G

Problemas

INTRODUCCION

1 Hacer una lista de las sustancias que se producen por fermentacin en el pas y
de las que se importan, estableciendo cantidades en kg/ao y precio en $/kg.
2. Buscar en la literatura el diagrama de flujo para la manufactura de los
siguientes productos: alcohol etlico, cido ctrico, penicilina y a-amilasa.
3. Hacer una lista de los lugares, en el pas, donde se pueden obtener cepas
para fermentacin, especificando el nmero y las especies disponibles.
4. Listar las principales diferencias entre los organismos eucariotes y
procariotes, considerando su posible uso en fermentacin. Mencionar algunos
ejemplos de cada uno.
CRECIMIENTO MICROBIANO

5. Un organismo que crece en un medio complejo en cultivo sumergido

aerbico, fue medido de la siguiente manera:
Tiempo (h)

Nm. de organismos
mi

012345678

)().

2Q

,35

J2()

J81

3,,

Determine el valor de Pnrix y el de Ks Cmo afectara al resultado el que las

mediciones se hubieran hecho cada 4 horas?
6. Se tiene una bacteria con un tiempo do duplicacin mnimo de 1 h
otra con uno de 2 h en las mismas condiciones ambientales. Si inicialmente la
|305|

Problemas

Problemas

306

relacin de concentraciones entre ellas es de 0.1 Cul ser la concentracin

despus de 5 y de 10 h? Especifique sus suposiciones para la solucin del
problema. Cmo afectara un cambio en el pH?
7. En un cultivo batch, y en un medio complejo (y.gr. jugo de tuna) crece
S. cerevisiae. Es lgico esperar un crecimiento diaxico? Por qu? Cmo
se manifiestara dicho crecimiento en las mediciones de peso seco, nmero de
clulas, densidad ptica y oxgeno disuelto?
8. Si en un cultivo batch (matraz agitado) crece E. coli a 20 y 37C en
un medio compuesto por 1% de glucosa, amoniaco y sales y se obtienen los
siguientes datos:

TC

indique cul es el tamao de Inculo ptimo para maximizar el rendimiento

del producto. Suponga que la concentracin final del organismo es indepen
diente del tamao del inculo y que es constante: ningn producto se
introduce con el inculo y no hay fase lag.
II. Qu modelo cintico para el crecimiento celular y de formacin de
producto es aplicable a los siguientes datos?
Concentracin
Peso seco

(h)

(g/l)

sustrato

0.100
0.122
0.149

5.0
4.96

Tiempo

Y(g clulas/g sustrato)

0.2

0.4
0.6
0.8

0.41

20
37

0.26

1.0
1.5
2.0

Es acertado concluir que la temperatura afectar siempre el rendimiento

de esa manera? En caso de que su respuesta sea negativa, exponga de qu otra
manera explica usted el experimento.

2.5
3.0
3.5
4.0
5.0

CINETICA DE FERMENTACIONES

6.0
7.0
8.0
9.0

9. Encuentre usted los parmetros cinticos, tanto de crecimiento como de

formacin de productos, de los siguientes datos experimentales:

10.0

Tiempo
(h)

0
13
30
40
64
80
90
110
130
150

Concentracin del
sustrato

Biomasa

(g/l)

(g/l)

54.5

0.2
1.1
2.0
2.8

52.0

51.0
50.2
41.0
32.0
27.0
21.0
17.2

6.0

6.3
6.32
5.94
5.1
5.2

15.0

750
1 880
2 700
3 150
3 800
4 800
5 160

Tiempo

(h)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.5
2.0
2.5

particular,

3.0

3.5
4.0
5.0
6.0
7.0

dx

+ px
dt

8.0

-1 dP

dt

0.221
0.269
0.441
0.724
1.187
1.94

2.54
2.56
2.53
2.51
2.48

2.46

2.43
2.41

4.90
4.84
4.76
4.66
4.31
3.74
2.80
1.27
0
0

0
0
0
0
0

(unidades/l)
0

0.00243
0.00540

0.00901
0.0134
0.0188
0.0379
0.0693
0.121
0.205

0.330
0.459
0.714
0.966
1.22
1.46

1.71

1.95

12. La siguiente informacin se obtuvo en cultivos batch de B. subtilis

que crecan en maltosa como sustrato limitante y a-amilasa como el producto
deseado :

proponga uno.
10. Suponiendo que el siguiente modelo se ajusta a una fermentacin

dt

0.181

(g/D

Concentracin
producto

Producto

(unidades/ml)

Utilice varios modelos y en caso de que ninguno de ellos se ajuste,

dP

307

9.0
10.0

= a/u + (3

dP

Biomasa

(g/l)

0.1
0.122

0.149

Maltosa

(g/D

5.00
4.96
4. >2

a -am lasa

(ujl)

0.243
0.540

0.181
0.221
0.269
0.441
0.724
1.187
1.94
2.54

4.84

0.901

4.76

1.34

4.66
4.31
3.74
2.80
1.27
0

1.88
3.79

2.56

0
0

6.93
12.1

20.5

33.0
45.9
71.4

2.53
2.51
2.48
2.46
2.43

0
0
0

146.0
171.0

2.41

195.0

96.6

122.0

Cul es el modelo cintico aplicable al crecimiento de las clulas?

Determine los parmetro* cintico y ostcquiomtrico apropiados. Cul es In

= tt /jx + /3 x

dt

308

Problemas

cintica de formacin de a-amilasa?

necesarios.

