Virologia Veterinária

VIROLOGIA
VETERINRIA
Eduardo Furtado Flores
(ORG.)
VIROLOGIA
VETERINRIA
Santa Maria, 2007
Clovis Silva Lima
Felipe Martins Mller
Honrio Rosa Nascimento
Ademar Michels
Daniela Lopes dos Santos
Eliane Maria Foleto
Maristela Brger Rodrigues
Honrio Rosa Nascimento
Jorge Luiz da Cunha
Marcos Martins Neto
Ronai Pires da Rocha
Silvia Carneiro Lobato Paraense
Maristela Brger Rodrigues
Luzia de Lima Santanna
Marcio Oliveira Soriano sobre fotograa
de microscopia eletrnica de clulas de cultivo
infectadas com herpesvrus bovino.
Carolina Isabel Gehlen
Lase Miolo Morais, Marcio Oliveira Soriano,
Reitor
Vice-reitor
Diretor da Editora
Conselho Editorial
Reviso lingstica
Normalizao referncias bibliogrcas
Capa
Projeto grco e diagramao
Ilustraes
Direitos reservados :
Editora da Universidade Federal de Santa Maria
Prdio da Reitoria - Campus Universitrio
Camobi - 97119-900 - Santa Maria - RS
Fone/Fax: (55) 3220.8610
e-mail: editora@ctlab.ufsm.br
www.ufsm.br/editora
Ficha catalogrca elaborada por Maristela Eckhardt CRB-10/737
Biclioteca Central da UFSM
V819 Virologia veterinria / Eduardo Furtado Flores
(organizador). Santa Maria : Ed. da UFSM,
2007.
888 p. ; 30 cm.
1. Medicina veterinria 2. Virologia I. Flores,
Eduardo Furtado
CDU 619:578
Alice Aleri, MV, MSc. Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva
Universidade Estadual de Londrina (UEL)
Londrina, PR, Brasil. 86051-970.
aleri@uel.br
Amauri A. Aleri, MV, MSc.Doutor
Londrina, PR, Brasil. 86051-970.
aleri@uel.br
Ana Cludia Franco, MV, MSc.,PhD
Departamento de Microbiologia
Instituto de Cincias Bsicas da Sade
Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)
Porto Alegre, RS, Brasil. 90050-170
anafranco@ufrgs.br
Ana Paula Ravazzolo, MV, D.Sc.
Faculdade de Veterinria
ana.ravazzolo@ufrgs.br
Clarice Weis Arns, MV, DSc.
Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biologia
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Campinas, SP, Brasil. 13081-970
arns@unicamp.br
Clarissa Silveira Luiz Vaz, MV, MSc., Embrapa Sunos
e Aves (CNPSA)
Concrdia, SC, Brasil. 89.700-000,
clarissa.vaz@ufrgs. br
Cludio Wageck Canal, MV, MSc. Doutor
Departamento de Patologia Clnica Veterinria
claudio.canal@ufrgs. br
Diego Gustavo Diel, MV, MSc.
Laboratrio de Virologia
Universidade Federal de Santa Maria
Santa Maria, RS, Brasil. 97105-900
diegodiel@pop.com.br
Elisabete Takiuchi, MV., MSc. Doutor
Londrina, PR, Brasil. 86051-970
elisabete.takiuchi.@gmail.br
Elizabeth Rieder, PhD.
Plum Island Animal Disease Center ARS, USDA
PO Box 848 Greenport
NY 11944 USA
elizrieder@yahoo.com
Fernanda Silveira Flores Vogel, MV, MSc. Doutor
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM)
fervogel@smail.ufsm.br
Fernando A. Osorio, MV, MSc. PhD
Department of Veterinary and Biomedical Sciences
University of Nebraska/Lincoln
Lincoln, Nebraska, USA. 68583-0905
fosorio@unlnotes.unl.edu
COLABORADORES
Fernando Rosado Spilki, MV, MSc., Doutor
Departamento de Microbiologia e Imunologia
Instituto de Biologia
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Campinas, SP, Brasil. 13083-970
fernandospilki@yahoo.com.br
Gael Kurath, PhD
Microbiologist Western Fisheries Research Center
6505 NE 65th St.
Seattle, Washington, 98115. USA
gael_kurath@usgs.gov
Gustavo Delhon, MV, MSc.PhD
Department of Pathobiology
College of Veterinary Medicine
University of Illinois at Urbana-Champaign
Urbana, Illinois, USA.
gadelhon@uiuc.edu
Helena Beatriz de Carvalho R. Batista, MV, MSc.
hruthner@yahoo.com.br
Hernando Duque Jaramillo, MV, MSc. PhD
Plum Island Animal Disease Center
USDA-APHIS-VS-NVSL-FADDL
Greenport, New York USA.
11944-0848
Janice Reis Ciacci-Zanella, MV, MSc.PhD
Embrapa Sunos e Aves (CNPSA)
Concrdia, SC, Brasil. 89.700-000,
janice@cnpsa.embrapa.br
John D. Neill, DVM, PhD
National Animal Disease Center, USDA, ARS
2300 Dayton Avenue. P.O. Box 70
Ames, Iowa.USA. 50010
jneill@nadc.ars.usda.gov
Julia Ridpath. PhD
National Animal Disease Center ARS - USDA
2300 Dayton Avenue. P.O. Box 70
Ames, IA, USA. 50010
jridpath@nadc.ars.usda.gov
Letcia Frizzo da Silva, MV, MSc.
Laboratrio de Virologia
diegodiel@pop.com.br
Luciane Teresinha Lovato, MV, MSc., PhD
Departamento de Microbiologia e Parasitologia
llovato@smail.ufsm.br
Luiz Carlos Kreutz, MV, MSc., PhD
Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria
Universidade de Passo Fundo (UPF)
Passo Fundo, RS, Brasil. 99001-970
lckreutz@upf.tche.br
Luis L. Rodriguez, MV. PhD
Foreign Animal Disease Research Unit
PO Box 848 Greenport NY 11944. USA.
lrodriguez@piadc.ars.usda.gov
Marcelo de Lima, MV, MSc.
Department of Veterinary and Biomedical Sciences
University of Nebraska/Lincoln
Lincoln, Nebraska, USA. 68683-0905
mdelima2@unlnotes.unl.edu
Maria Elisa Piccone, PhD
PO Box 848 Greenport, NY. 11944. USA
maria.piccone@ars.usda.gov
Mariana S e Silva, MV, MSc.
Setor de Virologia
msaesilva@yahoo.com.br
Mrio Celso Speroto Brum, MV, MSc.
Setor de Virologia
mcsbrum@yahoo.com.br
Mauro Pires Moraes, MV, MSc., Doutor
Departamento de Veterinria
Universidade Federal de Viosa
Viosa, MG, Brasil. 36570-000
mpmoraes@ars.usda.gov
Paulo Michel Roehe, MV, MSc.PhD
Instituto de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamor
FEPAGRO Sade Animal
Eldorado do Sul, RS, Brasil. 92 990-000 &
Instituto de Cincias Bsicas da Sade
Departamento de Microbiologia
Porto Alegre, RS, Brasil 90 050 -170
proehe@gmail.com

Paulo Renato dos Santos Costa, MV, MSc., Doutor
Departamento de Veterinria
Universidade Federal de Viosa
Viosa, MG, Brasil. 36570-000
prenato@ufv. br

Renata Dezengrini, MV, MSc.
Setor de Virologia
renatadezengrini@yahoo.com.br
Renata Servan de Almeida, MV, MSc.Doutor
CIRAD - Dpartement Systmes Biologiques
UPR 15 Controle ds Maladies Animales
Exotiques et Emergentes
34398 Montpellier cedex 5 France
renservan@yahoo.com.br
Rudi Weiblen, MV, MSc., PhD
rudi@ccr.ufsm.br
Sheila Wosiacki, MV., MSc. Doutor
Centro de Cincias Agrrias,
Universidade Estadual de Maring (UEM)
Campus Umuarama
Maring, PR, Brasil. 87020-900
wosiacki@yahoo.com.br
Ubirajara M. da Costa, MV, MSc.Doutor
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva e Tecnologia
Centro de Cincias Agroveterinrias
Universidade Estadual de Santa Catarina (UDESC)
Lages, SC, Brasil. 88520-000
biravetvirus@yahoo.com.br
Zlia Ins Portela Lobato. MV, PhD.
Escola de Veterinria Departamento de Medicina
Veterinria Preventiva
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
Belo Horizonte, MG, Brasil. 34992-101
ziplobat@vet.ufmg.br
A presente obra foi concebida para preencher uma lacuna existente na bibliograa dedicada
Virologia Veterinria na lngua portuguesa. O crescimento notvel do ensino e pesquisa em Virologia
Animal no Brasil, nas ltimas dcadas, infelizmente no foi acompanhado por um aumento equiva-
lente na literatura disponvel. Neste perodo, o acmulo fantstico de conhecimentos acerca da gen-
tica e biologia dos agentes virais, proporcionado pelo desenvolvimento e popularizao das tcnicas
moleculares, tem tornado algumas obras clssicas gradativamente desatualizadas e obsoletas. Exis-
tem bons livros de Virologia Animal e excelentes tratados de Virologia Geral e Molecular na lngua
inglesa. No entanto, esses textos so temporariamente inacessveis a uma parcela considervel dos
estudantes de graduao que se interessam e ingressam no mundo fascinante da Virologia. Esta obra,
pois, tem por objetivo fornecer aos iniciantes em Virologia, que, porventura, sejam tambm iniciantes
na lngua inglesa, um contedo atualizado e abrangente da Virologia Animal, com nfase aos animais
de interesse veterinrio.
O presente texto direcionado aos iniciantes em Virologia, sejam eles estudantes de graduao,
ps-graduao ou mdicos veterinrios; e tem como objetivo fornecer informaes bsicas sobre a
estrutura, biologia, patogenia, diagnstico e controle dos principais vrus de interesse veterinrio. Os
principais aspectos da biologia molecular e replicao viral so abordados de maneira simples e de
fcil compreenso, para embasar o entendimento da patogenia, resposta imunolgica e diagnstico
dessas infeces. A omisso de informaes mais detalhadas sobre a biologia molecular dos vrus foi
intencional. Tal detalhamento est um pouco alm da informao usualmente buscada por iniciantes
em livros-texto. Por outro lado, os estudantes em nveis mais avanados podem recorrer a excelentes
livros existentes na lngua inglesa.
Um grande desao enfrentado durante a elaborao deste texto foi acompanhar a dinmica das
descobertas e constataes na rea da Virologia Molecular. A dinmica do conhecimento gerado nesta
rea exigir atividades de reviso e atualizao constantes do contedo, sob a pena de deix-lo obsole-
to em poucos anos. Os avanos nas reas de vacinologia e teraputica antiviral tambm se intensica-
ram neste perodo, permitindo aos autores relatar as mais recentes conquistas cientco-tecnolgicas
nessas reas.
A dinmica das interaes dos vrus com os seus hospedeiros no ambiente natural tambm re-
presenta um desao para a elaborao de textos descritivos. No perodo de elaborao desta obra
aproximadamente trs anos surgiram novos vrus e novas doenas; e vrus j conhecidos cruzaram
a barreira de espcies e infectaram hospedeiros inusitados. Ou seja, a evoluo natural das infeces
vricas no ambiente natural to dinmica que exige uma reviso contnua de conceitos.
Este livro encontra-se dividido em duas partes. A parte inicial aborda os aspectos gerais da Viro-
logia Animal, discorrendo sobre a estrutura, classicao e nomenclatura, gentica e evoluo, mto-
dos de deteco e identicao de vrus, aspectos gerais da replicao viral, replicao de vrus DNA
e RNA, patogenia das infeces, epidemiologia, imunidade a vrus, diagnstico laboratorial e vacinas.
Embora o enfoque desta parte seja direcionado para a Virologia Animal, os conceitos e aspectos nela
tratados so tambm aplicveis a vrus que infectam humanos. Assim, este texto pode til tambm
para os demais estudantes das reas biomdicas.
INTRODUO
A segunda parte trata individualmente das famlias virais de importncia em medicina veterin-
ria. Os captulos foram elaborados seguindo algumas orientaes com relao organizao e conte-
do. Dessa forma, cada captulo especco dividido em duas partes: a seo inicial aborda os aspectos
gerais da respectiva famlia, a estrutura dos vrions, a estrutura e organizao genmica, expresso
gnica, replicao do genoma e o ciclo replicativo. Um dos maiores desaos enfrentados na elabo-
rao deste texto foi obter um equilbrio entre o nvel de aprofundamento nos aspectos biolgicos e
moleculares com a nfase necessria nos aspectos epidemiolgicos, clnico-patolgicos e diagnsticos.
Os aspectos moleculares da biologia dos vrus foram abordados de maneira simplicada para facilitar
o entendimento por iniciantes da rea. Um maior detalhamento nos aspectos biolgicos e moleculares
da estrutura e replicao dos vrus pode ser encontrado nos livros especializados.
A segunda parte de cada captulo especco dedicada s doenas de importncia veterin-
ria causadas por membros das respectivas famlias. Esta seo discorre acerca das caractersticas do
agente, epidemiologia, patogenia, sinais clnicos e patologia, diagnstico, controle e prolaxia das
doenas por ele causadas. Algumas famlias possuem vrios vrus associados com doenas animais
de importncia sanitria e econmica; enquanto outras possuem poucos patgenos animais. Por isso,
a disparidade de contedo e extenso dos diferentes captulos. O ltimo captulo apresenta algumas
famlias virais que possuem importncia limitada em medicina veterinria. Algumas dessas famlias
abrigam patgenos exclusivamente humanos; outras abrigam vrus que infectam somente animais
sem interesse econmico ou afetivo; enquanto outras congregam vrus cujo interesse maior reside nos
seus aspectos biolgicos e moleculares.
Os autores
Uma obra deste porte somente poderia ser elaborada com a colaborao de vrias pessoas. E
nada mais justo do que agradecer a todos aqueles que tornaram possvel concretiz-la. Aos colegas
colaboradores, pela disposio em dedicar uma parte importante do seu tempo na elaborao dos
captulos. desnecessrio list-los aqui, pois os seus nomes se encontram nos respectivos captulos
ou sees.
Aos colegas e amigos de longa data, com quem a elaborao de um livro de Virologia Veterinria
foi tema de inumerveis conversas e planos em congressos e reunies cientcas nestes ltimos 15
anos. Janice Ciacci-Zanella, Clarice Arns, Ana Paula Ravazollo, Amauri Aleri, Luciane Lovato,
Mauro Moraes, Paulo Roehe, Luiz Carlos Kreutz e Rudi Weiblen, entre outros, o meu agradecimento
e a certeza de que este livro representa a concretizao de um sonho de todos ns.
O agradecimento aos colegas estrangeiros, que entenderam a importncia de um livro-texto
como este e dedicaram parte de seu tempo para auxiliar a elabor-lo: Drs. Julie Ridpath, John Neill,
Luis Rodriguez, Gael Kurath, Fernando Osorio, Maria Elisa Piccone, Gustavo Delhon, Elisabeth Rie-
der e Hernando Duque.
Devo um agradecimento especial a trs colegas que contriburam muito alm da elaborao dos
respectivos captulos, participando de vrios outros, enviando sugestes, traduzindo, revisando e re-
formulando os textos submetidos: Dr Luiz Carlos Kreutz, Dra. Fernanda Silveira Flores Vogel e Md.
Vet. doutoranda Renata Dezengrini.
Gostaria de externar o meu reconhecimento e gratido equipe do Setor de Virologia da UFSM,
composta por mestrandos e doutorandos, que participaram ativamente de todo o processo de elabo-
rao, edio e reviso desta obra. Grande parte da qualidade e propriedade deste texto se deve s
interminveis discusses e revises de captulos, patrocinadas por um grupo cheio de entusiasmo
e motivao. Ao Mrio Celso S. Brum, Diego G. Diel, Evandro Winkelmann, Sabrina R. Almeida,
Sandra Arenhart, Andria Henzel, Renata Dezengrini, Mariana S e Silva, Helton dos Santos, Letcia
Frizzo da Silva e Marcelo Weiss, com certeza de que vocs possuem parte importante nessa obra.
Agradeo tambm aos colegas professores Slvia Hbner (UFPEL) e Valria Lara Carregaro
(UFSM) pelas revises e colaborao em captulos especcos. profa. Maristela Brger Rodrigues,
pela reviso gramatical; Carolina Gehlen, pela diagramao; Zlide Bayer Zucheto e prof. Honrio
Rosa Nascimento, da Editora da UFSM, pelo apoio para que a edio deste livro fosse possvel.
Alm do apoio da Editora da UFSM, parte do trabalho grco (elaborao de guras, diagrama-
o, reviso gramatical) e pagamento de direitos autorais foram custeados com recursos da taxa de
bancada de Produtividade em Pesquisa do CNPq do Organizador. A arte nal e capa somente foram
possveis com o auxlio do Centro de Cincias Rurais, na pessoa do seu Diretor, prof. Dalvan Jos
Reinert, e da vice-reitoria, pelo Prof. Felipe Mller, a quem agradecemos.
Quero tambm manifestar o meu agradecimento e admirao pelo trabalho grco magnco
realizado pelos acadmicos do Curso de Desenho Industrial da UFSM, Lase Miolo Moraes e Mrcio
Oliveira Soriano. Eles foram os responsveis diretos por grande parte das ilustraes desta obra; e
responsveis indiretos pela parte restante, cuja confeco lhes foi subtrada pelo seu entusiasmado
aprendiz. Ao nal do trabalho, tivemos como resultados: um conjunto formidvel de ilustraes; dois
AGRADECIMENTOS
Eduardo Furtado Flores, MV. MSc. PhD
Professor Associado
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva (DMVP)
Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), Santa Maria, RS, Brasil.
97105-900 ores@ccr.ufsm.br
Eduardo Furtado Flores natural de Santa Maria, RS (25/10/61); com graduao (1983) e mestrado
(1989) em Medicina Veterinria pela Universidade Federal de Santa Maria (UFSM). Possui PhD em
Virologia Molecular pela Universidade de Nebraska/Lincoln, Estados Unidos (1995). professor do
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva da UFSM desde 1991, responsvel pelas discipli-
nas de Epidemiologia Geral Veterinria e Sade Pblica Veterinria na graduao; e pelas disciplinas
Epidemiologia Veterinria, Virologia Molecular e Introduo Biologia Molecular na ps-graduao.
Faz parte do Conselho Editorial da Editora da UFSM; pesquisador de produtividade em pesqui-
sa (1C) do CNPq desde 1997; e editor adjunto de Virologia da revista Pesquisa Veterinria Brasileira.
Divide as suas atividades didticas e editoriais com a rotina de diagnstico virolgico no Setor de
Virologia (SV/UFSM) e com a orientao de bolsistas de iniciao cientca, mestrado e doutorado.
Coordena pesquisas nas reas de epidemiologia molecular e patogenia das infeces pelos vrus da
diarria viral bovina e herpesvrus bovino tipos 1 e 5.
acadmicos de Desenho Industrial com certo conhecimento de Virologia e um virologista accionado
pela arte de ilustrar gracamente a biologia dos vrus. E isso s o incio...
Parte I - Virologia Geral
1 Estrutura e composio dos vrus
2 Classicao e nomenclatura dos vrus
Luciane Teresinha Lovato
3 Deteco, identicao e quanticao de vrus
Mrio Celso S. Brum & Rudi Weiblen
4 Gentica e evoluo viral
Mauro Pires Moraes & Hernando Duque Jaramillo
5 Replicao viral
Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz
6 Replicao dos vrus DNA
Gustavo Delhon
7 Replicao dos vrus RNA
Maria Elisa Piccone & Eduardo Furtado Flores
8 Patogenia das infeces vricas
9 Resposta imunolgica contra vrus
Luiz Carlos Kreutz
10 Epidemiologia das infeces vricas
11 Diagnstico laboratorial de infeces vricas
12 Vacinas vricas
Cludio Wageck Canal & Clarissa Silveira Luiz Vaz
19
37
59
87
107
137
165
189
237
261
295
327
SUMRIO
Parte II - Virologia Especial
13 Circoviridae
Janice R. Ciacci-Zanella
14 Parvoviridae
Mauro Pires Moraes e Paulo Renato da Costa
15 Papillomaviridae
Amauri Aleri, Alice Aleri & Sheila Wosiacki
16 Adenoviridae
Mauro Pires Moraes & Paulo Renato da Costa
17 Herpesviridae
Ana Cludia Franco & Paulo Michel Roehe
18 Poxviridae
Cludio Wageck Canal
19 Asfarviridae
Gustavo Delhon
20 Caliciviridae
John Neill
21 Picornaviridae
Elisabeth Rieder & Mrio Celso S. Brum
22 Flaviviridae
Julia Ridpath & Eduardo Furtado Flores
23 Togaviridae
24 Coronaviridae
Luciane Teresinha Lovato & Renata Dezengrini
25 Arteriviridae
Marcelo de Lima & Fernando A. Osorio
26 Paramyxoviridae
Clarice Weis Arns, Fernando R. Spilki & Renata Servan de Almeida
27 Rhabdoviridae
Luis Rodriguez, Helena R. Batista, Paulo Michel Roehe & Gael Kurath
361
375
397
413
333
489
513
525
537
563
593
613
639
657
689
28 Orthomyxoviridae
Eduardo Furtado Flores, Luciane T. Lovato, Mariana S e Silva, Renata Dezengrini & Diego G. Diel
29 Bunyaviridae
Fernanda Silveira Flores Vogel
30 Reoviridae
Amauri Aleri, Alice Aleri, Elisabete Takiuchi & Zlia I. P. Lobato

31 Retroviridae
Ana Paula Ravazzollo & Ubirajara da Costa
32 Outras famlias virais
Fernanda Silveira Flores Vogel & Eduardo Furtado Flores
Abreviaturas e siglas
Glossrio
721
755
773
809
839
861
871
PARTE I
VIROLOGIA GERAL
1 Introduo
2 Estrutura das partculas vricas
2.1 O genoma
2.2 O capsdeo
2.3 O envelope
2.4 A matriz
3 Protenas virais
4 Outros componentes dos vrions
4.1 Enzimas
4.2 Outras protenas virais
4.3 Lipdios
4.4 Carboidratos
4.5 cidos nuclicos celulares
4.6 Protenas celulares
5 Partculas vricas anmalas
6 Propriedades fsico-qumicas
7 Bibliograa consultada
21
21
30
31
32
33
33
ESTRUTURA E COMPOSIO DOS VRUS
1
23
25
28
29
31
31
31
31
31
32
1 Introduo
Os vrus so os microorganismos menores e
mais simples que existem. So muito menores do
que clulas eucariotas e procariotas e, ao contr-
rio destas, possuem uma estrutura simples e est-
tica. Esses agentes no possuem a maquinaria ne-
cessria para a produo de energia metablica e
para a sntese de protenas e, por isso, necessitam
das funes e do metabolismo celular para se
multiplicar. Fora de uma clula viva os vrus so
estruturas qumicas. A sua atividade biolgica s
adquirida no interior de clulas vivas, por isso
so parasitas intracelulares obrigatrios.
O genoma viral cido ribonuclico (RNA)
ou desoxirribonuclico (DNA) codica apenas
as informaes necessrias para assegurar a sua
multiplicao, empacotamento do genoma e para
subverso de funes celulares em benefcio da
sua multiplicao. Ao contrrio de clulas euca-
riotas e procariotas, os vrus no crescem ou se
dividem; e sim so produzidos pela associao
dos seus componentes pr-formados no interior
da clula infectada.
A palavra vrus utilizada para designar o
agente biolgico, o microorganismo. A estrutura
fsica denominada partcula viral, partcula v-
rica ou simplesmente vrion. A nomenclatura uti-
lizada para designar as diversas hierarquias da
classicao taxonmica dos vrus (ordem, fam-
lia, subfamlia, gnero, espcie) ser apresentada
no Captulo 2. No presente captulo, a terminolo-
gia vernacular ser utilizada. Por exemplo: o ter-
mo picornavrus ser utilizado para referir-se aos
membros da famlia Picornaviridae; os membros
da famlia Orthomyxoviridae sero chamados de
ortomixovrus.
2 Estrutura das partculas vricas
A unidade fundamental o indivduo dos
vrus denominada partcula vrica, partcula viral
ou simplesmente vrion. As dimenses, morfolo-
gia e complexidade das partculas vricas variam
amplamente entre os vrus das diferentes fam-
lias. A grande maioria dos vrions possui dimen-
ses ultramicroscpicas, com dimetro que varia
entre 15 e 22 nanmetros (nm) nos circovrus; e
entre 200 e 450 nm nos poxvrus; e s pode ser
visualizada sob microscopia eletrnica (ME). As
excees so alguns poxvrus que so maiores
e podem ser visualizados sob microscopia tica
(Figura 1.1).
Figura 1.1. Escala logartmica mtrica, ilustrando as dimenses dos vrus comparativamente com clulas animais,
bactrias e macromolculas. Opoder deresoluodas microscopias tica e eletrnica indicadopor barras.
10
(1mm)
-3
10
(0,1mm)
-4
10
(10 m)
-5
10
(1 m)
-6
10
(0,1m)
-7
10
(10nm)
-8
10
(1nm)
-9
10
(1A)
-10
Poxvrus
Clulas
animais
Vrus e
ribossomos Protenas
Bactrias
Microscopia tica
Microscopia eletrnica
10
(1cm)
-2
Fonte: adaptado de Flint et al. 2000 . ( )
22 Captulo 1
condies ambientais que rapidamente inativa-
riam o cido nuclico. Por isso, o capsdeo e o
envelope so crticos para a manuteno da in-
tegridade e viabilidade do genoma, que contm
as informaes essenciais para a multiplicao
do vrus. Outras funes importantes dos com-
ponentes superciais das partculas vricas so
o reconhecimento e interao com estruturas da
membrana da clula hospedeira. Essas interaes
so essenciais para a penetrao do agente na c-
lula e incio da sua replicao.
A arquitetura e modo com que as partculas
vricas so construdas devem permitir o desem-
penho de duas funes fundamentais: a) prote-
o do genoma durante o transporte entre clulas
e entre hospedeiros, e b) liberao do genoma n-
tegro e vivel aps a penetrao na clula hospe-
deira. A evoluo fez com que a arquitetura das
partculas vricas tenha sido adequada para cum-
prir essas tarefas. Ou seja, os vrions so resisten-
tes o suciente para proteger o genoma no exte-
rior das clulas e so facilmente desintegrados ao
penetrarem na clula hospedeira, para permitir a
pronta liberao do genoma no seu interior. Essas
duas propriedades, aparentemente opostas, que
so particularmente bem evidentes em alguns v-
rus sem envelope, caracterizam o que se conven-
cionou denominar de estrutura metaestvel.
De acordo com a estrutura bsica das part-
culas, dois grupos principais de vrus podem ser
reconhecidos: os vrus sem envelope e os vrus
com envelope (Figura 1.2). Os vrions mais sim-
ples so compostos pelo genoma recoberto por
uma camada simples de protena, denominada
capsdeo. Os vrus mais complexos possuem ge-
nomas longos associados com vrias protenas,
recobertos por capsdeos complexos, revestidos
externamente por uma membrana lipoprotica
de origem celular, denominada envelope. As ca-
madas proticas que envolvem o genoma (caps-
deo, envelope) so freqentemente denominadas
de envoltrios virais. Os conceitos principais re-
lacionados estrutura e componentes dos vrions
esto apresentados no Quadro 1.1.
Figura 1.2. Estrutura fundamental das partculas vricas
e seus componentes. Representao esquemtica de um
vrionsemenvelope (A) e comenvelope (B).
Genoma
Capsdeo
A
B
Genoma
Capsdeo
Envelope
A funo primordial dos envoltrios virais
(capsdeo e envelope) proteger o genoma de
danos fsicos, qumicos ou enzimticos durante
a transmisso entre clulas e entre hospedeiros.
Nessa etapa, os vrions podem ser expostos a
- O constitudo por RNA ou DNA.
- O a camada protica que
recobre o genoma.
- Os so as unidades proticas
que compe o capsdeo.
- Os so as unidades
morfolgicas do capsdeo.
- O a estrutura formada
pelo genoma + capsdeo.
- O a membrana lipoprotica
que recobre o nucleocapsdeo
- O a partcula vrica completa, infecciosa.
genoma
capsdeo
protmeros
capsmeros
nucleocapsdeo
envelope
vrion
VRUS - DEFINIES
E CONCEITOS
Quadro 1.1. Conceitos e definies fundamentais.
Estrutura e composio dos vrus 23
2.1 O genoma
O genoma dos vrus constitudo por mo-
lculas de cido ribonuclico (RNA) ou desoxir-
ribonuclico (DNA), nunca pelos dois. Por isso,
esses agentes so comumente denominados de
vrus RNA ou vrus DNA. Em geral, os vrus das
diversas famlias contm apenas uma cpia do
genoma por vrion (so haplides). Uma exce-
o so os retrovrus, que possuem duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). A extenso,
estrutura, organizao genmica e o nmero de
genes contidos no genoma variam amplamen-
te entre os diferentes vrus. Os menores vrus
animais (circovrus) possuem uma molcula de
DNA com aproximadamente 1.700 nucleotdeos
(1,7 quilobases, kb) como genoma; os vrus maio-
res possuem um genoma DNA com mais de 350
kb (poxvrus). O nmero de genes e conse-
qentemente o nmero de protenas codicadas
tambm varia entre os diferentes vrus. Alguns
vrus de plantas codicam apenas uma protena,
enquanto o genoma dos poxvrus codica mais
de 100.
Em geral, o genoma dos vrus muito com-
pacto e codica apenas as protenas essenciais
para assegurar a sua replicao e transmisso.
Resumidamente, essas funes compreendem: a)
assegurar a replicao do genoma (enzimas poli-
merases de RNA e DNA e protenas acessrias);
b) subverter funes celulares em seu benefcio
(protease leader no vrus da febre aftosa [foot and
mouth disease virus, FMDV]) e c) empacotar o ge-
noma (protenas do capsdeo e envelope). Essas
funes so codicadas pelo genoma de, virtual-
mente, todos os vrus. Alguns vrus mais comple-
xos codicam funes adicionais que, de alguma
forma, favorecem a sua multiplicao e dissemi-
nao.
O tipo e estrutura do genoma de muitos
vrus diferem do padro clssico observado nos
cidos nuclicos de eucariotas e procariotas. Nes-
ses organismos, o genoma constitudo por mo-
lculas de DNA de cadeia dupla (ds, double-stran-
ded); enquanto os RNAs possuem ta simples (ss,
single-stranded). Os genomas dos vrus apresen-
tam variaes de tipo e estrutura, que incluem
desde genomas de DNA de ta simples (ssDNA)
at RNA de ta dupla (dsRNA) (Tabelas 1.1 e 1.2,
em anexo).
A maioria dos vrus DNA possui o cido
nuclico genmico como uma molcula de ta
dupla. As excees so os parvovrus (cadeia
simples linear), os circovrus (cadeia simples cir-
cular) e os hepadnavrus (cadeia parcialmente
dupla). O termo circular refere-se continuidade
da cadeia de DNA e no forma geomtrica ado-
tada pela molcula. Ao contrrio dos genomas
lineares, que apresentam as extremidades livres,
os genomas circulares apresentam a cadeia cont-
nua, sem extremidades.
Os poliomavrus e papilomavrus possuem
uma molcula de DNA de cadeia dupla circular.
Essa molcula apresenta-se enrolada/tensionada
sobre o seu eixo longitudinal (do ingls: supercoi-
led) e est associada com protenas celulares de-
nominadas histonas, tanto nas clulas infectadas
como nos vrions. Os parvovrus possuem uma
molcula de DNA de cadeia simples, cujas extre-
midades possuem seqncias complementares
invertidas (palindromes). Essa caracterstica per-
mite que as extremidades do genoma se dobrem
sobre si mesmas, pareando com a sua regio
complementar e formando estruturas semelhan-
tes a grampos de cabelo (hairpins). Os genomas
dos adenovrus e herpesvrus so molculas de
DNA de cadeia dupla linear. Nos herpesvrus, o
genoma linear apenas nos vrions, pois assume
a topologia circular (devido ao pareamento com-
plementar nas extremidades) logo aps a entrada
no ncleo da clula. O genoma dos hepadnavrus
uma molcula de DNA de cadeia parcialmente
dupla (aproximadamente 3/4), o restante pos-
sui cadeia simples. As extremidades da cadeia
completa fazem um pareamento de bases entre
si, conferindo molcula a topologia circular
(a cadeia de DNA no contnua). Os poxvrus
possuem uma molcula de DNA de cadeia dupla
linear; porm as duas cadeias so contnuas, ou
seja, no h extremidades livres. Uma ilustrao
simplicada da morfologia das partculas e da
topologia do genoma dos vrus DNA est apre-
sentada na Figura 1.3.
24 Captulo 1
O cido nuclico genmico de todos os vrus
RNA composto por molculas lineares. Em al-
gumas famlias (Orthomyxoviridae e Bunyaviridae),
essas molculas circularizam pelo pareamento de
seqncias complementares, localizadas nas ex-
tremidades, formando estruturas que lembram
cabos de panela (panhandles). A maioria dos vrus
RNA possui o seu cido nuclico genmico como
uma molcula de cadeia simples. As excees
so os reovrus e os birnavrus, cujos genomas
so formados por segmentos de RNA de cadeia
dupla (10 a 12 segmentos nos reovrus, dois nos
birnavrus). Os genomas dos vrus RNA de ca-
deia simples podem ser constitudos por uma
nica molcula (no-segmentados) ou por mais
de uma molcula (genomas segmentados: sete a
oito molculas de RNA nos ortomixovrus, trs
nos buniavrus e duas nos arenavrus).
O genoma de alguns vrus RNA de cadeia
simples possui o mesmo sentido do RNA men-
sageiro (mRNA) e pode ser diretamente traduzi-
do pelos ribossomos da clula hospedeira. Isso
possvel porque a seqncia de nucleotdeos, que
codica os aminocidos constituintes da prote-
na, est alinhada no mesmo sentido da seqncia
genmica. Esses mRNA (e os respectivos vrus)
so denominados RNA de sentido ou polarida-
de positiva; ou simplesmente RNA+. A primeira
etapa intracelular do ciclo replicativo desses vrus
a traduo parcial ou total do RNA genmico,
resultando na produo de protenas virais, entre
as quais a enzima polimerase de RNA (replicase),
que ir replicar o genoma.
Outros vrus RNA de cadeia simples pos-
suem genomas que no podem ser diretamente
traduzidos, pois possuem o sentido contrrio (an-
tissense) ao mRNA. Esses genomas (e os respec-
tivos vrus) so denominados de RNAs de sen-
tido ou polaridade negativa (RNA-). Esses vrus
trazem a enzima polimerase de RNA nos vrions
para permitir o incio da replicao do genoma.
A etapa inicial da replicao a sntese de uma
cpia de RNA de polaridade positiva (mRNA) a
partir do RNA genmico. Ou seja, nesses vrus, a
sntese protica ocorre pela traduo do mRNA,
que possui sentido antigenmico.
Os genomas RNA dos buniavrus e arena-
vrus no so diretamente traduzidos pelos ri-
bossomos, sendo considerados RNA de sentido
negativo. Esses RNAs servem de molde para a
transcrio e produo de cpias de RNA de sen-
tido positivo (RNA+ ou mRNA) de extenso par-
cial ou total do genoma. No entanto, em alguns
desses vrus, um dos segmentos de RNA codica
protenas tanto no sentido do genoma como na
molcula de sentido oposto (antigenmico). Essa
estratgia de expresso gnica denominada am-
bissense e uma caracterstica nica dessas fam-
lias.
Nos reovrus e birnavrus (genomas RNA
segmentados de ta dupla), a cadeia negativa
serve de molde para a transcrio e produo de
mRNA (RNA- RNA+). A cadeia complemen-
tar de RNA genmico (sentido positivo) no
traduzida. Essa molcula serve apenas de molde
e para parear com a cadeia negativa. A Figura 1.4
apresenta uma ilustrao simplicada da morfo-
logia dos vrions e topologia do genoma dos v-
rus RNA.
Circoviridae Parvoviridae
Hepadnaviridae
Polyoma
Papilloma
viridae
viridae
Adenoviridae Herpesviridae Poxviridae
Asfarviridae
Figura 1.3. Ilustrao simplificada da morfologia dos
vrions edatopologia dogenomados vrus DNA.
Fonte: adaptado de Gelderson, H. R. www.gsbs.utmb.edu
2.2 O capsdeo
O capsdeo (tambm chamado de cpsula)
a camada protica que recobre externamente o
genoma. Nos vrus que no possuem envelope,
o capsdeo representa o nico envoltrio do ci-
do nuclico viral. Alm dessa cobertura protica,
o genoma de alguns vrus encontra-se associado
com uma ou mais protenas de origem viral (p.
ex.: adenovrus e reovrus) ou da clula hospedei-
ra (poliomavrus e papilomavrus). As protenas
que esto associadas ao genoma geralmente pos-
suem carter bsico, sendo formadas predomi-
nantemente por aminocidos com carga positiva.
Essa estrutura, geralmente compacta (genoma +
protenas associadas), denominada core ou n-
cleo. O conjunto formado pelo core + capsdeo
comumente denominado nucleocapsdeo. Nos v-
rus envelopados, o nucleocapsdeo recoberto
externamente pela membrana lipoprotica que
constitui o envelope (Figura 1.2).
A funo do capsdeo proteger o material
gentico e proporcionar a transferncia do v-
rus entre clulas e entre hospedeiros. Nos vrus
sem envelope, a superfcie externa do capsdeo
responsvel pelas interaes iniciais dos vrions
com a clula hospedeira no processo de penetra-
o do vrus. Nesses vrus, as protenas localiza-
das na superfcie do capsdeo tambm interagem
com componentes do sistema imunolgico e so
alvos importantes para anticorpos com atividade
neutralizante.
Os capsdeos so formados pela associao
de subunidades proticas denominadas protme-
ros, que se constituem nas suas unidades estrutu-
rais. A associao dessas protenas pode formar
estruturas tridimensionais bem denidas, geral-
mente na forma de pequenas salincias visveis
na superfcie dos vrions. Essas estruturas consti-
Picornaviridae Astroviridae Caliciviridae Flaviviridae Arteriviridae Togaviridae
Coronaviridae Retroviridae Reoviridae Bunyaviridae
Orthomyxoviridae Arenaviridae Filoviridae Rhabdoviridae Paramyxoviridae
Birnaviridae
Figura 1.4. Ilustrao simplificada da morfologia dos vrions e da topologia do genoma dos vrus RNA.
Fonte: adaptado de www.gsbs.utmb.edu Gelderson, H. R.
26 Captulo 1
tuem-se nas unidades morfolgicas do capsdeo,
tambm denominadas capsmeros. Cada caps-
mero pode ser formado por uma nica protena,
pela associao de molculas de uma mesma pro-
tena ou por diferentes protenas (Figura 1.5).
O icosaedro se constitui em uma estrutura
quase esfrica com uma cavidade interna. Os
capsdeos icosadricos (tambm denominados
cbicos) so formados pela associao de 20 uni-
dades triangulares planas idnticas, unidas entre
si em 12 vrtices e arranjadas ao redor de uma
esfera imaginria (Figura 1.6). Eixos imaginrios
traados atravs do icosaedro do origem a trs
possveis planos de simetria: bilateral (two-fold),
trilateral (three-fold) e pentalateral (ve-fold). O
nmero de unidades que compem cada unida-
de triangular varivel e d origem a variaes
estruturais entre os capsdeos de diferentes vrus.
O icosaedro representa a otimizao estrutural
para a construo de um envoltrio resistente,
compacto e com mxima capacidade de armaze-
namento, podendo ser composto por mltiplas
cpias de uma mesma protena.
Assim, o capsdeo pode ser formado por c-
pias de uma mesma protena (vrus do mosaico,
rabdovrus) ou por diferentes tipos de protenas
(mais de dez tipos diferentes nos reovrus), e to-
das se encontram em mltiplas cpias e so codi-
cadas pelo genoma viral. Os capsdeos compos-
tos por cpias mltiplas de uma mesma protena
representam um exemplo de ecincia estrutural
de armazenamento e economia de espao no ge-
noma, pois um nico gene codica a protena ne-
cessria para formar todo o envoltrio viral. Inde-
pendente do nmero de protenas que compem
o capsdeo, a associao entre essas protenas
pode resultar em capsdeos com duas simetrias
principais: icosadrica e helicoidal (Figura 1.5).
Os capsdeos helicoidais so formados por
mltiplas cpias de uma mesma protena. Essas
protenas se associam entre si e com o cido nu-
clico, revestindo externamente o genoma. Essa
associao resulta em uma estrutura espiralada
alongada, exvel ou relativamente rgida (Figu-
ra 1.7). As dimenses dos nucleocapsdeos heli-
coidais variam muito, dependendo da extenso
do genoma, podendo atingir at 1.800 nm nos
lovrus.
A maioria dos vrus animais possui capsde-
os icosadricos ou helicoidais, mas alguns (poxv-
rus, iridovrus e bacterifagos) possuem capsde-
os com arquitetura mais complexa, denominados
genericamente capsdeos complexos.
Com base na arquitetura, simetria e comple-
xidade de arquitetura, os vrions de diferentes
famlias podem ser agrupados em cinco grupos
estruturais (Figura 1.8):
Os capsdeos helicoidais de alguns vrus de
plantas apresentam-se como cilindros exveis
ou rgidos, no interior do qual est localizado o
genoma. So todos vrus sem envelope. Os vrus
animais que possuem nucleocapsdeos helicoi-
dais possuem genoma RNA de sentido negativo
e so todos envelopados. O nucleocapsdeo heli-
coidal desses vrus formado pela associao de
cpias mltiplas da protena do capsdeo com o
genoma, que adota uma forma espiralada. Nos
rabdovrus, o nucleocapsdeo adota uma forma
bem denida, semelhante a um projtil de arma
de fogo, no interior do qual se aloja o genoma
espiralado (Figura 1.7A). Na maioria dos vrus,
o nucleocapsdeo helicoidal exvel e enovela-
se sobre si mesmo e sobre o genoma sem adotar
uma forma denida (Figura 1.7 B).
A B
Figura 1.7. Ilustrao esquemtica de nucleocapsdeos
helicoidais. A. Nucleocapsdeo helicoidal com
morfologia definida; B. Nucleocapsdeo helicoidal
flexvel.
3
1A 1B
2A 2B
1. Capsdeo icosadrico
2. Capsdeo helicoidal
Figura 1.8. Os cinco principais tipos estruturais dos
vrus. 1. Vrions com capsdeos icosadricos: 1A. Sem
envelope; 1B. Com envelope. 2. Vrions com capsdeos
helicoidais: 2A. Sem envelope; 2B. Com envelope. 3.
Vrioncomsimetria complexa.
Fonte: adaptada de Carter et al. (2005).
28 Captulo 1
sem envelope, capsdeo icosadrico: ex:
adenovrus, picornavrus;
sem envelope, capsdeo helicoidal: ex: v-
rus do mosaico do tabaco;
com envelope, capsdeo isosadrico: ex: to-
gavrus, herpesvrus;
com envelope, capsdeo helicoidal: ex: pa-
ramixovrus, rabdovrus;
complexos: ex: bacterifagos, poxvrus.

2.3 O envelope
Os vrions de vrias famlias possuem os nu-
cleocapsdeos recobertos externamente por uma
membrana lipoprotica denominada envelope.
O envelope formado por uma camada lipdica
dupla, derivada de membranas celulares. Nessas
membranas esto inseridas um nmero varivel
de protenas codicadas pelo genoma viral. Na
maioria dos vrus, o envelope est justaposto
externamente ao capsdeo. Nos herpesvrus, en-
tretanto, existe um espao de espessura varivel
entre o capsdeo e o envelope, que preenchido
por uma substncia protica amorfa, denomina-
da tegumento. A quantidade e a forma adotada
pelo tegumento so variveis e, conseqente-
mente, determinam a variao da morfologia e
dimenses da partcula dos herpesvrus. Como o
envelope derivado de membranas celulares, e
estas so uidas e exveis, a superfcie externa
e a morfologia dos vrus envelopados so mais
exveis e menos denidas do que nos vrus sem
envelope. A estrutura de um vrion com envelo-
pe est ilustrada na Figura 1.9.
Os vrions adquirem a membrana lipdica
que compe o envelope pela insero/protuso
do nucleocapsdeo atravs de membranas celu-
lares, mecanismo denominado brotamento. Os
lipdios que constituem o envelope so deriva-
dos das membranas da clula hospedeira, e as
protenas so codicadas pelo genoma viral. A
estrutura lipdica dupla dos envelopes bem se-
melhante entre os diferentes vrus. No entanto, a
espessura e composio dessa camada variam de
acordo com a membrana celular que os originou.
O envelope, adquirido na membrana plasmtica,
contm fosfolipdios e colesterol em determinada
proporo, enquanto o envelope originado das
membranas celulares internas mais delgado e
contm pouco ou nenhum colesterol. Os envelo-
pes virais praticamente no contm protenas ce-
lulares. As protenas celulares da membrana so
excludas da regio do brotamento por interaes
entre as protenas virais que se inserem na cama-
da lipdica.
Os envelopes dos vrus podem conter um ou
mais tipos de protenas codicadas pelo genoma
viral (os herpesvrus possuem entre 10 e 12; os
poxvrus possuem um nmero ainda maior). A
maioria das protenas do envelope contm oligos-
sacardeos (acares) associados, constituindo-se,
portanto, em glicoprotenas. Essas glicoprotenas
so produzidas e modicadas no retculo endo-
plasmtico rugoso (RER) e no aparelho de Golgi,
cando inseridas na prpria membrana do RER
ou sendo enviadas para a membrana nuclear do
Golgi ou para a membrana plasmtica, locais do
brotamento.
As glicoprotenas do envelope viral pos-
suem dimenses e estruturas variveis e a maio-
ria formada por protenas integrais de membrana
(Figura 1.10A). Essas glicoprotenas podem estar
presentes na forma de monmeros, homo ou he-
terodmeros, trmeros e at tetrmeros. Em geral,
as glicoprotenas do envelope apresentam trs
regies principais em comum: a) uma regio ci-
toplasmtica ou interna (cauda); b) uma regio
transmembrana (tm) e c) uma regio externa. A
cauda geralmente pequena e interage com a su-
perfcie externa do nucleocapsdeo no processo
de morfognese e brotamento. A regio tm est
inserida na camada lipdica e serve de sustenta-
o e xao da protena. A extenso dessa re-
nucleocapsdeo
genoma
membrana
lipdica
glicoprotenas
envelope
Figura 1.9. Ilustrao esquemtica da estrutura de um
vrion com envelope. As aberturas no envelope e no
capsdeo so meramente ilustrativas, com o fim de
permitir avisualizaodas estruturas internas.
Adaptado de Reschke, M.; www.biographix.de
gio varia de acordo com a espessura e origem
da camada lipdica: entre 18 (vrus da febre ama-
rela, que brota no retculo endoplasmtico) e 26
aminocidos (vrus da inuenza, que adquire o
envelope na membrana plasmtica). A regio tm
composta principalmente por aminocidos hi-
drofbicos. Algumas glicoprotenas do envelope
possuem vrias regies tm e, assim, atravessam
a membrana duas ou trs vezes. Outras no pos-
suem regio tm e, portanto, no se encontram
inseridas na membrana lipdica. Essas glicopro-
tenas encontram-se associadas ao envelope por
interaes covalentes ou no-covalentes com ou-
tras glicoprotenas integrais de membrana e, por
isso, so ditas protenas perifricas de membrana
(Figura 1.10B). Exemplos desse tipo de protena
so as glicoprotenas E0 dos pestivrus e a SU dos
retrovrus. A regio externa geralmente maior;
hidroflica e contm um nmero varivel de oli-
gossacardeos associados. As glicoprotenas do
envelope de alguns vrus formam projees na
superfcie dos vrions, denominadas peplmeros,
que podem ser visualizadas sob ME.
d) transmisso do vrus entre clulas. Nas etapas
nais do ciclo replicativo, algumas glicoprotenas
do envelope auxiliam no egresso das partculas
recm-formadas, permitindo a sua liberao a
partir da membrana celular (neuraminidase nos
ortomixovrus). As glicoprotenas do envelope
tambm desempenham um importante papel na
interao do vrus com o sistema imunolgico e
se constituem em alvos importantes para anticor-
pos neutralizantes.
Como as glicoprotenas do envelope me-
diam as interaes iniciais dos vrions com as
clulas, a sua integridade e conformao natu-
ral so essenciais para a infectividade do vrus.
Algumas substncias qumicas (formalina e de-
tergentes) ou agentes fsicos (calor e radiaes)
alteram a conformao dessas protenas e, con-
seqentemente, reduzem ou eliminam a infecti-
vidade do vrus. Solventes lipdicos, como ter e
clorofrmio, tambm afetam negativamente a in-
fectividade de vrus envelopados, pois destroem
a integridade da camada lipdica que compe o
envelope.
Os vrions adquirem o envelope por meio de
um mecanismo denominado genericamente de
brotamento. Nesse processo, o nucleocapsdeo ini-
cialmente interage com as caudas das glicopro-
tenas previamente inseridas na membrana. Essa
interao inicial seguida da protuso/insero
do nucleocapsdeo atravs da membrana, resul-
tando na formao de vrions com uma camada
lipoprotica que envolve externamente o nucle-
ocapsdeo (Figura 1.11). O local do brotamento
varia entre os diferentes vrus e pode ocorrer na
membrana nuclear, do RER, do aparelho de Gol-
gi ou na membrana plasmtica.
2.4 A matriz
Alguns vrus envelopados possuem prote-
nas que recobrem externamente o nucleocaps-
deo, mediando a sua associao com a superfcie
interna do envelope. Essas protenas, denomi-
nadas de matriz, so geralmente glicosiladas e
abundantes, podendo corresponder a at 30% da
massa total dos vrions (como nos retrovrus).
As protenas da matriz so encontradas em v-
rios vrus envelopados, principalmente nos vrus
RNA de polaridade negativa (exemplos: parami-
As glicoprotenas, principalmente por meio
de sua regio extracelular, desempenham vrias
funes na biologia do vrus, incluindo: a) liga-
o aos receptores celulares; b) fuso do envelope
com a membrana celular; c) penetrao celular e
E
M
TM
I
A B
Figura 1.10. Representao simplificada da estrutura das
glicoprotenas do envelope viral. A. Protena integral de
membrana com as regies interna (I), transmembrana
(TM) e externa (E); M. membrana lipdica; B. Duas
protenas associadas: uma integral de membrana (cinza)
associadacomuma protena perifrica (preto).
30 Captulo 1
xovrus e ortomixovrus). As protenas da matriz
desempenham importante funo estrutural e na
morfognese das partculas vricas, pois intera-
gem simultaneamente com a superfcie externa
do nucleocapsdeo e com as caudas das glicopro-
tenas, funcionando como adaptadores entre o
nucleocapsdeo e o envelope.
3 Protenas virais
O genoma dos vrus codica duas classes
principais de protenas: estruturais e no-estrutu-
rais. As protenas estruturais so aquelas que par-
ticipam da construo e arquitetura da partcula
vrica (Figura 1.12), ou seja, esto presentes como
componentes estruturais dos vrions. Enqua-
dram-se nessa classe as protenas do nucleocap-
sdeo e do envelope. As protenas do tegumento
(herpesvrus) e as protenas da matriz tambm se
constituem em protenas estruturais.
As protenas no-estruturais so aquelas co-
dicadas pelo genoma viral e produzidas no
interior da clula hospedeira durante o ciclo re-
plicativo, mas que no participam da estrutura
das partculas vricas. So geralmente protenas
com atividades enzimticas e/ou regulatrias
que participam das diversas etapas do ciclo re-
plicativo do vrus e de sua interao com as or-
ganelas e macromolculas da clula hospedeira.
So exemplos de protenas no-estruturais as en-
zimas polimerases de DNA (DNA polimerase) e
RNA (RNA polimerase), enzimas envolvidas no
metabolismo de nucleotdeos (timidina quinase,
ribonucleotdeo redutase etc.), fatores de trans-
crio e regulao da expresso gnica (ICP0
nos herpesvrus, protena E1A dos adenovrus,
2
3
4
Meio extracelular
Citoplasma
1
Membrana
plasmtica
Figura 1.11. Etapas dobrotamentoe aquisiodoenvelope por vrus envelopados. 1. Interaodonucleocapsdeocom
as caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope; 2-3. Insero/protuso do nucleocapsdeo atravs da
membrana; 4. Egressodapartculacompleta.
PA+PB1+PB2
M
NP
HA
NA
M2
Figura 1.12. Ilustrao esquemtica da estrutura de um
ortomixovrus (vrus da influenza), indicando a
localizao das protenas na partcula vrica.
Glicoprotenas do envelope: HA: hemaglutinina; NA:
neuraminidase; M2: canal de ons; M: protena da matriz.
Componentes do complexo ribonucleoprotena: RNA:
recoberto pela NP; NP: nucleoprotena; PA: polimerase
cida; PB1: polimerase bsica1; PB2: polimerase bsica2.
antgeno T dos poliomavrus), entre outras. O
nmero de protenas no-estruturais (e tambm
estruturais) codicadas pelo genoma varia com
a complexidade dos vrus. Os vrus mais sim-
ples codicam uma ou poucas protenas no-
estruturais, enquanto os poxvrus e herpesvrus
codicam dezenas de protenas com atividades
enzimticas e regulatrias, que desempenham
funes diversas no seu ciclo replicativo. Embora
estejam presentes nas partculas vricas de vrias
famlias, protenas com atividade enzimtica so
consideradas protenas no-estruturais.
4 Outros componentes dos vrions
4.1 Enzimas
Protenas com atividade enzimtica esto
presentes nas partculas vricas de membros de
vrias famlias de vrus DNA e RNA. Essas en-
zimas so necessrias para a sntese do cido nu-
clico viral e/ou para a biossntese de nucleot-
deos e, geralmente, catalisam reaes nicas dos
vrus, que no encontram fatores com funes
similares nas clulas hospedeiras. Os vrus RNA
de sentido negativo, por exemplo, trazem a enzi-
ma RNA polimerase (polimerase de RNA depen-
dente de RNA) nos vrions. Os retrovrus trazem,
nos vrions, a enzima transcriptase reversa (poli-
merase de DNA dependente de RNA; tambm
polimerase de DNA dependente de DNA). Os
hepadnavrus tambm trazem a enzima polime-
rase (polimerase de DNA dependente de DNA e
tambm de RNA) nos vrions. Os poxvrus tra-
zem, em seus vrions, enzimas RNA polimerases
(com atividade equivalente s do hospedeiro),
alm de enzimas que modicam o mRNA. Essas
enzimas so necessrias para a realizao dessas
funes no citoplasma, onde ocorre a replicao
viral. Endonucleases (ortomixovrus), proteases
(vrios vrus), quinases (hepadnavrus), integrase
e ribonuclease (retrovrus) so exemplos de ativi-
dades enzimticas presentes em partculas virais.
Os retrovrus complexos (exemplo: vrus da imu-
nodecincia humana HIV) possuem protenas
adicionais nos vrions, VPR e VIF, que so impor-
tantes para a replicao eciente em alguns tipos
de clulas.
4.2 Outras protenas

Protenas sem atividade enzimtica, mas
que possuem participao no ciclo replicativo,
tambm esto presentes nos vrions de algumas
famlias. Os herpesvrus possuem, como parte do
tegumento, a VP-16 (ou -TIF), que um transa-
tivador dos genes iniciais, e a VHS, uma protena
que degrada os mRNA da clula hospedeira.
4.3 Lipdios
Os lipdios presentes nos envelopes virais
so tipicamente os mesmos das membranas celu-
lares, onde os vrions adquirem o seu envoltrio
externo. Os envelopes originados da membrana
plasmtica contm principalmente fosfolipdios
(50-70%) e colesterol, enquanto os envelopes ad-
quiridos em membranas celulares internas (nu-
clear, Golgi, RER) possuem pouco ou nenhum
colesterol. Os lipdios constituem entre 20 e 35%
da massa dos vrus envelopados.
4.4 Carboidratos
Os carboidratos podem estar presentes em
vrions como componentes de glicoprotenas, gli-
colipdios e mucopolissacardeos. Esses carboi-
dratos esto presentes principalmente no envelo-
pe, mas os vrus complexos (poxvrus) tambm
possuem carboidratos associados com protenas
internas e/ou do capsdeo.
4.5 cidos nuclicos celulares
Alguns vrus podem ocasionalmente encap-
sidar em seus vrions, fragmentos de DNA cro-
mossmico da clula hospedeira (poliomavrus).
Os vrions dos retrovrus contm molculas de
RNA transportador (tRNA) adquiridos da clu-
la infectada. Esse tRNA desempenha um papel
importante no incio do ciclo replicativo do vrus,
pois serve de iniciador (primer) para a sntese da
cadeia de DNA a partir do RNA genmico viral.
Os vrions da famlia Arenaviridae contm ribos-
somos da clula hospedeira, o que lhes confere
uma aparncia granular quando examinados sob
32 Captulo 1
ME (da a denominao da famlia, arena = areia).
Os vrions dos ortomixovrus podem conter RNA
ribossmico derivado das clulas hospedeiras.
4.6 Protenas celulares
No ncleo da clula hospedeira, o genoma
DNA recm-replicado dos poliomavrus e papi-
lomavrus associa-se com protenas celulares de-
nominadas histonas (H), formando estruturas se-
melhantes cromatina celular. Essas estruturas,
chamadas de minicromossomas, que contm o
DNA viral, conjugado com as histonas H2A, H2B,
H3 e H4, so encapsidadas durante a morfogne-
se das partculas virais. Cabe ressaltar que cada
vrion dos papilomavrus e poliomavrus contm
uma cpia do genoma, ou seja, um minicromos-
soma. Os vrions dessas famlias, portanto, con-
tm certa quantidade de protenas celulares.
5 Partculas vricas anmalas
Alm de partculas vricas completas e infec-
tivas, a replicao de alguns vrus pode resultar
na produo de uma quantidade varivel de par-
tculas vricas anmalas, geralmente no-infec-
ciosas. A freqncia e abundncia dessas partcu-
las em relao aos vrions completos e infecciosos
variam amplamente de acordo com o vrus. So
muitas as causas da ausncia de infectividade
nessas partculas, incluindo:
ausncia do genoma viral. Clulas infecta-
das por poliomavrus podem produzir capsdeos
vazios, sem o DNA genmico; outros capsdeos
podem conter fragmentos de DNA celular. Essas
partculas so denominadas pseudovrions;
clulas infectadas por vrus de genoma
RNA segmentado (ortomixovrus, por exemplo)
podem produzir vrions com o conjunto incom-
pleto dos segmentos genmicos;
vrios vrus podem encapsidar genomas
com delees em um ou mais genes. Os vrions
que contm esses genomas defectivos so deno-
minados partculas defectivas. Esses vrions no
replicam autonomamente e somente so capazes
de replicar quando ocorre uma co-infeco com
um vrus homlogo infeccioso (denominado de
vrus helper);
os picornavrus podem ocasionalmente
apresentar capsdeos vazios em razo da degra-
dao do genoma;
clulas infectadas com os hepadnavrus
(vrus da hepatite B) produzem vrions comple-
tos (Dane particles) e tambm duas formas de
partculas incompletas (partculas esfricas de 20
nm e partculas lamentosas) (Figura 1.13). As
partculas incompletas so formadas por molcu-
las da glicoprotena de superfcie (HbsAg), asso-
ciadas com segmentos de membranas celulares.
Para cada vrion completo, so produzidas entre
10.000 e 1.000.000 partculas esfricas. A abun-
dncia dessas partculas no sangue de pessoas
infectadas cronicamente tem sido utilizada como
ferramenta para o diagnstico e, durante muitos
anos, foi utilizada para a produo de vacinas.
A
B
Figura 1.13. Partculas produzidas por clulas infectadas
pelo vrus da hepatite B (hepadnavrus). A. Ilustrao
esquemtica e B. fotografia de microscopia eletrnica. As
partculas esfricas maiores com parede dupla so as
partculas infecciosas (dane particles); as esfricas
menores e as filamentosas so partculas defectivas,
compostas por protenas de superfcie e pores de
membranas celulares.
A. Fonte: adaptada de Flint et al. 2000 .
B. Fonte: Dr. Linda Stannard, www.uct.ac.za.
( )

Vrios agentes fsicos e qumicos podem
afetar a integridade funcional e infectividade dos
vrions, incluindo a temperatura e o pH. A ao
deletria da temperatura sobre a viabilidade dos
vrus possui importncia durante a manipulao
e remessa de material clnico para o diagnstico,
como tambm para a preservao de estoques vi-
rais na rotina laboratorial. Alm disso, pode ser
um fator limitante para a sua disseminao entre
hospedeiros. Temperaturas de 55 a 60C desna-
turam as protenas de superfcie, sobretudo as do
envelope, em poucos minutos, tornando os v-
rions incapazes de interagir produtivamente com
receptores celulares e iniciar a infeco. Tempe-
raturas ambientais altas tambm afetam negati-
vamente a infectividade dos vrus.
Os vrus envelopados so geralmente muito
mais sensveis ao deletria de altas tempera-
turas sobre a infectividade. Alguns vrus, como
os paramixovrus, so particularmente suscep-
tveis a temperaturas ambientais e tambm per-
dem a infectividade quando submetidos a con-
gelamento e descongelamento. A conservao de
vrus em suspenso lquida por longos perodos
deve ser realizada a temperaturas de -70C ou em
nitrognio lquido (-196C). Outra forma segura e
eciente de armazenar vrus por longos perodos
sem perder infectividade por meio de lioliza-
o (dessecao a temperaturas de congelamen-
to) e conservao do material liolizado (p) a
4C ou -20C.
Para vrus em suspenso, temperaturas de 4
a 6C so compatveis com a preservao da in-
fectividade apenas por horas ou poucos dias; tem-
peraturas de 4 ou -20C no so indicadas para
conservao por longos perodos. A resistncia
a diferentes condies de pH varia amplamente;
alguns vrus sem envelope (rotavrus, alguns pi-
cornavrus) mantm a infectividade mesmo em
condies de pH cido e so chamados de cido-
resistentes; outros, sobretudo os envelopados, so
inativados j em pH um pouco abaixo do neutro
(5 a 6) e so chamados de cido-lbeis. Agentes
qumicos que possuem ao desnaturante sobre
protenas e/ou solventes e detergentes lipdicos
possuem ao deletria sobre a infectividade dos
vrus e muitos so utilizados como desinfetantes
de materiais, equipamentos e ambientes. Em ge-
ral, os vrus sem envelope so muito mais resis-
tentes a agentes qumicos e condies ambientais
do que os vrus com envelope.
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Disponvel em: <http://www.ivis.org>. Acesso em: 20 set.
2006.
Anexos

Circoviridae Icosadrico No
15-22 nm,
esfrico-icosadricos
DNA de cadeia simples,
circular, 1.7-2,2kb
Famlia Capsdeo Envelope
Dimenses e morfologia
do vrions
Caractersticas do
genoma
F
I
T
A
S
I
M
P
L
E
S
Parvoviridae Icosadrico No 25nm, icosadricos
DNA de cadeia simples, linear,
seqncias complementares
nas extremidades, flexionadas
sobre si (hairpins), 5 kb
F
I
T
A
D
U
P
L
A
Polyomaviridae Icosadrico No 45nm, esfrico-icosadricos
DNA de cadeia dupla,
circular, superenrolada,
5 kb
Papillomaviridae Icosadrico No 55nm, esfrico-icosadricos
circular, superenrolada,
8 kb
Adenoviridae Icosadrico No 80-110nm, icosadricos
DNA de cadeia dupla, linear,
com uma protena nas
extremidades, 30-44 kb
Herpesviridae Icosadrico Sim
120-200 nm, pleomrficos
ou aproximadamente
esfricos
linear, 120-235 kb
Poxviridae Complexo Sim
170- 200 x 300-450nm,
ovides/retangulares
linear e contnua,
130-375 kb
Iridoviridae/
Asfaviridae
Complexo Sim
175-215nm, quase esfricos
ou com aspecto de prismas
hexagonais
linear e contnua,
170-190kb
Hepadnaviridae Icosadrico Sim
40-48nm, esfricos,
ocasionalmente pleomrficos,
partculas subvirais em excesso
DNA de cadeia parcialmente
dupla (3/4), com as
extremidades pareando entre
si (pseudo-circular), 3.2 kb
Tabela 1.1. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus DNA
Birnaviridae Icosadrica No 60nm, icosadricos
2 segmentos de RNA de cadeia
dupla, lineares, 5.7-5.9kb
Reoviridae Icosadrica No
60-80nm, aproximadamente
esfricos
10, 11 ou 12 segmentos de RNA de
cadeia dupla, lineares, 16-27kb
Retroviridae Icosadrico Sim 80-100nm, esfricos
duas cpias idnticas de RNA,
cadeia simples (+), linear, 7-11kb
Famlia Capsdeo Envelope
Dimenses e morfologia
do vrions
Caractersticas do
genoma
Picornaviridae Icosadrico No
28-30nm,
esfrico-icosadricos
RNA de cadeia simples (+),
linear, 5'IRES, 3'polyA, 7.2 -
8.5kb
Caliciviridae Icosadrico No
30-38nm,
esfrico-icosadricos
linear, protena na ext. 5,
3'polyA, 7.4 -7.7kb
Astroviridae Icosadrico No 28-30nm, esfricos
linear, 3'polyA, 7.2-7.9kb
Coronaviridae Helicoidal Sim
RNA de cadeia simples (+), linear,
5'cap, 3'polyA, 20-32kb
Arteriviridae Icosadrico Sim
50-70nm, aproximadamente
esfricos
linear ,5'cap, 3' polyA, 15kb
Togaviridae Icosadrico Sim 70nm, esfricos
linear, 5'cap, 3'polyA, 9.7-
11.8kb
Flaviviridae Icosadrico Sim 45-60nm, esfrico
linear, 5'cap/IRES,
3'polyA/poliC, 9.5-12.5kb
P
O
L
A
R
I
D
A
D
E
P
O
S
I
T
I
V
A
80-220nm, pleomrficos ou
aproximadamente esfricos
F
I
T
A
S
I
M
P
L
E
S
Paramyxoviridae Helicoidal Sim
150-300nm, pleomrficos,
aproximadamente esfricos,
filamentosos
RNA de cadeia simples (-),
linear, 15-16kb
Rhabdoviridae Helicoidal Sim
70-85 x 130-380 nm, forma
de projtil
linear, 13-16kb
Filoviridae Helicoidal Sim
80 x 780-970nm (at 14.000),
pleomrficos (filamentosos,
forma de U ou 6
linear, 19.1kb
Bornaviridae ? Sim 90nm, esfricos (?)
linear, 8.9kb
?
Orthomyxoviridae Helicoidal Sim
80-120nm, ovides,
filamentosos,
aproximadamente
esfricos, pleomrficos
6 a 8 segmentos de RNA de cadeia
simples, (-), lineares, extremidades
complementares permitem
circularizao, 10-13.6kb
Bunyaviridae Helicoidal Sim
80-120nm, pleomrficos
ou esfricos.
simples (-), lineares, extremidades
complementares permitem
circularizao, 11-21kb
Arenaviridae Helicoidal Sim
50 x 300nm , esfricos ou
pleomrficos
simples (-), lineares, 10-14kb
P
O
L
A
R
I
D
A
D
E
N
E
G
A
T
I
V
A
Tabela 1.2. Caractersticas morfolgico-estruturais dos vrions e do genoma dos vrus RNA
F
I
T
A
D
U
P
L
A
1 Introduo
2 Taxonomia dos vrus
3 Nomenclatura dos vrus
4 Critrios utilizados para a classicao dos vrus
5 Famlias de vrus
5.1 Vrus com genoma DNA
5.1.1 Poxviridae
5.1.2 Asfarviridae
5.1.3 Herpesviridae
5.1.4 Adenoviridae
5.1.5 Papillomaviridae
5.1.6 Polyomaviridae
5.1.7 Parvoviridae
5.1.8 Circoviridae
5.1.9 Hepadnaviridae
5.2 Vrus com genoma RNA de sentido positivo
5.2.1 Picornaviridae
5.2.2 Caliciviridae
5.2.3 Astroviridae
5.2.4 Togaviridae
5.2.5 Flaviviridae
5.2.6 Coronaviridae
5.2.7 Arteriviridae
5.3 Vrus com genoma RNA de sentido negativo no-segmentado
5.3.1 Paramyxoviridae
5.3.2 Rhabdoviridae
5.3.3 Filoviridae
5.3.4 Bornaviridae
CLASSIFICAO E NOMENCLATURA DOS VRUS
Luciane Teresinha Lovato
2

