CERTAMEN DE BIOLOGIA

Modificado del semestre pasado. atte

Team Jugo
MICROPIPETA
MIDEN EN EL ORDEN DE LOS MICROLITROS 10 EXP -6
Usamos de dos tipos una con un mximo de
20 microlitros y otra de 200 microlitros.
Se utilizo en los siguientes laboratorios:
Mtodos de estudio de biologa molecular (con
el propsito de aprender su uso),
Transformacin gentica, para transferir los
componentes para realizar la transformacin
bacteriana de la E-coli, Purificacin de
protenas recombinantes para obtener pura la
protena GFP, Huellas dactilares aqu se utiliz
para agregar los buffer a los tubos juntos con
los sobrenadantes y en el ultimo no se utilizo
porque cikuto no lo hizo, pero dems se
acuerdan de la vez anterior.

Puntas de plstico (tips)

Esta punta plstica la ocupamos
para el extremo inferior de la
punta de la pipeta, los modelos
inferiores a 200 microlitros
ocupan puntas amarillas, o sea la
que siempre ocupamos, las
cuales se utilizaron en todos los
laboratorios. recuerden que
siempre la micropipeta se utiliza
con tips en su extremo inferior
para evitar descalibrarla.
COLUMNAS DE
CROMATOGRAFIA

En este tubo llamado columna de
cromatografa en cuyo interior se
encuentra la resina la cual es una
matriz de protenas que sirve para
filtrar estas ultimas de acuerdo a los
distintos tipos de cromatografas. (se
utilizo en el laboratorio de protenas
recombinantes y en el de huellas
dactilares de protenas musculares)
Asa de Vidrio: (las que se ven son
plsticas que fueron las del semestre
pasado), las ocupamos para el
laboratorio de transformacin
gentica para distribuir las bacterias
sobre el gel en la superficie de agar
para que quedaran esparcidas y no se
amontonaran sobre una parte de este.
Gua para la micropipeta

Gua para la micro pipeta se
coloca en la columna de
electroforesis para guiar el
tips a la cubeta. Se utilizo en
el laboratorio de huellas
dactilares de protenas
musculares y en el
laboratorio de purificacin
de protenas recombinantes
MAQUINA TERMOCICLADOR

Esta maquina se ocupa para
la reaccin de la PCR
(reaccin de la polimersa en
cadena) la que hace
cambios de Temperaturas
(96 se abren las hebras de
ADN complementarias, 64
el partidor se une a las
bases y en 72 el partidor
Taq polimerasa empieza a
copiar para formar nuevas
hebras) en lapsos cortos de
tiempo. Se utilizo en el
laboratorio de Polimorfismo
para duplicar ADN.

ESTUFA DE CULTIVO

Aparato que sirve para
incubar y calentar muestras
bacterianas. Se utilizo para
el laboratorio de
transformacin gentica.
En esta maquina pusimos
nuestras colonias
bacterianas que se
encontraban en las capsulas
Petri, estas a su vez estaban
envueltas con cintas
adhesivas mirando boca
abajo. La estufa tenia una T
de 37.

TRANSLUMINADOR
Esta maquina emite luz
ultravioleta. Se utilizo en el
laboratorio de transformacin
gentica para ver las capsulas
Petri con el cultivo de bacterias
en su interior (GFP). Tambin
en el laboratorio de purificacin
de protenas recombinantes
(para ver el precipitado blanco
despus de la centrifugacin,
tambin se observaron despus
de la centrifugacin con buffer
de equilibrio y luego las
columnas de cromatografa con
cada buffer y al final observar el
tubo ependorff con la protena
pura.
BAO TERMOREGULADOR.(Bao
Mara)
Aparato que calienta a bao
Maria regulando la T. Se
utilizo en el laboratorio de
transformacin gentica
para darles golpes de T a
los tubos ADN+ y ADN-, para
que ingresara el plasmido
pGLO a las bacterias a
transformar, la T fue de 42
C por 50 segundos.
En el laboratorio de
polimorfismos se utilizo para
incubar tubos eppendorf
con sustancias a 56 C por
10 minutos.
CAPSULA PETRI
En el laboratorio de mtodos de
estudio se utilizo para preparar
un medio de cultivo slido, el cual
contena 1 gramo de triptona, 0,5
gramos de levadura y 0,5 gramos
de NaCl, este se mezclo en un
matraz y posteriormente se puso
en la capsula Petri.
En el laboratorio de
transformacin gentica se
utilizaron 4 capsulas petri para
realizar los cultivos de bacteria,
los cuales contenan:
1. ADN+/AMP/LB
2. ADN+/AMP/LB/Ara
3. ADN- /AMP/LB
4. ADN-/LB
(ADN+ significa que contiene el
gen para la GFP, y ADN- significa
que no lo tiene
CAMARA DE ELECTROFORESIS
VERTICAL.
- Se utilizo en el laboratorio.
De huellas dactilares de
protenas musculares, lo
utilizamos para correr el
gel por 30 min. A 200
volt. Contiene el gel y el
buffer para que las
molculas cargadas
elctricamente migren en
el gel.
CAPSULA DE ELECTROFORECIS
HORIZONTAL