Problemas

309

Determine los parmetros cinticos

D

. 'ymk>

13. Se utiliza un quimiostato para medir las velocidades de mutacin y se

obtienen los siguientes datos:

wi-V

l:

'

D = 0.6 h~l

100

9
11
13

0.1
0.2
0.3
0.35
0.39

8.0

24.0
16.0
13.3
12.5
11.8

8.0
7.95
7.80

0.03
0.11
0.16

_
0.29
_

0.89
1.07

E. S i
bikl/i

TRANSFERENCIA DE MASA

17. Un volumen de agua de 0.21 m3 (densidad = 103 kg/m3, viscosidad

10 ~3 N seg/m2) se agita en un tanque cilindrico de 0.6 m de dimetro me
diante un impulsor de 0.24 m de dimetro. A una velocidad de 5 rps, se encon
tr que el impulsor transmiti 720 W de potencia al fluido.
Calcule la velocidad del impulsor para operar un tanque geomtricamente
similar de modo que transmita 2 kW/m3 a 15~m3 de agua. Para el primer
tanque, cul es la velocidad mxima del impulsor si se cuenta con un motor
de 2 HP?
18. Se proyecta utilizar un tanque cilindrico, al cual se inyecta aire, para
producir levadura. Las condiciones del fermentador son las siguientes:

Dimetro del tanque

Volumen del lquido
Flujo de aire
Presin en el tanque
Temperatura

(IT1)_ (g/i)_ fg/i)

8.0

0.04

a) Encuentre los parmetros cinticos de este organismo suponiendo una

cintica de Monod y una energa de mantenimiento (compare con metabolis
mo endgeno).
b) Si ahora se lleva a cabo una alimentacin de S0 =5 g/1, cul ser la
productividad mxima del sistema (suponiendo que no haya otro tipo de
limitacin)?

Calcule la velocidad de mutacin (eventos de mutacin/organismo padre-generacin). Suponga que la /j del mutante es igual que la del padre.
14. Si un solo contaminante entra en un quimiostato, existe una probabili
dad finita de que salga del fermentador antes de dividirse. Calcule esta
probabilidad para una clula con un td de 2 h en un fermentador que opera a
las siguientes tasas de dilucin: 0.2, 0.5, 1.0 y 1.5 h-1 . -
15. Utilizando el modelo de Luedeking y Piret para la formacin de
producto dP/dt = atx /3x derive la ecuacin para el estado estacionario que
relaciona a concentracin del producto a la salida con la concentracin celular
y la velocidad de dilucin. Suponga una cintica tipo Monod. Cules son los
valores de a y 0 para la produccin de cido lctico en cultivo continuo que
se obtienen de los siguientes datos experimentales?

cido lctico

1.11
1.18
1.26
1.33
1.36
1.37
1.25
1.21
0.98
0.88

0.205

Tiempo/(h)

0.012

0.133
0.161
0.172

Numero de mutantes/ml

(i/D

0.114

Poblacin total = 109/mi

200
300

(gil)

0.022
0.035
0.054
0.077
0.092

CULTIVO CONTINUO

.u

(h-1)

4m
125 m3
0.5 VVM

0.5 atm

30C

Con agua y usando un electrodo de oxgeno se obtuvieron los siguientes

datos:

16. A continuacin se dan los datos experimentales de cultivo continuo en

estado estacionario para la produccin de biomasa:
i

1_

Tiempo (seg)

10

20

30

40

50

60

Tensin de oxgeno
(KN/ma)

5.0

11.1

14.1

15.9

16.8

17.3

17.6

Problemas

311

Calcule el coeficiente de transferencia de masa (suponiendo una respuesta

instantnea del electrodo).
Encuentre la productividad mxima del sistema para la produccin de
levadura en cultivo continuo, usando melazas.
19. Disee un fermentador piloto de 550 1 para los siguientes requerimien

evidencia de que la velocidad de corte del fluido es un parmetro crtico que

influye en la produccin del antibitico. Se intenta duplicar la velocidad de la
punta del impulsor, y para ello existen varias posibilidades; evale cada una de
ellas y proponga la mejor.
a) Sin cambiar la potencia, HP, del motor elctrico instalado, cmo liara
en ND?
b) Cmo afectara duplicar N a los otros parmetros del proceso?
c) Si se redujera 25% el tamao del impulsor, qu le sucedera a N y a la
potencia?
d) Suponiendo que el coeficiente de transferencia de masa est correlacio
nado con la potencia por unidad de volumen y que no hay efecto en la
correlacin cuando vara ND, que sugerira usted?
Suposiciones:
1. Flujo turbulento en todos los c&as
2. Propiedades fsicas del fluido constantes
3. Despreciar el efecto de aeracin en absorcin de potencia
22. Indique usted cul de las dos siguientes correlaciones usara para hacer
un diseo de escalamiento:

310

tos:

Viscosidad de 0.01 a 100 cp

Densidad de 50 a 75 lb/ft3
Geometra estndar
20% de prdida de potencia del motor en sellos, conexiones, etc.
El motor deber operar de 0 a 300 rpm
Volumen de operacin, aproximadamente 70%
Indique las relaciones geomtricas y el tamao del motor elctrico re
querido.
20. En el laboratorio se encontr que el rea interfacial en tanques
agitados est gobernada por los siguientes parmetros:

N0Dj = 0.195

0.2 DT/Dj

a HL = 96 (ND - N0Dj)

N0

VW

= velocidad mnima del agitador, rps

N = velocidad del agitador, rps

D = dimetro del impulsor, m

Dt = dimetro del tanque, m

Hl = altura del lquido, m
a

= rea interfacial, m2/m3

Para escalamiento en tanques geomtricamente similares se recomienda:

1 . Igual velocidad tangencial en la punta del agitador (tip speed velocity).
2. Igual rea interfacial.
3. El escalamiento no se debe hacer con base en P/V constante
Analice los resultados anteriores y seale sus crticas en cuanto a los criterios
propuestos.
a) Si los criterios 1 y 2 son correctos, qu sucedera si hiciese un

escalamiento en volumen de 1 000? (Comparacin cuantitativa).

b) Discuta el criterio 2 para escalamiento, apoyndose en su conocimiento
de la teora de transferencia de masa.
c) Por qu razn las correlaciones encontradas apoyan el criterio 3?
ESCALAMIENTO DE FERMENTACIONES

21. En la produccin de antibiticos se emplean organismos miceliales y hay

/ PA 0 4

kLa (
a

kLa

/ Pe\0 -7

Mj

vs'5

N'5 (Calderbank)

