Strongyloides

Ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzimas (ELISA) para anticuerpos IgG Strongyloides es

comnmente disponibles y ha aumentado la practicidad - que permite la deteccin de las larvas,
ya sea en las heces o por medio de suero. Tiene una sensibilidad del 83% -93% y especificidad de
95% -97,7% en la determinacin de si se ha producido una infeccin en cualquier momento.
Estudios recientes sugieren que los mtodos de diagnstico a travs de uso de 31-kDa antgeno
recombinante (NIE), que no tiene interaccin con otros helmintos mejoraron. El uso de ensayos
basados en NIE junto con luciferasa Sistema inmunoprecipitacin (NIE-LIPS) se aproxima a 97% de
sensibilidad y especificidad del 100% para el diagnstico de S. stercoralis
Ancylostoma duodenale, Necator americanus y Strongyloides stercoralis. Si bien el diagnstico se
hace rutinariamente por visualizacin de huevos o larvas en heces, las larvas rabditiformes son
indistinguibles y para determinar la especie se recurre a tcnicas de cultivo (carbn vegetal,
Baermann, agar sangre) para identificacin de larvas filariformes. El cultivo ha sido considerado
como el mtodo ms sensible para el diagnstico de S. stercoralis, mientras que la toma de
muestra de aspirado duodenal puede poner de manifiesto la presencia de sus formas larvarias.
ltimamente, se han desarrollado algunas tcnicas de determinacin de anticuerpos sricos para
estos nematodos, como es el caso de S. stercoralis (IFI, ELISA), que podran ser de utilidad tanto
para el diagnstico como para estudios epidemiolgicos. As mismo, la PCR sobre muestras fecales
para identificacin de A. duodenale y N. americanus19 y la deteccin de IgG4 especfica
Deteccin de anticuerpos en suero sanguneo:
Empleando un inmunoensayo de anticuerpos IgG contra Strongyloides ( anti-Strongyloides IgG
enzyme immunoassay [EIA]) la sensibilidad alcanz el 91.2%y la especificidad el 93 %, con un valor
predictivo negativo de 99.9 % en regiones no endmicas . Asimismo, un metaanlisis analiz el
ELISA para Strongyloides y los resultados fueron de 25 referencias revisadas que esta prueba
serolgica tiene un valor predictivo positivo de 85 % y valor predictivo negativo de 98% .
Se han desarrollado otras pruebas de inmunodiagnstico que incluyen pruebas cutneas,
immunofluorescencia indirecta, ELISA, mtodos de aglutinacin, entre otros.
La sensibilidad y especificidad es muy variable para los distintos autores, lo que se explica
principalmente por la falta de una prueba de referencia estandarizada. Adems, el diagnstico
serolgico no distingue entre una infeccin pasada de otra actual, ya que los niveles de
anticuerpos permanecen detectables durante aos luego del tratamiento antihelmntico. Tambin
presentan reacciones cruzadas con otros helmintos como filarias, esquistosomas y algunos
nematodos intestinales muy prevalentes como Ascaris lumbricoides. Algunos emplean estas
pruebas como mtodos de tamizaje, de manera tal que si son positivas se desarrolla un estudio
exhaustivo para la bsqueda del parsito y, si son negativas, existira una certeza casi del 100 % de
que el paciente est realmente libre de la infeccin. Sin embargo, an est en evaluacin su
desarrollo por las implicancias que acarreara en el anlisis de costo-beneficio.

Deteccin de cidos nucleicos en heces:

