DESENVOLVIMENTO DE MTODO ANALTICO PARA QUANTIFICAO DO EFAVIRENZ POR

ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-VIS
Lariza Darlene Santos Alves, Larissa Arajo Rolim, Danilo Augusto Ferreira Fontes e Pedro Jos Rolim-Neto*
Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Rua Arthur de S, s/n, 50740-521 Recife PE, Brasil
Mnica Felts de La Roca Soares e Jos Lamartine Soares Sobrinho
Departamento de Bioqumica e Farmacologia, Universidade Federal do Piau, Campus Universitrio Ministro Petrnio Portella,
64049-550 Teresina PI, Brasil
Recebido em 29/11/09; aceito em 13/4/10; publicado na web em 20/7/10

Nota Tcnica

Quim. Nova, Vol. 33, No. 9, 1967-1972, 2010

UV-VIS SPECTROPHOTOMETRY ANALYTICAL METHOD DEVELOPMENT FOR QUANTIFYING EFAVIRENZ. An UV-Vis

spectrophotometry analytical method for quantifying Efavirenz was developed and validated as an alternative to replace the HPLC
current method. The report method presents sample concentration of 10 g mL-1, dissolved in a solution ethanol:water (60:40, v/v),
economic and technically adequate for the purpose adopted. The results and the statistical treated proved that the method being
considered an precise and accurate analytical low cost alternative for laboratory routine. The adaptability of this method in product
and other analytical methods development has been challenged by mathematical calculation of drug extinction coefficient in water
and methanol and practical experiments, showing interesting results.
Keywords: UV-Vis spectroscopy; Efavirenz; analytical method.

INTRODUO
O Efavirenz (EFZ) um frmaco inibidor da transcriptase reversa no nucleosdico, utilizado desde 1998 em associao com
outros agentes antirretrovirais no tratamento da infeco pelo vrus
da imunodeficincia humana.1 Atualmente utilizado por cerca de
75 mil das 200 mil pessoas em terapia antirretroviral no Brasil, chegando a representar um custo de US$ 42.930.000 em 2007. Contudo,
o licenciamento compulsrio, ocorrido no final deste mesmo ano,
possibilitou ao Brasil a produo nacional do medicamento, garantindo o acesso universal a um nmero cada vez maior de pacientes,
reduzindo custos e viabilizando a sustentabilidade do Programa de
Doenas Sexualmente Transmissveis.2
No Brasil, assim como em grande parte do mundo, este frmaco
considerado como de primeira escolha, associado aos frmacos
zidovudina e lamivudina na terapia antirretroviral; exceto para gestantes e crianas menores de 3 anos. Essa opo est fundamentada
na elevada potncia da supresso viral, comprovada eficcia a longo
prazo e ao menor risco de efeitos adversos.2
Na literatura cientfica internacional, diversos mtodos analticos para a quantificao do EFZ so preconizados utilizando-se
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) do frmaco isolado
e na forma farmacutica cpsula,3 assim como em plasma na forma
isolada e associado a outros antirretrovirais.4-14 Contudo, nenhum
mtodo analtico por espectrofotometria de absoro no ultravioleta
visvel (UV-vis) foi relatado.
Esta tcnica reconhecida pelas vantagens relacionadas ao seu
uso, sendo utilizada principalmente no controle de qualidade na indstria farmacutica, que exige rapidez e confiabilidade nos resultados.15
Alm disso, possui baixo custo operacional, sendo de fcil utilizao
e produz resultados de interpretao bastante simples.16
Paralelamente, a necessidade de proporcionar qualidade s medies qumicas est sendo cada vez mais reconhecida e exigida.15 Logo,
para garantir que um novo mtodo analtico gere informaes confiveis, o mesmo deve passar por uma avaliao denominada validao.
*e-mail: pedro.rolim@pq.cnpq.br

