TCNICO EN ANLISIS QUMICO

CENTRO DE FORMACIN TCNICA

SANTO TOMAS

SOLUCIONES
AMORTIGUADORAS
Labor
atorio
n 1
Integrantes:
- Anas Contreras C.
- Yicel Rojas G.
- Patricio Cortes R.
- Cristian Pozo B.
Laboratorio Bioqumica

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Objetivos generales

Conocer el funcionamiento y preparacin de soluciones reguladoras.

Presentar una alternativa eficaz y sencilla de disear soluciones
Amortiguadoras de pH.
Prctica en los ejercicios tradicionales de pH, no solo para la fabricacin
de Buffers, ya que estos, tambin son de gran utilidad en casos en los
que es imposible emplear la simple ecuacin de equilibrio, debido a la
presencia de equilibrios simultaneaos con especies compatibles de la
misma familia.

Objetivos Especficos

Entregar el conocimiento sobre la estructuracin, la articulacin y la

correcta elaboracin de soluciones amortiguadoras de pH, empleando, a

su vez, una visin sistemtica del equilibrio inico sobre soluciones
acuosas.
Determinar la capacidad reguladora de una solucin tampn.
Alentar y beneficiar la concentracin en la prctica como mtodo de
validacin y de confirmacin de los resultados en el Laboratorio.
Habituar al estudiante en la calibracin y la utilizacin de los diferentes
equipos y dispositivos de anlisis.

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Mtodo.

Volumtrico
pH- metro
Materiales.

Pipetas volumtricas
Vaso de precipitado
Matraz aforado de 100 y 250 mL
Medidor de pH-metro
Bureta de 50 mL
Piseta
Agitador de vidrio
Soporte Universal
Pinza para bureta
Mechero

Reactivos.

KH2PO4
HPO4 -2
NaOH
Agua destilada

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Marco terico.
Un tampn, buffer, solucin amortiguadora o solucin reguladora es la
mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un cido dbil y su base
conjugada, es decir, sales hidrolticamente activas. Tienen la propiedad de
mantener estable el pH de una disolucin frente a la adicin de cantidades
relativamente pequeas de cidos o bases fuertes. Este hecho es de vital
importancia, ya que meramente con un leve cambio en la concentracin de
hidrogeniones en la clula se puede producir un paro en la actividad de las
enzimas.
Se puede entender esta propiedad como consecuencia del efecto ion comn y
las diferentes constantes de acidez o basicidad: una pequea cantidad de cido o
base desplaza levemente el equilibrio cido-base dbil, lo cual tiene una
consecuencia menor sobre el pH.
Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual depender de
la constante de equilibrio del cido o base empleado. Son importantes en el
laboratorio y en la industria, y tambin en la qumica de la vida. Tampones tpicos
son el par amonaco-catin amonio, cido actico-anin acetato, anin carbonatoanin bicarbonato, cido ctrico-anin citrato o alguno de los pares en la
disociacin del cido fosfrico.
Clculo del pH de disoluciones tampn
Frecuentemente se utiliza la ecuacin de Henderson-Hasselbalch para el clculo
del pH en soluciones reguladoras. Sin embargo, debe aclararse que esta ecuacin
no es aplicable en todos los casos, ya que para su deduccin se realiza una serie
de suposiciones. Esta ecuacin suele proporcionar resultados incorrectos cuando
las concentraciones del cido y su base conjugada (o de la base y su cido
conjugado) son bajas. Para el clculo del pH, se debe saber el pKa del cido y la
relacin entre la concentracin de sal y cido, como se observa a continuacin
pH = pKa + log [B] / [A]
En donde:
B = forma bsica.
A = cida
pKa de un cido dbil se obtiene a partir de su constante de acidez (Ka) y es
especfico para cada cido.

