Escherichia coli -bakteerit

Elintarvike- ja ympristhygienia ja valvonta MIKRO575

7.11.2011
Outi Martikainen / Bakteriologian yksikk
17.11.2011

Luennon rakenne

Escherichia coli bakteerilajina

Hydylliset ja haitalliset kolit
E. colin eristys
E. colin tyypittminen
E. colin valvonta

17.11.2011

Escherichia coli bakteerilajina

Gram-negatiivinen sauva
Fakultatiivisti anaerobi
Liikkuva, mys liikkumattomia kantoja
Biokemiallisia ominaisuuksia
Laktoosipositiivinen (90 % kannoista)
Beta-glukuronidaasipositiivinen (97 % kannoista)
Indolipositiivinen (99 % kannoista)
Sijoittuminen taksonomisesti
Fyyla: proteobakteerit
luokka: gammaproteobakteerit
lahko:
Enterobacteriales
heimo: Enterobacteriaceae
suku: Escherichia

laji: Escherichia coli
Lhilajeja mm. E. albertii, E. hermannii, E. fergusonii
Kolonisoi ihmisen ja muiden niskkiden ja lintujen paksusuolta, osa
normaaliflooran mikrobistoa
Vastasyntyneen suolisto kolonisoituu muutaman tunnin kuluttua
synnytyksest
Geneettisesti monimuotoinen laji
Geenien vaihtoa Salmonella spp., Shigella spp. ja muiden E. coli kantojen kanssa

17.11.2011

Escherichia coli

Kaper et al 2004 Nature Reviews

17.11.2011

Hydylliset kolit
Normaalimikrobiston kolit estvt tautia aiheuttavia mikrobeja
tarttumasta isnnn suolistoon tai lisntymst siell
K2-vitamiinin tuotto paksusuolessa
Probiootit
E. coli Nissle 1917:
kroonisten suolistosairauksien hoidossa
vhent patogeenisen kolin (invasiivinen ja
adhesiivinen) adheesiota suoliston epiteelisoluihin ja
lis sytokiinien tuotantoa (Huebner et al 2011)
Genetiikan malliorganismi
Kloonausisntn rekombinaatti-DNA-tekniikoissa

17.11.2011

Haitalliset kolit
1. Suolistoinfektiot
2. Virtsatieinfektiot
3. Meningiitti/sepsis

Kommensaalikolit voivat aiheuttaa tautia

Heikentynyt immuniteetti
Suoliston epiteeli vaurioitunut
Bakteeri vrss paikassa

17.11.2011

Suolistopatogeeniset E. coli -bakteerit

= ripulikolit

Aiheuttavat suolistoinfektioita ihmisille
ripulia, veriripulia ja

oksentelua sek mahdollisesti jlkitauteja kuten hemolyyttisureeminen oireyhtym (HUS)
Ripulikolit voidaan jakaa ainakin viiteen luokkaan = patoryhmn:

Enteropatogeeninen E. coli (EPEC)

Enterotoksigeeninen E. coli (ETEC)
Enterohemorraaginen E. coli (EHEC)
Enteroinvasiivinen E. coli (EIEC)
Enteroaggregatiivinen E. coli (EAEC)

Ripulikolit esiintyvt elinten, etenkin mrehtijiden, suolistossa

kuten normaaliflooran E. coli. Niit on mys todettu olevan
maaperss ja vesistiss.
Ihminen voi saada tartunnan elinperisten elintarvikkeiden
vlityksell tai juomalla elinten tai ihmisen ulosteilla saastunutta
vett.

17.11.2011

Ripulikolien virulenssimekanismit

Eri patoryhmill erilaisia virulenssiominaisuuksia

Jotkin ominaisuudet voivat esiinty useammalla patoryhmll
Virulenssigeenit sijaitsevat liikkuvissa elementeiss (integroituneet
transposonit, bakteriofagit ja patogeenisuussaarekkeet) bakteerin
kromosomissa ja plasmideissa
Virulenssigeenien kohteena suoliston epiteelisolut
Suoliston epiteelin kolonisaatio
Tunkeutuminen solujen sislle
Toksiinien tuotto ja niiden erittminen epiteelisoluihin

Ei-patogeeninen koli voi muuttua patogeeniseksi saamalla

virulenssigeenej muilta kolikannoilta tai muilta lajeilta.
Eri patoryhmt voivat saada toisiltaan virulenssigeenej
uusia
hypervirulentteja kantoja?

