Süreyya ÖZCAN

Hacettepe Üniversitesi Hacettepe

Gıda Müh. Böl. Üniversitesi
 Đçerik

• HPLC’nin Tarihçesi
• HPLC’de Ayırma
• Ayırmada Rol Alan Unsurlar
• HPLC Sistemleri
• HPLC’de Kullanılan Dedektörler
• Floresans Dedektör
• HPLC’nin Kullanım Alanları
 HPLC Tarihçesi

M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906)

1906 - Mikhail Semenovich Tswett

 HPLC Tarihçesi

1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919)

Calcium Carbonate, Petroleum Ether
1931- Kuhn ve Lederer
1938 - Ismailov ve Schraiber
1940's – Consden, Gordon ve Martin Partisyon ve
Kağıt Kromatografisi
1950's – Stahl Gaz, Đnce-Tabaka, Jel-Süzme ve
Gradient Elution Kromatografisi
1960's - Ticari HPLC’ye giriş
 Ayırma

ABsorpsiyon ADsorpsiyon
 Ayırma
Ayırma, durgun faz ile hareketli Durgun Faz – Kolon içerisinde
faz arasındaki göçe bağlıdır. sabit duran faz ör. C18, Silica
Enjektör

Karıştırıcı
Hareketli Faz –
Numuneyi durgun faz
üzerinde taşıyan
fazdır.
Pompalar

Kolon

Detektör

Atık
Solvan

Yüksek Performanslı Sıvı Kromatograf

 Afl B1
Ayırma
mAU Afl B2
Afl G2
Afl G1

Enjektör

Enjeksiyon zaman
Karıştırıcı

Pompalar

Kolon

Detektör

Solvan
 Kromatogram Afl B1
Ayırma
mAU Afl B2
Afl G2
Afl G1

Enjektör

Enjeksiyon zaman
Karıştırıcı

Pompalar

Kolon

Detektör

Solvan
 Ayırmada Rol Alan Unsurlar

Kolon Seçimi
Durgun faz, partikül büyüklüğü, vs..
Kolon Uzunluğu
Hareketli Faz Bileşimi
Kolon Sıcaklığı
Akış Hızı
 HPLC Sistemleri

Çözücü Kabini

Vakum degasser

Pompa

Kontrol Modülü
Otoörnekleyici

Kolon
kompartmanı

Dedektör
 Genel HPLC Dedektörleri

Rayoaktivite
Đletkenlik
LC/IR

MS
FLD
8%
Elektro
10%
RI 10% UV-VIS
LS 65%
 Performans Özellikleri

Detektör performans özellikleri:

• Hassasiyet (LOD, LOQ)

• Seçicilik
• Lineerlik
• Kalitatif Bilgi
• Güvenilirlik
• Kullanım kolaylığı
• Üniversal olması
 Floresans Dedektör

Flow
Cell
Excitation
Light
Source

Emission
Variable Excitation
and
Emission
Wavelengths

Photomultiplier
Tube
 Floresans Dedektör Özellikleri

• Floresans sadece seyreltik çözeltiler için lineerdir.

• Emisyon ölçümü sadece 900’ de yapılmakta ve ağ ile bir

tek dalga boyu seçimi yapılmaktadır. Bu sebeple ölçüm
çok hassastır.

• Bazı kimyasallar floresansı yok ederek hassasiyeti

azaltır (i.e., O2).

• Eksitasyon dalga boyunda absorbsiyon yapan çözücüler

kullanılmamalıdır.

• FLD detektörleri akış hızı ve ısı değişikliğinden fazla

etkilenmemektedir.

• Seçici detektörlerdir.
 FLD Uygulamaları

Mikotoksin Analizleri
 HPLC Uygulamaları

Biyolojik Bilimler
Kimyasal proteinler
peptidler
nucleotidler
polistirenl
er
boyalar
fitalatlar

tetrasiklinler
Đlaçlar hormonlar
antidepressantlar
barbituratlar Tüketici Ürünleri
yağlar
Antioksidan bileşikler
şekerler
Çevre
poliaromatik hidrokarbonlar Klinik
Inorganik iyonlar amino asitler
herbisitler vitaminler
Teşekkürler...