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Sistemas tampn fisiolgicos

Niveles de pH en el cuerpo humano
Muchas biomolculas no actan a un determinado valor de pH y solo toleran
fluctuaciones mnimas en el pH. Dado el bajo grado de ionizacin del agua (H2O),
cuando aadimos en sta una pequea cantidad de cido o de base, el pH vara
en mucha cantidad, llegando a niveles de pH en los cuales las biomolculas no
podran cumplir sus funciones. Por esta razn los lquidos fisiolgicos contienen
tampones que, a diferencia del agua, mantienen el pH constante.
Los tampones mantienen la cantidad de cidos y de bases en equilibrio en un
determinado pH en el cual la actividad biolgica de las protenas, hormonas,
enzimas, bombas de iones... sea ptima. En humanos, los valores compatibles
con el mantenimiento de funciones vitales son de pH entre 6,8 y 7,8; siendo el
intervalo de 7,35 a 7,45 el de normalidad. En concreto, podemos decir que cada
lquido fisiolgico tiene un nivel caracterstico normal de pH:

Sangre arterial: pH= 7,4

Sangre venosa: pH= 7,35
Lquido intersticial: pH= 7,35
Lquido intracelular: pH= 6 - 7,4
Orina: pH= 4,5 - 8
HCl gstrico: pH= 0,8

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Sistemas tampn en el organismo

Existen tampones de gran importancia en el organismo:
Inorgnicos:
Tampn bicarbonato:
CO2 + H2O

H2CO3

HCO3 - + H+

Tampn fosftico:
H2PO4-

HPO42- + H+

Orgnicos:
Tampn hemoglobina:
HHbO2

HbO2- / HbH

Hb- + H+

Aminocidos y protenas
Tampn bicarbonato
El tampn bicarbonato est compuesto por cido carbnico
(H2CO3) y bicarbonato (HCO3-) y el valor de su pKa es de
6,1. Es el tampn ms importante de la sangre (pH=7,4),
representa el 75 % de la capacidad buffer total de la sangre.
Tambin est presente en el lquido intersticial. Es un tampn
muy eficaz porque la relacin HCO3-/ H2CO3 es muy alta, lo
que supone una alta capacidad para amortiguar los cidos.
Supone una ventaja el hecho que se trata de un sistema
abierto ya que el CO2 puede ser eliminado en la respiracin
muy rpidamente, los H+ se pueden eliminar por va renal y el
HCO3- puede reemplazarse en la orina. En realidad, este
tampn est compuesto por dos equilibrios, pues el cido
carbnico forma CO2, generando una molcula de H2O.
Cuando el pH disminuye, el bicarbonato toma los protones
libres. As, el equilibrio se desplaza hacia el H2CO3, que a su vez, mediante la
reaccin catalizada por la anhidrasa carbnica (glbulos rojos), cede una molcula
de H2O y se convierte en CO2, el cual se elimina a travs de los pulmones. Por el
contrario, si el pH de la sangre aumenta, se forma HCO3- a partir de H2CO3, lo
que conduce a mayor captacin de CO2. Las concentraciones de HCO3- y de H+
tambin se pueden controlar por mecanismos fisiolgicos a nivel renal. El rin
puede eliminar protones unindolos a amonacos o fosfatos y mantiene la
concentracin de bicarbonato mediante reabsorcin o regeneracin del mismo.

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As, es importante tener en cuenta que el cuerpo necesita ms bicarbonato que no

cido carbnico porque el metabolismo produce ms cidos que bases.
Tampn fosfato
El tampn fosfato est compuesto por el hidrgeno fosfato (HPO42) y el
dihidrgeno fosfato (H2PO4-). Acta en el plasma y el lquido intersticial. Este
tampn tiene un pKa de 6,8, el cual est mucho ms cerca del pH plasmtico.
Esto significara que este tampn tendra que ser ms til que el anterior, pero no
es as ya que se encuentra en concentraciones menores en sangre y la
eliminacin del fosfato es mucho ms lenta, por va renal.
A pH fisiolgico de 7,4, la relacin HPO42/ H2PO4- es igual a 4.
As, se trata de un sistema eficaz para amortiguar cidos. Como
hemos dicho, a nivel sanguneo, el tampn bicarbonato resulta
ms til que el tampn fosfato ya que este ltimo se encuentra en
concentraciones bajas. Ahora bien, a nivel intracelular, el tampn
fosfato tiene concentraciones elevadas y es ms eficiente.

