Professional Documents
Culture Documents
aiheuttavat levt ja
syanobakteerit
Kaarina Sivonen
MIKRO 213
Levien ja syanobakteerien
tuottamat toksiinit
Fykotoksiinien tuottajat
Panssarilevt DINOPHYTA:
Dinoflagellaatit:
PSP Paralytic Shellfish Poisoning (halvausta aih.)
DSP Diarrethic Shellfish Poisoning (ripulia aih.)
NSP Neurotoxic Shellfish Poisoning (hermosto oireita)
CFP Ciguatera Fish Poisoning
Ruskolevt CHROMOPHYTA
Piilevt Diatoms,
ASP - Amnetic Shellfish Poisoning (muistin menetys)
Tarttumalevt Prymnesiophycaceae
Kalakuolemat (Ichthyotoxins)
Syanobakteerit - CYANOPHYTA
PSP l.
"saksitoksiinit"
Voimakkaita hermomyrkkyj:
tukkivat hermoston natrium
kanavat, saksitoksiini LD50 10
g/kg (hiiri i.p.)
Myrkytysoireet vaihtelevat
PSP toksiinien koostumuksen
mukaan: tunnottomuus,
lihasheikkous pahoinvointi,
hengitysvaikeudet, halvaus
Tuottajat, dinoflagellaatit
Gymnodinium/Ptychodiscus brevis,
G. breve
Ciguatera
Ruokamyrkytyksi yli 50 000 ihmist sairastuu vuosittain
Trooppisten ja subtroppisten alueiden kalat (35 N 34 S)
yli 400 kalalajia (Kuuba, Florida, Indonesia, PohjoisAustralia...)
Koralliriutoilla kalat syvt toksiineja sisltvi
dinoflagellaatteja makrolevien pinnoilta, toksiinit
kerntyvt petokaloihin (baracuda, snapper, grouper,
jacks...)
Tuottajat,
dinoflagellaatit:
Ciguatera
Siguatera-toksiini (Ciguatoxin) on hyvin
rasvaliukoinen yhdiste, LD50 arvo on 0.45 g/kg (i.p.
hiiri), muistuttaa brevetoksiineja mutta on
voimakkaampi (10 100X)
Siguatera myrkytyksiss useita toksisia
komponentteja
Scaritoxin, Gambiertoxin
Kuvassa kalasta ja
levst eristetty
(polyeetteri) siguatoksiini
Toksiini domonihappo
(domoic acid) vaikuttaa
keskushermostoon
(hermovlittjaine glutamaatin
analogi)
Turvaraja 20 g/g (epidemian
aikana 900 g/g) - PSP 0.8 g/g
Ihminen herkempi kuin jyrsij
Prymnesium parvum
Murtovesiss
Kalakuolemia: Englannissa, Hollannissa,
Tanskassa, Bulgariassa, Israelissa ja Norjan
rannikoilla (v. 89, -90)
Toksiinit happamia polaarisia lipidej:
iktyotoksiini = kalatoksiini, cytotoksiini =
solutoksiini ja hemolyyttinen = punasoluja
hajottava toksiini
Toksiinit erittyvt veteen ja vaikuttavat kalojen
kiduksiin
Lev herkk ammoniumsuoloille hyv
kontrollointi keino
Chrysochromulina polylepsis
1988 massiivisia kalakuolemia Ruotsin (9-14
toukokuuta), Tanskan (- 26 toukokuuta) ja
Norjan (24-29 toukokuuta) rannikoilla
Suurin mr soluja 7-14 syvyydess kalakuolemia ennen kuin kukinta havaittiin
Toksiini kerntyy ostereihin ja simpukoihin, ei
voitu tunnistaa kalan lihasta
Toksiini sislt komponentteja, jotka erilaisia
kuin Prymnesium parvumin tuottamat toksiinit
(hemolyyttist = punasoluja hajottavaa ja
solutoksista aktiivisuutta)
Levtoksiinien mittausmenetelmt
Hiiritesti mm. PSP MU (mouse unit)/kg
Raja-arvo: 80 g STX ekvivalenttia per 100 g
simpukan lihaa tmn ylittvt pitoisuudet
> simpukoita ei saa myyd
Nestekromatografia, kapillaarielektroforeesi, LC-MS
tehokkaita kaikkien tunnettujen toksiinien