Vs0-67

(Fukuda)

Analice en su respuesta las diferencias y/o similitudes de ambas. Establezca la

razn por la que utilizara una en lugar de la otra (la correlacin de Michel y
Miller puede ayudarle en su decisin).
23. Se tiene un fermentador que opera en cultivo continuo de 10 1 y se
desea escalar a 1 000 1 y despus a 100 000 1. Se han medido las propiedades
del cultivo: Ys, Y0, YK, jimx, Ks, ke, Ccrt. Se desea anticipar, para cada
escala, los problemas de escalamiento por cambio de escala, considerando a)
kLa constante; b)P/V constante; c) efecto de la aeracin, y d) crecimiento en
las paredes.
24. Un tanque de 100 000 1 (volumen total) con un motor de 200 kW
opera a 76 rpm, se desea emplear inicialmente un sustrato cuya viscosidad es
100 000 cP; el motor no es de velocidad variable. Es posible emplearlo?
Por qu? Qu cambios pueden sugerirse para que sirva?

METODOS DE ESTERILIZACION DEL MEDIO

DE CULTIVO Y DEL AIRE

25. En la determinacin de la curva de sobrevivencia de E. coli con luz

ultravioleta (U.V.) y rayos 7 producidos por Co60, se obtuvieron los siguientes
resultados:

Problomas

312

(organismo/ml)

rw cn 2.4

0
10

O o

X 10"
1.07 X 107
(2.9 - 3.7) 107
(2.2- 3.3) 105
(7.5 - 9.5) 103

20
40
70

100

Rayos

(min)

velocidad de muerte trmica (seg 1 )

constante de tipo Arrhenius = 10'6,a (seg ')
A
E = energa de activacin = 2.83 X 105 (J/gmol)
= constante de los gases = 8.31 (J/gmol" K)
T = temperatura absoluta (K)

U.V.

(seg)

313

Pmttlfiima

IR

28. En un proceso industrial se esteriliza el medio de cultivo por inyeccin

de vapor y posterior enfriamiento con agua. Los datos del caso 1 son
representativos; se han propuesto algunos cambios en el proceso obtenindose
los datos del caso II. En una autoclave (caso III) se alcanza un nivel de
esterilidad adecuado para el mismo medio.

(organismo/ml)
(3.7 - 4.4) 10"
(2.1 - 2.4) 101
(1.6 - 1.9) 107

0
3.5

4.0

(7.3

8.9)
(2.7 - 4.9)
(1.1 1.6)
(3.7 4.0)

4.5
6.0

7.0
10.0

106
10*
10*
105

La fuente de U.V. produce 2.7 X 10s erg/seg y la de rayos 7 4X 108 erg/min.

Cul de las dos radiaciones es ms efectiva?
Para una contaminacin de 106 organismos/ml, cunto tiempo se requeri
ra de cada uno de los dos tipos de radiacin?
26. Un caldo de cultivo de Pseudomonas psicroflica ha sido contaminado
con el mesfilo Bacillus subilis (clulas vegetativas y esporas). Suponga que
hay 109 clulas/ml de Pseudomonas y 103 clulas/ml de B. subilis (cuenta
viable):
a) Qu tipo de curva de inactivacin trmica se espera a 55C y a

121C?
b) Qu tipo de curva de inactivacin por radiacin se puede postular?
c) Se desea cuantificar Pseudomonas por plateamiento.
Cmo se asegurara de que B. subilis no se incluya en la cuenta de clulas
viables?
27. Se desea esterilizar continuamente 500 m3 de un medio que contiene
licor de cocimiento de maz para la produccin de gluconato de sodio. Un
experimento bach con 10 1 de este medio, con rpido calentamiento a la
temperatura de esterilizacin de 121C y un subsecuente enfriamiento rpido
a temperatura ambiente, requiri de 90 seg para alcanzar una probabili
dad suficientemente baja de sobrevivencia de un organismo. A qu tempera
tura se deber operar un esterilizador continuo si se desea operar con la misma
probabilidad de esterilidad en un reactor de flujo tapn con un tiempo de
residencia de 35 seg y un flujo volumtrico de 0.033 m3/seg? Como base de su
clculo, suponga que los contaminantes son esporas de Bacillus searohennophilus,cuya velocidad de muerte est dada por:

k=

a-e'rt

Tiempo

Caso I Caso I

T (C)

24

10
20

34
48

30

64

40
50
60

70

80

90
100
110
120
130
140
150

81

97
103
113
121
121
114
106
99
92
84

76

Caso III

tCQ

T(C)

28
36
48
70
121
121
105
90
78
68
60
52
47
42
37
34

26
58
90
121
121
80

48
30
18

V. 8. <

Haga un anlisis de los tres casos e indique qu cambios propondra y las

razones de los mismos.
PROCESOS DE SEPARACION Y PURIFICACION

29. Se utiliza una centrfuga tubular con un radio de 2.05 in y una altura de
12 in para separar 2 lquidos con densidades de 62 lb/ft3 y 63.91 lb/ft3 . Para
obtener una separacin satisfactoria es necesario que el fluido pesado permu
nezca en la centrfuga 5.5 seg y el ligero 4.0 seg. La relacin volumtrica de los
fluidos es 1: 1 . El espesor del lquido pesado es 3/4 in.
a) Cul es la capacidad de centrfuga, expresada como galones de alimenta

cin total/minuto?
b) Determine dnde debern localizarse las dos salidas de la centrfuga.
30. Se desea aumentar la capacidad de un filtro de vaco rotatorio.
Indique, tan exactamente como le sea posible, el porcentaje de aumento de
capacidad con los siguientes cambios:
a) duplicacin de la velocidad de rotacin;
b) duplicacin de la concentracin de alimentacin;
c) duplicacin de la cada de presin, y
d) duplicacin de la distancia del espejo del lquido al fondo del cilindro.