Aminocidos y protenas
Los aminocidos tienen carcter anftero, es decir, pueden ceder protones y
tambin captarlos. Esto es as gracias a dos de los radicales comunes en todos
los aminocidos: el grupo NH2 y el grupo COOH. Estos radicales, al estar en
contacto con el agua, se presentan ionizados o protonados; actuando los dos
como donantes o aceptores de protones.
En el punto isoelctrico de los aminocidos sin cadena radical cida o bsica se
encuentra a medio camino entre el pKa del grupo amino y el pKa del grupo
carboxil. Y encontramos el aminocido en su forma zwitterin, ambos grupos
funcionales ionizados: NH3+ y COO-.
El punto isoelctrico de los aminocidos con cadenas protonables es diferente
ya que existe un tercer pka, que corresponde al valor de pH en el cual el protn de
la cadena lateral se disocia.
As, vemos como esta capacidad para captar y ceder protones convierte a las
protenas y aminocidos en amortiguadores del pH, actuando como cidos si
estn protonados, o como bases, si no lo estn.
Muchas protenas tienen grupos protonables en la cadena radical variable, as
cada protena o aminocido tiene su punto isoelctrico y sus pKa caractersticos
para cada grupo protonable del radical variable.

Procedimiento.

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Preparacin de solucin reguladora.

1. En base a los siguientes equilibrios cido-base determine que sistema
cido dbil base conjugada considerara para preparar una solucin
amortiguadora que presente un pH aproximado de 7,40.
2. Calcular la razn [base conjugada]/[cido dbil] empleando la ecuacin de
Henderson Hasselbalch. Calcular la cantidad de base conjugada
necesarios para preparar 200 mL de buffer.
3. Chequear resultados con el profesor.
4. Preparar solucin amortiguadora.

Determinacin de capacidad amortiguadora

1. Calibrar pH-metro. Seguir instrucciones del profesor para calibrar y limpiar
pH-metro.
2. Medir pH de solucin amortiguadora preparada.
3. Llenar una bureta de 50 mL con solucin amortiguadora y otra bureta de 50
mL con solucin estandarizada de NaOH ( 0,1 M)
4. Transferir 50 mL de solucin amortiguadora en un vaso de precipitado de
250 mL.
5. Adicionar alcuotas de solucin de NaOH (10 mL) a la solucin reguladora.
Despus de cada adicin, anotar el volumen de NaOH adicionado y el pH
de la solucin. Completar Tabla I.
6. Continuar hasta adicionar 100 mL de solucin de NaOH.
7. Graficar pH versus moles de NaOH adicionados.
8. Calcular el pH terico de cada solucin empleando la ecuacin de
Henderson Hasselbalch, y compararlos con los valores experimentales.

Clculos.

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Molaridad:

M=

m
PM x V(L)

Masa:

m = M x PM x V(L)
Milimoles:

m = M x V(mL)
PM
pH:

pH = pKa + log [forma bsica]

[forma cida]
pKa:

pKa = - log Ka

Desarrollo:

Tabla de Datos para preparacin del tampn:

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FORMA

MASA
(g)

H2PO4HPO4-2
OH-

4.0826
6.5517
2.0000

PESO
MOLECULA
R (g/mol)
136.01
141.96
40.00

VOLUMEN
(mL)

MOLARIDA
D

MILIMOLE
S

100
100
200

0.30
0.46
0.20

30
46
20

NOTA: Se observa que las molaridades de las sales del tampn estn dadas a un
volumen de 100 mL. Al mezclar la totalidad de las soluciones, dichas molaridades
se ven reducidas a de las iniciales.

Tabla de Datos para la valoracin volumtrica:

MILIMOLES DE
FORMA CIDA

MILIMOLES DE
FORMA BSICA

MILIMOLES DE
BASE
ADICIONADOS

4.6

5.6

6.6

7.6

7.6

6.6

NOTA: Milimoles tomados de una alcuota de 20 mL del tampn, ms una adicin

de 5 mL de hidrxido.
Datos obtenidos a partir del equilibrio propuesto a continuacin.

OHH2PO4-

HPO4-2 + H+

Tabla de Datos para los valores de pH:

N DE
ADICIONES
0

VALOR DE PH
EXPERIMENTAL
7.42

VALOR DE PH
TERICO
7.42

% DE ERROR
0.00

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1
2
3
4
5
6

7.59
7.94
8.99
10.67
11.06
11.24

7.66
8.03
9.76
11.52
11.87
12.13

0.91
1.12
7.88
7.37
6.82
7.34

NOTA: Los valores tericos fueron obtenidos en base a los milimoles calculados
para cada adicin de base.
Grficos:

TAMPN FOSFATO DICIDO/MONOCIDO

11.5
11
10.5
10
9.5

pH

9
8.5
8
7.5
7

10

15

20

25

30

Vol. NaOH adicionado

(mL)

NOTA: El grfico muestra la primera zona de tamponamiento entre los pH 7.42 y

7.94, adems se aprecia el primer punto de neutralizacin a pH 8.99, por sobre el
cual aparece la formacin de la segunda zona de tamponamiento,
especficamente, desde el pH 10.67.