analysoinnissa, PSP mys ELISA testi
Ongelma uudet toksiinit/toksiinivariantit,
referenssimateriaalien puute
Syanobakteeritoksiinit
Cyanobacteria
Hepatotoxins
Neurotoxins
Other toxins
(Homo-)Anatoxin-a
- binds to acetylcholine
receptors
- LD50 250 g / kg
Dermatotoxins
- aplysiatoxins
- lyngbyatoxins
Nodularins (~ 10 variants)
- acute hepatotoxicity
- tumour promotion
- carcinogens
Anatoxin-a(S)
- cholinesterase inhibitor
- LD50 20-50 g / kg
Cylindrospermopsins
- inhibitor of protein synthesis
- destroys liver, thymus, heart
and kidney cells
Saxitoxins (~ 20 variants)
- block Na channels
- LD50 10 g / kg
Endotoxins
- bacterial cell wall
components
Syanobakteerien peptidi
maksamyrkyt (hepatotoksiinit)
D-Glu
Mdha
Adda
Mikrokystiinit rengasrakenteiset
heptapeptidit (80 rakennevarianttia)
(makeissa vesiss) ptuottajat:
Microcystis, Planktothrix, Anabaena,
Nostoc
Nodulariini rengasrakenteinen
pentapeptidi (murtovesi esim. Itmeri) tuottaja Nodularia spumigena
D-Ala
Leu
Arg
D-Me-Asp
Mikrokystiinien ja nodulariinin
myrkkyvaikutus
Syanobakteerien massaesiintymien
(kukintojen) myrkyllisyys
Planktotrix
Microcystis
Anabaena
Itmeren syanobakteerikukinnat
Suomenlahdelta
lytynyt mys
mikrokystiinej
tuottavia Anabaena kantoja
Itmerell maksamyrkylliset
syanobakteerikukinnat ovat
jokakesinen ilmi
Trkein myrkky on nodulariini,
jota avomerell tuottaa
murtovesiss esiintyv
syanobakteeri Nodularia spumigena
Solutoksiini Sylindrospermopsiini
Syanobakteerien lipopolysakkaridit
(LPS)
Soluseinn osa
Aiheuttavat kuumetta ja
allergeenisia reaktioita
Syanobakteerien LPS
on vhemmn
myrkyllist kuin
patogeenisten
bakteerien LPS esim.
Salmonella
Dialyysi
Caruaru Brasilia:
v. 1996 n. 50 potilasta kuoli "Caruaru
syndroomaan" mikrokystiinit mahd. mys
sylindrospermopsiini aiheuttajina vesi
suoraan jrvest (haluttiin vltt
kloorauksen aiheuttamia ongelmia
dialyysiss) aktiivihiilisuodatettuna
dialyysiin aktiivihiilipatruunoiden
kyllstyminen toksiineilla toksiinit
suoraan suoneen
Terveysruoka
Kuvat:
http://www.spirulinas
ource.com/earthfood
ch5a.html
Spirulina tapletit/puristeet
Klamath Lake (Oregon) - Aphanizomenon
"Many of our clients ask us about blue-green algae and what it has to do with E3Live Aphanizomenon flos-aquae (AFA). As you know,
E3Live is 100% AFA, a superior blue-green algae. It is not man-made or manufactured, but harvested from nature under the highest of
standards before it is sent to you in its fresh-frozen state. AFA is an edible species of blue-green algae that has been consumed by
indigenous people for thousands of years. AFA is a very nutritious, whole food containing over 64 nutrients that are 97% absorbed by the
body. "
Toksiinikonsentraatiot
luonnossa
Kukinnan intensiteetti ja laajuus (Itmerell korkein
mitattu pitoisuus 18 mg /g kuivapainoa jrviss korkeita
anatoksiini-a pitoisuuksia > 4.3 mg/g kuivapainoa; mikrokystiinit
maksimi arvo miattuna ELISA:lla 5.2 mg/l, saksitoksiini 1 mg/l v.