A validao um processo contnuo que comea no planejamento

da estratgia analtica e continua ao longo de todo o desenvolvimento
e transferncia de um mtodo. Para registro de novos produtos, o
rgo regulador do Brasil, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
(ANVISA), e o dos Estados Unidos da Amrica, o Food and Drug Administration (FDA), exigem a validao das metodologias analticas
e, para isso, so estabelecidos documentos oficiais que direcionam
os critrios a serem adotados nesse processo.17
Logo, a validao tornou-se uma ferramenta de qualidade e no
mais um proforme inflexvel e automatizado. Com o desenvolvimento do setor de Desenvolvimento Analtico dentro do Controle
de Qualidade, os tcnicos ganharam flexibilidade para adaptar os
mtodos antigos, investigar desvios da qualidade e/ou desenvolver
novos mtodos para os frmacos de interesse.
Na atualidade, o fundamento da tcnica analtica e a aplicao de
equaes conhecidas acelera a investigao e otimizao dos mtodos
e prticas aplicadas. Aplicando-se o clculo de absortividade molar
ao mtodo desenvolvido e validado para o frmaco EFZ pode-se
relativizar qualquer resultado gerado em absorvncia para qualquer
sistema de solvente empregado, gerando agilidade e flexibilidade ao
setor de Desenvolvimento Analtico.
Portanto, esse estudo descreve o desenvolvimento e a validao
de um mtodo analtico para quantificao da matria prima EFZ, de
forma que o mtodo atenda s exigncias da International Conference
on Harmonization (ICH Q2A e ICH Q2B)18,19 e da ANVISA (RE n
899 de 2003),20 conferindo praticidade, confiabilidade e baixo custo
para a utilizao deste mtodo na rotina laboratorial da indstria
farmacutica.
PARTE EXPERIMENTAL
Material e mtodos
Matria-prima, reagentes e vidrarias
Para as etapas correspondentes ao desenvolvimento do mtodo e
sua validao, foram utilizadas a matria-prima EFZ (Cristlia, lote:
1289/07, teor 98.00%) e o seu respectivo padro de trabalho (Xiamem

1968

Alves et al.

Mchem, lote 050501, teor 98.32%) e a matria-prima zidovudina

(Northeast lote: DY 070041, teor 97.88%) para a determinao
da especificidade do mtodo desenvolvido. Os reagentes utilizados
foram acetonitrila (Vetec, lote 0806979); metanol (Cintica, lote
11850); lcool etlico absoluto (Dinmica, lote 30065 e Vetec, lote
0806654); cido clordrico (Dinmica, lote 10023) e gua ultrapurificada obtida por Milli-Q Millipore (Milli-Q System, Massachusetts,
USA). Utilizaram-se vidrarias volumtricas calibradas com certificado de calibrao por lote do fabricante Satelit.
Equipamentos
Os equipamentos utilizados foram balana analtica Bioprecisa,
modelo FA2104N; espectrofotmetro UV-Vis B582 Micronal; agitador magntico SBSR e ultrassom 1.500 Barnson (70 W de potncia).
Para a reprodutibilidade foram utilizados os seguintes equipamentos:
balana analtica CT 225 Sartorius; espectrofotmetro UV-Vis
modelo 50 Vankel e ultrassom 2.510 Barnson.
Desenvolvimento do mtodo analtico
Primeiramente realizou-se um teste de solubilidade (a 25 C)
com diferentes solventes (gua, lcool etlico absoluto, metanol,
acetonitrila e cido clordrico 0,1 M), de acordo com a Farmacopeia
Brasileira.21 Neste estudo observou-se o comportamento do frmaco
em diferentes solventes, com objetivo de definir a melhor soluo
diluente para o mtodo analtico desenvolvido. Para tal, levou-se em
considerao o poder de solubilizao do frmaco, custo e toxicidade
do solvente e a sensibilidade do frmaco frente ao comprimento de
onda utilizado. Diante disto, realizou-se uma varredura na faixa de
200 a 700 nm nos diferentes sistemas de solventes propostos (Tabela
1), para a identificao do comprimento de onda que apresentaria o
valor de absorbncia mais adequado para o mtodo. A calibrao
do equipamento espectrofotmetro foi realizada atravs de padres
de referncia rastreados pelo National Institute of Standards and
Technology (NIST).
Tabela 1. Sistemas solventes utilizados na preparao da soluo me de
500 g mL-1 (1 diluio) e da soluo amostra de 10 g mL-1 (2 diluio)
1a diluio
metanol
metanol
metanol
lcool etlico
lcool etlico
lcool etlico
acetonitrila