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Discusin:
Durante la realizacin de la experiencia se ha encontrado una serie de factores
que pueden afectar la precisin y exactitud de las mediciones realizadas, tales
como temperatura, concentracin, calibracin de equipos, entre otros. Por los que,
las variaciones presentan errores que, durante el primer equilibrio no reflejan ser
de gran magnitud, mientras que, en el punto final del primer equilibrio y durante el
segundo equilibrio, se observan errores aleatorios que no son de gran magnitud,
aunque si son mayores que en el primer equilibrio.

Conclusin:
A raz de lo realizado en el laboratorio, y en base a lo expuesto en las discusiones,
es posible asumir fallas en la realizacin de la experiencia, lo que otorga valores
con variaciones considerables, aunque estos se encuentran en un rango
aceptable. Para poder corregir estas desviaciones se hace necesario una

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repeticin de las mediciones en forma de triplicado, para as, optar a realizar un

trabajo estadstico de datos.
En cuanto a los objetivos planteados, se puede asegurar un cumplimiento a cada
uno de ellos, aunque las variaciones obtenidas, desvan la observacin
ocasionando dudas, al momento de ser capaces de discutir y comprender por qu
estos fluctuaron de los reales, asevera dicho cumplimiento.
Al elaborar la solucin tampn, se observa que la relacin del valor obtenido
mediante pH-metro versus el valor terico, no presentan variaciones, a lo que se
concluye una elaboracin eficaz de dicha solucin.
La calibracin del pH-metro realizada, afirma que los valores obtenidos son muy
cercanos a los reales, es por esto que, se han logrado comprender y aplicar las
tcnicas para calibraciones de este tipo de equipamiento. Pese a que existe una
incertidumbre en cuanto a la exactitud de los patrones utilizados, adems de que
las calibraciones fueron efectuadas sin determinar temperatura, por lo que el
rango de incertidumbre es an mayor.
En resumen, se puede aseverar que la realizacin de la experiencia de laboratorio
realizada ha cumplido con cada uno de los objetivos planteados, adems de
contribuir de manera imperante a la formacin del alumnado en cuanto al
desarrollo de habilidades analticas, de precisin y exactitud en las tcnicas de
laboratorio, adems de la incorporacin de los conocimientos aprendidos con
antelacin a la asignatura, para la correcta elaboracin de la prctica.

Introduccin.
Las soluciones amortiguadoras juegan un papel importantsimo en la formacin
y mantenimiento de la vida, ya que estos estn presentes en casi todos los
procesos biolgicos, tales como los tampones hemoglobina, los tampones
fosfatos, carbonatos, etc.

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La mayora de los procesos biolgicos son dependientes del pH, por lo que se
hace imperante mantener este factor lo ms constante posible frente a las
variaciones producidas por el ambiente en el cual se desarrollan dichos procesos.
Los tampones son sistemas acuosos que tienden a resistir cambios en su pH,
cuando se aaden pequeas cantidades de cido (H +) o base (OH-). Lo que
contribuye a cada proceso biolgico, debido a que el agua es el solvente universal,
por eleccin, y que cada forma de vida existente en el planeta est constituido
principalmente por este compuesto.
El tamponamiento es el resultado de dos equilibrios de reacciones reversibles
que tienen lugar en una solucin de concentraciones casi iguales de donador de
protones y de su aceptor de protones conjugado. Es decir, las soluciones
tampones o amortiguadoras se encuentran formadas por una mezcla en
relaciones conocidas de un cido o base dbil con su sal conjugada respectiva.

Bibliografa.
Lehninger Principios de Bioqumica, Tercera edicin, David L. Nelson - Michael M.
Cox, ao 2000.pginas 95, 96, 97, 98, 99, 101,102, 103.