2002-2003)
Erittyvtk toksiinit?
Syanobakteeritoksiinien/tuottajien
havainnointi
Tarvitaanko nytteen puhdistusta
tai konsentrointia?
Riittk meille tieto toksiinikonsentraatioista vai haluammeko
tiet mit toksiineja nytteess on?
Myrkyn tuottaja? > kantojen eristys
PCR, kvantit. reaaliaikainen PCR,
Microarray
Esim. jrvien kunnostus
Harada, 1996
Syanobakteeritoksiinien analyysimenetelmt
Physico-chemical
100
LC/MS
NMR
MS
Selectivity
75
HPLC (UV
detection)
50
TLC
MMPB
ELISA
25
Bioassay
(mouse)
0
Phosphatase
assay
Sensitivity
bandsurface
Maksamyrkkyjen
tuottajien tunnistus
perustuu
biosynteesigeeneihin
(mikrokystiini nodulariini
syntetaaseihin)
PCR, kvantitatiivinen
PCR, Mikrolastu
2S
H
2T 01
U
2 K 02
2SJ 03
2K J 04
2 VN 0
D 5
2P 06
N
2K 0 7
2RE 08
2L N09
2 KA1
Y 0
2 P 11
2V H1
U 2
2S 1 3
2V J1
M 4
2 15
2 HIL 16
Z
2T 17
2L T18
2 PA 19
Q
2T 20
2 V I2
E 1
2J 22
2M T2
3
2VY2
A 4
2 V 25
J
2 IA2 6
2S 27
S
2S 28
2 PN2
Y 9
2 P 30
2HU3
1
2K K3
L3 2
2I 3
2K J3
H 4
2 IK 3 5
2Y 3
6
2H L 37
V
2P 3 8
2 LO 3
K 9
2L 40
O
2K 41
M
2H 4
K 2
2R 4 3
2 T J4
4
2 TO4
A4 5
2N 6
J
2I 47
R
2H 4
H8
2 P 49
2 P J 50
P
2 H 51
2K I52
2 KK 5
S3
2 K 54
2PU5
5
2V K 5
6
S
2M 57
A
2IH58
2S 5
G 9
2 IV 60
2P 61
2P E62
2 KV 6
R3
2S 64
2MD6
5
2UK 6
6
2R R6
7
A
2E 68
N
2K 69
2V I 7
G 0
71
Tuottajien tunnistus
5000
4500
4000
3500
3000
2500
Plank_mcyE
2000
Ana_mcyE
1500
Mic_mcyE
general_mcyE
1000
500
0
s am ple s
-1
y = 0,7846x - 1,0697
R2 = 0,7244
0
11
2
log (ndaF copies/ ml water)
3
4
5
Syanobakteeritoksiinien
vaikutukset elistn
Vesieliist elinplankton ja kalat ovat alttiita
syanobakteerien toksiinivaikutuksille
Vaikutuksilla eroa, suvun, lajin ja jopa kloonien vlill
Syanobakteeritoksiinit voivat vaikuttaa elinplanktonin
rakenteeseen (jos toiset lajit herkempi kuin toiset
selektio)
Suositus l sy kalojen (vesilintujen) siselimi
(maksaa) kukintojen aikana
l kyt kukintavett salaattien kasteluun
(pitoisuusjmt)
Laboratoriokokeissa kasvien on havaittu olevan alttiita
myrkyille, juuristo alikehittynyt
Est koti ja lemmikkielinten psy kukintoihin
Animals affected
Type of toxicity/
Toxin
Cyanobacteria
Reference
Australia, L.