314

Problemas

31. Un filtro de hoja con 20 ft2 de superficie dio los siguientes resultados
a 50 psi:
Tiempo
(minutos)
15
30
45

60
90

Volumen

filtrado (ft3)
100
163
213
235
258

Se encontr que antes de la filtracin el lodo tena 5 Ib de slido/ 100 Ib de

lquido. Las densidades de los slidos y de los lquidos son 78.5 lb/ft3 y 62.4
lb/ft3 respectivamente. La viscosidad del caldo es 2 cP. La pasta es de tipo

incompresible.
a) Determine la resistencia especfica de la pasta y la longitud equivalente
de tela de filtro.
32. Cul es la capacidad en galones/min de una centrfuga que opera en las
siguientes condiciones:
Dimetro del rotor
24 in
Espesor de la capa lquida
3 in
Altura del rotor
16 in
Velocidad
1 000 rpm
Gravedad especfica del lquido
1.3
Gravedad especfica del slido
1.6
Viscosidad del lquido
3 cP
Tamao de partcula
30 i
PROTEINA UNICELULAR. ASPECTOS GENERALES

33. Se ha aislado una bacteria que utiliza metano como fuente de carbono.
Se propone usar un fermentador de 3 litros de volumen lquido en cultivo continuo
(I) - 0.2 h"1 y x = 10 g/1) para la produccin de biomasa. Los resultados
preliminares indican:

YCh4 =0.3 g

clulas/g

CH4,Yq =

0.4 g clula/g 02

Se lia estimado que las actividades crticas del metano y de oxgeno disueltos
son:
Actividad crtica para metano
0.05 atm
Actividad crtica para oxgeno
0.02 atm
HI fermentador se airea a 1.5 VVM con aire (20.9% 02, 79.1% N2) que se
mezcla con metano puro. El coeficiente de transferencia para el fermentador a
1.5 VVM es:
N(rpm)

kLa(h~l)

400

200
350
900
2500

500
700

1100

311

Problomns

Suponiendo que el coeficiente de transferencia de masa es igual para la

transferencia de 02 y CH, estime:
a) la velocidad mnima del agitador a que se debe operar el fermentador, y
b) el flujo volumtrico de C1I4 y aire que debe ser mantenido.
34. Se quiere disear una planta que opera en forma continua para la
produccin de levadura de pan. La capacidad diaria ser de 5 000 kg de
levadura seca. Utilizando valores razonables para los diversos parmetros di;
diseo estime:
a) requerimientos diarios de melazas, amoniaco y cido fosfrico;
b) tamao del fermentador;
c) especificaciones del compresor de aire;
d) especificaciones del motor de agitacin;
e) requerimientos de vapor, y
f) gasto de agua (temperatura 18C).
35. Se ha informado de numerosos sustratos para la produccin de
biomasa; se indica, sin embargo, que cada proceso es diferente y que tanto el
organismo como las condiciones en que crece deben ser investigadas en forma
particular. Considerando que se desea producir biomasa, qu sustrato escoge
ra usted para iniciar el estudio a nivel de planta piloto? Qu cantidades de
metano, metanol, etanol, n-parafinas, melazas, almidn, jugo del maguey y
cido actico se producen anualmente en el pas? Cules son sus precios de
venta? Qu ventajas tcnico-econmicas podra usted sealar para el sustrato
de su eleccin? Considera que su respuesta es general, o vara de acuerdo
con el pas y la situacin econmica? Cite algunos ejemplos.
36. Se ha sugerido recientemente el uso de etanol como sustrato para l;i
produccin de biomasa. Se le llama a usted como asesor y se le plantea el
siguiente problema: se tienen melazas y por medio de fermentacin alcohlica
se puede producir etanol, que ser utilizado posteriormente para producir
biomasa. Qu le parece la idea? Aconsejara que se realizase el proyecto7
Independientemente de su respuesta, indique por qu. Para el caso hipottico
sealado, cul sera el rendimiento Ys que se obtendra aproximadamente?
Cmo se podra mejorar la proposicin? Qu otras opciones existen?
PROTEINA MICROBIANA A PARTIR DE LA CAA DE
AZUCAR Y DE SUS SUBPRODUCTOS

37. Utilizando los datos de Saeman presentados en la tabla 10.5 y suponiendo

que se pudiesen aplicar al bagazo de caa (tabla 4), calcule usted cul sera la
cantidad de azcares que se producira para cada kg de bagazo que se
introdujese en un reactor que opera a 19C, 1.2% de cido sulfrico y con un
tiempo de residencia de 3 min. Qu hara usted con el bagazo que no se hidroliza? Recircularlo al tanque? Por qu?
38. La figura 10.8 presenta los resultados obtenidos por Dunlap et al., al
tratar el bagazo con lcali: Por qu tienen las curvas esa forma? Cul sera
la condicin ptima, considerando que un gramo de sosa es 100 veces ms
caro que un gramo de bagazo? Haga algunos comentarios sobre lo que
significa, tcnica y prcticamente, tener que someter los recursos celulsicos a
un pretratamiento.
39. Se han efectuado estudios en planta piloto con el objeto de podei

316

Problemas

disear una planta que produzca 10 000 ton/ao de biomasa (C. utilis Ys =
0.5). Para ello se emplea bagazo de caa (70% celulosa), que ser hidrolizado
con celulasa de T. viride, producida por un sistema de cultivo continuo de dos
tanques en serie. Despus la enzima es preconcentrada e inyectada a un tanque
de hidrlisis continua de donde pasa finalmente al fermentador. Con tanques
de 400 1 se obtuvieron los siguientes datos:

317

Prnhlomns

(gf
24
25
5
10

q
(h V
0.096
0.105

0.20
0.0532

(n/1)

(K/l)

Productividad
(K/I-It)

9.4
4.4
0.871
6.24

18.0
12.0

0.91
0.47

0.25
0.52

0.162

SQ- S
y-

0.512

0.59
0.34

No reportado.