17.11.2011

EHEC-bakteeri

A.K.A
VTEC = verosytotoksinen E. coli

toksinen Vero-soluille (apinan
munuaissoluja)
STEC = shigatoksiinia tuottava E. coli
Virulenssitekijt
Shigatoksiinit Stx1 ja Stx2 (stx1 ja stx2)
Intimiini = adheesioproteiini (eae)
Enterohemolysiini (EHEC-hly/ehx)
STEC-autoagglutinoiva adhesiini, Saa
(saa)
Ripuli/veriripuli
Jlkitautina hemolyyttis-ureeminen
oireyhtym (HUS)
EHEC O157-seroryhmn kannat
vakavin
taudinkuva
etsityin seroryhm
Riskiryhmt: alle 5-v lapset, vanhukset

17.11.2011

Kaper et al 2004 Nature Reviews

Patoryhmien virulenssimekanismit

Kaper et al
2004, Nature
Reviews

17.11.2011

10

EHEC-tartuntareittej

Nautakarja, lampaat (elin

yleens oireeton)
Kotielimet
Huonosti kypsennetty tai raaka
naudan jauheliha
Pastroimattomat
(maito)tuotteet
Hedelmt, salaatit, idut
Vesi; jrvet, lammikot
Ihmisest toiseen vlittyv
kosketustartunta
Sairaalainfektiot (ruoka;
salaatti, kotileivokset)
Laboratorioinfektiot

17.11.2011

11

Infektiiviset annokset

EHEC 10 100 solua

EPEC 108 solua
ETEC 108 solua
EIEC 10 106 solua
EAEC 108 1010 solua

EHEC, EPEC, ETEC ja APEC (avian pathogenic E.

coli) mys elinpatogeeneja

17.11.2011

12

Infektion hoito
Ripulit itsestn rajoittuvia
EHEC: antibiootteja ei suositella
Solujen hajoaminen
shigatoksiinin vapautuminen

oireet pahenevat
Oireeton kantajuus
EAEC-patoryhm sek ripulia sairastavilla ett
terveill lapsilla Afrikassa (Bonkoungou et al 2011)

17.11.2011

13

E. colin eristminen

Elintarvikkeesta
Ympristnytteest
Ihmisest (uloste, virtsa, veri)
Rikasteet
Selektiivimaljat
SMAC (sorbitol-MacConkey)
Lihanytteit peptonisuola CT-SMAC (kefiksiimi-telluriittiliuoksessa.
SMAC)
CLED (cysteine lactose electrolyte
deficient medium)
Suuri heikkous
Patogeeninen koli ei eroa ulkonllisesti tai biokemiallisilta
ominaisuuksiltaan normaalifloorasta

Virulenssigeenien etsiminen (PCR, DNA:DNA-hybridisaatio)

17.11.2011

14

Selektiivimaljat
SMAC
sorbitolin
fermentaatio
EHEC O157-seroryhmn
kannat usein
sorbitolinegatiivisia, mutta
mys sorbitolipositiivisia
kantoja eristetn usein

CLED
laktoosin
fermentaatio
Enterohemolysiinin tuoton
osoittava malja (TBVP)

osoittaa vain enterohemolyyttiset kannat

17.11.2011

SMAC:
Sorbitolia
fermentoiva
kanta

SMAC:
Kanta, joka ei
fermentoi
sorbitolia

15

Peskkeiden seulominen
sekaviljelmst PCR:n avulla
Yksittiset peskkeet
Peskepoolit
monen peskkeen testaus
yhdess reaktiossa
Voi olla tylst, jos patogeenin pitoisuus
nytteess alhainen

17.11.2011

16

Peskehybridisaatio

Maljan peskkeet jttvt DNA-jljen membraanille
leimattu

koetin pariutuu patogeenisen peskkeen jljen kanssa
vasta-aine
+ vri sitoutuvat
patogeenin paikannus maljalta

Positiivinen kontrolli

Negatiivinen kontrolli

Malja replikoituna hybridisaatiomembraanille.

17.11.2011

Positiivinen kontrolli

Positiivinen kontrolli

Membraanit hybridisaation jlkeen.