39
39
41
41
42
42
42
43
44
44
45
46
46
47
47
48
48
49
49
50
50
51
51
52
52
52
53
54
5.4 Vrus com genoma RNA de sentido negativo segmentado
5.4.1 Orthomyxoviridae
5.4.2 Bunyaviridae
5.4.3 Arenaviridae
5.5 Vrus com genoma RNA de ta dupla
5.5.1 Reoviridae
5.5.2 Birnaviridae
5.6 Vrus com genoma RNA que realizam transcrio reversa
5.6.1 Retroviridae
57
54
54
54
55
56
56
56
57
57
1 Introduo
Existe um nmero muito grande de vrus
circulando nas diferentes espcies de seres vivos,
desde vrus que infectam bactrias at aqueles
que infectam organismos superiores, como os
mamferos e plantas. Dentre estes, existem vrus
altamente patognicos e outros que no causam
doena nos seus hospedeiros, passando desper-
cebidos. Atualmente, so reconhecidas mais de
1.500 espcies de vrus, que abrangem mais de
30.000 cepas, isoladas ou variantes.
A classicao e nomenclatura dos vrus no
seguem as regras determinadas para os demais
microorganismos. medida que foram sendo
identicados, os vrus foram sendo agrupados de
forma aleatria, de acordo com os aspectos con-
siderados mais importantes pelos grupos que os
identicavam. Nas dcadas de 1950 e 1960, hou-
ve um grande avano na Virologia, resultando
na identicao de um grande nmero de novos
vrus. Com o intuito de determinar regras bsicas
para classicar esses vrus, vrios comits foram
formados, o que acabou gerando uma grande
confuso taxonmica.
Durante o Congresso Internacional de Mi-
crobiologia, realizado em Moscou, em 1966, foi
criado o Comit Internacional para Nomenclatura
de Vrus (ICTV). Esse comit teve a incumbncia
de desenvolver um sistema nico de classicao
e nomenclatura para todos os vrus. At hoje, o
ICTV o rgo que determina as regras a serem
seguidas para a classicao dos vrus at o nvel
de espcie. Esse comit se rene periodicamente,
com o m de revisar e atualizar os critrios de
classicao, de modo que as novas descobertas
biolgicas e moleculares possam ser incorporadas
aos critrios taxonmicos j existentes. Com isso,
a classicao dos vrus nas diversas hierarquias
tornou-se dinmica e pode ser alterada medida
que novas informaes biolgicas ou moleculares
assim o justiquem. A classicao apresentada
neste texto est de acordo com a ltima reviso
do ICTV, datada de 07 de julho de 2007.
2 Taxonomia dos vrus
De acordo com os vrios critrios adotados,
os vrus so classicados hierarquicamente em
ordens, famlias, subfamlias, gneros e espcies.
O suxo virales utilizado para designar a ordem.
Para a denominao de famlia, utiliza-se o suxo
viridae; para subfamlia, utiliza-se virinae; e para
gnero, o suxo virus. Por exemplo, o vrus da
cinomose canina est classicado na ordem Mo-
nonegavirales, famlia Paramyxoviridae, subfamlia
Paramyxovirinae, gnero Morbillivirus e, nalmen-
te, espcie, como vrus da cinomose canina (cani-
ne distemper virus, CDV). As famlias so os agru-
pamentos fundamentais dos vrus, agrupando
agentes que possuem caractersticas estruturais,
morfolgicas, genticas e biolgicas em comum.
Algumas famlias a minoria so agrupadas
em nveis hierrquicos superiores: as ordens. Da
mesma forma, nem todas as famlias so dividi-
das em subfamlias; algumas delas apresentam
o gnero como nvel hierrquico imediatamente
inferior, ou seja, nem todos os vrus so classi-
cados em todos os nveis hierrquicos possveis,
possuindo complexidades de classicao dife-
rentes entre si.
Os vrus que apresentam algumas caracte-
rsticas biolgicas, estruturais e moleculares em
comum so agrupados em uma mesma famlia.
Por exemplo, todos os membros da famlia Her-
pesviridae possuem vrions grandes, com enve-
lope contendo vrias glicoprotenas, capsdeo
icosadrico, uma camada protica denominada
tegumento entre o capsdeo e o envelope. O
genoma composto por uma molcula de DNA
de ta dupla linear. Esses vrus so capazes de
estabelecer infeces latentes em seus hospedei-
ros. Os vrus que apresentam essas caractersticas
(e que por isso compem a famlia Herpesviridae)
podem ser subdivididos em subfamlias, de acor-
do com algumas caractersticas que possuem em
comum e que so diferentes dos outros vrus da
famlia. Os membros da subfamlia Alphaherpes-
virinae possuem um amplo espectro de hospedei-
ros, apresentam um ciclo rpido e ltico em clu-
40 Captulo 2
las de cultivo e estabelecem infeces latentes em
neurnios sensoriais e autonmicos. Essas carac-
tersticas diferem dos membros das outras subfa-
mlias: Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae.
Os vrus de uma famlia ou de uma subfa-
mlia podem ser divididos em gneros, de acordo
com propriedades biolgicas, e, principalmente,
moleculares, como a estrutura e organizao ge-
nmica: a subfamlia Alphaherpesvirinae possui
dois gneros, o Simplexvirus e o Varicellovirus.
Dentro de cada gnero se encontram as espcies,
que so grupos de vrus muito semelhantes entre
si (a exemplo de espcies de animais), mas que
apresentam algumas diferenas que justicam a
sua classicao como vrus diferentes (e tam-
bm diferentes dos vrus do outro gnero). Por
exemplo, no gnero Varicellovirus, encontram-se
classicados os herpesvrus bovinos tipos 1 e 5
(BoHV-1 e BoHV-5), o herpesvrus suno (SuHV-
1) ou vrus da doena de Aujeszky (PRV), entre
outros.
A classicao dos vrus em espcies no
consensual entre os virologistas. A denio de
espcie aceita pelo ICTV foi estabelecida em 1991
e diz o seguinte: espcie de vrus uma classe
polythetic
1
de vrus que constitui uma linha-
gem replicativa e ocupa um nicho ecolgico par-
ticular. Uma classe polythetic denida em ter-
mos de um amplo grupo de critrios sendo que
nenhum dos critrios isoladamente necessrio
ou suciente. Dessa forma, cada membro da clas-
se deve possuir um nmero mnimo de caracte-
rsticas, mas nenhum dos aspectos necessita ser
encontrado em todos os membros de uma classe.
Assim, diferentes caractersticas podem ser usa-
das em diferentes grupos de vrus.
A classicao em subespcies, cepas, va-
riantes e isolados no existe de forma ocial, em-
bora seja reconhecida a sua importncia para o
diagnstico, para estudos biolgicos e molecula-
res e tambm para a produo de vacinas. A se-
guir so apresentadas algumas denies desses
termos.
O termo isolado (ou amostra) refere-se a um
vrus que foi obtido por isolamento de uma de-
terminada fonte de infeco (animal infectado),
1
A traduo para o termo polythetic no consta em di-
cionrios ociais; por esta razo o termo foi escrito na sua
forma original e a denio colocada logo em seguida no
texto.
por exemplo: o SV-299/04 um BoHV-5 isolado
do crebro de um bovino que desenvolveu me-
ningoencefalite no estado do Rio Grande do Sul.
A denominao SV-299/04 foi dada pelo labora-
trio que realizou o isolamento do vrus e refere-
se ao nmero do protocolo. Qualquer vrus que
tenha sido isolado de material clnico e sobre o
qual se conhea pouco, alm de sua identidade,
constitui-se em um isolado ou amostra.
O termo cepa utilizado para designar amos-
tras de vrus que j foram bem caracterizadas e
sobre as quais j se possui certo conhecimento.
A denominao cepa tambm pode ser utilizada
para se referir a isolados de um vrus que podem
apresentar pequenas variaes sem deixar de
pertencer s mesmas categorias taxonmicas. Por
exemplo, o vrus da doena de Newcastle (NDV)
pode apresentar diferentes nveis de virulncia,
dependendo da cepa do vrus que est causan-
do a doena. Existem trs cepas desse vrus em
ordem crescente de virulncia: as lentognicas,
as mesognicas e as velognicas. Assim, aqueles
isolados do vrus que apresentam alta virulncia
pertencem cepa velognica, os que apresentam
virulncia moderada so mesognicos, e os de
baixa virulncia so os lentognicos.
Cepas de referncia so cepas amplamente ca-
racterizadas e reconhecidas nacional ou interna-
cionalmente, que so utilizadas como referncia
para determinado vrus em testes de diagnstico,
pesquisa e para a produo de vacinas. Por exem-
plo, a cepa Cooper do BoHV-1 serve de referncia
para comparaes de isolados desse vrus e am-
plamente utilizada em diagnstico e na produo
de vacinas.
A terminologia wild-type refere-se cepa ori-
ginal do vrus que circula na natureza. No caso
da existncia de mutantes, o wild-type a cepa
que deu origem aos mutantes. Em portugus,
utilizam-se os termos cepa de campo (ou vrus de
campo), no caso dos vrus circulantes na popu-
lao; e cepa original ou parental no caso da pro-
duo e/ou comparao com mutantes. Variantes
ou mutantes so vrus que diferem do wild-type
em alguma caracterstica fenotpica, como, por
exemplo, o vrus da vacina contra a doena de
Aujeszky um mutante de deleo que foi pro-
duzido a partir da cepa Bartha do herpesvrus
suno tipo 1 (SuHV-1).
Classicao e nomenclatura dos vrus 41
3 Nomenclatura dos vrus
No uso formal, as palavras que designam
as famlias, subfamlias e gneros devem iniciar
com letra maiscula e devem ser escritas em it-
lico ou sublinhadas. O nome da espcie do vrus
no deve iniciar com letra maiscula (a no ser
que este nome corresponda a um nome prprio
de regio, cidade etc.) e deve ser escrito com fon-
te normal, sem itlico. No uso formal, a hierar-
quia (txon) deve preceder a unidade taxonmi-
ca. Exemplo: a famlia Parvoviridae; o gnero
Parvovirus.
No uso informal (ou vernacular) os termos
referentes famlia, subfamlia, gnero e espcie
devem ser escritos com letras minsculas, sem
itlico ou sublinhado. Neste caso, o suxo formal
no includo e o nome do txon segue o termo
usado para denir a unidade taxonmica. Escre-
ve-se ento: a famlia dos poxvrus, o gnero
parapoxvirus. O uso informal em portugus
deve suprimir letras que no existam no alfabeto
da lngua portuguesa. Exemplo: para se referir de
forma vernacular aos membros da subfamlia Al-
phaherpesvirinae, deve-se escrever: os alfaherpes-
virus. Os membros da famlia Orthomyxoviridae
devem ser tratados como os ortomixovrus.
No uso informal, o nome do txon , muitas
vezes, suprimido, o que pode resultar em con-
fuses. Isto se deve raiz comum das palavras
utilizadas para denir as unidades taxonmicas
nos diferentes nveis. Dessa forma, dependendo
do contexto, a palavra avivrus pode estar sen-
do usada para referir-se tanto famlia Flavivi-
ridae como ao gnero Flavivirus. Para evitar essa
ambigidade, aconselha-se o uso do txon prece-
dendo o termo usado. Exemplo: vrus do gnero
Flavivirus.
A nomenclatura ocial dos vrus utiliza
abreviaturas, que so constitudas pelas iniciais
do nome da espcie viral. No presente texto, sero
utilizadas as abreviaturas derivadas da nomen-
clatura na lngua inglesa, por exemplo, herpesv-
rus bovino tipo 1 (do ingls bovine herpesvirus type
1, BoHV-1).
No uso informal, muitos vrus podem ser
denominados de duas ou trs formas diferentes,
de acordo com a sua denominao original e com
a nomenclatura ocial preconizada pelo ICTV.
As recomendaes do ICTV so de que a sua
nomenclatura substitua as anteriores, embora
alguns deles continuem a ser denominados pela
nomenclatura tradicional. Citam-se como exem-
plos o SuHV-1, que tambm conhecido como
vrus da doena de Aujeszky (ADV) ou vrus da
pseudoraiva (PRV), e o BoHV-1, que tambm
conhecido como vrus da rinotraquete infecciosa
bovina (IBRV).
Exemplos de nomenclatura de vrus:
a) Formal: famlia: Picornaviridae; gnero:
Aphtovirus; espcie: vrus da febre aftosa (foot and
mouth disease vrus, FMDV);
Vernacular: Os aftovrus so sensveis ao
pH baixo [...].
b) Formal: famlia: Herpesviridae, subfamlia:
Alphaherpesvirinae, gnero: Alphaherpesvirus, es-
pcie: herpesvrus suno tipo 1 (vrus da doena
de Aujezsky);
Vernacular: O vrus da doena de Aujeszky
um alfaherpesvrus [...].
c) Formal: ordem: Mononegavirales; famlia:
Paramyxoviridae; subfamlia: Pneumovirinae; gne-
ro: Pneumovirus, espcie: vrus sincicial respirat-
rio bovino (BRSV);
Vernacular: Os pneumovrus causam do-
ena respiratria [...].
d) Formal: famlia: Flaviviridae; gnero: Fla-
vivirus; espcie: vrus da febre amarela (YFV);
Vernacular: O vrus da febre amarela um
avivrus transmitido por mosquitos.
4 Critrios utilizados para a
classicao dos vrus
A evoluo nos mtodos de deteco e ca-
racterizao dos vrus determinou uma evoluo
nos critrios utilizados para a sua classicao.
A diferenciao entre vrus e os demais micro-
organismos foi o primeiro passo na classicao
dos agentes virais e essa diferena foi determi-
nada, inicialmente, pela ltrabilidade dos vrus.
Enquanto as bactrias eram retidas no ltro, os
vrus passavam por ele, surgindo a denominao
de agentes ltrveis.
42 Captulo 2
No incio, as caractersticas ecolgicas e de
transmisso, sinais clnicos da doena e tropis-
mo por determinado rgo ou tecido foram os
critrios utilizados na classicao dos vrus. O
desenvolvimento da microscopia eletrnica pos-
sibilitou a classicao de acordo com a morfo-
logia das partculas virais. Ao longo dessa evo-
luo, outras caractersticas foram sendo mais
conhecidas e consideradas para descrever os
vrus. Aspectos como a composio qumica, o
tipo de genoma, distribuio geogrca, vetores,
estabilidade e antigenicidade dos vrus foram
adquirindo importncia. Atualmente as tcnicas
de biologia molecular tm sido utilizadas para
renar e detalhar a classicao dos vrus, espe-
cialmente o seqenciamento e comparao entre
seqncias do genoma. Estratgias de expresso
gnica, homologia de nucleotdeos entre seqn-
cias correspondentes, estrutura e funes de pro-
tenas virais tambm foram incorporadas aos cri-
trios de classicao dos vrus.
De acordo com o ICTV, as seguintes carac-
tersticas so atualmente levadas em considera-
o para classicar os vrus em ordem, famlias,
subfamlias e gneros: tipo de cido nuclico e
organizao do genoma, estratgia de replicao
e estrutura do vrion.
A classicao em espcies, embora no re-
gulamentada pelo ICTV, segue os seguintes cri-
trios:
a) homologia da seqncia do genoma;
b) hospedeiros naturais;
c) tropismo de tecido e clulas;
d) patogenicidade e citopatologia;
e) forma de transmisso;
f) propriedades fsico-qumicas;
g) propriedades antignicas.
Uma outra classicao prtica, no ocial,
regularmente usada entre os virologistas. Nes-
se caso, so levados em considerao os critrios
epidemiolgicos e/ou clnico-patolgicos para
agrupar os vrus. De acordo com esse critrio, os
vrus so classicados em:
a) respiratrios: vrus que penetram no
hospedeiro por inalao e produzem infeco e
doena primariamente no trato respiratrio. Ex:
rinovrus, calicivrus;
b) entricos: vrus que penetram pela via
oral e replicam no trato intestinal. Ex: coronav-
rus, rotavrus;
c) arbovrus: vrus que replicam e so trans-
mitidos por vetores artrpodos. Ex: vrus da en-
cefalites eqinas leste e oeste;
d) vrus oncognicos: vrus com potencial
para induzir transformao celular e tumores nos
hospedeiros. Ex: retrovrus, papilomavrus.
5 Famlias de vrus
A seguir sero apresentadas as famlias de
vrus que contm patgenos de animais (Figuras
2.1 a 2.25). Em cada gnero, sero mencionados
os principais vrus que causam doenas em ani-
mais de interesse para a medicina veterinria, ou
seja, animais de produo e animais de compa-
nhia. Tambm sero citados os principais patge-
nos humanos. Cabe ressaltar, por essa razo, que
esta lista no se constitui na relao completa dos
vrus de cada famlia.

5.1 Vrus com genoma DNA
5.1.1 Famlia: Poxviridae
Subfamlia: Chordopoxvirinae (infectam ver-
tebrados)
Gneros:
Orthopoxvirus: vrus da vaccinia (VACV),
poxvrus bovino (varola bovina), vrus da ectro-
melia (camundongos);
Parapoxvirus: vrus do ectima contagioso
dos ovinos (ORFV), vrus da estomatite papular
bovina (BPSV);
Avipoxvirus: vrus da bouba aviria
(FWPV), poxvrus do canrio (CNPV);
Capripoxvirus: poxvrus dos caprinos
(GTPV), poxvrus dos ovinos (SPPV), vrus da
doena Lumpy Skin (LSDV);
Leporipoxvirus: vrus do mixoma de coelhos
(MYXV), vrus do broma de coelhos (RFV);
Suipoxvirus: poxvrus suno (SWPV);
Molluscipoxvirus: vrus do molusco conta-
gioso (MOCV);
Yatapoxvirus: vrus Tanapox (TANV) e Ya-
tapox dos macacos (YMTV).
Subfamlia: Entomopoxvirinae (infectam inse-
tos)
Gneros:
Alphaentomopoxvirus;
Betaentomopoxvirus;
Gammaentomopoxvirus.
Os poxvrus so os maiores vrus de ani-
mais. Os vrions possuem uma forma retangular
ou ovide, com simetria complexa e, geralmente,
possuem envelope lipdico (algumas partculas
podem no possuir). As dimenses das partcu-
las virais podem variar de 220 a 450 nm de ex-
tenso x 140 a 260 nm de largura x 140 a 260 nm
de espessura. O genoma consiste de uma nica
molcula de DNA, linear, cadeia dupla, com 130
a 375 kbp. Esses vrus trazem, nos vrions, um
nmero considervel de enzimas e fatores auxi-
liares; e realizam o ciclo replicativo inteiramente
no citoplasma das clulas hospedeiras. A maio-
ria das doenas produzidas por esses vrus ca-
racteriza-se pela formao de leses vesiculares
e crostosas na pele e/ou mucosas dos animais.
O vrus da varola humana (smallpox) o mais
importante vrus dessa famlia. Dentre os pat-
genos de animais domsticos, o mais comum em
nosso meio o ORFV, uma doena caracterizada
por leses vesiculares e pustulares na regio dos
lbios, narinas e cascos.
5.1.2 Famlia: Asfarviridae
Gnero: Asvirus
Espcie: vrus da peste suna africana
(AFSV).
O ASFV o nico vrus classicado nessa
famlia. Os vrions do ASFV possuem envelope
lipoprotico e um capsdeo icosadrico formado
por 1.892 a 2.172 unidades estruturais. O dime-
tro das partculas virais varia entre 175 e 215 nm.
O genoma consiste de uma molcula de DNA
de cadeia dupla linear, com 170 a 190 kb. O v-
rus replica no citoplasma da clula hospedeira.
O ASFV transmitido por carrapatos do gnero
Ornithodoros, constituindo-se no nico arbovrus
entre os vrus DNA. Esse vrus mantido na na-
tureza em sudeos selvagens e, ocasionalmente,
transmitido aos sunos domsticos. O vrus en-
contrado na frica, mas j foi esporadicamente
introduzido na Europa, onde causou doena em
sunos de alguns pases. A peste suna africana
caracterizada pela produo de hemorragias,
principalmente nos rgos linfides. O nico re-
lato da doena no Brasil ocorreu em 1978, no Rio
de Janeiro. Atualmente o ASFV considerado
extico no Pas.
Figura 2.1. Fotografia de microscopia eletrnica de
vrions da famlia Poxviridae.
Fonte: Dr Stewart McNulty (web.qub.ac.uk).
Figura 2.2. Fotografia de microscopia eletrnica de um
vrionda famlia Asfarviridae(ASFV).
Fonte: Dra Sharon Brookes, Pirbright, UK (ICTVdB).
44 Captulo 2
5.1.3 Famlia: Herpesviridae
Subfamlia: Alphaherpesvirinae
Gneros:
Simplexvirus: herpesvrus bovino tipo 2
(BoHV-2) ou vrus da mamilite herptica (BMH),
herpesvrus B (macacos), vrus do herpes simplex
humano (HSV-1, HSV-2);
Varicellovirus: BoHV-1 ou vrus da rinotra-
quete (IBRV), BoHV-5, SHV-1 ou PRV, herpesv-
rus eqino tipos 1, 3 e 4 (EHV-1, EHV-3, EHV-4),
herpesvrus canino 1 (CaHV-1), herpesvrus feli-
no tipo 1 (vrus da rinotraquete felina, FeHV-1),
herpesvrus caprino tipo 1 (CpHV-1);
Mardivirus: vrus da doena de Marek;
Iltovirus: vrus da laringotraquete infec-
ciosa das galinhas (ILTV);
Subfamlia: Betaherpesvirinae
Gneros:
Cytomegalovirus: citomegalovrus suno;
Muromegalovirus: citomegalovrus do ca-
mundongo 1;
Roseolovirus: herpesvrus humano 6 (HHV-
6).
Vrios betaherpesvrus animais ainda no
foram classicados em gneros.
Subfamlia: Gammaherpesvirinae
Gneros:
Linphocriptovirus: vrus Epstein-Barr (EBV)
humano;
Rhadinovirus: vrus da febre catarral malig-
na (MCFV);
Ictalurivirus: herpesvrus do catsh de ca-
nal.
A famlia Herpesviridae abriga um grupo
grande e diverso de vrus encontrados em vir-
tualmente todas as espcies de vertebrados. Os
vrions contm envelope, capsdeo icosadrico e
o dimetro pode variar entre 120 e 300 nm. Entre
o capsdeo e o envelope, existe uma camada pro-
tica denominada tegumento. O genoma consiste
de uma molcula de DNA de cadeia dupla linear,
com 120 a 250 kb. Os vrus dessa famlia possuem
uma importante propriedade biolgica em co-
mum, que a capacidade de estabelecer infeces
latentes nos seus hospedeiros. Embora todos os
herpesvrus apresentem algumas caractersticas
em comum, os vrus das trs subfamlias apresen-
tam diferenas biolgicas e moleculares. Os vrus
da subfamlia Alphaherpesvirinae apresentam um
ciclo replicativo rpido e ltico em cultivo celu-
lar, estabelecem infeces latentes em neurnios
e produzem leses vesiculares em membranas
mucosas. Vrios vrus animais so classicados
nessa subfamlia, cujo prottipo o HSV-1. Os
vrus da subfamlia Betaherpesvirinae apresentam
uma replicao lenta em cultivo celular e estabe-
lecem infeces latentes em glndulas secretrias
e no tecido linforeticular. O herpesvrus huma-
no tipo 5 (HHV-5) ou citomegalovrus humano
(CMV) o prottipo dessa subfamlia. Os vrus
da subfamlia Gammaherpesvirinae infectam lin-
fcitos de forma ltica ou latente e alguns deles
possuem potencial oncognico. Nesta subfamlia,
est classicado apenas um patgeno de animais,
o MCFV, uma doena sistmica de bovinos. O
EBV, agente de mononucleose e tumores em hu-
manos, o prottipo dessa subfamlia.
5.1.4 Famlia: Adenoviridae
Gneros:
Mastadenovirus: vrus da hepatite infeccio-
sa canina (CAdV-1), vrus da traqueobronquite
infecciosa canina (CAdV-2), adenovrus sunos
(SAV-1-9), adenovrus bovinos (BAV-1-9), ade-
novrus eqino (EAV-1 e 2);
Aviadenovirus: vrus da sndrome da queda
de postura;
Atadenovirus: adenovrus ovino D;
Siadenovirus: adenovrus dos perus B.
vrionda famliaHerpesviridae (HSV-1).
Fonte: Dra Linda Stannard (web.uct.ac.za).
Deltapapillomavirus: papilomavrus do alce
europeu (EEPV), papilomavrus de cervdeos
(DPV), papilomavrus bovino (BPV-1 e BPV-2) e
papilomavrus ovino (OvPV-1 e OvPV-2);
Epsilonpapillomavirus: papilomavrus bovi-
no tipo 5 (BPV-5);
Zetapapillomavirus: papilomavrus eqino
1 (EcPV-1);
Etapapillomavirus: papilomavrus de aves
(FcPV);
Thetapapillomavirus: papilomavrus dos
psitacdeos (PePV);
Iotapapillomavirus: papilomavrus dos Mas-
tomys natalensis (MNPV);
Kappapapillomavirus: papilomavrus dos
coelhos (CRPV e ROPV);
Lambdapapillomavirus: papilomavrus oral
canino (COPV), papilomavrus felino (FDPV);
Mupapillomavirus: papilomavrus humano
(HPV-1 e HPV-63);
Nupapillomavirus: papilomavrus humano
41 (HPV-41);
Pipapillomavirus: papilomavrus oral do
hamster (HaOPV);
Xipapillomavirus: papilomavrus bovinos
(BPV-3, BPV-4 e BPV-6);
Omikronpapillomavirus: papilomavirus dos
cetceos (PsPV).
Os adenovrus possuem vrions icosadricos
grandes (dimetro de 80 a 100 nm), sem envelope
e apresentam bras de 9 a 35 nm nos vrtices. O
capsdeo envolve uma nica molcula de DNA
de cadeia dupla linear, com 36 a 44 kb. Os adeno-
vrus replicam no ncleo das clulas hospedeiras
e, como alguns outros vrus DNA, a transcrio
dos genes realizada pela maquinaria clula e
ocorre de forma ordenada. Alguns produtos dos
genes virais interferem com o controle do ciclo ce-
lular, e alguns adenovrus possuem potencial on-
cognico. O vrus tambm codica produtos que
antagonizam os mecanismos inatos da resposta
imunolgica. Os adenovrus so encontrados em
humanos, diversas espcies de mamferos e aves
e, em geral, so pouco patognicos. Quando as-
sociados com manifestaes clnicas, geralmente
esto envolvidos em sinais respiratrios leves em
animais e humanos. A doena de maior reper-
cusso causada por esses vrus em animais pro-
vavelmente seja a hepatite infecciosa canina. Os
adenovrus tm sido intensivamente estudados
como vetores para terapia gentica e vacinas.
5.1.5 Famlia: Papillomaviridae
Gneros:
Alphapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-32);
Betapapillomavirus: vrios papilomavrus
humanos (prottipo: HPV-5);
Gammapapillomavirus: vrios papilomav-
rus humanos (prottipo: HPV-4);
Os papilomavrus so vrus pequenos, sem
envelope, com 52 a 55 nm de dimetro e simetria
icosadrica. O capsdeo formado por 72 cap-
Figura 2.4. Fotografia de microscopia eletrnica de vrions
dafamlia Adenoviridae.
Fonte: Dra Cornelia Bchen-Osmond (ICTVdB).
vrion da famlia (Papilomavrus
humano).
Papillomaviridae
Fonte: www.oralcancerfoundation.org
46 Captulo 2
smeros, envolvendo o DNA circular de cadeia
dupla de aproximadamente 8 kbp. Os vrus re-
plicam no ncleo de clulas epiteliais do tecido
descamativo, e as sucessivas etapas da replica-
o ocorrem em clulas com estgios diferentes
de diferenciao. As etapas nais da replicao
ocorrem apenas nas clulas maduras das cama-
das granulosa e crnea da pele. Os papilomav-
rus so agentes etiolgicos dos papilomas, tam-
bm denominados verrugas, que consistem em
leses nodulares na pele e mucosas de animais
e humanos. Alguns desses vrus podem induzir
a produo de tumores malignos. Esse problema
particularmente importante no caso das verru-
gas genitais humanas, tambm conhecidas como
condilomas. Existem mais de 60 sorotipos dife-
rentes de papilomavrus causando doenas em
humanos, e alguns deles so considerados de alto
risco para a produo de tumores, como o caso
dos HPV 16 e HPV 18, que esto envolvidos no
desenvolvimento de cncer de colo de tero em
mulheres. As espcies bovina, eqina e canina
so as mais freqentemente afetadas por papilo-
mas, no entanto, o desenvolvimento de tumores
malignos nessas espcies no comum. A parti-
cipao de papilomavrus na induo de tumores
em animais parece ser limitada ao carcinoma de
esfago, induzido pela ingesto de samambaia
em bovinos.
5.1.6 Famlia: Polyomaviridae
Gnero:
Polyomavirus: vrus smio 40 (SV-40), polio-
mavrus de camundongos (PoV), vrus BK (hu-
manos), vrus JC (humanos), vrios poliomavrus
de mamferos e aves.
Os poliomavrus esto entre os menores
vrus DNA. Possuem vrions icosadrico-esf-
ricos com 45 nm, sem envelope, e uma molcu-
la de DNA de ta dupla circular como genoma
(5 kb). Os vrions so compostos por 72 caps-
meros, formados por trs protenas: VP1, VP2 e
VP3. O genoma est associado com histonas ce-
lulares, formando uma estrutura semelhante
cromatina celular. A famlia Polyomaviridae era
classicada anteriormente como uma subfamlia
da Papovaviridae, cuja denominao derivava dos
vrus prottipos: Pa (papilomavrus de coelhos);
po (poliomavrus de camundongos) e va (agente
vacuolizante, SV-40). Atualmente, os poliomav-
rus e o prottipo SV-40 so classicados separa-
damente, na famlia Polyomaviridae. O interesse
maior nesses vrus iniciou-se com a descoberta
de que o SV-40 e outros poliomavrus eram ca-
pazes de produzir tumores em hamsters (por
isso foram denominados pequenos vrus DNA
tumorais). Embora estudos extensivos realizados
durante dcadas no tenham sido capazes de de-
monstrar associao entre o SV-40 e tumores hu-
manos, estudos recentes demonstraram a presen-
a de seqncias de DNA e antgenos do SV-40
em certos tumores raros em humanos, renovando
o interesse por esse vrus. Os poliomavrus foram
muito estudados como modelos para Virologia
e biologia molecular. O prottipo da famlia o
SV-40, um vrus encontrado como contaminante
de vacinas contra a poliomielite nos anos 1950.
5.1.7 Famlia: Parvoviridae
Subfamlia: Parvovirinae
Gneros:
Parvovirus;
Patgenos animais: parvovrus canino ti-
pos 1 e 2 (CPV-1; CPV-2), parvovrus felino (vrus
da panleucopenia felina, FPLV), parvovrus su-
no (PPV), parvovrus bovino (BPV);
Erythrovirus: vrus B19 humano;
vrions da famlia Polyomaviridae.
Fonte: PHIL Library, CDC.
Dependovirus: vrus adeno-associado 2
(AAV);
Amdovirus: Aleutian mink disease virus;
Bocavirus: parvovrus bovino, vrus minu-
to dos ces.
tivas na suinocultura. O parvovrus humano B-16
tem sido associado com abortos em mulheres.
5.1.8 Famlia: Circoviridae
Gneros:
Circovirus: circovrus suno tipos 1 e 2
(PCV-1; PCV-2), vrus da doena das penas e bi-
cos dos psitacdeos (BFDV), circovrus dos pom-
bos (PiCV), circovrus dos gansos (GoCV), circo-
vrus do canrio (CaCV);
Gyrovirus: vrus da anemia das galinhas
(CAV).
Os vrus dessa famlia so os menores vrus
conhecidos que infectam animais. O dimetro
dos vrions, que no possuem envelope, pode va-
riar entre 17 e 22 nm. Esses vrions apresentam
uma aparncia esfrica microscopia eletrnica.
O ncleo do vrion formado por uma molcula
de DNA circular de cadeia simples. A replicao
viral ocorre no ncleo da clula hospedeira, na
fase S do ciclo celular. Essa famlia possui um
nmero pequeno de patgenos animais, entre os
quais o agente da CAV e o vrus da doena debi-
litante dos leites (PCV-2). Circovrus tambm j
foram identicados em humanos.
Subfamlia: Densovirinae
Gneros:
Densovirus: densovrus da Junonia coenia;
Iteravirus: densovrus da Bombyx mori;
Brevidensovirus: densovrus do mosquito
Aedes aegypti;
Pefudensovirus: densovrus da Periplaneta
fuliginosa.
Os parvovrus so vrus muito pequenos e,
at h pouco tempo, eram considerados os meno-
res vrus de animais e/ou humanos. Os vrions
possuem um dimetro de 25 nm, no possuem
envelope e apresentam uma aparncia esfrica
microscopia eletrnica. Os vrus dessa famlia
apresentam um DNA de cadeia simples linear
de, aproximadamente, 5.2 kb. Alguns membros
dessa famlia necessitam de uma co-infeco vi-
ral para realizar a sua replicao (Dependovirus),
o que no o caso do gnero Parvovirus, no qual
esto classicados importantes patgenos de ani-
mais e humanos. A replicao ocorre no ncleo
de clulas que esto em processo de mitose, mais
especicamente na fase S do ciclo celular. Os
principais agentes de doena dessa famlia so os
parvovrus que causam doenas gastroentricas
em caninos e felinos. O parvovrus suno um
importante agente etiolgico de perdas reprodu-
5.1.9 Famlia: Hepadnaviridae
Gneros:
Orthohepadnavirus: vrus da hepatite B hu-
mana (HBV), vrus do esquilo do solo (GSHV),
da famliaParvoviridae.
dafamlia Circoviridae.
Fonte: Dr Stewart McNulty (web.qub.ac.uk).
48 Captulo 2
vrus das marmotas (WHV) e outros recentemen-
te identicados em vrias espcies;
Avihepadnavirus: vrus da hepatite B dos
marrecos (DHBV).
5.2 Vrus com genoma RNA
de sentido positivo
5.2.1 Famlia: Picornaviridae
Gneros:
Enterovirus: enterovrus bovinos 1 e 2
(BEV-1, BEV-2), enterovrus suno 1-13 (PEV-1-
13), poliovrus (PV);
Rhinovirus: rinovrus bovino 1-3, rhinov-
rus humanos (HRV-2-100);
Hepatovirus: vrus da hepatite A humano
(HAV);
Cardiovirus: vrus da encefalomiocardite
murina Theiler (EMCV);
Aphtovirus: vrus da febre aftosa (FMDV);
Parechovirus: parechovrus humano;
Erbovirus: vrus da rinite eqina B (ERBV);
Kobuvirus: Aichi vrus (AiV);
Teschovirus: teschovirus suno 1 (PTV).
Os vrus da famlia Hepadnaviridae causam
hepatite em humanos e em algumas espcies de
animais. Esses vrus freqentemente estabele-
cem infeco persistente, e a persistncia viral no
hospedeiro est associada com cirrose heptica
e hepatocarcinoma. As clulas infectadas pelos
hepadnavrus produzem trs tipos de partculas
vricas: os vrions completos possuem um dime-
tro de 42-47 nm e so compostos por um nucle-
ocapsdeo icosadrico envolto por um envelope
lipoprotico. Partculas esfricas e lamentosas,
compostas apenas pelas protenas do envelope e
pores da membrana plasmtica, tambm so
produzidas pelas clulas infectadas. O genoma
viral composto por uma molcula de DNA cir-
cular de cadeia parcialmente dupla. O ciclo repli-
cativo dos hepadnavrus ocorre parte no ncleo e
parte no citoplasma da clula hospedeira e envol-
ve uma etapa de transcrio reversa. Os hepad-
navrus possuem tropismo marcante por clulas
hepticas e, freqentemente, produzem infeces
hepticas persistentes/crnicas. O HBV o ni-
co patgeno humano classicado nessa famlia.
O vrus animal mais conhecido dessa famlia
o DHBV, que causa uma doena muito similar
hepatite B humana.
Os picornavrus possuem vrions esfricos
pequenos, no-envelopados, com 28 a 30 nm de
dimetro. O capsdeo icosadrico formado por
60 cpias de cada uma das quatro protenas VP1,
VP2, VP3 e VP4. Alm das protenas do capsdeo,
cada vrion possui tambm uma protena deno-
minada VPg, associada ao cido nuclico na ex-
tremidade 5. O genoma composto de uma ca-
deia simples de RNA, de sentido positivo de 7.2 a
8.4 kb. A replicao do vrus ocorre inteiramente
vrions da famlia Hepadnaviridae(vrus da hepatite B).
vrions da famlia Picornaviridae (poliovrus).
Fonte: www.vetsciences.free.fr
no citoplasma, e o RNA traduzido diretamente
pelos ribossomas. A infeco geralmente aguda
e citoltica, ocorrendo a liberao dos vrions pela
lise celular. Essa famlia contm vrios patge-
nos muito importantes para humanos e animais,
como o vrus da poliomielite, o vrus da hepatite
A, os rinovrus, os enterovrus, o FMDV, entre
outros.
5.2.2 Famlia: Caliciviridae
Gneros:
Vesivirus: calicivrus felino (FCV), vrus do
exantema vesicular dos sunos (SVEV), vrus dos
lees marinhos de San Miguel (SMSV);
Lagovirus: vrus da doena hemorrgica
dos coelhos (RHDV), vrus da doena hemorr-
gica das lebres pardas (EBHSV);
Norovirus: vrus de Norwalk (humano);
Sapovirus: vrus de Sapporo (humano).
ta uma protena (VPg) covalentemente ligada na
extremidade 5. Em clulas infectadas, tambm
detectado um RNA subgenmico de 2.2 a 2.4 kb.
A replicao do vrus ocorre no citoplasma, e os
vrus so liberados por lise celular. O patgeno
animal mais conhecido dessa famlia o caliciv-
rus felino, associado com doena respiratria em
gatos. Um calicivrus (norovrus) tem sido consi-
derado um dos principais agentes de diarria em
pessoas de todas as idades.
5.2.3 Famlia: Astroviridae
Gneros:
Mamastrovirus: astrovrus humanos e de
vrias espcies de animais domsticos;
Avastrovirus: astrovrus dos perus.
Os astrovrus so pequenos, com 28 a30 nm
de dimetro, sem envelope e com capsdeo ico-
sadrico. A superfcie de algumas partculas v-
ricas apresenta estruturas que lembram estrelas
de cinco ou seis pontas, o que originou o nome
da famlia. A replicao ocorre no citoplasma, e
os vrus so liberados por lise celular. Os astro-
vrus tm sido isolados de casos de gastrenterite
de bovinos, sunos, ces, gatos, perus, patos e hu-
manos. Na grande maioria das espcies, a doena
se manifesta como uma diarria passageira e ra-
ramente h complicaes. Entretanto, em patos,
uma hepatite com altos ndices de mortalidade
tem sido descrita.
Os calicivrus so vrus pequenos (dimetro
entre 30 a 40 nm) sem envelope. O capsdeo for-
mado por 60 cpias de uma nica e grande pro-
tena. microscopia eletrnica, o vrus apresenta
depresses caractersticas na superfcie, que lem-
bram copos ou clices, o que originou a denomi-
nao da famlia. O genoma consiste de um cido
nuclico RNA linear de cadeia simples e sentido
positivo, com extenso de 7.4 a 7.7 kb. Semelhante
aos picornavrus, o RNA dos calicivrus apresen-
vrions dafamliaCaliciviridae.
Fonte: www.fli.bund.de
vrions dafamlia Astroviridae.
50 Captulo 2
5.2.4 Famlia: Togaviridae
Gneros:
Alfavirus: vrus das encefalites eqinas
do leste (EEEV), oeste (WEEV) e venezuelana
(VEEV), alm de outros arbovrus zoonticos (Se-
mliki Forest virus, SFV; Ross River virus, RRV;
Sindbis, SIN);
Rubivirus: vrus da rubola (humano).
Os togavrus possuem vrions esfricos, com
dimetro aproximado de 70 nm. O capsdeo
envolto por um envelope lipdico que apresenta
peplmeros formados por duas glicoprotenas.
O genoma consiste de uma molcula de RNA li-
near, de sentido positivo, com extenso de 9,7 a
11.8 kb. As protenas no-estruturais so sinteti-
zadas a partir de uma poliprotena traduzida di-
retamente do RNA genmico. As protenas no-
estruturais so produzidas pela traduo de um
mRNA subgenmico, sintetizado a partir de uma
cpia de RNA de sentido anti-genmico. A repli-
cao ocorre inteiramente no citoplasma e a libe-
rao da prognie viral ocorre por brotamento na
membrana plasmtica. Os Alfavirus so transmi-
tidos por insetos e a maioria deles zoontica.
Os EEEV, WEEV e VEEV de maior importncia
para a Veterinria esto classicados no gnero
Alfavirus. O vrus da rubola, tambm classica-
do nessa famlia, um agente que infecta exclusi-
vamente humanos.
5.2.5 Famlia: Flaviviridae
Gneros:
Flavivirus: vrus da febre amarela (YFV, hu-
mano e de primatas), vrus da dengue (humano),
vrus da encefalite japonesa (JEV), vrus Murray
Valley (MVEV), vrus do Nilo Ocidental (WNV),
vrus Wesselsbron (WBV), vrus do Louping Ill.
Com possvel exceo do vrus da dengue, os de-
mais vrus so zoonticos;
Pestivirus: vrus da diarria viral bovina
tipos 1 e 2 (BVDV-1; BVDV-2), vrus da peste su-
na clssica (CSFV), vrus da doena da fronteira
(BDV);
Hepacivirus: vrus da hepatite C (humano).
Os membros da famlia Flaviviridae possuem
vrions envelopados, com capsdeo possivel-
mente icosadrico e com 45-60 nm de dimetro.
Apresentam um genoma RNA linear de sentido
positivo (9.5 a 12.5 kb), que traduzido em uma
poliprotena, posteriormente clivada nas prote-
nas individuais por enzimas virais e celulares. O
genoma organizado de forma semelhante em
todos os membros da famlia, com as protenas
estruturais codicadas no primeiro tero (extre-
midade 5) e as no-estruturais nos teros nais
(extremidade 3). No gnero Flavivrus, esto
classicados vrios agentes de doenas hemor-
rgicas e encefalites transmitidas por mosquitos,
entre elas o YFV, o vrus da dengue e o WNV. Im-
vrions da famlia Flaviviridae (vrus do Nilo Ocidental).
Fonte: Dra Tuli Mukhopadnyay (ICTVdB).
vrions dafamlia Togaviridae.
portantes patgenos para a medicina veterinria
so classicados no gnero Pestivrus, entre eles o
BVDV e o CSFV. O vrus da hepatite C de huma-
nos o nico membro do gnero Hepacivirus.
5.2.6 Famlia: Coronaviridae
capsdeo helicoidal, que possui uma molcula de
RNA linear de cadeia simples e sentido positivo.
Dentre os vrus RNA, os coronavrus possuem o
maior genoma, podendo variar de 27 a 32 kb. A
sntese de um grupo de RNAs subgenmicos du-
rante a replicao viral na clula infectada um
aspecto comum aos vrus dessa famlia, assim
como aos demais vrus da ordem Nidovirales. A
replicao ocorre inteiramente no citoplasma. Es-
ses vrus causam importantes doenas entricas
em animais, incluindo a gastrenterite transmis-
svel dos sunos (TGE) e a peritonite infecciosa
dos felinos (FIP). Os coronavrus humanos esto
associados principalmente com os resfriados co-
muns. O vrus da SARS, agente de doena respi-
ratria severa na sia entre 2003 e 2004, tambm
classicado nessa famlia.
5.2.7 Famlia: Arteriviridae
Ordem: Nidovirales
Gnero:
Arterivirus: vrus da arterite eqina (EVAV),
vrus elevador da lactato desidrogenase (LDEV),
vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos
sunos (PRRSV).
Ordem Nidovirales
Gnero:
Coronavirus: vrus da bronquite infecciosa
das aves (IBV), coronavrus dos perus (TCoV),
vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos
(TGEV), coronavrus felino (FeCoV), vrus da pe-
ritonite infecciosa felina (FIPV), coronavrus ca-
nino (CCoV), coronavrus bovino (BCoV), coro-
navrus humano (HuCoV), vrus da pneumonia
asitica (SarsCoV humano);
Torovirus: torovrus eqino (EToV), torov-
rus bovino (BToV), torovrus suno (SToV), toro-
vrus humano (HToV), vrus Berne (BeV), vrus
Breda (BrV).
A morfologia dos vrions, quando obser-
vada ao microscpio eletrnico, deu origem ao
nome da famlia. Os vrions do gnero Corona-
vrus possuem dimetro de 80 a 220 nm e forma
esfrica; os do gnero Torovrus, de 120 a 140 nm
e aparncia bacilar ou na forma de rim. Vrus de
ambos os gneros apresentam envelope lipdico
com peplmeros que se projetam externamente
por at 20 nm, e que do ao vrion o aspecto de
coroa. Os coronavrus apresentam um nucleo-
O nome dessa famlia originou-se da patolo-
gia induzida por esses vrus em eqinos, a arteri-
te. Os arterivrus apresentam dimetro de 50 a 70
nm e possuem envelope. O genoma consiste de
uma molcula de RNA linear de sentido positivo,
vrions da famlia Coronaviridae (SARS CoV).
vrions da famlia Arteriviridae (PRRSV).
Fonte: Dr D. Robinson, South Dakota State University.
52 Captulo 2
com extenso entre 13 e 15 kb. De forma similar
ao que ocorre com os coronavrus, RNAs sub-
genmicos so produzidos durante a replicao
desses vrus no citoplasma das clulas infectadas.
A liberao dos vrus se d por exocitose aps
brotamento dentro de vesculas no citoplasma.
Alm do vrus da arterite eqina, est tambm
classicado nessa famlia o PRRSV. Ambas as do-
enas so consideradas ocialmente exticas no
Brasil. Entretanto, estudos sorolgicos demons-
traram a presena de anticorpos contra o EVAV
em eqinos de alguns estados brasileiros.
5.3 Vrus com genoma RNA de sentido
negativo no-segmentado
5.3.1 Famlia: Paramyxoviridae
Ordem: Mononegavirales
Subfamlia: Paramyxovirinae
Gneros:
Respirovirus: vrus da parainuenza bovi-
na tipo 3 (bPI-3V), vrus Sendai (camundongos);
Morbillivirus: vrus da cinomose canina
(CDV), vrus da peste bovina (Rinderpest), vrus
da peste dos pequenos ruminantes, morbilivrus
dos golnhos, morbilivrus de focas (PhDV), v-
rus do sarampo (humanos);
Rubulavirus: vrus da parainuenza canina
tipo 2 (cPIV-2), vrus da caxumba (humanos);
Henipavirus: vrus Hendra (HeV), vrus Ni-
pah (NiV);
Avulavirus: vrus da doena de Newcastle
(NDV), paramixovrus das aves 2 a 9 (APMV-2-
9).
Subfamlia: Pneumovirinae
Gneros:
Pneumovirus: vrus sincicial respiratrio
bovino (BRSV) e humano (hRSV);
Metapneumovirus: metapneumovrus das
aves AMPV (vrus da rinotraquete dos perus).
Os vrus dessa famlia so grandes, pleo-
mrcos, envelopados, com dimetro variando
de 150 a 350 nm. Possuem um genoma RNA li-
near de sentido negativo, cadeia simples, com
16 a 20 kb. No envelope, so encontradas as gli-
coprotenas hemaglutinina (HN) e de fuso (F).
Em alguns vrus, as glicoprotenas de superfcie
apresentam tambm uma atividade de neura-
minidase. A hemaglutinina a protena viral
responsvel pela ligao ao receptor celular, e a
protena F realiza a fuso do envelope viral com
a membrana da clula. A replicao e reunio dos
componentes virais ocorrem no citoplasma, e a
liberao feita por brotamento da membrana
plasmtica. Na partcula viral, tambm so en-
contradas algumas cpias da enzima polimerase,
que necessria para iniciar a replicao do v-
rus. Esses vrus esto associados principalmente
com doenas respiratrias e foram identicados
apenas em mamferos e aves. Alguns morbiliv-
rus podem causar infeco persistente. Entre os
vrus classicados nessa famlia e que causam
doena em animais incluem-se o CDV e o NDV
em aves, entre outros. O hRSV, o vrus do saram-
po e da caxumba so patgenos importantes de
humanos.
5.3.2 Famlia: Rhabdoviridae
Ordem: Monegavirales
Gneros:
Vesiculovirus: vrus da estomatite vesicular
(VSV), vrios outros vrus isolados de insetos, al-
guns que infectam mamferos;
Lyssavirus: vrus da raiva (RV), lissavrus
de morcegos Lagos;
Efemerovirus: vrus da febre efmera dos
bovinos (BEFV);
vrions da famlia Paramyxoviridae (vrus Sendai).
Fonte: Dr Samuel Baron (ICTVdB).
Novirhabdovirus: vrus da necrose hemato-
poitica infecciosa (HNV);
Cytorhabdovirus: vrus da necrose amarela
da alface (LNYV);
Nucleorhabdovirus: vrus do tomate peque-
no amarelo (PYDV).
5.3.3 Famlia: Filoviridae
Gneros:
Marburgvirus: vrus de Marburg;
Ebolavirus: vrus ebola.
Os vrus dessa famlia apresentam formas
lamentosas, pleomrcas, com dimetro de 80
nm e extenso que pode atingir at 14.000 nm.
Podem ser vistas formas de U, de 6 ou, ainda, for-
mas circulares. O genoma consiste de uma ni-
ca molcula de RNA linear, de cadeia simples e
sentido negativo, compondo um nucleocapsdeo
helicoidal. A replicao ocorre no citoplasma e o
vrus liberado por brotamento na membrana
plasmtica. Os vrus dessa famlia causam doen-
as hemorrgicas em humanos. Infeco natural
com vrus de Marburg e a cepa Reston do vrus
ebola tambm causa doena hemorrgica em ma-
cacos. Doena experimental pode ser induzida
atravs de inoculao em macacos, cobaias, ha-
msters e camundongos. A manipulao desses
vrus s permitida em laboratrios de nvel 4 de
biosegurana. O vrus ebola um dos vrus mais
letais j identicados para humanos. A histria
natural desses vrus ainda no bem conhecida.
Os vrions dessa famlia possuem uma mor-
fologia caracterstica, lembrando um projtil de
arma de fogo, com uma das extremidades arre-
dondadas e a outra romba. O dimetro dos v-
rions varia de 70 a 85 nm, e o comprimento pode
variar de 130 a 380 nm. O vrus envelopado e
apresenta peplmeros de 8 a 10 nm na superfcie;
o nucleocapsdeo helicoidal. O genoma consiste
de uma cadeia simples de RNA linear de sentido
negativo e extenso de 10 a 13 kb. A replicao
ocorre no citoplasma. O RNA genmico de sen-
tido negativo inicialmente transcrito em RNAs
subgenmicos, que so traduzidos nas protenas
necessrias formao de novas partculas virais.
A replicao do genoma ocorre a partir de um in-
termedirio positivo. O RV, que um dos vrus
zoonticos mais importantes, o principal vrus
dessa famlia. O VSV outro importante patge-
no animal, capaz de infectar vrias espcies. V-
rios rabdovrus de peixes e de plantas tambm
so agrupados nessa famlia.
vrionda famliaFiloviridae (vrus Ebola).
Fonte: Dr F. Murphy (ICTVdB).
vrions da famlia Rhabdoviridae.
Fonte: Dr. F. Murphy (ICTVdB).
54 Captulo 2
5.3.4 Famlia: Bornaviridae
Gnero:
Bornavirus: vrus da doena de Borna
(BDV).
Os bornavrus so esfricos e envelopados,
com dimetro de 90 nm. Possuem um genoma
RNA de cadeia simples, sentido negativo e 8.9
kb. Apesar do genoma RNA, os vrus replicam no
ncleo, onde produzem corpsculos de incluso.
Esses vrus so agentes etiolgicos reconhecidos
de doena neurolgica em ovinos e eqinos, mas
j foram isolados tambm de gatos e bovinos.
Alm disso, dados sorolgicos e moleculares re-
centes tm associado os bornavrus com doenas
neuropsiquitricas humanas.
5.4 Vrus com genoma RNA de sentido
negativo segmentado
5.4.1 Famlia: Orthomyxoviridae
Gneros:
Inuenzavirus A (FluAV): vrus da inuen-
za A (humanos, aves, eqinos, sunos, recente-
mente ces e feldeos);
Inuenzavirus B (FluBV): vrus da inuen-
za B (humanos);
Inuenzavirus C (FluCV): vrus da inuen-
za C (humanos, sunos);
Thogotovirus: vrus Thogoto de carrapatos
(THOV), vrus Dhori (DHOV). Tem sido detecta-
da sorologia positiva em bovinos e camelos;
Isavirus: vrus da anemia infecciosa do sal-
mo (ISAV).
Os ortomixovrus possuem vrions envelo-
pados pleomrcos, com 80 a 120 nm de dime-
tro. No envelope, esto inseridas as glicoprote-
nas hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NE)
que se extendem externamente por 10 a 14 nm.
O genoma consiste de oito (vrus inuenza A),
sete (vrus inuenza B) ou seis (vrus inuenza
C) segmentos de RNA linear, sentido negativo de
cadeia simples, com extenso total de 10 a 13.6
kb. Cada segmento genmico empacotado em
um nucleocapsdeo helicoidal. A replicao do
genoma ocorre no ncleo das clulas hospedei-
ras. Posteriormente, o vrus liberado da clula
por brotamento na membrana plasmtica. Os v-
rus do gnero inuenza so os agentes etiolgi-
cos da gripe. O vrus inuenza A causa gripe em
humanos, aves, sunos, cavalos, martas, focas e
baleias. O vrus inuenza B patgeno somente
de humanos, e os de inuenza C, de humanos e
sunos. A natureza segmentada do genoma des-
ses vrus facilita a troca dos segmentos genmi-
cos entre vrus das diferentes espcies quando in-
fectam a mesma clula. Esse mecanismo permite,
eventualmente, o surgimento de vrus bastante
virulentos.
5.4.2 Famlia: Bunyaviridae
Gneros:
Orthobunyavirus: vrus Bunyamwera
(BOTV), vrus La Crosse (LACV), vrus Akabane
(AKAV);
Hantavirus: vrus Hantaan (hantavrus
HTNV) de roedores e humanos;
Nairovirus: vrus de Dugbe (DUGV), vrus
da febre hemorrgica Crimean Congo (CCHFV),
vrus da doena das ovelhas de Nairobi (NSDV);
Phlebovirus: vrus da febre do vale Rift
(RVFV);
Tospovirus: vrios vrus de plantas.
vrions da famlia Orthomyxoviridae (influenza A).
rus de roedores e humanos (LASV), vrus Junin
(JUNV),vrus Machupo (MACV), vrus sabi
(SABV), vrios outros vrus identicados em roe-
dores e/ou causando doena em humanos.
So vrus envelopados e pleomrcos, cujo
dimetro varia de 100 a 300 nm. Possuem um ge-
noma RNA de cadeia simples, sentido negativo e
ambissense, com dois segmentos de extenso de 14
a 16 kb. Os vrus replicam no citoplasma e saem
da clula por brotao da membrana plasmtica.
Os arenavrus infectam diferentes espcies de ro-
edores nas Amricas, frica e Europa de forma
crnica e, na maioria das vezes, assintomtica.
Alguns desses vrus causam doenas severas em
humanos, algumas delas com aspectos hemorr-
gicos. Por isso esto entre os agentes mais impor-
tantes das febres hemorrgicas. A transmisso
ocorre geralmente atravs de aerossis prove-
nientes da urina contaminada desses animais.
Entre os arenavrus causadores de doena em
humanos est o vrus Lassa, agente etiolgico de
febre hemorrgica em algumas regies da fri-
ca. No continente americano, j foram descritos
o MACV na Bolvia, JUNV na Argentina, Guana-
rito na Venezuela e SABV no Brasil. Todos esses
vrus so agentes de doenas hemorrgicas.
Os buniavrus possuem vrions esfricos ou
pleomrcos, envelopados, com dimetro entre
80 e 120 nm. O genoma consiste de trs segmentos
de RNA de cadeia simples e sentido negativo, or-
ganizados em nucleocapsdeos helicoidais. Esses
vrus replicam no citoplasma. O ressortimento
possvel entre vrus do mesmo gnero devido
segmentao do genoma. Existe um grande n-
mero de vrus classicados nessa famlia, muitos
deles no infectam animais domsticos ou seres
humanos, apenas insetos. Os vrus patognicos
dessa famlia so agentes de doenas respira-
trias severas, hepatite, nefrite e encefalite em
animais e humanos. Esses vrus so geralmente
citopticos quando inoculados em clulas de ver-
tebrados, mas so no-citopticos em clulas dos
vetores invertebrados. A grande maioria dos v-
rus dessa famlia composta de arbovrus isola-
dos ou transmitidos por mosquitos, carrapatos e
outros artrpodos. Os vrus do gnero hantavrus
so excees, uma vez que so mantidos e trans-
mitidos por roedores. Alguns desses vrus (como
o RVFV e o CCMFV) s podem ser manipulados
em laboratrio de segurana nvel 4.
5.4.3 Famlia: Arenaviridae
Gnero:
Arenavirus: vrus da coriomeningite lin-
foctica dos camundongos (LCMV), Lassav-
vrions da famlia Bunyaviridae.
vrion da famlia Arenaviridae.
Fonte: Scientific American (ICTVdB).
56 Captulo 2
5.5 Vrus com genoma RNA de cadeia
dupla
5.5.1 Famlia: Reoviridae
vrus, e 12 segmentos e 27 kb para o Coltivrus. A
replicao e montagem dos vrions ocorrem no
citoplasma, de onde os vrions so liberados. O
ressortimento de segmentos de RNA pode ocor-
rer quando mais de um vrus do mesmo gnero
infectam a mesma clula. O BTV e os rotavrus
de vrias espcies de mamferos so exemplos
de patgenos importantes em veterinria. Os ro-
tavrus so importantes causadores de diarria,
sobretudo em crianas, em pases subdesenvol-
vidos.
5.5.2 Famlia: Birnaviridae
Gneros:
Aquabirnavrus: vrus da necrose pancreti-
ca infecciosa (IPNV);
Avibirnavrus: vrus da doena de Gumbo-
ro (IBDV);
Entomobirnavrus: vrus X da drosla.
Gneros:
Orthoreovirus: orthoreovrus de mamferos
(MRV), orthoreovrus de aves (ARV), orthoreov-
rus de babunos (BRV);
Orbivirus: vrus da lngua azul (BTV-1 a
24), vrus da encefalose eqina (EEV-1 a 7), vrus
da peste eqina (AHSV-1 a 9);
Rotavirus: rotavrus de todas as espcies (A
a G);
Coltivirus: vrus da febre do carrapato do
Colorado (CTFV);
Aquareovirus: aquareovrus A (ARV-A a
F);
Seadornavirus: virus kadipiro (KDV).
Existem ainda os gneros de vrus que in-
fectam plantas e insetos: Cypovirus, Idnoreovirus,
Fijivirus, Oryzavirus e Phytoreovirus.
Os reovrus possuem vrions complexos,
sem envelope, compostos por duas ou trs cama-
das de protenas arranjadas de forma concntri-
ca. O dimetro desses capsdeos pode variar de
60 a 85 nm e possui simetria icosadrica. O ge-
noma consiste de molculas de RNA de cadeia
dupla. O nmero e a extenso desses segmentos
variam entre os gneros; sendo de 10 segmentos
e 23 kb para o Reovrus, 10 segmentos e 18 kb para
o Orbivrus, 11 segmentos e 16-21 kb para o Rota-
Esses vrus possuem um genoma RNA line-
ar de cadeia dupla com dois segmentos, denomi-
nados A e B. A extenso total do genoma varia
entre 5.7 e 7 kb. Os vrions so formados por um
capsdeo icosadrico, sem envelope, e dimetro
de 60 nm. Os RNAs mensageiros so sintetizados
a partir dos dois segmentos do genoma RNA e
uma poliprotena produzida e, posteriormente,
clivada. Maiores detalhes da replicao no so
conhecidos. O patgeno mais conhecido dessa fa-
mlia o IBDV, que afeta galinhas.
vrions da famlia Reoviridae (rotavrus).
Fonte: Dra. Bchen-Osmond (ICTVdB)
vrions da famlia Birnaviridae.
Fonte: Dr. Stewart McNulty, (www.qub.ac.uk).
5.6 Vrus com genoma RNA que
realizam transcrio reversa
5.6.1 Famlia: Retroviridae
Subfamlia: Orthoretrovirinae
Gneros:
Alpharetrovirus: vrus da leucose aviria
(ALV), vrus do sarcoma Rous (RSV);
Betaretrovirus: vrus do tumor mamrio do
camundongo (MMTV), retrovrus Jaagsiekte dos
ovinos (JSRV);
Gammaretrovirus: vrus da leucemia felina
(FeLV), vrus da leucemia murina (MuLV);
Deltaretrovirus: vrus da leucose bovina
(VLB), vrus da leucemia de clulas T humano
(HTLV-1 e 2);
Epsilonretrovirus: vrus do sarcoma dermal
de Walleye (WDSV);
Lentivirus: vrus da anemia infecciosa eqi-
na (EIAV), vrus da imunodecincia felina (FIV),
vrus da artrite-encefalite caprina (CAEV), vrus
Maedi-Visna (MMV), vrus da imunodecincia
dos smios (SIV), vrus da imunodecincia hu-
mana (HIV-1 e 2);
Subfamlia: Spumaretrovirinae
Spumavirus: vrus foamy do chimpanz.
ral complexa, incluindo uma etapa de transcrio
reversa. Os retrovrus so envelopados e pos-
suem um capsdeo icosadrico. O dimetro dos
vrions pode variar entre 80 e 100 nm. O genoma
diplide, consistindo de duas cpias de RNA
cadeia simples e sentido positivo. A replicao
dos retrovrus ocorre em parte no citoplasma e
em parte no ncleo. A replicao viral envolve
a sntese de uma cpia DNA do RNA genmico
(provrus), que integrada no cromossomo celu-
lar. A sntese de mRNAs, para a sntese protica
e do RNA genmico, ocorre pela transcrio do
provrus pela maquinaria celular de transcrio.
Pelo fato de integrar o seu provrus ao DNA da
clula, os retrovrus infectam o hospedeiro para
o resto da vida. Os vrus dessa famlia esto as-
sociados principalmente a doenas tumorais e
imunossupressivas. O ALV e o EIAV esto entre
os vrus de importncia veterinria classicados
nessa famlia. O vrus da AIDS (HIV) o retrov-
rus de maior repercusso em sade humana.
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como principal caracterstica, uma replicao vi-
vrions da famlia Retroviridae (HIV).
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58 Captulo 2
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1 Introduo
2 Mtodos de deteco e identicao de vrus
2.1 Deteco direta por microscopia eletrnica
2.2 Deteco de propriedades biolgicas dos vrus
2.2.1 Hemaglutinao
2.2.2 Hemadsoro
2.3 Deteco de antgenos
2.3.1 Imunouorescncia
2.3.2 Imunoperoxidase
2.3.3 Ensaio imunoenzimtico
2.3.4 Radioimunoensaio
2.3.5 Imunocromatograa
2.3.6 Aglutinao em ltex
2.3.7 Imunodifuso em gar
2.3.8 Imunoblots
2.4 Deteco/identicao de cidos nuclicos
2.4.1 Tcnicas de hibridizao (Southern, Northern blot)
2.4.2 Hibridizao in situ
2.4.3 Reao de polimerase em cadeia
2.4.4 Anlise de restrio
2.4.5 Eletroforese em gel de poliacrilamida
3 Multiplicao de vrus
3.1 Inoculao em animais susceptveis
3.2 Inoculao em ovos embrionados
3.3 Inoculao em cultivo celular
DETECO, IDENTIFICAO E QUANTIFICAO
DE VRUS
Mrio Celso S. Brum & Rudi Weiblen
3

61
61
61
63
63
65
65
65
66
67
67
68
68
68
68
69
69
70
70
73
73
73
74
74
75
4 Quanticao de vrus
4.1 Diluio limitante
4.2 Ensaio de placa
4.3 Outros mtodos de quanticao
5 Identicao e caracterizao de um isolado
5.1 Sensibilidade a solventes orgnicos
5.2 Concentrao e puricao por ultracentrifugao
6 Biossegurana laboratorial
81
81
81
83
84
84
84
85
86
1 Introduo
Os grandes avanos no entendimento dos
meca nismos de replicao, transmisso e pato ge-
nia de vrios agentes virais somente foram poss-
veis aps o desenvolvimento de mtodos de pro-
pagao e deteco de vrus in vitro. No princpio
da Virologia, antes mesmo da classicao dos
vrus como agentes ltrveis, as alteraes pro-
duzidas nos animais durante as infeces virais
j eram observadas e descritas. No entanto, a fal-
ta de conhecimentos sobre o agente e de equipa-
mentos adequados fez com que a diferenciao
entre as infeces fosse realizada apenas entre
as enfermidades com sinais clnicos caractersti-
cos. Inicialmente, o nico mtodo de propagao
viral era a inoculao em animais susceptveis.
Embora essa forma de amplicao viral tenha
sido muito til nos primrdios da Virologia, esse
mtodo de amplicao restringiu o estudo dos
vrus devido diculdade de manuteno de
animais e tambm pela baixa reprodutibilidade
da maioria das enfermidades vricas.
A maior revoluo na Virologia ocorreu
aps o advento dos antibiticos, o que possibili-
tou o estabelecimento de cultivos celulares livres
de contaminantes bacterianos. O uso dos cultivos
celulares contribuiu de maneira decisiva para a
deteco e multiplicao dos vrus com diversas
nalidades, viabilizando o diagnstico, estudos
bioqumicos e moleculares e produo de vaci-
nas. Nesse sentido, a citopatologia, produzida
por alguns vrus em clulas de cultivo durante a
sua replicao, uma caracterstica amplamente
utilizada para demonstrar a presena do agente
em material clnico, permitindo a realizao do
diagnstico.
As tcnicas de deteco viral foram desenvol-
vidas inicialmente com ns diagnstico, ou seja,
para pesquisar vrus em amostras clnicas; porm
passaram a ser utilizadas para uma ampla gama
de nalidades em laboratrios de virologia.
A conrmao da presena do vrus em te-
cidos, secrees ou excrees pode ser realizada
pelo uso de tcnicas que demonstrem o agente, o
efeito da replicao em cultivo celular, produtos
intermedirios do processo replicativo (protenas,
corpsculos de incluso) ou o material gentico
(DNA ou RNA viral). Muitas vezes recorre-se
realizao de duas ou mais tcnicas para a conr-
mao denitiva da presena do agente. A esco-
lha de uma determinada tcnica de deteco est
diretamente relacionada com a forma de infeco
e com o tropismo do vrus por determinados te-
cidos e rgos. Por outro lado, a disponibilidade
de equipamentos, qualidade dos reagentes e de
pessoal capacitado para a execuo das tcnicas
tambm podem determinar a escolha da tcnica a
ser empregada. A simples deteco do agente vi-
ral em uma amostra clnica deve ser considerada
com cautela, pois a sua presena pode no ser um
indicativo seguro da etiologia da doena.
Os mtodos de deteco dos agentes virais
podem ser divididos em mtodos diretos e in-
diretos. Os mtodos diretos compreendem as
tcnicas em que o agente viral diretamente de-
tectado, ou seja, a partcula viral observada e
identicada de maneira precisa. A nica tcnica
que se enquadra nesse princpio a microscopia
eletrnica. Os mtodos de deteco indireta iden-
ticam as propriedades biolgicas ou produtos
resultantes da replicao viral, como protenas
ou cidos nuclicos. Neste captulo, sero apre-
sentadas e discutidas as tcnicas utilizadas para
a deteco de partculas vricas, protenas ou ma-
terial gentico viral. A aplicao dessas tcnicas,
com nalidades diagnsticas, ser abordada no
Captulo 11. Alm disso, sero abordadas as ma-
neiras de multiplicao, quanticao e caracteri-
zao viral, bem como alguns aspectos de segu-
rana laboratorial.
2 Mtodos de deteco e
identicao de vrus
2.1 Deteco direta por microscopia
eletrnica
A maioria dos agentes virais possui part-
culas vricas com caractersticas morfolgicas e
estruturais peculiares s famlias as quais perten-
cem. Com base nesse aspecto, o mtodo mais sim-
ples de deteco e identicao de vrus a visu-
alizao direta das partculas na amostra (Figura
3.1). Exemplos clssicos do uso da microscopia
eletrnica (ME) com ns diagnsticos incluem a
deteco de partculas vricas em crostas de le-
ses causadas pelo ectima contagioso dos ovinos
62 Captulo 3
e pseudo-varola bovina (parapoxvrus) ou, ain-
da, a deteco do parvovrus em fezes caninas e
rotavrus ou coronavrus em fezes de bezerros
com diarria.

