NORMA TCNICA

COLOMBIANA

NTC
4772
2008-04-30

CALIDAD DEL AGUA.

DETECCIN Y RECUENTO DE Escherichia coli y
DE BACTERIAS COLIFORMES. PARTE 1: MTODO
DE FILTRACIN POR MEMBRANA

E:

WATER QUALITY. DETECTION AND ENUMERATION OF

Escherichia coli and COLIFORM BACTERIA. PART 1:
METHOD BY MEMBRANE FILTRATION.

CORRESPONDENCIA:

esta norma adopcin modificada

(MOD), respecto al documento de
referencia, la norma ISO 9308-1:2001

DESCRIPTORES:

agua; mtodo horizontal; mtodo de

anlisis;
microbiologa;
anlisis
microbiolgico; recuento; recuento en
placa; E coli.

I.C.S.: 07.100.20; 07.100

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproduccin

Primera actualizacin
Editada 2008-05-13

PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.
La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica
est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.
La NTC 4772 (Primera actualizacin) fue ratificada por el Consejo Directivo de 2008-04-30.
Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a
travs de su participacin en el Comit Tcnico 25 Microbiologa.
ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A.
ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A.
ANNAR DIAGNSTICA IMPORT LTDA.
ARCHIVO DE BOGOT
ASBIOQUIM LTDA.
ASEBIOL LABORATORIO LTDA.
ASINAL LTDA.
ASOCIACIN COLOMBIANA DE CIENCIA
Y TECNOLOGA COSMTICA ACCYTECAVESCO KOKORICO S.A.
BIANLISIS
BIOCONTROL LTDA.
BIOQUILAB LTDA.
BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA.
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA.
CARULLA VIVERO S.A.
CONGELAGRO S.A.
DUPONT QUALICON DE COLOMBIA
ENZIPN DE COLOMBIA LTDA.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZEN S.A.
INSTITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
NACIONAL DE COLOMBIA
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.
JHONSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.
KOYOMAD S.A.
LABCONTROL E.U.

LABFARVE
LABORATORIO
DE
FARMACOLOGA VEGETAL
LABORATORIO EMICAL LTDA.
LABORATORIOS GRAM LTDA.
LABORATORIOS MICROLAB LTDA.
LABORATORIO SFC LTDA.
LESNIAK E.U.
MERCADEO
DE
ALIMENTOS
DE
COLOMBIA S.A.
MERCK S.A.
MICROBILOGOS ASOCIADOS LTDA.
NULAB LTDA.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
PURIFICACIN Y ANLISIS DE FLUIDOS
LTDA.
QUIK LTDA.
QUALA S.A.
SECRETARA DISTRITAL DE SALUD DE
BOGOT
SERVICIOS DE LABORATORIO CLNICO
LTDA.
SUIZO S.A.
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
VILASECA LTDA.

Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las

siguientes empresas:

3M COLOMBIA S.A.
ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A.
ALGARRA S.A.
AQUALAB
BAVARIA S.A.
BIOMERIEUX COLOMBIA
BLANCA USECHE
CASA LUKER S.A.
CENICAA
CENTROAGUAS S.A. E.S.P.
CERCAL LTDA.
CERVECERA LEONA
COMPAA NACIONAL DE CHOCOLATES
S.A.
COOPERATIVA DE GANADEROS DE
CARTAGENA LTDA.
CREPES Y WAFLES S.A.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y
ALCANTARILLADO DE BOGOT
FABRICA DE ESPECIAS Y
CONDIMENTOS EL REY S.A.
FRIGORFICO GUADALUPE S.A.
FRIGORFICO SUIZO S.A.
FRIGORFICOS COLOMBIANOS S.A.
FRUGAL S.A.
HOSPITAL DEPARTAMENTAL DE
VILLAVICENCIO
INGENIO PICHICHI S.A.
INGENIO RIOPAILA
INSTITUTO COLOMBIANO
AGROPECUARIO -ICA-

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

INVIMA - INSTITUTO NACIONAL DE
VIGILANCIA MDICA
LA CONSTANCIA COLOMBIA
LABORATORIO DE GENTICA Y
BIOLOGA MOLECULAR
LABORATORIO MICROBIOLGICO SIS
LABORATOTORIO MICROBIOLGICO DE
BARRANQUILLA
LARKIN
LEVAPN S.A.
LLOREDA GRASAS S.A.
MEDIIMPLANTES LTDA.
MICROLABY LTDA.
MINISTERIO DE PROTECCIN SOCIAL.
NESTL DE COLOMBIA S.A.
PASIFLORA COLOMBIANA S.A.
PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y
JUGOS DE FRUTA
QUIOS LTDA.
REPRESENTACIONES
BIOTECNOLGICAS LTDA.
RICA RONDO, INDUSTRIA NACIONAL DE
ALIMENTOS S.A.
SCHERING COLOMBIANA S.A.
TECNIMICRO LABORATORIO DE
ANLISIS
UNIVERSIDAD CATLICA INGECAL
UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
VIKINGOS
VILASECA LTDA.