La tcnica de PCR ha sido practicada en modelos animales con el fin de detectar fragmentos del
ADN del parsito en heces, con resultados favorables pero inconclusos en zonas endmicas de
bajos recursos econmicos.
La PCR ha sido tambin evaluada en humanos, utilizando como objetivo el gen del ARN ribosomal
del parsito, mediante tres secuencias de los genes: subunidad I de la citocromo C oxidasa,
secuencias repetidas de Strongyloides y subunidad 16s . La sensibilidad fue alta con especificidad
del 100 %. Sin embargo, tuvo tres falsos negativos y esto puede ser debido a que la cantidad de
heces necesaria para el PCR es 40 veces menor que para la microscopia. No obstante, slo una
muestra de heces fue evaluada en este estudio, por lo que al menos 7 % de los casos negativos
aun podran estar infectados. Tres muestras de heces aumentan la tasa de deteccin de estos
casos.
ELISA
La prueba ELISA permite la deteccin sensible de inmunoglobulina srica (Ig) G contra un extracto
soluble de larvas infectantes Strongyloides stercoralis.
La absorcin de IgG con reactividad cruzada es un medio eficaz de aumentar la especificidad de la
PRUEBA ELISA indirecta, para su uso en el inmunodiagnstico e inmuno-epidemiologa de S.
infeccin stercoralis.
La strongyloidiasis humana es una parasitosis que causa eosinofilia sangunea elevada y provoca
una respuesta inmune humoral. Por esto, se ha intentado efectuar el descarte de casos de
infeccin mediante reacciones inmunodiagnsticas. ELISA IgG es la tcnica mas utilizada en la
deteccin de anticuerpos sricos especficos . Mediante western-blot se han podido determinar
algunas fracciones proteicas larvales inmunodominantes sensibles y especficas para el
inmunodiagnstico. Los antgenos usados en ELISA han sido preparados a partir de extractos
solubles de larvas filariformes de S. ratti u otras espcies de Strongyloides que infectan mridos

El diagnstico indirecto de la estrongiloidiasis se fundamenta en la deteccin de anticuerpos

dirigidos hacia antgenos de las larvas filariformes. Se han desarrollado tcnicas de
inmunofluorescencia indirecta con larvas muertas35, pruebas con radioalergoabsorbentes36
especficos para la IgE y enzimoinmunoensayos (ELISA) dirigidos a IgG especficas frente a
antgenos de la larva filariforme; esta ltima es la tcnica que ha mostrado mayor sensibilidad y
especificidad. En las zonas endmicas, la principal limitacin del mtodo son las reacciones
cruzadas con otras helmintiasis, especialmente con microfilarias. Una de las soluciones planteadas
para evitar reacciones inespecficas consisti en una preincubacin del suero con un extracto de
Onchocerca gutturosa, antes de proceder a la realizacin del anlisis mediante ELISA, lo que
mejor considerablemente la especificidad. Con el mismo objetivo se han desarrollado
immunoblots en los que se utilizan 3 protenas antignicas de 41, 31 y 28 kDa, procedentes de la

larva infectante; con la de 41 kDa en concreto, se ha llegado a alcanzar una sensibilidad del 100% y
una especificidad del 94,2% en algunos estudios

Teniasis
El diagnstico inmunolgico se basa en la deteccin de antgenos del parsito o anticuerpos contra
el parsito en el hospedador. En cuanto al primer caso, se han desarrollado tcnicas de deteccin
de coproantgenos utilizando para su captura anticuerpos policlonales de conejos inmunizados con
extractos crudos del verme adulto. Esta tcnica presenta 100% de sensibilidad y 94% de
especificidad ya que permite detectar a los portadores de Taenia sp, pero no consigue distinguir
entre T. solium y T. saginata. Cuando la determinacin se realiza en tira reactiva (dipsticks), la
sensibilidad disminuye al 85%, aunque con esta variante se puede analizar un mayor nmero de
muestras y no se necesita de equipo costoso. Este ensayo ha sido empleado en trabajos
epidemiolgicos y demostr ser una tcnica muy sensible en la determinacin de la prevalencia de
teniasis, adems de su gran utilidad en la evaluacin de la eficacia de tratamiento en masa de
poblaciones de las reas endmicas. Otros grupos han desarrollado mtodos de deteccin de
coproantgenos similares donde los sueros policlonales de conejos estn dirigidos contra antgenos
de excrecin/secrecin o antgenos de superficie de T. saginata, pero presentan el mismo
inconveniente que la tcnica descrita por Allan, de no permitir un diagnstico especie-especfico.
Tambin existen variantes diagnsticas que utilizan anticuerpos monoclonales para la
identificacin de huevos de T. solium, que empleados con la tcnica de EITB (Enzyme-Linked
Immunoelectrotransfer Blot Assay o Western blot), rinden 100% de sensibilidad y especificidad.
Por otro lado se han desarrollado diversas tcnicas para la deteccin de anticuerpos en sueros de
individuos con teniasis, la mayora con pobre sensibilidad y especificidad. Sin embargo, en 1999, se
estandariz un ensayo de deteccin de anticuerpos mediante EITB, utilizando un antgeno de
excrecin/secrecin de T. solium, con el que lograron obtener 95% de sensibilidad y 100% de
especificidad en la identificacin de portadores del tnido. Dicho ensayo logr detectar teniasis en
Guatemala, Per e Indonesia. Ultimamente, se han identificado por proteomica 2 antgenos de el
adulto de T. solium, TSES33 y TSES38, que fueron reconocidos por sueros de teniasicos y no por
aquellos de pacientes con cisticercosis, demostrando que son estadio-especficos. A pesar de estos
avances hay que tener en cuenta que la deteccin de anticuerpos en teniasis tiene como
desventaja que despus del tratamiento los anticuerpos permanecen y podran rendir falsos
positivos.
Diagnstico molecular
Para el diagnstico diferencial de T. solium y T. saginata se han utilizado tcnicas de biologa
molecular, tales como sondas de ADN y PCR (Polymerase Chain Reaction o reaccin en cadena
de la polimerasa). En 1990, Harrison et al., clonaron 2 sondas de ADN, HDP1 y HDP2, en una
genoteca genmica de T. saginata, que permitieron la identificacin diferencial por hibridacin de
los dos grandes tnidos del hombre. Igualmente, en 1995, Chapman et al., clonaron de genotecas