Alexandrina, 1878
Hepatotoxin
Nodularia
Francis, 1878
Finland, L. Vesijrvi,
1928
40 cows
Neurotoxin
Anabaena
Hindersson, 1933
Hepatotoxin
Nodularia
Nehring, 1993
Norway, Roagland
1978
4 heifers
Hepatotoxins
Microcystis
Skulberg, 1979
5 cows
Anatoxin-a
Anabaena
Hepatotoxins
Oscillatoria/
Planktothrix
Denmark, L. Knud s
1993, 1994
Anatoxin-a(S)
Anabaena lemmermanni
saxitoxins
Anabaena circinalis
Veden virkistyskytt
Vlt sinilevisen veden
kytt
EU:n uimavesidirektiivi
syanobakteerit mainittu
erikseen
Uimarantojen valvonta
uimakiellot/varoitukset
lapset riskiryhm
Aerosolit roiskeet vesihiihto,
saunavesi
Suomessa myrkytyskeskuksiin
yhteydenottoja vuosittain
Juomavesi ohjearvot
Juomavesi saa sislt enintn 1 g/l
mikrokystiini-LR: (WHO:n suositus)
Riskialueet alhaisemmat arvot?
(kehitysmaat vett ei pudisteta +
ravinnossa esim. aflatoksiineja)
Monien toksiinien suhteen puuttuu
toksikologinen ja epidemiologinen tieto, jotta
raja-arvoja/ohjearvoja voitaisiin mritt
Ohjearvojen laskenta
Tarvitaan hyvi toksikologisia/epidemiologisia tutkimuksia
Ohjearvo = TDI x bw x P Mikrokystiineille= 1 g/litra
L
TDI = tolerable daily intake (0.04 g Kg-1 bw per day)
(myrkkymr joka ei aiheuta terveysvaikutuksia koko
elinin aikana laskettu hiiritestin perusteella
turvakertoimella 1000. Huom. tm perustuu vain akuuttiin
myrkyllisyyteen, tuumoripromootio vaikutuksia ei
huomioitu)
bw = body weight (oletus: 60 kg aikunen 2 litraa vett
per piv)
P = juomaveden osuus pivittisest toksiinisaannosta
arvioitiin 80% (arvo kaavassa 0.8)
Tulos kaavasta = 0,95 g/l pyristys 1 g/L
Poistuvatko syanobakteerisolut
vedenksittelyss?
SOLUT:
Solujen poistoon tarvitaan kemiallinen
saostus
Hiekkasuodatus ei poista soluja
tehokkaasti (esimerkki menneilt vuosilta
Suomesta: Draksfjrd kylpyammeessa vihreit
hiukkasia Planktothrix agardhii filamentteja
vedenkyttkielto tankkiautoilla puhdasta vett)
Depth (m)
0,01
0,1
10
100
0
2
4
6
8
Chl-a (g/l)
Planktothrix (mg/l)
MCYST-LR (g/l)
Massaesiintymi raakavesilhteiss
Planktothrix
0,01
0,1
10
100
0
1
Depth (m)
2
3
4
5
6
7
8
Kes 1999
Planktothrix agardhii (mg l-1), Chlorophyll-a
(g l-1), Microcystin-LR (g l-1)
Massaesiintymien seuranta
raakaveislhteiss trke
Planktothrix
MCYST (g / L)
Ice cover
700
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
Planktothrix
600
500
400
300
200
100
15.7.1999
15.6.1999
15.5.1999
15.4.1999
15.3.1999
15.2.1999
15.1.1999
15.12.1998
15.11.1998
15.10.1998
15.9.1998
15.8.1998
MCYST
Planktothrix (m / L)
Perusvedenksittelymenetelmt
(1) Orgaanisen aineen poisto
Saostus
ja
Selkeytys
sedimentaatio
tai
flotaatio
Poistaa solut
80-90% poisto solun sisiset toksiinit
Lhde: J. Rapala, STTV ja K. Lahti: Vesitalous lehti 5/1999
Perusvedenksittelymenetelmt