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIN DE NORMALIZACIN

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

CONTENIDO

Pgina

0.

INTRODUCCIN ..........................................................................................................1

1.

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN ........................................................................1

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................2

3.

TRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

4.

FUNDAMENTO ............................................................................................................3

4.1

DESCRIPCIN GENERAL DEL MTODO .................................................................3

4.2

FILTRACIN E INCUBACIN .....................................................................................3

4.3

EVALUACIN Y CONFIRMACIN, ENSAYO ESTNDAR .......................................3

4.4

EVALUACIN Y CONFIRMACIN, ENSAYO RPIDO .............................................3

5.

EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRIO ...........................................................................3

6.

MEDIO DE CULTIVO Y DILUYENTE ...........................................................................4

7.

MUESTREO..................................................................................................................5

8.

PROCEDIMIENTO........................................................................................................5

8.1

PREPARACIN DE LA MUESTRA .............................................................................5

8.2

FILTRACIN ................................................................................................................5

8.3

INCUBACIN Y DIFERENCIACIN, ENSAYO ESTNDAR .....................................5

8.4

INCUBACIN Y DIFERENCIACIN, ENSAYO RPIDO ...........................................6

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

Pgina

9.

EXPRESIN DE RESULTADOS .................................................................................6

10.

INFORME DE ENSAYO ...............................................................................................7

11.

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD .........................................................................7

DOCUMENTO DE REFERENCIA ..........................................................................................20

ANEXOS
ANEXO A (Informativo)
INFORMACIN MICROBIOLGICA COMPLEMENTARIA SOBRE LAS
BACTERIAS COLIFORMES ....................................................................................................8
ANEXO B (Normativo)
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS ...................................................................................9
ANEXO C (Informativo)
VOLMENES DE MUESTRAS ORIENTATIVOS ......................................................................13
ANEXO D (Informativo)
TCNICAS DE ENRIQUECIMIENTO ALTERNATIVAS SEGN EL STANDARD
METHOD 9222 PARA EL RECUENTO TOTAL DE COLIFORMES POR EL
MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA ........................................................................14
BIBLIOGRAFA ......................................................................................................................20

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

CALIDAD DEL AGUA.

DETECCIN Y RECUENTO DE Escherichia coli y DE BACTERIAS
COLIFORMES. PARTE 1: MTODO DE FILTRACIN POR MEMBRANA

0.

INTRODUCCIN

La presencia y el nivel de contaminacin fecal constituye un factor importante en la evaluacin

de la calidad de una masa de agua y del riesgo de infeccin que representa para la salud
humana. El anlisis de muestras de agua para detectar la presencia de Escherichia coli, que
normalmente habita en el tracto intestinal de hombres y otros animales de sangre caliente,
proporciona una indicacin de este tipo de contaminacin. Los resultados del anlisis de
bacterias coliformes pueden resultar ms difciles de interpretar dado que algunas bacterias
coliformes viven en el suelo y en las aguas dulces superficiales y, por tanto, no tienen siempre
un origen intestinal. La presencia de bacterias coliformes, aunque no pruebe de forma
concluyente una contaminacin de origen fecal, si puede indicar fallos en el tratamiento o en la
distribucin del agua. La identificacin de las cepas aisladas puede permitir en ocasiones
obtener informacin acerca de su origen.

1.

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN

La presente norma especifica un mtodo de referencia (ensayo estndar) para la deteccin y

recuento de Escherichia coli y bacterias coliformes en agua destinada al consumo humano. El
mtodo estndar se basa en la filtracin por membrana, el posterior cultivo en un medio de
agar de diferenciacin y el clculo del nmero de los organismos objeto de ensayo en la
muestra.
El mtodo estndar es poco selectivo y permite la deteccin de bacterias daadas. Debido a
esta baja selectividad, el crecimiento de la flora bacteriana general puede afectar a la fiabilidad
del recuento de E. coli y bacterias coliformes, por ejemplo, en algunas aguas potables, tales
como las aguas de pozos poco profundos, que no han sido desinfectadas y que dan lugar a
importantes crecimientos de flora interferente. Esta norma es, por tanto, especialmente
adecuada para agua desinfectada y otras aguas potables con bajas densidades bacterianas.
La presente norma incluye un mtodo rpido (ensayo rpido) para la deteccin, en menos de
24 h, de E. coli en aguas destinadas al consumo humano, y que puede resultar muy til en
aquellos casos en los que se requiere una rpida informacin. El ensayo rpido se basa en la
filtracin por membrana, el posterior cultivo, en condiciones selectivas, y el clculo del nmero
de E. coli en la muestra.