17

Immunomagneettinen rikastus (IMS)

Seroryhmn perustuva rikastusmenetelm
Seroryhmille O26, O103, O111, O145, O157
Helmien pinnalla seroryhmn vasta-ainetta
tarttuu
bakteerin pintarakenteeseen
etsityt bakteerit saadaan
talteen helmien mukana ja muista pstn eroon

17.11.2011

18

Jos ei voi erist

Monialukkeinen PCR-menetelm sekaviljelmille ripulikolien

havaitsemiseksi

17.11.2011

19

E. colin tyypittminen
Serotyypitys
seroryhm = O -rakenne (O = somaattinen antigeeni
LPS:ss)
serotyyppi = O:H -rakenne (H = flagellaarinen antigeeni)
EPEC: O26, O55, O86, O111, O125, O126, O127, O128
EHEC: O26, O45, O91, O103, O111, O113, O145, O157
(O157:H7, O157:H-)

EHEC O157 faagityypitys
serotyypityst tarkempi erottelu

Muut fenotyypitysmenetelmt
Genotyypitysmenetelmt

17.11.2011

Virulenssigeenit
Pulssikenttgeelielektroforeesi
geneettinen sormenjlki
Sekvensointi (geeni/koko genomi)
Virulenssigeenien kuten stx alatyypitys spesifisill alukkeilla tai
PCR-RFLP-menetelmll

20

Serotyypitys

O-tyypitys
H-tyypitys
Lasiagglutinaatio
Reaaliaikainen PCR
7 yleisint ihmispatogeenista E. colin O-ryhm
(O26, O55, O91, O157, O103, O111 ja O145) ja
flagella-antigeenia H7

17.11.2011

21

Faagityypitys
EHEC O157-kannoille

60 %
50 %
40 %
30 %
20 %
10 %
0%
PT2

17.11.2011

PT4

PT49

PT8

Othe r

Suomessa esiintyvi EHEC O157

faagityyppej

22

Muut fenotyypitysmenetelmt
Mikrobilkeherkkyys
Biokemialliset identifioimistestit
Laktoosin ja sorbitolin fermentointi
-glukuronidaasin tuotto (PGUA)
Enterohemolysiinin tuoton osoitus
Shigatoksiinin tuoton osoitus
Verosolukoe
Lateksiagglutinaatio

17.11.2011

23

Pulssikenttgeelielektroforeesi (PFGE)
Vertailu saman serotyypin
(O:H-rakenne) kantojen
vlill
Bakteerin kromosomaalisen
DNA:n pilkkominen
restriktioentsyymill
EHEC
XbaI

Elektroforeesi, jossa
shkvirran suunta muuttuu
tietyin vliajoin
Epidemiologiset tutkimukset
esim. ruokamyrkytykset

17.11.2011

24

PFGE
kantojen geneettinen

sormenjlki

17.11.2011

25

EHEC-diagnostiikka TABA:ssa
TABA:aan lhetetty
Ulosteen primaariviljelm /
Puhdasviljelm

Lopullisia vastauksia
EHEC + (O157)
EHEC + (non-O157)
EHEC EPEC +

17.11.2011

PCR
stx1 , stx2 , eae,
ehly, saa

Jos
+

PCR-positiivinen peske
eristetn ja
tunnistetaan

- API 20E
- O:H serotyypitys
- Faagityypitys (O157)
- Stx1 / Stx2 tuotto
- Ehly
- Antibiogrammi
- Sorbitolin fermentointi
- Beta-glukuronidaasi

- PFGE
(XbaI)
- stx2 alatyypit
- eae alatyypit

26

Ripulikolidiagnostiikka
Suomessa ja monessa muussa maassa etsitn
yleens vain EHEC-patoryhmn seroryhm O157

vaarallisin seroryhm (HUS)
Monissa tutkimuksissa jaottelu EHEC O157 ja
EHEC non-O157, vaikka mys muiden serotyyppien
on todettu olevan erittin virulentteja (esim. O26,
O103, O111, O145)
Muita ripulikoliryhmi ei yleens etsit, kun
selvitetn suolistoinfektion aiheuttajaa

17.11.2011

27

Elintarvikevlitteiset
bakteeritartunnat vuosina 2000-2010
Tapaukset

Tiedot: THL/TT-rekisteri

4500
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0

2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
Campylobacter
17.11.2011

Salmonella

Yersinia

Shigella

EHEC
28

EHEC-tapaukset vuosittain
Varmennetut EHEC tapaukset 1996-2010
70
61

60
50

sor+ O157:H7/H(n=25)

43
38
13
1 21
51

13

23
Yhteens (n=351)

2011

14
3
0
9

2010

6
2
6

20
3 11 15
12
0
8
5 13 9 5
0
3
3
2008

21

2007

2005

2004

2003

2002

2001

2000

1999

1996

7
0
2

6
18
15 15 15
29 6
12 7 7 9
10
1 0 6 10
11 0 1
6 7 7 6 0
4 5
1997

10

sor- O157:H7/H(n=168)

