M ÉTO D O S

H IS T O LÓ G IC O S

G IS E LA G A R C ÍA
C R ESPO .
 Facultad de Ciencias Veterinarias

Histo

Creado por Ysrael Villamarín

Dibujo: Jan Acevedo
MÉTODOS HISTOLÓGICOS

• Los métodos o técnicas

histológicas se puede definir
como: la serie de
procedimientos especiales a
los que se somete el material
que se va a estudiar bajo el
microscopio (Histológicamente)
METODOS HISTOLÓGICOS
• DIRECTOS( En
vivo)
• INDIRECTOS
(Postmorten)
• COLORACIÓN
 MÉTODOS DIRECTOS

• ESTUDIO DONDE SE EMPLEAN

PROCEDIMINETOS QUE NO
AFECTAN LA BIOLOGÍA CELULAR,
O PERMITEN OBSERVAR LOS
CAMBIOS QUE SUFRE ANTE
DETERMINADOS
PROCEDIMIENTOS.
 METODOS INDIRECTOS
• PROCEDIMIENTOS QUE
REQUIEREN MAYOR TIEMPO
PARA PODERLOS EJECUTAR, A
VECES REQUIEREN DE UNA
FIJACIÓN PREVIA.
• SON PROCEDIMIENTOS MEDIATOS
O POSTMORTEN.
Entre estos procedimientos contamos...
METODOS HISTOLÓGICOS

• CULTIVOS CELULARES
•Se cultivan células fuera del

organismo que les dio origen.

• Requiere un medio apropiado:
aséptico (sin agentes nocivos),
temperatura, pH, humedad,
nutrientes, etc.
• Ej: HeLa, linfocitos, etc.
•
CULTIVOS CELULARES
CULTIVOS CELULARES
CULTIVOS CELULARES
METODOS HISTOLÓGICOS
•

• AUTORRADIOGRAFIA:Técnica por
la cual un objeto radiactivo
produce una imagen de sí
mismo sobre una película
fotográfica. La imagen se
denomina autorradiografía
Autorradiografía
 METODOS HISTOLÓGICOS
• CENTRIFUGACIÓN -
ULTRACENTRIFUGACIÓN
•Se obtienen células o componentes

subcelulares específicos de
acuerdo a su gradiente de
sedimentación Ej.: glóbulos rojos,
glóbulos blancos; mitocondrias,
retículo endoplasmático, etc.
 METODOS HISTOLÓGICOS

• INJERTOS O TRANSPLANTES
– Homo-injertos: se realizan en la
misma especie
• Auto-transplantes ( el mismo
individuo)
• Alo-injertos (diferentes individuos)
– Isotransplante
•
•

•
Homotransplante
Alotransplante
 METODOS HISTOLÓGICOS
•

– Hetero-injertos o xeno-injertos: se
efectúan entre especies
diferentes
•
Xenotransplante o
heterotransplante
Xenotransplante o
heterotransplante
METODOS HISTOLÓGICOS
• Disociación

• Escisiones

• Iluminación especial
METODOS HISTOLÓGICOS
• Disociación
• Escisiones
METODOS HISTOLÓGICOS
• Maceracion

es

• Inyecciones
METODOS HISTOLÓGICOS

• Reconstrucciones
METODOS HISTOLÓGICOS

• Fotografías
• Videos
• Dibujos
METODOS HISTOLÓGICOS

• DIRECTOS
• INDIRECTOS
• COLORACIÓN
 METODO DE
COLORACIÓN
• SE BUSCA CONTRASTAR
COMPONENTES CELULARES O
EXTRACELULARES A TRAVÉS DE
SUSTANCIAS CROMÓGENAS.
 TEORÍAS DE LA
COLORACIÓN
FÍS IC A
Q U ÍM IC A
FÍS IC O - Q U ÍM IC A
 CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
• CLASIFICACIÓN
POR SU
ORIGEN
• NATURALES
• ARTIFICIALES
 CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
• CLASIFICACIÓN
POR SU
ORIGEN
• NATURALES
 COLORANTES
• NATURALES
VEGETALES
•

• hematoxilina,
azafrán, orceína.
•

•
 COLORANTES
•

ANIMALES
•

• carmín
(cochinilla)
 COLORANTES

• ARTIFICIALES
• PIGMENTOS
• rojo rutenio, verde
brillante, azul de
Prusia.
• Derivados de la
anilina
• (destilación de la
hulla)
Colorantes. Clasificación
química

• Colorantes
Básicos
• Colorantes
Ácidos
• Colorantes
Neutros
...
 Procesamiento
Histológico
Fases o procesos:

• Toma de la muestra
• Fijación
• Repicado
• Inclusión de la muestra
• Corte al micrótomo
• Coloración
• Montaje
 Procesamiento
Histológico
• Toma de la muestra
– Identificación
• Especie
• Raza
• Número
• Etc.
 Procesamiento
Histológico
• Toma de la
muestra
– Tamaño
 Procesamiento
Histológico
• Toma de la
muestra
– Tamaño: 0,5 a
1 cm
FIJACIÓN

PRINCIPIO DE LA FIJACIÓN
CARACTERÍSTICAS DE UN BUEN
FIJADOR
FIJACIÓN
Formol al 10 %

Inmersión o perfusión
 Procesamiento
Histológico
• Toma de la
muestra
– Identificación
Repicar la muestra
 Procesamiento
Histológico
• TOMA DE LA MUESTRA (0,5-1 CM)
• FIJACIÓN: 40-60 VECES EL
VOLUMEN
•• LAVADO EN AGUA CORRIENTE
•
¿cómo cortar tan delgado?
¿ 5 micrómetros?
¡¡¡ parafina !!! ... Pero y el agua?
¡¡¡ No son miscibles!!!
•
 Procesamiento
Histológico
•

• DESHIDRATACIÓN EN ALCOHOLES
CRECIENTES (50º- 100º)
• ACLARAMIENTO EN XILOL
• INCLUSIÓN EN PARAFINA

• CONFECCIÓN DE LOS BLOQUES

 Inclusión en parafina
• Procesamiento
de la muestra
– Lavado
– Deshidratación
– Aclaramiento
(xilol)
– Inclusión en
parafina
 Inclusión
• Confección del
bloque
– Identificación
 Inclusión
• Confección del
bloque
 Corte al microtomo

• 5 micrómetros
– Deslizamiento
– Rotación
MICROTOMO DE
DESLIZAMIENTO
 Procesamiento
Histológico
Microtomos de deslizamiento
 Corte al microtomo
• 5 micrómetros
– Microtomos de rotación
 Procesamiento
Histológico

•
• Recolección de
los cortes
– Pescado
(baño
María)
•
 Procesamiento
• Histológico
• Recolección de los cortes
• Desparafinación
– Estufa
– Xilol
–
• ¿ y el agua ? ...
•

• Hidratación(alcoholes
decrecientes)
• Coloración
Criostat
o
 COLORACIÓN
HEMATOXILINA Y EOSINA
 COLORACIÓN
•
HEMATOXILINA Y EOSINA
• Coloración
– Desparafinación (xilol)
– Hidratación
– Coloración Hematoxilina
– Coloración Eosina
 HEMATOXILINA & EOSINA
RESUMEN:
•

• CORTE AL MICROTOMO
• RECOLECCIÓN (BAÑO DE MARÍA)
• DESPARAFINACIÓN (XILOL)
• HIDRATACIÓN ALCOHOLES DECRECIENTES
(100º A-AGUA)
• COLORACION HEMATOXILINA( núcleo-
ácidos)
•
 HEMATOXILINA & EOSINA
•
• LAVADO AGUA CORRIENTE
• COLORACIÓN EOSINA
• LAVADO CON AGUA
• DESHIDRATACIÓN
• ACLARAMIENTO
• MONTAJE
 Tipos de coloración
( acorde color producido )
 Tipos de coloración
( acorde color producido )

• Ortocromática

• METACROMÁTICA

• Impregnación
 Tipos de coloración
( acorde color producido )
• Retrógrada

• Progresiva

• VITAL (in vivo, in vitro)

• Histoquímica
•
 MÉTODOS
HISTOQUÍMICOS
Para carbohidratos: PAS, PAS-D
Lípidos.: SUDÁN, ACEITE ROJO
Ácidos nucléicos: FEULGEN
Pigmentos y minerales: VON KOSSA (Ca.)
EnzimaS : FOSFATASA (alcalina , ácida), ESTERASAS
 MÉTODOS
HISTOQUÍMICOS

COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LOS TEJIDOS

MÉTODOS INMUNOHISTOQUÍMICOS
ENZIMAS (P-AP), FLUORESCENCIA
 OTRAS COLORACIONES

• PARA TEJIDO CONJUNTIVO

• FIBRAS RETICULARES
• IMPREGNACIONES ARGÉNTICAS Y
ÁUREAS
• CELULAS CROMAFINES
• HONGOS
• BACTERIAS
Coloración H & E
COLORACIÓN H & E
HISTOQUÍMICA: Azul
Alciano
HISTOQUÍMICA: PAS
 COLORACIONES
ESPECIALES: TRICRÓMICAS
COLORACIÓN FIBRAS
ELÁSTICAS
FIBRAS ELÁSTICAS
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA
METACROMASIA: AZUL DE
TOLUIDINA
TRICRÓMICA
CME “DR. HUMBERTO
FERNÁNDEZ MORÁN”

PANTALLA FLUORESCENTE
 RESULTADO

Tra n sm isió n B a rrid o

GRACIAS POR SU ATENCIÓN