EMBRIOGENESIS SOMATICA Y SUSPENSIONES DE CELULAS:

Estas tcnicas tuvieron su origen en el concepto de totipotencia enunciados por

Haberland en 1902. Totipotencia significa que todas las clulas vegetales tienen la
capacidad de formar plantas completas.
La totipontecialidad de la clula vegetal se debe a la particularidad que tiene cualquier
clula vegetal de perder su diferenciacin (desdiferenciacin)
Los primeros resultados a favor de esta teora fueron los obtenidos por Reinert en 1958
y Stewar et. al. En 1958. Estos investigadores lograron inducir la formacin de
embriones somticos a partir de las races de zanahoria.
A la fecha se han realizados cientos de estudios con diferentes plantas confirmndose
los resultados anteriores. Agunas revisiones sobre la embriognesis somtica se pueden
encontrar en: Tisserat et al. 1979; Ammirato 1983; Evans et al. 1981; Vasil 1982.
EMBRIOGENESIS SOMATICA
La embriognesis se refiere a la formacin de un embrin somtico a partir de las
clulas somticas que no son el producto de la fusin de gametos. Esta terminologa fue
utilizada por Tokin en 1963 para describir la formacin de un individuo de una o varias
clulas somticas. Sin embargo, este fenmeno no debe confundirse con la
organognesis.
CARACTERISTICA DE UN EMBRION SOMATICO
Son estructuras bipolares con un eje radical-apical, no poseen conexiones vasculares
con el tejido materno (generalmente aislados por una epidermis). Esta estructura es
capaz de crecer y formar una planta completa. En muchos aspectos de su desarrollo los
embriones somticos mantienen una similitud con los embriones cigticos. Sin
embargo, pueden ocurrir anormalidades en el desarrollo como por ejemplo la funcin de
los cotiledoneos.
EMBRIOGENESIS DIRECTA O INDIRECTA:
Aunque a veces esta distincin no es admitida es importante resaltar que la
embriognesis somtica puede acompaarse de un fenmeno llamado callognesis o
formacin de un callo (un callo puede ser definidos como un conjunto desorganizado de
clulas capaces de dividirse, pudiendo ser meristemticas o embriognicas). Es el
resultado de la totipotencialidad.
FACTORES QUE AFECTAN LA EMBRIOGENESIS SOMATICA
A la fecha existen muchas teoras sobre la embriognesis somtica y los factores que
favorecen este proceso, sin embargo no parecen existir reglas ni recetas universales.
EL EXPLANTE

En base a la definicin de toti potencia virtualmente todos los tejidos vegetales tienen
capacidad para formar embriones somticos in vitro. Sin embargo, dependiendo de las
especies y de las condiciones de cultivo, pocos explantes son capaces de iniciar la
embriognesis somtica. En general, los explantes utilizados con ms xito en varias
especies de la mayora de las familias de plantas son cotiledneas, los hipocotilos y los
embriones. Sin embargo, tambin se utilizan los pices, segmento de hoja, races e
inflorescencia. Por ejemplo: los embriones cigoticos inmaduros han resultado los
explantes ms favorables para inducir la embriognesis somtica en la mayora de los
cereales. Tambin se han utilizado las hojas en sorgo, caf y palmceas y las nucelas
ctricos y mangos. En general, se puede admitir entre ms jvenes sea el tejido utilizado
(estado juvenil poco diferenciado) ms fcil ser desviarlo de su programa gentico y
as obtener la des diferenciacin hacia la formacin de embriognesis somtica
Segn Litz, 1984 y Dheda et al, 1991, un factor a considerar es que muchas veces
dentro de una misma especie, las reacciones de las diferentes variedades pueden ser
muy diferentes. As, un mtodo establecido para un cultivar o variedad podr no
aplicarse a otro individuo de la misma especie.
La semilla y sus tejidos juegan un papel muy importante en el desarrollo del embrin
cigotico. Los tejidos en muchas especies crean barreras que permiten regular el
intercambio gaseoso as, el oxgeno disponible para el cigoto es limitado. A nivel de
nutricin, los tejidos de la semilla como la nucela y el endospermo proveen al cigoto los
elementos necesarios para su desarrollo: carbohidratos, lpidos y protenas. Los
tegumentos juegan tambin un papel importante en la regulacin de la luz.
FACTORES EXTERNOS:
En contraste con los esfuerzos que se han dedicado al estudio de los medio de cultivo y
las sustancia de crecimiento, pocos investigadores se han dedicado a estudiar el efecto
de los factores ambientales.
El oxgeno:
El nivel del oxgeno en cultivo de tejidos depende de los tejidos depende de los gases
presentes alrededor y dentro del recipiento del cultivo y de su proporcin. El nivel de
oxigeno depender entonces de la manera en que se cierre el frasco de cultivo, de la
frecuencia de los subcultivos y del metabolismo de los tejidos que rodean al tejido
embriognico (callos). En trigo, Carman (1989) demostr que bajas dosis de oxigeno
favorecan la embriognesis somatica por otro lado Engelman (1990), trabjando con
palma africana encontr que la conservacin en cultivos embriognicos se favorecio en
presencia de una atmosfera al 1% de O2 + 99% N2, ya que el nitrgeno despalza
rpidamente al oxgeno.
El medio:

Los medios semislidos son los mas empleados. Sin embargo, existen varios estudios
que demuestran la importancia del agente gelificante: agar, gelrite, agarosa.
Aunque la fase
de iniciacin de
la
embriognesis somatica
se utiliza
preferencialmente el medio slido, el medio liquido es muy utilizado en la
multiplicacin a gran escala.
El cultivo en medio lquido presenta varias ventajas:

Individualizacin de todos los embriones somticos.

Aumento del potencial embriognico.
Aumento en la expresin de los proembriones y por ende un aumento del
nmero de embriones somticos.
Mejoramiento de los embriones y como consecuencia mejoramiento de la
germinacin de los mismos

El proceso consiste en transferir el cultivo embriognico a un Erlenmeyer con medio

liquido con agitacin o en bioreactores. Tambin se puede utilizar el Sistema de
inmersin temporal, el cual ha sido desarrollado recientemente. Este sistema consiste
en sumergir el cultivo en el medio a intervalos regulares, por ejemplo, 4 veces al da por
un periodo de un minuto.
El medio de cultivo:
Por lo general, se utiliza el medio de Murashige y Skoog o modificaciones de este.
Sacarosa: La sacarosa se utiliza en niveles de 2 a 3% (20 a 30 g/l). Sin embargo,
existen varios estudios que demuestran que altas dosis de sacarosa pueden favorecer la
embriognesis somtica. As, Wetherell (1984) reporto l uso de sacarosa a 120 g/l en
zanahoria. Por otro lado, Escalant y Teisson(1989) demostraron que en Musa fue
necesaria utilizar 60 g/l de sacarosa. Segn finer (1987), otra ventaja que conlleva el
utilizar altas concentraciones de sacarosa (120 g/l) es poder disminuir la dosis de
auxina.
Nitrgeno: es sin duda un elemento esencial en el cultivo de tejidos. Existen varias
formas de suministrarlo siendo las ms comunes en NH4 (amonio) y el NO3 (nitrato).
Tambin se puede complementar la dosis con el nitrgeno orgnico provisto por
aminocidos tales como glutamina y alanina, la casena hidrolizada o por el agua de
coco.
Carbn activado: se utiliza principalmente para limitar los problemas de oxidacin
asociados al cultivo de tejidos (liberacin de compuestos fenlicos que provocan la
oxidacin y muerte del tejido). El carbn activado adsorbe las sustancias qumicas en
general, limitando asi su intervencin con el tejido cultivado,. Con respecto a las
auxinas y citocininas, se cree que el cabron activado las retiene liberndolas
progresivamente en el medio favoreciendo asi la embriognesis somatica. La dosis
comnmente utilziadas van de 0.1 g/l a 1 g/l.