29

2006

20

1998

30

2009

40

Non-O157 (n=135)

9
1

Kuva: Taru Lienemann/THL

17.11.2011

29

EHEC-epidemiat Suomessa
Pohjanmaa, vuonna 1997
Seroryhm O157
n. 15 tartuntaa
Uimavesi
Etel-Suomi, 1998-2002
Seroryhm O157
Pieni epidemiaklustereita
Jauheliha, nautakarja

17.11.2011

30

Saksan EHEC O104:H4 -epidemia

Tappajakurkut
Epidemiakannalla EHEC + EAEC -ominaisuuksia
stx2, aggR
Intimiini-negatiivinen, enterohemolysiini-negatiivinen
Multiresistentti
Harvinaisempi serotyyppi O104:H4
Sairastuneita 2684, kuolleita 39 (20.7.2011 menness)
HUS-oireyhtym 1/3 sairastuneista
EFSA (Euroopan elintarviketurvallisuus-viranomainen) ja
ECDC (Euroopan tautikeskus) riskinarvio
Saksan ja
Ranskan epidemioiden todennkinen yhteinen tekij
egyptilist alkuper olevat sarviapilan siementen idut

17.11.2011

31

Ripulikolit Burkina Fasossa

Suomen Akatemian projekti
2008-2011: Ruoka- ja
vesivlitteisten
enteropatogeenisten
bakteerien epidemiologia
Burkina Fasossa
Mikrobiologista tutkimusta
kestvn
kansanterveystyn
strategian tueksi
Ei aikaisempaa tietoa
enteropatogeenien
epidemiologiasta
Ripulikolien detektointi
elintarvikkeista ja ihmisten
ulosteista, EHEC-kantojen
eristys ja tyypitys
17.11.2011

32

Elintarvikehygienia Ouagadougoussa
syy

ripulikolien korkeaan esiintymiseen raaoissa lihoissa

17.11.2011

33

Virulenssigeenien esiintyvyyden vertailu

ripulikolipositiivisissa lihanytteiss ja
lasten ulostenytteiss
16-alukkeinen PCR sekaviljelmille

17.11.2011

34

Burkina Fasosta eristetyt EHEC-kannat

Eristysmenetelmin peskehybridisaatio ja PCR-seulonta
21 kantaa: 20 lihoista (naudanlihatuotteet, lampaanliha) ja 1
ripulia sairastavan lapsen ulosteesta
Kaikilla kannoilla stx1, puolella mys stx2
stx2 virulentimpi.
Kaikki kannat intimiininegatiivisia (eae-geeni), mutta
seitsemll kannalla intimiinia mahdollisesti korvaava STECautoagglutinoiva adhesiini (saa-geeni) (adheesio suoliston
epiteelisoluihin)
Verosolukokeessa testattu kanta tuotti shigatoksiinia
Serotyyppej O8:H-, O38:H26, O82:H8, O179:H- ja
OX183:H18 on aikaisemmin eristetty ripulipotilailta
Serotyyppi O2:H2 on aikaisemmin eristetty HUS-potilaalta

17.11.2011

35

Tutkimuksen johtoptksi

Ripulikoleja esiintyi 43 % toreilla

myytviss raaoissa lihoissa sek
59 % ripulista krsivill
pikkulapsilla Burkina Fasossa
Lasten ruoka valmistetaan usein
samoissa oloissa, jossa raakaa
lihaa ksitelln
Saastunut liha
voi olla pikkulasten ripulikoliinfektioiden takana
EPEC- ja ETEC-patoryhmt
esiintyivt usein sek uloste- ett
lihanytteiss
mahdollinen
tartuntayhteys
Lihoista ja sairaalta lapselta
eristetyt EHEC-kannat ovat
mahdollisesti ihmisille
patogeenisia

17.11.2011

36

E. coli -valvonta
Elintarvikevalvonta
Elintarvikkeiden laatuun liittyvt tutkimukset ovat
ensisijaisesti toimijan vastuulla
Omavalvonnan valvonta
E. colin kytt indikaattorina (tuotteet, tuotantotilat)

kertoo ulosteperisest kontaminaatiosta
Kontaminaatioiden vhentminen tuotantoelinten
teurastuksen jlkeen: ruhojen pesu ja ksittely laimealla
hapolla + kylmketju
Veden laadun valvonta
lmpkestoiset koliformit, E. coli
Talousvesi
Uimavesi