Figura 3.1. Microscopia eletrnica. (A) Partculas de parapoxvrus emmaterial coletado de leses de ovinos suspeitos
de ectima contagioso(50.000x); (B) Partculas tpicas de rotavrus emfezes bovinas diarricas (260.000x); (C) Partculas
caractersticas de calicivrus em clulas de cultivo, inoculadas com secreo nasal de um felino com doena
respiratria (40.000x); (D) Partculas tpicas de herpesvrus no ncleo de clulas de cultivo, inoculadas com material
coletado de um touro com balanopostite (48.000x); (E) Partculas do vrus da parainfluenza bovina 3 (bPI-3),
observadas emsobrenadante de cultivo celular (260.000x); (F) Arranjo cristalino de partculas tpicas de picornavrus
no citoplasma de clulas de cultivo, inoculadas com material coletado de um bovino com doena gastrentrica e
respiratria (315.000x).
A B
C D
E F
Deteco, identicao e quanticao de vrus 63
A ME possuiu grande aplicabilidade na pes-
quisa e identicao de vrus que no replicam
com ecincia em cultivo celular. Essa tcnica
permitiu a identicao de vrios agentes entri-
cos de difcil cultivo, tais como: poxvrus, rotav-
rus, calicivrus, astrovrus, entre outros. Quando
as partculas vricas esto presentes em grande
quantidade, so facilmente observadas nas fezes
de animais com diarria ou em lquidos vesicula-
res de infeces cutneas.
A maior restrio da ME a sua baixa sensi-
bilidade. Amostras clnicas que contenham quan-
tidade inferior a 10
6
-10
7
partculas vricas por mi-
lilitro no so detectadas como positivas por essa
tcnica, gerando resultados falso-negativos. Essa
quantidade de vrus geralmente encontrada em
uidos vesiculares e fezes, o que no ocorre com
tanta freqncia em secrees respiratrias. A
sensibilidade, no entanto, no o nico limitante
dessa tcnica. O custo elevado do equipamento
e a exigncia de tcnicos altamente capacitados
para a operao e interpretao dos resultados
tambm representam limitaes. O perodo ne-
cessrio para a obteno dos resultados varia en-
tre 15 minutos, nos casos em que o material ob-
servado diretamente no microscpio, at alguns
dias quando h necessidade do processamento
prvio da amostra para aumentar a possibilidade
de deteco. Pode-se tambm realizar a ME em
clulas de cultivo previamente inoculadas com o
material suspeito.
A sensibilidade da ME pode ser aumentada
pelo uso de tcnicas que permitam a concentrao
e facilitem a visualizao das partculas vricas. A
claricao de amostras por centrifugao de bai-
xa rotao empregada para remover partculas
e substncias que possam interferir na tcnica.
A ultracentrifugao utilizada com o objetivo
de concentrar as partculas virais. A aglutinao
com soro hiperimune rotineiramente utilizada
e denomina-se imunoeletromicroscopia. Nesta
metodologia, utiliza-se um soro hiperimune es-
pecco contra o agente suspeito, cujos anticor-
pos iro se ligar e promover a concentrao das
partculas, facilitando a visualizao. Anticorpos
marcados com micropartculas de ouro (tcnica
de imunogold) tambm so utilizados para au-
mentar a sensibilidade do teste. Aps o processo
de claricao e concentrao, a amostra cora-
da negativamente, geralmente com tungstnio, e
examinada sob ME.
Alm do seu uso em diagnstico, a ME tem
sido utilizada para o estudo da morfologia e ul-
tra-estrutura de partculas vricas e tambm em
estudos de patogenia. As caractersticas obser-
vadas para a identicao e caracterizao do
agente so: o dimetro dos vrions, morfologia
do nucleocapsdeo, presena ou no de envelope,
presena de projees na superfcie das partcu-
las, organizao dos agregados de partculas e a
localizao celular dos vrions.
2.2 Deteco de propriedades biolgicas
dos vrus
2.2.1 Hemaglutinao
Vrios vrus possuem protenas de superf-
cie que se ligam a eritrcitos, provocando a sua
agregao e aglutinao, fenmeno denominado
hemaglutinao (HA) (Tabela 3.1). A propriedade
de aglutinar eritrcitos restrita a algumas fam-
lias de vrus (exemplos: ortomixovrus e para-
mixovrus) e, para cada um desses vrus, a HA
ocorre apenas com eritrcitos de determinadas
espcies animais. Nos vrus da inuenza, por
exemplo, a ligao entre a protena do envelope
viral (hemaglutinina ou HA) com o cido N-ace-
tilneuramnico da membrana dos eritrcitos de
galinha a responsvel pela aglutinao. Basean-
do-se nesse princpio, a tcnica de HA pode ser
utilizada para a deteco dos vrus que possuem
essa propriedade biolgica. O teste realizado
pela incubao de uma suspenso de eritrcitos
com o material suspeito (puro ou em diluies)
em microplacas com fundo em V ou U. Aps
o perodo de incubao, a presena do agente
hemaglutinante ser indicada pela formao de
uma rede difusa de eritrcitos no poo. Em amos-
tras negativas (ausncia do agente hemaglutinan-
te), as hemcias no sero aglutinadas, iro rolar
e se acumular no fundo da cavidade, formando
um boto bem denido (Figura 3.2). Esse teste
de fcil execuo, porm falha em detectar quan-
64 Captulo 3
tidades pequenas de vrus. Outra restrio que
a atividade hemaglutinante uma propriedade
restrita a algumas famlias de vrus, ou seja, a tc-
nica no possui aplicao universal.
A atividade hemaglutinante pode ser inibida
pela presena de anticorpos anti-hemaglutininas
especcos. Os anticorpos especcos iro ligar-se
protena hemaglutinante do vrus, impedindo a
ligao desta com os eritrcitos. Dessa maneira,
um mtodo para se detectar e quanticar anticor-
pos antivirais no soro de animais foi desenvolvi-
do e denomina-se inibio da hemaglutinao (HI).
A tcnica de HI pode ser utilizada tanto para
a deteco de anticorpos antivirais como para a
identicao de vrus hemaglutinantes. Aps a
deteco da atividade HA, a tcnica de HI rea-
lizada, utilizando-se um anti-soro especco con-
tra o vrus suspeito para conrmar o diagnstico.
A aplicao desse mtodo em diagnstico ser
abordada com detalhes no Captulo 11.
B
O
V
I
N
O
S
Adenovrus bovino (BAdV) Sobrenadante de cultivo celular Rato, bovino ou macacos rhesus
Vrus Fonte de vrus Eritrcitos (espcie)
Coronavrus bovino (BoCV)
Amostras fecais e sobrenadante
de cultivo celular
Camundongo, hamster e rato
Parainfluenza 3 bovino (bPI-3) Sobrenadante de cultivo celular Bovino e cobaia
E
Q
I
N
O
S
Encefalomielite eqina
(EEEV, WEEV)
Macerado de crebro de
camundongo
Ganso ou pinto de 1 dia
Influenza eqina
Sobrenadante de cultivo celular
ou lquido amnitico
Galinha e cobaia
Adenovrus eqino (EAdV) Sobrenadante de cultivo celular Rato ou macaco rhesus
Encefalite japonesa (JEV)
Suspenso de crebro de
camundongo
Ganso ou pinto de 1 dia
S
U
N
O
S
Peste suna africana (ASFV) Sobrenadante de cultivo celular Suno
Sobrenadante de cultivo celular
Galinha, rato, camundongo e
hamster
Encefalomielite
hemaglutinante dos sunos
Influenza suna (SIV) Fluido alantide Galinha
Parvovrus suno (PPV)
Extratos de tecidos fetais ou
sobrenadante de cultivo celular
Humano, macaco, camundongo,
cobaia, gato, galinha e rato
C
A
N
I
N
O
S
e
F
E
L
I
N
O
S
Adenovrus canino (CAdV) Sobrenadante de cultivo celular Rato, macaco rhesus, humano e aves
Parvovrus canino (CPV)
Amostras fecais ou
sobrenadante de cultivo
Suno ou macaco rhesus
Panleucopenia felina (FPLV)
Amostras fecais ou
Suno ou macaco rhesus
A
V
E
S
Influenza aviria (AIV) Fluido alantide Mamferos e aves
Doena de Newcastle (NDV) Fluido alantide Galinha
Bronquite infecciosa
aviria (IBV)
Fludo corioalantide Galinha
L
E
P
O
R
I
N
O
Doena hemorrgica dos
coelhos (RHDV)
Suspenso de tecidos e
Humano do tipo O
Tabela 3.1. Vrus com atividade hemaglutinante sobre eritrcitos animais
2.2.2 Hemadsoro
Durante o ciclo replicativo de alguns vrus
em cultivo celular, determinadas protenas virais
so expostas na superfcie das clulas infectadas.
Algumas dessas protenas possuem a capacidade
de se ligar a eritrcitos quando esses so adiciona-
dos ao meio de cultivo. Esse processo denomi-
nado hemadsoro (HAD), e restrito interao
de alguns vrus com eritrcitos de certas espcies
de mamferos e aves. A HAD um indicativo da
presena desses vrus no material suspeito. Essa
tcnica de simples execuo, sendo empregada
para a deteco de ortomixovrus, paramixovrus
e asfarvrus.
2.3 Deteco de antgenos virais
2.3.1 Imunouorescncia
A imunouorescncia (IFA) uma tcnica
de deteco de antgenos e baseia-se na reao de
anticorpos especcos com o antgeno presente
no material suspeito. Os anticorpos so conjuga-
dos com uma substncia que emite luminosidade
uorescente (uorescena) quando exposta luz
ultravioleta (UV). A presena do antgeno no ma-
terial revelada pela emisso de luminosidade
uorescente. Essa metodologia pode ser aplicada
em monocamada de clulas, em esfregaos celu-
lares, em tecidos frescos, congelados ou includos
em parana. Geralmente, o material deve ser
previamente xado em etanol, metanol ou ace-
tona. Aps a xao, incuba-se o material com o
anticorpo especco marcado com o uorocromo
(FITC isotiocianato de uorescena ou Texas
Red). Posteriormente, sucessivas lavagens so re-
alizadas para a remoo do anticorpo no-ligado.
O material , ento, examinado ao microscpio
de luz UV. A colorao verde-ma ou vermelha
(para anticorpos marcados com FITC e Texas Red,
respectivamente), visualizada contra um fundo
escuro, indica a presena de antgenos virais na
amostra. A emisso de uorescncia resulta da
excitao do uorocromo conjugado ao anticor-
po quando exposto luz UV. O resultado nal
a observao de uma regio ou de toda a clula
corada, pois as protenas virais esto dispersas no
seu interior (Figura 3.3).
Existem basicamente duas variantes da tc-
nica: a imunouorescncia direta (IFD) e a indi-
reta (IFI). Na IFD, o anticorpo primrio (mono-
clonal ou policlonal) especco para o agente
marcado com o uorocromo e adicionado direta-
mente sobre a amostra. No caso da IFI, a tcnica
realizada em duas etapas. A primeira incuba-
o realizada com o anticorpo primrio espe-
cco para os antgenos virais e, aps a remoo
dos anticorpos que no se ligaram aos antgenos,
por sucessivas lavagens, adiciona-se o anticorpo
secundrio, marcado com o uorocromo. O anti-
Figura 3.2. Teste de hemaglutinao (HA) para a
pesquisa de vrus. Aamostra suspeita de conter o vrus
misturada com uma suspenso de eritrcitos e incubada
a 37 C por 1 hora. A presena do vrus indicada
pela aglutinao dos eritrcitos e formao de uma rede
fina difusa no fundo da cavidade; Na ausncia do
vrus, os eritrcitos rolam para o fundo da cavidade,
formandoumbotodecontornobemdefinido.
(A).
(B).
+
Incubao
1 hora
Amostra
suspeita
Eritrcitos
Amostra
negativa
Amostra
positiva
A B
66 Captulo 3
corpo secundrio (especco para a espcie ani-
mal na qual foi produzido o anticorpo primrio)
reconhece e se liga ao anticorpo primrio.
A IFA uma tcnica simples e se constitui
em uma das tcnicas mais utilizadas em Viro-
logia, possuindo diversas aplicaes, incluindo
o diagnstico de infeces vricas. A aplicao
dessa tcnica em diagnstico ser abordada no
Captulo 11. Como desvantagens, incluem-se a
necessidade de um microscpio de luz UV e a
possibilidade de alguns tecidos ou clulas emiti-
rem uorescncia natural, o que pode dicultar a
interpretao do resultado.
ou peroxidase) ou a fosfatase alcalina (AP). O
termo IPX tem sido utilizado quase como sin-
nimo, embora deva ser ressaltado que essa no
a nica enzima utilizada na tcnica. Essa tcnica
pode ser aplicada em monocamadas celulares,
esfregaos ou diretamente em tecidos, sendo de-
nominada de imunocitoqumica (ICQ) ou imu-
noistoqumica (IHC), respectivamente. A meto-
dologia semelhante IFA, existindo tambm a
IPX direta e indireta. Na IPX direta, o material
xado incubado com o anticorpo antiviral mar-
cado com a enzima, seguido da lavagem e adio
do substrato. A presena do antgeno no material
revelada pela ao da enzima no substrato. Uti-
lizam-se substratos cromognicos (aminoetilcar-
bazol AEC; diaminobenzidina DAB; ou 4-clo-
ronaftol) que produzem uma colorao marrom
ou marrom-carmim pela ao da enzima e for-
mam um precipitado na clula positiva (Figura
3.4). A IPX indireta utiliza o anticorpo primrio
especco para o antgeno, e o anticorpo secun-
drio marcado com a enzima. Essa variao da
Antgenos virais
Anticorpo
antivrus-FITC
Anticorpo
anti-IgG-FITC
Anticorpo antivrus Clula infectada
Imunofluorescncia
direta
Imunofluorescncia
indireta
A B
Figura 3.3. Ilustrao demonstrativa da tcnica de
imunofluorescncia para a deteco de antgenos virais
em clulas. (A) Imunofluorescncia direta (IFD); (B)
Imunofluorescncia indireta (IFI).
2.3.2 Imunoperoxidase
A tcnica de imunoperoxidase (IPX) baseia-
se no mesmo princpio da IFA, com a diferena
que os anticorpos so marcados com uma enzi-
ma, que pode ser a horseradish peroxidase (HRPO
Antgenos virais
Anticorpo
antivrus HRPO
Anticorpo
anti-IgG-HRPO
Anticorpo antivrus Clula infectada
Imunoperoxidase
direta
Imunoperoxidase
indireta
A B
Figura 3.4. Ilustrao demonstrativa da tcnica de
imunoperoxidase (IPX) para a deteco de antgenos
virais em clulas. (A). Imunoperoxidase direta; (B)
Imunoperoxidase indireta.
Substrato
tcnica apresenta maior sensibilidade devido
amplicao do sinal. A tcnica de IPX possui
as mesmas aplicaes da IFA, porm apresenta
a vantagem de no necessitar do microscpio de
luz UV, j que as reaes podem ser visualizadas
sob microscopia tica comum.
2.3.3 Ensaio imunoenzimtico
O teste imunoenzimtico (ELISA) pode ser
utilizado para a deteco de antgenos virais e
tambm de anticorpos. uma tcnica que apre-
senta vantagens, tais como: a boa sensibilidade,
especicidade, baixo custo, repetibilidade e ver-
satilidade. Em alguns casos, o uso da tcnica per-
mite a deteco de at 1 ng (nanograma) de ant-
geno por grama de tecido coletado diretamente
do animal. Os testes podem ser executados em
amostras individuais, como recurso diagnstico
em clnicas ou consultrios; ou em grande esca-
la, como realizado em laboratrios totalmente
automatizados. A tcnica permite uma variao
de formas e aplicaes, dependendo do objetivo e
da disponibilidade de reagentes. Basicamente, os
testes de ELISA podem ser classicados em dire-
tos, indiretos ou de competio.
A tcnica baseia-se na imobilizao da re-
ao antgeno-anticorpo em um suporte slido
(placas de poliestireno), seguida de uma reao
colorimtrica. Por se tratar de uma tcnica que
apresenta inmeras variaes, neste captulo ser
apresentado apenas o fundamento geral da tcni-
ca. Para um detalhamento maior, recomenda-se a
literatura especca.
Um exemplo simplicado para facilitar o
entendimento da tcnica ser brevemente descri-
to. No ELISA de captura direto (Figura 3.5) para
deteco de antgenos virais, placas de 96 cavi-
dades so recobertas com anticorpos especcos
para um determinado agente. A amostra suspei-
ta da presena viral (sangue, secrees ou leite)
adicionada e incubada por um determinado tem-
po. Nesse perodo, ocorre a captura do antgeno
(amostras positivas) pelo anticorpo xado na pla-
ca. Aps essa etapa, so realizadas lavagens para
a remoo de substncias inespeccas. A seguir
adiciona-se um segundo anticorpo, especco
para o vrus, conjugado com a enzima (HRPO ou
AP). Novamente os anticorpos que no se liga-
ram so removidos por lavagens. A conrmao
da presena do antgeno viral evidenciada pela
adio de substrato e desenvolvimento da colo-
rao especca nas amostras negativas. A leitura
realizada pela inspeo visual ou pelo uso de
fotocolormetro.
Incubao da
amostra suspeita
Lavagem
Anticorpos
antivirais
Antgenos na
amostra
suspeita
Anticorpo
antivrus
Lavagem
Anticorpos
marcados
Adio do
substrato
Positivo Negativo
Mudana
de cor
A B
Figura 3.5. Ilustrao demonstrativa do ensaio
imunoenzimtico (ELISA) para a deteco de antgenos.
(A) Amostra positiva; (B) Amostra negativa.
2.3.4 Radioimunoensaio
O mtodo de radioimunoensaio (RIA) de
deteco de antgenos foi muito utilizado antes
do surgimento dos testes de ELISA. A diferena
bsica entre os dois mtodos reside no tipo de
marcao utilizada. Na RIA, utiliza-se um is-
topo radioativo em vez de enzima. O mtodo
muito sensvel e pode ser automatizado, porm
os equipamentos requeridos so caros. A prin-
cipal restrio do teste refere-se ao uso de subs-
tncias radioativas e ao descarte dos reagentes.
Dessa forma, a tcnica encontra-se em desuso
progressivo.
68 Captulo 3
2.3.5 Imunocromatograa
A imunocromatograa uma tcnica de
visualizao simples, geralmente realizada em
dispositivos plsticos, podendo ser executada em
clnicas e ambulatrios. A prova baseada na rea-
o antgeno-anticorpo, em que a amostra suspei-
ta (vrus ou antgenos virais) passada atravs de
um ltro e, ento, impregnada em uma membra-
na, onde reagir com o anticorpo especco pre-
viamente imobilizado. A presena do antgeno
revelada pelo aparecimento de focos ou bandas
coloridas, pois os reagentes so conjugados com
substncias cromgenas. O resultado depende
essencialmente da qualidade dos reagentes. Um
dos problemas do teste o seu custo elevado. V-
rios testes diagnsticos so baseados nesse prin-
cpio (Captulo 11).
2.3.6 Aglutinao em ltex
O ensaio de aglutinao em ltex provavel-
mente seja o mtodo mais simples de deteco de
antgenos virais. O princpio da tcnica baseia-se
na mistura do material suspeito com anticorpos
previamente adsorvidos a partculas de ltex. A
presena do antgeno resultar na sua ligao
aos anticorpos e na aglutinao das partculas.
A leitura da reao visual e pode ser realizada
imediatamente aps a sua execuo. Esta tcnica
tem aceitao por pequenos laboratrios e entre
tcnicos de campo. As suas principais restries
referem-se baixa sensibilidade e especicidade.
Por isso, resultados falso-negativos so freqen-
tes, a no ser que grandes quantidades de ant-
genos estejam presentes no material suspeito. A
resoluo dos problemas de sensibilidade e espe-
cicidade pode aumentar a sua aplicabilidade.

O teste de IDGA foi desenvolvido para a
deteco de antgenos, porm tem sido mais uti-
lizado para a deteco de anticorpos. A prova
baseada na precipitao de complexos antgeno-
anticorpos em gel de gar. O ensaio realizado
pela adio da amostra suspeita e do soro con-
trole em orifcios em posies opostas em uma
matriz de gar. As amostras difundem-se radial-
mente pelo gel e, ao se encontrarem, proporcio-
nam a reao antgeno-anticorpo, seguida da in-
solubilizao e precipitao. A precipitao deste
complexo forma linhas opacas no gel (linhas de
precipitao), que podem ser visualizadas a olho
nu, com o auxlio de uma fonte de luz (ver Figura
11.9, no Captulo 11). A IDGA uma tcnica bas-
tante difundida para a deteco de anticorpos,
porm sem muita aplicabilidade para a deteco
de antgenos ou partculas vricas.
2.3.8 Imunoblots
O princpio dos imunoblots semelhante ao
da IPX. Os antgenos virais so detectados pelo
uso de anticorpos marcados com enzimas, que
agem no substrato, provocando mudana de cor.
A diferena fundamental entre a IPX e os imuno-
blots que o material suspeito deve ser previa-
mente solubilizado e imobilizado em um suporte
slido, geralmente membranas de nitrocelulose
ou nylon. A membrana , ento, incubada com
o anticorpo antiviral no-marcado (anticorpo pri-
mrio), seguido de lavagem e incubao com um
anticorpo antiespcie do anticorpo primrio (an-
ticorpo secundrio) conjugado a uma enzima. A
presena do antgeno pesquisado revelada pela
adio do substrato, que muda de colorao pela
ao da enzima. Substratos que emitem lumino-
sidade capturvel em lmes de raios X tambm
tm sido utilizados e aumentam a sensibilidade
da tcnica (Figura 3.6).
Existem duas variaes principais dos imu-
noblots: os dot/slot blots e o Western blot (WB). No
dot/slot blot, o homogenado de protenas dire-
tamente imobilizado na membrana, em pontos
(dots) ou fendas (slots), seguida pela deteco com
os anticorpos. Essa variao da tcnica mais
simples e rpida, porm no fornece informa-
es acerca da massa da protena detectada. No
WB, as protenas solubilizadas so separadas por
eletroforese em um gel de poliacrilamida (SDS-
PAGE), transferidas para a membrana e, ento,
submetidas deteco com os anticorpos marca-
dos. Essa tcnica permite a deteco da protena e
tambm a determinao de sua massa molecular,
pelo padro de migrao no gel.
2.4 Deteco/identicao de cidos
nuclicos
As seqncias nicas de nucleotdeos do ge-
noma dos vrus, associadas com tcnicas de am-
plicao e hibridizao de cidos nuclicos, pro-
porcionaram o desenvolvimento de metodologias
para a deteco e identicao de agentes virais
em uma variedade de amostras. As tcnicas de
hibridizao e a reao em cadeia da polimerase
(PCR) tornaram-se muito teis para a deteco e
identicao de agentes virais e impulsionaram
os estudos da biologia molecular desses agentes.
A disponibilidade das seqncias genmicas dos
vrus em bancos de dados possibilitou a iden-
ticao de regies conservadas, viabilizando
a sntese de primers e de sondas, utilizadas nas
tcnicas de PCR e hibridizao, respectivamente.
A interpretao dos resultados dessas tcnicas,
principalmente quando utilizadas com ns diag-
nsticos, deve ser realizada com cautela. O resul-
tado positivo pode no signicar necessariamente
a associao do agente suspeito com a doena em
questo. O material gentico de agentes que pro-
duzem infeces latentes, como os herpesvrus,
pode ser detectado sem que os agentes estejam,
necessariamente, associados com a enfermidade
em questo.
A deteco de cidos nuclicos possui apli-
cao especial para os vrus de difcil adapta-
o ao cultivo celular; casos em que o material
suspeito contenha pequenas quantidades do
agente, que esteja com viabilidade comprometi-
da por problemas de conservao e em estudos
retrospectivos. Essas tcnicas tambm possuem
aplicaes importantes na deteco de infeces
latentes, quando o nico indicador da infeco
a presena do genoma do agente.
2.4.1 Tcnicas de hibridizao
(Southern/Northern blot)
A deteco de cidos nuclicos virais pelo
uso de sondas marcadas com istopos radioati-
vos ou com enzimas tem sido muito utilizada em
Virologia, tanto em diagnstico como em pesqui-
sa. A tcnica baseia-se na complementaridade
das molculas de DNA ou RNA. Inicialmente,
escolhe-se a regio-alvo do genoma a ser detecta-
do, que deve ser um segmento conservado entre
isolados de campo. A sonda deve ser sintetizada
com base na seqncia de nucleotdeos da re-
gio-alvo e deve ser exatamente complementar
a esta. Essa sonda pode ser um oligonucleotdeo
sinttico, um segmento de DNA inserido em um
plasmdeo ou um produto de PCR. A sonda ,
ento, conjugada com um istopo radioativo ou
com uma enzima, para possibilitar a sua detec-
o. O material suspeito imobilizado em uma
membrana, seguido pela incubao com a sonda
marcada e de lavagens para remover as sondas
no-ligadas. Na presena do cido nuclico do
vrus suspeito, a sonda ir hibridizar com a se-
qncia-alvo. A presena da sonda revela-se pela
exposio da membrana a um lme de raios X ou
pela adio de substrato (Figura 3.7).
Amostra positiva
Amostra negativa
Removidos
pelas lavagens
Membrana
Antgeno viral
Anticorpo anti-IgG-HRPO
Anticorpo antivrus (IgG)
Substrato
Membrana
Figura 3.6. Western blot para a deteco de protenas
virais. Os antgenos so separados por eletroforese em
gel de poliacrilamida, transferidos e imobilizados em
uma membrana de nitrocelulose. A membrana
incubada com o anticorpo primrio (anti-antgeno) e
subseqentemente com o anticorpo secundrio
conjugado com a enzima peroxidase. A presena do
antgeno revelada pela ao da enzima no substrato
que resulta na marcao do filme de raios X no local
correspondente migraodaprotena-alvo.
- + -
70 Captulo 3
A tcnica de hibridizao possuiu variaes
de acordo com o cido nuclico a ser detectado
e com a forma como o material imobilizado
na membrana. Quando o cido nuclico (DNA,
RNA) imobilizado diretamente na membrana, a
tcnica denominada dot ou slot blot. A presena
do cido nuclico ser demonstrada pelo apareci-
mento de uma marca ou borro no local onde foi
aplicado o material. Porm, se o material for pre-
viamente submetido eletroforese, para a sepa-
rao das molculas de cido nuclico de acordo
com o tamanho, e ento transferido para a mem-
brana, a tcnica denomina-se Southern blot (para
DNA) ou Northern blot (para RNA). A reao po-
sitiva aparece na forma de bandas marcadas na
membrana, correspondentes migrao do cido
nuclico durante a eletroforese. Em razo da ne-
cessidade da eletroforese e transferncia para a
membrana, as tcnicas de Southern e Northern blot
so mais trabalhosas e demoradas, porm os re-
sultados so mais informativos.
As tcnicas de hibridizao possuem boa
sensibilidade e especicidade, e, quando imple-
mentadas na rotina do laboratrio, permitem a
obteno dos resultados em poucos dias. Outra
vantagem que podem ser aplicadas a qualquer
agente infeccioso, necessitando-se apenas de uma
sonda especca. As restries dessas tcnicas re-
ferem-se necessidade de pessoal especializado
e disponibilidade de reagentes.
2.4.2 Hibridizao in situ
A hibridizao in situ (ISH) detecta a presen-
a do material gentico do agente (DNA ou RNA)
diretamente em cortes histolgicos de tecidos.
Essa metodologia tem sido amplamente utilizada
para a localizao espacial e temporal da presen-
a e expresso de determinados genes. Tambm
utilizada na identicao de agentes causadores
de tumores. O princpio da tcnica o mesmo da
anterior, porm o cido nuclico detectado di-
retamente nos cortes de tecido. A reao revela-
da pelo uso de sondas marcadas com substncias
radioativas ou com protenas que so, posterior-
mente, detectadas com o auxlio de anticorpos.
As reaes positivas podem ser visualizadas pela
exposio a lmes radiogrcos lquidos ou com
uso de substncias cromgenas, permitindo a lo-
calizao e identicao das clulas infectadas.
Devido ao fato de ser trabalhosa e demorada, a
ISH no utilizada na rotina laboratorial, sendo
empregada em casos especcos, principalmente
em estudos de patogenia.
2.4.3 Reao da polimerase em cadeia
A reao da polimerase em cadeia (PCR)
uma tcnica altamente especca e sensvel, que
consiste na sntese in vitro de uma grande quan-
tidade de cpias de um segmento de DNA exis-
tente na amostra. Ou seja, consiste em amplicar
o nmero de molculas a partir de uma molcu-
la-alvo original, denominada template ou molde.
Essa amplicao pode ser realizada a partir de
uma quantidade mnima do cido nuclico-alvo;
uma PCR bem padronizada, teoricamente, ca-
paz de detectar e amplicar at uma nica cpia
do molde existente na amostra.
A regio-alvo a ser amplicada delimitada
por primers, que so oligonucleotdeos sintticos
de aproximadamente 20 nucleotdeos. Esses pri-
DNA/RNA viral
Sonda marcada
Radioatividade
Membrana Membrana
Amostra positiva Amostra negativa
C
C
A
T
G
A
C
A
C
C
A
T
G
A
C
A
Removidas
pelas lavagens
AT C G G TAC T G T TAT T
C CAT GACA
' ' ' ' ' ' ' ' ' '
Filme de raios X
Figura 3.7. Tcnica de hibridizao de cidos nuclicos (dot blot). Omaterial gentico do vrus extrado de tecidos e
imobilizado em reas de uma membrana. Posteriormente a membrana incubada com uma sonda com seqncia de
nucleotdeos complementar ao DNA do vrus, marcada com uma substncia radioativa. A presena do DNA viral
revelada pelamarcaodofilme deraios Xpelaemissoradioativa dasonda.
mers hibridizam com suas regies complemen-
tares, que se localizam nas cadeias opostas do
DNA, nas regies anqueadoras da seqncia-
alvo. Os primers so sintetizados de acordo com a
seqncia a ser amplicada, e a sua especicidade
depende do seu grau de conservao e comple-
mentaridade com a seqncia-alvo. A reao de
PCR envolve a realizao de vrios ciclos (entre
30 e 40) de desnaturao (separao da ta du-
pla), hibridizao dos primers e polimerizao da
cadeia de DNA a partir dos primers, pela enzima
DNA polimerase. A cada ciclo o nmero de mo-
lculas correspondentes seqncia-alvo duplica
e, no nal da reao, acumulam-se milhes de c-
pias idnticas correspondentes seqncia-alvo
inicial. Essas molculas, denominadas generica-
mente de produtos de PCR (ou amplicons), po-
dem, ento, ser detectadas visualmente em gis
de agarose, corados com brometo de etdio, sob
luz UV (Figura 3.8). Os produtos de PCR podem
tambm ter a sua identidade conrmada por hi-
bridizao com sondas especcas. Essa tcnica
tem tido inmeros usos nos diversos campos da
Biologia e Medicina.
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Denaturao (95C)
Anelamento
dos primers
Polimerizao
Reduz a
temperatura
Eleva a
temperatura
Eleva a
temperatura
'''''''''
Primer 1
'''''''''
Primer 2
Molcula de DNA
Seqncia-alvo
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
1 ciclo
30 ciclos
50-60C 72C
270pb
250pb
O nmero de cpias
duplica a cada ciclo
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Gel de agarose
M 1 2 3 4 5
Figura 3.8. Ilustrao demonstrativa da tcnica de reao emcadeia da polimerase (PCR). Apartir da molcula molde
original (genoma viral), um segmento especfico amplificado por sucessivas etapas de sntese de DNA. O produto
da amplificao pode ser visualizado sob luz UVemumgel de agarose corado combrometo de etdio, aps migrao
por eletroforese. Otamanho dos produtos pode ser comparado comummarcador molecular de massa conhecida. (M)
marcador molecular, (1) controle negativo, (2) controle positivo, (3, 4 e 5) amostras teste.
72 Captulo 3
A grande difuso da PCR somente foi poss-
vel aps a identicao de uma enzima polimera-
se de DNA resistente ao calor (Taq Thermophilis
aquatics), o que levou simplicao da tcnica
associado com o desenvolvimento de equipa-
mentos cada vez mais acessveis. Essas novas tec-
nologias proporcionaram um domnio maior da
tcnica e o desenvolvimento de variaes, como
a nested-PCR, multiplex-PCR, RT-PCR e real-time
PCR.
A nested-PCR realizada em duas etapas. Na
primeira etapa, um determinado segmento am-
plicado pelo mtodo tradicional. Uma segunda
etapa , ento, realizada, utilizando-se o produto
da primeira reao como molde e um outro con-
junto de primers, complementares s seqncias
localizadas internamente no produto da primeira
reao. Com isso, uma seqncia interna do pri-
meiro produto reamplicada (Figura 3.9).
Em relao PCR tradicional, a nested-PCR
possui as vantagens de maior sensibilidade (duas
etapas de amplicao) e especicidade. Uma va-
riao dessa tcnica o semi-nested PCR, em que,
na segunda reao, utiliza-se um primer interno
e em conjunto com um dos primers da primeira
reao.
O mtodo da multiplex-PCR baseia-se na uti-
lizao de dois ou mais pares de primers na mes-
ma reao. Cada conjunto de primer especco
para uma regio do agente ou de diferentes agen-
tes. Devido a sua versatilidade, essa tcnica uti-
lizada para a busca de variantes do mesmo vrus
ou no diagnstico de enfermidades que podem
ser causadas por diferentes agentes. Um exemplo
o diagnstico de aborto em bovinos, quando
realizada uma reao com diferentes pares de pri-
mers, cada conjunto sendo especco para um dos
agentes suspeitos.
A tcnica de RT-PCR (reverse transcriptase
PCR) consiste na amplicao de segmentos de
RNA. Atravs da transcrio reversa, realizada
pela ao da enzima transcriptase reversa, uma
cpia de DNA complementar (cDNA) sinteti-
zada a partir da RNA viral (genoma ou produto
intermedirio do processo de replicao). Essa
nova molcula sintetizada ser usada como tem-
plate (molde) para a reao de PCR convencional.
O desenvolvimento desta tcnica proporcionou
um grande avano no estudo e diagnstico dos
vrus RNA.
O PCR em tempo real (real time PCR) uma
variao do PCR, com a capacidade de se detec-
tar e quanticar a amplicao do produto me-
dida que vai sendo sintetizado. Essa tcnica uti-
liza, alm dos primers, uma sonda marcada com
um uorocromo. A sonda complementar a uma
regio interna do produto e marcada com uma
substncia uorognica. A cada ciclo de sntese,
o uorocromo liberado da sonda e essa libera-
o captada e medida na forma de intensidade
luminosa. Esta tcnica tem grande aplicabilidade
quando a quanticao do cido nuclico pre-
sente na amostra necessria. Tambm possui
aplicabilidade em diagnstico de viroses de im-
portncia sanitria estratgica (exemplos: febre
aftosa e peste suna clssica), pois permite a ob-
teno dos resultados em poucas horas.
Figura 3.9. A reao de PCR-nested realizada em duas
etapas. Na primeira etapa, utilizado um par de primers
externos (1 e 2), que permitem a amplificao de um
segmentodogenoma viral (seqncia-alvo1). Asegunda
etapa utiliza o produto da primeira reao como molde.
Esta utiliza um par de primers internos (3 e 4), que
permitem a amplificao de um segmento interno
seqncia inicial (seqncia-alvo 2). O PCR- nested
utilizado para aumentar a sensibilidade e especificidade
daamplificao.
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Produtos da
primeira
reao
Produtos da
segunda
reao
Seqncia-alvo 2
Primer 1
Primer 2
Primer 3 Primer 4
Seqncia-alvo 1
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''''
Primeira
reao
Segunda
reao
30 ciclos
30 ciclos
DNA molde
DNA molde
2.4.5 Anlise de restrio
Diferentes isolados de vrus podem ser
identicados e distinguidos entre si pela anlise
dos fragmentos gerados pela clivagem de seus
genomas por enzimas de restrio (endonucle-
ases, Figura 3.10). Essas enzimas clivam o DNA
em seqncias especcas, compostas por quatro
a oito bases; a alterao em uma dessas bases al-
tera o stio e resulta em falha de clivagem. Assim,
o genoma de um determinado vrus DNA cli-
vado com um conjunto de enzimas, produzindo
um conjunto de fragmentos de determinados ta-
manhos. Outros isolados do vrus que possuam
diferenas em quaisquer dos stios de clivagem
iro gerar padres de clivagem distintos, poden-
do-se, assim, fazer a diferenciao entre isola-
dos. A anlise por restrio enzimtica (REA) foi
muito utilizada na classicao e caracterizao
de isolados de campo. Atualmente, o advento e
difuso do seqenciamento de DNA substituiu,
com algumas vantagens, essa tcnica, que se en-
contra restrita a alguns vrus ou em desuso.
2.4.4 Eletroforese em gel de
poliacrilamida
A tcnica de eletroforese em gel de poliacri-
lamida (SDS-PAGE), alm de ser usada para se-
parao de protenas nos passos iniciais do WB,
tambm utilizada para a deteco do genoma
e em estudos epidemiolgicos de rotavrus, cujo
genoma composto por vrios segmentos de
RNA. Uma caracterstica dos rotavrus a pre-
sena de sorogrupos (ver Captulo 30), que so
correlacionados com diferenas na extenso des-
ses segmentos. Essas diferenas iro produzir um
padro de migrao na eletroforese, e isso ser
utilizado para a identicao do agente e classi-
cao em sorogrupos. A metodologia consiste
na extrao do RNA a partir de fezes, separa-
o dos fragmentos por SDS-PAGE e colorao
do gel com nitrato de prata. Aps a realizao
desse procedimento, as bandas correspondentes
aos segmentos genmicos so analisadas, e os
padres de migrao dos segmentos so com-
parados. O SDS-PAGE possui boa sensibilidade
e especicidade quando comparado com outras
tcnicas de deteco dos rotavrus.
3 Multiplicao de vrus
A obteno de vrus em grandes quantida-
des essencial para diversos procedimentos viro-
lgicos. Aps o seu isolamento, o vrus deve ser
identicado e caracterizado. Para isso, deve ser
amplicado a partir da amostra original. Quan-
tidades considerveis de vrus so necessrias
Genoma BoHV - 1 135.301bp Genoma BoHV - 5 138.390bp
Stios de clivagem da enzima BamHI
9 locais de clivagem 16 locais de clivagem
Enzima de restrio BamHI =
Digesto do genoma em fragmentos
Eletroforese em agarose
B
o
H
V
-
1
B
o
H
V
-
5
DNA viral genmico
Figura 3.10. Ilustrao demonstrativa da anlise de
restrio do genoma do herpesvrus bovino. A enzima
BamHI reconhece e cliva o genoma do herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1) em nove stios (A) e o genoma
do BoHV-5 em16 locais (B). Os produtos da digesto so
separados por eletroforese em agarose e visualizados
sob luz UV. Os diferentes padres de clivagemresultam
em fragmentos de tamanho diferentes, cuja anlise
comparativa permite a identificao dos respectivos
genomas. No exemplo acima, os locais de clivagem e o
tamanhodos fragmentos someramente ilustrativos.
74 Captulo 3
para a realizao de testes sorolgicos (soro-neu-
tralizao SN, HI), produo de antgenos para
a imunizao de animais (obteno de anti-soros
ou anticorpos monoclonais) ou para uso como
imungenos em vacinas. A reproduo da mani-
festao clnica de uma enfermidade, sob condi-
es experimentais, tambm requer altos ttulos
do vrus. Em resumo, a rotina de um laborat-
rio de virologia envolve necessariamente etapas
repetidas e contnuas de multiplicao de vrus
com nalidades diversas. Como os vrus neces-
sitam clulas vivas para se multiplicar, sistemas
biolgicos so utilizados com esse propsito.
Trs sistemas biolgicos tm sido classicamente
utilizados para a multiplicao de vrus: animais
susceptveis, ovos embrionados de galinha (OE)
e cultivos celulares.
3.1 Inoculao em animais susceptveis
Durante muitos anos, a reproduo da do-
ena em animais se constituiu na forma mais ob-
jetiva de deteco de vrus em material suspeito.
A inoculao de animais tambm serviu para a
amplicao do agente para diversos ns, entre
eles a produo de vacinas. Os fatores limitantes
para esse procedimento incluem o custo elevado
de manuteno, a imunidade prvia dos animais
ao agente e a baixa reprodutibilidade da enfermi-
dade. Nos ltimos anos, questes ticas referen-
tes ao uso experimental de animais somaram-se a
essas restries.
No princpio do sculo, os bovinos eram
inoculados com o vrus da febre aftosa (FMDV)
no epitlio lingual. Aps o desenvolvimento de
vesculas, o uido era coletado, inativado e uti-
lizado para a produo de vacinas. A utilizao
de extratos de crebro de camundongos infecta-
dos com o vrus da raiva (RabV), para a produo
de vacinas, outro exemplo da inoculao em
animais. Com o desenvolvimento dos cultivos
celulares, essa metodologia deixou de ser utili-
zada. Atualmente, a multiplicao de vrus pela
inoculao de animais possui uso muito restrito,
dentre os quais se destacam a prova biolgica
para o diagnstico da raiva em camundongos
lactentes (Captulo 11). A inoculao de camun-
dongos lactentes ocasionalmente utilizada para
o diagnstico do FMDV. Para alguns vrus que
no replicam ecientemente em cultivo celular,
como o vrus da peste suna africana (ASFV), a
inoculao de animais, para se obter altos ttulos
do vrus, empregada.
3.2 Inoculao em ovos embrionados
Vrios vrus de aves e alguns de mamferos
replicam com ecincia em tecidos de embrio de
galinha. A habilidade desses vrus em se multi-
plicar nesse sistema biolgico tem sido utilizada
para a multiplicao de vrus em laboratrio, seja
para a deteco de vrus em material clnico, seja
para a amplicao de vrus. Essa metodologia
teve grande difuso antes do desenvolvimento
e estabelecimento dos cultivos celulares, porm,
nos dias atuais, est limitada a poucos vrus,
principalmente queles que no replicam em cul-
tivos.
O material pode ser inoculado por vrias
vias, dependendo do agente suspeito (Figura
3.11). A presena do agente pode ser evidencia-
da pelo desenvolvimento de leses macro e mi-
croscpicas caractersticas no embrio e/ou nas
membranas vitelnicas (Tabela 3.2). Tambm se
pode observar retardo no desenvolvimento e
morte do embrio. A presena do agente e a sua
quanticao tambm pode ser detectada pela
pesquisa da atividade biolgica do agente (HA),
de antgenos (IFI) ou de cidos nuclicos virais
(hibridizao, PCR).
Cavidade
amnitica
Cavidade
alantide
Membrana
crio-alantide
Saco da gema
Casca
Embrio
Albumina
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | |
| | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | ||
|
|
|
|
|
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|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Figura 3.11. Vias de inoculao de vrus em ovos
embrionados.
3.3 Inoculao em cultivo celular
A deteco e identicao de vrus em amos-
tras clnicas, aps a sua multiplicao em cultivo
celular, constituram-se em uma das primeiras
formas de deteco viral. O advento dos antibi-
ticos contribuiu de forma decisiva para o desen-
volvimento da Virologia, pois somente a partir
da foi possvel estabelecer cultivos celulares em
grande escala. A propagao do agente em cul-
tivo celular permite que quantidades mnimas
de partculas vricas viveis sejam detectadas,
amplicadas e, posteriormente, caracterizadas.
Para os vrus que replicam bem em clulas de
cultivo, esse sistema biolgico possui aplicaes
virtualmente ilimitadas, incluindo: a) isolamento
e identicao com ns diagnsticos; b) obteno
de estoques virais para caracterizao biolgica
e molecular; c) uso em testes sorolgicos; d) pro-
duo de estoques virais para estudos de patoge-
nia; e) produo de antgeno para a imunizao
de animais (produo de anti-soro ou anticorpos
monoclonais); f) produo de vacinas, entre ou-
tros.
O isolamento em cultivo celular considera-
do a prova ouro (golden standard) em diagnstico
virolgico, sendo utilizada como padro de com-
parao com qualquer outro mtodo. Esse mto-
do tambm capaz de detectar amostras ocasio-
nais de vrus em material clnico. Vrios agentes
virais conhecidos resultaram de achados aciden-
tais em cultivo de clulas, entre estes o circov-
rus suno (PCV-1) e o vrus smio 40 (SV-40). Os
cultivos celulares ainda se constituem na forma
mais simples e econmica de obteno de gran-
des quantidades de vrus vivel para a pesquisa
e produo de vacinas.
Devido ao fato de nenhuma linhagem celu-
lar ser susceptvel a todos os vrus, muitos labo-
ratrios mantm cultivos celulares susceptveis
a diferentes agentes. A escolha de um tipo celu-
lar para o isolamento ou multiplicao do vrus
est, muitas vezes, associada com a espcie de
origem do material e com o histrico clnico da
enfermidade. Geralmente, so utilizadas clulas
originrias da espcie animal de origem do vrus.
No entanto, isso no regra, pois existem vrios
vrus que replicam em clulas de cultivos de ou-
B
O
V
I
N
O
-
Vrus Idade do embrio Via de inoculao Leso/conseqncia
E
Q
I
N
O
O
V
I
N
O
S
C
A
N
I
N
O
S
e
F
E
L
I
N
O
S
A
V
E
S
Varola bovina 10-11 dias Membrana corioalantide
Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
7 dias
Membrana corioalantide ou
cavidade alantide
Morte do embrio
Focos esbranquiados (pocks)
na membrana, morte do embrio
Lumpy skin vrus (LSDV) 7 dias Membrana corioalantide Pocks na membrana crio -alantide.
Influenza eqina 10-11 dias Cavidade alantide
Cavidade alantide
(EEE, WEE e VEE)
10-11 dias Qualquer via Morte do embrio
S
U
N
O
Vrus da doena de
Aujeszky (PRV)
10 dias Membrana corioalantide
Leses na membrana
corioalantide, invaso do sistema
nervoso central, e protuso cerebral
do embrio, morte do embrio.
Raiva (RabV) 7 dias Gema
Retardo do crescimento, distrofia
muscular, encefalomalcia
Morte do embrio
Morte do embrio
Newcastle (NDV) 9-11 dias
Morte do embrio
Vrus da lngua azul
(BTV)
Intravenosa 9-11 dias
9-11 dias
Membrana corioalantide ou
cavidade alantide
Influenza aviria (AIV)
Tabela 3.2. Vrus animais que replicam em embries de pinto e efeitos da replicao
76 Captulo 3
tras espcies. Por exemplo, o FMDV cultivado
em clulas de rim de hamster (BHK-21); o vrus
da sndrome reprodutiva e respiratria dos su-
nos (PRRSV) cultivado em clulas de rim de
macacos (MA-104); e o herpesvrus eqino (EHV)
cultivado em clulas de rim de coelhos (RK-13)
ou em clulas de rim de macaco-verde africano
(Vero).
Basicamente existem dois tipos principais
de cultivos celulares: cultivos primrios e as li-
nhagens contnuas. Cada um desses tipos apre-
senta vantagens e restries. Os cultivos primrios
originam-se da remoo de um rgo fresco de
um embrio ou feto recm-sacricado. O rgo
removido submetido a um processo mecnico e
enzimtico para fracionamento do tecido e indi-
vidualizao das clulas. As clulas individuali-
zadas so cultivadas em frascos ou garrafas, onde
iro aderir e formar uma monocamada. O cultivo
realizado com meio nutritivo e promotores de
crescimento, a temperatura de incubao de
37C. Nesse processo, a diviso celular bastan-
te restrita, com uma propagao lenta e limitada,
podendo-se dizer que ocorre uma diviso celular
a cada 24 horas. Assim, necessria a realizao
de subcultivos peridicos, e isso realizado atra-
vs da individualizao da monocamada pela
ao enzimtica, ressuspenso e semeadura em
novos frascos de cultivo. Nesses novos cultivos,
o nmero celular ir duplicar ou quadruplicar
em poucos dias. Aps um nmero varivel de
subcultivos (10 a 30 passagens, dependendo do
tipo celular), as clulas comeam a apresentar ta-
xas reduzidas de multiplicao e, eventualmen-
te, cessam a multiplicao. Os cultivos primrios
so os preferidos para a realizao da multiplica-
o viral, pois possuem caractersticas morfol-
gicas e siolgicas bastante semelhante s clu-
las dos rgos originais. Sendo assim, possuem
uma maior sensibilidade para a infeco viral. A
restrio que esse tipo de cultivo apresenta o
nmero limitado de subcultivos, gerando neces-
sidade de preparao contnua nos laboratrios
com alta demanda celular.
As linhagens celulares ou linhagens contnuas
so derivadas de clulas tumorais ou de tecidos
normais que sofreram transformao in vitro. Es-
ses tipos de cultivos celulares so cultivados de
maneira semelhante aos cultivos primrios e pos-
suem capacidade de multiplicao quase inde-
nida. Por estarem bem adaptadas s condies do
cultivo, so de fcil manipulao e propagao.
A maioria dos laboratrios d preferncia a esse
tipo de cultivo celular devido sua uniformidade,
estabilidade e facilidade de manuseio. Por causa
dessa alta taxa de propagao em laboratrio, as
linhas celulares podem sofrer alteraes morfol-
gicas e siolgicas que alteram a sensibilidade
infeco viral. No entanto, a sensibilidade infec-
o com alguns vrus pode ser inferior nas linha-
gens celulares em comparao com os cultivos
primrios, mas as vantagens citadas acima com-
pensam este aspecto. Linhagens celulares podem
ser obtidas pela transferncia entre laboratrios
ou pela aquisio junto a bancos depositrios.
Diversas linhagens celulares so utilizadas
rotineiramente em laboratrios de virologia em
atividades de diagnstico e pesquisa. O nome
dessas linhagens geralmente est relacionado
com o rgo de origem e freqentemente contm
as letras iniciais do nome do descobridor ou ou-
tra caracterstica marcante. Alguns exemplos de
linhagens celulares comumente utilizadas em Vi-
rologia Veterinria so: MDBK (Madin-Darby bo-
vine kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney),
CRFK (Crandell feline kidney), CRIB (cell resistant
to infection with bovine viral diarrhea vrus), RK13
(rabbit kidney), PK15 (porcine kidney 15), SK6 (swi-
ne kidney), BHK-21 (baby hamster kidney clone 21),
IBRS2 (Instituto Biolgico rim de suno clone 2), c-
lulas Vero, entre outras.
Existem ainda cultivos de clulas que se
multiplicam em suspenso, ou seja, no necessi-
tam de uma superfcie de contato para adeso e
multiplicao. Uma grande vantagem desse tipo
de cultivo a concentrao do nmero de clulas,
reduzindo a relao do nmero de clulas, tama-
nho do frasco e volume de meio utilizado. Essa
uma caracterstica desejvel e amplamente utili-
zada para a produo de vacinas. Clulas BHK-21
que se multiplicam em suspenso so utilizadas
para a multiplicao e produo de estoques do
RabV e o FMDV para uso em vacinas.
Alguns vrus no replicam ecientemente
em clulas de cultivo, assim, a sua amplicao
requer o uso de outro sistema biolgico, como
animais susceptveis (animais de laboratrio ou
os hospedeiros naturais) ou ovos embrionados.
Outros vrus no replicam em quaisquer dos sis-
temas biolgicos utilizados atualmente, como os
papilomavrus, vrus da hepatite C de humanos
e os vrus causador da hepatite B (famlia Hepad-
naviridae).
O processamento de amostras que poten-
cialmente contenham vrus deve ser realizado
rapidamente e seguir algumas regras para au-
mentar a probabilidade de deteco e multipli-
cao do agente. Para o diagnstico, as amostras
devem ser inoculadas em cultivos celulares o
mais brevemente possvel. A inoculao consiste
na deposio do material suspeito sobre as mo-
nocamadas, seguido de incubao por 1 a 2 horas
(perodo de adsoro). Posteriormente, o incu-
lo desprezado, e a monocamada lavada para
remover ou reduzir a presena de substncias
txicas e/ou contaminao bacteriana e fngica.
Aps, o meio de cultivo reposto, e as clulas so
incubadas a 37C, com uma atmosfera de 5% de
CO
2
. As monocamadas devem ser observadas
diariamente para a presena de alteraes mor-
folgicas celulares associadas com a replicao
viral (Figura 3.12). Essas alteraes, conseqn-
cias do processo replicativo dos vrus, so deno-
minadas genericamente de efeito citoptico (ECP
cytopathic effect). Uma grande parcela dos vrus
produz alteraes morfolgicas nos cultivos celu-
lares, que, muitas vezes, so caractersticas de um
determinado agente ou grupo de vrus. As altera-
Figura 3.12. Efeito citoptico produzido pela replicao viral em clulas de cultivo. Clulas de linhagem de rim
bovino no-infectadas (A) ou inoculadas com o BoHV-1 (B); BVDV (C); BoHV-2 (D); enterovrus bovino (E); e PI-3v
(F). Pode-seobservar diferentes tipos deefeitocitoptico. Para descriodetalhadaver tabela3.3.
A B
C D
E F
78 Captulo 3
es freqentemente produzidas pelos vrus so
vacuolizao citoplasmtica, formao de clulas
gigantes multinucleadas (sinccios) e arredonda-
mento celular entre outros. Na Tabela 3.3, esto
descritos os efeitos citopticos produzidos pelos
principais vrus de interesse veterinrio.
A visualizao dessas alteraes ao micros-
cpio ptico apenas um indicativo da presena
Vrus Tipo celular
Clulas de origem renal ou
primrias de testculos de bovinos.
Adenovrus bovino
(BAdV)
Efeito citoptico
Arredondamento e desprendimento celular, formao
de focos infecciosos como cachos de uva.
Corpsculos intranucleares.
MDBK, SK-6, PK15, BT, cultivos
primrios de pulmo, corneto nasal,
rim e testculo de bovino.
Vrus da diarria viral
bovina (BVDV)
Vacuolizao citoplasmtica, degenerao celular,
enrugamento do tapete, desprendimento e lise celular
(somente as amostras citopatognicas).
MDBK, CRIB, HeLA, BT, EBTr e
cultivos primrios de pulmo, corneto
nasal, rim e testculo de bovino.
Herpevrus bovino tipos
1 e 5 (BoHV 1 e 5)
Desorganizao nuclear, arredondamento e
desprendimento celular; formao de focos
infecciosos com o aspecto de cachos de uva, lise.
MDBK, BT, HELA e cultivos primrios
de corneto nasal e de rim de
bovino.
Parainfluenza bovina
tipo 3 (bPI-3)
Arredondamento, citomegalia e refringncia celular, formao
de grandes sinccios, desprendimento das clulas.
Corpsculos intracitoplasmticos.
MDBK, BT, cultivos primrios de
clulas do trato respiratrio de
bovinos.
Vrus respiratrio
sincicial bovino (BRSV)
Arredondamento e refringncia celular, formao de
pequenos sinccios e desprendimento das clulas.
Corpsculos acidoflicos intracitoplasmticos.
CV-1, VERO, MA-104, BSC-1,
Aubek, MDBK
Rotavrus bovino
(BRV)
Vacuolizao citoplasmtica, degenerao e
desprendimento celular. Corpsculos
intracitoplasmticos.
VERO, HRT-18, cultivos primrios de
rim de bovino.
Coronavrus bovino
(BCoV)
Formao de sinccios.
MDBK, EBTr, BT e cultivos primrios
de rim de feto bovino.
Parvovrus bovino
(BPV)
Citomegalia e refringncia celular, arredondamento e
desprendimento.
MDBK, CRIB e cultivos primrios de
origem bovina.
Virus da mamilite
herptica (BoHV-2)
Arredondamento celular, sinccios multinucleares.
Corpsculos eosinoflicos intranucleares.
Cultivo primrio de bao e pulmo
bovino e clulas embrionrias
diplides de humanos.
Vrus da leucose
bovina (BLV)
Formao de sinccios.
BHK-21, IB-RS-2 cultivos primrios de
tireide bovina, cultivos primrios de
rim de suno, bovino ou cordeiro.
Vrus da febre aftosa
(FMDV)
Condensao nuclear, arredondamento,
desprendimento e lise celular.
VERO, BHK-21 ou IB-RS2. Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
Arredondamento, retrao e desprendimento celular,
lise.
BT, cultivo de rim de fetos bovinos. Vrus da estomatite
papular (BPSV)
Arredondamento, agregao, lise celular.
Corspsculos intracitoplasmticos.
Cultivos primrios de clulas de
testculo bovino.
Vrus da varola e
pseudovarola bovina
Formao de sinccios. Corpsculos intracitoplasmticos.
VERO ou cultivos primrios de
rim de terneiros.
Rinderpest (RPV) Arredondamento e refringncia celular, seguido
de retrao com alongamentos citoplasmticos
pontes e formao de sncicios. Corpsculos
LT ou cultivos primrios de origem
bovina, caprina ou ovina
(preferencialmente de raas
lanferas).
Vrus da doena Lumpy Skin
(LSDV)
Arredondamento e retrao da membrana celular
e marginalizao da cromatina nuclear.
VERO, BHK-21, CER e cultivos
primrios de rim de terneiro e cordeiro.
Vrus da febre do vale
Rift (RVFV)
Arredondamento e rpida lise celular.
Cultivos primrios de clulas de
rim, bao, tireide, pulmo,
testculo e plexo coride de fetos
ovinos ou bovinos.
Vrus da febre catarral
maligna (MCFV)
Sinccios grandes,
contrao, arredondamento e desprendimento
celular da monocamada. Corpsculos
intranucleares.
Tabela3.3. Principais vrus animais, clulas susceptveis para replicaoinvitroe efeitocitoptico
B
o
v
i
n
o
s
VERO, ED, RK-13, MDBK, BHK-21
e cultivos primrios de rim eqino e
fibroblastos da derme eqina.
Herpesvrus eqino
(EHV 1, 2, 3 e 4)
desprendimento celular; formao de focos
com o aspecto de cachos de uva.
ED, PBMC eqino, fibroblastos
de derme eqina.
Anemia infecciosa
eqina (EIAV)
Formao de sinccios somente em leuccitos.
VERO, RK-13, BHK-21 e cultivos de
fibroblastos de embrio de
galinhas e patos.
(EEE, WEE e VEE)
RK-13, VERO, LLC-MK2 e cultivos
primrios de clulas de macaco,
coelho e eqino.
Arterite viral eqina
(EAV)
MDCK Influenza eqina (EIV) Arredondamento, desprendimento celular
Desprendimento celular do tapete, lise
Lise celular
BHK-21, VERO Lngua azul (BTV) Arredondamento celular, fuso.
HeLa, VERO, cultivos primrios
de rim e testculo ovino e bovino;
fibroblastos de galinhas e patos.
Ectima contagioso
(ORFV)
Arredondamento celular, aglomerao e desprendimento
celular. Corpsculos de incluso intracitoplasmticos
eosinoflicos.
Clulas da membrana sinovial de
fetos caprinos e cultivos primrios
de testculos de caprinos.
Artrite e encefalite
caprina (CAEV)
Formao de sinccios.
Cultivos de pulmo fetal, de clulas
do plexo coride de ovino ou de
leuccitos sangneos perifricos.
Pneumonia progressiva
dos ovinos Maedi-Visna
(OPPV)
Formao de sinccios e degenerao celular.
Cultivos primrios de testculo
de cordeiro.
Poxvrus ovino e
caprino
Vacuolizao nuclear. Corpsculos
intracitoplasmticos eosinoflicos.
VERO e cultivo primrio de rim
de cordeiro
Arredondamento, agregao celular e formao de
sncicio com o ncleo na forma circular. Vacuolizao
de algumas clulas. Corpsculo de incluso
intracitoplasmticos e intranucleares.
Peste dos
pequenos
ruminantes (PPRV)
PK-15, SK6, MDBK, cultivos
primrios de origem suna.
Doena de Aujeszky
(PRV ou SuHV-1)
desprendimento celular e formao de focos
Cultivos primrios de rim suno,
PK-15 e SK6.
Adenovrus suno Citomegalia e arredondamento celular,
desprendimento das clulas da monocamada.
Copsculos intranucleares.
SK6, PK-15. Peste suna clssica
(CSFV)
A maioria dos isolados no causa citopatologia
MARC-145, MA-104 e clulas de
origem de smios.
Sndrome respiratria
e reprodutiva suna
(PRRSV)
Aumento de tamanho, arredondamento e
agregao celular, lise.
PK-15, IB-RS-2, SST e cultivos
de clulas de rim e testculos
de sunos.
Enterovrus suno
(PEV)
Lise e desprendimento celular,
destruio da monocamada.
Cultivos primrios de rim suno,
ST, PK-15 e SK6.
Parvovrus suno
(PPV)
Arredondamento celular e picnose.
.
Tabela3.3. Continuao.
Vrus Tipo celular Efeito citoptico
O
v
i
n
o
s
e
c
a
p
r
i
n
o
s
E
q
i
n
o
s
S
u
n
o
s
80 Captulo 3
de um agente viral na amostra suspeita. Alguns
vrus possuem a capacidade de infectar cultivos
celulares de diversas origens, como o vrus da
lngua azul (BTV), que infecta clulas de mam-
feros e insetos e variaes do efeito citoptico po-
dem ser observadas. No entanto, a ausncia de
alteraes no indica necessariamente a ausncia
de vrus. Alguns vrus infectam as clulas sem
causar ECP e so denominados de no-citopti-
cos, como o caso do circovrus suno (PCV-2).
CRFK, MDCK, A-72 e
cultivos primrios de clulas de rim
e pulmo de canino e felino.
Parvovrus
canino (CPV)
Aumento do ncleo, enrugamento da membrana
celular, arredondamento das clulas, lise.
CRFK, A-72 e cultivos de rim, timo
e sinvia de canino.
Coronavrus
canino (CCoV)
Formao de sinccios.
MA-104, A-72, CRFK e cultivos
primrios de rim de canino.
Rotavrus
canino
MDCK e cultivos primrios
de rim de canino.
Herpesvrus
canino (CaHV)
VERO, MDCK e PBMC de
caninos e furo.
Vrus da cinomose
(CDV)
Formao de sinccios, desprendimento celular
do tapete, incluses intracitoplasmticas.
MDCK, cultivos primrios de
testculo ou rim de canino e felino.
Adenovrus canino
(CAdV)
Arredondamento e desprendimento celular,
lise e destruio do tapete. Corpsculos intranucleares.
CV-1, BHK-21, VERO, HeLa e cultivos
de fibroblastos de embrio de galinhas.
Vrus da raiva (RabV) Arredondamento e desprendimento celular.
CRFK, FCWF-4, Fe3TG, VERO
e fibroblastos felinos.
Calicivrus felino
(FCV)
Arredondamento e desprendimento celular,
lise e destruio do tapete.
CRFK e cultivos primrios de pulmo,
rim e testculo de felino.
Vrus da rinotraquete
felina (FeHV)
Desorganizao nuclear, arredondamento,
Vacuolizao citoplasmtica, degenerao e
desprendimento celular. Corpsculos
CRFK, A-72, FeWF e cultivos primrios
de tecidos fetais de felinos.
Vrus da peritonite
infecciosa felina
(FeCoV)
Arredondamento e desprendimento celular.
CRFK e Fe3TG. Vrus da panleucopnia
felina (FPLV)
Arredondamento e aumento da refringncia
das clulas.
PBMC felino. Vrus da imuno-
deficincia felina
(FIV)
Formao de sinccios.
Cultivos primrios de rim de embrio
de galinhas, cultivos primrios de
fibroblastos de galinhas e BHK-21.
Doena
de Newcastle (NDV)
Formao de sinccios, morte celular.
Cultivos primrios de clulas da
bursa, rim e fibroblastos de
embrio de galinha.
Doena de
Gumboro (IBDV)
CEK e cultivos de rim, fgado e
pulmo de galinhas.
Vrus da laringo-
traquete aviria
(ILTV)
MDCC-MSB1. Vrus da anemia
aviria (CAV)
Citomegalia, formao de sinccios.
Efeito pouco discernvel
Citomegalia, lise celular.
CK e fibroblastos de embrio
de galinhas ou patos.
Vrus da doena
de Marek (MDV)
desprendimento celular. Corpsculos intranucleares.
QT-35, cultivos primrios de rim ou
derme de embrio de galinha.
Poxvrus avirio Arrendondamento, refringncia celular e
desprendimento.
.
Tabela3.3. Continuao.
Vrus Tipo celular Efeito citoptico
G
a
l
i
n
h
a
s
e
O
u
t
r
a
s
A
v
e
s
C
a
n
i
n
o
s
e
F
e
l
i
n
o
s
Outro exemplo o vrus da diarria viral bovina
(BVDV), que possui amostras citopatognicas e
no-citopatognicas (Captulo 22). A conrma-
o e identicao do agente so, geralmente,
realizadas por mtodos que detectam alguma ati-
vidade biolgica (HA ou HAD), antgenos (IFA
ou IPX) ou cidos nuclicos virais (PCR, hibridi-
zao). A neutralizao com anti-soro especco
tambm pode ser usada para a identicao do
agente causador do ECP nos cultivos. Colorao
direta, como Giemsa ou hematoxilina e eosina
(para corpsculos de incluso), tambm podem
ser utilizadas para a conrmao da presena de
alguns agentes.
4 Quanticao de vrus
A realizao de vrias tcnicas virolgicas
requer o conhecimento da quantidade aproxi-
mada de partculas vricas presente no material.
O procedimento de quanticao denominado
titulao, e o valor obtido dito ttulo viral. Exis-
tem tcnicas diretas e indiretas para a quanti-
cao das partculas vricas. As tcnicas diretas
baseiam-se na contagem das partculas presentes
em uma amostra e observadas ao microscpio
eletrnico. Esse mtodo capaz de informar o
nmero preciso de partculas, porm no dife-
rencia partculas infecciosas de no-infecciosas.
Devido a essas particularidades, o mtodo direto
de quanticao viral no utilizado na rotina
laboratorial. As tcnicas indiretas possuem como
base a infectividade do vrus, que medida por
meio de um indicador biolgico. A quanticao
da infectividade de uma determinada suspenso
viral requer necessariamente o uso de sistemas
biolgicos para a replicao do agente (cultivos
celulares, OE ou animais). Como j mencionado,
os cultivos celulares so muito utilizados com
esse propsito. Para os vrus que no replicam
em cultivo, pode-se recorrer aos OE ou animais.
4.1 Diluio limitante
Os testes que utilizam a diluio limitante
foram os primeiros desenvolvidos e so mui-
to utilizados pela sua simplicidade. O material
inicialmente submetido diluio seriada, e
cada diluio serve como inculo para um n-
mero determinado de cultivos celulares. Quanto
maior o nmero de rplicas, mais preciso ser o
resultado. Essa tcnica geralmente realizada em
placas de microtitulao de 96 cavidades, e cada
diluio do material inoculada em oito rpli-
cas. Aps um determinado perodo de incubao
(varia entre 48 h e vrios dias, dependendo do
vrus), os cultivos so monitorados em relao ao
aparecimento do ECP (ou submetidos IFA ou
IPX para deteco de antgenos virais), que so
os indicadores da presena de infectividade na
respectiva diluio.
O ttulo viral geralmente expresso como a
recproca da maior diluio capaz de provocar re-
ao especca (ECP ou antgenos virais) em 50%
dos cultivos e a unidade ser TCID
50
(tissue cultu-
re infection dose). Quando a titulao realizada
em animais ou em OE, e o indicador a morte,
a unidade usada dose letal 50% (LD
50
). Quando
o resultado da infectividade medido de outra
forma que no a morte (ex.: paralisia, presena
de leses de pele, prurido), a unidade emprega-
da dose infectiva 50% (ID
50
). Para os vrus com
capacidade hemaglutinante, aplica-se o teste de
HA, ento a unidade de expresso ser unidade
hemaglutinante (UH).
Os valores obtidos nos ensaios de titulao
so submetidos anlise matemtica, que conver-
te os dados de infectividade em valores numri-
cos com uma acurcia aceitvel. Alguns mtodos
de clculo so utilizados, no entanto, o mtodo
de Reed e Muench o mais difundido para o
clculo de ttulo viral (Quadro 3.1). Os mtodos
de Spearman e Krber; e Seligman e Mickey so
menos populares. Esses mtodos, apesar de di-
ferirem na metodologia aplicada, baseiam-se na
observao da infectividade, portanto, somente
consideram as partculas infecciosas.
4.2 Ensaio de placa

