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Procesamiento Histolgico

I N C LU S I N e n PA R A F I N A
Para la inclusin de muestras que han de observarse con microscopa ptica se utiliza sobre
todo la parafina, y en menor medida la celoidina, como medio de inclusin. Vamos a describir los
pasos para la inclusin en parafina de muestras de tejido previamente fijadas.
La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que est formada por mezclas de
hidrocarburos saturados. A temperatura ambiente es slida y su punto de fusin puede variar entre
40 y 70 C segn su composicin de la mezcla de hidrocarburos. Resultan distintos tipos de
parafinas a temperatura ambiente que se emplean segn las necesidades. As, parafinas ms
duras a temperatura ambiente tienen un punto de fusin mayor, mientras que las ms blandas uno
menor. Es recomendable una dureza mayor para incluir muestras ms duras. Las parafinas ms
usadas tienen un punto de fusin en torno a los 60 C. Podemos tambin modificar las
caractersticas de las parafinas aadiendo sustancias para variar su dureza, viscosidad, fragilidad,
etctera.
La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos estn formados
principalmente por agua. Adems, la mayora de los fijadores son soluciones acuosas. Esto implica
que para que la parafina lquida pueda penetrar completamente en el tejido ha de sustituirse el agua
por un solvente orgnico. Esto se consigue mediante la deshidratacin del tejido en alcoholes,
normalmente metanol, de gradacin creciente hasta alcohol de 100. Posteriormente se transfiere el
tejido a un lquido que sea miscible tanto con el alcohol de 100 como con la parafina,
denominado sustancia intermediaria, como es el benceno, xileno, tolueno o el xido de propileno,
entre otros. Estas sustancias son normalmente aclarantes por lo que comprobando la translucidez
de la pieza podemos cerciorarnos de la penetracin de la sustancia intermediaria en el tejido. El
tiempo de incubacin de la pieza algunos de estos lquidos intermediarios como el tolueno o xileno
no debe ser excesivo puesto que estas sustancias endurecen la pieza y provocar problemas hacer
las secciones.
Por ltimo se pasa el tejido a parafina previamente licuada en una estufa regulada a la
temperatura apropiada para dicho tipo de parafina. Se dan tres pasos por parafina para favorecer
una buena impregnacin. El tiempo que duran dichos pasos depende de lo voltil que sea el lquido
intermediario y lo grande que sea nuestra pieza. Ser mayor cuanto menos voltil es el lquido
intermediario o mayor sea la muestra de tejido. Hay que tener en cuenta que un tiempo excesivo en
parafina puede endurecer el tejido. Tras el embebimiento completo de la muestra se vierte parafina
lquida en un molde, se intruduce la muestra y se coloca segn la orientacin deseada de corte
y se deja solidificar a temperatura ambiente.
Un protocolo comn de inclusin en parafina es el siguiente:

Procesamiento Histolgico

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