Produccin de celulasa de T. viride (30C, pH 9.8)

Fermentador de crecimiento
I)

Fermentador de produccin
ae enzima

Actividad enzimtica

(h "V

(g/D

(g/l)

(h-1)

(unidades/ml)

0.10
0.15
0.20
0.25
0.27

5.0
5.0
4.6

0.1
0.1
0.1
2.0
3.8

0.0125
0.015
0.0185
0.02

2.4
2.05

3.4

3.0

TECNOLOGIA ENZIMAT1CA

41. La penicilina G puede convertirse al cido 6-aminopenicilinico por la

enzima penicilina amidasa. Con los siguientes datos derive una ecuacin que
describa la conversin en el estado estacionario y calcule despus las conversio
nes para las condiciones dadas.
Qu ventajas o desventajas produce cambiar la velocidad de flujo? Sera
deseable alterar la KM aparente de la enzima inmovilizada utilizando para ello
un soporte catinico o aninico?

2.6

2.54
1.44

0.025

Hidrlisis de bagazo de caa con celulasa de T. viride

(50C, pH 4.8, S0 = 100 g/l)

Actividad enzimtica
(unidades/ml)
1.0
2.72
3.25
4.26
4.41

% de hidrlisis en diferentes tiempos

20 h

30 h

40 h

39.14

50.21
75.32

57.60

64.98
73.11
77.54

81.97

81.97

85.66
89.35

A qu se debe la baja eficiencia de utilizacin de bagazo?

Qu medidas tomara para mejorar el proceso?
Cul es el programa de investigacin y desarrollo que sugerira para el
fermentador de 400 1 con objeto de optimizar el proceso?

81.97

88.61
90.83
94.52

En todos los casos las unidades/ml equivalen a mg de azcares producidos/ml

de cultivo-hora.
Calcule las dimensiones que debern tener los cuatro tanques para poder
producir la biomasa estipulada. Haga adems el balance de materia para todo
el sistema. Considere que todos los tanques sern agitados segn la siguiente
relacin: H/DT = 3, y calcule la potencia requerida.
Qu experimentos hara usted antes de iniciar la construccin de una
planta industrial?
Cmo podra mejorarse la produccin de enzima y la hidrlisis enzimtica?
Indique claramente las suposiciones que haga y el fundamento de sus
clculos.
40. En un fermentador de 400 1 crece una bacteria que utiliza bagazo de
caa. Se opera el cultivo de forma continua y se obtienen los siguientes datos:
Con los resultados experimentales disee una planta de operacin continua
que produzca 1 000 ton/ao de bacteria (peso seco).
Qu problemas espera usted encontrar al escalar?

Condiciones experimentales del reactor

de la penicilina amidasa
inmovilizada
Volumen del reactor
Velocidad de flujo
Carga de enzima
Actividad especfica
Penicilina alimentada
Unidades de la enzima

6 X 10"3 M
101
200 1/h
3.5 X 104

unidades/1

300 unidades/mg
8 g/1

Mol de penicilina
hidrolizada por
minuto

42. Desea usted analizar el potencial del uso de enzimas en detergentes.

Como consultor de una compaa interesada, exponga usted desde el punto de
vista de la ingeniera bioqumica, la microbiologa aplicada y la enzimologa
aplicada a lo siguiente:
a) caractersticas deseables de la enzima (Le. modo de accin, mtodo de
utilizacin, etc.);
b) mtodos de produccin de la enzima (Le. produccin, recuperacin,
etc.), y
c) uso futuro de estas enzimas-detergentes (Existen otras enzimas que se
pudieran utilizar en lugar de las que actualmente se emplean? Diga cules.)
43. Una columna con aminoacilasa inmovilizada en DEAE-Sefadcx se pone
en una columna de 2.5 X 45 cm2 (220 ml de volumen) y se compara con un
reactor de lote que utiliza enzima nativa. Con base en los siguientes datos,
diga usted cul sera el mejor sistema para producir 120 kg de metionina/ao.

ProhlonuH

318

Cules pueden ser las causas de las diferencias entre ambos tipos de opera
cin?

Metionina obtenida (kg)

(das)

Enzimas
usadas*
(unidades)

Proceso en
columna

Proceso en
batch

30
60
90

1 221
488
488

5.13
5.13
5.13

0.82
0.33
0.33

* Igual para ambos sistemas.

44. La siguiente tabla presenta los datos obtenidos al adsorber una enzima
A en DEAE-Sefadex en una columna; despus se midi su actividad en dife
rentes condiciones.

Hidrlisis del sustrato"

carga

MM/h)
1 500
3 000

4 500
6 000
7 500
9 000

**
***

Actividad de

Adsorcin
de la
enzima

Componente
Harina do soy
Aceite do soya
Malta
Dextrosa

Almidn

Tiempo de
operacin *

Cantidad*
de enzima

310

SV = 4

SV = 6.7

SK = 5

100

65

53

43

100
88
80

90
87
86

78

67

76
74

65

71
64

85
87

70
69

63

62
61

la enzima
en la columna

nMfh***
2 953
4 040

3 799
3 920
3 739
3 678

A 9 mi de una columna de DEAE-Sefadex se le pasaron de 15a 450 ml (1 500 - 9 000)

mM/1 de una solucin de enzima, con un flujo de 45 ml/h a 25C
SV = 1/tiempo de residencia.
La actividad de la columna se expres a un SV de 6.7.

Una columna de 9 ml que opera a SV = 6.0, qu cantidad de enzima

cargara? Cul sera el porcentaje de absorcin, hidrlisis y actividad de la

columna?
Si la columna fuese de 90 mi (con similitud geomtrica y SV de 4), qu
datos esperara usted obtener?
BALANCE DE MATERIA Y ENERGIA EN FERMENTACION

45. Se utiliza el siguiente medio para una fermentacin aerbica. Como se

desea hacer algunos cambios en su composicin es necesario calcular el
rendimiento de sustrato, de oxgeno y de desprendimiento de calor. Cul ser
la concentracin de biomasa mxima? Cul es el elemento limitante?