2a diluio
metanol
lcool etlico
sistema de diluio (lcool etlico:
gua purificada, 60:40, v/v)
lcool etlico
metanol
sistema de diluio
gua purificada

Posteriormente foram realizadas comparaes entre as amostras

obtidas pelas tcnicas de agitao por ultrassonicao e agitao magntica (ambas sem aquecimento), paralelamente variao do tempo
de agitao (5, 10 e 15 min para ultrassonicao e 10 e 15 min para
agitao magntica). Alm disso, realizou-se a verificao da estabilidade das amostras, no sistema de solvente escolhido, avaliando-se o
aspecto visual e a absorbncia das mesmas, preparadas em triplicata
no intervalo de 0, 24 e 48 h, na presena e ausncia de luz.
Preparao da soluo amostra
As amostras de EFZ foram analiticamente pesadas e solubilizadas
em lcool etlico absoluto, ultrassonicadas por 10 min, obtendo-se
uma concentrao final de 500 g mL-1, aps aferio do balo
volumtrico. Uma alquota foi retirada dessa soluo para diluio,

Quim. Nova

utilizando-se como sistema de solventes lcool etlico absoluto:gua

purificada (60:40, v/v), obtendo-se uma concentrao final de 10 g
mL-1. As amostras foram preparadas em triplicata e lidas no comprimento de onda de 247 nm.
Preparao da curva controle
Partindo da soluo estoque do padro de EFZ (500 g mL-1),
foram realizadas diluies com o sistema lcool etlico absoluto:gua
purificada (60:40, v/v) para a obteno das seguintes concentraes:
8, 10 e 12 g mL-1. A curva controle foi preparada diariamente e
utilizada para os clculos das concentraes.
Validao do mtodo analtico
Parmetros avaliados
No processo de validao desta metodologia analtica foram
avaliados os seguintes parmetros: robustez, linearidade, intervalo,
limite de deteco, limite de quantificao, preciso, exatido e especificidade, de acordo com as normas estabelecidas pelo ICH18,19 e
pela RE n 899/03 (ANVISA).20
A confiabilidade dos parmetros avaliados pode ser observada
pelo coeficiente de variao (CV%) ou desvio padro relativo de
uma srie de medidas. Para cada parmetro avaliado, foi determinado
um CV% menor que 5%20 e tratados estatisticamente por Anlise de
Varincia (ANOVA) One-Way e teste t de Student com um nvel de
significncia de 95%.
O ensaio para determinao da robustez foi realizado a partir da
variao dos seguintes parmetros: fabricante do lcool etlico absoluto (Dinmica e Vetec), influncia da luminosidade (presena e
ausncia de luz) e tempo de preparao das amostras (0, 1, 2, 3, 4 h).
A linearidade do mtodo foi verificada a partir da anlise de trs
curvas autnticas nas concentraes de 5, 8, 9, 10, 11, 12 e 15 g
mL-1 de EFZ. Os resultados obtidos foram tratados estatisticamente
atravs do clculo de regresso linear pelo mtodo dos mnimos
quadrados. Tambm foram estimados os limites de deteco (LD)
e quantificao (LQ) de acordo com as equaes LD = DP x 3/IC e
LQ = DP x 10/IC, onde DP o desvio padro do intercepto com o
eixo do Y obtido com as trs curvas de linearidade e IC a mdia
dos coeficientes angulares das respectivas curvas. Para calcul-los,
foi considerado o desvio padro da reta com relao absorbncia do
primeiro nvel de concentrao de EFZ das trs curvas de calibrao.
Apesar desses parmetros no serem considerados como requisitos
necessrios para testes da categoria I de validao (Testes quantitativos para a determinao do princpio ativo em produtos farmacuticos
e matrias-primas),20 os mesmos foram realizados para a utilizao
em uma posterior validao de limpeza de equipamentos.
A preciso do mtodo foi avaliada nos nveis de repetitividade
(preciso intracorrida), preciso intermediria (preciso intercorridas)
e reprodutibilidade (preciso interlaboratorial). A repetitividade foi
verificada por 6 determinaes individuais a 100% da concentrao
teste (10 g mL-1), analisadas em um pequeno intervalo de tempo.
Para o parmetro preciso intermediria, 3 rplicas foram analisadas
variando-se os dias e os analistas, ambas tambm na concentrao
de 100%. A reprodutibilidade foi realizada em dois laboratrios
diferentes em triplicata de amostras.
A exatido foi definida atravs da manipulao de amostras
preparadas em triplicata nas concentraes de 80, 100 e 120% da
concentrao terica do EFZ, sendo determinada aps o estabelecimento da linearidade e intervalo do mtodo.
O parmetro especificidade foi verificado atravs da contaminao da soluo me de 500 g mL-1 de EFZ com 1 mg do antirretroviral
zidovudina, com o objetivo de observar a especificidade do mtodo