Outro mtodo muito utilizado para a quan-
ticao de vrus o ensaio de placa, descrito ini-
cialmente por Dulbecco, em 1952. Diluies seria-
das da suspenso viral so inoculadas em tapetes
celulares pr-formados, geralmente em placas
poliestireno de seis cavidades. Aps a adsoro
e a remoo do inculo, os tapetes so recobertos
82 Captulo 3
com uma camada de meio semi-slido base de
gar ou carboximetilcelulose, e incubados por 24
a 72 horas, variando conforme o agente. As part-
culas virais que penetraram nas clulas durante a
adsoro iro replicar e produzir prognie viral.
A cobertura semi-slida, no entanto, impede que
as partculas vricas produzidas se disseminem
distncia. A transmisso do vrus a partir das c-
lulas inicialmente infectadas ocorre apenas para
as clulas vizinhas, pela transmisso direta entre
clulas. Aps alguns dias, so observados focos
de destruio celular nos tapetes, denominados
placas. Cada placa representa um determinado
nmero de clulas infectadas e destrudas a par-
Testes de infectividade so rotineiramente utilizados para o
clculo do ttulo viral (nmero de unidades infecciosas por
unidade de volume), que comumente expresso por TCID /mL
ou PFU/mL. Uma unidade infecciosa definida como a menor
quantidade do vrus capaz de produzir um efeito biolgico
detectvel (efeito citoptico, ECP) emclulas de cultivo ,
ou doena clnica, ou morte em animais. No caso de cultivos
celulares, uma unidade infecciosa equivaleria a uma
50
in vitro
Diluio
Cultivos celulares ndices acumulados
Porcentagem (%) =
[Infectados/(infectados
+ no-infectados)] X
No-
infectados Infectados
No-
infectados
+
infectados
10
-1
0 41 41 41/41 =100%
10
-2
0 33 33 33/33 =100%
10
-3
0 25 25 25/25 =100%
10
-4
0 17 17 17/17 =100%
10
-5
2 9 11 9/11 =81%
10
-6
7 3 11 3/11 =27%
10
-7
15 0 15 0/15 =0%
10
-8
No-infectados Infectados
0 8
0 8
0 8
0 8
2 6
5 3
8 0
8 0 23 0 23 0/23 =0%
Para o clculo dos ndices acumulados dos cultivos no-
infectados (isto , onde no se observou ECP), soma-se os
valores dos cultivos no-infectados, iniciando-se a partir da
menor diluio (10 ). J o clculo do ndice dos cultivos
infectados, realizado pelo somatrio das culturas infectadas
(onde o ECP foi visualizado) a partir da maior diluio (10 ).
Assim, a diluio apresentada no Quadro 3.1 necessria para a
infeco de 50%dos cultivos celulares, obviamente estar entre
as diluies 10 (27% infectados) e (10 ) (81% infectados). A
distncia proporcional entre essas duas diluies calculada
da seguinte forma:
(%positivo acima de 50%) - 50
------------------------------------------------------------------------ =
(%positivo acima de 50%) - (%positivo abaixo de 50%)
Assim, tem-se: 81-50 =0,57
81-27
-8
-1
-6 -5
partcula viral vivel capaz de infectar e replicar em uma clula
susceptvel.
1.TCID definida como a diluio de um determinado vrus
necessria para infectar 50%dos cultivos celulares inoculados.
Esse tipo de teste consiste na produo e deteco de ECPnas
clulas infectadas. O clculo da TCID em uma suspenso
inicial de vrus pode ser feito pelos mtodos de Reed & Muench
ou Spearman-Krber.
50
50
Este ndice ou distncia proporcional utilizado para o clculo
do ttulo viral pelo uso da equao: (fator da diluio onde se
observou ECPemmais de 50%das culturas de clulas) + (ndice
ou distncia proporcional multiplicado pelo logaritmo do fator de
diluio). Assim, tem-se (-5) + (0,57 x 1) = -5,57. Desse modo, a
diluio limitante da suspenso inicial do vrus capaz de infectar
50% dos cultivos celulares ser de 10 . A recproca deste
nmero ser o ttulo viral por unidade de volume empregado para
a realizao da prova, ou seja, 10 TCID em 50 L.
Rotineiramente, o ttulo viral expresso em mililitros (mL). Para
isso, basta multiplicar o valor obtido por 20 (1 mLcontm20 vezes
o volume de 50 L utilizado para a realizao da prova).
Finalmente, tem-se 10 que equivalente a 2 x 10 ou 10
TCID /mL.
-5,57
-5,57
-5,57 6,57 6,87
50
50
Quadro 3.1. Quantificao de vrus por diluio limitante

tir de uma clula originalmente infectada. O n-
mero de placas produzidas no tapete, portanto,
corresponde ao nmero aproximado de unidades
infecciosas presentes na diluio inoculada. Para
uma melhor visualizao e contagem das placas,
os tapetes so corados com cristal violeta (Figura
3.13).
Nessa tcnica, a quanticao expressa
como unidade formadora de placas por mililitro
(PFU/mL). Para o clculo nal do ttulo, leva-se
em considerao o nmero de placas produzidas
em cada diluio e o volume utilizado para ino-
culao. Um exemplo de titulao, usando essa
tcnica, est descrito no Quadro 3.2. Os ensaios
em placa so utilizados principalmente para a
quanticao de vrios vrus citopatognicos (ou
citopticos), mas podem tambm ser utilizados
para vrus que no induzem citopatologia. Nes-
ses casos, os focos (e no placas) de replicao
viral podem ser detectados e contados aps a re-
alizao da tcnica de IPX.
Alm de quanticao viral, os ensaios de
placa so tambm utilizados com outras nalida-
des, incluindo: a) clonagem biolgica e purica-
o de vrus; b) anlise de fentipo de variantes
virais; c) ensaios de neutralizao viral por anti-
corpos monoclonais ou policlonais; d) testes de
Figura 3.13. Ensaio de placa. Tapetes de clulas BHK-21
foram infectados com diferentes diluies do vrus da
estomatite vesicular (VSV) e, 48 horas aps, foram
corados comcristal violeta. Linha superior: a ausncia de
placas indicativa da ausncia de vrus; Linha inferior:
observa-se inmeros focos infecciosos, indicando a
replicaoviral e lisecelular.
atividade antiviral de compostos qumicos; e) es-
tudos de cintica e replicao viral, entre outras.
4.3 Outros mtodos de quanticao
Mtodos mais modernos que utilizam a
biologia molecular tm sido empregados para a
quanticao de vrus, principalmente em medi-
Para a obteno do ttulo, utiliza-se o nmero mdio de
placas presentes na maior diluio em que foi possvel
observar a replicao do vrus. Dessa maneira, tem-se: 31
x 10 PFU/200 L, que o equivalente a 3,1x10
PFU/200 L.
5 6
Nmero de placas
Diluio
Rplicas
Mdia
10
-3
168
150
159
10
-4
96
89
92,5
10
-5
35
27
31
10
-6
0
0
0
10
-7
0
0
0
10
-8
0
0
0
Controle
0
0
0
10
-1
incontveis
incontveis
-
10
-2
incontveis
incontveis
-
Ottulo de uma suspenso viral do VSVfoi calculado
pelo mtodo de ensaio de placa. Para isso, trs placas
de seis cavidades, contendo uma monocamada pr-
formada de clulas BHK-21 foraminoculadas. Apartir da
suspenso original, realizou-se oito diluies seriadas
na base 10, que serviramcomo inculo. Cada diluio foi
inoculada emduplicada e, para isso, foram
utilizados 200 L/cavidade. Aps o perodo de adsoro,
o inculo foi removido e meio de cultivo contendo
carboximetilcelulose foi adicionado. Aps 24 horas de
incubao, os tapetes celulares foram corados por
cristal violeta. Os nmeros da contagem das placas
esto apresentados abaixo.
Normalmente o ttulo expresso em mililitro (mL), nesse

caso, o volume inoculado foi de 200 L e, para realizar a
transformao, deve-se multiplicar por 5. Tem-se, ento,
15,5 x 10 PFU/mLou 1,55 x 10 PFU/ml.
6 7
Quadro3.2. Quantificaodevrus por ensaiodeplaca
84 Captulo 3
cina humana. Essas tcnicas mensuram a carga
viral (ou quantidade de vrus) pela anlise quanti-
tativa do material gentico viral presente em uma
amostra clnica. A quantidade de vrus presente
nas secrees e excrees de animais infectados
com o FMDV pode ser estimada atravs da tc-
nica de real time PCR. Essa mesma metodologia
tambm pode ser aplicada para os vrus da peste
suna clssica (CSFV) e AFSV, entre outros. Imu-
noensaios quantitativos e outros procedimentos
imunolgicos que fornecem a titulao e que
avaliam a presena do vrus em cada diluio so
amplamente usados. Esses mtodos apresentam
a vantagem de permitir realizar diluies, adio
de reagentes e leituras colorimtricas automatiza-
das. Os dados da leitura crua so posteriormente
analisados por mtodos matemticos que permi-
tem a identicao correta e precisam das unida-
des infectantes presentes no material testado. No
entanto, esses mtodos possuem aplicabilidade
restrita em medicina veterinria e dicilmente
sero substitudos pelos mtodos tradicionais.
5 Identicao e caracterizao de
um isolado
Os termos isolado ou amostra de vrus refe-
rem-se a um vrus que foi detectado e identi-
cado, mas que ainda no foi completamente ca-
racterizado. O termo cepa designa um vrus cujas
principais caractersticas genotpicas e fenotpi-
cas j foram estudadas e so conhecidas. As ce-
pas so geralmente utilizadas como referncia
em testes de diagnstico, em pesquisas e para a
produo de reagentes.
A primeira etapa aps a deteco de um
agente viral a partir de amostras clnicas a sua
identicao. Isso pode ser realizado prelimi-
narmente pelas caractersticas do ECP produzi-
do nos cultivos ou pelas alteraes produzidas
no embrio de galinha. A ME pode ser utilizada
para a identicao inicial do agente, de acordo
com as suas caractersticas morfolgico-estrutu-
rais. A conrmao da identidade do agente, no
entanto, depende do uso de anticorpos espec-
cos (IFA, IPX), de anti-soro especco (SN ou HI)
ou de mtodos de deteco e identicao de ci-
dos nuclicos (hibridizao, PCR).
A caracterizao de uma amostra viral
uma etapa posterior sua deteco e identica-
o. Essa etapa geralmente envolve a caracteriza-
o antignica ou sorolgica, que pode ser de-
nida como o perl dos antgenos de um vrus. A
obteno deste perl realizada pelo uso de tes-
tes que detectam e identicam os determinantes
antignicos presentes nas protenas virais. Vrias
tcnicas so utilizadas com essa nalidade, in-
cluindo a IFA com anticorpos monoclonais, soro-
neutralizao, xao do complemento, ELISA,
alm de outras tcnicas sorolgicas. A forma de
caracterizao a ser utilizada depende das parti-
cularidades de cada famlia de vrus e da dispo-
nibilidade de tcnicas e reagentes do laboratrio.
A identicao de seqncias especcas pode
ser realizada pelo uso de tcnicas como o PCR,
anlise de restrio ou seqenciamento do geno-
ma viral.
5.1 Sensibilidade a solventes lipdicos
Existe uma correlao entre presena do en-
velope e susceptibilidade dos vrus aos solven-
tes lipdicos. Durante muito tempo, uma forma
de identicao e caracterizao da presena de
vrus envelopados foi o tratamento com solven-
tes lipdicos previamente inoculao em cultivo
celular ou ovo embrionado. No envelope viral,
encontram-se inseridas glicoprotenas, que so
responsveis pelas interaes iniciais vrus-clu-
la. A remoo do envelope dos vrus resulta em
perda de infectividade e inativao da partcula.
A maioria dos vrus envelopados sensvel ao
ter e/ou clorofrmio, que so os solventes nor-
malmente utilizados (paramixovrus, herpesv-
rus, mixovrus entre outros); no entanto, alguns
vrus, como os poxvrus, apresentam variaes
de sensibilidade ao ter.
5.2 Concentrao e puricao por
ultracentrifugao
Estudos estruturais e ultra-estruturais, pro-
duo de antgenos para imunizaes ou mtodos
de deteco, entre outros, requerem solues con-
tendo altas concentraes de vrus e com elevado
grau de pureza. A obteno de solues com es-
sas caractersticas pode ser feita de vrias manei-
ras, das quais se destacam a ultracentrifugao.
A ultracentrifugao um mtodo relativamente
fcil, rpido e prtico, em que o material de alta
qualidade obtido. Seu princpio baseia-se na
taxa de sedimentao do vrus, que, por sua vez,
dependente do tamanho, densidade, morfolo-
gia da partcula, bem como da natureza do meio
e da fora de centrifugao. A maior restrio o
custo do equipamento, que difere das centrfugas
por atingir velocidades que variam entre 20.000 e
100.000 rotaes por minuto (RPM).
6 Biossegurana laboratorial
A manipulao em laboratrios de agentes
infecciosos, como os vrus, pode representar risco
de infeces inadvertidas ou disseminao de en-
fermidades entre humanos e animais. Isso pode
ser observado em vrias descries do passado.
O FMDV, devido a sua alta infecciosidade, talvez
tenha produzido os exemplos mais conhecidos.
A infeco de pesquisadores pelo vrus Marburg,
em um laboratrio da Alemanha na dcada de
1970, outro exemplo. No princpio, uma alterna-
tiva para evitar acidentes, como a disseminao
do vrus febre aftosa ou introduo de agentes
exticos no rebanho de um pas, foi a construo
de laboratrios em ilhas, o caso mais conhecido
de Plum Island Animal Disease Center, nos Estados
Unidos. Posteriormente outros laboratrios de
segurana elevada e acesso restrito, para mani-
pulao de agentes virais e animais infectados,
foram estabelecidos, tais como: o Australian Ani-
P
r
o
c
e
d
i
m
e
n
t
o
s
E
q
u
i
p
a
m
e
n
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V
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r
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t
e
o
E
x
e
m
p
l
o
s
Vrus no-zoonticos.
Bancada laboratorial.
BoHV, BVDV, BLV, BTV,
PRV, CDV, outros.
Normas bsicas de prtica
laboratorial.
BSL-1 Nvel
Nenhum requerido.
BSL-2
Associados com
infeces em humanos,
risco de auto-inoculao,
ingesto ou exposio
da pele e mucosas.
BSL-1, com acesso limitado,
identificao das reas de
manipulao, primeiros
socorros e descontaminao
do lixo e resduos.
Aventais, luvas, culos,
conforme a necessidade.
Manipulao de material
que produz aerossol em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II.
BSL-1 com autoclave.
Adenovrus humano,
citomegalovrus, influenza A,
B e C, rubola, poliovrus,
parainfluenza, vrus da raiva.
BSL-3
Agentes exticos ou
selvagens, com potencial de
transmisso por aerossol e de
produzir doena severa ou
letal.
Normas do BSL-2, com
acesso restrito e controlado,
coleta de soro do
trabalhadores,
descontaminao de todo o
lixo e resduos e esterilizao
das roupas antes da lavagem.
Requerimentos do BSL-1 e
toda manipulao em
cabine de fluxo laminar do
tipo I ou II. Uso de luvas,
aventais, respiradores,
conforme a necessidade.
BSL-2 acrescido de
separao fsica para
corredores e reas de
circulao, porta duplas,
presso negativa nos
laboratrios, sistema de
filtrao do ar.
Herpesvrus dos smios
(vrus B), vrus da encefalite
japonesa, hantavrus, febre
amarela, encefalite eqina
venezuelana, vrus do Nilo
Ocidental.
BSL-4
Agentes altamente perigosos
ou exticos, com risco de
vida para humanos,
transmitidos por aerossis,
ou agentes de periculosidade
desconhecida.
Normas do BSL-3, com
mudanas de roupas ao
ingressar na rea
contaminada. Requerimento
de banho para sada,
descontaminao de todo o
material antes da remoo
do laboratrio.
BSL-3, utilizao de cabine
de fluxo laminar tipo III ou
cabines tipo I e II em
ambiente com presso
positiva, macaces de
corpos inteiro com
respiradores para todos os
procedimentos.
BSL-3, rea ou prdio
isolado com suprimento de
ar e exausto, vcuo e
sistema de
descontaminao.
Vrus Ebola, Marburg, sabi,
febre do vale Rift, entre
outros.
Tabela 3.4. Nveis de biossegurana para manipulao de agentes virais
Adaptada de Murphy et al., 1999.
86 Captulo 3
mal Health Laboratory na Austrlia, o Onderstepoort
Veterinary Institute na frica do Sul, o Institute for
Animal Health na Inglaterra, o Center for Disease
Control (CDC) em Atlanta e, mais recentemente,
o Canadian Science Center for Human and Animal
Health, em Winnipeg, no Cnada.
A manipulao de amostras infectadas para
pesquisa ou diagnstico deve seguir as normas
da boa prtica laboratorial. Dessa maneira, con-
taminaes inadvertidas de amostras ou dissemi-
naes da infeco entre humanos ou animais so
evitadas. Conforme a infra-estrutura do laborat-
rio e o risco dos agentes manipulados, os labora-
trios de virologia so classicados em Nveis de
Segurana (BSL) 1, 2, 3 ou 4 (Tabela 3.4). O uso de
tcnicas asspticas, roupas adequadas (avental,
mscaras, luvas e culos) e desinfetantes apro-
priados so cuidados bsicos e necessrios em
todo trabalho laboratorial, independente do nvel
de segurana. O uso de equipamentos, tais como:
cabines de uxo laminar, sistema de ltrao do
ar, tratamento e esterilizao de dejetos, descarte
e incinerao dos dejetos so requisitos necess-
rios para laboratrios que manipulem agentes
com risco mdio a elevado, conforme o caso.
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GENTICA E EVOLUO VIRAL
Mauro Pires Moraes & Hernando Duque Jaramillo
1
1
Responsvel pela seo de Evoluo Viral.
1 Gentica viral
1.1 Conceitos e denies
1.2 Mutao
1.3 Classicao genotpica
1.4 Classicao fenotpica
1.5 Taxa de mutao
1.6 Interaes genticas entre vrus
1.6.1 Recombinao
1.6.2 Ressortimento
1.7 Outras interaes virais
1.7.1 Complementao
1.7.2 Mistura fenotpica
1.7.3 Poliploidia
2 Evoluo viral
2.1 Origem dos vrus
2.2 Quando se originaram os vrus
2.3 Como os vrus ampliaram o seu repertrio protico
2.4 Capacidade de mutao viral
2.5 Estudos laboratoriais de evoluo
2.6 Exemplos de evoluo viral
2.6.1 Vrus da estomatite vesicular: tempo versus fatores ambientais
2.6.2 Mixomatose na Austrlia
2.6.3 Vrus da inuenza
2.6.4 Parvovrus canino
2.7 Concluses
4

89
90
92
93
93
94
95
95
97
97
97
98
98
99
99
100
100
100
102
102
102
103
104
105
105
106
1 Gentica viral
As populaes virais, principalmente aque-
las de vrus RNA, so excelentes modelos para
estudos de evoluo gentica. Devido ao ciclo
replicativo dos vrus ser extremamente rpido,
tanto em infeces naturais como em cultivo ce-
lular, os processos de seleo e evoluo podem
ser observados em um curto espao de tempo.
Assim, a gentica de populaes virais pode ser
considerada uma viso minimalista e simplista
da evoluo das espcies.
Ao longo de sua histria natural que pode
remeter h milhes de anos os vrus vm reali-
zando um nmero incontvel de ciclos replicati-
vos em seus hospedeiros, sendo constantemente
transmitidos entre hospedeiros. Alguns necessi-
tam utilizar diferentes espcies de hospedeiros
mesmo invertebrados para assegurar a sua
manuteno na natureza. As infeces naturais
resultam em presso de seleo constante, que
acaba moldando o perl gentico e fenotpico dos
vrus, pois favorece e permite a sobrevivncia das
variantes que melhor se adaptam ao hospedeiro e
que so mais ecientemente transmitidas. Dentre
as propriedades que favorecem a sobrevivncia
e evoluo dos vrus destacam-se: a) capacidade
de replicar e ser excretado em altos ttulos; b) ca-
pacidade de se adaptar a novos tecidos, rgos
e/ou hospedeiros; c) capacidade de ser excretado
por longo tempo; d) capacidade de se reproduzir
e ser excretado sem produzir doena severa na
maioria de seus hospedeiros; e) capacidade de
escapar dos mecanismos imunolgicos do hospe-
deiro; f) capacidade de resistir no meio ambien-
te, tanto fora de clulas vivas como em animais
vertebrados ou invertebrados, assegurando a sua
sobrevivncia at alcanar um novo hospedeiro;
g) habilidade de ser transmitido verticalmente
entre hospedeiros.
Dentre as caractersticas que apresentam
relevncia na gentica das populaes virais e
facilitam a compreenso da sua evoluo, des-
tacam-se a grande quantidade de prognie viral
produzida a partir da infeco de uma nica c-
lula e o curto perodo de tempo de gerao. Para
se ter uma idia desta dinmica, a infeco de
uma clula, com uma nica partcula infecciosa,
pode produzir uma prognie de mais de 100.000
novos vrions em pouco mais de 10 horas. Isso
corresponde a uma cpia do genoma produzida
a cada meio segundo. Considerando-se infec-
es de hospedeiros multicelulares ou mesmo
cultivos celulares as geraes se sucedem em
magnitude (nmero de indivduos produzidos)
e velocidade inimaginveis. Um ingrediente adi-
cional nesta complexidade a potencial variao
gentica da prognie. Nos vrus RNA, geralmen-
te ocorre uma mutao para cada 10.000 nucleo-
tdeos incorporados aos novos genomas, ou seja,
cada novo genoma potencialmente contm, pelo
menos, uma mutao e, em alguns casos, a gran-
de maioria da prognie pode ser distinta do vrus
parental. Esses eventos, em conjunto, proporcio-
nam uma grande capacidade de adaptao des-
sas populaes, resultando em novas geraes de
vrus com propriedades distintas das parentais,
de acordo com o ambiente em que replicam.
A gentica dos vrus possui implicaes
em todos os aspectos de sua biologia, incluindo
a evoluo e seleo de variantes adaptados ao
meio, distribuio espacial e temporal, espectro
de hospedeiros, patogenicidade e virulncia, in-
teraes com o sistema imunolgico do hospe-
deiro, entre outros. O estudo da gentica viral
tem como objetivos conhecer a composio gen-
tica do genoma e como as informaes genticas
nele contidas se reetem no fentipo do vrus.
Assim, o conhecimento da gentica viral pode ter
um amplo espectro de aplicaes, que vo desde
a sua utilizao para otimizar o manejo sanitrio
de um rebanho at a produo de recombinantes
atenuados para uso em vacinas.
A gentica viral clssica era baseada no iso-
lamento e anlise fenotpica de um grande n-
mero de mutantes naturais, estudos de comple-
mentao, recombinao natural, determinao
da ordem e posio dos genes no genoma e, nal-
mente, na anlise fenotpica dos mutantes para
determinar a funo dos genes. Notveis avanos
foram obtidos com o desenvolvimento dos culti-
vos celulares na dcada de 1950 e com o advento
das tcnicas moleculares a partir do nal dos anos
1970. Essas tcnicas permitiram a anlise detalha-
da da seqncia, estrutura e funo de cidos e
protenas virais e inauguraram uma nova etapa
90 Captulo 4
no estudo da gentica dos seres vivos. Embora
alguns procedimentos genticos clssicos conti-
nuem em uso, grande parte foi substituda por
mtodos modernos que permitem uma anlise
mais detalhada e aproximada das relaes entre
gentipo e fentipo.
A seqncia completa do genoma de vir-
tualmente todos os vrus de interesse humano e
animal j foi determinada e, atualmente, encon-
tra-se disponvel em bancos de dados de acesso
pblico. As funes de grande parte das prote-
nas virais tambm j foram estabelecidas, tanto
por mtodos diretos como por inferncia a par-
tir de seqncias de aminocidos e estrutura de
outras protenas semelhantes. De especial rele-
vncia para a Virologia o conjunto de procedi-
mentos denominados genericamente de genti-
ca reversa, que realizam a anlise fenotpica a
partir da composio gentica, ao contrrio da
gentica clssica. Assim, o conhecimento da ge-
ntica e a disponibilidade das tcnicas molecula-
res tm permitido a manipulao do genoma dos
vrus, a produo de recombinantes com muta-
es em genes especcos e o estudo do impacto
dessas mutaes no fentipo viral. Essas tcnicas
e conhecimentos adquiridos tm proporcionado
um progresso notvel na Virologia, permitindo
a identicao e manipulao de genes envolvi-
dos em virulncia e nas interaes com o sistema
imune, como, por exemplo, para a produo de
vacinas mais ecientes e seguras.
A seqncia completa de nucleotdeos do
genoma dos vrus pode ser determinada por tc-
nicas de seqenciamento de DNA. Em se tratando
de vrus RNA, a anlise e manipulao dos geno-
mas so facilitadas pela sua converso em mol-
culas de DNA complementar (cDNA) por meio
de transcrio reversa. Genomas recombinantes,
contendo delees de genes, inseres de genes
heterlogos ou mutaes pontuais em nucleot-
deos ou seqncias especcas podem ser obtidos
pelo uso de tcnicas moleculares de manipulao
enzimtica e clonagem de DNA. Vrus conten-
do genes de outros vrus de interesse podem ser
produzidos in vitro para estudos de patogenia,
usos em terapia gentica e em vacinas. Protenas
virais, para uso teraputico ou vacinal, podem
ser expressas em sistemas heterlogos. Essas so
apenas algumas aplicaes da tecnologia de DNA
recombinante e tcnicas moleculares em geral no
estudo da gentica e biologia dos vrus. Consi-
dera-se que os limites da manipulao gentica
dos vrus sero impostos apenas pelas restries
biolgicas, ou seja, ser possvel modicar tudo e
apenas o que a biologia permitir.
Este captulo abordar os principais meca-
nismos genticos e de evoluo das populaes
virais. Dentre esses, sero discutidos os meca-
nismos relacionados diretamente com as carac-
tersticas de replicao do genoma, como as mu-
taes; aqueles resultantes de interaes entre
diferentes vrus, como a recombinao, rearranjo,
complementao; algumas interaes entre vrus
e hospedeiros, como a integrao; e as interaes
no-genticas entre vrus. A seo de evoluo
abordar alguns aspectos e hipteses sobre a ori-
gem e evoluo dos vrus, e de como esses micro-
organismos conseguem se perpetuar e evoluir,
apesar das constantes restries impostas pelo
meio e pelas defesas dos hospedeiros. Ao nal,
sero apresentados alguns exemplos de evoluo
de vrus humanos e animais e as conseqncias
biolgicas nas interaes desses agentes com os
seus hospedeiros.
1.1 Conceitos e denies
Os princpios bsicos, conceitos e termino-
logia utilizados em gentica de vrus so basi-
camente os mesmos empregados no estudo da
gentica de outros organismos. Assim, eventos
como mutao, recombinao e seleo possuem
signicado semelhante quando aplicados aos v-
rus. A gentica viral, no entanto, possui algumas
particularidades que so derivadas das peculiari-
dades da biologia desses agentes. A replicao e
a conseqente expanso viral, por exemplo, um
processo muito mais rpido do que em outros or-
ganismos uni- ou multicelulares. Para se ter uma
idia dessa dinmica, a infeco de uma clula
por uma nica partcula vrica pode resultar na
produo de uma prognie de mais de 100.000
vrions em poucas horas. Considerando-se as in-
feces naturais em hospededeiros multicelula-
res vertebrados, por exemplo ou mesmo em
cultivos celulares, a populao derivada de um
Gentica e evoluo viral 91
nico progenitor se expande exponencialmente
em uma velocidade impressionante. Como resul-
tado, as geraes de vrus se sucedem a uma ve-
locidade incomparvel com aquela observada em
organismos multicelulares. Essa caracterstica faz
com que os vrus sejam muito utilizados como
modelo para estudos genticos e evolutivos.
Assim, quando se estuda os diversos aspec-
tos da biologia e gentica dos vrus, na verdade
est se estudando uma populao numerosa de
indivduos (vrions), e no um indivduo isolado
ou um grupo pequeno (como em estudos gen-
ticos em bovinos, por exemplo). Ento, quando
se refere a uma cepa ou um mutante viral, a refe-
rncia feita ao conjunto de unidades vricas que
compe aquela populao de vrus.
Quando se refere a um determinado vrus
vrus da cinomose (CDV), por exemplo est se
referindo a uma espcie viral. Uma espcie viral
denida como uma populao de vrus geneti-
ca e biologicamente muito semelhantes entre si,
derivada de ancestrais comuns. Assim como os
demais organismos uni- ou multicelulares, as di-
ferentes espcies virais ou os diferentes vrus
so compostos por inumerveis indivduos, que
podem ser mais ou menos semelhantes entre si.
Ou seja, a similaridade gentica e fenotpica entre
os vrus que compem uma espcie variam entre
as espcies. Os componentes de uma populao
de vrus RNA (vrus da inuenza, por exemplo)
so mais variveis entre si do que os vrus DNA.
Em outras palavras, as populaes de vrus va-
riam em sua homogeneidade/heterogeneidade,
sendo que os vrus RNA so mais variveis. Cabe
recordar que uma clula infectada com um ni-
co vrion pode produzir centenas de milhares
de novas partculas, no necessariamente idnti-
cas em suas seqncias de nucleotdeos. Assim,
uma amostra do vrus da diarria viral bovina
(BVDV), isolada no Brasil, provavelmente di-
ferente gentica e antigenicamente de amostras
isoladas em outras partes do mundo. Por outro
lado, os vrus DNA tendem a ser mais estveis
geneticamente e pouca variao encontrada en-
tre os vrus de uma mesma espcie. As diferenas
nos nveis de homogeneidade/heterogeneidade
entre os vrus DNA e RNA devem-se principal-
mente s propriedades das enzimas replicativas
desses vrus, que apresentam diferentes taxas de
erro ao replicarem os genomas.
Em razo da heterogeneidade gentica e fe-
notpica que pode existir em uma populao de
vrus de uma mesma espcie sobretudo em v-
rus RNA os estudos genticos geralmente so
realizados com vrus puricados. Atravs de clo-
nagem biolgica e posterior expanso dos clones
obtidos, possvel se obter populaes homog-
neas de vrus derivados de um nico ancestral.
Os vrus puricados (ou clonados) a partir de
populaes mistas so geralmente aqueles mais
abundantes e predominantes na populao, sen-
do, por isso, os seus verdadeiros representantes.
medida que esses clones so expandidos, no
entanto, a tendncia que a prognie viral se
torne gradualmente divergente geneticamente
devido gerao contnua de indivduos com
mutaes. Por isso, quando se deseja trabalhar
continuamente com populaes homogneas de
vrus, essas populaes devem ser periodicamen-
te clonadas.
Alm dos conceitos acima, algumas deni-
es so tambm necessrias para o entendimen-
to dos princpios de gentica viral, embora a sua
aceitao e terminologia nem sempre sejam uni-
versais. Cabe ressaltar que as denies a seguir
como j denido , referem-se aos vrus como
populaes, colhidas diretamente dos hospedei-
ros ou de cultivos celulares onde so multiplica-
dos:
Vrus de campo (wild-type): o vrus original
ou parental, a partir do qual se realiza estudos
biolgicos, genticos ou moleculares. Esta po-
pulao de vrus serve de base para as compa-
raes genotpicas e fenotpicas feitas com popu-
laes derivadas dela ou com outras populaes
da mesma espcie viral, porm de outra origem.
Embora a denominao remeta ao vrus original
que foi obtido de animais infectados, os vrus de
campo, utilizados em estudos biolgicos e genti-
cos, nem sempre so exatamente iguais queles
originalmente isolados. Isto porque a obteno de
ttulos virais compatveis com vrios estudos re-
quer a sua multiplicao, s vezes, por passagens
sucessivas em cultivos celulares ou em ovos em-
brionados. Esses ciclos sucessivos de replicao
podem resultar em alteraes genticas e fenot-
92 Captulo 4
picas no vrus. De forma ideal, os vrus de campo
utilizados em quaisquer experimentos devem ter
sido cultivados o menor nmero de vezes poss-
vel. O termo selvagem tambm tem sido utilizado
para designar os vrus de campo;
Mutante: o vrus que difere do vrus pa-
rental na seqncia de nucleotdeos de seu geno-
ma, ou seja, apresenta alteraes de bases e/ou
de segmentos genmicos em comparao com
o vrus de campo. Algumas mutaes no se re-
etem em alteraes fenotpicas e, por isso, so
chamadas de mutaes silenciosas (silent muta-
tions). Nesses casos, o fentipo do vrus mutante
indistinguvel do parental e a sua identicao
depende de anlise da seqncia do genoma. Por
outro lado, as mutaes que resultam em altera-
es fenotpicas podem ser detectadas pela ob-
servao e anlise das caractersticas fenotpicas
alteradas. Vrus temperatura-sensveis (TS), por
exemplo, so mutantes que no replicam bem
temperatura corporal (37-38C), ao contrrio do
vrus parental. Os vrus TS geralmente necessi-
tam uma temperatura mais baixa (30-34C) para
replicarem com ecincia. Mutantes de placa
pequena (small plaque mutants) so vrus que se
disseminam decientemente em cultivo celular,
produzindo focos menores de destruio celular
do que os produzidos pelo vrus parental. Esse
fentipo est geralmente associado com uma ca-
pacidade reduzida de transmisso direta entre
clulas. Mutantes de gama de hospedeiros (host
range mutants) so vrus que diferem dos vrus
parentais em relao ao espectro de hospedei-
ros que infectam in vivo, ou em relao aos tipos
celulares que podem infectar in vitro. O termo
variante usado para designar um determinado
vrus (uma populao de vrus) que apresenta al-
guma diferena fenotpica em relao ao vrus de
campo, ou seja, uma denio essencialmente
fenotpica. As diferenas fenotpicas entre os v-
rus parentais e os seus variantes certamente so
reexos de mutaes no genoma;
Cepa (ou estirpe): um vrus cujas carac-
tersticas biolgicas e/ou moleculares so razo-
avelmente conhecidas. Em contraste, uma amos-
tra (ou isolado) um vrus isolado de animais
sobre o qual no se tem um maior conhecimento.
Amostras (ou isolados) podem se tornar cepas
a partir da sua caracterizao laboratorial. Em
outras palavras, as cepas so alguns isolados ou
amostras de um determinado vrus que sofreram
caracterizao aps o seu isolamento. No entan-
to, essas denies no possuem utilizao uni-
versal, e o termo cepa , muitas vezes, utilizado
para designar isolados no-caracterizados e vrus
de campo.
O termo cepa de referncia utilizado para de-
signar cepas virais conhecidas que so utilizadas
por diferentes laboratrios com ns diagnsticos
e/ou produo de reagentes, vacinas e mesmo
para estudos de patogenia.

1.2 Mutao
O termo mutao utilizado para designar
alteraes na seqncia de nucleotdeos no cido
nuclico genmico de um determinado organis-
mo comparando-o com o seu parental. As mu-
taes surgem naturalmente como resultado da
indelidade das polimerases principalmente as
polimerases de RNA que incorporam nucleo-
tdeos incorretos durante a replicao do geno-
ma. Mutaes tambm podem ser induzidas por
mtodos qumicos (hipoxantina, bromodeoxiu-
ridina) ou fsicos (raios X, ultravioleta e gama).
Acredita-se que muitas mutaes que ocorrem
naturalmente resultam na produo de vrus in-
viveis, ou seja, constituem-se em mutaes le-
tais. Esses tipos de mutaes no so percebidas
e no possuem impacto na adaptao e evoluo
viral, pois os genomas mutantes so incapazes de
replicar. Logo, quando se faz referncia a mutan-
tes, cepas, tipos ou variantes virais, sempre so
consideradas as mutaes no-letais, que permi-
tem diferenciar o indivduo e a sua prognie do
vrus parental.
Como foi mencionado, as mutaes podem
ser espontneas (resultados de erros durante a
replicao) ou induzidas (resultados de danos
ao cido nuclico por agentes qumicos ou fsi-
cos). As mutaes naturais so mais freqentes
nos vrus RNA (um nucleotdeo incorreto entre
10
3
a 10
4
nucleotdeos inseridos) do que nos vrus
DNA (um erro a cada 10
8
a 10
11
nucleotdeos in-
corporados). A maior taxa de mutao observa-
da nos vrus RNA deve-se menor delidade da
polimerase de RNA, que incorpora nucleotdeos
incorretos com maior freqncia, alm da inca-
pacidade de corrigir os erros cometidos. As po-
limerases de DNA, por sua vez, cometem menos
erros e, ainda assim, so capazes de corrigi-los,
substituindo os nucleotdeos incorretos incorpo-
rados s cadeias nascentes.
Os mutantes gerados durante a replicao
viral, quando apresentam uma vantagem seletiva
em comparao com os parentais, sero ampli-
cados com maior ecincia e rapidamente tor-
nam-se predominantes na populao viral. Por
outro lado, mutantes que no apresentam van-
tagem seletiva tendem a permanecer em propor-
o pequena e ocasionalmente desaparecem da
populao, caso repliquem com menor ecincia
do que os demais indivduos. Ou seja, a evoluo
de uma determinada populao viral depende da
taxa de mutao e da seleo a qual os vrus gera-
dos so submetidos.

1.3 Classicao genotpica
Um dos critrios usados para a classicao
de mutantes baseia-se nas caractersticas genot-
picas da mutao. Mutaes causadas por simples
substituies de nucleotdeos so chamadas de
mutaes pontuais. As mutaes pontuais podem
ser do tipo transio, quando h substituio de
uma purina por outra purina (A ou G) ou pirimi-
dina por outra pirimidina (C ou T); ou transverso,
quando ocorre a substituio de uma pirimidina
por uma purina ou vice-versa. Outras mutaes
envolvem delees ou inseres de segmentos de
tamanhos variveis de cido nuclico.
Outra forma de classicao das mutaes
pontuais considera as suas conseqncias na
codicao de aminocidos, quando a mutao
ocorre em seqncias codicantes do genoma.
Assim, as mutaes podem ser silenciosas (silent
mutations) quando a troca do nucleotdeo no
resulta na codicao de outro aminocido. A
protena sintetizada permanece a mesma e no
ocorre mudana no fentipo do vrus. Mutaes
de sentido trocado (missense) so aquelas em que
a troca de nucleotdeos resulta na codicao
de outro aminocido. As conseqncias dessas
mutaes so variveis, dependendo do novo
aminocido incorporado protena e da possvel
alterao da conformao e/ou funo proti-
ca. Mutaes missense podem ser absolutamente
incuas (se o aminocido incorporado no alte-
rar a funo da protena) ou mesmo letais (se o
novo aminocido alterar drasticamente a funo
da protena codicada). Mutaes sem sentido
(nonsense) resultam na produo de um cdon de
terminao da traduo (stop codon) em uma se-
qncia aberta de leitura (ORF). Com isso, ocorre
a produo de uma protena truncada, cuja fun-
cionalidade pode variar amplamente, dependen-
do do local onde a mutao introduzida. Essas
mutaes so classicadas como mbar (amber =
UAG), ocre (ochre = UAA) ou opala (opal = UGA).
As conseqncias de mutaes nonsense tambm
variam amplamente, e muitas delas so prova-
velmente letais ou, pelo menos, deletrias para a
viabilidade do vrus.
Embora as mutaes e suas conseqncias
sejam mais estudadas em seqncias codicantes
de protenas, certamente tambm so importantes
em regies regulatrias de transcrio e replica-
o (promotores, enhancers, origens de replicao
etc.), e em seqncias nucleotdicas envolvidas
na encapsidao dos genomas recm-formados.
1.4 Classicao fenotpica
Os mutantes virais tambm podem ser clas-
sicados quanto s conseqncias fenotpicas de
suas mutaes. Vrias caractersticas fenotpicas
podem ser consideradas nesta classicao, e os
mutantes podem ser selecionados pela sua ha-
bilidade em produzir placas de lise celular; por
exemplo. Alguns mutantes de adenovrus podem
egressar precocemente da clula infectada, em
comparao com os seus parentais, e, conseqen-
temente, produzem maiores placas de destruio
celular in vitro. Essa caracterstica pode estar rela-
cionada com alteraes da virulncia do vrus, ou
seja, mutantes virais que produzem placas maio-
res in vitro podem possuir maior virulncia em
hospedeiros susceptveis in vivo. Este fenmeno
j foi observado em diversos vrus, incluindo o
vrus da peste suna clssica (CSFV). Em outros
casos, pode no existir uma correlao entre ta-
manho de placa in vitro e virulncia in vivo. Nes-
94 Captulo 4
ses casos, o fentipo serve apenas como um par-
metro para a seleo de mutantes com diferentes
habilidades replicativas in vitro.
Outro fentipo observado para a seleo
de mutantes a capacidade de replicao a di-
ferentes temperaturas. Como j mencionado, os
mutantes TS replicam bem a temperaturas de
30-34C (denominada temperatura permissiva) e
no replicam com ecincia a 37C (temperatu-
ra no-permissiva). Mutantes adaptados ao frio
(cold adapted) replicam melhor sob temperaturas
baixas, mas retm alguma capacidade de repli-
car a 37C. Freqentemente, essa caracterstica
atribuda a alteraes conformacionais de deter-
minadas protenas, especialmente as polimera-
ses virais, dependendo da temperatura. Ou seja,
pela mudana na sua seqncia de aminocidos
em determinada temperatura, essa protena no
manteria sua conformao secundria ou terci-
ria e perderia a sua funo. Esses mutantes po-
dem ser utilizados em vacinas atenuadas, pois
replicam apenas em reas superciais do corpo,
sem se disseminar sistemicamente no organis-
mo.
A alterao da gama de hospedeiros outra
caracterstica fenotpica utilizada na classicao
de mutantes. Alguns mutantes podem no repli-
car com a mesma ecincia nos mesmos hospe-
deiros que os vrus de campo, reduzindo, assim,
a sua abrangncia. Um exemplo tpico um mu-
tante do vrus da febre aftosa (FMDV) que surgiu,
em 1997, na Tailndia. Esse mutante natural no
possua a habilidade de infectar bovinos prin-
cipal espcie hospedeira do vrus infectando
apenas sunos.
Uma forma importante de seleo de mu-
tantes a resistncia a determinadas drogas. A
presso de seleo exercida pelas drogas antivi-
rais permite o seu uso para a seleo e pesqui-
sa desses mutantes. Anticorpos neutralizantes
tambm podem ser utilizados para a seleo de
vrus resistentes neutralizao. Para isso, os
vrus so cultivados in vitro na presena de an-
ticorpos neutralizantes. Os mutantes originados
que eventualmente no forem reconhecidos pe-
los anticorpos por alteraes nas protenas de
superfcie so rapidamente amplicados e se
tornam predominantes na populao. Esses vrus
so chamados de mutantes de escape antignico. A
gerao natural de mutantes de escape uma es-
tratgia utilizada por vrus que produzem infec-
es persistentes, sobretudo os retrovrus, pois
podem seguir replicando no hospedeiro mesmo
na presena de anticorpos.
Mutantes decientes em atividade enzim-
tica so aqueles que apresentam mutaes nos
genes que codicam determinadas enzimas,
como a timidina quinase dos herpesvrus. Esses
mutantes apresentam capacidade de replicao
semelhante a dos vrus parentais in vitro, mas a
sua virulncia atenuada quando so inoculados
em animais susceptveis. A exemplo dos mutan-
tes TS, esses vrus tambm podem ser utilizados
para a produo de vacinas. Os mutantes que
apresentam atenuao da virulncia, sem que ne-
cessariamente se conhea a causa, so conhecidos
como mutantes atenuados.
1.5 Taxa de mutao
As taxas de mutao natural dependem ba-
sicamente da delidade da enzima polimerase
e da sua capacidade de corrigir eventuais erros
cometidos durante a polimerizao das novas ca-
deias de cido nuclico. As polimerases de DNA,
que utilizam molculas de DNA como molde
para a sntese de novas molculas, geralmente
apresentam um sistema de correo (proofreading)
para aqueles nucleotdeos incorporados erro-
neamente. Esse processo envolve seqncias
funcionais especcas (motivos) com atividade
exonuclease, que so capazes de remover os nu-
cleotdeos incorretos e substitu-los pelos corre-
tos. Em contraste, as enzimas que polimerizam
RNA a partir de RNA no possuem a capacidade
de proofreading. Como conseqncia, as polime-
rases de DNA apresentam uma taxa de um erro
para cada 10
10
a 10
11
nucleotdeos incorporados,
enquanto as polimerases de RNA apresentam um
erro a cada 10
3
a 10
4
nucleotdeos. Isso signica
que a taxa de erros cometida durante a replicao
dos vrus RNA pode ser at um milho de vezes
maior do que aquela resultante da replicao dos
vrus DNA. A diferena nas taxas de mutao se
constitui na principal causa da grande variabi-
lidade gentica e antignica dos vrus RNA em
comparao com os vrus DNA.
Os erros de incorporao so essencialmen-
te randmicos, mas a sua deteco em mutantes
naturais indica que podem existir regies onde
h uma maior concentrao de erros, conhecidos
como pontos quentes (hot spots). Essas diferenas
esto relacionadas com a habilidade dos mutan-
tes sobreviverem com essas mudanas. Regies
mais conservadas so aquelas em que as muta-
es eventualmente introduzidas no se perpetu-
am na populao por provocarem efeitos delet-
rios aos novos gentipos.
1.6 Interaes genticas entre vrus

1.6.1 Recombinao
Classicamente, o termo recombinao uti-
lizado para designar um intercmbio de seqn-
cias genticas entre dois genomas. Esse processo
muito estudado em molculas de DNA e ocor-
re, com grande freqncia, na maioria das clu-
las eucariotas e procariotas. Alguns mecanismos
de reparo do DNA, por exemplo, baseiam-se em
eventos de recombinao gentica entre os cro-
mossomos homlogos. Mecanismos semelhantes
so observados em vrus DNA e parecem fazer
parte do seu processo evolutivo. Esse processo
envolve o alinhamento de duas molculas com
seqncias semelhantes, a clivagem da cadeia
contnua do DNA, o intercmbio de uma regio
do genoma e a religao da cadeia de DNA, ori-
ginando molculas hbridas ou recombinantes
(Figura 4.1). Por causa da necessidade do alinha-
mento de seqncias entre molculas semelhan-
tes, este processo denominado recombinao
homloga. Na biologia dos vrus, recombinaes
podem ocorrer entre dois vrus de uma mesma
espcie viral ou, ocasionalmente, entre o genoma
viral e o DNA da clula hospedeira.
A recombinao homloga parece ser co-
mum entre os vrus DNA e aqueles que apresen-
tam molculas de DNA intermedirias de sua
replicao, como os retrovrus. Em clulas infec-
tadas, esse processo realizado com o auxlio de
enzimas e fatores auxiliares do hospedeiro. Em
tese, a recombinao homloga pode ocorrer en-
tre o genoma do vrus e da clula e entre dois ge-
nomas virais. As conseqncias da recombinao
entre dois genomas virais variam de acordo com a
similaridade das seqncias recombinadas e com
o seu impacto no fentipo viral. Cabe ressaltar
que a recombinao entre dois vrus geralmente
ocorre entre vrus da mesma espcie e depende
de uma infeco concomitante por esses vrus.
Figura 4.1. Ilustrao simplificada da recombinao
homloga entre duas molculas deDNA.
Genoma A
Genoma B
Genomas recombinantes A/B
Pareamento e troca
de um segmento
Nos vrus RNA clssicos, esse evento mais
raro e, provavelmente, no utiliza enzimas celu-
lares. Os picornavrus e provavelmente outros
vrus RNA de genoma no-segmentado apre-
sentam uma forma de recombinao pouco e-
ciente e diferente da recombinao homloga. A
recombinao genmica desses vrus envolve o
mecanismo de escolha do molde (copy-choice). Nes-
ses casos, a polimerase de RNA inicia a sntese
da cadeia lha utilizando uma molcula de RNA
como molde, mas troca de molde durante a poli-
merizao, resultando em molculas hbridas de
RNA, com seqncias mistas derivadas de mais
de uma molcula molde (Figura 4.2).
96 Captulo 4
Alguns exemplos de recombinao de vrus
RNA na natureza servem para ilustrar as suas
possveis conseqncias. Um exemplo clssico
a recombinao entre RNA viral e seqncias
celulares (provavelmente de RNAs mensagei-
ros), alm de recombinaes intramoleculares,
que ocorrem durante infeces persistentes com
o vrus da diarria viral bovina (BVDV). Nesses
casos, o vrus que produz a infeco persistente
no-citoptico e replica continuamente no ani-
mal, muitas vezes sem conseqncias clnico-pa-
tolgicas. No entanto, eventos de recombinao
e/ou rearranjos genmicos, envolvendo o geno-
ma viral e seqncias celulares, ocasionalmente
resultam na gerao de mutantes citopticos. A
gerao desses mutantes no animal persistente-
mente infectado seguida do desenvolvimento
de doena fatal, denominada doena das muco-
sas. Os mutantes citopticos podem conter uma
variedade de mutaes, inseres e rearranjos
genmicos (Figura 4.3.). Casos de recombinao
pro
N
pro
N
C
Rns
E E1 E2 NS2-3
NS2-3
NS2-3
NS4-A
NS4-A
NS4-B
NS4-B
NS5A
NS5A
NS5B
NS5B
3
3
5
5
pro
N
pro
N
pro
N
pro
N
C
C
C
C
Rns
E
Rns
E
Rns
E
Rns
E
E1
E1
E1
E1
E2
E2
E2
E2
Ns2
Ns2
Ns3
Ns3
Ns3
NS4-A
NS4-A
NS4-A
NS4-B
NS4-B
NS4-B
NS5A
NS5A
NS5A
NS5B
NS5B
NS5B
3
3
3
5
5
5
A
D
E
B
C
Insero
Insero Duplicao
Duplicaes
Deleo
Figura 4.3. Ilustraode genomas dovrus da diarria viral bovina (BVDV) contendoalteraes genticas. A) Genoma
do vrus de campo no-citoptico; B-E) Genomas de mutantes citopticos gerados por recombinao gentica; B)
Genoma contendo uma insero de seqncia celular; C) Genoma contendo uma insero de gene celular e
duplicao do gene na protena NS3; D) Genoma contendo duplicaes dos genes N e NS3; E) Genoma defectivo
contendouma deleoqueabrange os genes das protenas estruturais e a NS2.
pro
Ns3
Genoma recombinante A/B
A polimerase
troca de molde
Genoma A
Genoma B
Figura 4.2. Ilustrao simplificada do modelo de
recombinaodeRNApelomecanismode . copychoice
de amostras de campo e cepas vacinais do BVDV,
com conseqncias diversas, tambm j foram re-
latadas.
Eventos de recombinao tambm tm sido
descritos nos togavrus e coronavrus, com con-
seqncias que incluem o surgimento de novos
vrus, apresentando espectro de hospedeiros e
virulncia alterados. No entanto, esses processos
ainda no esto totalmente elucidados. Provavel-
mente, h uma correlao direta com a estrat-
gia de replicao utilizada por esses vrus. At o
momento, no h evidncia desse tipo de recom-
binao em vrus com genoma RNA de sentido
negativo.
O mecanismo natural de recombinao tem
sido explorado em laboratrio, para a produo
de vrus recombinantes, com caractersticas de-
terminadas para usos diversos, incluindo estudos
genticos de virulncia e produo de vacinas.
1.6.2 Ressortimento
Esse mecanismo exclusivo dos vrus que
possuem o genoma RNA segmentado (ortomi-
xovrus, buniavrus, arenavrus, reovrus e bir-
navrus) e pode ocorrer quando h uma infeco
concomitante por duas cepas do mesmo vrus.
Nesses casos, os segmentos genmicos recm-
replicados so redistribudos de maneira irre-
gular na prognie viral, resultando em vrions
que contm uma mistura de segmentos dos dois
vrus parentais. Esse mecanismo tem sido bem
documentado nos vrus da inuenza e tem sido
responsabilizado pelo surgimento de cepas alta-
mente patognicas resultantes do ressortimento
entre vrus avirios e de mamferos (Figura 4.4).
Esses eventos ocorrem com maior freqncia em
sunos, que podem ser infectados tanto por vrus
avirios como por vrus de mamferos. De fato,
vrias cepas do vrus da inuenza que causaram
surtos em humanos e sunos podem ter resultado
de ressortimento entre vrus previamente exis-
tentes. Do ponto de vista evolutivo, o ressorti-
mento representa um importante evento para o
vrus, pois resulta em uma alterao gentica e
fenotpica muito rpida.
1.7 Outras interaes virais
1.7.1 Complementao
Esta interao puramente fenotpica e
funcional e no resulta de modicao do ge-
noma viral. Por exemplo, se dois mutantes TS,
determinados por mutaes em genes distintos,
infectarem concomitantemente uma clula, a ca-
racterstica fenotpica pode ser revertida e ambos
os vrus podem replicar a 37C, porm as carac-
tersticas genotpicas permanecem as mesmas.
Esse tipo de complementao do tipo intergni-
ca ou no-allica (nonallelic). Quando as mutaes
determinantes dos TS ocorrem no mesmo gene,
mesmo que com modicaes diferentes, pouco
provvel que ocorra complementao.
Com menor freqncia, a complementao
pode ser intragnica ou allica (allelic). Essa com-
plementao pode ocorrer quando o produto do
gene mutante origina uma protena com mlti-
plas subunidades, e as subunidades que so fun-
cionais podem complementar a decincia do
complexo nal.
Vrus parental A Vrus parental B
Prognie A Prognie B Prognie A/B
Figura 4.4. Ilustrao do mecanismo de ressortimento
entre dois vrus da influenza resultante de uma co-
infeco emsunos.
98 Captulo 4
O processo de complementao tambm
ocorre em determinadas populaes de vrus que
so submetidas a vrias passagens in vitro. Du-
rante esse processo, so gerados genomas defec-
tivos contendo delees em um ou mais genes.
Esses genomas defectivos no so capazes de
replicar autonomamente, pois no contm genes
que codicam protenas essenciais para a repli-
cao. A presena concomitante de um genoma
ntegro nas clulas infectadas, no entanto, permi-
te a complementao das funes ausentes nos
genomas defectivos e, assim, esses genomas so
continuamente replicados. Embora esse evento
seja bem caracterizado na biologia de vrios v-
rus in vitro, a sua ocorrncia e signicado biolgi-
co in vivo permanecem incertos.
1.7.2 Mistura fenotpica
Essa alterao caracterizada pela interao
entre dois vrus com a produo de prognie dis-
tinta dos vrus parentais. Os vrus resultantes so
caracterizados pela presena de diferentes deter-
minantes antignicos e as partculas virais pos-
suem componentes de ambos os vrus parentais
(Figura 4.5). Como a complementao, a mistura
fenotpica no envolve mudanas genticas na
prognie. Ou seja, os vrions resultantes possuem
componentes estruturais oriundos dos dois vrus
parentais, porm os seus genomas so idnticos
aos dos vrus parentais. A mistura fenotpica
pode ocorrer entre vrus da mesma famlia ou de
famlias diferentes.
Um exemplo de mistura fenotpica entre
famlias distintas ocorre entre membros da Rhab-
doviridae e Paramyxoviridae. Os vrus dessas duas
famlias possuem protenas distintas no envelo-
pe, porm com funes semelhantes e, quando
co-infectam uma determinada clula, podem re-
alizar a mistura fenotpica. H tambm a possibi-
lidade de produo de pseudovrions, quando o
nucleocapsdeo pertence a um vrus e o envelope
a outro (exemplo: nucleocapsdeo de retrovrus
e envelope de um rabdovrus). Nesse caso, o tro-
pismo dos vrus resultantes ser o mesmo dos ra-
bdovrus, enquanto a prognie formada ser de
retrovrus.
1.7.3 Poliploidia
A grande maioria dos vrus animais ha-
plide, ou seja, possui apenas uma cpia do ge-
noma nos vrions. Os retrovrus se constituem
em excees, pois os vrions contm duas cpias
idnticas do genoma (so diplides). Porm, os
paramixovrus podem, ocasionalmente, apresen-
tar mltiplas cpias de seu genoma encapsi-
dados em mltiplos nucleocapsdeos em uma
nica partcula vrica, fenmeno denominado
poliploidia.
Existem descries de isolados do vrus do
sarampo que, ecientemente, produzem vrions
com, pelo menos, duas cpias do genoma. Essas
duas molculas de RNA so complementares e
possuem mutaes diferentes, existindo a neces-
sidade da presena das duas tas para ocorrer a
replicao.
Vrus parental A Vrus parental B
Co-infeco de
um hospedeiro
Prognie
Fentipo misto
Sem alteraes no genoma
Possvel: alterado
Resistentes neutralizao
Host range
Figura 4.5. Ilustrao da mistura fenotpica resultante da
co-infeco de uma clula por dois vrus diferentes. A
prognie viral pode conter vrus com fentipos mistos,
pormcomogenoma deumdos dois vrus parentais.
2 Evoluo viral
Quando se fala em evoluo, geralmente
se relaciona esse termo com um processo longo,
que ocorre durante milhes de anos. No entanto,
mesmo para os vrus muito antigos (alguns com
indcios de existncia por mais de 220 milhes de
anos), o processo de evoluo ocorre rapidamen-
te e permanente, em razo do grande nmero
de geraes produzidas em um curto espao de
tempo. As mudanas evolutivas dos vrus se pro-
duzem em questes de dias, e possvel avaliar
as suas conseqncias no fentipo viral em nvel
laboratorial. Essa capacidade de mudana possui
implicaes importantes na emergncia de novos
patgenos, como tem sido testemunhado duran-
te as ltimas dcadas, com a emergncia de vrus
como o da imunodecincia humana (HIV), o
parvovrus canino (CPV) e as mudanas peridi-
cas que capacitam os vrus da inuenza a iniciar
novas pandemias.
A evoluo viral tem sido tema de estudos
intensos nos ltimos anos e, conseqentemente,
tem permitido a compreenso dos seus mecanis-
mos e efeitos. Esta seo no pretende ser um tra-
tado exaustivo de um tema to complexo, apenas
se trata de um resumo geral, que inclui algumas
das teorias recentes sobre a origem dos vrus, sua
rpida capacidade de mudana, a maneira como
se estuda a evoluo em laboratrio e no campo,
as implicaes da evoluo viral na patognese e
aparecimento ou emergncia de novas enfermi-
dades. O conhecimento acerca dos mecanismos
utilizados pelos vrus para alterar as suas pro-
priedades genticas e fenotpicas pode permitir a
utilizao de manejos mais adequados dos surtos
e o planejamento mais efetivo de programas sani-
trios para o controle de infeces virais.
Todos os seres vivos evoluem com o decorrer
do tempo, mas a rapidez de evoluo dos vrus
RNA situa-se vrias ordens de magnitude acima
da velocidade de evoluo dos organismos cujo
genoma formado por DNA. Essa caracterstica
pode ser explicada pela indelidade e incapaci-
dade de correo das polimerases de RNA, o que
resulta em um nmero maior de erros durante a
replicao do genoma.
2.1 Origem dos vrus
O estudo da origem e evoluo dos vrus
realizado principalmente por alinhamento e com-
parao de seqncias de cidos nuclicos e pro-
tenas, anlises logenticas e por estudos das es-
truturas tridimensionais das enzimas e protenas
estruturais. Ainda que no exista uma evidncia
inequvoca que permita determinar quando se
originaram e com que rapidez evoluram, pode-
se armar que os diferentes vrus no possuem
uma origem comum e que vrios grupos deles
surgiram independentemente. Atravs dos anos,
tm-se proposto vrias teorias sobre a origem
desses agentes. A teoria regressiva prope que os
vrus evoluram por simplicao ou regresso
de parasitos intracelulares que perderam os ge-
nes requeridos para a replicao independente.
A teoria de origem celular defende que os vrus sur-
giram de componentes celulares que adquiriram
a habilidade de replicar de forma autnoma den-
tro da clula hospedeira. A teoria da co-evoluo
com as clulas muito favorecida na atualidade,
mas de difcil comprovao prope que tanto
os vrus RNA como os vrus DNA se originaram
de plasmdeos (cromossomos acessrios que re-
plicam independentemente do DNA celular).
Estes plasmdeos poderiam ter adquirido, prova-
velmente por recombinao com o genoma das
clulas hospedeiras, genes que permitiam a sua
transformao em elementos genticos com as
trs caractersticas bsicas dos vrus. Essas carac-
tersticas so: a) codicar mecanismos que per-
mitam a replicao intracelular; b) capacidade de
empacotar o cido nuclico em partculas vricas,
que so biologicamente inativas e relativamente
resistentes no meio extracelular; e c) capacidade
de ser transmitido entre clulas. Pode-se dedu-
zir, portanto, que antes de se converter em vrus,
esses plasmdeos j continham as funes neces-
srias para a sua replicao independente e que
alguns deles comearam a desenvolver parte da
maquinaria protica (polimerases) que permite
a replicao do seu material gentico. Posterior-
mente, teriam adquirido os genes que codicam
as protenas necessrias para empacotar o seu
genoma e transport-lo entre clulas. Teriam ad-
100 Captulo 4
quirido tambm um variado repertrio de prote-
nas, para uma melhor manipulao das funes
celulares, do sistema imunolgico do hospedeiro
e para a produo de uma prognie mais abun-
dante.