Manteca de coco
Sales

Medio A
(i/0

Medio II

33

(k/D

30
3

1
0.01

25
1
0.01

10
50

Cul es la funcin que desempea cada componente?

46. Un fermentador con las siguientes caractersticas: transferencia de
oxgeno = 500 mAf/l-h; eliminacin de calor= 12 000 cal/l-h, se usa part
una fermentacin que utiliza metanol. Cul es la mxima productividad en
continuo y en batch? Se puede cambiar por metano sin que disminuya la
productividad? Cul es la velocidad de dilucin mxima en que opera l)con
metanol y 2) con metano? Especifique todas las suposiciones necesarias paru
la solucin del problema.
47. Suponiendo que un organismo contiene:
C
45%
H
8%
O
30%
y que todo el sustrato es convertido a clulas, C02 y agua, calcule los gramos
de 02 requerido para hacer crecer 100 g de clulas en los siguientes sustratos
con los siguientes rendimientos:
glucosa
45%
35%
etanol
40%
70%
hexadecano
100%
80%
48. Un fermentador que opera en forma continua con etanol, Ks := 0.5,
D = 0.4 h-1, x = 20 g/1, T = 30C, produce biomasa. Se desea cambiar el
sustrato a hexadecano y operar en las mismas condiciones. El gasto de agua de
enfriamiento est a su mximo. Se puede hacer el cambio de sustrato sin
afectar la productividad? Cul es la capacidad de transferencia de oxgeno
requerida en cada caso?
CINETICA ENZIMATICA

49. Determine Vmx y

KM

para la siguiente cintica.

S
mM

V observada

0.25
0.333
0.50

0.18
0.30
0.35

mtA/min

1.0

0.48

2.0

0.80

4.0

0.82

Problemas

320

Problnmaa

50. Indique usted el tipo de inhibicin que hay en la siguiente cintica y

calcule los valores de KM y K:

P/min
A
mM

sin inhibidor

1.5
2.0
3.0
4.0

0.21
0.25

0.28
0.33
0.44
0.40

8.0

16.0

40 mM del
inhibidor
0.08
0.10
0.12
0.13
0.16
0.18

5 1 . Una enzima tiene un KM de 6.3 X 10"5 M. Si Vma-X de la solucin es 20

/iA//I-min, qu velocidad se observar en la presencia de 2 X 10 M sustrato
y 5 X 10"4 M de: a) un inhibidor competitivo, b) un inhibidor no competitivo,
y c) un inhibidor anticompetitivo. En los tres casos K, es 3 X 10 M. Qu
grado de inhibicin hay en los tres casos?
52. La D-serina dehidratasa de N. crassa requiere fosfato de piridoxal como
coenzima. La enzima cataliza la reaccin:

ch2oh.chnh2 .cooh - CH3CO.COOH + nh3

Los datos siguientes fueron obtenidos en un experimento para determinar la
curva de saturacin de la enzima en fosfato de piridoxal:

Moles de cido
pirvico formado
en 20 minutos

Concentracin
de fosfato de
piridoxal X 10* M

0.150
0.200
0.275
0.315
0.340
0.350
0.360

0.20
0.40
0.85

1.25
1.70

2.00
8.00

Determine la constante de Michaels-Menten para la enzima D-serina dehidratada con respecto al fosfato de piridoxal.
TRATAMIENTO DE AGUAS POR METODOS BIOLOGICOS

53. Una pequea industria produce agua con un DBO de 1 g/1. Las auforidades locales van a tratar el agua y cobrarn con base en la descarga de
DBO/da. Las caractersticas del agua son:

(asto

321

= 10 0001/h

DBO =
1 g/|
nx = -2h"'
ks =35 mg/l

Se cuenta con dos tanques para el pretratamiento de las aguas. Uno de ellos tiene
un volumen de 10 000 1 y el otro de 40 000 1. Suponiendo que ambos tanques
tienen un mezclado ideal, determine:
a) el orden ptimo de colocacin de los tanques en serie;
b) la concentracin de salida de los dos tanques en serie, y
c) la mejor decisin para la industria si la operacin y el mantenimiento de
los tanques es de $ 100/1 000 1-da y la autoridad local cobra a razn de
$ 30/kg BOD que se descargue.
54. En un tanque de tratamiento de aguas de 100 000 I se lleva a cabo una

prueba de transferencia de oxgeno. Los resultados obtenidos aparecen en la

siguiente tabla:

Concentracin promedio de 02 disuelto (mg/l)

Flujo de aire (l/min.)

Tiempo
(min.)

0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

1500

3 000

5 000

7000

0
0.71
1.36
1.94
2.47
2.95
3.38
3.78

0
1.36
2Al
3.38
4.13
4.74

0
1.83
3.22
4.26

4.13

4.45
4.74

5.24

5.65
5.99
6.26
6.48

5.05

5.65
6.10
6.44
6.70

6.90
7.04

2.11

3.62
4.71
5.50
6.06
6.46
6.76
6.46
7.12

7.22

Siendo el aire distribuido slo por difusores, determine:

a) el valor de kLa, y su ecuacin emprica. Compare el valor de p con el
obtenido en tanques de fermentacin;
b) determine la eficiencia de transferencia de oxgeno en cada caso ( 20" C
760mm Hg);
c) explique la relacin entre kLa y la eficiencia de transferencia de ox
geno; analice las implicaciones econmicas, y
d) exponga brevemente los valores relativos de k a y su significado desde
el punto de vista de diseo.
55. Una planta de lodos activados opera con 1111 flujo de I06 l/lir n un
tanque de tratamiento de 10' I de volumen. La concentracin de los coinpuestos orgnicos contaminantes os de I 000 mg/l. Todos los compuestos
orgnicos contaminan les son oxidados durante el tratamiento, lil efluente del
lialamienlo entra 1 un lauque de asentamiento mezclado donde los lodos

Problamos

322

Problemas

activados son floculados para su recirculacin. Tericamente el sobrenadante

CONSUMO DE ENERGIA POR AGITACION Y AERACION EN

SISTEMAS DE FERMENTACION

no contiene microorganismos.

