MTODO DE GROCOTT

Tcnica PLATA METENAMINA, con cido perydico

PLATA METENAMINA
COLORACIN
Atraccin qumica entre el colorante
y ncleo, citoplasma o sustancias
intercelulares, ya modificadas por el
proceso de fijacin
IMPREGNACIN
ARGNTICA
Proceso de diferenciacin de las estructuras
celulares por reduccin del reactivo:
Sales de plata
Observaciones generales en
uso de sales de plata
nitrato de plata

Material de trabajo*
Continentes
Accin de la luz
Temperatura
Concentraciones
Duracin


Impregnacin toda coloracin que utiliza sales
metlicas para originar precipitados metlicos
sobre estructuras a teir.
Nos referimos a impregnacin argntica cuando
utilizamos sales de plata.
Se basa en la reduccin una sal de plata

nitrato de plata hasta la reduccin a plata
metlica.
(AgNO3)
2 tipos mecanismos histoqumicos
mecanismos fsicos y fsico-qumicos
Los mecanismos fsicos y fsico-qumicos son ms
usuales.
La coloracin se debe a: mecanismo
electroesttico, obtenindose precipitados por
accin del tejido y a sustancias reductoras
utilizadas.
Ocurren en fases sucesivas:
1. El nitrato de plata se trata con una base como el
Hidrxido de amonaco (NH4OH):

2Ag+ + 2OH- Ag2O + H2O

Se obtiene Oxido de Plata que precipita color
pardo.
2. Adicin de amonaco a la solucin.
Tejidos o estructuras a identificar

tejido nervioso
Melanina
Fibras reticulares
clulas argentafines
Espiroquetas
Hongos

Clulas a identificar por
mtodos argnticos
clulas argirfilas

Clulas argentafines
argentafinidad

capacidad de unirse a la plata con reduccin al agregar otra sustancia


argirofilia

la melanina sin necesidad de otra sustancia reduce la plata
la plata experimente reduccin hace que los grnulos de melanina se vean de color negro.
Para hacer el diagnstico diferencial con otras sustancias capaces de reducir o captar la plata:
propiedad de blanqueo de la melanina con los oxidantes
Tejidos o estructuras a identificar


Tejido nervioso

Melanina

clulas argentafines

Espiroquetas

Hongos

Fibras reticulares
Fontana Masson


Grimelius
Warthin - Starry
Grocott
Gomori
Tincin argntica
reticulina
Ganglio linftico

Soluciones usadas

Nitrato de plata
Revelado en sol. Hidroquinona
Reducida por el tejido
Reducida por un agente : formalina

xido de plata o plata amoniacal
Complejo plata - metenamina
plata amoniacal
Solucin de plata
Plata amoniacal
Dejar reposar
24 horas
Mtodo de Bielchowsky
Preparacin del xido
de plata
A la solucin de nitrato de plata se le agrega
gota a gota
Hidrxido de amonio, se forma un precipitado
oscuro
que se disuelve agregando mas hidrxido de
amonio
hasta casi disolverlo, cuidando no agregar
hidrxido de amonio en exceso.
se guarda por 24 horas

mtodo de plata amoniacal

utilizan la solucin de Bielchowsky :

precipitando 20cc de nitrato de plata al 5%
con 5 gotas de hidrxido de sodio al 40%
Luego se redisuelve el precipitado resultante
aadiendo gota a gota amonaco
y se completa con agua destilada a 40cc.
mtodo de plata amoniacal en general




Oxidacin en cido cido perydico

exposicin a la solucin de plata

reduccin con solucin de oro

remocin de la plata que no ha reaccionado: hiposulfito de sodio

coloracin de contraste:
- hematoxilina de Harris o Mayer
- Rojo neutro
- safranina etc.
Cloruro de oro:
AuCl
3
La plata metlica proceso de reduccin puede ser marrn o negra:
tamao de las partculas.
Cantidad de plata

al tratarlos con cloruro de oro :
convirtindolos en depsitos de oro metlico que son prpura negros,

El oro metlico es mucho ms estable que la plata metlica,
y los cortes muestran un mejor contraste y claridad

Cloruro de oro
Se utiliza para aumentar el contraste de
la impregnacin argntica.
Le sigue un paso por hiposulfito de sodio
para eliminar restos de plata reducida en
sitios que puedan tener grupos argirfilos
que opaquen la tincin

Para eliminar residuos de plata

Tioulfato de sodio al 2%
solucin de tiosulfato de sodio :



forma complejos solubles con la plata inica
que no ha reaccionado con el tejido

la plata no reactiva previene una tarda reduccin no especfica
de la plata con la luz

remueve el exceso de cloruro de oro que pueda estar
presente en el tejido.
LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLGICAS
UNIVERSIDAD DE VALPARASO
LABORATORIO DE CIENCIAS MORFOLGICAS
UNIVERSIDAD DE VALPARASO
Lavado simple
Lavado qumico
Mezcla sulfocrmica



Dicromato de Potasio.... 100 grs
Agua destilada 1000 cc.
cido sulfrico concentrado. 600 ml.




Disolver el dicromato en agua caliente, dejar enfriar
agregar poco a poco,
agitando siempre el cido sulfrico concentrado.

Cuidados especiales para trabajo
Trabajar siempre con materiales
limpios
Trabajar siempre con guantes
Mantener la mezcla en lugar fresco y
oscuro
Duracin aproximada 3 meses
Nunca usar materiales metlicos, como pinzas