Esta cmara funciona del
ctodo (negro) al nodo (rojo),
funciona con una diferencia de
potencial de 100V. Se utilizo
en el laboratorio de mtodos
de estudio, para colocar el gel
(agarosa) que preparamos,
para luego realizar una corrida
de electroforesis, esto con el
fin de que las molculas de
ADN elctricamente cargadas
emigraran en el campo
elctrico. Se utilizo tambin en
el laboratorio de polimorfismo
para poner el ADN contenidos
en nuestra salida y correrlos
por 30 min.
Peinetas
- Las utilizamos en el
laboratorio de mtodos
de estudio, luego de la
preparacin del gel de
electroforesis se insertan
estas peinetas cuando
aun esta en estado
liquido y luego se retira
cuando este se seca,
dejando pocillos en los
cuales se depositan las
muestras.
GRADILLA DE ESPUMA
Se utilizo en todos los laboratorios,
para portar los tubos eppendorf y
los tubos de tapa rosca.
Se utilizo en el laboratorio de
transformacin gentica, los tubos
se incuban puestos en la gradilla de
espuma en el vaso precipitado que
contena agua a 94
CLORURO DE AMONIO SLIDO
Este qumico permite
bajar el punto de
congelamiento del
hielo. El hielo permite
inhibir la accin
enzimtica.
ULTIMO LABORATORIO
No se ve para nada bien
pero es un estndar de
protenas conocidas que
nos sirve para comparar
nuestro gel.
En el n1:
kaleidoscopio
(estndar pretincin):
Es una combinacin
de protenas, tejidos
musculares varios
para poder identificar
las otras protenas
N2: tiburn
N3: Salmn
N4: Trucha
N6: Esturione
Bueno ah est el gel
puesto entre dos
laminas de papel se
podra decir para que
no se seque ni se
destruya.
Micro centrfuga
Eppendorf centrifuga 5415 D.
En el laboratorio de purificacin de
protenas recombinantes la utilizamos
para separar los restos celulares y
protenas a 10000 rpm. x 5 min. En el
precipitado que resulta se encuentra la
GFP, en este mismo laboratorio tambin
se utiliz luego de agregar la lizosima
para obtener un nuevo precipitado.
En el laboratorio de huellas dactilares de
protenas musculares se centrifuga el
trozo de pescado ms el buffer de carga
a 13200rpm. X 5 min.
MECHERO
Se utiliz en el laboratorio de
mtodos de estudio para calentar
el matraz hasta la disolucin de
los compuestos.
En el laboratorio de huellas
dactilares de protenas
musculares se calienta las
muestras, el marcador de peso
molecular y el estndar de actina y
miosina por 5 minutos a 95 para
denaturar las protenas.
Lo usamos en general para
esterilizar materiales
Shaker
Se utiliza para
mantener en
constante
movimiento las
soluciones
CENTRIFUGA BASCULANTE

MICROONDAS

Aparato elctrico que se utiliza
para calentar ciertos elementos.
En el laboratorio de mtodos de
estudio se utiliz para la
preparacin del gel de
electroforesis. En el microondas
se introdujo el matraz que
contena 1 gr. de agarosa y 100
ml. de buffer TBE, ste se calent
en cortos intervalos para que el
lquido no ebulla.
En el laboratorio de polimorfismo
se utiliz para hacer gel.
CUNAS PARA PREPARAR EL
GEL
Moldes para dar forma a los
geles, existen horizontales y
verticales.
En el laboratorio de
mtodos de estudio se
utiliz para dar forma
necesaria al gel de agarosa.
Vertimos el gel en el
soporte, evitando la
formacin de burbujas,
luego le insertamos el peine
que se deja nivelado hasta
que gelifique
FENOL CLOROFORMO ALCHOL
sta solucin se utiliz
como un tipo de tcnica
esterilizante, las cuales
minimizan la posibilidad de
contaminacin, limpiando
con alcohol o fenol las
manos del manipulador, las
superficies y aparatos a
utilizar y filtrando el aire de
las salas.
BUFFER
Buffer: permite la separacin mediante su Ph
1. Buffer de equilibrio: permite que se separen las
protenas mediante igualacin de Ph. ( se
carga la columna para que pasen las protenas
preparndola para que algunas protenas se
unan a la columna). 2M (NH
4
)
2
SO
4

