12. Recoger lo que se us para las pruebas del Ejercicio 7.2............ 10 minutos

13

13. Prueba corta ................................................................................ 10 minutos

14. Discutir los resultados de los Ejercicios 7.1 b, 7.2 a.2, y 7.2 b ... 15 minutos
15. Recopilar los datos del Ejercicio 7.2c, recoger el laboratorio
y discutir resultados .....................................................................10 minutos

14