17.11.2011

37

Mikrobikriteeriasetuksen (2073/2005)
mukaiset tutkimukset
E. coli etsittv:
LIHAT: jauheliha, raakalihavalmiste, mekaanisesti erotettu
liha (nauta ja lammas: EHEC-listutkimus)
KALAT: kuorettomat ja kypsennetyt yriis- ja nilviistuotteet,
elvt simpukat, nilviiset
MAITO: kulutukseen sellaisenaan tarkoitettu pakattu
raakamaito, raakamaidosta tai pastrointia heikommasta
lmpksitellyst maidosta valmistettu kerma ja voi,
pastrointia voimakkaammasta lmpksitellyst maidosta tai
herasta valmistetut kypsyttmttmt pehmet juustot tai
kypsytetyt juustot
KASVIKSET JA HEDELMT: Pilkotut hedelmt ja
vihannekset, kun tarkoitettu sellaisenaan sytvksi (esim.
salaatit, raasteet, pakastevihannekset), Hedelm ja
vihannesmehut (pastroimattomat, sellaisenaan juotavat)
Listutkimuksena voidaan etsi EHEC-bakteeria

17.11.2011

38

EHEC-valvonta
Tartuntatautilaki (989/2006) ja -asetus (1376/2006)

Ihmisten EHEC-infektiot luokitellaan yleisvaarallisiksi

tartuntataudeiksi

Elintarvikevalvonta

Lihantarkastus
Esim. ELISA-mentelmn perustuva pikatesti (antigeenivasta-ainekompleksin muodostuminen) EHEC O157:lle

THL:ss

Humaanikantojen tyypitys
Epidemioiden tilastointi

EVIRA:ssa

Elintarvikkeista ja elimist eristettyjen kantojen tyypitys

Escherichia coli O157, O145, O111, O103 ja O26 seroryhmien osoittaminen viljelymenetelmll ja
reaaliaikaisella PCR-menetelmll

17.11.2011

39

Maa- ja metstalousministerin asetus nautojen EHECtutkimuksista teurastamossa ja pitopaikassa

(24/EEO/2006)
Teurastamon ja pienteurastamon elintarvikelain 20 :n mukaiseen

omavalvontasuunnitelmaan on sisllytettv nytteenotto EHECbakteerin varalta teurastamolle tai pienteurastamolle

vastaanotettujen nautojen ulosteesta liitteen 1 mukaisesti. Nytteet
on lhetettv tutkittavaksi elintarvikelain 39 :n 2 momentin
mukaiseen laboratorioon. Nytteet on tutkittava E. coli O157kantojen varalta. Nytteet tutkivan laboratorion on toimitettava
eristmns E. coli O157-bakteerikannat Elintarviketurvallisuusvirastoon. Elintarviketurvallisuusviraston on varmistettava sille
toimitetut bakteerikannat.

Elintarviketurvallisuusviraston on laadittava vuosittain teurastamoita

koskeva nytteenottosuunnitelma EHEC-seurantaa varten.

Suunnitelmassa ilmoitetaan teurastusmriin perustuva nytteiden
mr teurastamokohtaisesti. Teurastamossa on otettava nytteit
nytteenottosuunnitelman mukaisesti. Nytteenoton on oltava
satunnaista ja jakauduttava mahdollisimman tasaisesti koko vuoden
ajalle. Pienteurastamossa on otettava vhintn kaksi nytett
vuodessa. Jos pienteurastamo teurastaa alle 100 nautaa vuodessa,
nytteit ei tarvitse ottaa.

17.11.2011

40

Viranomaiset: ruokamyrkytysten selvitysty

THL: TART, TABA
Tartuntatautirekisteri

Elintarvikevirasto
Ruokamyrkytysrekisteri

Sairaanhoitopiirit

Lninhallitus

Terveyskeskus

Terveydensuojeluviranomainen

Elinlkint- ja elintarviketutkimuslaitos

Kunnallinen
elintarvikelaboratorio

Ruokamyrkytysten selvitystyryhm
Niemi ym. 2004
17.11.2011

41

Yhteenveto

EHEC (seroryhm O157) merkittvin ruokamyrkytyksi aiheuttava

koli
Tapauksia vuosittain vhn muihin ruokamyrkytysbakteereihin
verrattuna, mutta aiheuttaa vakavia oireita
Ripulikolikantojen muuntuminen uhkana
vakavia infektioita
Tartuntojen ennaltaehkisy riittvn valvonnan avulla
Epidemioiden jljitys vaatii viranomaisten yhteistyt

17.11.2011

42

KIITOS!

outi.martikainen@thl.fi
17.11.2011

43