2.2 Quando se originaram os vrus
A dependncia de uma clula hospedeira
para a ocorrncia da replicao poderia impli-
car que os vrus se originaram depois das clu-
las eucariotas. No entanto, alguns elementos que
compem os vrus podem ter se originado antes
da evoluo celular. O genoma dos vrus RNA,
por exemplo, pode ter surgido nos primrdios
da vida, em um mundo constitudo por RNA e
que consistiria de molculas de RNA catalticas e
auto-replicativas.
Aparentemente, todos os vrus RNA se origi-
naram de um nico ancestral ou desenvolveram
solues comuns para problemas similares. A
anlise comparativa das seqncias de aminoci-
dos das polimerases dos vrus RNA (enzimas que
sintetizam cpias do genoma RNA) favorece a hi-
ptese de que o seu gene seja codicado por vrus
de procariotas e de eucariotas. Essa observao
indica que a molcula ancestral das polimerases
de RNA provavelmente se originou antes da di-
vergncia evolutiva em procariotas e eucariotas.
Outras superfamlias de enzimas comuns a todos
os vrus RNA e que, como as polimerases, apre-
sentam um alto grau de similaridade, tambm
reforam a hiptese de uma origem muito antiga
e monologentica dos vrus RNA. Essas super-
famlias so as helicases e algumas proteases se-
melhantes a quimiotripsinas.
2.3 Como os vrus ampliaram o seu
repertrio protico
Aps a aquisio dos genes bsicos que per-
mitiam a replicao e construo do capsdeo
viral contendo o genoma, os vrus continuaram
evoluindo e ampliando o nmero de genes do
seu genoma, para codicar novas protenas, e,
conseqentemente, adquirir novas funes e pro-
priedades evolutivas.
Um dos mecanismos utilizados para a aqui-
sio de novas seqncias a recombinao do
genoma viral com o cido nuclico de outros v-
rus ou das clulas hospedeiras. A recombinao
do genoma pode ocorrer entre vrus diferentes,
inclusive entre vrus que pertenam a famlias
distintas. Os vrus so muito ativos na obteno
de seqncias genmicas por recombinao com
outros vrus durante a sua evoluo, e essa ca-
racterstica tem dicultado a construo de rvo-
res logenticas nicas, que facilitem uma clas-
sicao lgica e nica. Como resultado dessas
recombinaes, vrus de grupos muito distintos
podem possuir genes relacionados e seqncias
homlogas.
A recombinao pode ocorrer entre regies
do prprio genoma viral (recombinao intra-
molecular), resultando em duplicao de genes,
delees e inseres, com a transformao em
novos genes. Assim, uma determinada seqncia
de nucleotdeos pode duplicar-se vrias vezes e,
dessa maneira, originar famlias de genes, como
ocorre nos poxvrus e no vrus da peste suna
africana (ASFV).
Os vrus tambm podem obter novos genes
mediante a sntese de uma nova seqncia de
nucleotdeos ou pelo uso de seqncias abertas
de leitura (ORFs; open reading frame) alternativas.
Combinaes desses mecanismos j foram descri-
tas, como a duplicao de um gene acompanhada
de mudana de ORF.
Esses processos de recombinao seguem
ocorrendo e podem ter conseqncias diversas
na biologia dos vrus, incluindo alteraes na
especicidade de hospedeiro, tropismo tecidual,
patogenicidade e virulncia, como tambm po-
dem resultar na emergncia de novos vrus.
2.4 Capacidade de mutao viral
O estudo das enzimas que catalisam a repli-
cao dos cidos nuclicos as polimerases tem
demonstrado que as polimerases de DNA celula-
res possuem uma alta delidade. Isto se deve, em
parte, capacidade dessas enzimas de remover
nucleotdeos inseridos equivocadamente. A taxa
de erro dessas polimerases tem sido calculada em
10
-8
a 10
-11
nucleotdeos por replicao. Isso sig-
nica que, em uma molcula de DNA de um bi-
lho de nucleotdeos polimerizados, apenas um
nucleotdeo errado ser incorporado. A taxa de
erro das polimerases virais de DNA 20 a 100
vezes maior.
Em contraste, as polimerases dependentes
de RNA no possuem mecanismos de correo,
e, por isso, a sua taxa de erro muito alta: entre
10
-3
a 10
-4
nucleotdeos/replicao. Portanto, cada
novo genoma RNA viral com 10.000 nt contm
uma mdia de trs mutaes pontuais (trs nu-
cleotdeos diferentes do genoma parental). Algu-
mas dessas mutaes podem ser prejudiciais aos
vrus, enquanto outras so neutras e no possuem
nenhum efeito. provvel tambm que algumas
mutaes introduzidas durante a replicao re-
sultem em benefcios para a replicao viral, con-
ferindo vantagens evolutivas aos vrus mutantes.
Uma mesma mutao pode ter efeitos diferentes
para um vrus, dependendo do meio em que se
encontre. Por exemplo, uma determinada muta-
o pode conferir vantagens para a replicao do
vrus em sunos, porm pode ser adversa para a
sua replicao em bovinos. Essas mutaes, que
ocorrem ao acaso, so mantidas ou descartadas
por meio dos processos de seleo natural por
conferir maior aptido biolgica. O conhecimento
das conseqncias dessas mutaes pode ser til
para a manipulao viral, pois possibilita o de-
senvolvimento de vacinas baseadas em variantes
virais atenuadas ou adaptadas a outras espcies.
Como cada novo genoma de RNA viral
sintetizado possui pelo menos trs mutaes,
as seqncias genmicas e os vrus individuais
produzidos continuamente so diferentes entre
si. Essa distribuio de indivduos no idnti-
cos, porm muito semelhantes, foi denominada
por Manfred Eigen como quasispecies. Portan-
to, os indivduos que compem uma quasispecie
apresentam pequenas variaes nas seqncias
genmicas, porm aqueles indivduos que apre-
sentam uma maior aptido biolgica e ecincia
de replicao tornam-se predominantes sobre os
demais e so produzidos em maior abundncia.
Apesar do polimorsmo existir em virtualmen-
te todos os seres vivos, o termo quasispecie viral
utilizado para enfatizar a grande variao que
os vrus componentes de uma mesma populao
exibem. Esse termo utilizado para os vrus RNA
pela sua grande variabilidade gentica. Assim
mesmo, os diferentes vrus RNA apresentam n-
veis variveis de variabilidade gentica.
A caracterstica das polimerases de intro-
duzir mutaes muito favorvel para os vrus,
permitindo a produo de mutantes que, even-
tualmente, possam se adaptar ao hospedeiro ou
a diferentes condies do meio. Em alguns casos
especcos, os vrus que possuem polimerases
com maior delidade apresentam decincias
em sua aptido biolgica. Isso sugere que a evo-
luo tende a conservar esta capacidade de erro
das polimerases, mas mantendo-as abaixo de um
limite denominado nvel de erro limite (threshold
error). Acima desse nvel no seria possvel a so-
brevivncia dos vrus como espcie.
Os vrus constituem a combinao da gran-
de diversidade de indivduos, com seqncias
diferentes e que possuem a propriedade de pro-
duzir prognie abundante. Como exemplo, o
vrus da poliomielite (um picornavrus) produz
uma descendncia de 10.000 indivduos em uma
nica clula infectada. A populao viral sofrer,
ento, um processo de seleo natural cada vez
que as condies do meio se alterem. Assim, os
indivduos com maior aptido para sobreviver
a essas novas condies se tornaro tambm os
mais abundantes.
A alta taxa de alteraes produzidas no ge-
noma dos vrus RNA o motor que permite a ex-
plorao rpida de novos espaos evolutivos. Em
outras palavras, as mutaes no genoma podem
reetir em mudanas de aminocidos e essas no-
vas combinaes de aminocidos podem gerar
novas estruturas proticas com propriedades e
funes inditas. Essas propriedades e funes
podem ser importantes para a adaptao do v-
rus a novos hospedeiros ou para escapar da vigi-
lncia do sistema imune, por exemplo.
importante tambm observar que a sele-
o natural faz parte do processo evolutivo. O
processo de seleo faz com que os indivduos
que contenham mutaes que favoream a sua
replicao em determinado meio produzam
maior descendncia e predominem na popula-
o. Por exemplo, uma mutao nas protenas do
capsdeo pode fazer com que um vrus escape da
neutralizao por anticorpos. Esses vrus que es-
capam da neutralizao sofrem um processo de
seleo quando infectam animais vacinados e,
com o tempo, passam a predominar e substituir a
populao viral original.
102 Captulo 4
2.5 Estudos laboratoriais de evoluo
O estudo da dinmica de evoluo dos vrus
RNA in vitro tem sido realizado principalmente
em bacterifagos e no vrus da estomatite vesi-
cular (VSV). A freqncia de recombinao do
VSV muito baixa e no detectvel. Esse fen-
meno permite que se utilizem duas populaes
virais competindo em clulas, sem que haja in-
tercmbio gentico entre elas. Caso se consiga
uma caracterstica ou marcador que identique
e diferencie essas populaes, possvel saber as
propores de cada populao ao longo de pas-
sagens seriadas em cultivos de clulas e avaliar a
aptido biolgica relativa de cada populao. Uma
caracterstica fenotpica utilizada nesses estudos
a resistncia (ou escape) neutralizao por
anticorpos, presente em uma das populaes,
devido a mutaes introduzidas pela polimerase.
Dessa maneira, foram isolados mutantes cujas se-
qncias consenso diferiam da seqncia da cepa
progenitora somente em um aminocido, sendo
resistentes neutralizao por um anticorpo mo-
noclonal especco. Quando a cepa progenitora e
a cepa resistente neutralizao so misturadas,
possvel determinar a proporo de placas pro-
duzidas por cada uma das cepas cultivadas na
presena ou ausncia do anticorpo monoclonal.
No cultivo com a presena do anticorpo, somente
so amplicados os vrus da cepa resistente neu-
tralizao, enquanto no cultivo sem anticorpos
so produzidas placas produzidas por vrus das
duas cepas. Dessa forma, possvel quanticar a
proporo de placas formadas por componentes
de cada cepa e determinar qual cepa apresentou
maior aptido biolgica.
Esses experimentos podem ser relacionados
com muitas observaes epidemiolgicas realiza-
das em populaes animais. As altas densidades
animais nas criaes intensivas requerem progra-
mas sanitrios especiais, pois, aps a introduo
de um patgeno, a aglomerao de animais fa-
vorece os ciclos de infeco iniciados com gran-
des populaes de vrus, e a evoluo viral con-
tribuiria para uma maior aptido biolgica. Em
contraposio, as baixas densidades de animais
na populao produzem indiretamente um gar-
galo gentico e, como conseqncia, os vrus so
mais benignos, alguns animais no adoecem e
podem desenvolver imunidade natural por con-
tato com o vrus de baixa aptido biolgica.

2.6 Exemplos de evoluo viral
Mesmo que a capacidade terica de muta-
o e explorao do espao evolutivo por parte
dos vrus parea ilimitada, a estrutura e funes
das diferentes protenas e cidos nuclicos desses
agentes, assim como as interaes com os hospe-
deiros, j sofreram um processo intenso e pro-
longado de otimizao da aptido biolgica. Por-
tanto, provavelmente h restries que limitem
a capacidade real de mudana. Por essa razo,
possvel que vrus isolados de uma mesma regio
com um grande intervalo de tempo sejam virtu-
almente idnticos. Ou seja, j teriam atingido um
gentipo/fentipo equilibrado e sucientemente
evoludo ou, por outro lado, j teriam esgotado a
sua capacidade de evoluo.
Quando se analisa a evoluo viral, pode-
se observar como os diferentes vrus utilizam
distintas estratgias evolutivas. Em seguida, so
apresentados alguns exemplos que ilustram essas
mudanas evolutivas que conduzem aquisio
de uma maior aptido biolgica, isto , produ-
o de prognie viral mais bem adaptada e mais
numerosa.
Existem vrus cujas mutaes facilitam a
sua adaptao ao meio e outros cujas alteraes
genticas alteram a sua virulncia. Existem tam-
bm aqueles que alteram as suas propriedades
antignicas para garantir seus ciclos contnuos de
transmisso e alguns que usam estratgias que
ampliam seu tropismo para outras espcies e/ou
tecidos. Todas essas alteraes ocorrem com o
objetivo nico de garantir a sobrevivncia e ma-
nuteno desses agentes na natureza.
2.6.1 Vrus da estomatite vesicular: tem-
po versus fatores ambientais
O vrus da estomatite vesicular (VSV) um
vesiculovrus pertencente famlia Rhabdoviridae.
O VSV infecta uma grande variedade de rumi-
nantes e sudeos domsticos e silvestres, causan-
do uma doena clinicamente semelhante febre
aftosa, caracterizada por febre e leses vesicula-
res na boca, focinho, patas e em regies do corpo
com abrases ou leses mecnicas.
As anlises logenticas de isolados do VSV
de vrias regies da Amrica Central e do Norte
tm demonstrado que as seqncias de cepas de
uma mesma regio geogrca apresentam um
alto grau de conservao, mesmo quando isola-
das a grandes intervalos de tempo (at 30 anos).
Essa caracterstica no observada para os vrus
isolados na mesma poca em diferentes regies.
A distribuio logentica mostra um melhor
agrupamento dos vrus por regies geogrcas. A
evoluo desse vrus depende de presses de se-
leo relacionadas com fatores ecolgicos, como
os vetores que transmitem o vrus e os animais
reservatrios que o mantm. Para esse vrus, no
foi detectada a evoluo por presso imunolgi-
ca seletiva, que muito evidente para o vrus da
inuenza, por exemplo.
2.6.2 Mixomatose na Austrlia
Muitos estudos clssicos demonstram a evo-
luo dos vrus nas populaes humanas e ani-
mais. Em um deles, observou-se como o vrus da
mixomatose dos coelhos evoluiu aps a sua intro-
duo na Austrlia. A mixomatose uma doena
produzida por um poxvrus, cujos hospedeiros
naturais so os coelhos americanos do gnero
Sylvilagus. Essa enfermidade conhecida desde
1896, e a transmisso ocorre mecanicamente por
insetos. Nos hospedeiros naturais, a infeco pro-
duz bromas localizados e benignos. Porm, ao
contrrio da enfermidade branda produzida nos
coelhos americanos, o vrus do mixoma produz
uma infeco letal nos coelhos europeus do gne-
ro Oryctolagus.
Nas primeiras dcadas do sculo passado,
coelhos europeus foram introduzidos da Aus-
trlia propositalmente e, como no existiam pre-
dadores naturais, esses animais se reproduziram
rapidamente, tornando-se uma praga para a agri-
cultura e pecuria. Assim, em 1950, um progra-
ma de controle biolgico dos coelhos com o vrus
da mixomatose foi aplicado naquele pas com o
objetivo de solucionar o problema da superpopu-
lao.
A cepa viral utilizada era oriunda do Brasil,
isolada pelo Instituto Oswaldo Cruz em 1911. Ini-
cialmente, a disseminao do vrus no foi ampla
e permaneceu restrita aos habitats onde era in-
troduzido, sem disseminao para ecossistemas
vizinhos. Porm, observaram-se, posteriormente,
centenas de coelhos doentes em locais muito dis-
tantes dos locais originais de introduo do vrus.
A doena se distribuiu principalmente pelas mar-
gens dos grandes rios, onde os mosquitos eram
mais abundantes. O vero seguinte foi mido, e a
enfermidade se disseminou rapidamente, resul-
tando em mortalidade de at 99%. No entanto,
no ano seguinte, observou-se que uma variante
menos virulenta do vrus estava gradativamente
substituindo a cepa original de alta virulncia.
A virulncia da cepa original e das cepas de
campo isoladas na Austrlia foi determinada em
coelhos de laboratrio e a cada isolado se atri-
buiu um grau de virulncia entre I e V. A cepa
original foi 100% letal em 11 a 13 dias aps a ino-
culao (virulncia grau I). Algumas das cepas de
campo produziram uma letalidade entre 70-95%,
com mdia de sobrevivncia de 17 a 20 dias (vi-
rulncia grau III). Outras cepas matavam menos
de 50% dos coelhos infectados e produziam uma
doena mais benigna (virulncia grau IV). Aps
dois anos, todos os vrus de campo recuperados
na Austrlia possuam grau III.
A seleo de cepas menos letais ocorreu em
conseqncia da transmisso do vrus para os
mosquitos, que foi prolongada para os vrus com
virulncia de grau III pela maior sobrevivncia
dos coelhos. Como conseqncia, os animais in-
fectados produziam vrus por mais tempo, dan-
do maior oportunidade aos mosquitos de se con-
taminar e transmitir a doena. Por outro lado, os
coelhos infectados com a cepa original de grau I
morriam rapidamente, e o ciclo de transmisso
era interrompido.
A populao de coelhos na Austrlia tam-
bm sofreu uma seleo para a resistncia mi-
xomatose. A nova gerao de coelhos descendeu
dos 10% da populao original que sobreviveu
doena. Durante sete anos, antes de comearem
os surtos de mixomatose na primavera, coelhos
jovens eram capturados nas reas endmicas
e mantidos em cativeiro at atingirem a idade
104 Captulo 4
adulta e os nveis de anticorpos maternos desa-
parecerem. Esses coelhos foram desaados com
uma cepa de virulncia grau III. A mortalidade
foi superior a 90% no primeiro ano e somente
30% no stimo ano.
Embora a mixomatose tenha sido introduzi-
da deliberadamente na Austrlia, pode-se consi-
derar que esse foi um caso de enfermidade emer-
gente. Humanos infectaram coelhos europeus
com o vrus da mixomatose, uma espcie na qual
o vrus produz uma doena muito mais severa. A
emergncia de uma enfermidade pode estar rela-
cionada com uma mudana evolutiva no agente
causal, porm a enfermidade pode emergir mes-
mo na ausncia de mutaes virais.
No caso da mixomatose na Austrlia, o vrus
evoluiu, reduzindo a sua virulncia. No entanto,
no h um consenso de que todos os vrus evo-
luem no sentido da atenuao. muito comum
se considerar que os vrus evoluem para uma
forma inofensiva para o seu hospedeiro, o que,
provavelmente, poderia ser melhor para o futuro
da populao viral. Aos parasitas interessa no
produzir muitos danos na populao hospedeira,
para que esses sobrevivam e permitam a sua am-
plicao e transmisso. Contudo, o xito evolu-
tivo de uma espcie depende essencialmente da
gerao de uma descendncia numerosa, e isso
no est necessariamente associado com atenua-
o da doena nos hospedeiros.
2.6.3 Vrus da inuenza
Os vrus da inuenza tm utilizado uma
srie de estratgias e alteraes evolutivas que
permitem a sua contnua circulao mesmo em
populaes com certo grau de imunidade. Exis-
tem razes evidentes pelas quais se estuda muito
esses vrus: ocorreram quatro pandemias de in-
uenza em um sculo e, na pandemia de 1918,
morreram entre 20 e 50 milhes de pessoas.
O vrus da inuenza um ortomixovrus,
possui envelope e seu genoma composto por
oito segmentos de RNA de sentido negativo, a
maioria dos quais codica somente uma prote-
na. O envelope viral possui duas glicoprotenas:
a hemaglutinina (16 tipos) e a neuraminidase
(nove tipos), e as cepas so designadas conforme
a composio da superfcie viral por estas prote-
nas (H3N2, H5N1, H3N8).
A hemaglutinina (HA) a protena que se
liga a molculas da superfcie celular que pos-
suem cido silico, que servem como recepto-
res para o vrus. A HA tambm a protena que
induz a produo de anticorpos neutralizantes
e protetores pelo hospedeiro. A neuraminidase
(NA) atua durante o egresso do vrus, clivando
o cido silico dos glicoconjugados e permitindo,
dessa maneira, que a prognie viral seja liberada
da clula.
Os vrus da inuenza so mestres nas mu-
danas genticas e antignicas. Ao se estudar os
diferentes isolados, so observadas variaes an-
tignicas pontuais e progressivas na HA. Essas
pequenas variaes denominam-se drift antig-
nico (pode ser traduzido como substituio ge-
ntica, principalmente por mutaes em ponto)
e permitem ao vrus reinfectar uma populao
parcialmente imune, que ainda possui anticorpos
produzidos por uma infeco recente, mantendo
o vrus circulante na populao. Contrastando
com essas variaes pequenas, as alteraes ra-
dicais na HA e NA denominam-se shift (troca),
e ocorrem pelo intercmbio dos respectivos ge-
nes entre dois vrus da inuenza quando estes
co-infectam um mesmo hospedeiro. Esses shifts
antignicos foram responsveis pelas pandemias
de 1957 e 1968, e acredita-se que so produzidos
periodicamente pela criao conjunta de aves e
sunos. Ao contrrio, os segmentos genticos do
vrus que causou a pandemia de 1918 se origi-
naram completamente de um ancestral avirio.
Alm do drift e shift, so detectadas inseres de
seqncias e outros mecanismos que permitem o
processamento proteoltico da HA, alterando o
tropismo tecidual e a patogenicidade.
Assim, os vrus da inuenza evoluem por
meio de dois mecanismos principais: mutaes
em ponto, que conferem pequenas alteraes an-
tignicas; e ressortimento, que proporciona gran-
des alteraes antignicas e/ou de virulncia. A
espcie animal que geralmente abriga os eventos
de ressortimento a suna, que pode ser infecta-
da tanto por vrus avirios como por vrus huma-
nos ou sunos.
Em 2005, foi publicado um artigo que des-
creve como o vrus que ocasionou a pandemia de
1918 foi recriado em laboratrio. O mais marcan-
te deste fato que esta pandemia ocorreu muito
antes da identicao do vrus da inuenza, que
somente foi isolado no princpio dos anos 1930.
Os segmentos genmicos de RNA do vrus foram
recuperados de amostras de pulmo xadas em
formalina, que estavam guardadas, e tambm de
tecidos de uma vtima da pandemia de 1918 que
havia sido enterrada na permafrost (terra perma-
nentemente congelada, no Alasca). Por meio de
metodologia de gentica reversa, foi possvel re-
criar o vrus em laboratrio e estudar algumas de
suas caractersticas. As seqncias dos genes do
vrus de 1918 so relacionadas com o vrus H1N1
avirio, mais do que com qualquer outro isolado
H1N1 de mamfero. Esses achados aumentaram
a preocupao atual com os casos de inuenza
de origem aviria pelo vrus H5N1, que pode
infectar humanos. At o momento, no h evi-
dncias de que este vrus possua a habilidade de
ser transmitido entre humanos, pois a replicao
viral connada ao trato respiratrio inferior e
provoca a morte de pessoas em poucos dias. Po-
rm, medida que o nmero de pessoas infecta-
das aumente, a probabilidade de mutaes que
permitam a transmisso entre humanos tambm
aumentar.
Os trs tipos de alteraes evolutivas descri-
tas, drift e shift antignico e inseres na hemaglu-
tinina conferem ao vrus da inuenza uma maior
aptido biolgica, uma vez que podem reinfectar
uma populao parcialmente imune ou ampliar
o tropismo tecidual, produzindo uma prognie
mais abundante.
2.6.4 Parvovrus canino
O parvovrus canino (CPV) surgiu subita-
mente como causa de enfermidade de ces na
dcada de 1970 e, em 1978, foi diagnosticado si-
multaneamente em vrios pases, causando enfer-
midade grave na populao canina. Este vrus se
originou a partir de um parvovrus j conhecido
anteriormente, o vrus da panleucopenia felina
(FPLV), por mutaes em ponto na protena VP2
do capsdeo, stio de ligao do vrion aos recep-
tores celulares. Assim, o novo vrus foi capaz de
infectar e, posteriormente, se adaptar a uma nova
espcie hospedeira.
Estudos das mutaes responsveis pelo
cruzamento da barreira entre espcies indicam
que mudanas em apenas dois cdons (posies
93 e 323) da VP2 do FPLV possibilitaram ao v-
rus infectar ces e linhagens celulares de origem
canina. Posteriormente foi demonstrado que as
mesmas substituies desses cdons no CPV pe-
los correspondentes do FLPV eliminam a predi-
leo do vrus pela espcie canina.
Como a populao canina no possua an-
ticorpos contra o novo agente, os primeiros seis
meses aps o surgimento do CPV foram seguidos
de uma pandemia mundial, que produziu gas-
trenterite hemorrgica grave com altos ndices de
mortalidade em ces. Esse agente foi denomina-
do CPV-2 e, nos anos seguintes, sofreu algumas
alteraes que permitiram uma adaptao maior
aos hospedeiros caninos, originando os bitipos
CPV-2a e CPV-2b. Um terceiro bitipo, o CPV-2c,
tem sido descrito na populao canina nos lti-
mos anos. Acredita-se que o CPV no perdeu a
sua capacidade inicial de infectar felinos, pois a
infeco natural tem sido demonstrada em gatos
domsticos. Os CPVs que existem atualmente cir-
culando na populao canina so menos virulen-
tos do que os originais, provavelmente reetindo
uma evoluo do vrus no sentido de se adaptar
aos novos hospedeiros.

2.7 Concluses
Os vrus so os mestres das mudanas e
evoluo gentica. importante conhecer as es-
tratgias que esses agentes utilizam para melhor
reconhecer enfermidades produzidas por vrus
emergentes e por vrus conhecidos que produ-
zam doenas atpicas. medida que se intensica
a explorao pecuria e se aumenta a densidade
dos animais, torna-se necessria a implementao
de programas sanitrios especiais que reduzam a
possibilidade de introduo de novos patgenos
nas criaes. importante considerar tambm
que todos os vrus so importantes, mesmo os
que aparentemente no produzem enfermida-
des no homem ou em animais, pois esses agen-
tes podem alterar a sua gama de hospedeiros e
produzir enfermidades devastadoras. Exemplos
recentes incluem a infeco de humanos, ces e
106 Captulo 4
felinos com novos subtipos do vrus da inuen-
za, o surgimento do SARS-CoV, que matou cen-
tenas de pessoas na sia e a inusitada infeco
de mamferos marinhos com variantes do CDV,
causando alta mortalidade no mar Mediterrneo.
Assim, tendo em vista a sua plasticidade e capa-
cidade de adaptao e evoluo, nenhum vrus
pode ser considerado sem importncia.
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1 Introduo
2 Conceitos bsicos: infeco, susceptibilidade, permissividade
3 Etapas da replicao
3.1 Adsoro
3.2 Penetrao
3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie celular
3.2.2 Penetrao aps endocitose
3.2.3 Outros mecanismos de penetrao
3.3 Etapas aps a penetrao
3.3.1 Desnudamento
3.3.2 Movimentao intracelular
3.3.3 Penetrao nuclear
3.4 Expresso gnica
3.5 Replicao do genoma
3.5.1 Replicao dos vrus DNA
3.5.2 Replicao dos vrus RNA
3.6 Morfognese, maturao e egresso
3.6.1 Maturao intracelular (citoplasmtica ou nuclear)
3.6.2 Maturao por brotamento em membranas celulares
REPLICAO VIRAL
Eduardo Furtado Flores & Luiz Carlos Kreutz
5
109
109
110
111
114
114
114
117
118
118
118
119
119
121
122
126
131
131
132
134
1 Introduo
A produo de prognie gentica e fenotipi-
camente semelhante ao vrus parental se constitui
no evento central da existncia e perpetuao dos
vrus na natureza. Por isso, por uma viso evolu-
tiva simplista, a multiplicao dos vrus possui
uma nalidade nica e objetiva: produzir prog-
nie vivel. As alteraes da siologia celular, as-
sociadas com as infeces virais que podem re-
sultar em doena e at em morte do hospedeiro ,
so meras conseqncias das interaes do vrus
com as clulas; interaes que so absolutamente
necessrias para o agente atingir esse objetivo.
Os vrus so os organismos mais simples
que existem: os mais simples so compostos por
uma molcula de cido nuclico envolta por uma
camada protica. Quando esto fora de clulas
vivas, os vrus so estruturas qumicas, despro-
vidas de qualquer atividade biolgica. No pos-
suem metabolismo prprio, no so capazes de
produzir autonomamente nem os componentes
mnimos para a sua multiplicao. Por isso, ne-
cessitam utilizar as organelas e o metabolismo
celular para replicar o seu genoma e produzir as
protenas necessrias para a construo de novas
partculas vricas. Esses agentes s adquirem ati-
vidade biolgica dentro de clulas vivas. Mesmo
os vrus mais complexos e evoludos so depen-
dentes de processos biolgicos celulares para a
sua multiplicao. Por isso, os vrus so, tradicio-
nalmente, classicados como parasitas intracelu-
lares obrigatrios.
O termo replicao que em sua origem sig-
nica a sntese de molculas de cidos nuclicos
a partir de um molde tem sido universalmente
utilizado para designar o processo de multiplica-
o dos vrus como um todo e assim ser utiliza-
do neste texto. Este captulo abordar os aspectos
gerais da replicao dos vrus; os aspectos pecu-
liares de cada famlia sero abordados nos cap-
tulos especcos.
2 Conceitos bsicos: infeco,
susceptibilidade e permissividade
A palavra infeco deriva do latim infere, que
signica inserir, penetrar, introduzir. No entanto,
embora a penetrao (ou infeco, no signicado
estrito da palavra) seja uma etapa indispensvel
replicao viral, por permitir a introduo do
material gentico na clula, o termo infeco pos-
sui um signicado mais amplo em Virologia. A
penetrao do vrus na clula, por si s, no as-
segura a produo de prognie viral, pois outras
etapas intracelulares so necessrias. Por isso, o
termo infeco tem sido utilizado para denir o
processo replicativo do agente como um todo, in-
cluindo a penetrao e as etapas subseqentes da
replicao. A srie de etapas que inicia com a pe-
netrao e culmina com a liberao de prognie
viral tambm denominada ciclo replicativo.
Se todas as etapas da infeco forem com-
pletadas e resultarem na produo de prognie
viral vivel, a infeco dita produtiva. Se, aps
a penetrao, o ciclo replicativo for interrompido
em alguma etapa, a infeco dita abortiva. Sus-
ceptibilidade e permissividade so propriedades
complementares que denem a capacidade das
clulas de suportar as etapas da replicao viral.
Susceptibilidade refere-se capacidade das clulas
de serem infectadas naturalmente pelo vrus, en-
quanto permissividade refere-se s condies intra-
celulares para a ocorrncia da multiplicao viral.
Assim, as clulas que suportam o ciclo replicativo
completo, aps a infeco natural, so simulta-
neamente susceptveis (permitem a penetrao) e
permissivas (permitem a ocorrncia das etapas in-
tracelulares). Essas duas propriedades, no entan-
to, nem sempre ocorrem concomitantemente em
uma clula. Em algumas situaes, clulas per-
missivas podem ser no susceptveis infeco,
devido falta de receptores para a adsoro e pe-
netrao do vrus. Essas clulas somente podero
ser alvo de uma replicao produtiva se o mate-
rial gentico viral for introduzido articialmen-
te (i.e., por transfeco). Por outro lado, clulas
susceptveis infeco natural podem apresentar
um bloqueio intracelular em alguma etapa da
replicao, sendo denominadas no-permissivas.
Se esse bloqueio ocorrer aps algumas etapas do
ciclo, essas clulas so ditas semipermissivas. Para
simplicar, neste texto, o termo susceptibilidade
ser utilizado para denir a capacidade das clu-
las de suportar todas as etapas da replicao viral
aps a infeco natural.
110 Captulo 5
A susceptibilidade determinada pela inte-
rao de mltiplos fatores virais e celulares. Em
razo da complexidade dessas interaes, as es-
pcies animais (e tambm as clulas de cultivo)
apresentam uma ampla variao de susceptibili-
dade a diferentes vrus. O termo espectro de hos-
pedeiros (host range) utilizado para denir o con-
junto de espcies animais (host range in vivo) ou de
diferentes clulas (host range in vitro) que podem
ser infectados naturalmente por um determinado
vrus. O termo tropismo refere-se predileo do
vrus por determinadas clulas, tecidos ou rgos
do hospedeiro para se multiplicar. O principal
fator celular mas no o nico determinante
da susceptibilidade e do tropismo a presena
de molculas especcas na superfcie celular,
denominadas genericamente de receptores virais.
Os receptores virais so molculas da membrana
plasmtica que desempenham funes diversas
na biologia das clulas, das quais os vrus se utili-
zam para se ligar e iniciar a infeco.
3 Etapas da replicao
A multiplicao dos diferentes vrus apre-
senta vrias etapas em comum, apesar da di-
versidade estrutural, do tipo e da organizao
genmica e das diferentes estratgias de replica-
o. Essas etapas ocorrem de forma ordenada e
seqencial e envolvem interaes complexas en-
tre as protenas e o genoma viral com organelas e
macromolculas celulares. O ciclo replicativo de
todos os vrus inclui necessariamente as etapas
de adsoro, penetrao, desnudamento, expres-
so gnica (transcrio e traduo), replicao do
genoma, morfognese/maturao e egresso. Es-
sas etapas esto ilustradas esquematicamente na
Figura 5.1.
A maior parte dos conhecimentos sobre os
mecanismos biolgicos e moleculares da mul-
tiplicao dos vrus somente foi obtida a partir
do estabelecimento dos cultivos celulares. Aps
a inoculao do vrus em clulas cultivadas in
vitro, os cultivos so deixados em repouso para
que as partculas vricas iniciem gradativamen-
te a entrar em contato com a superfcie celular.
Essa etapa denominada adsoro. Imediatamen-
te aps a adsoro, os vrions penetram nas clu-
las e iniciam a infeco. A coleta e quanticao
do vrus presente no sobrenadante dos cultivos a
diferentes intervalos, aps a inoculao, permite
a identicao de trs fases: eclipse, maturao e
inativao (Figura 5.2).
Figura 5.1. Representao esquemtica do ciclo
replicativode umvrus DNA. 1) Adsoro; 2) Penetrao;
3) Desnudamento; 4) Transcrio dos genes virais; 5)
Traduo dos RNA mensageiros (mRNA) e produo
das protenas virais; 6) Replicao do genoma; 7)
Morfognese; 8-9) Egresso.
Ncleo
Citoplasma
1
2
3
4
6
7
5
8
9
Aps a remoo do material que foi inocu-
lado e durante um perodo varivel, apenas uma
pequena quantidade de infectividade pode ser
detectada no sobrenadante. Esse perodo em que
o vrus virtualmente desaparece denominado
eclipse e coincide com as fases iniciais da infeco.
A durao da fase de eclipse depende do ciclo re-
plicativo de cada vrus, que varia entre quatro a
seis horas nos picornavrus e mais de 40 horas em
alguns herpesvrus. A fase de eclipse seguida
por um perodo em que a prognie viral vai sen-
do produzida e gradativamente liberada pelas
clulas, acumulando-se no sobrenadante (Figura
5.2). Essa fase denominada maturao. Nos vrus
que produzem lise celular, a quantidade de vrus
no sobrenadante aumenta at atingir um plat,
que coincide com a perda da integridade funcio-
nal e estrutural das clulas. A partir da, o ttulo
viral no sobrenadante tende a decrescer gradati-
vamente dependendo do vrus devido ina-
Replicao viral 111
tivao da infectividade das partculas vricas e
perda da viabilidade das clulas. Essa fase de-
nominada inativao. Em infeces por vrus no-
lticos, as clulas podem produzir prognie viral
indenidamente, mas o balano entre a produo
e a inativao no permite que o ttulo viral no
sobrenadante aumente indenidamente.
rus, vrus da febre aftosa [FMDV]) enquanto ou-
tros podem utilizar receptores alternativos para
iniciar a infeco (exemplo: herpesvrus, alguns
togavrus). A capacidade de utilizar mais de um
receptor para iniciar a infeco pode representar
uma vantagem evolutiva, pois oferece a esses v-
rus a possibilidade de infectar diferentes tipos de
clulas e/ou hospedeiros.
Os receptores celulares para vrus so mol-
culas de membrana que desempenham funes
diversas na biologia celular e que, ocasionalmen-
te, servem para os vrus se ligarem e iniciarem
a infeco. Os receptores celulares para vrios
vrus animais j foram identicados (Tabela 5.1).
Na maioria dos casos, a presena dos receptores
determina o espectro de hospedeiros e o tropismo
do vrus. Conseqentemente, a presena e distri-
buio dos receptores tambm so determinantes
fundamentais da patogenia da infeco. O nme-
ro de receptores na superfcie de uma clula pa-
rece ser extremamente varivel. Essas molculas
podem ser raras e especcas de algumas clulas
ou abundantes e amplamente distribudas em v-
rias clulas.
Em alguns casos, as interaes entre as VAPs
e os receptores no so sucientes para permitir
o incio da infeco. Nesses casos, a interao dos
vrions com protenas adicionais da membrana
celular, denominadas co-receptores, necessria
para que ocorra a penetrao. Por exemplo, a in-
terao inicial dos adenovrus com a clula hos-
pedeira envolve a ligao da protena ber com
um receptor celular. Essa interao no su-
ciente para assegurar a penetrao, mas neces-
sria para que a protena viral penton interaja com
uma segunda molcula da membrana celular a
vitronectina e resulte em penetrao. O vrus
da imunodecincia humana (HIV-1) liga-se ao
receptor CD4 e utiliza como co-receptor um re-
ceptor de citocina. A interao inicial do vrus do
herpes simplex humano (HSV-1) com as clulas
mediada pela interao da glicoprotena gC (ou
gB) com o sulfato de heparina na superfcie celu-
lar. A fuso e penetrao, no entanto, dependem
de interaes secundrias entre a gD (e tambm a
gH) com outras molculas da membrana.
Eclipse Maturao Inativao
Inoculao
Horas
T
t
u
l
o
v
i
r
a
l
n
o
s
o
b
r
e
n
a
d
a
n
t
e
Figura 5.2. Fases da infeco por vrus lticos em cultivo
celular: eclipse, maturaoe inativao.
3.1 Adsoro
A primeira etapa da replicao a ligao
especca das partculas vricas na superfcie das
clulas hospedeiras evento denominado adsor-
o . Essa ligao mediada por protenas da
superfcie dos vrions (viral attachment proteins,
VAPs) que interagem com os receptores na su-
perfcie das clulas. Nos vrus sem envelope, a
funo de ligao exercida pelas protenas do
capsdeo; nos vrus envelopados, pelas glicopro-
tenas do envelope. Os receptores celulares para
os vrus so geralmente protenas (glicoprotenas)
ou carboidratos (presentes em glicoprotenas ou
em glicolipdios da membrana). Em comparao
com os receptores proticos, os carboidratos so
menos especcos, pois podem estar presentes em
uma variedade de molculas de membrana. Al-
guns vrus so estritamente dependentes de um
receptor especco (exemplos: rinovrus, poliov-
112 Captulo 5
Herpes simplex Herpesviridae
V
r
u
s
D
N
A
Sulfato de heparina/receptor homlogo
ao fator de necrose tumoral (TNF) e
fator de crescimentonNeuronal (NGF)
Fuso na membrana plasmtica
Pseudoraiva
Sulfato de heparan (HS),
proteoglicanos (HSPG) e coreceptores
Fuso na membrana
plasmtica
Adenovrus 2 Adenoviridae
Endocitose dependente
de clatrina
Vaccinia Poxviridae Fator de crescimento epidermal (EGF)
Membrana plasmtica e/ou
macropinossomo
SV-40 Polyomaviridae
Molculas do complexo maior de
histocompatibilidade (MHC)
classe I
Endocitose caveolar e/ou
retculo endoplasmtico
Papilomavrus
bovino
Papillomaviridae
Integrina -6 e molculas
semelhantes ao heparan
a
Endocitose dependente
de clatrina
Parvovrus
canino
Parvoviridae Receptor da transferrina Endossomos
Peste suna
africana
Asfarviridae nd
b
Endossomos
Famlia Vrus Receptor Viral Forma/local de Penetrao
Tabela 5.1. Receptores celulares e mecanismos depenetraodos principais vrus animais
.
Vrus elevador da
desidrogenase lctica
Arteriviridae
Molculas do complexo maior de
histocompatibilidade (MHC) classe II
Endossomos
Vrus da Hepatite dos
Murinos
Coronaviridae
Glicoprotena biliar dos murinos/
antgeno carcinoembriognico
Endossomos
Coronavrus
humano 229E
CD13 (Aminopeptidase) Membrana plasmtica
Vrus da influenza Orthomyxoviridae cido silico Endocitose dependente de clatrina
Vrus do sarampo Paramyxoviridae CD46 Membrana plasmtica
Semliki Forest Togaviridae Molculas do MHC classe II Endocitose dependente de clatrina
bovina
Flaviviridae CD46 bovino Endossomos
Vrus da raiva Rhabdoviridae Receptor da neurotropina (p75NTR) Endocitose dependente de clatrina
Vrus Ebola e Marburg Filoviridae Receptor folato (FR- ) a a Caveola
HIV-1 Retroviridae CD4 e receptor de citocinas Membrana plasmtica
Vrus Hantaan Bunyaviridae Integrinas ( ) b
3
Endocitose dependente de clatrina
Vrus da febre aftosa Picornaviridae Integrinas ( ) a
v
Endocitose
nd Caliciviridae Endossomos
Reovrus Reoviridae
cido silico e molcula 1 de adeso
jjuncional (JAM 1)
Endossomos
nd
Rotavrus
Integrinas V 3 e protenas cognatas
do choque trmico (hscp70)
a b
Membrana citoplasmtica ( ) lipid rafts
V
r
u
s
R
N
A
* Adaptado de Klasse et al. (1998); de Pelkmans e Helenius (2003) e referncias selecionadas. CAR: receptor de virus
coxsackie B e adenovirus. nodeterminado.
a
b
Receptor para adenovrus e
vrus Coxsackie B (CAR)
Replicao viral 113
Em cultivo celular e provavelmente tam-
bm in vivo o contato de um vrion com uma
clula um evento que ocorre ao acaso. Ou seja,
a clula hospedeira no atrai a partcula vrica a
distncia. Uma vez em contato com a superfcie
da clula, componentes externos dos vrions in-
teragem quimicamente (interaes eletrostticas,
pontes de hidrognio etc.) com molculas da
membrana plasmtica, podendo resultar ou no
em penetrao e incio da infeco.
O processo de adsoro independente de
energia e do metabolismo celular e ocorre com
a mesma ecincia temperatura corporal ou a
4C. Embora seja de alta especicidade, a intera-
o de uma molcula de VAP com o receptor de
fraca intensidade e, isoladamente, no seria su-
ciente para proporcionar a ocorrncia das etapas
seguintes da penetrao. Para isso, necessria
a ocorrncia simultnea de dezenas ou centenas
dessas interaes. Ou seja, a adsoro viral na
superfcie celular um processo cooperativo, re-
sultante de mltiplas interaes entre protenas
da superfcie dos vrions com os seus respectivos
receptores.
Embora a adsoro dos vrions superfcie
celular seja a etapa inicial e indispensvel para o
incio da replicao, esse evento nem sempre re-
sulta em infeco produtiva. provvel que um
nmero muito grande de interaes entre vrions
e clulas no resulte em penetrao, seja pela au-
sncia de receptores especcos para o vrus, seja
pela debilidade dessas interaes. Partculas v-
ricas podem se ligar superfcie da clula e no
serem internalizadas. Outro cenrio possvel a
ligao, porm com internalizao e liberao do
nucleocapsdeo em compartimentos inadequados
para a replicao (p. ex.: lisossomos). possvel
tambm que vrions sejam internalizados em c-
lulas que no possuam os componentes necess-
rios continuao do ciclo. Resumindo, a ligao
dos vrions a molculas da membrana celular
uma etapa absolutamente necessria, porm nem
sempre suciente para garantir a continuidade
do ciclo replicativo.
Alm de proporcionar o contato inicial com
a clula, as interaes dos vrions com os recep-
tores tambm podem desencadear alteraes es-
truturais nas protenas de superfcie dos vrions.
Para alguns vrus (p. ex.: poliovrus), essas alte-
raes so absolutamente necessrias para a pe-
netrao, desnudamento e continuao do ciclo.
Por isso, alm de servir para a ligao inicial, os
receptores, para alguns vrus, podem ser necess-
rios para a desestabilizao das partculas vricas
e conseqente liberao do genoma no interior
da clula. Nos vrus envelopados, a ligao ao re-
ceptor pode induzir alteraes conformacionais
nas VAPs, que promovem a fuso do envelope
com a membrana celular. No caso do HIV-1, a
ligao do vrion ao receptor CD4 necessria
para estimular a capacidade fusognica da glico-
protena TM.
Em alguns casos, a ligao dos vrions aos
receptores tambm pode induzir sinais qumicos
intracelulares, que podem estar envolvidos na
facilitao da endocitose, no transporte intrace-
lular dos nucleocapsdeos e at mesmo na sobre-
vivncia da clula. Por outro lado, a penetrao
e a posterior replicao viral ativam mecanismos
imunolgicos de defesa, como a produo de in-
terferon do tipo I (IFN-I).
A distribuio dos receptores na superfcie
apical das clulas parece ser aproximadamente
uniforme. A penetrao dos vrions, no entanto,
parece ocorrer preferencialmente em alguns lo-
cais. Isso ocorre porque a ligao das partculas
vricas aos receptores acompanhada de movi-
mentos laterais dessas molculas, resultando na
aglomerao dos receptores em determinados lo-
cais. Esses locais so facilmente observveis sob
microscopia eletrnica (ME) e aparecem como
espessamentos da membrana plasmtica. Esses
espessamentos so decorrentes do acmulo de
uma protena denominada clatrina, envolvida em
sistemas de transporte intracelular por vesculas.
A aglomerao dos vrus que penetram por en-
docitose mediada por receptores, em determina-
dos locais, precede e promove a invaginao da
membrana, com a conseqente formao da ves-
cula endoctica contendo os vrions em seu inte-
rior. A endocitose mediada por receptores um
processo siolgico utilizado pelas clulas para
internalizar diversas molculas, das quais os v-
rus tiram proveito para iniciar a infeco.

114 Captulo 5
3.2 Penetrao
A penetrao a etapa subseqente ad-
soro e envolve a transposio da membrana
plasmtica, permitindo a introduo do nucleo-
capsdeo (genoma viral + protenas) no interior
da clula, local onde ocorrero a expresso gni-
ca e a replicao do genoma. A transposio da
membrana pode ocorrer na superfcie celular ou
j no interior do citoplasma, a partir de vesculas
produzidas por endocitose, fagocitose ou macro-
pinocitose. Dependendo da biologia do vrus, a
penetrao pode ocorrer sem prvia internalizao
(se ocorrer na superfcie celular) ou aps inter-
nalizao (se ocorrer a partir de vesculas intra-
citoplasmticas). No entanto, a internalizao de
vrions em vesculas endocticas no assegura a
ocorrncia de penetrao. A internalizao em
vesculas ou a penetrao direta so processos
que ocorrem imediatamente aps a ligao dos
vrions aos receptores da membrana plasmtica.
Ao contrrio da adsoro, a internalizao e
penetrao so processos dependentes de energia
e no ocorrem ecientemente a 4C. Uma forma
de sincronizar o incio da infeco viral in vitro
realizar adsoro a 4C durante uma hora (ocorre
adsoro sem penetrao) e, a seguir, transferir o
cultivo para 37C, quando ocorrer a penetrao
simultnea das partculas vricas adsorvidas.
As etapas iniciais da infeco viral tm sido
estudadas com o recurso da ME e com a utiliza-
o de qumicos que inibam a internalizao e/
ou a acidicao de vesculas intracelulares (i.e.,
endossomos). Dessa forma, quando a infeco
por um vrus prevenida por substncias inibi-
doras da endocitose, deduz-se que a sua pene-
trao dependa de prvia internalizao; quando
a infeco inibida por agentes que previnam a
acidicao dos endossomos, conclui-se que o
pH cido dessas organelas seja necessrio para a
penetrao.
Em geral, os vrus penetram nas clulas uti-
lizando um (ou alternativamente mais de um)
dos seguintes mecanismos: a) penetrao por
fuso na superfcie celular; b) penetrao aps
endocitose (mediada por clatrina, caveolina ou
agrupamentos de lipdios); c) fagocitose. Esses
mecanismos esto ilustrados na Figura 5.3.
3.2.1 Penetrao por fuso na superfcie
celular
Alguns vrus com envelope (p. ex.: retrov-
rus, paramixovrus e herpesvrus) penetram na
clula aps fuso do envelope com a membrana
plasmtica, evento que ocorre na superfcie celu-
lar (Figura 5.3A). A fuso resulta em um canal
entre o interior da partcula e o compartimento
citoplasmtico, atravs do qual o nucleocapsdeo
penetra no citoplasma. A fuso entre as membra-
nas do envelope e a plasmtica requer a ao de
protenas de fuso presentes no envelope dos v-
rions (p. ex.: glicoprotena TM nos retrovrus e F
nos paramixovrus). Nesses vrus, o mecanismo
de fuso ocorre sob pH neutro, ou seja, indepen-
de de acidicao, e, por isso, esses vrus so de-
nominados pH-independentes.
A membrana plasmtica no a nica bar-
reira que o nucleocapsdeo viral deve ultrapassar
para ter acesso aos locais intracelulares apropria-
dos para a replicao. Algumas clulas possuem
um citoesqueleto cortical espesso logo abaixo da
membrana plasmtica, o que impede o acesso de
ribossomos e outras organelas rea imediata-
mente adjacente membrana. Essas estruturas
tambm dicultam a progresso dos nucleocap-
sdeos at as regies mais internas da clula. No
obstante, os vrus que penetram por fuso na su-
perfcie celular desenvolveram estratgias para
superar esses obstculos e conseguir liberar os
seus nucleocapsdeos nos locais adequados.
3.2.2 Penetrao aps endocitose
Esse mecanismo caracterstico da penetra-
o de vrios vrus envelopados (p. ex.: avivrus
e ortomixovrus) e de alguns vrus sem envelope
(p. ex.: adenovrus, picornavrus e reovrus). A via
endoctica parece ser o caminho mais adequado
para a internalizao dos vrus, pelos seguintes
aspectos: a) a endocitose um processo siolgi-
co comum maioria das clulas; b) somente ocor-
re em clulas com transporte de membrana ativo,
evitando a penetrao em eritrcitos e plaquetas,
onde a infeco seria improdutiva; c) os vrions
podem se ligar em qualquer local da superfcie
celular para serem internalizados; d) a endocito-
Replicao viral 115
Figura 5.3. Principais mecanismos de penetrao dos vrus nas clulas hospedeiras. A) Penetrao na superfcie
celular, por fuso com a membrana plasmtica; B) Penetrao por fuso aps endocitose mediada por clatrina; C)
Penetrao por fuso aps endocitose mediada por caveolina; D-E) Penetrao aps endocitose mediada por
agrupamentos delipdios.
H+
H+
H+
H+
H+
H+
?
?
A
B
C
D
E
Meio extracelular
Citoplasma
Ncleo
Microtbulos
R
e
t
c
u
l
o
e
n
d
o
p
l
a
s
m
t
i
c
o
se assegura a internalizao e o transporte dos v-
rions aos locais de expresso gnica e replicao;
e) a penetrao a partir dos endossomos reduz os
riscos de deteco pelo sistema imunolgico, pois
no deixa protenas virais expostas na superfcie
celular; e f) o ambiente endossomal se acidica
gradativamente, o que auxilia na ativao dos
mecanismos de fuso e penetrao.
3.2.2.1 Endocitose mediada por clatrina
Os endossomos recobertos por clatrina so
vesculas de aproximadamente 100 nm de dime-
tro e se formam pela invaginao de pequenas re-
gies da membrana plasmtica revestidas inter-
namente por molculas de clatrina (clatrin-coated
pits). Quando examinadas sob ME, essas regies
116 Captulo 5
aparecem como espessamentos da membrana,
adjacentes aos locais de ligao dos vrions. Aps
a invaginao, o revestimento de clatrina remo-
vido e as vesculas trafegam em direo ao inte-
rior da clula. Nesse trajeto, o ambiente endos-
somal gradativamente acidicado por meio de
ATPases associadas membrana, que bombeiam
prtons H
+
para o seu interior. Nos endossomos
tardios e lisossomos, o pH pode atingir 5,0 a 5,5.
Dessa forma, os vrions internalizados por essa
via so submetidos reduo gradativa do pH.
Essa forma de penetrao a mais estudada e,
provavelmente, a mais importante entre os vrus
animais, sendo tratada com mais detalhes a se-
guir (Figura 5.3B).
Ao contrrio da fuso e penetrao dos v-
rus pH independentes, a fuso do envelope de
muitos vrus com a membrana celular s ocorre
sob pH baixo (5,5-6,5). Esses vrus so denomi-
nados pH-dependentes e no conseguem fusionar
e penetrar na superfcie celular sob pH neutro. A
acidicao progressiva dos endossomos propor-
ciona condies para a fuso do envelope com a
membrana endossomal, resultando na liberao
do nucleocapsdeo no citoplasma. Embora v-
rios vrus penetrem dessa forma, esse um me-
canismo particularmente bem caracterizado nos
vrus da inuenza. A protena de fuso desses
vrus (hemaglutinina, HA) tambm a protena
responsvel pela ligao aos receptores (cido si-
lico). Aps a ligao nos receptores, os vrions
so internalizados por endocitose. A acidicao
dos endossomos induz alteraes conformacio-
nais na HA que resultam na fuso do envelope
com a membrana do endossomo. O pH baixo nos
endossomos tambm facilita a dissociao dos
nucleocapsdeos do restante do envelope, resul-
tando na sua liberao no citoplasma. Nos vrus
pH-dependentes, a penetrao deve ocorrer no
momento apropriado, pois a acidicao excessi-
va que ocorre aps a fuso dos endossomos com
os lisossomos pode inativar o vrus. Drogas que
inibem a endocitose (xido de fenilarsina) ou im-
pedem a acidicao dos endossomos (monensi-
na, cloroquina e cloreto de amnia) previnem a
penetrao de vrus pH-dependentes.
Os vrus sem envelope transpem a mem-
brana pela formao de canais proteinceos na
membrana endossomal (picornavrus) ou por
lise/perturbao da integridade dessa membra-
na (adenovrus e reovrus). A acidicao pro-
gressiva dos endossomos e as interaes com a
membrana provocam alteraes estruturais e
desorganizao do capsdeo, podendo ocorrer a
dissociao de algumas protenas. Nos picorna-
vrus, o rearranjamento das protenas do caps-
deo induzido pelo pH baixo, leva formao de
aberturas atravs das quais o genoma transloca-
do para o interior do citoplasma. As partculas v-
ricas do reovrus, internalizados por endocitose,
sofrem alteraes estruturais e algumas protenas
do capsdeo so ativadas, tornando-se capazes
de lisar ou permeabilizar a membrana do endos-
somo. Dessa forma, permitem a penetrao dos
capsdeos semidesintegrados. Nos adenovrus, o
capsdeo sofre alteraes estruturais pela expo-
sio ao pH progressivamente baixo, resultando
na desorganizao da partcula e na ativao das
protenas bra e penton. Essas protenas partici-
pam da lise ou da permeabilizao da membrana
endossomal, permitindo a penetrao do com-
plexo nucleoprotena no compartimento intrace-
lular.
3.2.2.2 Endocitose mediada por caveo-
lina
As caveolas so pequenas invaginaes em
forma de cantil, que so formadas na membrana
plasmtica de diversos tipos de clulas. As caveo-
las podem ser internalizadas com auxlio da actina
e, at o presente momento, no h evidncias de
que o seu contedo seja entregue via endoctica,
ou seja, constituem um mecanismo independente
de internalizao. As caveolas internalizadas so
transportadas at a regio perinuclear, prxima-
ao retculo endoplasmtico (RE). Recentemente,
evidenciou-se que o vrus smio 40 (SV-40) utiliza
essa via para a internalizao e penetrao (Figu-
ra 5.3C). Aps a ligao aos receptores, os vrions
se deslocam lateralmente na superfcie celular
at serem capturados por caveolas. As caveolas
so, ento, circundadas parcialmente por bras
de actina, conferindo vescula uma aparncia
de cantil. Posteriormente, a vescula caveolar,
contendo os vrions, entregue aos caveossomos,
Replicao viral 117
que so organelas de pH neutro preexistentes no
citoplasma, ricas em caveolina e colesterol. Aps
algumas horas da infeco, os caveossomos libe-
ram tbulos membranosos repletos de vrions,
que trafegam ao longo dos microtbulos at o RE.
Posteriormente, as partculas virais deixam essa
organela, entram no citosol e penetram no ncleo
atravs dos poros nucleares. Essa via de penetra-
o parece no ser exclusiva do SV-40. Estudos
recentes com o vrus ebola (lovrus), poliomav-
rus e echovrus (picornavrus) tm sugerido um
mecanismo semelhante de penetrao.
3.2.2.3 Endocitose mediada por
agrupamento de lipdeos
Esngolipdeos e/ou glicoesngolipdeos e
molculas de colesterol podem se associar late-
ralmente e formar microdomnios na membrana
celular, denominados de lipid rafts (o termo raft
denota as toras de madeira utilizadas na constru-
o de jangadas). Esses microdomnios contm
protenas especcas e participam de funes
celulares, como o transporte de membrana, mor-
fognese e sinalizao celular. A internalizao
dessas estruturas independente do revestimen-
to por clatrina e caveolina. Os vrions internali-
zados por essa via so direcionados aos endos-
somos, a partir dos quais ocorre penetrao no
compartimento citoplasmtico. Essa via de pene-
trao tem sido sugerida para o SV-40, em clulas
que no contm caveolina, e tambm para alguns
picornavrus, papilomavrus e retrovrus (Figu-
ras 5.3D e 5.3E).
3.2.3. Outros mecanismos de
penetrao
3.3.3.1 Fagocitose
O papel da fagocitose na penetrao dos
vrus nas clulas hospedeiras ainda no est es-
clarecido. No entanto, partculas do vrus da in-
uenza j foram observadas em vesculas fagoc-
ticas, e os poxvrus possivelmente utilizam essa
via para a internalizao e posterior penetrao
celular. Aps a sua formao, os fagossomos se
fusionam com os endossomos e lisossomos e so
acidicados, potencializando a capacidade de fu-
so e penetrao dos vrions pH-dependentes.
3.3.3.2 Macropinocitose
A macropinocitose um processo celular
no especco (pode ocorrer na ausncia de ligan-
tes aos receptores) de internalizao de volumes
grandes de uidos e de regies de membrana.
Substncias internalizadas por essa via tambm
so direcionadas aos endossomos e lisossomos.
O vrus da vaccinia (poxvrus) pode penetrar por
essa via, uma vez que os seus vrions so muito
grandes para serem internalizados por endocito-
se mediada por clatrina. O vrus HIV tambm pa-
rece utilizar essa via para infectar macrfagos.
3.2.3.3 Translocao atravs da mem-
brana plasmtica
Esse um mecanismo pouco conhecido, pro-
vavelmente raro entre os vrus animais e parece
ocorrer somente com os vrus sem envelope.
3.2.3.4 Transferncia direta entre
clulas
Alm dos mecanismos especcos de pe-
netrao, alguns vrus podem ser transmitidos
diretamente entre clulas, sem a necessidade de
egresso e infeco de uma nova clula. Essa trans-
misso possvel pela insero de protenas vi-
rais na membrana lateral da clula. As protenas
virais produzem fuso entre as clulas vizinhas e
transferncia do material gentico do vrus para
a nova clula. Esse mecanismo de transferncia
direta (observada nos paramixovrus e poxvrus,
entre outros) permite ao vrus infectar novas c-
lulas sem se expor ao sistema imunolgico.
Como j mencionado, a simples internaliza-
o da partcula vrica no assegura que a repli-
cao ir ocorrer. O desnudamento e a entrega do
material gentico aos locais apropriados so ne-
cessrios para o prosseguimento do ciclo. Alm
disso, a clula deve apresentar as condies in-
tracelulares necessrias para a expresso gnica
e replicao do genoma. Sob ME, freqente a
118 Captulo 5
visualizao de vrions internalizados em clulas,
porm localizados em stios inapropriados para
o prosseguimento da replicao. Alguns desses
vrions podem ser eventualmente reciclados e
liberados na superfcie celular, podendo infectar
produtivamente outras clulas. A maioria, po-
rm, parece estar destinada inativao por pro-
cessos catablicos celulares.
3.3 Etapas aps a penetrao
3.3.1 Desnudamento
O termo desnudamento (do ingls uncoating)
refere-se serie de eventos que ocorrem imedia-
tamente aps a penetrao, em que os componen-
tes do nucleocapsdeo so parcial ou totalmente
removidos, resultando na exposio parcial ou
completa do genoma viral. A remoo das prote-
nas do nucleocapsdeo necessria para a exposi-
o do genoma s enzimas e fatores responsveis
pela transcrio (vrus DNA e RNA de cadeia
negativa) ou traduo (vrus RNA de cadeia po-
sitiva). No ciclo replicativo de alguns vrus, a re-
plicao do genoma ocorre aps o desnudamen-
to completo do genoma (poliovrus e avivrus).
Em outros vrus, a remoo parcial das protenas
do nucleocapsdeo j suciente para a ocorrn-
cia das etapas seguintes do ciclo (paramixovrus,
rabdovrus, ortomixovrus e reovrus). Portanto,
o desnudamento parece ter uma denio mais
funcional do que estrutural. A estrutura e com-
plexidade de cada nucleocapsdeo que determi-
na os passos subseqentes na replicao.
O produto do desnudamento depende da
estrutura do nucleocapsdeo. Nos picornavrus,
o resultado a liberao do RNA genmico to-
talmente desnudo, com uma protena de 23 ami-
nocidos (VPg) ligada covalentemente sua ex-
tremidade 5. Em alguns vrus (paramixovrus,
rabdovrus, arenavrus e ortomixovrus), o geno-
ma nunca totalmente desnudo. Os processos de
transcrio e replicao ocorrem com o genoma
recoberto por protenas (ribonucleoprotena).
Nos reovrus e poxvrus, a transcrio e a replica-
o do genoma ocorrem no interior de capsdeos
parcialmente desintegrados.
Nos vrus que penetram por fuso com a
membrana plasmtica, a remoo do envelope,
que ocorre pela fuso faz parte do desnuda-
mento. Em alguns vrus RNA de cadeia positiva
(togavrus), a remoo das protenas do nucleo-
capsdeo ocorre logo aps a penetrao, pela sua
interao com o RNA dos ribossomos. Nos vrus
pH dependentes, a acidicao dos endossomos
desencadeia a fuso e tambm pode facilitar a
dissociao das protenas do genoma. Isso resul-
ta na liberao do nucleocapsdeo ou do genoma
desprovido de protenas diretamente no citoplas-
ma. Nos herpesvrus, adenovrus e papovavrus,
o capsdeo permanece parcialmente ntegro aps
a penetrao, sendo transportado at as proxi-
midades do ncleo associado aos tbulos do ci-
toesqueleto. O desnudamento e a penetrao do
nucleocapsdeo no ncleo ocorre prximo aos
poros nucleares. Nos picornavrus, a acidicao
dos endossomos provoca alteraes conforma-
cionais no capsdeo que proporcionam interaes
de suas protenas com a membrana, resultando
na formao de aberturas atravs das quais o ge-
noma liberado no citoplasma.
O desnudamento torna o genoma acessvel
s enzimas e a outros fatores celulares respon-
sveis pelas etapas subseqentes da replicao.
Dependendo do tipo de genoma, as etapas que
se seguem ao desnudamento diferem entre os v-
rus.
3.3.2 Movimentao intracelular
Aps a penetrao, o genoma viral precisa
ser transportado at o local onde ocorrero a ex-
presso gnica e a replicao. A movimentao
dos vrions no citoplasma ocorre inicialmente
de forma passiva, no interior de vesculas endo-
cticas. Aps a penetrao, os nucleocapsdeos
podem interagir com os componentes do cito-
esqueleto ou com protenas transportadoras. Os
paramixovrus (que penetram na clula por fu-
so direta do envelope com a membrana celular)
e os picornavrus (que penetram atravs de poros
na membrana endossomal) no necessitam de
transporte intracelular antes de iniciar a sntese
de protenas, pois os ribossomos podem estar
Replicao viral 119
prximos ao local de penetrao. Outros vrus
penetram na clula em vesculas endocticas, que
se movimentam entre a densa cadeia de micro-
lamentos e entregam a sua carga aos locais apro-
priados. Os herpesvrus e retrovrus penetram na
clula por fuso do envelope com a membrana
plasmtica, e o genoma viral deve ser transpor-
tado at o ncleo para a replicao. Para iniciar
a transcrio reversa de seu material gentico, os
retrovrus interagem com lamentos de actina,
necessitam funes relacionadas miosina e dos
microtbulos. O HSV ultrapassa o crtex celular
(composto basicamente de actina) por mecanis-
mos ainda desconhecidos, e os nucleocapsdeos
so transportados at o ncleo associados com os
microtbulos. Os adenovrus e parvovrus tam-
bm so transportados por microtbulos at o
ncleo da clula hospedeira.
3.3.3 Penetrao nuclear
O ncleo o local de replicao da maioria
dos vrus DNA e tambm dos ortomixovrus. No
entanto, a presena da membrana nuclear repre-
senta uma barreira adicional progresso dos v-
rions ou dos nucleocapsdeos, pois os poros nucle-
ares permitem a passagem somente de partculas
com at 39 nm de dimetro. Conseqentemente,
o transporte dos nucleocapsdeos ou do genoma
at o interior do ncleo depende de interaes
especcas com componentes celulares. Vrions
pequenos, como os parvovrus (18-24 nm) e os
capsdeos do vrus da hepatite B (36 nm), podem
ser transportados intactos (ou semi-ntegros), por
meio de mecanismos citoplasmticos especializa-
dos (microtbulos, microlamentos e protenas
motoras), e, posteriormente, translocados atravs
dos poros nucleares por protenas especializadas.
Os vrions ou capsdeos maiores necessitam ser
previamente desintegrados ou deformados para
permitirem a introduo do genoma viral pelos
poros nucleares. O nucleocapsdeo do HSV, por
exemplo, transportado do crtex celular at o
ncleo ao longo dos microtbulos e liga-se, na
face citoplasmtica da membrana nuclear, por
meio de uma molcula denominada de importi-
na. Posteriormente ocorre uma abertura parcial
de um dos vrtices do capsdeo e a liberao do
DNA viral atravs do poro nuclear. O adenov-
rus tipo 2 transportado ao longo dos microt-
bulos at as proximidades do ncleo e liga-se a
lamentos dos poros nucleares. Aps, com o au-
xlio das importinas, e pela ligao com histonas,
ocorre a desmontagem do vrion e o DNA viral
translocado para o interior do ncleo.