2. Buffer de enlace: de alta concentracin salina,
para que se peguen los aa. hidrofbicos a la
resina. 4M
3. Buffer de lavado: limpia la resina de las
columnas cromatogrficas eliminando los aa
que son ms o menos hidrofbicos. 1.3 M
4. Buffer de carga: ( laemmli) anula las cargas de
las protenas intrnsecas, entonces el nico
factor de corrida que afecta en la electroforesis
es el peso.
5. Buffer de elucin: corta interacciones de las
protenas con la columna. 10 mM ( tris/edta)
SDS
Detergente fuertemente aninico,
recubre las protenas y las
mantiene denaturadas en lnea
recta( anula las cargas de las
protenas intrnsecas) entonces es
el nico valor que afecta el peso.
Se utiliz en el laboratorio de
protenas recombinantes, se utiliz
para cargar las protenas
negativamente, ste est
contenido en el buffer de carga
AGAROSA

Polisacrido de galactosa y
derivados de galactosa que
se entrecruzan por puentes de
hidrogeno, el tamao de los
poros disminuye aumentando
la agarosa.
Lo utilizamos para realizar
todos los geles de
electroforesis, por lo tanto se
utiliz en : mtodos de
estudio, purificacin de
protenas recombinantes,
huellas dactilares,
polimorfismo.
Asa de plstico
En el laboratorio de transformacin
gentica se usa para sacar la colonia de
bacterias de una placa y se pone en el
tubo eppendorf marcado +ADN en el cual
se gira el asa para desprender las
bacterias, se hace lo mismo en el tubo -
ADN. Se usa tambin para sacar el
plsmido pGLO quedando una fina
pelcula lquida en ella.


Ampicilina
Anestsico que es insertado en el medio
para evitar la aparicin de bacterias no
deseadas.
Se utiliza para ponerle a las placas #1, #2
y #3, tanto para ver si el plsmido pGLO
haba entrado a la bacteria como para
matar todo lo que no serva, ya sean
bacterias sin pGLO como agentes
extraos.
Solucin de transformacin
Solucin que contiene Ca
++
para
permeabilizar la membrana para que entre
el plsmido.
En el laboratorio de transformacin
gentica se utiliza para ponerle a los tubos
marcados como +ADN y ADN para luego
poder agregarles las bacterias y el pGLO.
Todo esto con el fin que la transformacin
ocurra
LB ( medio Luria Bertani)
Medio lquido que contiene levadura y
peptona, se transforma en slido con
agarosa 15%.
En el laboratorio de transformacin
gentica se usa cuando se le agrega a los
tubos +ADN y ADN 250
ul
esto con el fin
de proporcionarle a la bacteria los
alimentos o el medio adecuado para vivir.
Arabinosa
Carbohidrato que permite la expresin del
GFP.
En el laboratorio de transformacin
gentica se utiliza en la placa #2 para
poder activar el GFP, con el fin de que la
fluorescencia se haga presente.
pGLO
Plsmido comercial de ADN circular y
contiene genes como Bla, GFP y AraC
Es el plsmido que contiene la GFP, en el
laboratorio de transformacin gentica es
incluido mediante asas plsticas al tubo
+ADN y ADN, para que se introduzca al
interior de la bacteria.
Lisozima
Enzima que rompe las membranas de las
bacterias, se encuentra en lgrimas y
acta como agente bactericida.
En el laboratorio de purificacin de
protenas recombinantes se le agrega al
tubo + luego de retirar los 20
ul
para el tubo
A, todo esto con el fin que clula se rompa
y libere la GFP contenida en su interior.
Azul de bromofenol
Colorante de menor peso molecular que el
ADN a fraccionar y sirve para seguir
visualmente la corrida.
Se encuentra contenido en el buffer de
carga, se utiliz para ver con la migracin
del ADN en la corrida, para distinguir las
distintas bandas.
Biosafe Comassie
Se utiliza para teir el gel de Laemmli,
para ver las bandas de corridas en
electroforesis, en el laboratorio de
purificacin de protenas recombinantes.
En el laboratorio de Huellas dactilares de
protenas musculares, el gel se introdujo
en un recipiente con colorante bio safe
comassie y se agita de 1 a 8 horas
Matraz Erlenmeyer
En el laboratorio de mtodos de estudio
se utiliza para preparar el gel de agarosa y
para preparar placas de cultivo.
En el laboratorio de polimorfismo se utiliza
tambin para la preparacin de gel de
agarosa, para la posterior electroforesis
Fuente de Poder
Especie de batera que proporciona a la
electroforesis la energa necesaria para correr la
muestra,
Se utiliz para cargar elctricamente la
electroforesis en la cubeta horizontal.
Proporciona la energa para que el ADN migre a
100 volts. De a +.
En el laboratorio de huellas dactilares de
protenas musculares se utiliza un potencial de
200 volts, corriendo desde ctodo a nodo