genmicas de T. solium y T. saginata dos sondas, pTsol-9 y pTsag-16, especificas de T. solium y T.

saginata respectivamente y que logran distinguir los dos tnidos. La primera PCR en Taenia fue
desarrollada por Gottstein y lograba la identificacin de T. saginata. Posteriormente otros grupos
desarrollan PCRs que diferencian T. saginatade T. saginataasiatica . A partir de la secuencia de la
sonda HDP2, se ha diseado una multiplex PCR que posibilita un diagnstico diferencial de T.
solium y T. saginata. Esta PCR ha sido utilizada para la identificacin de aislados de los tnidos
procedentes de distintas zonas geogrficas. Paralelamente, realizaron la deteccin diferencial de
T. solium y T. saginata mediante una PCR-RFLP (PCR-, polimorfismo en la longitud de los
fragmentos de restriccin), basada en la amplificacin del gen 5.8S ribosomal adems de los
espaciadores intergnicos ITS1 e ITS2 y posterior digestin con enzimas de restriccin.
Recientemente se ha desarrollado una PCR-RFLP (Polimorfismo en el tamao de los fragmentos de
restriccin) que amplifica la secuencia 12S ribosomal del ADN mitocondrial, seguido por digestin
con la enzima DdeI, que permite diferenciar T. solium de T. saginata. Tambin se han realizado
estudios filogenticos utilizando distintas tcnicas, que adems de identificar los tnidos han
demostrado, en base a anlisis de los genes mitocondriales, que T. solium forma dos grupos
filogenticos o genotipos, uno constituido por los aislados americanos y africanos y otro por los
asiticos.
Utilizando la PCR basada en la amplificacin de la secuencia HDP2 en Brasil se logr la
diferenciacin de T. solium y T. saginata.
Posteriormente, se han desarrollado multiplex PCRs que permiten diferenciar T. saginata de T.
saginata asitica y T. saginata, T. saginata asitica y los 2 genotipos de T. solium.
Recientemente,han desarrollado una PCR-RFLP que amplifica la secuencia HDP2, seguido por
digestin con la enzima DraI, que permite diferenciar T. solium de T. saginata.
Todos estos trabajos demuestran que las tcnicas de biologa molecular, en especial la PCR son un
gran avance en el diagnstico especie-especfico de teniasis.