3.4 Expresso gnica
A sntese de protenas virais pela maqui-
naria celular o evento central da multiplicao
dos vrus. O genoma viral codica diferentes
protenas que devem desempenhar pelo menos
trs funes bsicas: a) assegurar a replicao
do genoma; b) subverter funes celulares em
seu benefcio e c) empacotar os genomas recm-
replicados em novas partculas vricas. Os vrus
no possuem metabolismo prprio e so inteira-
mente dependentes da maquinaria celular para a
produo de suas protenas. Ou seja, as informa-
es genticas contidas no genoma dos vrus so
decodicadas em protenas virais pelo aparato
de sntese protica da clula hospedeira. Para uti-
lizar esse aparato para a produo de suas pro-
tenas, os vrus tiveram que evoluir de forma a
satisfazer algumas restries impostas pelas clu-
las hospedeiras. O ponto-chave desse processo
a sntese (ou apresentao) de mRNAs que sejam
adequadamente reconhecidos e traduzidos pelos
ribossomos. Dependendo da estrutura e organi-
zao genmica, os vrus de diferentes famlias
convergem para a produo de mRNA por dife-
rentes vias (Figura 5.4).
O aparato celular de transcrio (RNA poli-
merase II e fatores de transcrio) e de processa-
mento dos transcritos se localiza no ncleo das
clulas hospedeiras. A maioria dos vrus DNA
replica no ncleo e, assim, pode utilizar esses
mecanismos. Os genes desses vrus contm re-
gies regulatrias (promotores, enhancers) que
so reconhecidas pela RNA polimerase II (RNA-
polII) e pelos fatores de transcrio celulares. Os
transcritos (mRNA) produzidos contm a estru-
tura cap, so poliadenilados e alguns so subme-
tidos a splicing antes de serem exportados para
o citoplasma. Embora sejam vrus DNA, os po-
xvrus e asfarvrus replicam no citoplasma e so
independentes da maquinaria nuclear de sntese
120 Captulo 5
e processamento de DNA e RNA. Isso s pos-
svel porque esses vrus trazem, nos vrions, as
enzimas e fatores auxiliares para a transcrio e
processamento dos seus mRNA.
Os vrus RNA, com exceo dos retrovrus,
no dependem da maquinaria celular de transcri-
o e convergem para a produo de mRNA por
vias diferentes. Os retrovrus utilizam a maqui-
naria celular para a transcrio dos seus genes,
aps a integrao de uma cpia DNA do genoma
(provrus) nos cromossomos celulares. A transcri-
o resulta na produo de mRNA para a sntese
Vrus DNA Vrus RNA
Poxviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Polyomaviridae
Papillomaviridae
(Classe I)
Circoviridae
Parvoviridae
(Classe II)
Vrus que realizam
transcrio reversa
Hepadnaviridae
(Classe VII)
Retroviridae
(Classe VI)
Reoviridae
Birnaviridae
(Classe III)
Picornaviridae
Flaviviridae
Caliciviridae
Astroviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Togaviridae
(Classe IV)
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Bunyaviridae
Filoviridae
(Classe V)
ssRNA
(-)
ssRNA
(+)
dsDNA ssDNA pdsDNA ssRNA
(+)
dsRNA
(+ / -)
Traduo
.dsDNA .dsDNA
ssDNA
dsDNA
1
2 3
mRNA
4 5 6 7
Protena
Figura 5.4. Estratgias de produo de RNAmensageiros (mRNA) e expresso gnica das diferentes classes de vrus.
Nos vrus da classe I, os promotores virais so reconhecidos por fatores celulares, e os genes so transcritos pela
RNApolII celular, resultando emmRNAs traduzveis pelos ribossomos (1). Nos vrus da classe II, o genoma DNAde
fita simples linear (parvovrus) ou circular (circovrus) , inicialmente, convertido em fita dupla e transcrito pela
RNApolII (2). Apenas as cadeias negativas dos vrus da classe III (genoma RNA de fita dupla) so transcritas pela
polimerase viral, originando os mRNA (5). O genoma dos vrus da classe IV (RNA fita simples de polaridade
positiva) pode ser diretamente traduzido, em toda a sua extenso (flavivrus, picornavrus) ou parcialmente (outros)
(7). Nestes, o restante dos mRNA so produzidos pela transcrio do RNA intermedirio pela polimerase viral. Nos
vrus da classe V, o genoma RNA de polaridade negativa transcrito pela polimerase presente nos vrions (6). Nos
hepadnavrus (classe VII), os mRNAso produzidos pela transcrio do DNAviral pela RNApolII e fatores celulares
(3). Nos retrovrus (classe VI), os mRNA so produzidos pela transcrio do provrus DNA (uma cpia do RNA
genmico) pelaRNApolII e fatores celulares, aps a integraodoprovrus aogenomacelular (4).
Fonte: adaptado de altimore 1971). B (
Replicao viral 121
protica e tambm de cpias de RNA genmico
que sero encapsidadas.
Os vrus RNA convergem para a apresenta-
o de mRNA traduzveis de duas formas: a) o
prprio genoma dos vrus RNA de sentido posi-
tivo serve de mRNA e parcial ou integralmente
traduzido pelos ribossomos. Nos vrus cujo geno-
ma parcialmente traduzido, os mRNAs, para a
sntese das protenas estruturais, so produzidos
pela transcrio do RNA de sentido antigenmi-
co, que produzido pela replicao do genoma;
b) os vrus RNA de sentido negativo trazem a
sua prpria RNA polimerase nos vrions. Assim,
no incio da infeco, essa enzima se encarrega
de transcrever o genoma viral, produzindo os
mRNA para a sntese protica. Nos vrus RNA
de cadeia dupla, a RNA polimerase trazida nos
vrions transcreve as cadeias genmicas negati-
vas em mRNA.
A maquinaria de sntese protica das clu-
las eucariotas (ribossomos e fatores auxiliares) se
localiza no citoplasma; somente traduz mRNA
monocistrnicos e que possuam a estrutura cap
na extremidade 5. Os mRNA dos vrus DNA que
replicam no ncleo so produzidos, processados
e exportados para o citoplasma pela maquinaria
da clula e, como tal, assemelham-se aos mRNA
celulares. Os mRNA do vrus DNA que replicam
no citoplasma (poxvrus, asfarvrus) so produzi-
dos e modicados no prprio citoplasma por en-
zimas virais, tambm semelhana dos mRNA
celulares. Para serem traduzidos diretamente,
os genomas dos vrus RNA de sentido positivo
possuem cap 5 (alguns avivrus, coronavrus,
arterivrus e togavrus) ou uma estrutura secun-
dria que permite o reconhecimento pelos ribos-
somos e o incio da traduo. Essa estrutura
denominada IRES (internal ribosomal entry site) e
est presente prxima extremidade 5 do geno-
ma dos picornavrus e de alguns membros da fa-
mlia Flaviviridae (pestivrus). Nos vrus RNA de
sentido negativo e RNA de cadeia dupla, a RNA
polimerase viral produz mRNAs com cap e cauda
poliA.
A maquinaria de traduo das clulas eu-
cariotas no capaz de traduzir mRNAs policis-
trnicos, ou seja, mRNAs que contenham mais
de uma ORF. A traduo de ORFs internas no
mRNA exige o reconhecimento de seqncias
especcas localizadas prximas ao cdon de
iniciao, mecanismo ainda no identicado em
eucariotas. Por isso, os vrus desenvolveram di-
ferentes estratgias de codicao de suas pro-
tenas: produo de mRNA monocistrnicos
(contendo uma ORF = um gene) ou produo
de mRNA policistrnicos. Os mRNAs policistr-
nicos contm uma nica e longa ORF que codi-
ca uma longa poliprotena. medida que vai
sendo traduzida, essa poliprotena clivada por
proteases celulares e/ou virais, dando origem s
protenas virais individuais. Do ponto de vista da
traduo, os mRNA que contm uma nica ORF,
que traduzida em poliprotena, comportam-se
como mRNAs monocistrnicos, pois a traduo
se inicia no primeiro cdon de iniciao e termina
no cdon de terminao. As protenas individu-
ais so geradas aps este processo, pela clivagem
enzimtica.
Alm de superar essas restries, os vrus
tiveram que desenvolver estratgias que os per-
mitam utilizar a maquinaria celular de traduo
em seu benefcio. Isso porque os mRNA celula-
res esto presentes em muito maior quantidade e
competem com grande vantagem em relao aos
mRNA virais. Dentre as estratgias virais utiliza-
das pelos vrus para competir pelo aparato celular
de traduo destacam-se: a) inibio da transcri-
o celular (vrus da estomatite vesicular, VSV);
b) inibio do processamento e/ou maturao e
exportao de mRNA celulares do ncleo (ade-
novrus, HIV); c) degradao de mRNA celulares
no ncleo (ortomixovrus, HSV) ou no citoplasma
(buniavrus); d) inibio seletiva da traduo de
mRNA celulares (poliovrus, FMDV); e) facilita-
o do processamento, transporte e traduo de
mRNA virais (HIV); g) alterao da especicida-
de de reconhecimento de mRNA para a traduo:
a traduo de mRNA que possuem cap inibida
e as clulas infectadas passam a traduzir mRNA
virais, que so reconhecidos pelos ribossomos
atravs da estrutura IRES (picornavrus).
Dependendo do tipo e organizao genmi-
ca, os vrus podem utilizar diferentes estratgias
122 Captulo 5
para cumprir as etapas de expresso gnica e re-
plicao do seu genoma. Baltimore (1971) props
a classicao dos vrus em seis grupos, de acor-
do com o tipo de genoma, local e estratgia de
replicao. Essa classicao foi posteriormente
ampliada para contemplar novos vrus e estra-
tgias identicadas, resultando em sete grupos
ou classes (Tabela 5.2). A seguir sero abordados
os principais aspectos da replicao de cada um
desses grupos. Os detalhes da replicao dos v-
rus de cada famlia sero abordados nos captu-
los especcos.
3.5.1 Replicao dos vrus DNA
A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hospe-
deira associada com fatores codicados pelo v-
rus. A contribuio dos fatores virais na replica-
o desses vrus, no entanto, varia muito entre as
diferentes famlias. Em geral, os vrus DNA mais
simples (circovrus, parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
pois os seus genomas codicam poucos produ-
tos associados com funes replicativas. Por ou-
tro lado, os vrus DNA complexos (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquina-
ria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral.
A replicao da maioria dos vrus DNA
ocorre no ncleo da clula hospedeira. O genoma
desses vrus contm regies regulatrias que so
reconhecidas pela maquinaria celular de trans-
crio e, assim, podem utiliz-la para a produo
I DNA de cadeia dupla
Ib. Citoplasma
Ia. Ncleo
Polyomaviridae
Papillomaviridae
Adenoviridae
Herpesviridae
Poxviridae
Asfarviridae
II DNA cadeia simples Ncleo
Parvoviridae
Circoviridae
III RNA de cadeia dupla Citoplasma
Reoviridae
Birnaviridae
IV
RNA de cadeia simples,
sentido positivo
Citoplasma
Flaviviridae
Picornaviridae
Va. Ncleo
IVa.Traduo integral
do genoma
IVb.Traduo parcial
do genoma; mRNAs
subgenmicos
V
RNA de cadeia simples,
sentido negativo
Orthomyxoviridae
Bornaviridae
Vb. Citoplasma
Bunyaviridae
Arenaviridae
Rabdoviridae
Paramyxoviridae
Filoviridae
VI
RNA de cadeia simples e
intermedirio DNA
Citoplasma/ncleo Retroviridae
VII
DNA de cadeia parcialmente
dupla e intermedirio RNA
Ncleo/citoplasma Hepadnaviridae
Classe Genoma Local de replicao Famlias
Astroviridae
Caliciviridae
Togaviridae
Coronaviridae
Arteriviridae
Tabela 5.2 Classificao dos vrus de acordo com o tipo de genoma, local de replicao e estratgia utilizada para
produzir os mRNAs.
Fonte: adaptado de altimore 1971). B (
Replicao viral 123
dos mRNA necessrios sntese de suas prote-
nas. Em diferentes graus, esses vrus tambm
utilizam enzimas e fatores celulares para o meta-
bolismo de nucleotdeos, para a sntese de DNA
e replicao do genoma.
Os poxvrus e asfarvrus se constituem em
excees, pois trazem, nos vrions, as enzimas e
fatores necessrios para a transcrio e modica-
o dos mRNA e codicam as enzimas e fatores
requeridos para a replicao do genoma. Mesmo
assim, so dependentes da maquinaria celular de
sntese protica. A replicao desses vrus ocorre
inteiramente no citoplasma.
O mecanismo de replicao do genoma
tambm apresenta diferenas entre as famlias,
devido a peculiaridades de estrutura, topologia
e organizao genmica. A replicao do geno-
ma circular de ta dupla dos poliomavrus, por
exemplo, realizada quase que exclusivamente
por enzimas e fatores celulares. A sntese das no-
vas cadeias utiliza um primer de RNA e ocorre de
forma bidirecional e semidescontnua, a exemplo
da replicao do DNA celular. A replicao dos
genomas DNA de ta simples (circovrus e parvo-
vrus) tambm envolve a participao predomi-
nante de fatores celulares e se inicia com a sntese
da ta complementar. Nos parvovrus, a prpria
extremidade 3 do genoma serve de primer para
o incio da replicao. A replicao do genoma
linear de ta dupla dos adenovrus se inicia com
um primer de protena, ocorre de forma contnua
e em duas etapas. Apenas uma das cadeias re-
plicada em cada etapa. A replicao do genoma
dos herpesvrus e poxvrus mais complexa e
envolve a participao de vrios fatores codica-
dos pelo genoma viral. Os herpesvrus parecem
replicar o seu genoma por um mecanismo de cr-
culo rolante, no qual a replicao inicia-se aps a
circularizao do genoma e resulta na produo
de multmeros, que so posteriormente clivados
em unidades genmicas. A replicao do genoma
dos hepadnavrus inclui uma etapa de transcri-
o reversa, na qual um RNA produzido a partir
do DNA genmico convertido em DNA de ta
simples e, posteriormente, em DNA de ta du-
pla.
As etapas do ciclo replicativo dos diferentes
grupos de vrus DNA esto ilustradas esquema-
ticamente nas Figuras 5.5 a 5.8 (a forma de apre-
sentao das etapas de replicao foi adaptada de
ROIZMAN e PALESE, 1996).
Genoma dsDNA DNA Prognie
Replicao
Morfognese
mRNA
Protenas
iniciais (NS)
Morfognese
Vrions
3
Egresso
Traduo
Protenas tardias
(estruturais)
Transcrio
genes iniciais
1
2
4
5
6
6
mRNA
Traduo
Transcrio
genes tardios
Figura 5.5. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ia ( ).
Os genes iniciais so transcritos antes da replicao do genoma (1) e geralmente codificam protenas no-estruturais
(NS) envolvidas nas etapas seguintes da replicao (2). Essas protenas, isoladamente ou em conjunto com fatores
celulares, atuam na replicao do genoma (3). Os genes tardios so transcritos aps a replicao do genoma (4) e
codificam protenas estruturais em sua maioria (5). As protenas estruturais so importadas para o ncleo, onde
ocorre amorfognese (6).
Adenoviridae, Herpesviridae, Polyomaviridae e Papillomaviridae
124 Captulo 5
3.5.1.1 Vrus da classe Ia
Os genes desses vrus so transcritos pela
maquinaria celular de transcrio, pois possuem
as regies regulatrias (promotores, enhancers),
que so reconhecidas pela RNApolII e pelos fato-
res de transcrio da clula hospedeira. Os genes
so classicados em duas ou mais classes e so
transcritos seqencialmente sob regulao tem-
poral restrita. Os genes iniciais (immediate-early e
early nos herpesvrus; early nas demais famlias)
so transcritos logo aps a penetrao na clula e,
geralmente, codicam protenas no-estruturais
que possuem funes regulatrias sobre outros
genes e tambm enzimas e fatores envolvidos na
replicao do genoma. A replicao do genoma
dos poliomavrus e papilomavrus realizada
quase que exclusivamente por fatores e enzimas
celulares; j os herpesvrus e adenovrus codi-
cam vrias protenas com funes replicativas
(DNA polimerase, protena de ligao no DNA,
helicase e quinases de nucleotdeos). Os genes
tardios so transcritos aps a replicao do geno-
ma e codicam principalmente protenas estrutu-
rais e/ou protenas envolvidas na morfognese.
Algumas protenas no-estruturais (NS), que so
necessrias nos estgios iniciais do prximo ciclo
de infeco, tambm so produzidas nessa etapa
e incorporadas na prognie viral (Figura 5.5).
3.5.1.2 Vrus da classe Ib
Os poxvrus e asfarvrus realizam o seu ciclo
replicativo inteiramente no citoplasma. Para isso,
trazem, nos vrions, as enzimas e fatores necess-
rios para a transcrio dos seus genes e proces-
samento dos transcritos. O genoma desses vrus
codica vrios produtos que atuam no metabo-
lismo de nucleotdeos e na replicao do genoma
(DNA polimerase, helicase, protena de ligao
no DNA e quinase de timidina), que, portanto,
realizada predominantemente por enzimas e
fatores virais. A expresso gnica ocorre em trs
etapas principais: inicial, intermediria e tardia.
Os genes iniciais so os primeiros a ser expres-
sos, e os seus produtos possuem funes diver-
sas, incluindo a concluso do desnudamento, a
replicao do genoma e ativao da transcrio
dos genes intermedirios. As protenas inter-
medirias atuam principalmente na ativao da
transcrio dos genes tardios, cujos produtos so
predominantemente protenas estruturais e/ou
que participam da morfognese da prognie viral
(Figura 5.6). Esses vrus codicam vrios produ-
Genoma DNA
(encapsidado)
DNA
livre
mRNA
intermedirios
Protenas
intermedirias
5
6
3
Egresso
mRNA iniciais
1 Transcrio
inicial
2
Protenas
iniciais (NS)
DNA prognie
7
8
mRNA
tardios
Protenas
tardias
4
9
9
Vrions
Traduo
Traduo Traduo
Transcrio Transcrio Morfognese
Morfognese
Replicao
Figura 5.6. Ciclo replicativo dos vrus da classe Ib ( ). Os genes iniciais so transcritos pela
RNA polimerase viral ainda com o DNA parcialmente encapsidado, resultando nos mRNAs (1) que so traduzidos
nas protenas iniciais (2). Essas protenas participamdo desnudamento completo do genoma (3), na sua replicao (4)
e na transcrio (5) dos genes que codificam as protenas intermedirias (6). Estas protenas esto envolvidas na
transcrio dos genes tardios (7), que codificam principalmente protenas estruturais (8). Estas protenas participam
damorfognese dos vrions, juntamentecomoDNArecm-replicado(9).
Poxviridae e Asfarviridae
Replicao viral 125
tos que interferem com a resposta do hospedei-
ro infeco, dicultando o reconhecimento das
clulas infectadas pelo sistema imunolgico do
hospedeiro.
3.5.1.3 Vrus da classe II
A replicao do genoma dos parvovrus e
circovrus realizada predominantemente por
enzimas e fatores da clula hospedeira. A primei-
ra etapa da replicao a sntese da cadeia com-
plementar de DNA. O DNA de ta dupla (linear
nos parvovrus, circular nos circovrus) , ento,
transcrito pela RNA polII celular, originando os
mRNAs para a sntese de protenas virais. A re-
plicao dos parvovrus est intimamente asso-
ciada com a fase S do ciclo celular, demonstran-
do a dependncia de fatores celulares presentes
nesta fase. O genoma dos parvovrus replicado
de forma contnua, a partir de uma 3-OH loca-
lizada na extremidade do hairpin, formado pelo
pareamento das regies complementares termi-
nais. A sntese da nova cadeia seguida pelo des-
locamento da cadeia original, originando conca-
tmeros, que sero posteriormente clivados para
originar os monmeros de extenso genmica.
Os parvovrus encapsidam predominantemente
cpias de DNA de sentido negativo (aquelas que
sero transcritas), mas algumas espcies podem
encapsidar tambm cpias positivas e, ocasional-
mente, uma mistura das duas (Figura 5.7).
3.5.1.4 Vrus da classe VII
A replicao do genoma dos hepadnav-
rus envolve uma etapa de transcrio reversa e
ocorre parte no ncleo e parte no citoplasma. No
ncleo, o genoma de cadeia dupla parcial con-
vertido em um crculo covalentemente fechado
(ccc) por fatores celulares e virais e, subseqen-
temente, transcrito pela RNApolII celular. Alm
dos mRNA para a produo das protenas virais,
a transcrio produz RNAs com a extenso do
genoma (pgRNA). Esses pgRNAs serviro de
molde para a transcrio reversa, que realizada
pela polimerase viral, e ocorre no interior de cap-
sdeos pr-formados no citoplasma. A sntese da
cadeia complementar de DNA inicia em seguida,
mas interrompida por ocasio do egresso dos
vrions. Com isso, as partculas vricas contm
uma molcula de DNA de ta parcialmente du-
pla (Figura 5.8).
Figura 5.7. Ciclo replicativo dos vrus da classe II ( ). O genoma DNA de cadeia simples ,
inicialmente, convertido em DNA de cadeia dupla por polimerases e fatores auxiliares da clula hospedeira (1).
Apenas uma das cadeias (DNA de sentido negativo) transcrita pela RNA polimerase II celular, originando os
mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde so traduzidos (3). A replicao do genoma
depende da interao entre fatores celulares e virais e resulta na sntese de cpias de DNA de cadeia simples de
sentido positivo (4) e negativo (5). As molculas de DNArecm-replicadas so ento includas nos vrions, atravs de
interaes especficas comas protenas docapsdeo(6).
Parvoviridae e Circoviridae
DNA fita dupla DNA ss (-)
1
Genoma DNA
(cadeia simples)
Transcrio
Morfognese
mRNA
Protenas estruturais
e
No-estruturais (NS)
DNA ss (+)
Morfognese
Vrions Egresso
2
3 Traduo
4
5
5
126 Captulo 5
3.5.2 Replicao dos vrus RNA
A replicao dos vrus RNA enfrenta algu-
mas diculdades adicionais, impostas por pecu-
liaridades dos processos biossintticos das clu-
las hospedeiras. A replicao do genoma desses
vrus envolve a sntese de molculas de RNA de
sentido antigenmico, que servem de molde para
a subseqente sntese de RNAs de sentido gen-
mico. Essas reaes so realizadas por polimera-
ses especcas, que produzem molculas de RNA
a partir de moldes RNA (polimerases de RNA de-
pendentes de RNA). No entanto, as clulas euca-
riotas no possuem tais enzimas e, por isso, no
so capazes de replicar o genoma desses vrus.
Assim, para replicar o genoma, os vrus RNA de-
vem codicar as suas prprias enzimas replicati-
vas. As polimerases de RNA virais, cuja funo
produzir cpias do genoma, so denominadas
genericamente transcriptases ou replicases.
Os vrus RNA de polaridade positiva solu-
cionaram esse problema pela prpria natureza
do genoma: a enzima replicase codicada pelo
genoma e produzida pela traduo direta do
genoma logo no incio da infeco. Uma vez pro-
duzida, essa enzima se encarrega de replicar o
genoma, produzindo cpias de RNA de sentido
antigenmico, que servem de molde para a snte-
se de mais cpias de sentido genmico. Por isso,
o genoma desses vrus dito infeccioso, ou seja, a
sua introduo por mtodos articiais em clulas
permissivas (transfeco) resulta na ocorrncia
de todas as etapas do ciclo replicativo e na pro-
duo de prognie viral.
Por outro lado, o genoma dos vrus RNA de
polaridade negativa no pode ser traduzido, pois
possui o sentido complementar ao mRNA. Esses
vrus solucionaram esse problema de forma di-
ferente: trazem associado ao material gentico
algumas molculas da polimerase de RNA (repli-
case). Uma vez no interior da clula, a replicase
sintetiza cpias de RNA de sentido antigenmico
que servem de mRNA para a sntese das prote-
nas virais. Esses RNAs tambm servem de molde
para a sntese de mais cpias de RNA de sentido
genmico. O genoma dos vrus RNA de pola-
ridade negativa no infeccioso, ou seja, a sua
introduo (desprovido de protenas) em clulas
permissivas no resulta na ocorrncia das etapas
Sntese da
cadeia complementar
Vrions
Egresso 1
Transcrio
parcial
(Parcialmente ds)
Genoma DNA
DNAccc mRNA
e polimerase
Traduo
PgRNA CDNA
DNApds
2
4 5
Transcrio
completa
Transcrio
reversa
3
6
7
8
A cadeia dupla
completada
Figura 5.8. Ciclo replicativo dos vrus da classe VII ( ). O DNA genmico , inicialmente, convertido
em uma molcula circular de cadeia dupla completa ccc (1). Essa molcula transcrita pela RNA pol II celular,
originando inicialmente mRNAs (2), que so processados e exportados para o citoplasma, onde sero traduzidos em
protenas estruturais e no-estruturais (3). RNAs coma extenso integral do genoma (pgRNA) so, ento, produzidos
(4) e exportados para o citoplasma. A polimerase viral recm-produzida realiza a transcrio reversa do pgRNAs,
resultando em cDNA (5), que convertido em DNA de cadeia dupla (6). Capsdeos contendo o DNA de cadeia
parcialmente dupla podem voltar ao ncleo e reiniciar o ciclo (7) ou participar da morfognese das partculas vricas
(8).
Hepadnaviridae
Replicao viral 127
seguintes da replicao. Em resumo, a necessida-
de da polimerase de RNA para replicar o geno-
ma foi suprida, de formas diferentes, tanto pelos
vrus RNA de sentido positivo como pelos vrus
RNA de sentido negativo.
A replicao do genoma dos vrus RNA
ocorre em duas etapas. A primeira etapa envolve
a sntese de um RNA de sentido antigenmico,
tambm denominado replicativo intermedirio
(RI). Nos vrus RNA de polaridade positiva, o
RI possui polaridade negativa; nos vrus RNA
de polaridade negativa, o RI possui polaridade
positiva. A segunda etapa envolve a sntese de
RNA de sentido genmico, utilizando o RI como
molde. Em alguns vrus RNA de sentido positivo
(Classe IVb), o RI tambm serve de molde para a
sntese de mRNAs. Embora essas duas etapas fa-
am parte do processo replicativo, s vezes, rece-
bem denominaes diferentes: a sntese de RNAs
de polaridade positiva denominada transcrio;
a sntese da cpia negativa de RNA denomi-
nada replicao. Essas duas etapas so realizadas
pelas replicases virais, pois as clulas eucariotas
no possuem enzimas e funes para replicar o
RNA. Alm das replicases, esses vrus codicam
outras protenas no-estruturais (NS) com fun-
es diversas e que auxiliam, de algum modo,
na replicao do genoma. Atividades de helicase,
protease, ligao no RNA, ATPase, ribonuclease,
entre outras, j foram identicadas entre as pro-
tenas NS dos vrus RNA.
Como os vrus RNA independem da ma-
quinaria nuclear para a sntese e modicao
de cidos nuclicos, o seu ciclo replicativo pode
ocorrer inteiramente no citoplasma. Os ortomixo-
vrus constituem as excees, pois dependem de
segmentos dos mRNA celulares para a produo
e funcionalidade de seus mRNAs e, por isso, re-
plicam no ncleo da clula hospedeira.
Os retrovrus apresentam um mecanismo de
replicao que difere dos demais vrus RNA. Em-
bora possua polaridade positiva, o RNA genmi-
co no traduzido pelos ribossomos, e sim con-
vertido em uma molcula de DNA de ta dupla
pela enzima transcriptase reversa (RT) presente
nos vrions. Essa molcula de DNA, denominada
provrus, integrada ao genoma da clula hospe-
deira e, posteriormente, transcrita pela RNApo-
lII. A transcrio resulta em mRNAs para a snte-
se de protenas estruturais e da enzima RT, e em
cpias do RNA genmico, que ento includo
nas novas partculas vricas.
As etapas do ciclo replicativo dos diferentes
grupos de vrus RNA esto ilustradas esquema-
ticamente nas Figuras 5.9 a 5.13 (a forma de apre-
sentao das etapas de replicao foi adaptada de
ROIZMAN E PALESE, 1996).
RNA
anti-genmico
(-)
Genoma RNA (+) Replicao
4
Traduo
Morfognese
Poliprotena
Protenas no-estruturais
Morfognese
Vrions
1 , 6
2 Clivagem
7
7
3
Egresso
Figura 5.9. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVa ( ). A ORF nica do genoma
traduzida em toda a sua extenso logo aps o desnudamento, resultando da produo de uma longa poliprotena (1).
medida que vai sendo produzida, essa poliprotena vai sendo clivada por proteases celulares e/ou virais dando
origem s protenas individuais, entre as quais a RNA polimerase viral (2). A RNA polimerase responsvel pela
replicao do genoma, que ocorre via produo de umintermedirio RNAde sentido negativo (3, 4). As novas cpias
de RNA de sentido positivo so, ento, utilizadas em novos ciclos de traduo (6), replicao (3,4) e/ou participam da
morfognese daprognie viral (7).
Picornaviridae e Flaviviridae
128 Captulo 5
3.5.2.1 Vrus da classe IVa
O genoma desses vrus contm uma ORF
nica e longa, anqueada por duas regies no
traduzidas (5UTR; 3UTR). Os genes das prote-
nas estruturais ocupam o tero 5 do genoma; o
restante da ORF contm os genes das protenas
no-estruturais (NS). Essa ORF traduzida em
toda a sua extenso logo aps o desnudamento,
originando uma poliprotena longa, que cliva-
da em protenas individuais medida que vai
sendo produzida (Figura 5.9). As protenas NS
recm-produzidas incluindo a replicase viral
realizam a replicao do genoma, que envolve a
sntese de um RNA de sentido antigenmico (de
polaridade negativa); que serve, ento, de mol-
de para a sntese de cpias de RNA de sentido
genmico. As regies 5UTR e 3UTR do genoma
contm seqncias importantes para a transcri-
o e replicao. O genoma dos vrus do gnero
Flavivirus possui a estrutura cap na extremidade
3; os demais membros da famlia Flaviviridae e os
picornavrus possuem estruturas secundrias (in-
ternal ribosomal entry site, IRES) na regio 5UTR,
que so reconhecidas pelos ribossomos para o
incio da traduo.
3.5.2.2 Vrus da classe IVb
O genoma desses vrus constitudo por
uma molcula de RNA de polaridade positiva,
mas a organizao genmica e a estratgia de
expresso gnica diferem do grupo anterior. Os
genes que codicam as protenas NS ocupam os
dois teros iniciais do genoma; o tero restante
contm os genes das protenas estruturais. No
incio da infeco, o RNA genmico traduzido
parcialmente, resultando na produo de uma
poliprotena que abrange a regio das protenas
NS. A clivagem dessa poliprotena resulta nas
protenas NS, incluindo a replicase viral. Utili-
zando o RNA genmico como molde, a replicase
sintetiza uma cpia de RNA de sentido antigen-
mico (polaridade negativa) com a extenso com-
pleta do genoma. Esse RNA antigenmico serve
de molde para a sntese de vrios mRNAs de
extenses variveis (denominados mRNAs sub-
genmicos), que sero traduzidos nas protenas
estruturais. O RNA antigenmico tambm serve
de molde para a transcrio completa e produo
de RNAs de sentido e extenso genmica. Resu-
mindo, embora o genoma desses vrus possua
polaridade positiva, apenas a regio da ORF, que
corresponde s protenas NS, traduzida pelos
ribossomos. As protenas estruturais so produ-
zidas pela traduo de mRNAs subgenmicos,
que, por sua vez, so produzidos pela transcrio
do RNA antigenmico. Uma caracterstica mar-
cante dessas famlias e que difere do grupo an-
terior a produo de mRNAs subgenmicos
(Figura 5.10).
Genoma RNA (+) Replicao
6
Transcrio Morfognese
mRNA
subgenmicos
Protenas
no-estruturais
Protenas
estruturais
Morfognese
Vrions
4
5 Traduo
7
3
Egresso
RNA
anti-genmico
(-)
Genoma RNA (+)
7
Poliprotena
regio 5
Replicao
6
1
2
Traduo
parcial
Clivagem
Figura 5.10. Ciclo replicativo dos vrus da classe IVb
). ORNAgenmico de sentido positivo traduzido parcialmente, resultando emuma poliprotena (1) que
clivada emprotenas no-estruturais, incluindo a replicase (2). Areplicase recm-produzida replica o genoma emtoda a
sua extenso, produzindo uma molcula de RNA de sentido antigenmico (3). O RNA anti-genmico serve de molde
para a transcrio e produo de vrios RNAm subgenmicos de extenses variveis (4), cuja traduo resulta nas
protenas estruturais (5). Posteriormente tambmsoproduzidas cpias inteiras dogenoma RNAde sentidopositivo(6),
queservirodemolde para ciclos adicionais dereplicao(3) eserooportunamente encapsidadas (7).
(Coronaviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Caliciviridae e
Astroviridae
Replicao viral 129
3.5.2.3 Vrus da classe V

Esses vrus possuem um genoma RNA de
sentido negativo, no-segmentado (paramixov-
rus, rabdovrus e lovrus) ou segmentado (or-
tomixovrus, buniavrus e arenavrus) e trazem a
replicase viral nos vrions. Nos vrus com o ge-
noma no-segmentado, os genes so transcritos
individualmente, originando mRNAs que so
traduzidos nas protenas estruturais e NS (Figura
5.11). Nos vrus com o genoma segmentado, cada
segmento contm um (ou dois) gene(s), que tam-
bm so transcritos individualmente. Nas etapas
iniciais da infeco, a transcrio direcionada
para a sntese de mRNAs para a produo de pro-
tenas virais. Em fases tardias do ciclo, o modo de
transcrio deve ser alterado, de modo a produ-
zir os RNAs intermedirios de replicao (RI) de
sentido antigenmico. Nos vrus com o genoma
no-segmentado, esses RI possuem a extenso in-
teira do genoma e servem de molde para a sntese
de molculas de RNA de sentido genmico. Dois
tipos de RNAs de sentido positivo so, ento,
produzidos: os mRNA com a extenso dos genes
individuais (para a traduo); e o RNA RI, com a
extenso inteira do genoma (para a replicao).
Nos vrus com o genoma segmentado, a transcri-
o dos segmentos genmicos de RNA tambm
resulta em dois tipos de RNAs, com funes dife-
rentes (mRNAs para a traduo; RI RNAs para a
replicao). Os mRNAs e RIs, derivados de cada
segmento, no entanto, possuem tamanhos apro-
ximados. Os mRNAs possuem alguns nucleot-
deos a mais e a estrutura cap na extremidade 5
e uma cauda poliA na extremidade 3. Os RNAs
RI, sem cap ou poliA so produzidos tardiamente
na infeco e servem exclusivamente de molde
para a replicao e produo de segmentos de
RNA genmicos. Todas as etapas de transcrio
e replicao desses vrus ocorrem com o genoma
intimamente associado com protenas, principal-
mente a nucleoprotena (NP), formando o com-
plexo ribonucleoprotena (RNP).
Os arenavrus e os vrus do gnero Phlebovi-
rus (Bunyaviridae) apresentam uma estratgia pe-
culiar de expresso de alguns de seus genes. Os
RNA genmicos possuem polaridade negativa
e a maioria dos genes expressa pela estratgia
descrita acima. No entanto, um dos segmentos
genmicos contm seqncias codicantes de
protena tanto no sentido do genoma (sentido ne-
gativo) como no sentido antigenmico. Essa es-
RNA
antigenmico
(-)
Genoma RNA (-)
Replicao
4
Transcrio
Morfognese
No-estruturais + NP
Morfognese
Vrions
1, 5
2 Traduo
6
6
3
Egresso
mRNA
Figura 5.11. Cicloreplicativodos vrus da classe V(
). Os genes individuais so transcritos pela RNA polimerase presente nos vrions, produzindo
mRNAs correspondentes a cada gene (1). A traduo desses mRNA resulta em protenas estruturais e NS (2). As
protenas NS, incluindo a replicase, participamda replicao do genoma. Areplicao ocorre via sntese de RNAs de
sentido antigenmico (3), que servem de molde para a sntese de RNAs de sentido genmico (4). As molculas de
RNA de sentido genmico servem de molde para novos ciclos de transcrio (5), replicao (3, 4) e sero
posteriormente encapsidadas (6).
Paramyxoviridae, Rhabdoviridae, Filoviridade, Orthomyxoviridae
e Bunyaviridade
130 Captulo 5
tratgia denominada ambissense e nica dessas
famlias.
3.5.2.4 Vrus da classe III

O genoma desses vrus composto por 10
a 12 segmentos (reovrus) ou dois segmentos
(birnavrus de animais) de RNA de ta dupla.
Nos reovrus, a maioria dos segmentos codica
apenas uma protena; poucos segmentos contm
dois genes. Logo aps a penetrao e ainda em
capsdeos semi-ntegros, a polimerase viral pre-
sente nos vrions realiza a transcrio primria de
cada segmento. Os mRNA resultantes possuem
duas funes: so traduzidos em protenas e, j
associados com as protenas estruturais recm-
produzidas, servem de molde para a replicao
(sntese de RNAs de sentido negativo). Dentro de
capsdeos pr-formados, os segmentos de RNA
de polaridade negativa recm-produzidos so
transcritos (transcrio secundria). Os transcritos
resultantes so utilizados predominantemente
para a produo de protenas nas fases tardias do
ciclo. Os eventos que ocorrem nas fases nais do
ciclo no esto esclarecidos, mas parecem envol-
ver a associao das protenas externas do caps-
deo com os complexos pr-formados entre o ge-
noma e outras protenas estruturais. A liberao
dos vrions maduros ocorre de forma ineciente
aps a lise celular. As molculas de RNA gen-
mico possuem funes distintas: as molculas de
RNA de polaridade negativa servem apenas de
molde para a transcrio. A funo aparente das
molculas genmicas de RNA positivo apenas
parear com as cadeias negativas. J as molculas
de RNAs de sentido positivo, produzidas duran-
te a infeco, possuem duas funes: podem ser
traduzidas em protenas (mRNAs) e/ou servem
de molde para a sntese das cadeias negativas (Fi-
gura 5.12).
3.5.2.5 Vrus da classe VI

A replicao do genoma dos retrovrus in-
clui etapas que ocorrem no citoplasma (logo aps
a penetrao do nucleocapsdeo na clula hospe-
deira) e no ncleo (aps a integrao do material
gentico viral no genoma da clula). O genoma
desses vrus composto por duas molculas idn-
ticas de RNA de sentido positivo que, no entanto,
no so traduzidas pelos ribossomos. No inico
da infeco, a molcula de RNA genmico con-
Replicao
Transcrio
primria e
secundria
Morfognese
mRNA
Protena no-estruturais
Morfognese
Vrions
1,6
2 Traduo
Egresso
Morfognese
inicial
3
3
6
6
4
Pr-capsdeos
+ mRNA
Genoma RNA
(cadeia dupla)
Figura 5.12. Ciclo replicativo dos vrus da classe III ( ). A replicase viral trazida nos vrions
realiza a transcrio primria, produzindo mRNAs (1), que so traduzidos em protenas estruturais e no-estruturais
(2). Esses mRNAs formam complexos com as protenas estruturais recm-produzidas (3) e, no interior desses
complexos, servemde molde para a sntese de RNAs de sentido negativo, coma participao das protenas NS (4). As
molculas de RNA de cadeia dupla, resultantes da replicao (4), servem de molde para a transcrio secundria (5) e
para etapas adicionais de replicao (4). Essas molculas, j conjugadas com algumas protenas estruturais,
eventualmenteparticipamdamorfognese pelaassociaocomas demais protenas docapsdeo(6).
Reoviridae e Birnaviridae
Replicao viral 131
vertida em uma molcula de cDNA pela enzima
viral transcriptase reversa (RT, DNA polimerase
dependente de RNA), que, em seguida, con-
vertida em uma molcula de DNA de ta dupla.
Essa molcula, denominada provrus, ingressa no
ncleo e integrada no genoma da clula hospe-
deira, pela atividade integrase da polimerase vi-
ral. A integrao do provrus no genoma celular
assegura a perpetuao das informaes genti-
cas do vrus no hospedeiro, e absolutamente ne-
cessria para a continuao do ciclo replicativo.
A prxima etapa a transcrio dos genes virais
pela RNApolII e fatores de transcrio celulares.
A transcrio parcial do genoma produz mRNAs
que sero processados por splicing e sero tradu-
zidos nas glicoprotenas do envelope. A transcri-
o completa do genoma origina mRNAs com
duas nalidades: servirem de molde para a tra-
duo em protenas (RT, protena da matriz, do
capsdeo) ou constiturem o RNA genmico para
a morfognese da prognie viral. Considerando-
se que a transcrio do provrus que produz o
RNA genmico realizada pela maquinaria celu-
lar de transcrio, sem a participao de nenhum
fator viral, o genoma dos retrovrus o nico ge-
noma viral a ser sintetizado exclusivamente por
enzimas e fatores celulares (Figura 5.13).
3.6 Morfognese, maturao e egresso
Os vrus das diversas famlias apresentam
uma ampla diversidade estrutural, que vai des-
de partculas formadas pelo genoma e uma ca-
mada simples de protenas at vrions altamen-
te complexos. No entanto, independente da sua
complexidade estrutural, uma srie de interaes
entre os seus constituintes so necessrias para a
montagem das partculas vricas e a concluso do
processo de replicao. Essas interaes incluem:
a) formao das unidades estruturais do caps-
deo pela interao entre as respectivas protenas;
b) incorporao do genoma ao capsdeo pr-for-
mado ou em formao; e c) liberao da prognie
viral da clula infectada. No caso dos vrus enve-
lopados, a formao no nucleocapsdeo seguida
pela aquisio do envelope a partir de membra-
nas celulares, nas quais as protenas virais foram
previamente inseridas.
ssDNA
Transcrio
reversa
Morfognese
dsDNA
(provrus)
Provrus DNA
Integrado
Morfognese
Vrions
1
Egresso
Integrao
Genoma RNA (+)
Sntese da
cpia complementar
2
3
Transcrio
Splicing +Traduo
Traduo
4
5
7
6
8
RNAs de extenso
genmica
Glicoprotenas
do envelope
Pol+In
Protenas do
capsdeo
8
8
Figura 5.13. Ciclo replicativo dos vrus da classe V ( ). Logo aps o desnudamento, a enzima viral
transcriptase reversa (RT) sintetiza uma molcula de DNA complementar ao RNA genmico (1) que, em seguida,
convertida em DNA de cadeia dupla (dsDNA), tambm pela ao da RT (2). Esta molcula de dsDNA, denominada
provrus, penetra no ncleo e integrada no genoma da clula hospedeira pela atividade viral integrase (3). Os genes
presentes noprovrus so, ento, transcritos pela RNApolII celular, originandomRNAs de extensosubgenmica (4)
para a traduo nas protenas do envelope (5). Atranscrio do provrus emtoda a sua extenso resulta emmRNAs de
extenso genmica (6), que podemser traduzidos nas outras protenas estruturais e polimerase viral (7) ouparticipam
damorfognese das partculas virais (8).
Retroviridae
132 Captulo 5
Diferentemente de clulas eucariotas e pro-
cariotas, que se multiplicam por sso binria,
os vrions so formados pela associao de com-
ponentes pr-formados (genoma + protenas).
O processo de montagem das partculas vricas,
que ocorre ao nal do ciclo replicativo, deno-
minado genericamente de morfognese ou reunio.
A aquisio da capacidade infectiva pelas part-
culas vricas recm-formadas que ocorre prvia
ou concomitantemente com o seu egresso da c-
lula denomina-se maturao. Como, para muitos
vrus, esses processos ocorrem simultaneamente,
sero aqui abordados conjuntamente.
As diferentes etapas da formao da part-
cula vrica no ocorrem ao acaso. As associaes
entre os componentes so direcionadas e favore-
cidas por interaes qumicas especcas entre as
unidades proticas estruturais e entre estas e o
cido nuclico. Dependendo da estrutura e com-
plexidade da partcula vrica, da estratgia e local
de replicao, os vrus desenvolvem diferentes
estratgias de morfognese e maturao/egresso
de sua prognie.
3.6.1 Maturao intracelular
(citoplasmtica ou nuclear)
Alguns vrus (principalmente os desprovi-
dos de envelope) completam o processo de mor-
fognese das partculas (e a conseqente matura-
o) integralmente no citoplasma (vrus RNA) ou
no ncleo (vrus DNA). Dessa forma, a prognie
viral infecciosa pode ser encontrada nesses com-
partimentos, mesmo com a clula ainda ntegra,
ou seja, a maturao ocorre previamente ao egres-
so. Esses vrus geralmente so liberados quando
ocorre a destruio das clulas infectadas (Figu-
ra 5.14). Os vrus no-envelopados das famlias
Polyomaviridae, Papillomaviridae, Adenoviridae e Pi-
cornaviridae e tambm os membros da Poxviridae e
Asfarviridae (com envelope), enquadram-se nessa
categoria.
3.6.2 Maturao por brotamento em
membranas celulares
No ciclo replicativo dos vrus envelopados,
as glicoprotenas do envelope recm-sintetizadas
so inseridas em membranas celulares, isto , na
membrana do retculo endoplasmtico rugoso
(RER), no aparelho de Golgi ou na membrana
plasmtica. Os nucleocapsdeos recm-formados
interagem com a protena da matriz e/ou com
extremidades citoplasmticas dessas glicopro-
tenas e inserem-se (ou projetam-se) atravs da
membrana, incorporando o envoltrio. Esse en-
voltrio (envelope) composto pela membrana
lipdica dupla, contendo as glicoprotenas virais
1
3
2
Membrana plasmtica
Citoplasma
Meio extracelular
Figura 5.14. Maturaointracelular e egressodos vrus semenvelope. Os componentes docapsdeointeragementre si
e comogenoma (1), resultandonaformaodepartculas vricas infecciosas (2), quesoliberadas por lisecelular (3).
Replicao viral 133
inseridas. O processo de aquisio do envelope
denominado brotamento, pois o nucleocapsdeo
literalmente brota para o interior do RER (Figura
5.15), do Golgi ou para o exterior da clula (Fi-
gura 5.16). Os vrus que realizam brotamento em
membranas celulares, como forma de adquirir o
envelope e completar a sua morfognese/matu-
rao, podem ser liberados por exocitose sem in-
duzir necessariamente lise da clula.
Os vrus RNA de sentido negativo, alguns
vrus RNA de sentido positivo (togavrus) e os re-
trovrus completam a morfognese e a maturao
1
2
3
Membrana plasmtica
Citoplasma
Meio extracelular
Figura 5.15. Maturao intracitoplasmtica de vrus envelopados por brotamento em membranas celulares internas.
Interao dos nucleocapsdeos comas caudas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento e transporte no interior
devesculas (2), liberaopor exocitose (3).
1
2
3
4
Membrana plasmtica
Meio extracelular
Citoplasma
Figura 5.16. Brotamento e maturao de vrus envelopados na membrana plasmtica. Interao do nucleocapsdeo
com a protena matriz e/ou caudas citoplasmticas das glicoprotenas do envelope (1), brotamento atravs da
membrana plasmticae aquisiodoenvelope (2, 3), egressodepartculas infecciosas (4).
134 Captulo 5
somente no momento da liberao dos vrions na
superfcie da clula. Nesses casos, no possvel
detectar prognie viral infecciosa no interior das
clulas. Os vrions de outras famlias (Flaviviri-
dae, Coronaviridae, Arteriviridae, Bunyaviridae, Po-
xviridae) realizam o brotamento no RER e/ou no
aparelho de Golgi. Vrions infecciosos podem ser
encontrados em vesculas citoplasmticas deriva-
das desses compartimentos, nas quais so trans-
portados at a membrana plasmtica, onde so
liberados por exocitose.
Os herpesvrus apresentam uma estratgia
particular de morfognese, maturao e egres-
so. A replicao do genoma e a montagem dos
nucleocapsdeos ocorrem no ncleo, para onde
as protenas estruturais so importadas aps a
sua sntese no citoplasma. Os nucleocapsdeos
podem adquirir o envelope pelo brotamento na
membrana nuclear interna vrions completos
envelopados podem ser observados no espao
entre as membranas nucleares . Esses nucleo-
capsdeos podem perder o envelope ao sair desse
compartimento e readquir o envelope pelo bro-
tamento na membrana do RER. Nesses casos,
so transportados em vesculas e liberados ao
exterior por exocitose. Outros nucleocapsdeos
podem ser transportados atravs do citoplasma
at a membrana plasmtica, onde adquirem o en-
velope por brotamento. Ao contrrio de alguns
vrus envelopados, que no so lticos, a replica-
o dos herpesvrus inevitavelmente leva lise e
destruio celular.
Os efeitos da replicao viral na clula hos-
pedeira so muito variveis e vo desde infec-
es que no provocam alteraes detectveis at
a morte e lise celular. As conseqncias da repli-
cao viral em nvel celular possuem importncia
na patogenia das doenas vricas. Esses temas se-
ro abordados no Captulo 8.
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REPLICAO DOS VRUS DNA
Gustavo Delhon
1

1
Traduzido por Fernanda S.F.Vogel.
6
1 Introduo
2 Poliomavrus
2.1 O ciclo replicativo
2.2 O genoma dos PoVs
2.3 Expresso dos genes iniciais
2.4 Replicao do DNA
2.5 Expresso dos genes tardios
2.6 Morfognese e egresso
2.7 Concluses
3 Papilomavrus

3.2 O genoma dos PpVs
3.4 Replicao do DNA e interferncia com o ciclo celular
3.6 Concluses
4 Adenovrus
4.2 O genoma dos AdVs
4.3.Expresso dos genes iniciais
4.4 Replicao do DNA viral
4.6 Concluses
5 Herpesvrus
5.2 O genoma dos HVs
5.3 Os genes virais
5.4 Expresso gnica
5.6 Expresso gnica durante a infeco latente
139
140
140
142
142
144
145
146
146
147
147
147
148
148
150
151
151
151
151
153
154
154
156
156
156
156
157
158
159
160
5.7 Concluses
6 Poxvrus
6.2 O genoma dos PoxVs
6.3 Expresso gnica
6.4 Replicao do DNA
6.5 Concluses
160

160
160
160
161
162
163
163
1 Introduo
A replicao dos vrus DNA realizada pela
ao orquestrada da maquinaria da clula hos-
pedeira, associada com fatores codicados pelo
vrus. A contribuio relativa dos fatores virais
na replicao desses vrus, no entanto, varia mui-
to entre as diferentes famlias. Em geral, os v-
rus DNA pequenos (parvovrus e poliomavrus)
utilizam extensivamente a maquinaria celular,
ou seja, os seus genomas codicam poucos pro-
dutos associados com funes replicativas. Por
outro lado, os vrus DNA grandes (herpesvrus
e poxvrus) codicam muitas enzimas e fatores
envolvidos na replicao. Esses ltimos seriam,
teoricamente, menos dependentes da maquina-
ria celular para a replicao de seus genomas e a
conseqente produo da prognie viral. Dessa
forma, qual seria a estratgia mais eciente para
a manuteno desses vrus na natureza? Na ver-
dade, ambas, pois tanto os vrus DNA pequenos
como os grandes tm conseguido se perpetuar,
sugerindo que uma perfeita adaptao a um ni-
cho tecidual mais importante do que a comple-
xidade do genoma e a estratgia de replicao.
Os mecanismos de replicao do genoma
tambm variam entre os vrus DNA, de acordo
com a estrutura e topologia do genoma e tambm
com a participao relativa de fatores celulares
e/ou virais (Figura 6.1). O genoma circular de
cadeia dupla dos poliomavrus (e provavelmente
dos papilomavrus), por exemplo, replicado de
forma bidirecional e semidescontnua, a partir de
uma origem nica. O complexo replicativo utili-
za um primer de RNA para iniciar a sntese, e o
mecanismo de replicao semelhante ao utiliza-
do pelas clulas eucariotas para replicar o DNA
cromossmico. O genoma linear de ta dupla dos
adenovrus possui uma origem em cada extremi-
dade. A replicao ocorre em duas etapas, e cada
cadeia parental replicada em uma dessas etapas.
O complexo replicativo utiliza uma oxidrila (OH)
ligada a uma protena viral (pTP), que est ligada
em cada extremidade do genoma como iniciador
da sntese de DNA (protein priming). A replicao
dos genomas dos herpesvrus e poxvrus mais
complexa. O genoma dos herpesvrus possui trs
origens e parece ser replicado por um mecanis-
mo de crculo rolante, no qual multmeros line-
ares so produzidos e, posteriormente, clivados
Adenovrus Parvovrus Herpesvrus Poxvrus
Poliomavrus
Papilomavrus
Ou
A B C D E
Figura 6.1. Ilustraoda replicaodogenoma dos principais vrus DNA. Os estgios intermedirios forampropostos
a partir deestudos fsico-qumicos e, microscopia eletrnica, realizados a diferentes intervalos aps a infeco.
Fonte: adaptada de Dulbecco e Ginsberg (1980).
140 Captulo 6
em unidades genmicas. A replicao do genoma
DNA linear de ta dupla dos poxvrus parece se
iniciar com a clivagem de uma das cadeias prxi-
ma a ala terminal do genoma, seguida de elon-
gao a partir da extremidade 3, gerada pela cli-
vagem. A replicao do genoma DNA linear de
ta simples dos parvovrus no abordada neste
captulo inicia-se com a elongao da extremi-
dade 3 livre, que se encontra exionada, e pros-
segue continuamente. Uma ilustrao esquem-
tica da replicao do genoma de diferentes vrus
DNA est apresentada na Figura 6.1.
O objetivo fundamental da replicao viral
produzir prognie viral vivel e abundante, que
assegure a propagao do vrus e a conseqente
transmisso a novos hospedeiros. A produo de
prognie depende da sntese de milhares de c-
pias do genoma viral e das protenas componen-
tes do vrion, associado com a montagem correta
e liberao eciente das partculas vricas. Esse
processo envolve uma srie de etapas reguladas
temporal e espacialmente, que incluem a expres-
so de genes virais e a induo e/ou represso
de alguns genes do hospedeiro. Muitas vezes, a
replicao viral est associada com alterao da
siologia celular, o que pode determinar dife-
rentes graus de patologia e at a morte da clula
hospedeira.
Embora a grande maioria dos vrus DNA
replique no ncleo, alguns deles desenvolveram
estratgias especiais que permitem a sua replica-
o no citoplasma da clula hospedeira. No de-
correr deste captulo, sero abordados os aspec-
tos replicativos das principais famlias de vrus
DNA e a estratgia de replicao dos prottipos
de cada famlia, enfatizando-se os aspectos mole-
culares e biolgicos da expresso gnica, a inter-
ferncia com funes celulares, para assegurar a
replicao (entre elas a induo do ciclo celular),
e a replicao do genoma propriamente dita. A
replicao dos circovrus e parvovrus ser abor-
dada nos Captulos 13 e 14, respectivamente. A
replicao dos hepadnavrus ser tratada, resu-
midamente, no captulo destinado s famlias de
interesse limitado em medicina veterinria.
Inicialmente, ser descrita a replicao dos
vrus da famlia Polyomaviridae, vrus relativa-
mente simples, cuja estratgia de replicao tem
sido amplamente estudada. De fato, a replicao
dos vrus DNA grandes pode ser considerada
como uma evoluo progressiva de complexida-
de quando comparada com os esquemas relativa-
mente simples de replicao dos poliomavrus. A
seguir, sero apresentados os principais aspectos
da expresso gnica, replicao do genoma e in-
terao com funes celulares dos papilomav-
rus, adenovrus, herpesvrus e poxvrus, respec-
tivamente.
2 Poliomavrus
A famlia Polyomaviridae contm um nico
gnero, Polyomavirus, que inclui o prottipo da
famlia, o vrus smio 40 (SV-40), e os vrus JC e
BK, que tm sido, esporadicamente, associados
com tumores em humanos. Os poliomavrus
(PoVs) so vrus DNA pequenos, sem envelope,
de simetria icosadrica, que infectam um amplo
espectro de hospedeiros desde pssaros at hu-
manos . As infeces pelos PoVs so geralmente
subclnicas. No entanto, a infeco de clulas que
no suportam uma replicao produtiva freqen-
temente resulta em transformao neoplsica.
Por isso, os PoVs so tambm conhecidos como
os pequenos vrus DNA tumorais.
Apesar de sua pequena importncia clnica,
os PoVs foram alvo de intensivos estudos biol-
gicos e moleculares, principalmente devido s
suas propriedades tumorignicas. As pesquisas
com os PoVs elucidaram importantes aspectos
da biologia celular. Dentre as maiores descober-
tas resultantes do estudo dos poliomavrus des-
tacam-se: a) estrutura do DNA superenrolado,
b) estrutura e funo da origem da replicao do
DNA, c) estrutura e funo dos promotores, d) des-
coberta dos enhancers e o seu papel na expresso
gnica, e) descoberta do mecanismo de splicing
alternativo dos transcritos (RNA mensageiros,
mRNA) e f) replicao do DNA cromossmico.
O mecanismo de penetrao dos PoVs nas
clulas hospedeiras ainda no est completamen-
te esclarecido. Embora estudos recentes tenham
demonstrado o envolvimento de molculas do
Replicao dos vrus DNA 141
complexo maior de histocompatibilidade do tipo
I (MHC-I) como receptores para o SV-40, ainda
no h evidncias conclusivas nesse sentido. Aps
a ligao aos receptores, os vrions so internali-
zados por endocitose caveolar e transportados ao
longo dos microtbulos at o retculo endoplas-
mtico. O mecanismo de transporte para o cito-
plasma e da para o ncleo no est esclarecido,
porm, sabe-se que o desnudamento do genoma
ocorre no interior do ncleo. Aps a sua liberao
no nucleoplasma, o genoma transcrito pela RNA
polimerase II celular e, subseqentemente, repli-
cado. Os mRNA virais produzidos so processa-
dos por splicing e exportados para o citoplasma,
onde so traduzidos. As protenas virais recm-
produzidas so transportadas de volta ao ncleo,
onde participam da replicao do genoma e, pos-
teriormente, da montagem das partculas vricas.
Durante esse processo, os mRNA e as protenas
virais necessitam interagir com componentes da
maquinaria celular responsvel pela exportao
e importao nuclear de macromolculas. A mor-
fognese das partculas virais ocorre no ncleo.
As partculas recm-formadas so transportadas
Citoplasma
3
4
6
7
8
9
5
4
3
1
1
2
2
x
x
Ncleo
Transformao
celular
5a
Clula permissiva Clula no-permissiva
A B
Figura 6.2. Cicloreplicativodos poliomavrus emclulas permissivas (A) e no-permissivas (B). A) Aps a penetrao
do vrion (1), o genoma desnudo no interior do ncleo (2), onde os genes iniciais so transcritos pela maquinaria
celular de transcrio (3). Os mRNAs so traduzidos nas protenas iniciais, ou seja, os antgenos T(4). Os antgenos T
ingressam no ncleo e interagem com o DNA viral e com fatores da clula hospedeira, resultando na replicao do
genoma (5). Aps a replicao, os genes tardios so transcritos (6) e a traduo dos mRNAs origina as protenas
estruturais (7) que ingressam no ncleo e interagem com o genoma para formar as novas partculas vricas (8). Os
vrions se acumulam no ncleo, so exportados em vesculas para o citoplasma e liberados por lise celular ou por
exocitose (9). Emclulas no-permissivas (B), as etapas 1 a 4 ocorremnormalmente. No entanto, o antgeno Tfalha em
interagir com os fatores celulares, no ocorrendo a replicao do DNA viral, nem a transcrio e expresso dos genes
tardios. O DNA viral persiste no ncleo da clula (5a) e os genes dos antgenos T continuam sendo expressos (3, 4),
podendo levar imortalizao e transformao celular. No h replicao do genoma e nem produo de prognie
viral.
Fonte: adaptado de Cole e Conzen (2001).
142 Captulo 6
at a superfcie celular, no interior de vesculas, e
liberadas por exocitose ou por lise celular, depen-
dendo do tipo de clula.
A infeco de clulas permissivas resulta na
ocorrncia de todas essas etapas e na conseqen-
te produo de prognie viral infecciosa. Por ou-
tro lado, a infeco de clulas semipermissivas
(geralmente de espcies heterlogas) resulta em
replicao abortiva, na qual ocorre apenas a ex-
presso dos genes iniciais, sem a replicao do
genoma ou produo das protenas tardias (pro-
tenas estruturais). A persistncia do genoma
viral nessas clulas, associada com a expresso
contnua dos antgenos T, pode levar imortali-
zao e transformao celular. As etapas do ciclo
replicativo dos PoVs em clulas permissivas e
no-permissivas esto representadas esquemati-
camente na Figura 6.2.
2.2 O genoma dos PoVs
O genoma dos PoVs constitudo por uma
molcula de DNA de ta dupla circular, com
aproximadamente 5.000 pares de bases (bp), que,
na maioria dos PoVs, est associado com prote-
nas. O genoma desses vrus encontra-se associa-
do com histonas celulares, formando estruturas
semelhantes aos nucleossomas e assumindo uma
congurao helicoidal semelhante cromatina
celular. Por essas razes, os seus genomas so ge-
ralmente denominados minicromossomos virais. A
replicao do genoma do SV-40 realizada basi-
camente por fatores e enzimas da clula hospe-
deira, com a participao de apenas uma protena
viral, o antgeno T. Por isso, a replicao do DNA
do SV-40 tem sido utilizada como modelo para se
estudar a replicao bidirecional semidescont-
nua do DNA cromossmico celular.
A organizao do genoma do SV-40 est re-
presentada na Figura 6.3. Cerca de 90% da exten-
so do genoma codicante, e os 10% restantes
representam regies no-traduzidas que possuem
funes regulatrias. O genoma do SV-40 codi-
ca seis protenas, sendo trs delas componentes
da estrutura do capsdeo (VP1, VP2 e VP3) e trs
protenas no-estruturais, denominadas antgeno
T pequeno (sT) e grande (lT), e a protena agno. A
protena agno parece participar na morfognese
dos vrions, pois interage com a VP1. Os PoVs de
roedores codicam uma terceira protena T, o an-
tgeno T mdio (mT), e no codicam a protena
agno.
Em vez de possurem regies codicantes
com seqncias regulatrias individuais, os PoVs
solucionaram o problema do genoma pequeno
realizando splicing alternativo em alguns trans-
critos, resultando, assim, na traduo em prote-
nas diferentes parcialmente homlogas. Alm
disso, o genoma apresenta uma concentrao das
seqn cias regulatrias para a transcrio e re-
plicao do DNA em uma pequena regio, o que
contribui para a compactao gentica (Figura
6.3).
Aps o desnudamento do genoma no in-
terior do ncleo, o minicromossoma do SV-40
transcrito pelos complexos de transcrio da c-
lula hospedeira (RNA pol II e fatores de trans-
crio). O primeiro gene a ser transcrito o do
antgeno T, e a sua transcrio contnua resulta
em um acmulo gradual do mRNA especco
durante as primeiras 10 a 12 horas de infeco.
Como os mRNA do antgeno T so os primeiros
a serem transcritos e detectados, so denomina-
dos transcritos iniciais (E = early). Os transcritos
primrios do gene do antgeno T sofrem splicing
alternativo para originar mRNAs, que sero tra-
duzidos em duas protenas: o antgeno T grande
(lT) e pequeno (sT). Com isso, as protenas lT e sT
possuem parte de sua seqncia de aminocidos
em comum; sendo que o lT possui uma regio
adicional no presente no sT.
A transcrio dos genes iniciais controlada
por uma regio regulatria de 250 pb, localiza-
da imediatamente na direo 5 do stio inicial
de transcrio do gene do antgeno T (Figura
6.3). Essa regio regulatria apresenta pequenas
seqn cias de nucleotdeos, dispostas em la, ou
motivos (motifs) que, juntos, constituem o promo-
tor inicial do SV-40. Esses motivos atuam como
stios de ancoragem e ligao de componentes do
aparato de transcrio celular, incluindo a RNA
pol II e os fatores de transcrio. Logo acima do
promotor (na direo 5), existem duas cpias re-
petidas de 72 pb que atuam como enhancers do
promotor. Essas seqncias de 72 pb so respon-
sveis pela ligao especca de fatores de trans-
crio, ou transativadores, cuja funo se ligar
ao DNA e aumentar a ecincia da transcrio a
partir do complexo basal de transcrio.
Alguns motivos presentes nos promotores
e enhancers virais so encontrados tambm nas
regies regulatrias de certos genes das clulas
hospedeiras. Esse aspecto molecular crucial
para o parasitismo do vrus. Possuindo regies
regulatrias semelhantes s da clula hospedeira,
o vrus pode seqestrar os componentes da ma-
quinaria celular de transcrio para sintetizar os
seus mRNA.
Alm disso, a regio regulatria do SV-40
contm vrias seqncias repetidas que servem
de stios de ligao para o antgeno lT, o que in-
72 72 21 21 22 TATA
III II I
Promoter inicial Enhancer
320 240 160 80 0/5243 5163 bp
Origem da replicao bidirecional
Organizao genmica
do SV-40
PL
Ori
PE
ST
17kT
VP1
VP3
VP2
LT
Core ORI Aux-1 Aux-2
RNA tardios m
RNA iniciais m
Figura 6.3. Estrutura e organizao do genoma do SV-40 (inferior) e organizao das regies regulatrias da
transcrio e replicao (superior). ORI: origem de replicao; PE: promotor dos genes iniciais; PL: promotor dos
genes tardios; lT: mRNAdo gene do antgeno Tgrande; sT: mRNAdo gene do antgeno Tpequeno; VP1, VP2 e VP3:
mRNA das protenas estruturais. >>: stios de ligao do antgeno; I: stio de regulao negativa da transcrio dos
mRNAiniciais; II: stios de ligao e separao do DNApara o incio da replicao; III: stios de regulao positiva da
transcriodos genes tardios.
144 Captulo 6
dica que esta protena regula a sua prpria ex-
presso. Quando a quantidade de antgeno lT, na
clula infectada, atinge nveis altos, a ocupao
desses stios pelo prprio antgeno lT regula ne-
gativamente a transcrio do seu gene.
A prxima etapa do ciclo replicativo a re-
plicao do genoma viral. Como o genoma dos
PoVs no codica os produtos necessrios sua
prpria replicao, esses vrus dependem inte-
gralmente de enzimas e fatores celulares para re-
plicar o seu DNA. No entanto, apenas um peque-
no nmero de clulas no organismo encontra-se
na fase S do ciclo celular, fase em que a clula ex-
pressa os fatores necessrios para a replicao do
DNA nuclear. A maioria das clulas do organis-
mo j so diferenciadas ou so clulas que neces-
sitam estmulos externos (fatores de crescimen-
to, hormnios ou outros estmulos mitognicos)
para iniciar o ciclo celular. Os PoVs, assim como
outros vrus DNA, solucionaram esse problema
ao desenvolverem mecanismos para estimular as
clulas a entrarem em fase S e, assim, produzi-
rem os fatores necessrios replicao do seu ge-
noma. Dessa maneira, o SV-40 capaz de infectar
de forma persistente clulas renais diferenciadas
e que no esto em diviso de seu hospedeiro
natural.
A replicao do DNA cromossmico das c-
lulas ocorre durante a fase S do ciclo celular, mas
a sntese e o acmulo dos fatores necessrios
replicao do DNA iniciam na fase anterior (G1).
A transio entre as fases G1 e S controlada par-
cialmente pela protena do retinoblastoma (pRb)
e pelas protenas relacionadas p107 e p130. Em
clulas que no esto em diviso, as protenas da
famlia Rb impedem o incio da fase S pelo se-
qestro de fatores de transcrio que ativam os
genes das enzimas relacionadas com a replicao
do DNA, incluindo a DNA polimerase . Aps o
estmulo mitognico, a ciclina D liga-se nas cdk
4 e cdk 6, ativando-as, o que leva hiperfosfori-
lao da protenas Rb e resulta na liberao dos
fatores de transcrio (E2F) e incio da fase S.
Outros fatores tambm esto envolvidos no
controle da transio entre as fases G1 e S. O fator
de transcrio p53 pode prevenir a sntese no-
programada de DNA e bloquear o incio da fase
S quando so detectadas leses no DNA celular.
Dependendo do estgio siolgico da clula, a
p53 pode retardar o progresso do ciclo celular
ou induzir apoptose. Pelo seu papel na transio
G-S1, tanto a pRb como a p53 podem ser consi-
deradas guardis que evitam a diviso celular
extempornea e a transformao maligna das
clulas. Por isso, so conhecidas como protenas
antioncognicas.
Apesar desses mecanismos de controle do
ciclo celular, os PoVs conseguem induzir o incio
da fase S em clulas quiescentes porque o ant-
geno lT dos PoVs exerce um importante papel,
alterando o controle do ciclo celular por intera-
gir diretamente com a protena Rb e, em alguns
PoVs, tambm com a p53. Um pequeno domnio
prximo a regio N-terminal do antgeno lT se
liga especicamente s protenas da famlia Rb,
enquanto seqncias prximas regio C-termi-
nal so requeridas para a associao com a p53
(Figura 6.4). As conseqncias dessas interaes
so a inibio da funo da pRb e p53 e a conse-
qente expresso dos produtos necessrios re-
plicao do DNA viral e tambm celular.
Alm do efeito da ligao nas pRbs, o an-
tgeno lT capaz de estimular diretamente os
promotores dos genes envolvidos no controle do
ciclo celular, incluindo os genes que codicam as
ciclinas. Dessa forma, o antgeno lT utiliza dois
mecanismos para assegurar que a clula infecta-
da entre em fase S e, assim, propicie um ambiente
favorvel replicao viral.
A funo exata do antgeno T pequeno (sT)
durante a infeco produtiva ainda no est com-
pletamente esclarecida, porm sabe-se que esta
protena capaz de interagir com a fosfatase 2,
uma enzima reguladora do ciclo celular. Assim, o
sT poderia colaborar com o lT na induo da fase
S em clulas infectadas.
2.4 Replicao do DNA
A replicao do DNA circular dos PoVs en-
volve o relaxamento e a separao das cadeias do
DNA, a sntese da cadeias lhas de DNA e a reso-
luo e a separao das molculas replicadas. O
multifuncional antgeno lT exerce um papel fun-
damental no incio da replicao do DNA viral
ao se ligar em seqncias regulatrias, localiza-
das nas proximidades do promotor/enhancer do
genoma do SV-40. Essa regio, conhecida por ori-
gem da replicao (ori), consiste de uma seqn-
cia central de 64 nucleotdeos, anqueada por
seqncias auxiliares (Figura 6.3). Como outras
protenas que se ligam ao DNA, o antgeno lT oli-
gomeriza ao interagir com os stios especcos na
ori. Hexmeros do lT formam um anel duplo ao
redor da ori e promovem a separao das cadeias
do DNA viral nesse local. Esse processo depen-
dente de energia, que fornecida pela hidrlise
de ATP catalisada por uma atividade ATPase do
prprio antgeno T (Figura 6.4).
As regies de ta simples do DNA associam-
se, ento, com a protena replicativa A (RPA), que
uma protena celular que se liga e mantm as
regies de ta simples separadas. Isso permite a
separao bidirecional das cadeias mediada pelo
antgeno lT, expondo regies de cadeia simples
para a processividade da replicao. O recruta-
mento da DNA polimerase (primase) e da topoi-
somerase I resulta na formao do complexo de
iniciao. A etapa de elongao envolve a sntese
bidirecional do DNA, que precedida pela ati-
vidade helicase do antgeno lT, que se move
frente do complexo replicativo (Figura 6.1A). Os
fatores do hospedeiro (PCNA e a DNA polime-
rase ) participam da sntese das cadeias leading
(contnua) e lagging (descontnua). A exonuclease e
ligase I da clula hospedeira so necessrias para
a remoo dos primers e ligao dos fragmentos de
Okazaki, produzidos pela replicao descontnua
de uma das cadeias. Como as cadeias parental e
recm-replicada de DNA, so circulares e perma-
necem entrelaadas. A prxima etapa envolve a
separao dessas molculas pela ao da enzima
celular topoisomerase II (Figura 6.1). As histonas
acumuladas no ncleo celular durante a fase S se
associam com os genomas virais recm-replica-
dos, formando, assim, uma prognie de minicro-
mossomos. As clulas infectadas contm mais de
200.000 cpias de DNA viral e, aproximadamen-
te, 50% destes so encapsidados para formar a
prognie viral. Em resumo, a replicao do DNA
do SV-40 compartilha vrias etapas e componen-
tes essenciais envolvidos na replicao do DNA
da clula hospedeira.
A replicao do DNA viral provoca uma
alterao no padro de expresso gnica, fa-
vorecendo a transcrio e expresso dos genes
tardios (L = late), que codicam as protenas do
capsdeo. O mecanismo de transio, passando
da expresso dos genes iniciais para a expresso
pRB
p107
p130
Hsc70
Domnio J
p53
p300
Zn HR
Antgeno T
N
L
S
L
X
C
X
E
Liga na ORI
Liga na p53
ATPase
Liga na p53
Figura 6.4. Estrutura funcional do antgeno T do SV-40. Nessa representao, esto indicados os motivos funcionais
do lT. Domnio J: stio de ligao da protena Hsc70; LXCXE: stio de ligao das protenas da famlia pRb; NLS: sinal
para localizaonuclear; stiode ligaona ORI; stiode ligaode Zn+; stiocomatividade ATPase; stios de ligao
nas protenas p53; HR: stioenvolvidonadeterminaodohost range.
146 Captulo 6
dos tardios no bem conhecido. A redistribui-
o dos nucleossomos nas regies regulatrias
do genoma possivelmente desempenhe alguma
funo nesse processo, pois resulta na exposio
dos stios regulatrios dos genes tardios para o
reconhecimento pelo aparato celular de transcri-
o. O promotor que direciona a expresso dos
mRNA tardios possui alguns motivos presentes
tambm nos stios regulatrios dos genes iniciais,
incluindo as seqncias para a ligao do antge-
no lT.
Dois mRNA tardios principais so trans-
critos na direo oposta aos mRNA iniciais e
sofrem splicing alternativo. Os mRNA pequenos
so traduzidos na protena VP1 do capsdeo, e os
transcritos grandes originam a VP2 e VP3. Como
a seqncia que codica a VP3 est contida na
seqncia da VP2, a VP3 poderia ser produzida
pela clivagem da protena VP2. No entanto, tem
sido demonstrado que a traduo e sntese da
VP3 e VP2 so independentes.
A quantidade de mRNA tardios nas clulas
infectadas muito superior a dos mRNA iniciais.
Isso se explica pelo fato de que uma nica part-
cula vrica contm 360 molculas de VP1. Portan-
to, para uma prognie viral de 10
5
vrions por c-
lula, so necessrias 3.6 x 10
7-8
molculas de VP1.
Assumindo que cada molcula de mRNA pode
originar de 5.000 a 10.000 molculas de VP1, mais
de 30.000 molculas de mRNA da VP1 seriam ne-
cessrias para a produo de protena suciente
para encapsidar a prognie viral. O acmulo da
prognie de minicromossomos durante a replica-
o do DNA viral, com a conseqente amplica-
o dos moldes DNA e a ativao da transcrio
pelo antgeno lT, so os responsveis pelos nveis
altos de mRNA tardios nas clulas infectadas.
Recentemente, foi relatado que microRNAs
(miRNAs) so transcritos do genoma do SV-40
em fases tardias da infeco. Os miRNAs so
pequenos (aproximadamente 20 nt) e desempe-
nham funes regulatrias na expresso gnica
de eucariotas. A hibridizao desses miRNAs
com determinados mRNA-alvos resulta no silen-
ciamento dos genes correspondentes. Esse silen-
ciamento pode ocorrer por interferncia com a
traduo ou pela degradao dos mRNA. Assim,
dois mecanismos atuam para reduzir a expresso
do antgeno lT em fases tardias da infeco: a re-
presso da transcrio pelo prprio antgeno lT
e a interferncia pelos miRNAs. Surpreendente-
mente, clulas infectadas com isolados de campo
do SV-40 so menos susceptveis lise por linf-
citos T citotxicos do que clulas infectadas com
cepas mutantes que no induzem a sntese de
miRNAs. Provavelmente, a capacidade de snte-
se de miRNA se constitua em um mecanismo de
evoluo viral, permitindo a esses vrus escapa-
rem da vigilncia do sistema imunolgico.
Aps a sntese no citoplasma, as protenas
virais VP1, VP2 e VP3 so transportadas para o
interior do ncleo para a montagem dos vrions.
Esse transporte mediado por sinais de locali-
zao nuclear (NLS, seqncias especcas de
aminocidos) presentes nessas protenas. Essas
seqncias so responsveis pela interao das
protenas virais com o aparato de importao nu-
clear.
O mecanismo de montagem das partculas
virais (morfognese) dos poliomavrus no co-
nhecido. Capsdeos vazios podem ser inicialmen-
te pr-formados, seguidos da incorporao dos
genomas (como minicromossomos). Alternativa-
mente, os capsmeros individuais formados pe-
los pentmeros da VP1, associados com a VP2 e
com a VP3, podem interagir como o minicromos-
somo para a montagem dos capsdeos. A prote-
na agno, uma protena altamente bsica, codica-
da pela regio lder dos mRNA tardios de alguns
PoVs, facilita a morfognese por interagir com a
VP1. Nos PoVs de humanos, a agnoprotena atua
tambm na transcrio e replicao do DNA.
2.7 Concluses