1 de 20

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

Los ensayos estndar y rpidos descritos en la presente norma, son aplicables a otros tipos de
aguas, siempre que la materia en suspensin o la flora de fondo no interfieran en la filtracin, el
cultivo y el recuento.

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicacin de

este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica nicamente la edicin citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la ltima edicin del documento normativo
referenciado. (incluida cualquier correccin).
NTC 4491-1, Microbiologa de los alimentos para consumo humano y animal. Preparacin de
las muestras de ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para examen microbiolgico.
Parte 1: Reglas generales para la preparacin de la suspensin inicial y las diluciones
decimales. (ISO 6887-1).
NTC 5395, Agua para uso en anlisis de laboratorio. Especificacin y mtodos de anlisis.
NTC-ISO 5667-1, Calidad del agua. Muestreo. Parte 1: Directrices para el diseo de programas
de muestreo.
NTC-ISO 5667-2, Calidad del agua. Muestreo. Parte 2:Tcnicas generales de muestreo.
NTC-ISO 5667-3, Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Directrices para la preservacin y
manejo de las muestras.
ISO 3696, Agua para uso en anlisis de laboratorio. Especificacin y mtodos de ensayo.
ISO 7704, Water quality. Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses.
ISO 8199, Water quality. General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture.
ISO 19458, Water quality. Sampling for microbiological analysis.
ISO/IEC Gua 2. Normalizacin y actividades relacionadas. Vocabulario general.

3.

TRMINOS Y DEFINICIONES

Para los propsitos de esta norma se aplican los siguientes trminos y definiciones dados en la
Gua ISO/IEC 2 as como las siguientes:
3.1 Bacterias lactosa-positivas. (Ensayo estndar) bacterias capaces de formar colonias en
condiciones aerobias a (36 3) C en un medio de cultivo de lactosa selectivo y diferencial, con
produccin de cido en (21 3) h.
3.2 Bacterias coliformes. (Ensayo estndar) bacterias lactosa-positivas segn la definicin
indicada en el numeral 3.1 y que son oxidas a-negativas.
3.3 Escherichia coli. (Ensayo estndar) bacterias coliformes segn la definicin indicada en el
numeral 3.2 y que, adems, producen indol a partir de triptfano en (21 3) h a (44,0 0,5) C.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

3.4 Escherichia coli. (Ensayo rpido) bacterias resistentes a la bilis y que, adems, producen
indol a partir de triptfano en (21 3) h a (44,0 0,5) C.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

BIBLIOGRAFA

[1]

BARRELL, R.A.E. (1992). A Comparison Between Tryptone Bile Agar and Membrane
Lauryl Sulphate Broth for the Enumeration of Presumptive Escherichia coli in Water.
Water Res. 26:677-681.

[2]

HA VELAAR, A.H. y DURlNG, M. (1988). Evaluation of the Anderson Baird-Parker Direct

Plating Method for Enumerating Escherichia coli in Water. J Appl. Bacterial. 64: 89-98.

[3]

SCHETS, F.M. y HAVELAAR, A.H. (1991). Comparison of lndole Production and Glucuronidase Activity for the Detection of Escherichia coli in a Membrane Filtration
Method. Lett.Appl.Micrabiol. 13: 272-274.

[4]

SCHETS, F.M., MEDEMA, G.J. y HAVELAAR, A.H. (1993). Comparison of Colilert with
Dutch Standard Enumeration for Escherichia coli and Total Coliforms in Water. Lett.
Appl. .Microbiol. 17:17-19.

[5]

Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater, 18 th ed, APHA,
AWWA, WPCF, 2005.

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

IMPORTANTE

Este resumen no contiene toda la informacin necesaria para la aplicacin del documento normativo original al que se
refiere la portada. ICONTEC lo creo para orientar a su cliente sobre el alcance de cada uno de sus documentos y facilitar
su consulta. Este resumen es de libre distribucin y su uso es de total responsabilidad del usuario final.
El documento completo al que se refiere este resumen puede consultarse en los centros de informacin de ICONTEC en
Bogot, Medelln, Barranquilla, Cali o Bucaramanga, tambin puede adquirirse a travs de nuestra pgina web o en
nuestra red de oficinas (vase www.icontec.org).
El logo de ICONTEC y el documento normativo al que hace referencia este resumen estn cubiertos por las leyes de
derechos reservados de autor.
Informacin de servicios aplicables al documento aqu referenciado la encuentra en: www.icontec.org o por medio del
contacto cliente@icontec.org

ICONTEC INTERNACIONAL

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 4772 (Primera actualizacin)

RESUMEN

DOCUMENTO DE REFERENCIA
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Water Quality. Detection and Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria. Part 1:
Method by Membrane Filtration. Geneve, 2001 (ISO 9308-1:2001).