Vol. 33, No. 9

Desenvolvimento de mtodo analtico para quantificao do Efavirenz

frente a uma possvel contaminao, j que ambos so manipulados

na mesma rea de produo de uma indstria. A soluo me contaminada foi diluda para se obter uma soluo na concentrao de 10
g mL-1. Tambm foi preparada uma soluo amostra no contaminada, contendo apenas o EFZ na mesma concentrao e outra soluo
numa concentrao de 0,2 g mL-1 de zidovudina, correspondente
concentrao final deste frmaco na soluo contaminada de EFZ
aps diluio.
Determinao da absortividade molar
A espectrofotometria fundamentada na lei de Lambert-Beer,
que a base matemtica para medidas de absoro de radiao por
amostras no estado slido, lquido ou gasoso, nas regies ultravioleta,
visvel e infravermelho do espectro eletromagntico. A absortividade
molar (e) uma grandeza caracterstica da espcie absorvente, cuja
magnitude depende do comprimento de onda da radiao incidente.21
As amostras para a determinao da absortividade molar do EFZ nos
solventes gua purificada e metanol foram preparadas utilizando-se
a mesma tcnica descrita anteriormente, variando-se apenas o tempo
de sonicao das amostras preparadas em gua (4 h). Para as leituras
das amostras, tambm se utilizou o comprimento de onda de 247 nm
do mtodo desenvolvido e validado.

1969

comprimento de 247 nm; com exceo do sistema acetonitrila/gua,

que apresentou uma absoro duas vezes maior aos outros sistemas
na concentrao de 10 g mL-1. Portanto, devido alta solubilizao
deste frmaco neste solvente e, consequentemente, da absoro
elevada na faixa de concentrao testada, esse sistema mostrou-se
inadequado para o mtodo.
Somado a este fato, para a escolha final do sistema a ser utilizado,
levou-se em considerao a toxicidade e o custo do solvente, alm da
possvel adio de uma proporo de gua ao sistema, o que as facilita
as leituras provenientes de estudos de preparao de complexos com
ciclodextrinas, disperses slidas e ensaios de dissoluo. Levando
em considerao esses critrios, optou-se pelos solventes lcool
etlico/sistema de diluio (lcool etlico:gua, 60:40, v/v) para a
primeira e segunda diluies, respectivamente (Figura 1).

Verificao da aplicabilidade da absortividade molar

Por meio dos trs parmetros utilizados na covalidao do mtodo
analtico, verificou-se estatisticamente a diferena dos resultados
tericos obtidos por meio do clculo da absortividade molar e dos
resultados prticos realizados com os dois solventes, gua purificada
e metanol. Tais parmetros foram executados de forma idntica
validao do mtodo desenvolvido com o sistema solvente lcool
etlico absoluto: gua purificada (60:40, v/v).