El examen morfolgico de las progltides revel que 11 de las 14 muestras eran T. saginata,
mientras que las otras tres no pudieron ser identificadas dado el mal estado de las progltides,
completamente maceradas o fragmentadas. Asimismo el diagnstico mediante multiplex-HDP2PCR, en el que se utiliz los ADNg extrados de las 14 muestras, puso de manifiesto que todas las
muestras correspondan a T. saginata.
En la figura 1 se observa la amplificacin de una seleccin de las muestras problema, entre las que
se incluyen las progltides en mal estado. En todos los casos se observaron dos bandas de
amplificacin de 600 y 170 pb, respectivamente, al igual que el control positivo de ADNg de T.
saginata y a diferencia de T. solium, que rindi un fragmento de 170 pb. Por consiguiente,
mediante multiplex-HDP2-PCR se confirm el resultado del examen morfolgico y se
diagnosticaron las progltides en mal estado que no haban sido susceptibles de identificacin
morfolgica.

En conclusin, este trabajo demuestra la utilidad de la tcnica multiplex-HDP2-PCR como un

mtodo de diagnstico habitual, rpido, sencillo, sensible y especfico, capaz de identificar
diferencialmente teniasis producidas por T. saginata y T. solium en pacientes que acuden a los
distintos centros sanitarios con el problema, siendo la tcnica imprescindible cuando las
progltides se encuentran deterioradas. Adems, el hecho de que en estudios preliminares se
haya aislado ADNg a partir de huevos de Taenia spp., eliminados en las heces de enfermos,
aumenta la relevancia del protocolo de PCR propuesto, ya que permitir el diagnstico especieespecfico de esta fase parasitaria, frecuentemente aislada en los estudios coprolgicos e
imposible de identificar su especie por los mtodos convencionales.

El diagnstico de la teniosis humana se realiza a travs de un mtodo de captura de antgenos en

heces usando un ensayo inmunoenzimtico (ELISA) tipo sndwich, el cual atrapa entre dos
anticuerpos policlonales a los antgenos que pudieran encontrarse en la muestra (figura 1),
detectando parasitosis activa, es decir, a los portadores del gusano adulto, comnmente llamado
"solitaria". Este mtodo ofrece mayor sensibilidad diagnstica (95%) comparada con los mtodos
coproparasitoscpicos (50% a 60%), adems de que tiene la ventaja de que en una placa se
pueden examinar hasta 40 muestras clnicas (figura 2).

Nector
Mtodos de ADN, en particular, la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) a base de mtodos
utilizando ADN diana apropiada regiones han demostrado ser alternativas tiles.
Por ejemplo, el primer y segundo espaciador interno transcrito (ITS-1 y ITS-2, respectivamente) de
ADN ribosmico (ADNr) proporcionan marcadores genticos para la identificacin especfica de
una gama de nematodos parsitos, incluyendo A. duodenale y N. americanus.
Basndose en los resultados de la validacin, el ADN fecal muestras (n = 378) fueron sometidas a
PCR para el diferencial diagnstico de A. duodenale y N. americanus usando El enfoque descrito en
este documento y el descrito previamente para N. americanus (ver Verweij et al. 2001) (Tabla 2).
Las ITS-2 parciales amplicn (aproximadamente Se ha detectado 130 pb) especfica para A.
duodenale para 74 muestras (19,6%), de los cuales 64 (16,9%) tambin mostraron el N.
americanus producto especfico (aproximadamente 250 bp).
En conclusin, el ensayo de PCR en tiempo real actual junto con el anlisis de HRM puede servir
como una herramienta de epidemiologa molecular alternativo para la deteccin rpida de
grandes nmeros de muestras. Las ventajas sobre otros mtodos utilizados para la diferenciacin
de especies y la discriminacin incluyen su rapidness, la simplicidad como no se requiere
electroforesis para verificar el producto de forma sostenible la reduccin de tiempo de
procesamiento, as como su alta especificidad y sensibilidad. Adems, el anlisis HRM no requiere
un instrumento especial, ya que se puede realizar utilizando un sistema existente PCR en tiempo

real. Del mismo modo, los perfiles de fusin se registran automticamente, almacenan
electrnicamente en un formato de hoja de clculo y se pueden recuperar en cualquier punto en
el tiempo para los anlisis comparativos. Debido a su simplicidad, el anlisis de HRM ofrece una
alternativa todava precisa rentable para otros ensayos de genotipificacin basados en sondas
tales como SSCP, RFLP y secuenciacin de ADN. Este enfoque podra ser aplicable a una amplia
gama de microorganismos de importancia mdica, especialmente especies diagnosticadas en un
laboratorio clnico estrechamente relacionadas.