Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Equipo 8:
Alatriste Solano Edgar, Colín Castro Julieta, Cruz Hernández
Carlos, Merino González Carlos Alberto
Características tintoriales de los hongos
 HONGOS

Son heterótrofos (quimioorganotrofos), se

alimentan de materia orgánica.
Son eucariotas, presentan núcleo diferenciado
con membrana bien organizada.
Presentan una pared celular formada por
polisacáridos, polipéptidos y quitina.
Se tienen hongos pluricelulares y unicelulares
La estructura fúngica (pluricelular) consta de un
complejo llamado talo o micelio, que a su vez esta
constituido por múltiples filamentos o hifas.
Los hongos (levaduras) son microscópicos,
poseen forma redonda, estos se reproducen por
gemación
Estructura de los Hongos

Las hifas son tubos de longitud variable

formadas por una pared celular rígida, en la
que fluye protoplasma.
Las hifas no constan de células, sino de
compartimientos
 Estructura de la célula fúngica
Poseen:
Núcleo con doble membrana
Nucléolo
Mitocondrias
Retículo endoplásmico
Vacuolas
Ribosomas
Aparato de Golgi
Inclusiones cristalinas (ergosterol)
 Pared celular
La pared es un exoesqueleto rígido que protege a
la célula y condiciona la nutrición absortiva ya
que no permite la endocitosis. Algunos hongos
unicelulares producen cápsulas constituidas por
polisacáridos mucilaginosos con
apacidadinmunógena y acción antifagocitaria.
 Composición de la pared celular
Esta formada por capas de polisacáridos
Glucanos (polímeros β-1,6, ramificados de glucosa)
Mananos(polímeros α –1,6, ramificados de manosa)
Polímeros de glucosamina
Proteínas
Lípidos (ergosterol)
Quitina (polímero β-1,4 de N-acetilglucosamina)
 Quitina

Ergosterol
H H
HO
Tinciones simples
Safranina
Útil para el estudio de cultivos y productos biológicos líquidos.
Los elementos fúngicos se tiñen de color rojo intenso, y el
resto del campo toma un tono incoloro o rosa pálido.

Rhizopuz sp.
Penicillium sp.

Aspergillussp.
Azul de algodón
El azul de lactofenol tiene tres funciones importantes a
la hora de observar hongos del tipo mohos obtenidos por
aislamiento o de medios inoculados.

El fenol destruye la flora acompañante.

El acido láctico conserva las estructuras fungicas al

provocar un cambio de gradiente osmótico con relación
al interior del fúngico generando una película por así
llamarlo protectora,
 Es útil para realizar el examen directo de cultivos, ya que es
una técnica rápida que permite visualizar perfectamente las
estructuras fúngicas.
El colorante es fuertemente ácido y se usa para la tinción
directa de micelio micólico, el cual toma un delicado color
azul claro.
Composición:
• Alcohol metílico
• Azul de algodón
acetico
• Agua destilada
250 mL
• Alcohol al 96%
Microsporiumcanis
• Xilol
 Paracoccidioides
brasiliensis
Hongo dimórfico; Se
visualiza macroconidia en
forma de “timón de barco”

Rhizopus sp
Rhizopusstolonifer

Scedosporiumapiospermum
Anaranjado de Acridina
Se utiliza para la detección de bacterias y hongos
en muestras clínicas
Puede utilizarse un microscopio con accesorios
fluorescentes como el de ReichertZetopan. El
microscopio ordinario puede equiparse con filtros
para filtración fluorescente (BG12, de 4mm de
espesor). Se colocan filtros amarillos de modo de
barreras filtrantes.
Fundamento:

El pigmento se intercala en el ácido nucleico

(nativo y desnaturalizado). Con pH neutro, las
bacterias, los hongos y el material celular se
tiñen de naranja rojizo. Con pH ácido, las
bacterias y los hongos se mantienen de color
naranja rojizo, pero el material de fondo se tiñe
de amarillo verdoso
 Composición:
Alcohol absoluto
Ácido acético
Anaranjado de
acridina
Buffer de fosfatos
Cloruro de calcio

Tinción de ascosporas de
Sowerbyellarhenana en naranja de
acridina
Mucor mucedo.
Candidaalbicans
Tinción con Eritrocina.
Útil para la observación de gránulos
causados por:
• Nocardia
• Madurella grisea
• M. mycetomatis

Tinción de Eritrocina en M.
mycetomatis
 Solución de eritrocina.
Reactivos utilizados:

• Eritrocina de Grübler 0.20g

• Naranja G 1g
• Agua destilada 100mL
Granos de micetoma por
Nocardiasp. Grano teñido con
eritocina
 Tinciones diferenciales:

Son técnicas que utilizan dos o más

colorantes y/o principios activos.
Tinción de Gram

Tinción diferencial

Se emplea para teñir:

Productos biológicos líquidos

Exudados de lesiones
Macerados de biopsias
Todos los hongos son positivos a la coloración de Gram,
excepto Cryptococcus neoformans.
 El decolorante alcohol acetona disuelve a los lípidos de la
pared impidiendo la retención del cristal violeta en los
organismos Gram negativos