A importncia crtica de uma nica prote-
na o antgeno lT em vrias etapas do ciclo
replicativo, como a transcrio, induo da fase S
e replicao do DNA, constitui-se em um aspecto
nico da famlia Polyomaviridae. O antgeno lT o
protagonista principal e possui vrias atividades
biolgicas. Atua como regulador da transcrio
viral, como protena ligante de DNA, possui ati-
vidade helicase e ATPase e de chaperone, alm de
interagir com vrias protenas da clula hospe-
deira. A atividade do antgeno lT regulada por
vrias modicaes ps-traduo, como fosfori-
lao, glicosilao, acetilao e adenilao.
Os PoVs so tambm conhecidos como pe-
quenos vrus DNA tumorais, por causa de sua
capacidade de induzir a formao de tumores. A
infeco de clulas no-permissivas pode resul-
tar em replicao abortiva. No entanto, a integra-
o freqente do genoma viral nos cromossomos
da clula hospedeira pode resultar em expresso
contnua das protenas iniciais. O antgeno T pos-
sui um papel decisivo nos processos de imortali-
zao, transformao celular e oncognese, pro-
vavelmente por suas interaes com mltiplos
fatores celulares e pela interferncia com a regu-
lao do ciclo celular.
3 Papilomavrus
A famlia Papillomaviridae possui apenas o
gnero Papillomavirus, que inclui vrios vrus de
mamferos e de aves. Esses vrus esto freqen-
temente associados com leses proliferativas na
epiderme e nas mucosas (papilomas ou verrugas).
Alm de clulas epiteliais, alguns papilomavrus
(PpVs) tambm infectam clulas do tecido con-
juntivo, causando bropapilomas (p. ex.: papi-
lomavrus bovino-1, BPV-1). As leses causadas
pelos PpVs so geralmente benignas, mas alguns
desses vrus esto associados com a produo de
neoplasias malignas.
Os vrions dos PpVs so icosadricos, sem
envelope e possuem aproximadamente 55 nm de
dimetro. O genoma consiste de uma molcula
de DNA de ta dupla circular, com 6.800 a 8.400
pb que, a exemplo dos poliomavrus, est asso-
ciada com histonas da clula hospedeira, forman-
do um complexo semelhante cromatina celular
(minicromossomo).
O ciclo replicativo dos PpVs est estreita-
mente associado com o processo de diferenciao
dos queratincitos (ou das clulas equivalentes
em superfcies no-cutneas). Na epiderme, os
queratincitos representam cerca de 90% das c-
lulas e encontram-se em diferentes fases de dife-
renciao. As clulas menos diferenciadas esto
localizadas no compartimento basal (estrato ger-
minativo), e as mais diferenciadas localizam-se
no compartimento apical (estrato crneo). As c-
lulas em estgios intermedirios de diferenciao
esto localizadas nos estratos granuloso e espi-
nhoso. As clulas-tronco do compartimento basal
se multiplicam de forma assimtrica, originando
outras clulas-tronco e tambm clulas de transi-
o para a posterior diferenciao. Essas ltimas
deixam o estrato basal e penetram no estrato es-
pinhoso, onde iniciam o processo de diferencia-
o celular. O ritmo de multiplicao das clulas
basais assegura uma substituio contnua das
clulas escamosas da superfcie apical que vo
sendo desfoliadas.
A infeco de animais e pessoas pelos PpVs
provavelmente ocorre por meio de microleses,
que expem o compartimento basal, permitindo
a penetrao e incio da replicao viral. A liga-
o dos vrus s clulas mediada pelo sulfato de
heparina. No entanto, no se conhecem os recep-
tores especcos que mediam a ligao e penetra-
o do vrus nas clulas e tampouco o mecanismo
de desnudamento.
A infeco das clulas basais no produ-
tiva, ou seja, no resulta na produo de prog-
nie viral. O ciclo replicativo inicia nessas clulas
com a expresso limitada de genes virais (genes
iniciais) e replicao do DNA. No entanto, a re-
plicao s completada nas clulas diferencia-
das, onde ocorre a amplicao do DNA viral,
a expresso dos genes tardios, a morfognese e
egresso da prognie viral. Embora as clulas ba-
sais representem a fonte de fatores de replicao,
a infeco viral necessita de fatores que somente
esto presentes em clulas que esto na fase S,
para assegurar a expresso temporal dos genes e
a replicao do genoma.
3.2 O genoma dos PpVs
A Figura 6.5 apresenta a organizao do ge-
noma do papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1).
148 Captulo 6
Os genes do PpVs so classicados em iniciais
(E) ou tardios (T) e, ao contrrio dos PoVs, so
codicados em apenas uma das tas do DNA
genmico. Assim, a transcrio do DNA viral
realizada em apenas uma direo. Uma regio
no-traduzida, conhecida como regio longa de
controle (LCR), contm as seqncias regulat-
rias, incluindo a origem da replicao do DNA
e enhancers para a transcrio. Seis diferentes
promotores foram identicados no genoma do
BPV-1. Entre os diferentes PpVs, existe uma va-
riabilidade muito grande dos promotores, prova-
velmente reetindo os aspectos peculiares de re-
gulao em diferentes espcies ou em diferentes
stios de replicao.
A expresso dos genes dos PpVs comple-
xa, em razo da presena de mltiplos promoto-
res, de stios de splicing alternativo e pela produ-
BPV-1
L2
4000
5000
6000
7000
7946/1
1000
2000
3000
CE
AL
P7185
PL
P7940
P89
P890
P2443
P3080
AE
L1
LCR
E6
E7
E8
E1
E2
E4
E3
E5
Figura 6.5. Estrutura e organizao do genoma do
papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1). LCR: regio longa
de controle (contm a origem de replicao); CE:
enhancer constitutivo; P: promoters (os nmeros
indicam a posio no genoma); AE: stio de
poliadenilao dos transcritos iniciais; AL: stio de
poliadenilao dos transcritos tardios; E1 a E8: mRNAs
dos genes iniciais; L1e L2: mRNAs dos genes tardios.
Fonte: adaptado de Fowley e Lowy (2001).
o diferencial de mRNAs em diferentes clulas.
Os mRNA dos PpVs so policistrnicos, ou seja,
contm mais de uma seqncia codicante (open
reading frame, ORF). No entanto, apenas uma des-
sas ORFs traduzida de cada mRNA. Nos PpVs
de humanos e de bovinos, os primeiros genes a
serem expressos so o E1 e E2, pela RNA pol II,
com o auxlio de fatores de transcrio espec-
cos de queratincitos.
A protena E2 desempenha um papel funda-
mental na transcrio e na replicao do DNA.
Essa protena contm uma regio para a ligao
no DNA e outra com funo de ativao da trans-
crio. A E2 se liga especicamente em determi-
nados promotores no LCR e controla positiva e
negativamente a expresso dos genes iniciais,
dependendo da sua concentrao e das intera-
es de suas regies regulatrias com o DNA.
Essa regulao ainda mais complexa devido
presena de diferentes isoformas da E2, que, pro-
vavelmente, possuam diferentes propriedades
regulatrias. Por outro lado, a nica e importante
funo da E2 na replicao do genoma estimu-
lar a ligao da E1 ao DNA, principalmente no
incio da infeco, quando a concentrao da E1
ainda baixa.
A E1 a maior e mais conservada protena
dos PpV. a nica protena viral diretamente en-
volvida na replicao do DNA viral. Essa prote-
na apresenta atividade ATPase/helicase e forma
hexmeros simples e duplos ao redor do DNA vi-
ral. Alm disso, a E1 forma complexos com pro-
tenas do hospedeiro que esto envolvidas com
a replicao do DNA, incluindo as subunidades
da DNA polimerase , a RPA e chaperone Hsp40.
Portanto, a E1 dos PpV semelhante ao antgeno
lT dos poliomavrus com relao atividade en-
zimtica, capacidade de recrutar fatores celulares
e no papel fundamental na iniciao da replica-
o do genoma viral.
3.4 Replicao do DNA e interferncia
com o ciclo celular
O resultado da atividade conjunta da E1 e
E2 a formao do complexo de iniciao que se
liga na origem de replicao do DNA. Esse even-
to precede e permite a elongao da cadeia, resul-
tando na produo das cpias de DNA a serem
encapsidadas na prognie viral. importante sa-
lientar que todas as fases da replicao do DNA
viral ocorrem em sincronia com a replicao dos
cromossomos da clula hospedeira.
A replicao do DNA viral no compartimen-
to basal produz entre 20 e 100 cpias do genoma,
que so mantidos como DNAs extracromossmi-
cos no ncleo da clula hospedeira. Os genomas
virais so elmente distribudos entre as clulas-
lhas, e o processo de replicao s reiniciado
nos queratincitos em estgios avanados de di-
ferenciao (Figura 6.6).
A amplicao dos genomas virais que
ocorre em queratincitos diferenciados, denomi-
nada replicao vegetativa do DNA, representa
um desao para o vrus, pois essas clulas encon-
tram-se na fase G0 do ciclo celular. Acredita-se
que duas pequenas protenas virais, a E6 e a E7,
sejam responsveis pela criao de um ambiente
favorvel para a replicao vegetativa. Essas pro-
tenas tambm desempenham um papel central
na transformao celular e na induo de neopla-
sias, especialmente nos PpVs humanos de alto
risco. De fato, sabe-se muito mais sobre o papel
dessas protenas na transformao celular do que
em infeces produtivas. Por isso, deve-se anali-
sar com cautela as informaes a respeito do pro-
vvel papel da E6 e da E7 na infeco produtiva
no contexto da replicao vegetativa do DNA.
Estrato crneo
Camadas
granulares
Camadas
espinhosas
superiores
Camadas
espinhosas
inferiores
Clulas amplificadores
em trnsito (mitticas)
Clulas basais
e de reserva
(substituem as
amplificadoras)
Membrana basal
Derme
(tecido conjuntivo,
fibroblastos, endotlio
vascular)
Diferenciao dos
queratincitos
Replicao dos
papilomavrus
Liberao de vrions maduros
Vrions maduros
Morfognese dos vrions
Produo das protenas tardias
Amplificao vegetativa do DNA
Nveis altos de protenas iniciais (E4)
Protenas dependentes
da diferenciao E6 e E7
Protenas iniciais E1, E2, E3 e E4
Possvel stio alternativo
de infeco
Protenas iniciais E1 e E2
Infeco primria
Estabelecimento da replicao
Vrus introduzido
por microleses
Figura 6.6. Diferenciao do epitlio cutneo e etapas da replicao dos papilomavrus em infeces benignas (no-
tumorais). As fases de diferenciao celular esto apresentadas esquerda da figura; e as etapas do ciclo replicativo
estoapresentadas direita.
Fonte: daptado de Chow e Broker (1997).
150 Captulo 6
De forma semelhante ao antgeno lT dos
PoVs, as E6 e E7 dos PpVs interagem com as
protenas celulares pRb e p53, que so protenas
antioncognicas envolvidas no controle do ciclo
celular. Quando a E6 expressa em camundon-
gos transgnicos, ocorre a hiperproliferao do
epitlio e o desenvolvimento de tumores epite-
liais. Esses efeitos dependem parcialmente da
habilidade da E6 de se ligar p53 e recrutar uma
ligase celular, que adiciona uma ubiquitina, a
p53, direcionando-a a degradao. A E6, ento,
ao remover a p53, que envolvida no controle do
ciclo celular, estimularia a clula a entrar em fase
S e retardaria a apoptose.
Estudos recentes sugerem que, alm dos efei-
tos mediados pela interao com a p53, a E6 pode
interferir com o ciclo e na sobrevivncia celular
por outros mecanismos. A E6 induz a hiperfos-
forilao e inativao da pRb, o que importante
para entrada da clula na fase S. Tambm induz a
expresso da telomerase, uma enzima que repli-
ca as extremidades do DNA e impede o encurta-
mento dos cromossomos aps a diviso celular.
A inativao da pRb e a expresso da telomerase
so importantes no processo de imortalizao de
clulas pelos PpVs. Alm disso, a E6 pode intera-
gir com a BAK, que uma protena pr-apoptose,
que expressa em altos nveis na camada apical
do epitlio estraticado. Assim como a p53, a in-
terao da E6 com a BAK resulta na ubiquitina-
o e posterior degradao da BAK. Por induzir a
degradao da p53 e BAK, a E6 impede ou reduz
a probabilidade da clula infectada sofrer apop-
tose em resposta infeco, aumentando o tempo
para o vrus completar o seu ciclo replicativo.
A E7 interage com vrias protenas celula-
res envolvidas no controle do ciclo e na diferen-
ciao celular, incluindo os membros da famlia
das protenas pRb, as deacetilases de histonas,
as ciclinas, cdks e fatores de transcrio da fa-
mlia dos AP-1. Embora o signicado de vrias
dessas interaes permanea incerto, sabe-se que
a ligao da E7 com a pRb resulta na degradao
da pRb e na conseqente liberao do fator de
transcrio E2F. A interao da E7 com fatores de
transcrio AP-1 est associada com a modulao
da transcrio de genes envolvidos com resposta
inicial a sinais mitognicos.
Em resumo, a E6 e a E7 atuam sobre regula-
dores importantes do ciclo celular e da sobrevi-
vncia das clulas infectadas, com o objetivo de
proporcionar tempo suciente para assegurar a
replicao e produo de prognie viral em clu-
las diferenciadas. A progresso do ciclo e a dife-
renciao celular so eventos mutuamente exclu-
dentes. De fato, a progresso no-programada do
ciclo celular em clulas diferenciadas geralmente
leva morte celular. Assim, a E6 e a E7, ao in-
uenciarem simultaneamente o ciclo celular e o
mecanismo de sobrevivncia, so capazes de re-
solver o impasse que levaria morte celular.
Alm do papel da E6 e E7, experimentos in
vitro tm demonstrado que a E5 do BPV-1 ativa
o receptor para o fator de crescimento derivado
das plaquetas (PDGF), uma protena que se liga
ao PDGF e proporciona o sinal mitognico. As-
sim, por mimetizar o PDGF, a E5 capaz de criar
sinais adicionais para criar um ambiente de fase
S propcio replicao viral.
A transcrio dos genes tardios controlada
por um promotor, que estimulado por fatores
de transcrio presentes somente em queratin-
citos em fase nal de diferenciao. Isso pode ex-
plicar porque a sntese das protenas estruturais e
a morfognese das partculas virais ocorrem ape-
nas em clulas diferenciadas. No entanto, evidn-
cias indicam que a expresso dos genes tardios
em queratincitos menos diferenciados repri-
mida por fatores do hospedeiro. Isso indica que
a regulao dos genes tardios e a conseqente
continuao do ciclo podem estar sujeitas tanto a
regulao positiva como negativa, ambas depen-
dentes de condies e fatores associados com o
estgio de diferenciao celular.
O mesmo promotor tardio direciona a snte-
se de mRNAs que codicam a E4, uma das pro-
tenas menos conservadas dos PpV. Dessa forma,
embora o gene da E4 esteja localizado na regio
dos genes iniciais, expresso em fases tardias. O
gene da E4 completamente sobreposto ao gene
da E2. No entanto, a sua seqncia de aminoci-
dos codicada por uma ORF diferente, fazendo
com que as seqncias de aminocidos da E2 e
da E4 sejam completamente diferentes. A E4 se
associa com a queratina e, quando expressa em
altos nveis, pode induzir o colapso da cadeia de
queratina. Com base nessas observaes, pro-
vvel que a E4 participe da replicao, facilitando
o egresso das partculas vricas.

3.6 Concluses
Os PpVs dependem da diferenciao do epi-
tlio para completar o seu ciclo de replicao, e
a expresso dos seus genes regulada medida
que as clulas basais migram em direo super-
fcie do epitlio. Os produtos virais no apenas
controlam a expresso gnica dos genes virais e
a replicao do DNA viral como tambm modu-
lam o ciclo celular e os programas de apoptose
para assegurar a produo de prognie viral. Em
algumas circunstncias, infeces abortivas, sem
a realizao completa do ciclo replicativo viral,
podem ocorrer. A exemplo de outros vrus DNA
pequenos, essas infeces abortivas podem resul-
tar em transformaes neoplsicas.
4 Adenovrus
A Adenoviridae uma famlia de vrus DNA
grandes, no-envelopados, que infectam verte-
brados e produzem enfermidade leve no trato
respiratrio, gastrintestinal e genitourinrio. Os
adenovrus (AdVs) possuem a capacidade de in-
fectar uma grande variedade de clulas que no
esto em diviso. Por isso, tm sido muito utiliza-
dos como vetores para a transferncia de genes e
tambm para vacinas vetoriais. Por essas razes,
a biologia molecular dos AdVs conhecida com
detalhes.

Aproximadamente aps 40 minutos da pe-
netrao na clula, os vrions podem ser observa-
dos prximos ao ncleo. A internalizao parece
ativar a protease viral L3, que inicia o desmonte
da partcula vrica. A protena terminal (TP), que
uma protena que est associada de forma co-
valente na extremidade 5 do genoma, contm si-
nais de localizao nuclear, que so encarregados
de mediar a importao do genoma viral para o
ncleo da clula hospedeira.
A expresso gnica do AdVs divide-se em
fases inicial e tardia. As protenas iniciais so
necessrias para a transcrio dos genes virais
e para a replicao do DNA. Tambm esto en-
volvidas com a interferncia com os mecanismos
inamatrios e de apoptose desencadeados pelo
hospedeiro. Aps a replicao do DNA, ocorre a
expresso dos genes tardios, cujos produtos so,
em sua maioria, componentes estruturais das
partculas vricas. O ciclo replicativo se completa
em 20 a 24 horas e resulta na produo de apro-
ximadamente 10
4
partculas vricas por clula in-
fectada.
Embora a diviso da expresso gnica em
fases inicial e tardia seja conveniente do ponto de
vista didtico, o limite exato entre essas fases no
claro. Por exemplo, alguns genes iniciais conti-
nuam a ser expressos em fases tardias da infec-
o; e baixos nveis de expresso de genes tardios
podem ser detectados j no incio da infeco.
Essa sobreposio da expresso gnica inicial/
tardia tambm observada durante a replicao
de outros vrus DNA.

4.2 O genoma dos AdVs
Os genomas dos AdVs de mamferos so
constitudos por molculas lineares de DNA de
ta dupla, com aproximadamente 35 kb. Seqn-
cias repetidas invertidas (ITRs) com 36 a 200 pb
so encontradas nas regies terminais do geno-
ma. O genoma encontra-se associado com quatro
protenas virais (V, VII, X and TP) para formar o
ncleo (ou core) da partcula viral. A protena V
provavelmente medeia as interaes entre o n-
cleo e o capsdeo. Maiores detalhes da estrutura
das partculas vricas dos adenovrus esto apre-
sentados no Captulo 16.
Embora a organizao genmica seja conser-
vada dentro dos gneros, diferenas importantes
podem ser observadas entre vrus de gneros di-
ferentes. A maioria dos genes gnero-especcos
se localiza prxima s extremidades do genoma,
enquanto os genes conservados na famlia ten-
dem a se concentrar na regio central. Essa ca-
racterstica tambm observada em outros vrus
152 Captulo 6
DNA de ta dupla lineares, como os poxvrus
e herpesvrus. Nessas famlias, vrios genes g-
nero-especcos esto envolvidos nas interaes
do vrus com o hospedeiro, provavelmente para
favorecer a sua sobrevivncia em determinados
nichos biolgicos. Alguns desses genes parecem
ter sido capturados do hospedeiro em um passa-
do remoto.
O genoma dos AdVs codica aproxima-
damente 45 protenas, das quais apenas 12 so
encontradas nos vrions. Os genes virais so or-
ganizados em unidades de transcrio, cuja ex-
presso regulada temporalmente. Cinco unida-
des E1A, E1B, E2, E3 e E4 so expressas em
fases iniciais e uma (L) expressa tardiamente na
infeco. Duas pequenas unidades (IX e Iva2) so
expressas em fases intermedirias. O genoma do
AdV humano pode ser descrito como um bloco
central de genes com orientao para a direita,
interrompidos por genes iniciais da regio E3 na
mesma cadeia, e por genes E2 na cadeia oposta.
A regio terminal direita ocupada pelos genes
E4, e, esquerda, pelos genes E1A and E1B e dois
genes intermedirios (Figura 6.7).
Vrios mRNA so produzidos a partir de
cada unidade transcripcional. Com poucas exce-
es, os transcritos primrios das vrias unidades
so processados por splicing. De fato, uma das
mais importantes contribuies dos AdVs para a
1 2 i 3 Leader:
ML
IX
E1B
L1
L2
L3
L4
L5
x y z
E1A
L1 (iniciais)
VA
E3 (tardio)
E3
10 100 20 30 40 50 60 70 80 90
IV a2
E2A
E2B
E4
Figura 6.7 Estrutura do genoma e mapa de transcrio dos adenovrus. A linha dupla representa o genoma. Os
nmeros abaixo representam as unidades genmicas. Os transcritos iniciais (E: so representados por setas
finas; os transcritos tardios (L: so representados por setas espessas. A extenso das setas corresponde regio
codificante dos mRNAs. A maioria dos transcritos tardios inicia na regio prxima unidade 16 do mapa e contm
uma regio lder composta por trs seqncias (1, 2 e 3). As regies entre as seqncias lder e as respectivas setas so
removidas por (representamos ntrons).
early)
late)
splicing
Fonte: adaptado de Shenk (2001).
Biologia foi a descoberta do splicing de RNA rea-
lizada durante estudos de expresso gnica.
A maioria das unidades de transcrio co-
dica uma srie de polipeptdeos com funes
relacionadas. Por exemplo, a unidade E1A co-
dica duas protenas que ativam a transcrio e
induzem a clula hospedeira a entrar na fase S,
enquanto a E2 codica trs protenas que atuam
na replicao do DNA viral.

A regio da E1A, a primeira unidade trans-
cripcional a ser expressa, resulta em um transcri-
to primrio nico, que processado por splicing
diferencial em dois mRNAs. Os seus produtos,
as protenas 12S e 13S (em razo de diferenas
no coeciente de sedimentao dos mRNA), so
idnticas, com exceo de 46 aminocidos adicio-
nais presentes na E1A 13S.
Uma funo importante das protenas E1A
estimular a transcrio generalizada de genes
virais. Essa funo depende da habilidade das
protenas E1A de se ligarem em uma variedade
de fatores regulatrios da transcrio celular,
como as protenas CREB, AP1 e fatores basais
de transcrio como a protena ligante do TATA
(TBP). A ligao da E1A nesses fatores media-
da pelos domnios conservados CR1 e CR2 (12S e
13S) e CR3 (somente na 13S). Uma interao crti-
ca ocorre entre o CR3 e a subunidade mediadora
MED23, que estimula a montagem do complexo
de pr-iniciao nos promotores dos genes ini-
ciais e, provavelmente, tambm aumente a taxa
de incio da transcrio desses genes.
As protenas E1A tambm desempenham
um papel importante de induo do ciclo celular.
A exemplo dos poliomavrus, as protenas iniciais
dos AdVs focalizam a sua ao nos reguladores
principais do ciclo celular, a pRb e p53. A intera-
o entre as E1A e a pRb resulta na dissociao
dos complexos E2F-pRb e ativao da transcrio
de genes cujos produtos promovem a entrada na
fase S. Interessantemente, a E2F tambm se liga
e ativa os promotores da E1 e E2. Isso provavel-
mente represente um mecanismo para coordenar
a progresso do ciclo celular com a expresso g-
nica e replicao do DNA viral.
As protenas E1A inibem a p300/CBP, uma
protena que modica a estrutura da cromatina
para facilitar a atividade de fatores de transcrio,
como a p53. Ao se ligar na p300/CBP, as prote-
nas E1A antagonizam a ao da p53, liberando o
bloqueio para a progresso do ciclo celular. Alm
disso, a E1B de certos AdVs pode se ligar direta-
mente e bloquear a p53. A razo por que os AdVs
(e tambm os polioma e papilomavrus) utilizam
dois mecanismos para estimular o ciclo celular
desconhecida. Uma possibilidade que, in vivo,
podem existir clulas nas quais um dos mecanis-
mos mais eciente do que o outro. Uma anlise
mutacional demonstrou que, embora a ligao da
E1A nas protenas pRb ou p300/CBP possa indu-
zir a sntese de DNA em clulas quiescentes, am-
bas as regies so necessrias para induzir a fase
M, sugerindo que eventos tardios do ciclo celular
so, provavelmente, requeridos para assegurar
uma replicao viral eciente. Funes virais que
induzem a progresso do ciclo celular esto en-
volvidas na transformao de clulas de cultivo
por alguns sorotipos dos AdVs. No entanto, ne-
nhum AdV tem sido associado com tumores em
seu hospedeiro natural.
Os AdVs induzem apoptose na clula hospe-
deira em fases iniciais da infeco, principalmen-
te atravs de efeitos indiretos da E1A. Por outro
lado, vrias protenas virais, incluindo as E1B/55
kDa, E1B/19 kDa e E4orf6, atuam bloqueando a
apoptose por vrios mecanismos. A E1B e E4orf6
bloqueiam o mecanismo pr-apopttico depen-
dente da p53, ligando-se e inativando essa prote-
na. A E1B/19 kDa semelhante protena celular
antiapopttica Bcl-2, que se localiza na membra-
na mitocondrial e impede a ativao da caspase-
9, uma efetora da apoptose. Mutantes do AdVs
defectivos na E1B/19 kDa induzem morte celular
rpida, resultando em produo de prognie vi-
ral em quantidade reduzida quando comparada
com o vrus de campo.
A sobrevivncia das clulas infectadas tam-
bm depende da interferncia com sinais de mor-
te celular induzidos pela resposta imune. A E3
19 kDa uma glicoprotena transmembrana que
ca retida no retculo endoplasmtico (RE) e cujo
domnio luminal se liga em molculas do MHC-
I, provocando a sua reteno no RE. A E3 19 kDa
154 Captulo 6
tambm se liga no complexo TAP e o impede de
transferir peptdeos ao MHC-I. O efeito dessas
atividades a proteo das clulas infectadas do
reconhecimento e lise mediada por linfcitos T
citotxicos (CTLs). Os CTLs tambm podem in-
duzir lise celular, desencadeando sinais atravs
do receptor de Fas expresso nas clulas-alvo. O
complexo viral E3 14.4-kDa/E3 10.4-kDa interfe-
re com a apoptose mediada pelo Fas, induzindo
a degradao do seu receptor. Alm disso, esse
complexo tambm inibe a lise celular pelo fator
de necrose tumoral alfa (TNF), uma citoquina
antiviral potente. Provavelmente, as atividades
imunomodulatrias das protenas E3 dos AdVs
desempenhem importantes funes durante e re-
plicao viral in vivo.
Uma das respostas mais precoces contra
infeces vricas aquela mediada pelos interfe-
rons (IFNs) e , que agem de forma autcrina
e parcrina, induzindo um estado de resistncia
antiviral nas clulas. Os IFNs atuam por meio de
seu receptor, provocando a ativao da transcri-
o de genes cujos produtos possuem aes anti-
virais. Elementos-chave nesse mecanismo so as
quinases citoplasmticas denominadas STATs,
que, uma vez ativadas, so translocadas para o
ncleo, onde se ligam e ativam os promotores
responsivos ao IFN. As protenas E1A dos AdVs
atuam diretamente nos mecanismos mediados
pelos IFNs, ligando-se e inativando a STAT1 e,
assim, bloqueando a ativao dos genes respon-
sivos aos IFNs.
Em resumo, as protenas iniciais dos AdVs
atuam para assegurar uma expresso gnica ade-
quada, progresso do ciclo celular e modulao
das respostas do hospedeiro, at que o ciclo repli-
cativo seja concludo. Indiretamente, essas ativi-
dades contribuem para a disseminao do vrus
no organismo do hospedeiro. Estudos de infec-
es pelos AdVs in vivo tm demonstrado que
esses vrus no so inerentemente inamatrios,
indicando que conseguem moderar a resposta in-
amatria do hospedeiro.

A maioria das funes necessrias para a re-
plicao do DNA dos AdVs so codicadas pela
regio E2 do genoma. Seqncias especcas de
51 bp, localizadas nas regies terminais repeti-
das, servem de origem de replicao (ori). Duas
protenas virais codicadas pela regio E2, a pro-
tena pr-terminal (pTP) e a polimerase de DNA,
se ligam nas primeiras 20 bases da ori. Uma ter-
ceira protena da E2, a protena ligante do DNA
(DBP), juntamente com fatores celulares, ligam-
se um pouco abaixo (na direo 3) e interagem
com o complexo pTP/polimerase. A principal
funo da pTP servir de primer para a inicia-
o da replicao do DNA viral. Essa protena ,
posteriormente, clivada para originar a TP, que
permanece ligada s extremidades 5 do genoma.
A DBP forma multmeros em uma das cadeias
do DNA, provocando a separao das cadeias,
evento que necessrio para a elongao das ca-
deias-lhas. A sntese de DNA se inicia na extre-
midade de uma das cadeias e se prolonga at a
outra extremidade, resultando em uma molcula
de cadeia dupla recm-replicada e uma molcula
parental de cadeia simples. No segundo estgio,
a cadeia simples deslocada na reao inicial serve
de molde para a sntese da cadeia complementar.
Em clulas de cultivo, a replicao do DNA viral
se inicia 5 a 10 horas aps a infeco e continua
at a morte celular. Uma ilustrao simplicada
da replicao do genoma dos AdVs est apresen-
tada na Figura 6.8. Maiores detalhes sobre este
mecanismo esto apresentados no Captulo 16.
O promotor principal tardio exibe um nvel
baixo de atividade durante as fases iniciais da
infeco e direciona a expresso da protena L1
52/55-kDa. Esta protena se associa com o geno-
ma e o empacota em etapas avanadas do ciclo.
medida que a replicao do DNA progride, a
atividade do promotor tardio aumenta e se torna
centenas de vezes mais ativo em fases tardias da
infeco. Esse promotor fortemente ativado pe-
las protenas E1A, mas as razes de sua ativao
tardia so desconhecidas.
A transcrio da regio tardia do genoma re-
sulta em um transcrito primrio longo, que pro-
cessado por poliadenilao em diferentes stios,
e por splicing para gerar vrios mRNA tardios. O
acmulo citoplasmtico dos mRNA tardios fa-
vorecido por duas protenas virais, a E1B 55 kDa
e E4 34 kDa, que facilitam o movimento desses
transcritos do ncleo para o citoplasma. Conco-
mitantemente, o transporte de mRNA celulares
para o citoplasma inibido. A natureza dessa
discriminao (mRNA virais versus mRNA celu-
lares) no completamente conhecida, mas pode
envolver a relocalizao de fatores celulares re-
queridos para o transporte de mRNA nos centros
de transcrio virais.
Alm disso, os mRNA virais so preferen-
cialmente traduzidos em etapas tardias da infec-
o, por causa de vrios mecanismos regulatrios
virais. Um desses mecanismos a inativao do
fator de iniciao da traduo eIF-4F, que, nor-
malmente, se liga aos mRNA para facilitar a
traduo. As extremidades 5 dos mRNA virais
tardios contm uma regio no-codicante de
200 nt, que permite a esses mRNA serem tradu-
zidos na ausncia de eIF-4F ativo. Em contraste,
os mRNA celulares no so mais traduzidos na
ausncia do eIF-4F.
A maioria das protenas tardias dos AdVs
so componentes estruturais dos vrions e fatores
envolvidos na morfognese que, juntamente com
a replicao do DNA, produzem o cenrio para a
morfognese e egresso da prognie viral.
Primeira
etapa
Segunda
etapa
Circulariza
Lineariza
Tp
Tp
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
-OH
-OH
OH
OH
.pTp
+
Figura 6.8. Ilustrao esquemtica da replicao do genoma dos adenovrus. Na primeira etapa, apenas uma das
cadeias replicada de maneira contnua, a partir de uma das extremidades. A cadeia no-replicada circulariza ento
para a formao de uma nova origem de replicao. A replicao desta cadeia inicia na extremidade e prossegue ao
longo da cadeia, que, emseguida, assume a topologia linear. Ao final das duas etapas, as duas cadeias de DNAesto
replicadas.
.pTp
Fonte: adaptada de Flint et al. (2000).
156 Captulo 6
4.6 Concluses
Os adenovrus codicam uma srie de pro-
dutos envolvidos na interferncia com os meca-
nismos de regulao do ciclo celular. As protenas
E1A so ativadores promscuos de vrios genes
virais e tambm induzem a clula a entrar em
fase S. Por outro lado, os efeitos indiretos dessa
ativao podem levar a clula infectada apopto-
se. Por isso, os AdV codicam tambm produtos
com atividade antiapopttica. Com isso, o vrus
tem tempo suciente para completar o seu ciclo
replicativo. No hospedeiro, os AdVs interferem
com o reconhecimento de clulas infectadas pelo
sistema imunolgico, tambm com o objetivo de
preservar a integridade das clulas infectadas
pelo tempo necessrio para a concluso do ci-
clo. Os AdVs tm sido intensivamente estudados
como potenciais vetores para terapia gentica e
vacinas contra vrus.
5 Herpesvrus
Os herpesvrus (HVs) so vrus grandes
(120-200 nm de dimetro), com envelope, que
possuem uma molcula de DNA de cadeia du-
pla linear como genoma. A famlia Herpesviridae
dividida em trs subfamlias, de acordo com
aspectos biolgicos e moleculares em comum:
Alphaherpesvirinae, Betaherpesvirinae e Gammaher-
pesvirinae. Todos os herpesvrus possuem a capa-
cidade de estabelecer infeces latentes em seus
hospedeiros. Os herpesvrus so encontrados em
praticamente todas as espcies de vertebrados.
Os HVs replicam o seu genoma no ncleo
da clula hospedeira e utilizam fatores virais e
celulares no processo de replicao. Dependendo
da expresso de determinados genes e das inte-
raes com a clula hospedeira, os HVs podem
apresentar dois tipos distintos de ciclo replica-
tivo. O primeiro ocorre nas clulas epiteliais ou
do tegumento durante a infeco aguda inicial,
logo aps a penetrao no hospedeiro. A infeco
dessas clulas resulta na expresso do conjunto
completo de genes virais e na produo de pro-
gnie viral infecciosa. A infeco produtiva com
produo de prognie incompatvel com a so-
brevivncia das clulas e resulta inevitavelmente
em lise. Esse ciclo ltico pode ser facilmente re-
produzido in vitro pela inoculao de HVs em
clulas de cultivo.
Aps a replicao ltica inicial, os HVs po-
dem permanecer em determinadas clulas do
hospedeiro em um estado no-replicativo duran-
te um longo perodo, provavelmente por toda a
vida do indivduo, sem que este apresente sinais
da infeco. Essa forma no-produtiva de infec-
o, que ocorre sem a expresso de genes virais
ou produo de prognie viral, denominada in-
feco latente. No entanto, estmulos especcos
muitos deles relacionados ao estresse podem
induzir o vrus em latncia a retomar a replicao
ativa e, assim, iniciar um novo ciclo de infeco
produtiva que culmina com a produo da pro-
gnie viral. Essa retomada da replicao ativa
denominada reativao. Grande parte dos conhe-
cimentos sobre a replicao produtiva dos HVs
foram obtidos a partir de estudos da replicao
in vitro pelo herpesvrus humano tipo 1 (vrus do
herpes simplex, HSV-1), que o prottipo da fa-
mlia Herpesviridae. Em contraste, muito menos se
conhece sobre a infeco latente pelos HVs pela
diculdade de sua reproduo in vitro.
5.2 O genoma dos HVs
O genoma dos herpesvrus consiste de uma
ta dupla linear de DNA com 125 a 240 kb. Os ge-
nomas dos HVs so classicados em seis classes
(A-F), com base na organizao do genoma pre-
sena, nmero e localizao de regies repetidas e
terminais (Figura 6.9). Por exemplo, nos genomas
da classe E (p. ex.: HSV-1), as seqncias termi-
nais so repetidas em uma orientao invertida
e justapostas internamente, dividindo o genoma
em uma regio curta (S) e outra longa (L), onde
cada regio anqueada por regies repetidas
e invertidas. O genoma do herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1) um genoma do tipo D, no qual
apenas a regio curta (US) anqueada pelas re-
gies repetidas invertidas (Figura 6.9). Em ambos
os casos, os componentes nicos podem estar na
mesma orientao ou invertidos em relao ao
outro. O DNA extrado dos vrions consiste em
populaes equimolares que diferem apenas na
orientao relativa dos dois componentes. Os ge-
nes presentes nas regies repetidas obviamente
se encontram em mais de uma cpia no genoma.
Epstein-Barr (EBV), so sintetizados microRNAs
que apresentam potencial para silenciar a expres-
so de genes celulares e/ou virais.
5.3 Os genes virais
Aproximadamente 30 genes dos HV (deno-
minados centrais ou core genes) so conservados
entre os membros da famlia Herpesviridae, ou
seja, esto presentes nos genomas de todos os
HV examinados at o momento. Os produtos
desses genes so responsveis pelo metabolismo
dos nucleotdeos, pela replicao do DNA e pela
morfognese e estrutura dos vrions. Outros ge-
nes so conservados apenas entre membros de
uma determinada subfamlia. Por exemplo, os
alfaherpesvrus codicam transcritos associados
latncia, uma protena do tegumento que ativa
a transcrio dos genes iniciais e um regulador
da transcrio relacionado ao ICP4 dos HSV-1.
Alm desses, vrios outros genes so peculiares
a algumas espcies de vrus.
Os HVs da subfamlia Gammaherpervirinae,
principalmente, codicam genes de origem do
hospedeiro, provavelmente adquiridos por re-
trotransposio de cDNAs. Em alguns casos, os
genes virais codicam funes similares as dos
correspondentes celulares. Em outros casos, es-
ses genes foram alterados para modicar a sua
funo. Por exemplo, o homlogo da ciclina tipo
D (no herpesvrus humano tipo 8 [HHV-8]) no
responde a sinais que atuariam sobre a verso ce-
lular do gene, fazendo com que a ciclina tipo D
viral permanea constantemente ativada e capaz
de promover transformao celular. Na seo 5.4,
ser visto que a aquisio de genes do hospedeiro
uma caracterstica marcante dos poxvrus.
Cerca de 50% dos genes do HSV-1 no so
necessrios para a replicao viral em cultivo ce-
lulares, por isso so ditos no-essenciais (NE). No
entanto, esses genes so importantes para a repli-
cao e patogenia durante a infeco natural. V-
rios genes NE atuam antagonizando os mecanis-
mos de defesa antiviral do hospedeiro e, assim,
favorecendo a replicao do vrus.
Os HVs so capazes de alterar o ambiente
celular para favorecer a sua replicao, provocan-
do a inibio ou induo da sntese de macromo-
O genoma dos HVs contm entre 70 e 200
genes, e a maioria destes so monocistrnicos,
portanto, codicam apenas uma protena. Os ge-
nes esto presentes e so transcritos a partir de
ambas as cadeias de DNA. A expresso gnica
controlada por promotores com TATA box e a
transcrio realizada pela RNA polimerase II
celular. Quando os genes so sobrepostos, as suas
regies regulatrias esto localizadas na regio
codicante do gene adjacente. Uma caracterstica
comum dos genomas dos HV a existncia de
grupos de transcritos co-terminais da extremida-
de 3, cada um expressando uma ORF diferente.
Ao contrrio dos adenovrus, a grande maioria
dos transcritos dos HVs no sofrem splicing.
Alguns transcritos de genes dos HV parecem
no conter ORFs traduzveis. Um exemplo clssi-
co o transcrito associado com a latncia (LAT)
do HSV-1, que o nico RNA viral transcrito
durante a latncia desse vrus. No caso do vrus
R1 R4 R2 R3
Us
UL
UL
Us
A
B
C
D
E
F
Figura 6.9. Estrutura e organizao dos genomas dos
herpesvrus. As linhas representam seqncias nicas;
os blocos representam seqncias repetidas.
Representantes de cada grupo: A) Herpesvrus docatfish
de canal; B) Herpesvrus Saimiri; C) Vrus Epstein-Barr;
D) Vrus da varicella-zoster; E) Vrus do herpes simplex;
F) Herpesvrus Tupaia. Note que somente os genomas
do tipo F no apresentam seqncias repetidas. Os
alfaherpesvrus de maior importncia veterinria
(herpesvrus bovino tipo 1 [BoHV-1] e vrus da doena
deAujeszky[PRV]) possuemgenomas dotipoD.
Fonte: adaptado de Roizman e Pellet (2001).
158 Captulo 6
lculas, induo ou inibio da sntese de DNA
celular e, ainda, podem induzir a imortalizao
da clula hospedeira. Os HVs podem bloquear a
induo de apoptose, ativar os mecanismos me-
diados pelo interferon e a apresentao de ant-
genos e mimetizar determinadas funes imu-
nomodulatrias. Uma conseqncia geral dessas
atividades o retardamento na erradicao da
infeco das clulas hospedeiras, por um perodo
suciente para permitir a replicao viral com-
pleta ou o estabelecimento da infeco latente.
5.4 Expresso gnica
A cintica da expresso dos genes dos HVss
durante a infeco aguda produtiva tem sido es-
tudada detalhadamente em cultivo celular, mas
acredita-se que variaes possam ocorrer in vivo
e tambm entre tipos celulares diferentes. Como
na maioria dos vrus DNA, os genes dos HV so
expressos sob regulao temporal estrita. Os ge-
nes alfa ou de transcrio imediata (IE) so os pri-
meiros a serem expressos, seguidos pelos genes
beta ou iniciais (E), gama 1 (parcialmente tardios)
e pelos genes gama 2 ou tardios (L). Embora os
genes virais sejam transcritos pela RNA polII ce-
lular com o auxlio de fatores celulares de trans-
crio, protenas virais so necessrias e auxiliam
em cada etapa de transcrio.
Aps a penetrao do vrus, o nucleocaps-
deo envolto pelo tegumento transportado para
as proximidades dos poros nucleares, de onde o
DNA viral translocado para o interior do ncleo
e rapidamente circularizado. No HSV-1, a prote-
na VP16 do tegumento liga-se a duas protenas
celulares, HGF e oct-1, formando um complexo
que se liga especicamente aos promotores dos
genes IE, ativando a sua transcrio. A ativao
da transcrio dependente da regio C-termi-
nal da VP16, que atua facilitando a reunio dos
fatores de transcrio celulares responsveis pela
maquinaria de transcrio basal. A dependncia
da VP16 parece ser maior em clulas quiescentes
e diferenciadas encontradas in vivo.
Seis produtos IE so codicados pelo HSV-
1: os polipeptdeos ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 e 47
e a protena Us1.5. Os promotores desses genes
geralmente so mais complexos do que os de ou-
tras classes de genes virais. Alm do stio para
a ligao do complexo VP16/HCF/Oct-1, esses
promotores contm stios especcos para a liga-
o de uma variedade de fatores de transcrio
do hospedeiro (Figura 6.10).
As protenas IE ICP4, ICP27 e ICP22 regu-
lam a expresso dos outros genes virais e, por-
tanto, so indispensveis para a continuao do
ciclo replicativo. A deleo experimental do gene
do ICP4, o mais importante transativador viral,
resulta em um vrus incapaz de replicar. Outras
funes dos genes IE incluem a inibio de spli-
cing de mRNA (ICP27), a modulao do sistema
de degradao das protenas celulares (ICP0) e a
reduo da expresso das ciclinas indutoras da
fase S (ICP22/Us1.5). A expresso das protenas
IE alcana o pico mximo em 2 a 4 horas aps
a infeco. Como o ICP4 capaz de reprimir a
sua prpria expresso, acredita-se que contribua
para a supresso dos genes IE, que observada
nas fases tardias da infeco.
Classe
do gene
Promotor
IE (ICP4)
E (TK)
L (UL38)
+1
ICP4
TATAA
SP1 TIF SP1 ICP4 SP1 SP1 SP1 TIF
- 300
+1
+1
TATAA DAS
+20
-30
CCATT, SP1 SP1 TATA
Inr
Figura 6.10. Organizao dos promoters dos genes de
transcrio imediata (IE), iniciais e tardios
do vrus do herpes simplex (HSV-1). Cada classe
representada pelo promotor de um determinado gene.
Os retngulos indicamos stios de ligao dos fatores de
transcrio/ transativadores. As setas indicam o incio e
direo da transcrio. IE: stios para a ligao do
complexo VP16/HCF/oct-1 (TIF), do fator de transcrio
celular SP1 e do produto do gene ICP4; TATAA (TATA
box). Inr: iniciador; DAS.
(early) (late)
Fonte: adaptado de Roizman e Knipe (2001).
As protenas codicadas pelos genes E (beta)
atingem o pico mximo de sntese cerca de 5 a 7
horas aps a infeco, embora alguns produtos
(p. ex.: a subunidade maior da ribonucleotdeo
redutase, RR) sejam sintetizados com cintica se-
melhante aos genes IE. As protenas E apresen-
tam diferentes funes, relacionadas com o me-
tabolismo de nucleotdeos e com a replicao do
DNA viral. O seu acmulo nas clulas infectadas
prenuncia o incio da replicao do DNA. Os pro-
dutos dos genes E envolvidos no metabolismo de
nucleotdeos (timidina quinase TK, dUTPase, RR)
e aqueles envolvidos na modicao e reparo do
DNA (uracil-N-glicosilase e nuclease alcalina)
no so essenciais para a replicao viral em c-
lulas de cultivo. Isto se deve ao fato de as clulas
em multiplicao expressarem enzimas prprias
com atividades semelhantes. No entanto, as pro-
tenas E so importantes in vivo e mutaes nos
seus genes resultam em vrus que apresentam
replicao deciente. Isso faz sentido principal-
mente nos alfaherpervrus HSV-1 e BoHV-1, que
so capazes de infectar diferentes tipos celulares,
inclusive neurnios. Os neurnios so clulas di-
ferenciadas que no se dividem e no expressam
protenas envolvidas no ciclo celular, incluindo
vrias protenas envolvidas no metabolismo de
nucleotdeos e na replicao do DNA. Por isso,
essas e outras protenas virais podem ser cruciais
para possibilitar a infeco de determinados ti-
pos celulares.
A expresso dos genes gama 1 inicia em n-
veis baixos aps o incio da replicao do DNA,
mas o seu nvel de expresso aumenta com o
avano do processo replicativo. Os genes gama
2 (L) comeam a ser expressos aps a sntese e
replicao do DNA viral. A transcrio dos genes
tardios ocorre a partir de genomas recm-replica-
dos, localizados em compartimentos de replica-
o nuclear, nos quais a ICP4 e a RNA polimerase
II se localizam.
Os promotores dos genes tardios consistem
de seqncias regulatrias localizadas a certa dis-
tncia dos genes, como tambm de seqncias lo-
calizadas na regio 5no-traduzida (Figura 6.10).
Alm da ICP4, a transcrio dos genes tardios
exige a presena da ICP27, uma protena multi-
funcional que estimula a transcrio das prote-
nas virais envolvidas na replicao do DNA viral.
A ICP27 movimenta-se entre o ncleo e o cito-
plasma das clulas infectadas, com funes nos
dois compartimentos. Evidncias indicam que a
ICP27 participa no recrutamento da enzima RNA
polimerase II celular para a transcrio dos ge-
nes tardios; auxilia na exportao dos transcritos
tardios para o citoplasma e estimula a traduo
desses mRNA nos poliribossomos.
No incio da expresso dos genes iniciais, as
protenas UL9 (protena viral que se liga na ori-
gem de replicao), UL29 (protena que se liga em
DNA de ta simples) e UL5, UL8 e UL52 (com-
plexo helicase-primase) se dirigem ao ncleo e
se associam ao DNA viral, formando estruturas
focais chamadas de stios pr-replicativos. Aps
o recrutamento do complexo viral de replicao
de DNA (UL30/UL42), uma frao dos stios pr-
replicativos maturam para formar os comparti-
mentos virais de replicao.
As funes mais importantes da protena
UL9 so a de ligao especca na origem de re-
plicao (ori) e a separao das cadeias de DNA
neste stio. Acredita-se que isso favorea a mon-
tagem do complexo de iniciao, incluindo a as-
sociao da DNA polimerase viral. A sntese da
cadeia contnua envolve a separao das cadeias
do DNA e a sntese de um primer pelo complexo
helicase-primase, a partir do qual a cadeia nas-
cente pode ser sintetizada de forma contnua pela
DNA polimerase. A sntese da cadeia descontnua
mais complexa e envolve mltiplos ciclos de
sntese do primer, extenso, remoo dos primers
e ligao dos fragmentos de Okazaki adjacentes.
A sntese de DNA viral ocorre pelo mecanismo
de crculo rolante (rolling circle), que resulta em
molculas longas, contendo vrias unidades do
genoma unidas linearmente entre si. Essas mo-
lculas contm as quatro possveis formas iso-
mricas do genoma (no caso do HSV-1), que so,
ento, clivadas em unidades genmicas, que so
encapsidadas nos nucleocapsdeos (Figura 6.1).
Os fatores celulares induzidos na fase inicial
da infeco, incluindo vrios componentes da
maquinaria de reparo do DNA, acumulam-se nos
160 Captulo 6
centros de replicao viral. Esses fatores parecem
ser importantes para os centros de replicao do
HSV-1 se tornarem funcionais, sugerindo que um
estresse celular pode ser necessrio para a repli-
cao eciente dos HVs.