(2) Orgaanisen aineen poisto
(Nopea) Hiekkasuodatus
Saostuksen ja selkeytyksen jlkeen, ei
suositella ilman
Poistaa osan soluista
Ei poista liuenneita toksiineja
Lhde: J. Rapala, STTV ja K. Lahti: Vesitalous lehti 5/1999
Perusvedenksittelymenetelmt
(3) Desinfiointi
Klooraus
kaasu: ei tehokas toksiineille
tai
hypokloriitti: riippuu annoksesta, aika ja pH, >80%
toksiinien poisto mahdollista
Klooriamiiniksittely
ei tehoa syanobakteerien toksiineihin
UV-ksittely
ei tehoa syanobakteerien toksiineihin
Lhde: J. Rapala, STTV ja K. Lahti: Vesitalous lehti 5/1999
Vesien lisksittelymenetelmt
(1) liuenneiden orgaanisten aineiden poisto
Aktiivihiili (adsorptio)
Aktiivihiilijauhe
ei poista soluja, >85% toksiineista poistuu
Aktiivihiilisuodatus
poistaa jonkin verran soluja, >80% poisto
liuenneille toksiineille
Vesien lisksittelymenetelmt
(2) (liuenneiden) orgaanisten aineiden
poisto
Otsonointi
rikkoo solut lis liuenneita toksiineja
>98% liuenneiden toksiinien poisto
Vetyperoksidi
tehoton toksiinien poistossa, tehokas yhdistettyn TiO2
Hidas hiekkasuodatus
tehokas solujen sisisten toksiinien poisto
liuenneiden toksiinien poisto riippuu biofilmist suodattimilla
ja suodatusnopeudesta
(Kalium permanganaatti)
Veden lisksittelymenetelmt
(3) Esiksittelyt
Esiotsonointi
tai
Esiklooraus
kytetn lismn saostuksen
vaikutusta
lisvt liuenneiden toksiinien mr
Lhde: J. Rapala, STTV ja K. Lahti: Vesitalous lehti 5/1999
Vedenksittelyjrjestelmt vaihtelevia
Suomessa
(Lahti et al., 2001 Water Sci. Technol. 43:225-228)
A - Sand filtration, Al-coagulation, mixing with ground water, chlorination
B - Contact filtration with Al, activated carbon filtration, chlorination
C - Al-flotation on sand filter, chlorination
D - Al-flotation on sand filter, UV-disinfection, chlorination
E - Al-coagulation, flotation, sand filtration, chlorination
F - Al-coagulation, flotation/clarification, ClO2, activated carbon filtration,
chlorination
G - Fe-coagulation, clarification, sand filtration, Fe-coagulation, flotation,
activated carbon filtration, chlorination
H - Fe-coagulation, activated carbon powder, Fe-coagulation,
flotation/clarification, activated carbon filtration, chloramine
I - Al-coagulation, clarification, sand filtration, ozonation, slow sand
filtration, chlorination
J - Ozonation, Fe-coagulation, flotation, sand filtration, chloramine
K - Al-coagulation, clarification, sand filtration, ozonation, activated carbon
filtration, chlorination
Mikrokystiinien konsentraatiot
(g l-1) raakavedess
MCYST-positive samples
1999
2000
A
1/4
0/5
B
0/3
C
3/3
D
0/3
0/4
E
1/4
0/4
F
2/3
0/4
G
1/3
0/4
H
3/4
3/6
I
2/8
0/4
J
9 / 20
1 / 13
K
0/4
Others
3/5
0 / 13
total
13 / 33 (39%)
19 / 52 (37%)
10 / 56 (18%)
2001
2/3
0/1
