Les Entrobactries (1re partie) :

Identification bactrienne jusquau genre et /ou

lespce laide dune macrogalerie
Objectifs : * Mettre en vidence les caractres morphologiques, culturaux et biochimiques
pour orienter ltude vers la famille des entrobactries.
* Raliser lensemencement dune galerie traditionnelle didentification en tubes
(= macrogalerie)
* A laide des tableaux dichotomiques, identifier le genre voire lespce de la
bactrie donne.
1er jour
Manipulation : Par personne, vous disposez dune souche pure prsente sur GNi :

Souche numrote
prsente sur glose nutritive
incline

Raliser une
suspension bactrienne
Isoler sur milieu
slectif des bacilles
Gram - :
Milieu de
Drigalski

Etude
microscopique :
Raliser une coloration de
Gram

Ensemencements
des milieux de la
galerie de famille :

Ensemencements des
milieux de la galerie
de genre et
despce :

VF
Kligler-Hajna
Recherche de l
enzyme respiratoire :
Raliser le test dorientation
rapide en fonction du
Gram : oxydase ou catalase

Hugh et Leifson
glucoss

Clarks et Lubs

Bouillon nitrat

Ure Indole

Glose Nutritive
Ordinaire

Mannitol-Mobilit
Citrate de Simmons

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Incuber botes et tubes 24 h 37C

Compte-rendu :
Coloration de Gram

Observations

Test respiratoire :

Conclusion

Observations

Conclusion

Orientation vers une

famille, un ou des
genres bactriens

Souche n

2me jour
Manipulation :
Lecture des diffrents milieux ensemencs : botes et tubes.
Raliser le test complmentaire ncessaire la mise en vidence de la nitrate rductase.
Raliser le test ONPG partir du milieu Kligler pour les bactries lactose - uniquement.
Raliser le test du RM et du VP partir du milieu Clark et Lubs.
Raliser les tests complmentaires ncessaires la mise en vidence de la tryptophane
dsaminase et de la tryptophanase partir du milieu Ure-Indole.

Compte-rendu :
1. Ensemencements
Milieux
VF
Bouillon nitrat
Hugh et Leifson glucos
Kligler
Clark et Lubs

Observations

Interprtations

Conclusion

Citrate de Simmons
Mannitol- Mobilit
Ure-Indole
Milieu avec le film photographique

2. Isolements
Observations : aspect des colonies

Conclusion

Glose Nutritive Ordinaire

Glose Drigalski

3. Conclusion
Proposer une identification de cette souche numrote et justifier votre dmarche
logique danalyse :
Justification de lappartenance la famille des Entrobactries.
Justification de lappartenance au genre bactrien.
Eventuellement dtermination de lespce bactrienne.

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