Figura 1. Estrutura qumica do EFZ (C14H9ClF3NO2) e varredura espectrofotomtrica no sistema solvente selecionado

RESULTADOS E DISCUSSO
Desenvolvimento do mtodo analtico
Conforme avaliao da solubilidade do EFZ frente a diferentes
solventes, observou-se que este se apresenta como praticamente insolvel ou insolvel em gua e em cido clordrico 0,1 M, conforme
classificao da Farmacopeia Brasileira.22 Para o solvente acetonitrila,
o frmaco apresentou-se facilmente solvel, enquanto que para os
solventes metanol e lcool etlico absoluto o frmaco se mostrou
pouco solvel.
Os resultados obtidos fornecem informaes importantes sobre
o comportamento do frmaco, possibilitando a escolha inicial dos
solventes mais adequados para a completa solubilizao do EFZ e
que permitam a mxima estabilidade da soluo, proporcionando a
quantificao adequada do frmaco.
Para o mtodo em desenvolvimento, utilizaram-se inicialmente
metanol, lcool etlico e acetonitrila, como solventes iniciais de
solubilizao. Aps a escolha destes solventes, foram realizadas
varreduras utilizando vrias combinaes de solventes para a diluio
das solues, incluindo a possibilidade da adio de uma proporo
de gua. A proporo deste no sistema foi determinada de acordo com
a estabilidade do EFZ em permanecer solvel por 48 h em repouso,
aps completa solubilizao. As combinaes dos sistemas testados
para a preparao das amostras esto descritas na Tabela 1.
As varreduras espectrofotomtricas, realizadas para verificao
dos sistemas que apresentavam as melhores absores na faixa de
comprimentos de onda entre 200 e 700 nm, demonstraram que
todos os sistemas testados apresentaram absores semelhantes no

Nas anlises realizadas para a determinao do tipo e tempo de

agitao na preparao das amostras, foi possvel definir a ultrassonicao por 10 min como o mtodo a ser padronizado, uma vez que este
se apresentou como o mais eficiente para o mtodo proposto (Tabela 2).
Tabela 2. Resultados experimentais do desenvolvimento do mtodo com
relao ao tipo e tempo de agitao das amostras
Tipo/
Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Mdia CV%
Tempo de agitao
Sonicao 5 min
0,490
0,495
0,495
0,493 0,58
Sonicao 10 min
0,510
0,511
0,519
0,513 0,96
Sonicao 15 min
0,505
0,502
0,503
0,503 0,30
F calculado = 25,7146 F tabelado = 5,1432
Agitao 10 min
0,471
0,476
0,491
0,474 0,53
Agitao 15 min
0,495
0,491
0,496
0,494 0,54
F calculado = 93,0250 F tabelado = 7,7086

Validao do mtodo analtico

Robustez
O mtodo desenvolvido demonstrou ser robusto quanto variao dos fabricantes de lcool etlico absoluto. De acordo com os
resultados obtidos, o F calculado para esse parmetro foi de 0,0218,
inferior ao F tabelado (7,7086), sendo o CV de 0,28 e 0,14 para os
fabricantes Dinmica e Vetec, respectivamente. Com relao
avaliao da estabilidade das solues no intervalo de 4 h a partir da
preparao das amostras e da influncia da luminosidade, obteve-se

1970

Alves et al.

um F calculado de 2,1185 (F tabelado = 5,1922) e 4,1784 (F tabelado

= 5,3176), respectivamente, demonstrando que no houve diferenas
estatisticamente significativas entre os mesmos (Tabela 3).
Tabela 3. Resultados da robustez com relao ao parmetro luminosidade e
estabilidade das amostras
Tempo (h)
0
1
2
3
4
Mdia
CV %

Presena de luz
100,96
100,77
100,22
101,15
101,41
101,10
0,24

Concentrao %
Ausncia de luz
100,51
100,58
100,83
100,83
100,15
100,78
0,25

Linearidade
A anlise de regresso linear dos mnimos quadrados apresentou
um coeficiente de correlao de 0,99978, indicando linearidade
dentro dos limites das concentraes estudadas, obtendo-se a equao da reta y = 0,0520x 0,0099. Atravs da anlise de varincia
(Tabela 4) pode-se testar a validao do mtodo e a significncia
estatstica da curva ajustada. De acordo os resultados, observou-se
que o mtodo linear e no houve falta de ajustes para as mdias
estudadas, apresentando um valor de F de 2,9582, abaixo do valor
crtico tabelado (4,3807).
Tabela 4. Resultado do tratamento estatstico por ANOVA one-way para a
regresso linear
Fonte
Modelo
Residual
Falta de ajuste
Erro puro
Total

