Biocromatografa: cromatografa de afinidad (AFC)

Cromatografa de afinidad (AFC)

Columnas TSK-gel AFC
De entre todas las tcnicas cromatogrficas, la Cromatografa
de Afinidad (AFC) ofrece la mayor especificidad y
selectividad para el aislamiento y purificacin de biomolculas.
Esta tcnica se basa en interacciones bioespecficas gracias a las cuales la columna de AFC absorbe nicamente
de la muestra los componentes que presentan afinidad con
los ligandos acoplados al soporte cromatogrfico. Cuando
el compuesto retenido es eluido, se consiguen niveles de
pureza extraordinarios, gracias a la elevada selectividad
de estas interacciones de afinidad.
Toso ofrece una amplia gama de columnas analticas y
preparativas, as como relleno, con una amplia variedad
de ligandos especficos y grupos funcionales qumicamente activos. Toda la gama toma como base el relleno
polimrico TSKgel G5000PW, de 1000 A de tamao de
poro. Esto permite abordar la purificacin de biomolculas de hasta 5.000.000 Da.
Adems, estas resinas polimricas son qumica y fsicamente estables, siendo resistentes a los ataques microbianos, dimensionalmente estables frente a los cambios de
pH y compatibles con muchos disolventes orgnicos.
Adems, en muchos casos, la resina es autoclavable y permite su lavado con soluciones de 0.5M NaOH.

Columna

Ligando

Concentracin
Ligando

Capacidad
adsorcin

Aplicaciones
ms usuales

TSK Chelate-5PW

cido
iminoactico

20 mol/ml

Para Cu++ o Zn++

20 mol/ml

Purificacin de protenas sricas,

colagenasa, lactoferrina,
protenas glanulares, interfern.

TSK Boronate-5PW

cido m-aminofenilbornico

Sorbitol
40 mol/ml

Separacin de glicoprotenas,
nucleasas, nucletidos, catecolaminas,
carbohidratos, RNA de transferencia.

TSK ABA-5PW

p-aminobenzamida Tripsina

Purificacin de tripsina, trombina

3-4 mg/ml
bovina, urokinasa enterokinasa,
actividor del plasmingeno.

TSK Tresyl-5PW

Tresyl

20 mol/ml

Permite una fcil inmovilizacin

de diversos ligandos.

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Columnas construidas tambin en vdrio para

trabajos de purificacin de enzimas y protenas.

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604

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Biocromatografa: cromatografa de afinidad (AFC)

1. Lavar la columna con 3 ml de agua destilada a un

flujo de ~0,5 ml/min (para columnas de 7,5 mm
ID x 75 mm).

Biocromatografa: cromatografa de afinidad (AFC)

Procedimiento para inmovilizar los ligandos

a la columna TSKgel Tresyl-5PW

3. Hacer circular a travs de la columna una solucin de la protena durante toda una noche a un
flujo de 0,2-0,5 ml/min a 4C. La concentracin
ptima de protena ser entre 5 y 10 mg/ml.
4. Despus de la operacin de acoplamiento, bloquear los grupos activados residuales mediante el
lavado con 0,1 M Tris-HCE (pH8) durante una
hora a 4C.

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2. Lavar la columna con ~3 ml de tampn a un flujo

de 0,5 ml/min. El tampn empleado no deber
contener grupos amino. Una
solucin 1,0 M
de tampn fosfato pH 7-8 es en general muy
efectiva.

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Biocromatografa: cromatografa de afinidad (AFC)

Columnas TSK-GEL de afinidad, analiticas y preparativas. Propiedades

Referencia

Descripcin

ID Longitud Tamao Eficacia mnima

(mm) (cm)
partcula
(m)

Caudales (ml/min)
Rango
Mx

Presin
mxima
de trabajo
(kg/cm2)

Columnas de vidrio
TH-14452

ABA-5PW vidrio, 1000

5,0

10

500

0,5-0,8

1,0

20

TH-14453

ABA-5PW vidrio, 1000

7,5

10

1.300

0,5-1,0

1,2

15

TH-14449

Boronate-5PW vidrio, 1000

5,0

10

500

0,5-0,8

1,0

20

TH-14450

Boronate-5PW vidrio, 1000

7,5

10

1.300

0,5-1,0

1,2

15

TH-14440

Chelate-5PW vidrio, 1000

5,0

10

500

0,5-0,8

1,0

20

TH-14441

Chelate-5PW vidrio, 1000

7,5

10

1.300

0,5-1,0

1,2

15

TH-14457

Tresyl-5PW vidrio, 1000

5,0

10

500

0,2-0,8

1,0

10

TH-14458

Tresyl-5PW vidrio, 1000

7,5

10

1.300

0,5-1,0

1,2

10

Columnas de acero inoxidable

TH-13067

ABA-5PW

7,5

7,5

10

1.300

0,5-1,0

1,2

10

TH-13066

Boronate-5PW

7,5

7,5

10

1,.300

0,5-1,0

1,2

10

TH-08645

Chelate-5PW

7,5

7,5

10

1.300

0,5-1,0

1,2

10

TH-08646

Chelate-5PW

21,5 15,0

13

2.500

4,0-6,0

8,0

15

TH-14455

Tresyl-5PW

6,0

4,0

10

0,2-0,8

1,0

10

TH-14456

Tresyl-5PW

7,5

7,5

10

0,5-1,0

1,2

10

Precolumnas

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Referencia Descripcin

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TH-14454

ABA-5PW Glass Guardgel Kit

TH-13127

ABA-5PW Guardgel Kit

TH-14451

Boronate-5PW Glass Guardgel Kit

TH-13125

Boronate-5PW Guardgel Kit

TH-14442

Chelate-5PW Glass Guardgel Kit

TH-08647

Chelate-5PW Guardgel Kit

Tamao de partcula (m)

20

Para P/N 13067

20

Tresyl-5PW, 2g dry gel

Para P/N 14450

Para P/N 13066

20

Para P/Ns 14440 y 14441

Para P/N 08645

Bulk packing
TH-16028

Para P/Ns 11452 y 11453

10

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