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H IS T O LÓ G IC O S
G IS E LA G A R C ÍA
C R ESPO .
Facultad de Ciencias Veterinarias
Histo
• CULTIVOS CELULARES
•Se cultivan células fuera del
• AUTORRADIOGRAFIA:Técnica por
la cual un objeto radiactivo
produce una imagen de sí
mismo sobre una película
fotográfica. La imagen se
denomina autorradiografía
Autorradiografía
METODOS HISTOLÓGICOS
• CENTRIFUGACIÓN -
ULTRACENTRIFUGACIÓN
•Se obtienen células o componentes
subcelulares específicos de
acuerdo a su gradiente de
sedimentación Ej.: glóbulos rojos,
glóbulos blancos; mitocondrias,
retículo endoplasmático, etc.
METODOS HISTOLÓGICOS
• INJERTOS O TRANSPLANTES
– Homo-injertos: se realizan en la
misma especie
• Auto-transplantes ( el mismo
individuo)
• Alo-injertos (diferentes individuos)
– Isotransplante
•
•
•
Homotransplante
Alotransplante
METODOS HISTOLÓGICOS
•
– Hetero-injertos o xeno-injertos: se
efectúan entre especies
diferentes
•
Xenotransplante o
heterotransplante
Xenotransplante o
heterotransplante
METODOS HISTOLÓGICOS
• Disociación
• Escisiones
• Iluminación especial
METODOS HISTOLÓGICOS
• Disociación
• Escisiones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Maceracion
es
• Inyecciones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Reconstrucciones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Fotografías
• Videos
• Dibujos
METODOS HISTOLÓGICOS
• DIRECTOS
• INDIRECTOS
• COLORACIÓN
METODO DE
COLORACIÓN
• SE BUSCA CONTRASTAR
COMPONENTES CELULARES O
EXTRACELULARES A TRAVÉS DE
SUSTANCIAS CROMÓGENAS.
TEORÍAS DE LA
COLORACIÓN
FÍS IC A
Q U ÍM IC A
FÍS IC O - Q U ÍM IC A
CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
• CLASIFICACIÓN
POR SU
ORIGEN
• NATURALES
• ARTIFICIALES
CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
• CLASIFICACIÓN
POR SU
ORIGEN
• NATURALES
COLORANTES
• NATURALES
VEGETALES
•
• hematoxilina,
azafrán, orceína.
•
•
COLORANTES
•
ANIMALES
•
• carmín
(cochinilla)
COLORANTES
• ARTIFICIALES
• PIGMENTOS
• rojo rutenio, verde
brillante, azul de
Prusia.
• Derivados de la
anilina
• (destilación de la
hulla)
Colorantes. Clasificación
química
• Colorantes
Básicos
• Colorantes
Ácidos
• Colorantes
Neutros
...
Procesamiento
Histológico
Fases o procesos:
• Toma de la muestra
• Fijación
• Repicado
• Inclusión de la muestra
• Corte al micrótomo
• Coloración
• Montaje
Procesamiento
Histológico
• Toma de la muestra
– Identificación
• Especie
• Raza
• Número
• Etc.
Procesamiento
Histológico
• Toma de la
muestra
– Tamaño
Procesamiento
Histológico
• Toma de la
muestra
– Tamaño: 0,5 a
1 cm
FIJACIÓN
PRINCIPIO DE LA FIJACIÓN
CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN
FIJADOR
FIJACIÓN
Formol al 10 %
Inmersión o perfusión
Procesamiento
Histológico
• Toma de la
muestra
– Identificación
Repicar la muestra
Procesamiento
Histológico
• TOMA DE LA MUESTRA (0,5-1 CM)
• FIJACIÓN: 40-60 VECES EL
VOLUMEN
•• LAVADO EN AGUA CORRIENTE
•
¿cómo cortar tan delgado?
¿ 5 micrómetros?
¡¡¡ parafina !!! ... Pero y el agua?
¡¡¡ No son miscibles!!!
•
Procesamiento
Histológico
•
• DESHIDRATACIÓN EN ALCOHOLES
CRECIENTES (50º- 100º)
• ACLARAMIENTO EN XILOL
• INCLUSIÓN EN PARAFINA
• 5 micrómetros
– Deslizamiento
– Rotación
MICROTOMO DE
DESLIZAMIENTO
Procesamiento
Histológico
Microtomos de deslizamiento
Corte al microtomo
• 5 micrómetros
– Microtomos de rotación
Procesamiento
Histológico
•
• Recolección de
los cortes
– Pescado
(baño
María)
•
Procesamiento
• Histológico
• Recolección de los cortes
• Desparafinación
– Estufa
– Xilol
–
• ¿ y el agua ? ...
•
• Hidratación(alcoholes
decrecientes)
• Coloración
Criostat
o
COLORACIÓN
HEMATOXILINA Y EOSINA
COLORACIÓN
•
HEMATOXILINA Y EOSINA
• Coloración
– Desparafinación (xilol)
– Hidratación
– Coloración Hematoxilina
– Coloración Eosina
HEMATOXILINA & EOSINA
RESUMEN:
•
• CORTE AL MICROTOMO
• RECOLECCIÓN (BAÑO DE MARÍA)
• DESPARAFINACIÓN (XILOL)
• HIDRATACIÓN ALCOHOLES DECRECIENTES
(100º A-AGUA)
• COLORACION HEMATOXILINA( núcleo-
ácidos)
•
HEMATOXILINA & EOSINA
•
• LAVADO AGUA CORRIENTE
• COLORACIÓN EOSINA
• LAVADO CON AGUA
• DESHIDRATACIÓN
• ACLARAMIENTO
• MONTAJE
Tipos de coloración
( acorde color producido )
Tipos de coloración
( acorde color producido )
• Ortocromática
• METACROMÁTICA
• Impregnación
Tipos de coloración
( acorde color producido )
• Retrógrada
• Progresiva
• Histoquímica
•
MÉTODOS
HISTOQUÍMICOS
Para carbohidratos: PAS, PAS-D
Lípidos.: SUDÁN, ACEITE ROJO
Ácidos nucléicos: FEULGEN
Pigmentos y minerales: VON KOSSA (Ca.)
EnzimaS : FOSFATASA (alcalina , ácida), ESTERASAS
MÉTODOS
HISTOQUÍMICOS
PANTALLA FLUORESCENTE
RESULTADO