SQ
0,488486777
0,000598175
9,28417E-05
0,000505333
0,489084952

GL
1
19
5
14
20

MQ
F
F-crtico
0,488486777 15515,9 4,3807
3,14829E-05 Curva linear
1,85683E-05 0,51443 2,9582
3,60952E-05 No h falta de ajuste
0,024454248

Ainda como resultado da avaliao da linearidade, calcularamse os LD e LQ. Os resultados encontrados foram de 0,21 para LD e
0,69 g mL-1 para LQ.
Preciso
O mtodo desenvolvido demonstrou ser preciso nos trs nveis
avaliados: repetitividade, preciso intermediria e reprodutibilidade.
Para o parmetro repetitividade os resultados obtidos apresentaram
uma mdia de 100,32 e um CV de 1,35%, abaixo do valor mximo
especificado.20
Na preciso intermediria foi demonstrado que o mtodo preciso
para anlises realizadas por analistas diferentes em um mesmo dia e
em dias diferentes, estando a variao encontrada dentro dos limites
especificados, pois atravs do tratamento estatstico foi demonstrado que os F calculados para as anlises foram menores do que o F
crtico (Tabela 5).
O mtodo tambm se apresentou reprodutivo quando avaliado
em diferentes laboratrios, utilizando equipamentos diferentes. Os
resultados avaliados podem ser visualizados na Tabela 6.
Exatido
A exatido do mtodo foi averiguada atravs da anlise de
trs concentraes distintas (80, 100 e 120%), encontrando-se os
resultados dentro dos limites especificados. Para este parmetro, foi
aplicado o teste t Student, o qual demonstrou que o t calculado para

Quim. Nova

Tabela 5. Resultados experimentais obtidos na preciso intermediria com

os diferentes sistemas testado
Analistas

Dia 1

Dia 2

Analista 1

100,84%

100,51%

Analista 2

100,52%

100,26%

Analista 1

100,67%

100,17%

Analista 2

99,92%

100,50%

Analista 1

100,15%

100,39%

Analista 2

99,77%

100,30%

lcool etlico: gua (60:40, v/v)

Dia
F calculado = 2,1109
F tabelado = 18,5128
Analista
F calculado = 1,8408
F tabelado = 18,5128
gua purificada
Dia
F calculado = 0,0095
F tabelado = 18,5128
Analista
F calculado = 0,3008
F tabelado = 18,5128
Metanol
Dia
F calculado = 3,8879
F tabelado = 18,5128
Analista
F calculado = 0,6526
F tabelado = 18,5128

Tabela 6. Resultados experimentais obtidos para a reprodutibilidade

Laboratrio
1
2
3
Mdia CV%
I
100,77 98,08 100,58 99,81 1,505 F calculado = 0,7384
II
99,42 98,65 99,04 99,04 0,390 F tabelado = 7,7086

cada concentrao foi de 0,8308; 0,8543 e 0,3523, respectivamente,

sendo estes menores que o t tabelado (4,3026), comprovando que no
houve diferena significativa entre as mdias das trs concentraes
analisadas.
Especificidade
Para o mtodo proposto, a soluo amostra de EFZ foi contaminada com uma impureza, a zidovudina. Embora este frmaco possua
absoro mxima no comprimento de onde de 270 nm,23 muito prximo ao comprimento em estudo (247 nm), no houve interferncia na
absoro do EFZ neste comprimento de onda e na concentrao de
0,2 g mL-1 de zidovudina. Esse valor encontra-se dentro do intervalo
que compreende os LD e LQ da zidovudina, que so de 0,0394 e
0,0597 g mL-1,23 respectivamente (Figura 2).