11 / 16
MCYST (g / l)
<0.1 1.1
<0.1
0.1 0.6
<0.1
<0.1 3.8
<0.1 0.1
<0.1 0.1
<0.1 8.3
<0.1 1.4
0.1 9.4
<0.1
<0.1 0.1
Esimerkkej mikrokystiinien
pitoisuuksista vedenksittelyn jlkeen
10
g / L
0,1
0,01
Raw water
Clarification I Clarification II
/ Flotation
AC +
Chloramine
Esimerkkej mikrokystiinien
pitoisuuksista vedenksittelyn jlkeen
10
g / L
0,1
0,01
Raw water
COAG,
CLARIF, FILT
AC
Chlorination
20/11/2001
20/08/2001
20/05/2001
20/02/2001
20/11/2000
20/08/2000
20/05/2000
20/02/2000
20/11/1999
20/08/1999
20/05/1999
20/02/1999
20/11/1998
20/08/1998
0,04
0,02
20/11/2001
20/08/2001
20/05/2001
20/02/2001
20/11/2000
20/08/2000
20/05/2000
20/02/2000
0,06
20/11/1999
0,08
20/08/1999
0,1
20/05/1999
Chlorination
20/11/2001
20/08/2001
20/05/2001
20/02/2001
20/11/2000
20/08/2000
20/05/2000
20/02/2000
20/11/1999
20/08/1999
20/05/1999
20/02/1999
20/11/1998
Coagulation
20/02/1999
Ozonation
20/08/1998
Clarification
20/11/1998
20/08/1998
Puhdistusjrjestelm
Raakavesi
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0,26
0,3
0,22
0,18
0,14
0,1
0,06
0,02
20/11/2001
20/08/2001
20/05/2001
20/02/2001
20/11/2000
20/08/2000
20/05/2000
20/02/2000
20/11/1999
20/08/1999
20/05/1999
20/02/1999
20/11/1998
20/08/1998
Vesilaitostutkimus:
Otsonointi - toimintahiri
0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
C h lo rin atio n
S lo w san d
filtratio n
O z o n atio n
COAG,
C L A R IF ,
F IL T
R aw w ater
g / L
Mikrokystiinien poisto
10
0,1
0,01
Yhteenveto, mikrokystiinit
(Suomalaiset puhdistuslaitokset)
Tekopohjavesi
Jrvi/jokivett ruiskutetaan
harjuun, jossa vesi
suodattuu harjun lpi ja
samalla puhdistuu
Rantaimeytys
Jrven vesi suodattuu rantapenkereiden lpi
Mikrokystiinit rantaimeytyslaitoksilla
Raakavesi
Rantaimeytyskaivo
Laitos Nytteet
posit/kaikki
Pitoisuus
Nytteet
Pitoisuus
19 / 27
<0.1 1.9
2 / 24
<0.01 0.05
9 / 27
<0.1 1.0
2 / 14
<0.01 0.1*
8 / 24
<0.1 0.2
1/5
<0.02 0.03
9 / 27
<0.1 0.4
4 / 15
<0.02 0.04
*hapeton vesi
Endotoksiinit
A
B
C
D
E
G
I
Raw water
Treated water
353300
5220
2229
3974
4661
2732
5795
48
839
45
28
49
12
12
Listietoa - lhteit
Suomeksi:
Sivonen, K. 1998. Lev iskee maksaan ja hermostoon. Tiede 2000,
4/98:40-43. (Levien ja syanobakteerien toksiinit)
Vesitalous-lehti, 5/1999. (Erikoisnumero syanobakteeritoksiineista).
Englanniksi:
Toxic Cyanobacteria in Water: a Guide to Public Health Significance,
Monitoring and Management. 1999. I. Chorus & J. Bertram (Eds.).
The World Health Organization. ISBN 0-419-23930-8. E & FN Spon,
London, UK.
http://www.who.int/water_sanitation_health/resourcesquality/toxicya
nbact/en/
Seafood and Freshwater Toxins: Pharmacology, physiology and
detection. 2000. L. M. Botana (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York.