Se forma un complejo: lugol-cristal-violeta-ribonucleato de

magnesio

Esta técnica se basa en las diferencias en el punto

isoeléctrico
Blastomycesbraziliensis

Aspergillus fumigatus
Candidaalbicans

Pityrosporum folliculitis
Histoplasmafarciminosum
Tinción Ziehl-Neelsen (Ácido-Alcohol-Resistentes)
Es el procedimiento utilizado para colorear aquellos
organismos que son difíciles de colorear con colorantes
básicos, porque se muestran impermeables a la coloración

El contenido lipídico de estos organismos esta compuesto

principalmente por ceras y fosfolípidos que alcanzan hasta un
40 % de su peso seco total
 La ácido-alcohol-resistencia es la capacidad de ciertos
materiales biológicos para formar complejos con algunos
colorantes y que luego de la exposición al alcohol-ácido no
ocurre decoloración

Se cree que el ácido micólico es responsable de ácido-

alcohol-resistencia

Util en algunos microorganismos ácido resistentes como

N. Asteroides, N. Brasiliensis y otros actinomicetes.
 El calentamiento ablanda ceras permitiendo la entrada del
colorante

El calentamiento es por emisión de vapores

La técnica de Kinyoun permite la tinción sin la necesidad

de calentamiento

Adición de nigrosina
Rhodococcusequi

Actinomycesisraelii
Técnica de Schiff
La tinción PAS (periodicacid-Schiff) es uno de los
métodos químicos más empleados en histología.

En la tinción PAS se trata el material con ácido

peryódico, que oxida los 1,2-glicoles formándose grupos
aldehído en los glucanos y mananos de las paredes celulares
de los hongos

Con el reactivo de Schiff, los aldehídos reaccionan dando

un color rojo luminoso
 Los filamentos fúngicos, conidias y esporas aparecen rojos
o rosas intensos

El cemento de algunos granos en los micetomas adquiere

un color amarillo naranja

El citoplasma que es verde en general adquiere un tinte

rosa

Permite la detección de hongos en muestras de tejido

Mucor sp.

Candidiasis
Aspergillus sp.

Coccidioides immitis
Tinción de Giemsa y Wright

Utilizada para levaduras intracelulares, que generalmente

se encuentran dentro de los macrófagos o monocitos

Forma un halo alrededor de la pared celular

Citoplasma se tiñe de azul celeste

Un polo se tiñe de azul oscuro (media luna)

Hystoplasmacapsulatum

Pneumocystisjiroveci
Tinciones especiales
Tinción negativa con tinta china
Fundamento: Este método es ideal para
observar inclusiones refráctiles que no se tiñen
fácilmente, tales como gránulos de azufre, ácido
poli-B-hidroxibutirico, esporas o capsulas, debido
a que las partículas de carbón empleadas están
cargadas negativamente y son repelidas por la
carga negativa de la pared y delimitan una
silueta mayor que el tamaño real de la bacteria
Esta tinción especial
para visualizar a
Cryptococcusneoformans
La tinta china se emplea
en una dilución de 1:2
con agua destilada
(suspensión de coloidal de
carbón o nigrosina)
La técnica consiste en
colocar una gota del
producto biológico por
examinar y una gota de
tinta china separados por
3 mm
 Tinción con tinta china para observar la cápsula
de C. neoformans.