Figura 2. Varreduras realizadas para a avaliao da especificidade do mtodo

Vol. 33, No. 9

Desenvolvimento de mtodo analtico para quantificao do Efavirenz

Absortividade molar (e)

A absorbncia da amostra foi de 0,555 para o solvente metanol
e 0,318 para a gua purificada, por meio da aplicao da equao
M = m/mol x V; onde M a concentrao molar, m a massa e
V o volume. Conhecida a massa molar do EFZ (315,68 g mol-1),
tem-se que a concentrao molar do mesmo a 10 g mL-1 igual a
3,1677x 10-5 mol. Aplicando-se a equao e = Abs.M-1, calculou-se
a absortividade molar do EFZ em gua purificada (9028,63 M1 cm1)
e metanol (17520,59 M1 cm1). Uma vez realizado o calculado da
absortividade molar do frmaco no solvente de interesse, pode-se
descobrir a concentrao molar de qualquer amostra desconhecida
solubilizada no solvente em questo.
Verificao da aplicabilidade da absortividade molar
Preciso
O mtodo desenvolvido demonstrou ser preciso por meio da
repetitividade e preciso intermediria para os dois solventes analisados. Na repetitividade, os resultados obtidos apresentaram um CV
de 0,92% para a gua purificada e 1,13% para o metanol. Na preciso
intermediria foi demonstrado que o mtodo preciso para anlises
realizadas por analistas diferentes em um mesmo dia e em dias diferentes, sendo a variao enquadrada dentro dos limites especificados
para ambos solventes (Tabela 5).

1971

Tabela 7. Resultados experimentais e tericos para o parmetro linearidade

nos solventes gua purificada e metanol

gua
purificada

Metanol

Concentrao
(g/mL)
5
8
9
10
11
12
15
5
8
9
10
11
12
15

Resultados
prticos

Terico
x Prtico

Abs Abs prtica

DP % CV %
terica Mdia (n3)
0,143
0,146
0,004 2,986
0,229
0,228
0,002 0,914
0,257
0,252
0,007 2,646
0,286
0,292
0,006 1,907
0,315
0,322
0,003 1,076
0,343
0,338
0,004 1,067
0,429
0,421
0,006 1,323

2,098
0,437
1,946
2,098
2,222
1,458
1,865

0,277
0,444
0,499
0,555
0,611
0,666
0,833

0,722
0,901
0,601
0,000
0,655
0,300
0,120

0,275
0,448
0,502
0,555
0,607
0,668
0,832

0,004
0,005
0,005
0,005
0,003
0,004
0,003

1,455
1,007
0,913
0,826
0,414
0,605
0,367

REFERNCIAS
Especificidade
Para o mtodo proposto, a soluo amostra de EFZ nos dois solventes analisados foi contaminada com uma impureza, zidovudina,
no havendo interferncia na absoro do EFZ neste comprimento
de onda.
Linearidade
Os resultados do estudo de linearidade esto agrupados na Tabela
7, bem como a mdia dos pontos estudados. A anlise de regresso
linear dos mnimos quadrados demonstrou um coeficiente de correlao de 0,9994 e 0,9939 para metanol e gua, respectivamente, indicando a linearidade dentro dos limites das concentraes estudadas,
obtendo-se a equao da reta y = 1,1107x + 0,0011 para o metanol
e y = 0,9308x + 0,0081 para gua. De acordo com os resultados,
verificou-se que o mtodo linear e no houve falta de ajustes para
as mdias estudadas, apresentando um valor de F de 2,9582, abaixo
do valor crtico tabelado de 4,3807.
Aplicando-se o mtodo de comparao entre duas grandezas, no
qual o mdulo do valor terico subtrado do valor prtico, sendo o
resultado dividido pelo valor terico e multiplicando por cem, obtmse em percentual o quo distante o resultado experimental est do
modelo terico. Para os valores avaliados na linearidade, para ambos
solventes menores, a variao encontrada foi menor do que 5%, sendo,
portanto, adequados analiticamente (Tabela 7).20
CONCLUSO
O mtodo apresentado foi desenvolvido e validado segundo o ICH
(ICH Q2A, 2005; ICH Q2B, 2005) e a ANVISA (RE n 899, 2003),
apresentou a confiabilidade requerida para um mtodo analtico. Alm
de se mostrar como uma alternativa rpida, segura e de baixo custo
quando comparado ao mtodo por CLAE.
Paralelamente, a absortividade molar pode ser utilizada no setor
de Desenvolvimento Analtico para facilitar o desenvolvimento de
novos mtodos, a investigao de desvios de qualidade e/ou adaptao
dos mesmos. Por meio dos parmetros utilizados, demonstraram-se
as vantagens do uso dentro do limite de confiabilidade analtica.

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