Las condiciones de operacin reales son:

10 1/h

Flujo al tanque de tratamiento

Concentracin de clulas floculadas

10 000 mg/1

para recirculacin

105 1/h.

Flujo de recirculacin

La porcin de clulas que flocula pero no se recircula se descarga para su

eliminacin. Suponga que en las condiciones presentes la velocidad de creci
miento de los lodos activados est en su valor mximo;
a) determine la velocidad mxima de crecimiento;
b) cul es la concentracin celular en el tanque? , y
c) cul es el flujo (en masa) de los lodos activados para su eliminacin?
Introduciendo oxgeno en la misma planta se pueden flocular lodos a una
concentracin de 40 000 mg/1. Suponiendo que se puede mantener la velo
cidad de crecimiento mxima con la misma recirculacin, determine:
d) el aumento de flujo que puede manejar el tanque de tratamiento, y
e) la nueva concentracin celular en el tanque.
Datos adicionales:
La concentracin de contaminante es constante: 1 000 mg/1. El rendi
miento del contaminante es de 80% del de levadura.
56. Las aguas de una industria orgnica van a ser tratadas por el mtodo
de lodos, para lo cual se hicieron algunos experimentos en un reactor con un
volumen de operacin de 1 litro.

Experi
mento

(Ntn)

(mgSo

/ s

<

\ < / \

DBO )

800

2
3

750
750
750

\ /[ * \)

mg DBO I mg SSLM

100
50
30
20

/
1 200
1 500
1 000
1 000

/
t

SVI \
(mi)

250

15
40

175
80

110

l-da I\

1 320
975
440
350

da

960

600

200
150

El diseo del tanque de lodos activados se hace con base en:

F = 8 360 m3/da
Flujo de agua contaminada
Concentracin de materia orgnica
en el agua contaminada
Concentracin de materia orgnica
en el agua de salida
Concentracin de lodos activados
en el tanque de aeracin

57. Un fermentador de 30 000 1 (volumen de operacin 20 000 1) se empica

para la produccin de levadura. El sistema tiene dos impulsores, y la relacin
altura/dimetro del tanque es 2. Se usan turbinas de seis aspas planas con
relaciones standar. Los agitadores operan a 50, 70 y 85 rpm y las velocidades
de aeracin son 200 y 300 m3/h .
a) Calcule la potencia (sin aeracin) requerida a diferentes velocidades de
agitacin. Exprese su respuesta en HP/1 000 galones, y diga cul es el tamao
de motor requerido.
b) Calcule la potencia con aeracin usando la correlacin del nmero de
aeracin, Na, as" como la de Michel y Miller. Cul puede ser una causa de las
diferencias?
58. En un tanque de geometra estndar (H/D = 1 ; un agitador de seis
aspas planas; etc.) con un volumen de 20 000 1 se obtuvieron los siguientes
resultados:

Velocidad
del impulsor
(rpm)

Velocidad de
absorcin de O 2

(mM/l-h)

Potencia medida
(kW-h/kg levadura)

16.7
19.4
23.7
21.8
26.3
27.8
39.0

0.475
0.615
0.572
0.528
0.589
0.615
0.610

50

70
85

50
70
85
85

Flujo diaire

(m'/h)
200

200
200

320
320
320
600

mg

\gSSLM) \

10
50

( F*x>\
(QA
1(mgOj SSLM

323

S0 = 85 mg DBO/l
S = 30 mg DBO/l

La concentracin de 02 disuelto fue esencialmente O cuando se midieron las

velocidades de absorcin de oxgeno. La concentracin de saturacin de
oxgeno disuelto a 0.21 atm de presin parcial fue de 7.2 mg 02/l-h.
a) Usando los datos anteriores encuentre una correlacin para el kL a en
h"1 y la potencia por unidad de volumen (HP/1 000 galones), y la velocidad
superficial (ft/h).
b) Cmo compara la potencia consumida experimentalmente con la
calculada?
59. Las propiedades Teolgicas de un caldo de fermentacin fueron me
didas con un viscosmetro Brookfield. Los siguientes datos se obtuvieron a las
114 horas de la fermentacin de cido giberlico con tres diferentes tamaos
de cilindro, A, B y C:

X= 3 000 mg SSLM/1

Cul es el volumen necesario del tanque de aeracin?

Flujo de los lodos de recirculacin y del exceso formado?
Cul es la velocidad de consumo de 02 y el coeficiente de transferencia
de ()2 , necesario para el tanque de aeracin?
Cul es el valor de Ys y de m en el sistema?

Velocidad de corte, A (seg )

Esfuerzo de corte (g/cm seg2)
Velocidad de corte, B (seg"' )
Esfuerzo de corte (g/cm segJ)
Velocidad de corte, C (seg 1 )
Esfuerzo de corte (g/cm seg1 )
"

949.6
49.6
327.7

27.7
203.8
26.0

491.2
43.2
273.6
26.5
170.2
20.7

627.8
37.3
216.6
24.1

139.7
18.7

475

318
28

163.9
20.9
101.9
17.0

108.7

31.6

17.0
68.23
15.3

Prob/omus

Problemas

324

Determine el tipo de fluido y los parmetros del modelo de potencia.

60. Un fermentador de tipo air-lift se llena con agua hasta una profundidad
de 35 m, antes de ser aireado. El aire se suministra a travs de burbujeadores
con orificios. La fraccin que se absorbe es pequea y el aire sale a 1.5 atm
de presin. La operacin se efecta a 30C y la velocidad del aire es de 5.5
irt/min (a 1.5 atm y 30 C). La cada de presin a travs de los orificios es de
2 psi. Calcule la potencia del compresor considerando una eficiencia total de
65%.- Exprese el P/V del sistema en HP/1 000 galones y kW/1 000 1.