La cápsula aparece como un halo claro y nítido en torno a una

levadura redonda, delimitado por las partículas de carbón en
suspensión coloidal de la tinta china, exhibiendo un nítido contraste.
Tinción de Esporas
Tinción de ascas y ascoposras de todos los hongos, y
especialmente útil cuando, se trata de visualizar
levaduras en los Hemiascomycetes, ya que con las
tinciones habituales es muy difícil distinguir sus
formas sexuales.
Reactivos
Verde de malaquita se tiñe la espora
Safranina se tiñe la célula vegetativa
Las ascas y ascasporas se tiñen de color verde, en
tanto que las levaduras toman coloración roja
Ascosporas de Daldiniaconcentrica
 Tinción de Gomori-Grocott
(Metenamina de plata)
Fundamento: Entre las coloraciones especiales
para hongos, la plata-metenaminas de Gomori.
La reacción tintorial esta basada en que
presencia de acido crómico, los grupos hidroxilo
de lo polisacáridos de la pared celular de los
hongos son oxidados a aldehídos; estos a su vez,
reducen el complejo nitrato- plata metenamina
produciendo la coloración café a negra, debido de
la plata reducida en los lugares de localización
de los aldehídos
Imagen histológica, tinción con Gomori-Grocott (tinción con plata)
mostrando esférulas en diferentes estados de maduración.
Tinción de Gomori-Grocott
Con esta técnica los hongos se tiñen de color negro al igual que
una bacterias; la mucina adquiere un color gris oscuro; las
partes internas del micelio, rosa oro; el fondo aparece de color
verde claro
Reactivos
Ácido crómico.- Oxidación de grupos hidroxilo de los
polisacáridos de pared celular
Bisulfito de sodio.- Buffer
Metamina-nitrato de plata.- Producción de color café a negro
en la pared
Cloruro de oro.- Colorante de contraste en la pared
Verde brillante.- Colorante de fondo en la preparación
Blanco de carcoflour
Fundamento: El calcofloúr es un flourocromo que se une
a polisacáridos con los enlaces beta 1-3 y beta 1-4 presentes
en polímeros tales como celulosa y la quitina. El colorante
fluorece cuando se expone a una fuente de luz ultravioleta
de onda corta o capaz de producir la luz azul (longitud de
onda 410-450 nm). Es un método de alta sensibilidad para
definir claramente los elementos micoticos con
microscopio de fluorescencia
Reactivos
Calcoflour blanco M2R (polysciences)
Azul de Evans
Negro de clorazol E
Fundamento: Es un colorante que permite visualizar
rápidamente y nítidamente las estructuras micoticas
uniéndose especialmente a la quitina. Tiene la desventaja
de degradarse con la luz, por lo requiere mantenerse en
oscuridad. Además debe prepararse mensualmente. Las
preparaciones con la muestra deben leerse al mismo día de
la realización, ya que el colorante se precipita con el
tiempo y al secarse.
Clorazol E
DMSO
KOH al 7%
Helvellalacunosa en L4 C (negro de clorazol)
Procedimientos
Azul algodón-lactofenol (colonias de Hongos)
Poner en un portaobjetos limpio sobre una superficie
iluminada y transparente o en su defecto sobre una hoja
blanca
Poner una gota pequeña de azul de algodón lactofenol en el
centro del portaobjetos
Tomar un fragmento de la colonia mediante una asa
Montar la preparación depositando suavemente un
cubreobjetos sobre el portaobjetos
Sellar con esmalte incoloro
Tinción con eritrosina
Fijar con alcohol metílico por 10 min
Cubrir con eritrosina por 15 min
Lavar ligeramente con agua de la llave
Hacer pasar rápidamente alcohol al 70 % y se deja secar
Pasar por alcohol absoluto durante 5 minutos y dejar secar
Poner xilol por 15 min y dejar secar
Montar en bálsamo de Canadá
Tinción con azul algodón acético
Fijar con alcohol metílico, cubriendo el portaobjetos y se
deja evaporar
Cubrir la preparación con azul de algodón acético por 20
min, calentando hasta la emisión de vapores
Lavar rápidamente con agua
Pasar por alcohol al 96 % y secar
Pasar por Xilol hasta que transparente la preparación
Montar en bálsamo de Canadá
Tinción de ZiehlNeelsen para Actinomyces
La preparación se llena con fucsina fenificada a emisión de
vapores por 3 minutos
Decolorar con alcohol-ácido y se lava con agua
Cubrir la preparación con azul de metileno durante 1 min y
se deja escurrir
Se deja secar y se observa a 10X y 40X
Tinción ZiehlNeelsen modificada
La preparación se llena con fucsina fenificada a emisión
de vapores por 5 minutos
Decolorar con alcohol-ácido y se lava con agua
Cubrir la preparación con azul de metileno durante 2 min y
se deja escurrir
Colocar una gota de nigrosina en el extremo del
portaobjetos y se extiende como si fuera un frotis sanguíneo
en capa fina, se deja secar y se observa a 10X y 40X
Tinción Gram
Tinción de Wright
No es necesario fijar el frotis
Coloque el portaobjetos completamente horizontal sobre una
superficie adecuada que deje libre la mayoría de sus bordes y
cúbralo con el colorante
Después de 3 min agregue solución buffer de fosfatos o
agua destilada en la misma cantidad que la del colorante,
mezcle la solución, aplique una corriente de aire sobre la
mezcla mediante una pipeta
Después de 5 min enjuague con agua de la llave
Deje secar y lea al microscopio en seco débil, seco fuerte y a
inmersión
 Referencias bibliográficas.
Guzman Arenas Roberto, “Micología médica”., Editorial
McGraw-Hill, 2ª. Edición; México, 2004. Capitulo 34 pag 299-
305
RubenLopezMartinez, Micología Médica Procedimiento para el
diagnostico de laboratorio, Ed. Trillas, México 2006 Capitulo 10
Pag.149-158
F.J. Baker, Manual de Técnicas de Micología Médica
Editorial Acribia, S.A Zaragoza España 1998 pag. 18-20; 40-
41
Dr. Norman F. Connan; Micología; Editorial Interamericana
S.A de C.V 3ra Edición México 1972 pag. 557-569
Lynch, M; Raphael, S. Métodos de Laboratorio. Editorial
Interamericana. 2º edición. México. 1987. Tomo II pag. 523-530
MURRAY, G. Microbiología Médica. Edit. El Manual
Moderno. 3º edición México D.F. 1997 pag 175-182