32b

Tiempo

1
&~
1

Oxigeno
dsuelto

(ppm)

0
10

5.2
5.2
5.2
5.2
4.7
4.2
3.7
3.1
2.6
2.0
1.5

20
30
40
50

60
70
80
90
100

110
120
130

DETERMINACION EXPERIMENTAL DE LA TRANSFERENCIA

DE OXIGENO EN UNA FERMENTACION

150
160

1 VVM
3 litros
300 rpm

muestras

num.

(mi)

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

5
5
5
5
5
5
5

5
5
5

\ ii

YS

4.4
4.5

Tiempo

Oxigeno

(segundos)

disuelto
(ppm)

30
40

Volumen de
tiosulfato usado
(mi)

50

60
70
80

21
20.7
20.35
20
19.7

90
100

110
120
130
140
150
160
170
180
190

19.3

19.0
18.7
18.7
18.7

3.7
3.7
3.7
3.7
3.7
3.7
3.2

Se corta aire e introduce N,

1.8

0.8
0.15
1.7
2.41

Se introduce aire

2.9

3.2
3.3
3.41
3.52
3.59
3.61

Cul es el k( a?
64. Usando el mtodo del balance de U2 en un fermenladr de 9 litros, u
29C que opera n 120 rpm se obtuvieron los siguientes datos para 0.5 VVM.

Cul es el valor de kLa?

62. Usando un electrodo de oxgeno disuelto en un fermentador con
levadura, se obtuvieron los siguientes resultados con la tcnica dinmica:

Vv

Se reinici la aeracin

0.5 N

0
20

Volumen de

Encuentre usted: k, a, Qo2x> y Cg*

63. Se carga un fermentador de 500 1 con un medio de cultivo y se
empieza a introducir aire; la temperatura es de 30C y el pH de 5. Para
determinar el kLa se emplea la tcnica de eliminacin de gas con nitrgeno. Se
obtuvieron los siguientes resultados.

29C
30C

Las muestras se tomaron cada 5 minutos, y se obtuvieron los siguientes

resultados:

Muestra

3.8
4.2

140

61. En un fermentador de 5 litros se hizo la prueba del sulfito para deter

minar el kLa. El experimento se realiz en las siguientes condiciones:

Temperatura del aire

Temperatura del agua del fermentador
Flujo de aire
Volumen de lquido
Velocidad de agitacin
Normalidad del tiosulfato
usado en la titulacin

0.9

2.8

CtrfL
jfv-'

Se cort el uirc

Vi

n
-

lili

Problemas

326

'"t 4f

Tiempo

fermentacin

en el aire de salida

Oxigeno diselto
(ppm)

(%)

0
1
2
3
4
5
6
7

21
20.95
20.90
20.85

5-90
5.85

5.70

5.42
5.00
4.40
3.72
2.80
1.65

8
9

1.28

10
11
12

1.35
1.92

Determine el valor de

20.70

. .

'

20.55
20.40
20.10
19.60
18.90
18.50
18.70
19.30

Indice analtico

kLa.

METODOS DE INMOVILIZACION ENZIMATICA

65. Haga usted una revisin bibliogrfica de los diferentes soportes que han
sido utilizados para la inmovilizacin de la glucosa isomerasa. Indique sus
caractersticas fsicas (tamao de poro, densidad, etc.) y qumicas (solubilidad,
grupo reactivo, etc.) y proponga el que usara usted.
66. Investigue cules son los mtodos de inmovilizacin ms usados cuando
se piensa montar columnas de escala industrial. Cules son los criterios que se
deben seguir en estos casos?
67. Si se pudiera sintetizar un soporte "ideal", qu caractersticas pedira
usted, tanto fsicas como qumicas? De los soportes que conoce, tiene
alguno esas caractersticas? Cul?
68. Para una reaccin del tipo:

se desea inmovilizar ambas enzimas en un soporte no poroso, por unin

covalente. Ambas enzimas se distribuyen uniformemente y la reaccin se
puede considerar de primer orden.
El soporte tiene carga positiva, el reactivo A, negativa, y el B positiva.
Cules sern los cambios de KM aparente? Qu perfil de pH se obtendr?
Cmo afectar la velocidad de agitacin a la velocidad de reaccin?

Antibiticos, 22, 133

Area interfacial, 82

Acido

ctrico, 36
glutmico, 1 11
nucleico, 135, 136
orgnico, 22, 133
Acilasa, 23, 196
Actividad celuloltica, 190
Adsorcin, 196
Aeracin, 59
consumo de energa, 269
nmero de, 275
Aerobacter aerogenes, 34, 61, 65, 67, 69,
72, 124
A. cloacae, 36
Agentes

floculantes, 134
mutagnicos, 59
qumicos, 176
Agitacin, 59
consumo de energa, 269-279
Aislamiento, tcnicas, 20
Alcaligenes, 164
Alcalino-fosfatasa, 199
Alcoholes, 22
Amilasa 23. 201
Aminocidos, 22, 133
1,-aminoacidacilasa, 201
-aminocido oxidasa, 199, 214
Aminogruma, 157

Arilsulfatasa, 199
Arrhenius, ecuacin, 34, 234
Asparaginasa, 214
Aspergillus, 32, 165
A. niger, 34, 83, 159
Atrapamiento, tcnica, 196

Autocatlisis, 65

B
Bacillus cereus, 124
B. lincheniformis, 24, 1 24
B. megaterium, 120, 124
B. mycoides, 120, 124
B. natto, 120
B. stearothermophilus, 120
B. sub tlis, 94, 118, 120, 124
B. thermoacidurans, 1 20
Bagazo, en la produccin de SCP, I 79
Bafies, 87. 89
Bernoulli, teorema de, 277
Biomasa (ver protena microbiana)
Calor hmedo, en la esterilizacin. 1 16
Calor seco, en la esterilizacin, 1 16
Candida 32, 165
C. intermedia, 94
C lipolytica, 158
C. tropicalis, 158
C milis 34. 37. 83, 94, 105, 158, 178,

191

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