5.6 Expresso gnica durante a infeco
latente
A expresso de genes virais durante a in-
feco latente muito restrita e apenas um ou
poucos genes virais so transcritos. Por exem-
plo, durante a latncia em neurnios de gnglios
sensoriais, o HSV-1 e o BoHV-1 sintetizam uma
srie de transcritos a partir de uma regio bem
determinada do genoma (regio associada la-
tncia, LRT; transcrito associado latncia, LAT).
As demais regies do genoma permanecem ina-
tivas em relao transcrio. A razo dessa res-
trio da transcrio desconhecida, mas o am-
biente neuronal e sinais derivados de clulas do
sistema imunolgico tm sido implicados. Vrus
recombinantes que possuem mutaes na regio
do LAT/LRT so capazes de estabelecerem infec-
es latentes, mas so defectivos na reativao,
o que sugere um papel para esses transcritos na
reativao da infeco.
5.7 Concluses
Os herpesvrus possuem um genoma mais
complexo e codicam vrias protenas envolvi-
das nos processos replicativos. Com isso, esses
vrus so capazes de replicar em uma variedade
de clulas, independente do seu estado de divi-
so ou diferenciao. Ao contrrio do que ocorre
com os vrus DNA pequenos (polioma, papiloma
e adeno), os HV no necessitam induzir as clulas
a entrarem na fase S, pois codicam e/ou trazem
nos vrions grande parte dos fatores necessrios
replicao de seu genoma. No entanto, depen-
dem da maquinaria celular de transcrio e pro-
cessamento dos mRNAs. A replicao dos HVs
geralmente induz uma supresso da sntese de
macromolculas das clulas, geralmente levando
a alteraes metablicas incompatveis com a vida
celular. O estabelecimento de infeco latente se
constitui em uma estratgia muito eciente para
permitir a permanncia do vrus no hospedeiro.
A reativao ocasional dessas infeces permite
ao vrus ser transmitido e infectar novos hospe-
deiros, perpetuando-se, assim, na natureza.
6 Poxvrus
Os poxvrus (PoxV) so vrus DNA que re-
alizam o seu ciclo replicativo incluindo a repli-
cao do genoma integralmente no citoplasma,
uma propriedade que comum tambm ao vrus
da peste suna africana (ASFV), nico membro da
famlia Asfarviridae. Como as enzimas celulares
que participam da sntese de RNA e DNA esto
localizadas no ncleo, os PoxV devem trazer nos
vrions as suas prprias enzimas e fatores auxilia-
res. Esse cenrio ilustra o nvel de independncia
relativa que esses vrus conseguiram atingir em
relao clula hospedeira. No entanto, embora
codiquem grande parte das enzimas e fatores
de transcrio, os PoxV ainda so dependentes
de vrios fatores auxiliares da clula hospedeira.
O ciclo replicativo dos PoxV foi estudado in vitro,
utilizando-se o vrus da vaccinia (VV) como mo-
delo. Apesar da sua complexidade, o ciclo repli-
cativo do VV relativamente rpido, e a prognie
viral pode ser detectada j oito horas ps-infec-
o (pi).
6.2 O genoma dos PoxVs
Mais de 50 seqncias genmicas completas,
representando vrios gneros, espcies e isolados
de campo dos PoxV j foram obtidas, permitindo
uma descrio detalhada da estrutura, organiza-
o genmica e dos genes individuais.
O genoma dos PoxV consiste de uma mo-
lcula de DNA linear de ta dupla com 130-390
kbp, contendo seqncias repetidas invertidas do
tipo hairpin (ITRs) de 0.1 a 12.4 kb nas extremi-
dades (Figura 6.11). Nos Chordopoxvirus (ChPVs),
o nmero de genes de aproximadamente 150,
embora mais de 300 genes j tenham sido deduzi-
dos no genoma do PoxV do canrio (canaripox).
A densidade gnica alta, com uma mdia de um
gene por kb.
Aproximadamente 90 dos 150 genes so
conservados no genoma de todos os ChPVs se-
qenciados at o presente, e codicam produ-
tos que participam da replicao do DNA, da
transcrio, da morfognese e da estrutura das
partculas virais. Nesses genes, tanto as regies
codicantes quanto os promotores so altamente
conservados. Em geral, grande parte dos genes
conservados esto localizados na regio central
do genoma.
Os genes localizados entre a regio central
e as extremidades do genoma tendem a ser es-
pcie-especcos e codicam protenas cujas fun-
es antagonizam a resposta imune do hospedei-
ro. Esses genes so chamados coletivamente de
genes de virulncia. Esto includos nesse grupo
os genes que codicam produtos homlogos s
citocinas e quimioquinas do hospedeiro, e genes
de receptores de citocinas e quimioquinas que
foram adquiridos do hospedeiro e modicados
durante a evoluo. Ao contrrio dos genes cen-
trais conservados, vrios genes de virulncia so
dispensveis para a replicao viral em cultivo
celular.
6.3 Expresso gnica
Como os outros vrus DNA, os PoxVs co-
ordenam os processos de replicao genmica e
morfognese por meio de uma regulao tempo-
ral da expresso de grupos de genes. A transcri-
o dos genes do VV pode ser dividida em trs
etapas: inicial, intermediria e tardia. A transcri-
o de vrios genes, no entanto, parece no obe-
decer a essa regulao estrita, ocorrendo continu-
amente ao longo do ciclo replicativo.
Os fatores de transcrio e enzimas neces-
srias para a transcrio dos genes iniciais esto
presentes nas partculas vricas infectantes. As-
sim, a transcrio desses genes inicia poucos mi-
nutos aps a penetrao viral, ainda no interior
de partculas parcialmente ntegras e, portanto,
antes do desnudamento ser completado. A trans-
crio inicial resulta na produo de aproxima-
damente 100 mRNA diferentes, que so expor-
tados do interior dos vrions para o citoplasma
para serem traduzidos. Entre as protenas dos
genes iniciais esto aquelas envolvidas nos me-
canismos de evaso do sistema imunolgico, no
desnudamento completo do genoma, na sntese
de DNA viral e na regulao da expresso dos
genes intermedirios.
Os produtos dos genes intermedirios so
principalmente fatores de transcrio utilizados
para a expresso dos genes tardios. As protenas
tardias, por sua vez, esto envolvidas na morfo-
gnese, fazem parte da estrutura das partculas
vricas e tambm incluem as enzimas e fatores de
transcrio que sero includos na prognie viral
para o prximo ciclo de replicao.
Os genes dos PoxVs so transcritos pela
RNA polimerase viral, que composta por nove
Repetio invertida Repetio invertida Seqncias nicas
160 kbp 10 kbp 10 kbp
0,9 kbp 1,3 kbp 1,3 kbp 0,9 kbp
Seqncias repetidas Seqncias repetidas
Figura 6.11. Estrutura do genoma dos poxvrus. Ogenoma consiste de uma molcula contnua de DNAde fita dupla,
sem extremidades livres. Nas duas extremidades, situam-se regies repetidas invertidas de aproximadamente 10 kb
cada. As seqncias nicas abrangemorestante dogenoma.
Fonte: adaptado de Murphy et al. (1999).
162 Captulo 6
subunidades. As duas subunidades maiores
apresentam um alto grau de similaridade nos
aminocidos, com as subunidades maiores das
RNA polimerases de eucariotas e procariotas,
mas as duas subunidades menores no apresen-
tam similaridade signicativa com as suas cor-
respondentes.
Aproximadamente a metade dos genes do
VV pertence ao grupo dos genes iniciais. Os pro-
motores desses genes possuem um resduo de
guanina (G) extremamente conservado na posi-
o 21, anqueado por uma regio varivel rica
em A-T. A transcrio dos genes iniciais requer a
RNA polimerase viral, o fator de transcrio ini-
cial (ou ETF, a nica protena de ligao ao DNA
codicada pelos PoxV) e ATP. No modelo atual,
o ETF se liga nos promotores iniciais e recruta
o complexo da RNA polimerase. A hidrlise de
ATP pelo ETF e a sua subseqente liberao do
complexo permite a RNA polimerase iniciar a
transcrio.
Estudos recentes sugerem que vrios fatores
de transcrio dos genes iniciais formam comple-
xos que se ligam aos promotores durante a mor-
fognese das partculas virais. Com isso, parte
dos fatores necessrios para a transcrio inicial
j estaria posicionada nos promotores, permitin-
do o rpido incio da transcrio, logo aps a pe-
netrao na clula hospedeira. As enzimas virais
guanilyl-transferase (capping enzyme), polimerase
poly-A e um fator de terminao da transcrio
tambm so importantes para a transcrio ini-
cial. A transcrio desses genes termina logo aps
o nal das ORFs, em resposta a uma seqncia
TTTTTNT (onde N qualquer nucleotdeo), lo-
calizada na cadeia de DNA oposta (codicante).
At o presente, nenhuma funo da clula hos-
pedeira foi identicada como necessria para a
iniciao e terminao da transcrio inicial.
Aps o desnudamento completo do geno-
ma, seguem-se as etapas de transcrio dos genes
intermedirios, a replicao do DNA e a transcri-
o dos genes tardios. Os promotores dos genes
intermedirios so bipartidos, possuindo um ele-
mento iniciador no stio de iniciao da transcri-
o e uma seqncia rica em A-T, localizada pr-
xima (na direo 5). A transcrio desses genes
requer fatores virais recm-sintetizados, como a
RNA polimerase, fatores ITF-A (helicase), ITF-B
(enzima que coloca o cap), VITF-2 (fator derivado
do hospedeiro) e B1R (protena quinase viral).
Os promotores dos genes tardios tambm
so bipartidos e contm um elemento iniciador
e uma regio rica em A-T logo acima. Alm da
RNA polimerase, trs produtos de genes inter-
medirios e um produto inicial so necessrios
para a transcrio dos genes tardios, embora as
funes desses produtos sejam desconhecidas.
Um fator de transcrio do hospedeiro tambm
parece estar envolvido na transcrio dos genes
tardios. A terminao da transcrio dos genes
tardios diferente daquela dos genes iniciais,
mas tambm requer a participao de produtos
virais.
6.4 Replicao do DNA
A replicao citoplasmtica do genoma se
constitui em um aspecto nico do ciclo replica-
tivo dos PoxV e ASFV. A replicao do DNA do
VV ocorre em fbricas virais, que so reas cito-
plasmticas totalmente envolvidas por membra-
nas derivadas do retculo endoplasmtico rugoso
(RER). O envolvimento dessas reas pelas mem-
branas do RER um processo que se completa
em, aproximadamente, 45 minutos a partir do
incio da infeco e parece ser inuenciado por
protenas virais de membrana. Em etapas tardias
da infeco, quando se inicia a morfognese, es-
ses envelopes membranosos do RER no so
mais visveis na estrutura celular.
Alguns PoxVs codicam enzimas envolvi-
das na sntese de deoxiribonucleotdeos (dNTPs),
para favorecer a sntese e replicao do DNA em
clulas que na esto em diviso. No caso do VV, a
replicao do DNA ocorre entre 3 e 12 horas ps-
infeco e resulta na produo de aproximada-
mente 10.000 cpias por clula, metade das quais
sero includas nos vrions.
Acredita-se que a replicao do DNA dos
PoxV se inicie com uma clivagem em uma das ca-
deias nas proximidades dos hairpins, seguida de
polimerizao seqencial a partir da extremidade
3, deslocamento da cadeia complementar e reso-
luo por concatmeros (Figura 6.1). A regio ter-
minal de 200 pb do genoma provavelmente serve
de origem de replicao. A resoluo/separao
dos genomas individuais requer uma protena
viral tardia, a resolvase. Partculas vricas imatu-
ras, em associao com estruturas membranosas,
acabam envolvendo o DNA e amadurecem na
forma de vrions de formato retangular.
Vrios produtos virais desempenham fun-
es importantes da replicao do genoma do
VV, incluindo a polimerase de DNA e um fator
de processividade associado; a trifosfatase de
nucleosdeos, a protena de ligao em DNA de
ta simples, a topoisomerase I, protena quina-
se e glicosilase de uracil. Mutaes em qualquer
desses genes so deletrias para a capacidade dos
vrus replicar o seu genoma.
6.5 Concluses
Os PoxVs esto entre os vrus mais com-
plexos de animais e trazem nos vrions e/ou
codicam um nmero grande de enzimas e fato-
res necessrios transcrio, processamento de
seus mRNAs e replicao do genoma. Por isso,
independem da maquinaria celular de sntese
de RNA e DNA e realizam o ciclo replicativo in-
teiramente no citoplasma da clula hospedeira.
Os PoxVs tambm codicam uma srie de pro-
dutos que antagonizam a resposta imunolgica
do hospedeiro, permitindo, assim, que o ciclo
replicativo seja completado com a mnima inter-
ferncia dos mecanismos anti-virais. A facilidade
da manipulao do genoma, assim como a sua
extenso e capacidade de suportar a insero de
grandes segmentos de DNA, tm feito dos PoxV
vrus adequados para a construo de vetores va-
cinais.
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REPLICAO DOS VRUS RNA
Maria Elisa Piccone
1
& Eduardo Furtado Flores
1
Responsvel pela seo de vrus RNA de sentido positivo.
7
1 Introduo
1.1 Diversidade de estrutura, organizao e funcionalidade dos genomas
1.2 Stios de replicao
1.3 Indelidade das replicases e diversidade gentica
1.4 Outras protenas virais envolvidas na replicao
2 Vrus com genoma RNA de sentido positivo

2.1 Genomas com uma nica ORF, sem produo de mRNA subgenmicos
2.1.1 Estrutura e organizao do genoma
2.1.2 Traduo e replicao do genoma
2.2 Genomas com mais de uma ORF e produo de mRNAs subgenmicos
2.2.1 Estrutura e organizao genmica
2.2.2 Expresso gnica e replicao do genoma
3 Vrus com genoma RNA de sentido negativo
3.1 Vrus com o genoma no-segmentado
3.1.2 Transcrio
3.1.3 Replicao do genoma

3.2 Vrus com o genoma segmentado
3.3 Vrus com o genoma ambissense
4 Vrus com RNA de ta dupla
4.1 Estrutura e organizao do genoma
4.2 Transcrio
5 Retrovrus
167
167
169
169
169
169
171
171
172
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174
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179
180
181
182
182
183
184
184
185
1 Introduo
Os vrus RNA compem um grupo amplo
e diverso de vrus que infectam desde insetos e
plantas at vertebrados superiores. So os nicos
organismos que possuem RNA como genoma, e,
por isso, precisaram se adaptar a certas condies
impostas pelas clulas hospedeiras para poder se
multiplicar. As clulas eucariotas no possuem
enzimas e reaes para a sntese de RNA a par-
tir de moldes RNA, etapa necessria para a re-
plicao do genoma desses vrus. No entanto, a
evoluo viral solucionou este impasse, pois o
genoma de um vrus RNA codica a sua prpria
enzima replicativa (RNA polimerase dependente
de RNA ou replicase). Em alguns vrus RNA, a
replicase e os fatores auxiliares para a replicao
do genoma so produzidos pela traduo dire-
ta do genoma, logo no incio do ciclo replicativo.
Em outros vrus RNA, o genoma no traduzido
diretamente e os vrions carreiam a enzima repli-
case e os fatores necessrios para a replicao do
genoma.
A replicao do genoma dos vrus RNA
(com exceo dos retrovrus) ocorre em duas eta-
pas e envolve a sntese de molculas intermedi-
rias (RNA complementar ou antigenmico). O
RNA antigenmico serve, ento, de molde para
a sntese de RNA de sentido genmico. A snte-
se de RNA com sentido de mensageiro (mRNA
ou sentido positivo) denomina-se transcrio, e
a sntese de RNA genmico denomina-se repli-
cao. Na verdade, transcrio e replicao so
termos equivalentes utilizados para designar a
sntese de molculas de RNA a partir de moldes.
A mesma enzima replicase, possivelmente assis-
tida por uma combinao diferente de fatores au-
xiliares ou submetida a modicaes qumicas,
responsvel tanto pela transcrio como pela
replicao. O complexo enzimtico envolvido na
transcrio geralmente chamado de transcrip-
tase; e o complexo responsvel pela replicao
denominado replicase.
Os retrovrus apresentam uma estratgia
de replicao nica, que difere dos demais vrus
RNA. Esses vrus possuem um genoma RNA
com sentido positivo, mas que no traduzido
diretamente. A replicao do genoma ocorre pela
produo de uma molcula de DNA complemen-
tar (provrus) que integrada aos cromossomos
celulares. A transcrio desse provrus pela RNA
polimerase II celular (RNApol II) resulta na pro-
duo do RNA para ser includo como genoma
nas partculas vricas.
A natureza do seu genoma resultou em al-
gumas conseqncias biolgicas e evolutivas
para os vrus RNA: a) a maioria deles realiza o
seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
das clulas hospedeiras, b) poucos deles utilizam
o processamento de RNA (splicing) para a gerao
de diversidade de protenas; c) a alta taxa de erro
das replicases virais, associada com a ausncia de
autocorreo, resulta em uma alta freqncia de
mutaes, o que contribui para a grande variabi-
lidade gentica e antignica desses vrus.
1.1 Diversidade de estrutura, organiza-
o e funcionalidade dos genomas
Os genomas dos vrus RNA de animais so
todos compostos por molculas lineares, porm,
apresentam diferenas quanto funcionalidade,
estrutura e organizao (Tabela 7.1). A distino
inicial se refere funcionalidade do genoma, ou
seja, existem vrus com genoma RNA de senti-
do (ou polaridade) positivo e negativo. Os vrus
RNA de sentido positivo possuem as seqncias
codicantes de protenas (open reading frames,
ORFs) no mesmo sentido do genoma, ou seja, o
seu genoma pode ser diretamente traduzido em
protenas pelos ribossomos. Dentre estes, duas
propriedades principais so reconhecidas: al-
guns vrus possuem uma nica ORF no genoma
e outros genomas possuem mais de uma ORF e
produzem RNAs mensageiros subgenmicos
(mRNAsg).
Os RNAs genmicos dos vrus RNA de sen-
tido negativo no apresentam as ORFs na mes-
ma orientao do genoma, assim, no podem ser
diretamente traduzidos em protenas. As ORFs
esto presentes no RNA complementar, de senti-
do antigenmico. Ento, a produo de suas pro-
tenas depende inicialmente da sntese de mR-
NAs pela polimerase viral trazida nos vrions.
Dentre esses vrus, existem alguns cujo genoma
composto por uma molcula contnua de RNA
168 Captulo 7
e outros cujo genoma dividido em dois ou mais
segmentos. Dentre os vrus com o genoma seg-
mentado, existem alguns que possuem o genoma
ambissense, ou seja, codicam as suas protenas
por ORFs existentes tanto no RNA de sentido ge-
nmico quanto no RNA complementar.
Todos os genomas dos vrus RNA (sentido
positivo e negativo, segmentados ou no) so
compostos por molculas de RNA de ta sim-
ples (ssRNA). Um terceiro grupo formado por
vrus que possuem ta de RNA de cadeia dupla
(dsRNA) segmentada como genoma. Estes vrus
tambm trazem a enzima polimerase nos vrions,
que necessria para a transcrio e replicao
dos segmentos genmicos.
Os retrovrus representam uma exceo en-
tre os vrus RNA. O seu genoma possui polarida-
de positiva, porm no traduzido diretamente
pelos ribossomos. A replicao dos retrovrus
envolve a transcrio reversa (sntese de DNA a
partir de RNA), integrao do DNA proviral nos
cromossomos da clula hospedeira e transcrio
do provrus pelo aparato celular de transcrio.
Apesar dessa diversidade, praticamente to-
dos esses vrus convergem para um evento cen-
tral comum: a produo de mRNA reconhecveis
e traduzveis pela maquinaria celular de tradu-
o. A nica exceo composta pelos genes que
codicam protenas no-estruturais (e estruturais
em alguns casos) entre os vrus RNA de sentido
positivo, que podem ser traduzidos diretamente
do genoma.
Tabela 7.1. Classificao dos vrus RNA de acordo com a estrutura, organizao e polaridade do genoma e local
intracelular dereplicao
Famlia ss/ds
Picornaviridae
Local intracelular
ss Positiva Citoplasma
Topologia Polaridade Segmentos
Replicao
Linear 1
Flaviviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Caliciviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Astroviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Togaviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Coronaviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Arteriviridae ss Positiva Citoplasma Linear 1
Retroviridae ss Positiva Ncleo/citoplasma Linear 2 (idnticos)
Birnaviridae ds Ambas Citoplasma Linear 2
Reoviridae ds Ambas Citoplasma Linear 10-12
Rhabdoviridae ss Negativa Citoplasma Linear 1
Filoviridae ss Negativa Citoplasma Linear 1
Bornaviridae ss Negativa Ncleo Linear 1
Paramyxoviridae ss Negativa Citoplasma Linear 1
Orthomyxoviridae ss Negativa Ncleo Linear 7-8
Bunyaviridae ss
Negativa ou
ambissense
Citoplasma Linear 3
Arenaviridae ss Ambissense Citoplasma Linear 2
RNA genmico
Replicao dos vrus RNA 169
1.2 Stios de replicao
Com exceo dos vrus das famlias Or-
thomyxoviridae e Bornaviridae, cuja replicao do
genoma ocorre no ncleo; e dos retrovrus, em
que o ciclo replicativo ocorre parte no citoplasma
e parte no ncleo, os demais vrus RNA realizam
o seu ciclo replicativo inteiramente no citoplasma
da clula hospedeira. Esses vrus so, portanto,
independentes da maquinaria nuclear de snte-
se e processamento de RNAs. Os ortomixovrus
replicam o genoma no ncleo e so dependentes
de oligonucleotdeos com cap, que so subtrados
dos mRNA celulares. Estes vrus, alm dos retro-
vrus, dependem ainda da maquinaria de pro-
cessamento de mRNAs celulares (splicing) para
o processamento de alguns de seus transcritos.
Alguns vrus RNA que replicam no citoplasma
(paramixovrus) utilizam mecanismos alternati-
vos para modicar os seus transcritos e produzir
diferentes protenas a partir de um mesmo gene.
1.3 Indelidade das replicases e
diversidade gentica
As replicases dos vrus RNA (RNAs poli-
merases dependentes de RNA) apresentam uma
taxa de erro aproximadamente 1.000 a 10.000 ve-
zes superior s polimerases de DNA. Alm disso,
essas enzimas no possuem a atividade de proo-
freading (correo de nucleotdeos incorretos adi-
cionados durante a sntese). O resultado disso
que pelo menos uma mutao em ponto pode ser
introduzida a cada replicao do genoma, o que
tem uma grande implicao para a diversidade e
evoluo desses vrus. Como conseqncia, uma
populao de vrus RNA no constituda por
uma prognie clonal homognea, e sim por uma
mistura de variantes agrupados em torno de uma
seqncia predominante e mais abundante. Essa
populao heterognea de vrus que compe
uma espcie viral denominada quasi-species. A
gerao contnua dessa populao heterognea
se constitui em uma grande vantagem evolutiva
para os vrus RNA, pois permite que variantes
geradas ao acaso possam apresentar vantagem
evolutiva e rapidamente se sobressair na popu-
lao quando submetidos determinada presso
de seleo. A rpida taxa de evoluo desses v-
rus possui implicaes importantes na epidemio-
logia, patogenia, diagnstico e para a produo
de vacinas.
1.4 Outras protenas virais envolvidas
na replicao
Alm das replicases, outras protenas que
participam da sntese de RNA so codicadas
por esses vrus. As funes exercidas por essas
protenas so diversas e incluem: a) direciona-
mento da polimerase e/ou do genoma aos locais
da clula onde ocorre a replicao; b) facilitao
do reconhecimento do stio de iniciao da snte-
se de RNA pela polimerase; c) encapsidao do
genoma RNA para a transcrio e replicao; d)
aumento da anidade da polimerase pelo RNA;
e) aumento da atividade da polimerase; f) sepa-
rao das cadeias de RNA para a polimerizao
(atividade de helicase); g) alterao da especi-
cidade da polimerase pelo molde RNA (troca de
transcrio para replicao). Ou seja, esses vrus
codicam uma srie de protenas, algumas com
atividades enzimticas, que atuam como co-fato-
res no processo de sntese de RNA e replicao
do genoma.
Alm de protenas, a sntese de RNAs virais
envolve a participao de componentes celulares,
denominados genericamente fatores do hospe-
deiro. A especicidade, as etapas de participao
e a dependncia relativa de fatores do hospedei-
ro para a sntese de RNA viral variam entre os
vrus.
2 Vrus com genoma RNA de sentido
positivo
Por denio, esses vrus codicam as suas
protenas no sentido do RNA genmico, ou seja,
as seqncias abertas de leitura (ORFs) que co-
dicam as protenas virais esto presentes na
mesma orientao do genoma. Por isso, o RNA
genmico pode ser usado como mRNA e ser di-
retamente traduzido pelos ribossomos. Os vrus
desse grupo possuem algumas caractersticas em
comum: a) replicam no citoplasma da clula hos-
pedeira; b) o RNA genmico serve de mRNA e
pode ser traduzido; c) o RNA genmico desprovi-
do de protenas infeccioso quando introduzido
170 Captulo 7
nas clulas; d) as protenas virais so sintetizadas
como poliprotenas precursoras. Essas polipro-
tenas so imediatamente clivadas em protenas
individuais por proteases virais e/ou celulares;
e) os vrions no contm enzimas.
As infeces por vrus RNA de sentido po-
sitivo no so exclusivas dos animais, e um gran-
de nmero desses agentes pode infectar tambm
bactrias ou plantas, constituindo gneros que
so classicados dentro dessas famlias de vrus.
Sete famlias de vrus animais possuem ge-
noma RNA de sentido positivo, e todos possuem
o genoma no-segmentado: 1) Picornaviridae, 2)
Flaviviridae, 3) Caliciviridae, 4) Astroviridae, 5) To-
gaviridae, 6) Arteriviridae e 7) Coronaviridae.
A replicao do genoma desses vrus envol-
ve a ao conjunta de vrios componentes, que
incluem protenas virais, seqncias especcas
no RNA viral e, provavelmente, vrios compo-
nentes celulares, como protenas e membranas.
Uma diferena fundamental entre grupos
de vrus RNA de sentido positivo se refere exis-
tncia de uma ou mais ORFs no genoma e a pro-
duo ou no de mRNAs subgenmicos (Figura
7.1; Tabela 7.2).
Figura 7.1. Estrutura e organizao do genoma dos vrus RNAde sentido positivo. As linhas contnuas representamo RNA
genmico; os retngulos representamos genes. Alocalizaodas ORFs e dos mRNAsubgenmicos tambmestindicada.
5
mRNA subgenmicos
5'
Pol
S E M N
NsP1 NsP2 NsP3 NsP4 C E3 E2 E1
Cap
Cap
3'
3'
3'
3'
3
L VP4 VP2 VP3 VP1 2A 2B 2C 3A 3B 3C 3D VPg polyA
Picornaviridae (FMDV) 7 - 8.5kb
Caliciviridae 7.3 - 8.3kb
Astroviridae 6.8kb
pro
N C
ms
E E1 E2 NS2-3 NS4-A NS4-B NS5A NS5B
Flaviviridae Pestivirus (gnero , BVDV) 12,3kb
poliC
poliA
poliA
poliA
poliA
poliA
VPg
VPg
ORF1
ORF1
ORF2
ORFs2-7
5-7 ORFs
ORF2
ORF2
ORF3
capsdeo p32 NTPase P30 VpG P76 (Pro - pol)
mRNA subgenmico
mRNA subgenmico
mRNA subgenmicos
ORF1a
ORF1b
Pro Pol Capsdeo
mRNA subgenmico
Togaviridae 9.7 - 11.8kb
Arteriviridae 13 - 15kb
Coronaviridae 27 - 32kb
L
L
ORF 1a ORF 1b
L a 2 b
4
3
5
6
7 3
3
5'
5'
5'
5'
5'
ORF nica
ORF nica
Cap
2 HE 4
L
ORF1a
ORF1b
Nos vrus que possuem uma nica ORF no
genoma, todas as protenas so produzidas pela
traduo direta do RNA genmico, originando
uma longa poliprotena. Esta poliprotena cliva-
da por proteases celulares e/ou virais, originan-
do as protenas individuais. A clivagem ocorre
medida que a traduo vai se desenvolvendo, de
modo que a poliprotena inteira nunca detecta-
da nas clulas infectadas. Nesses vrus, os genes
que codicam as protenas estruturais esto loca-
lizados no tero 5 do genoma; enquanto as pro-
tenas no-estruturais inclusive a polimerase
viral so codicadas pelo restante do genoma
(Figura 7.1).
Entre os vrus em que o genoma possui mais
de uma ORF, as protenas no-estruturais (e a
polimerase) so codicadas na regio prxima
extremidade 5 do genoma (dois teros do geno-
ma). Apenas a ORF localizada na regio prxi-
ma extremidade 5 traduzida diretamente do
RNA genmico, resultando na sntese das prote-
nas no-estruturais, inclusive a polimerase viral.
A(s) outra(s) ORF(s) embora estejam presentes
no sentido do RNA genmico so expressas a
partir de RNAs subgenmicos (mRNAsg), que
so produzidos a partir da transcrio das mo-
lculas de RNA complementar (antigenmicos),
ou seja, esses vrus produzem uma parte de suas
protenas (no-estruturais) pela traduo direta
do genoma e outra parte pela traduo de mR-
NAs subgenmicos (Figura 7.1).
Nesta seo, sero apresentados alguns as-
pectos das principais estratgias utilizadas pelos
vrus RNA de sentido positivo para expressar os
seus genes e replicar o seu genoma, utilizando
exemplos de diferentes famlias.
2.1 Genomas com uma nica ORF, sem
produo de mRNA subgenmicos
Importantes vrus animais e de humanos
esto includos neste grupo, que composto por
membros das famlias Picornaviridae e Flaviviri-
dae. Dentre os patgenos humanos, esto o po-
liovrus, os rinovrus, os vrus da dengue e febre
amarela, e o vrus da hepatite C. Os principais
vrus animais deste grupo so: o vrus da febre
aftosa (FMDV, um picornavrus), que possui um
impacto sanitrio e econmico notvel na bovi-
nocultura e na economia de vrios pases; e os
pestivrus (famlia Flaviviridae) vrus da diarria
viral bovina (BVDV) e vrus da peste suna cls-
sica (CSFV).
O genoma desses vrus contm uma ORF
nica e longa, que abrange quase toda a extenso
* Protena terminal associada extremidade 5' do genoma.
** Apenas os vrus do gnero
*** Pestivrus, hepacivrus.
**** Pestivrus (BVDV).
Flavivirus.
Famlia
Picornaviridae
RNA
subgenmicos
7,2 - 8,5 VPG*, IRES poliA
Genoma (kb)
Extenso (kb) Extremidades 5' 3'
no
Flaviviridae 9,6 - 12,3 cap**,IRES*** poliC**** no
Astroviridae 6,8 VPG poliA sim (1)
Caliciviridae 7,3 - 8,3 VPG poliA sim (1)
Arteriviridae 13 - 15 cap poliA sim (6)
Togaviridae 9,7 - 11,8 cap poliA sim (1)
Coronaviridae 27 - 32 cap poliA sim (5-7)
Tabela 7.2. Principais caractersticas do genoma dos vrus RNA de polaridade positiva
172 Captulo 7
do genoma (Figura 7.1). Essa ORF anqueada
por duas regies no-traduzidas (5UTR, 3UTR),
que possuem extenses variveis, de acordo com
o vrus (podem atingir at 1.100 nt em alguns pi-
cornavrus). A extremidade 5 do genoma possui
estruturas especializadas que so importantes
para o direcionamento do genoma para o local da
replicao (5VPg), para o incio da traduo (cap
ou IRES) e replicao. A extremidade 3 polia-
denilada ou possui uma seqncia de citosinas,
como no caso dos pestivrus (Figura 7.1; Tabela
7.2). A regio 3 UTR geralmente menor e pos-
sui seqncias importantes para a replicao do
genoma.
2.1.2 Traduo e replicao do genoma
A primeira etapa na replicao desses vrus
a traduo do genoma em uma nica poliprote-
na, que a precursora de todas as protenas virais
(Figura 7.2). Essa poliprotena clivada seqen-
cialmente, medida que produzida, originan-
do os precursores intermedirios e, nalmente,
as protenas virais maduras. Nos picornavrus,
as clivagens so realizadas essencialmente por
proteases virais; nos membros da famlia Flavivi-
ridae, essas clivagens so realizadas por proteases
virais e celulares.
Uma das protenas maduras produzidas
pela traduo do genoma a replicase viral (poli-
merase de RNA dependente de RNA), que se en-
carrega de replicar o genoma. A replicao ocorre
em duas etapas: a) sntese de uma molcula de
RNA complementar (com a extenso do genoma)
e b) sntese de cpias de RNA de sentido gen-
mico a partir do RNA complementar. As mol-
culas de RNA de sentido genmico possuem trs
funes: a) servem de mRNA para a produo da
poliprotena; b) servem de molde para a sntese
de RNA complementar; e c) so encapsidadas
5'-
-3'
3'
L VP4 VP2 VP3 VP1 2A 2B 2C 3A 3B 3C 3D VPg
5'
ORF nica
IRES
Poliprotena
L
L P1 P2 P3
VP3 VP1 2A VP2 2B 2C 3A 3B 3C 3D VP4
Clivagem
Clivagem
Protenas estruturais Protenas no-estruturais
Figura 7.2. Organizao do genoma e expresso gnica de umpicornavrus (vrus da febre aftosa, FMDV). Aestrutura
IRES, reconhecida pelos ribossomos, est demonstrada na regio 5' no-traduzida. A ORF nica e longa traduzida
pelos ribossomos em uma longa poliprotena, que vai sendo clivada por proteases celulares medida que
produzida. As clivagens seqenciais originamprecursores intermedirios e, finalmente, as protenas virais maduras.
como genoma nas novas partculas virais (Figura
7.3). Aps a morfognese dos vrions, ocorre lise
celular e a prognie viral liberada.
A cintica de replicao dos picornavrus
rpida e o ciclo completado em cinco a dez
horas. O RNA viral (vRNA) traduzido direta-
mente pelos polirribossomos, mas, aproximada-
mente 30 minutos aps a infeco, a sntese de
protenas celulares reduzida drasticamente.
Essa supresso da sntese protica a causa pri-
mria das alteraes morfolgicas celulares que
acompanham a infeco, genericamente denomi-
nadas como efeito citoptico (ECP). A supresso
parece ocorrer pela clivagem de fatores de tra-
duo celulares envolvidos no reconhecimento e
ligao s estruturas cap dos mRNAs celulares,
evento necessrio para o incio da traduo. Essa
clivagem atribuda protease 2A dos rinovrus
e enterovrus, e protease L do FMDV. Alguns
vrus deste grupo (a maioria dos isolados dos
pestivrus) so excees e no so citolticos.
Embora o genoma desses vrus se comporte
como mRNA e possa ser traduzido em protenas,
a sua estrutura diferente dos mRNA celulares.
Alm de codicar as protenas virais, esta mol-
cula possui importantes seqncias conservadas
e estruturas secundrias na regio 5 no-traduzi-
da (UTR). Entre as estruturas funcionais mais im-
portantes desta regio, destaca-se uma estrutura
secundria altamente complexa denominada In-
ternal Ribosomal Entry Site (IRES). Esta estrutura
direciona os ribossomos ao cdon de iniciao
da traduo, sobrepondo-se ao mecanismo usual
de iniciao da traduo dos mRNAs celulares.
Estruturas IRES j foram identicadas nos geno-
mas dos poliovrus, vrus da encefalomiocardite
(EMCV), FMDV, vrus da hepatite A e em alguns
membros da famlia Flaviviridae (vrus da hepati-
te C [HCV] e BVDV).
O mecanismo pelo qual o aparato de tradu-
o celular reconhece o IRES permanece desco-
nhecido, mas a participao de vrios fatores de
iniciao, alm de outros fatores celulares, tem
sido proposta. Ao contrrio dos poliovrus e dos
pestivrus, o genoma dos vrus do gnero Flavivi-
rus possui uma estrutura cap na extremidade 5,
mas parece ser traduzido por um novo mecanis-
mo que no depende do cap.
A regio 5 UTR do genoma dos vrus RNA
de sentido positivo tambm contm sinais para a
replicao do genoma. O balano entre traduo e
replicao parece ser mediado pela interao des-
sa regio com protenas virais e celulares. Outra
estrutura essencial para a replicao, conhecida
como sinal cis-acting de replicao (cre), tem sido
identicado no genoma de vrios vrus. Essas
Figura 7.3. Ilustrao simplificada das etapas de replicao dos vrus das famlias . O
genoma RNA , inicialmente, traduzido em protenas (1). A RNA polimerase produzida nesta etapa sintetiza o RNA
complementar (2) e, a seguir, cpias de sentido genmico (3). Alm de ser traduzido em protenas, o RNA de sentido
genmicoserve de molde para a sntese doRNAcomplementar e, posteriormente, encapsidadonas novas partculas
vricas (4).
Picornaviridae e Flaviviridae
5'-
-5'
-3'
3'-
RNA genmico (+)
RNA antigenmico (-)
Traduo (1) Encapsidamento (4)
Protenas
Replicao
2
3
174 Captulo 7
estruturas, embora aparentemente responsveis
pela mesma funo, esto localizadas em regies
diferentes dos genomas.
A regio 3 UTR do genoma contm estrutu-
ras secundrias e tercirias que so importantes
durante a replicao do genoma. Acredita-se que
ocorre uma interao direta entre as duas UTRs
(5 e 3) durante a traduo e replicao, mediada
por complexos do RNA com protenas. Existem
ainda evidncias de circularizao do genoma do
vrus da dengue (um avivrus) atravs de inte-
rao fsica entre as UTRs 5 e 3.
Durante a sua replicao, os picornavrus in-
duzem a proliferao de estruturas membranosas
envolvidas na replicao viral. Essas membranas
podem fornecer fatores celulares necessrios para
a replicao do RNA. Vrias protenas celulares
que interagem com o RNA genmico tm sido
identicadas e, em alguns casos, tm sido asso-
ciadas funcionalmente com a replicao.
2.2 Genomas com mais de uma ORF e
produo de mRNAs subgenmicos
Vrios patgenos animais e humanos utili-
zam esta estratgia de expresso gnica e replica-
o do genoma. Incluem-se entre eles os togav-
rus Sindbis e vrus das encefalites eqinas (EEEV,
VEEV e WEEV), os calicivrus (calicivrus felino,
FCV), os coronavrus (vrios patgenos animais
e humanos), os arterivrus (PRRSV, vrus da arte-
rite eqina) e os astrovrus. Pela sua organizao
genmica e estratgia de expresso similares, os
membros das famlias Coronaviridae e Arteriviri-
dae so agrupados na ordem Nidovirales. Os vrus
deste grupo de famlias apresentam vrias simi-
laridades de estrutura, organizao genmica e
expresso gnica com o grupo anterior, porm
tambm apresentam importantes diferenas.
2.2.1 Estrutura e organizao genmica
Os vrus deste grupo possuem molculas
de RNA de polaridade positiva como genoma,
com extenso entre 6.8 kb (astrovrus) a 32 kb
(coronavrus). Dependendo da famlia, a extre-
midade 5 possui uma protena ligada (VPg) ou
uma estrutura cap, enquanto a extremidade 3
poliadenilada. Os genes que codicam as pro-
tenas no-estruturais esto localizadas nos dois
teros prximos extremidade 5, e os genes das
protenas estruturais ocupam o tero restante do
genoma. Uma caracterstica comum a todos es-
ses vrus a produo de mRNA subgenmicos
(mRNAsg), em nmero e extenso variveis, que
so traduzidos nas protenas estruturais.
2.2.2 Expresso gnica e replicao do
genoma
A expresso gnica e a replicao do geno-
ma desses vrus apresentam algumas semelhan-
as com o grupo anterior: a) o genoma serve de
mRNA e traduzido diretamente pelos ribosso-
mos; b) a traduo resulta na produo de poli-
protenas, que so posteriormente clivadas nas
protenas individuais; e c) a replicao do geno-
ma ocorre via produo de um RNA de sentido
antigenmico. As principais diferenas se refe-
rem organizao do genoma (posio dos genes
das protenas estruturais versus no-estruturais),
nmero de ORFs e produo de mRNAsg.
Dentre esses vrus, os mais estudados so os
coronavrus e os togavrus. A seguir, ser descrita
a expresso gnica e replicao do vrus Sindbis,
um togavrus responsvel por encefalomielite
aguda em camundongos e extensivamente es-
tudado como modelo para diversos aspectos da
Virologia.
O genoma desse vrus contm duas ORFs,
cada uma codicando quatro protenas (Figura
7.4). Inicialmente, a ORF situada prxima ex-
tremidade 5 do genoma traduzida, resultando
na produo de uma poliprotena. Esta poliprote-
na clivada medida que vai sendo produzida,
originando as protenas no-estruturais, incluin-
do a replicase viral. Esta polimerase sintetiza,
ento, uma cpia de RNA de sentido negativo
(complementar ou antigenmica) com a extenso
completa do genoma. A molcula de RNA com-
plementar serve para dois propsitos: a) molde
para a sntese de RNAs de sentido e extenso ge-
nmicos que so encapsidados na prognie viral
e b) molde para a sntese de mRNAs subgenmi-
cos. Esses mRNAsg so traduzidos em uma poli-
protena que origina, por clivagem, as protenas
do capsdeo e envelope. Os nucleocapsdeos se
formam no citosol, pela associao de mltiplas
cpias da protena do capsdeo com o genoma
RNA. As glicoprotenas do envelope so inseri-
das em membranas de organelas celulares, e os
vrions maturam por brotamento na membrana
plasmtica.
A transcrio dos mRNAs (uma nica esp-
cie, no caso dos togavrus) ocorre por iniciao
em um stio ou promotor interno. Uma vez sin-
tetizados, esses mRNAsg no so reconhecidos
como molde pela polimerase viral e apenas ser-
vem para a traduo nas protenas estruturais.
Essa estratgia permite a separao temporal da
sntese de protenas regulatrias (iniciais) e estru-
turais (tardias). A replicao desses vrus um
pouco mais complexa do que a dos picornavrus,
e a clula deve manter a sua integridade para
permitir o brotamento contnuo das novas par-
tculas vricas. De fato, a reduo da sntese pro-
tica celular muito menos dramtica at mesmo
em fases tardias da infeco.
A replicao dos calicivrus e astrovrus no
tem sido to caracterizada como os togavrus,
pois alguns desses vrus no replicam com eci-
ncia em cultivo celular. No entanto, os vrus de
ambas as famlias tambm produzem mRNAsg
durante a sua replicao.
Os coronavrus e arterivrus replicam fazen-
do uso de um mecanismo similar. Nos coronav-
rus, uma srie de 5 a 7 mRNAsg sobrepostos so
produzidos pela transcrio do RNA antigen-
mico (Figura 7.1). Cada mRNAsg inicia com uma
regio lder 5 idntica (com cap), o que indica um
mecanismo mais complexo de iniciao do que o
simples reconhecimento de um promotor inter-
no. Todos os mRNAsg possuem a mesma extre-
midade 3 e so traduzidos em vrias protenas
estruturais.
A exemplo dos outros vrus RNA de sentido
positivo, a replicao desse grupo de vrus ocorre
em complexos replicativos associados com mem-
branas intracelulares. As estruturas formadas e a
origem das membranas envolvidas, no entanto,
variam entre os vrus. Por exemplo, os complexos
replicativos de vrios picornavrus e avivrus
so associados com o retculo endoplasmtico,
enquanto os togavrus utilizam tambm as mem-
branas dos endossomos e lisossomos como stios
de replicao.
Poliprotena
Traduo
NSP1 NSP2 NSP3 NSP4
Clivagem
Replicao
5 3
RNA antigenmico (negativo)
Transcrio
Transcrio
Cap A (n)
RNA subgenmico
Traduo
Poliprotena
C
Clivagem
E3 E2 E1
m
NsP1 NsP2 NsP3 NsP4 C E3 E2
3' 5'
E1
A(n) Cap
Protenas no-
estruturais
Figura 7.4. Ilustraoesquemticadaexpressognicae replicaodos togavrus (vrus Sindbis).
176 Captulo 7
3 Vrus com genoma RNA de sentido
negativo
Os vrus com genoma RNA de sentido nega-
tivo apresentam uma maior diversidade do que
o grupo anterior. Esses vrus possuem o genoma
geralmente mais extenso e codicam um nmero
maior de protenas. Essa complexidade pode de-
ver-se s diculdades adicionais da sua expresso
gnica e replicao, o que faz com que necessitem
codicar mais protenas e com funes diversas.
Os genomas dos vrus RNA de sentido ne-
gativo no so traduzidos diretamente em pro-
tenas, pois no possuem as ORFs no sentido ge-
nmico. Ao contrrio, as ORFs esto presentes na
ta de RNA complementar (RNA antigenmico).
A sntese das protenas virais, portanto, requer a
prvia produo de mRNAs. Estes mRNAs so
transcritos pela transcriptase/replicase viral,
usan do o RNA genmico como molde. Como o
RNA genmico no traduzido diretamente e
assim a polimerase no produzida no incio do
ciclo, como no grupo anterior esses vrus neces-
sitam trazer, nos vrions, as enzimas necessrias
para a sntese de RNA antigenmico e mRNA.
Os vrus RNA de sentido negativo compar-
tilham algumas caractersticas, tais como: a) os
vrions contm cpias da enzima replicase; b)
o RNA genmico desprovido de protenas no
infeccioso; c) so produzidos mRNAs indivi-
duais para cada gene, ou seja, so RNAs mono-
cistrnicos; d) os mRNAs possuem 5cap e so
poliadenilados (existem excees); e) o genoma
permanece associado com protenas durante a
transcrio e replicao; f) o RNA genmico de
vrios desses vrus forma estruturas semelhantes
a cabos de panela (panhandles), pela associao de
seqncias complementares presentes nas extre-
midades.
Neste grupo so encontrados vrus com dois
tipos de organizao genmica: os vrus com o
genoma no-segmentado, ou seja, uma molcula
nica de RNA; e os vrus com o genoma dividido
em vrios segmentos.
A estratgia de expresso gnica e replica-
o do genoma dos vrus RNA de sentido negati-
vo muito similar. Cada gene origina um mRNA
que codica uma protena, ou seja, so mRNAs
monocistrnicos. A replicao do genoma ocorre
por meio da produo de uma molcula de RNA
complementar (antigenmico), que serve de mol-
de para a sntese de RNA genmico.
Nos vrus com o genoma no-segmentado,
so produzidos vrios mRNAs de extenso cur-
ta, cada um correspondendo a um nico gene.
medida que os mRNAs so transcritos, ocorre a
atenuao da transcrio, sendo produzida uma
quantidade maior de mensageiros dos genes loca-
lizados na extremidade 3 do genoma. Esses mR-
NAs sero traduzidos em protenas. A produo
do RNA complementar (intermedirio na repli-
cao do genoma) envolve a transcrio completa
do genoma. Para isso, a replicase ignora os sinais
de terminao de cada gene e prossegue transcre-
vendo at a extremidade 5 da molcula molde.
Nos vrus com o genoma segmentado, cada
segmento genmico codica um ou ocasional-
mente dois produtos. Cada mRNA corresponde
aproximadamente extenso completa do res-
pectivo segmento genmico. Esses mRNAs pos-
suem 5 cap e so poliadenilados na extremida-
de 3. Os RNAs antigenmicos que serviro de
molde para a sntese de cpias de RNA genmico
possuem uma extenso semelhante, mas no
possuem cap na extremidade 5 e nem poliA na
extremidade 3.
3.1 Vrus com o genoma no-segmentado
Os membros de quatro famlias de vrus
possuem genoma RNA negativo no-segmenta-
do (Tabela 7.1). As famlias Paramyxoviridae, Fi-
loviridae, Bornaviridae e Rhabdoviridae compem
a ordem Mononegavirales, pelas semelhanas na
estrutura e organizao genmica, estratgia de
expresso gnica e replicao do genoma e por
semelhanas estruturais e funcionais das prote-
nas. Uma caracterstica marcante da replicao
desses vrus a grande estabilidade do complexo
ribonucleoprotena (genoma + nucleoprotena,
RNP). Esse complexo nunca desfeito durante
as diferentes etapas do ciclo replicativo, ou seja,
a transcrio e a replicao ocorrem utilizando,
como substrato (ou molde), um RNA fortemente
recoberto por mltiplas cpias da nucleoprotena
(N ou NP). Esses vrus apresentam tambm um
mecanismo interessante de regulao na trans-
crio dos diferentes genes, chamado de atenu-
ao da transcrio, o que resulta na produo
de quantidades de protenas de acordo com a
necessidade do vrus. Os bornavrus apresentam
alguns aspectos nicos, como a transcrio e re-
plicao nuclear, splicing alternativo dos transcri-
tos primrios policistrnicos, uso diferencial de
sinais de incio e trmino de transcrio. Esses
aspectos os distinguem dos paramixovrus, lo-
vrus e rabdovrus.
As seguir, sero abordados os principais
aspectos da expresso gnica e replicao do v-
rus da estomatite vesicular (VSV), um membro
da famlia Rhabdoviridae. Grande parte das infor-
maes se aplica tambm aos outros membros da
ordem Mononegavirales.
3.1.1 Estrutura e organizao
do genoma
A estrutura e organizao do genoma de
vrus representativos das trs famlias que com-
pem a ordem Mononegavirales esto apresenta-
dos na Figura 7.5. Variaes na extenso do geno-
ma, no nmero de genes e na extenso das regies
intergnicas (IR) so encontradas nos vrus das
diferentes famlias. Porm, todos eles possuem
um grupo principal de genes em comum e a or-
ganizao genmica muito semelhante.
O genoma do VSV formado por uma mo-
lcula de RNA linear de ta simples, com apro-
ximadamente 11 kb. Os rabdovrus, em geral,
codicam um mnimo de cinco genes, na ordem
3 N P M G L 5, e o VSV codica outras
duas pequenas protenas (C e C) em outra fase
de leitura do gene P. Nos paramixovrus, vrias
protenas so produzidas a partir do gene P, pela
utilizao de diferentes cdons de iniciao, tra-
duo de diferentes ORFs e por um mecanismo
de edio. Neste mecanismo, so adicionadas
uma, duas ou trs guaninas (G) em um determi-
nado ponto do mRNA, resultando em mudana
de fase de leitura a partir deste local. Prximo
extremidade 3, existe uma regio no-codican-
te, que transcrita em um polinucleotdeo deno-
minado lder. A seqncia lder possui 47 nt (no
Figura 7.5. Estrutura e organizao do genoma de trs vrus representativos das famlias que compem a ordem
A) (vrus da estomatite vesicular, VSV); B) (vrus da cinomose,
CDV); C) (vrus Ebola). O genoma consiste de uma molcula linear de RNA de polaridade negativa,
representada pelotraocontnuo. Os blocos representamos genes, comregies intergnicas (IRs) entre eles. NouNP):
nucleoprotena; P: fosfoprotena (C e V, produtos secundrios do gene P); M (VP40): protena da matriz; G:
glicoprotena do envelope; F: protena de fuso; H: protena de ligao aos receptores, hemaglutinina; L: polimerase
viral. VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP35: cofator para a transcrio e replicao; VP30: nucleoprotena
menor; VP24: protena doenvelope. Onmerodegenes podevariar entre os vrus decadafamlia.
Mononegavirales. Rhabdoviridae Paramyxoviridae
Filoviridae
3
3
3
5
5
L
L
N
NP
P
VP35
M
VP40
G
GP
VP30 VP24
M N
F H L
5'
P/C/V
A
B
C
Rhabdoviridae (VSV)
(11-15kb)
Paramyxoviridae
(15-16kb)
Filoviridae
(19kb)
178 Captulo 7
VSV), no possui cap, no poliadenilado e no
traduzido em protena. Logo aps, existe um sinal
para o incio da transcrio do primeiro gene, que
seguida da adio de 5 cap no mRNA resultan-
te. Entre os genes, existem as regies intergnicas
(IR), sendo que cada uma possui um sinal para a
terminao da transcrio do gene anterior, uma
pequena regio interveniente e um sinal para a
iniciao da transcrio do gene subseqente (Fi-
gura 7.6). Prximo extremidade 5, existe uma
regio no-traduzida, denominada trailer. Em to-
das as etapas da replicao, o genoma permanece
fortemente associado com mltiplas cpias da
nucleoprotena N, formando o complexo ribonu-
cleoprotena (RNP).
3.1.2 Transcrio
Aps a penetrao e perda do envelope, o
nucleocapsdeo (RNA + protena) serve de molde
para a transcrio, que realizada pela replicase
viral. O complexo replicase formado pelas pro-
tenas L e P. A transcrio se inicia na extremi-
dade 3, a partir de onde a transcriptase sinteti-
za a seqncia lder de 47 nt. Segue-se, ento, a
transcrio individual e seqencial de cada gene,
resultando em mRNAs individuais que possuem
a estrutura cap na extremidade 5 e so poliadeni-
lados na extremidade 3. A cada regio intergni-
ca, a transcriptase faz uma pausa de aproximada-
mente 1 a 2 minutos e prossegue transcrevendo o
gene seguinte. No entanto, apenas 70 a 80% das
replicases prosseguem transcrevendo o prximo
gene. As demais se dissociam do genoma e ces-
sam a transcrio. Esse mecanismo de transcrio
seqencial, acompanhado de reduo do nme-
ro de transcriptases que prosseguem a sntese de
RNA aps cada IR, gera um gradiente de transcri-
o que importante para a regulao da quanti-
dade de mRNA produzido de cada gene. Assim,
Figura 7.6. Organizao do genoma e estratgia de transcrio do vrus da estomatite vesicular (VSV) da famlia
. O genoma representado pela linha contnua (as extremidades 3' e 5' e a seqncia lder esto
indicados). Os blocos representam os genes, com o nmero respectivo de nucleotdeos. Acima do genoma est
apresentada a seqncia comumdas regies intergnicas (IR), comos sinais para a terminao e incio da transcrio
dos genes subseqentes. Abaixo do genoma, esto representados os mRNAs produzidos pela transcrio seqencial
dos genes. O nmero relativo de mRNAs decresce medida que a transcrio se distancia do seu incio. N)
nucleoprotena; P) fosfoprotena; M) protena damatriz; G) glicoprotenadoenvelope; L) polimerase.
Rhabdoviridae
3 5
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
L = 6380 N = 1333 P = 821 M = 838 G = 1672
N
mRNA
P
mRNA
M
mRNA
G
mRNA
L
mRNA
IR
Lder = 47nt
IR IR
IR
AUACUUUUUUUGAUUGUC
UAUG AACAG A
A
A
A
A
m
7
G
Terminao Iniciao
Regio intergnica IR
cada gene localizado na direo 5 do genoma
transcrito por um nmero progressivamente me-
nor de transcriptases, resultando em quantidades
decrescentes de mRNAs. Esse mecanismo de-
nominado atenuao da transcrio (transcription
attenuation). (Figura 7.6).
3.1.3 Replicao do genoma
A replicao do genoma inicia em um de-
terminado momento do ciclo, aps a sntese de
quantidade suciente de protenas virais, prin-
cipalmente de nucleoprotena. A replicao do
genoma desses vrus ocorre em duas etapas e
envolve a sntese de uma molcula de RNA com-
plementar com a extenso total do genoma. A
replicase no interrompe a transcrio a cada IR,
ignorando os sinais de terminao da transcrio
at a extremidade 5. Os mecanismos respons-
veis pela transio entre transcrio descontnua
(sntese de mRNAs) e transcrio contnua (snte-
se de RNA complementar) no so completamen-
te conhecidos, mas parecem ser dependentes do
acmulo da protena N (e provavelmente a P) nas
etapas iniciais do ciclo. Mltiplas cpias da prote-
na N se conjugariam fortemente com o transcri-
to lder, provocando um sinal de antiterminao,
que interferiria com a capacidade da replicase de
reconhecer os sinais de terminao presentes no
nal de cada gene, resultando na sntese de uma
molcula de RNA complementar com a extenso
do genoma (Figura 7.7). Outro modelo para a
troca do modo de transcrio descontnua para
a replicao sugere que dois complexos enzim-
ticos diferentes seriam responsveis por cada um
desses mecanismos. A fosforilao da protena P,
que faz parte do complexo, converteria o com-
plexo transcriptase (que realiza a transcrio des-
contnua) em complexo replicase (que realiza a
transcrio contnua).
O RNA antigenmico serve de molde para a
sntese das cpias genmicas. Esse processo fa-
cilitado pela inexistncia de sinais de terminao
da transcrio neste sentido do RNA. Tanto a sn-
tese de RNA antigenmico como a de RNA ge-
nmico so seguidas pela imediata encapsidao
dos RNAs recm-produzidos pela protena N. As
etapas de transcrio e replicao do genoma do
VSV esto ilustradas na Figura 7.7.
3
3
5
5
5
3
5
5
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
N
mRNA
P
mRNA
M
mRNA
G
mRNA
L
mRNA
Transcrio (1)
Replicao (2)
Replicao (3)
RNA genmico (-)
RNA genmico (-)
RNA antigenmico (+)
RNA pol
RNA pol
Figura 7.7. Etapas da transcrio e replicao do genoma do vrus da estomatite vesicular (VSV). A linha contnua
representa a molcula de RNA genmico, recoberta por mltiplas cpias da nucleoprotena. No incio do ciclo
replicativo, a transcrio descontnua resulta em mRNAs individuais de cada gene (1). Em uma determinada etapa,
com o acmulo da nucleoprotena (N), o complexo replicase realiza a sntese da molcula de RNA complementar (2),
que serve de molde para a sntese de molculas de RNA genmico (3). Note que tanto o RNA genmico (-) quanto o
RNA antigenmico ou complementar (+) permanecem recobertos por molculas da protena N (ou NP) durante os
processos detranscrioe replicao. As etapas ilustradas acima socomuns aos vrus daordemMononegavirales.
180 Captulo 7
3.2 Vrus com o genoma segmentado
Vrus de trs famlias possuem este tipo
de genoma: Orthomyxoviridae (7 ou 8 segmen-
tos); Bunyaviridae (trs segmentos) e Arenaviridae
(dois segmentos). Os ortomixovrus e a maioria
dos buniavrus possuem o genoma inteiramente
de sentido negativo, ou seja, as ORFs esto pre-
sentes no RNA complementar. O genoma dos
arenavrus e de alguns buniavrus possui senti-
do ambissense, ou seja, contm algumas ORFs no
sentido do RNA genmico e outras no sentido do
RNA complementar. O genoma no traduzido
diretamente, e esses vrus necessitam trazer a sua
replicase nos vrions. Por isso so classicados
como vrus RNA de sentido negativo.
Os ortomixovrus possuem o genoma seg-
mentado (inuenza A e B = oito segmentos; in-
uenza C = 7 segmentos) e replicam o genoma
no ncleo da clula hospedeira. A replicao no
ncleo faz desses vrus excees entre os vrus
RNA, juntamente com os bornavrus. A descrio
a seguir abordar o vrus da inuenza A.
O genoma do vrus da inuenza A consti-
tui-se por oito segmentos de RNA de polaridade
negativa, numerados de 1 a 8. Os segmentos 1 a 6
codicam uma protena cada; os segmentos 7 e 8
codicam duas protenas cada. Todos os segmen-
tos genmicos apresentam a mesma organizao
geral: possuem um gene (ou mais) na regio cen-
tral, anqueada por seqncias altamente con-
servadas nas extremidades 3 (12 nt) e 5 (13 nt)
(Figura 7.8). As regies terminais possuem sinais
para o incio da transcrio e replicao. Cada seg-
mento genmico encontra-se recoberto (encapsi-
dado) por mltiplas cpias da protena NP e est
associado com algumas protenas que formam o
complexo polimerase-replicase. Esse complexo
formado por trs protenas principais: PB1 (poli-
merase bsica 1); PB2 (polimerase bsica 2) e PA
(polimerase cida). O complexo RNA + prote-
nas associadas se denomina ribonucleoprotena
(RNP) e permanece estvel durante a replicao.
3-UCGCUUUCGUCC
A. RNA genmico (-)
C. RNA antigenmico (+)
GGAACAAAGAUGA-5
Cap-5---------GA
Cap-5---------GAGCGAAAGCAGG
8-13nt
8-13nt
AAA(n)-3
15-22nt
B. mRNA
Transcrio (1)
Traduo
Replicao
5-AGCGAAAGCAGG CCUUGUUUCUACU-3
2 3
Figura 7.8. Estrutura dos RNAs produzidos durante a replicao do vrus da influenza. A) RNAgenmico (vRNA); B)
mRNA; C) RNA antigenmico. A transcrio para a sntese de mRNA utiliza nucleotdeos com cap subtrados dos
mRNA celulares (1). Os mRNA apresentam uma extenso de 8-13 nt (com cap) em relao ao vRNA e os 15-22
nucleotdeos terminais so substitudos por uma cauda poliA. A primeira etapa da replicao do genoma envolve a
sntese do RNA de sentido antigenmico que exatamente complementar ao vRNA (2). A segunda etapa da
replicao envolve a sntese do vRNA ou genmico a partir do RNA antigenmico (3). Note que os mRNAs diferem
dos RNAantigenmicos, pelapresenade8-13 nt adicionais comcape caudapoliA.
Cada segmento genmico transcrito indi-
vidualmente pelo complexo transcriptase. O pro-
cesso se inicia pela subtrao de seqncias de 8
a 13 nt, com cap na extremidade 5, de mRNAs
celulares. Essa atividade atribuda PB1, ou
seja, essa enzima literalmente furta os segmentos
iniciais de mRNAs celulares. Esses nucleotdeos
servem de primer para o incio da transcrio,
alm de possurem a estrutura cap, que neces-
sria para a traduo dos mRNA virais. A trans-
crio termina 15 a 22 nt antes da extremidade
5 de cada segmento, e seguida pela adio de
uma cauda de poliA. Os mRNAs virais no so,
portanto, exatamente complementares aos RNAs
genmicos: possuem uma extenso de 8 a 13 nt
em sua regio 5 e no possuem os 15-22 nt termi-
nais, sendo substitudos por uma cauda poliA.
A replicao dos RNA genmicos (vRNA)
ocorre em duas etapas: sntese do RNA antige-
nmico (complementar) e sntese de RNA gen-
mico (vRNA), utilizando o RNA antigenmico
como molde. A sntese do RNA antigenmico
no envolve a subtrao de nucleotdeos com
cap de mRNA celulares; inicia-se exatamente na
extremidade 3 do genoma e termina exatamen-
te na extremidade 5. Dessa forma, o RNA anti-
genmico exatamente complementar ao RNA
genmico. A transio entre a transcrio inicia-
da por primer + cap para a transcrio indepen-
dente de primer + cap parece envolver complexos
transcriptase/replicase diferentes. O acmulo da
protena NP e alteraes especcas na composi-
o do complexo polimerase seriam responsveis
pela transio entre transcrio e replicao. A Fi-
gura 7.8 apresenta a estrutura dos vRNA, mRNA
e RNAs antigenmicos produzidos durante a re-
plicao dos vrus da inuenza A.
3.3 Vrus com o genoma ambissense
Os arenavrus e alguns buniavrus possuem
genoma ambissense, ou seja, alguns genes so co-
dicados no sentido do RNA complementar, en-
quanto outros so codicados no sentido do ge-
noma, aps a sntese de mRNA, a partir da cpia
complementar de RNA. Em outras palavras, as
ORFs de alguns genes esto presentes no RNA
genmico (sentido positivo) e outras esto pre-
sentes no RNA complementar (sentido negativo).
As ORFs que esto no sentido do genoma ocu-
pam a metade 3 do genoma e no so traduzidas
diretamente. Como o genoma no traduzido
diretamente pelos ribossomos, esses vrus neces-
sitam trazer, nos vrions, a sua enzima transcrip-
tase/replicase e, por isso, so classicados junta-
mente com os vrus RNA de sentido negativo.
Os arenavrus possuem dois segmentos de
RNA como genoma: um segmento grande (large
= L) e outro segmento pequeno (small = S). Cada
um desses segmentos contm dois genes (Figura
7.9A). No segmento grande, o gene L possui pola-
ridade negativa, ou seja, a sua ORF est presente
no RNA complementar. Para que a protena seja
expressa, esse gene transcrito pela polimerase
viral, originando um mRNA, que , ento, tradu-
zido (Figura 7.9B). Por outro lado, o gene Z possui
polaridade positiva (a ORF est presente no RNA
genmico do segmento L). No entanto, este gene
no expresso pela traduo direta do genoma.
A sua expresso somente ocorre aps a sntese do
RNA complementar, a partir do qual o mRNA ,
ento, produzido (Figura 7.9B). A expresso deste
gene segue o mesmo padro dos genes expressos
atravs de mRNA subgenmicos, caractersticos
de algumas famlias de vrus RNA. No segmento
S, o gene NP possui polaridade negativa e a sua
expresso depende da sntese de mRNA. O gene
GP possui polaridade positiva e a sua expresso
segue o mesmo padro do gene Z do segmento L:
sntese do RNA complementar e transcrio do
seu mRNA. A estratgia ambissense de codica-
o de protenas encontrada ainda em vrus de
alguns gneros da famlia Bunyaviridae (Tospov-
rus e Phlebovrus).
A replicao do genoma segue o padro dos
outros vrus RNA e ocorre por intermdio de um
RNA complementar de sentido antigenmico. A
diferena que o RNA complementar serve de
molde para a sntese do RNA genmico e tam-
bm para a sntese do mRNA de um dos genes.
Em resumo, os genomas ambissense possuem
genes que so expressos de maneira semelhante
aos genomas RNA de sentido negativo (as ORFs
esto presentes no RNA complementar); e genes
182 Captulo 7
que so expressos como nos vrus RNA de senti-
do positivo (as ORFs esto presentes no sentido
genmico, embora no sejam traduzidas direta-
mente).
4 Vrus com RNA de ta dupla
So conhecidas atualmente seis famlias de
vrus que possuem RNA de ta dupla (ds RNA)
como genoma, e apenas duas abrigam vrus que
infectam vertebrados (Reoviridae e Birnaviridae);
destas, apenas a primeira possui patgenos de
mamferos. A famlia Reoviridae a maior e mais
diversa dessas famlias, contendo importantes
patgenos animais. O genoma desses vrus
composto por 10, 11 ou 12 segmentos de dsRNA,
dependendo do gnero. A maioria dos segmentos
codica apenas uma protena, mas alguns podem
codicar duas. Nos segmentos duplos de RNA,
apenas uma das tas contm as ORFs codican-
tes de protenas. O complexo replicase trazido
nos vrions, associado aos segmentos, e a sntese
dos mRNA virais ocorre no interior dos capsde-
os semi-ntegros.
4.1 Estrutura e organizao do genoma
Os vrus do gnero Orthoreovirus possuem
os prottipos da famlia Reoviridae, os reovrus
no-fusognicos de mamferos. O genoma desses
vrus composto por dez segmentos de dsRNA.
Os segmentos genmicos so denominados de
acordo com a sua migrao em gis de poliacri-
lamida (SDS-PAGE): L = grandes (L1, L2, L3);
M = mdios (M1, M2 e M3) e S = pequenos (S1,
S2, S3 e S4). Somente os segmentos S1 e M3 ori-
ginam duas protenas, o restante codica apenas
uma. Os dez segmentos dos orthoreovrus so
lineares e possuem as extremidades livres. Em-
bora se constituam em segmentos separados,
algumas evidncias indicam que os segmentos
genmicos encontram-se associados atravs de
suas extremidades nas partculas vricas. Cada
segmento de polaridade positiva possui uma es-
trutura cap (7-M-guanina) na extremidade 5, que
provavelmente adicionado por enzimas virais
no interior dos capsdeos. As extremidades 5 dos
segmentos de polaridade negativa possuem um
nucleotdeo difosfato. A cadeia codicante (e os
mRNAs) possuem uma regio no-traduzida de
Figura 7.9. Estrutura e expresso do genoma ambissense
dos arenavrus. A) Organizao dos segmentos
genmicos L (grande) e S (pequeno) com os respectivos
genes; B) Estratgia de expresso gnica do segmento
grande. O gene L possui sentido negativo e a sua
expresso depende inicialmente da transcrio e sntese
de mRNA(1). Ogene Zpossui sentido positivo, mas no
expresso pela traduo direta do genoma. A sua
expresso ocorre somente aps a sntese do RNA
complementar (2). Este serve de molde para a transcrio
e produo do mRNAcorrespondente (3). Os genes NP e
GP do segmento S seguem os mesmos padres de
expressodos genes Le Z, respectivamente.
RNA genmico
mRNA
RNA complementar
Transcrio (1)
Transcrio (3)
Replicao (2)
Traduo
Traduo
Protena L
mRNA
L
L
NP
L
Z
Z
GP
Z
-5' 3'-
Protena Z
A
B
Segmento grande (L)
Segmento pequeno (S)
3' - - 5'
3' - - 5'
5' - - 3'
- 5' 3' -
5' - - 3'
Figura 7.10. Organizao do genoma dos vrus do gnero da famlia Ogenoma composto
por 10 segmentos de RNA de fita dupla, sendo que apenas uma das cadeias codificante (sentido positivo). No
segmentoL1, somostradas as duas cadeias, os demais mostramapenas a cadeia codificante. Os diferentes segmentos
apresentam uma organizao semelhante, possuindo uma ORF central flanqueada por pequenas regies no-
traduzidas nas extremidades 5' e 3'. A nomenclatura e nmero de aminocidos de cada protena esto apresentados
direita. Note que oito segmentos codificamapenas uma protena cada; os segmentos M3 e S1 codificamdois produtos
cada.
Orthoreovirus Reoviridae.
5'
5' 3'
3'
pp
Cadeia (+)
Cadeia (-)
L1=3854
L2=3916
L3=3901
M1=2304
M2=2203
M3=2241
S1=1416
S2=1331
S3=1198
S4=1196
Protena (aa) Gene (nt)
3 (1267)
2 (1269)
1 (1275)
2 (736)
1 (708)
NS (721 ) + NSC (681)
1 (455) + 1s (120)
2 (418)
NS (366)
3 (365)
12 a 32 nt prxima extremidade 5 e outra re-
gio no-traduzida de 35 a 73 nt na extremidade
3, intercaladas por ORFs que possuem entre 365
e 1.289 nt (Figura 7.10). Essas regies no-codi-
cantes possuem stios regulatrios da transcrio
e traduo.
4.2 Transcrio
A transcrio inicial ocorre ainda no interior
dos capsdeos, logo aps a penetrao dos vrions
no citoplasma da clula hospedeira, e apenas as
cadeias negativas so transcritas. Os mRNAs in-
dividuais so exatamente complementares aos
RNA moldes: possuem 5 cap e no so poliade-
nilados. Por isso servem tanto para a traduo
como de molde para a sntese do RNA comple-
mentar (Figura 7.11). Os mRNAs tardios, produ-
zidos aps a replicao do genoma, constituem
uma exceo por no receberem cap na extremi-
dade 5. Os mRNAs so rapidamente exportados
dos capsdeos e ganham acesso ao citoplasma
para serem traduzidos. Em fases adiantadas do
ciclo, j no interior de capsdeos recm-formados,
ocorre um novo ciclo de transcrio com a produ-
o de mais mRNA.
184 Captulo 7
A segunda etapa da replicao, a sntese das
cadeias negativas, ocorre j em capsdeos pr-for-
mados no citoplasma da clula hospedeira, em
um local chamado de viroplasma, que constitui
uma fbrica de vrus dentro da clula hospedei-
ra. Para que isso ocorra, as protenas que formam
os capsdeos j so produzidas em etapas iniciais
do ciclo replicativo. Cada segmento de RNA (+)
serve de molde para a sntese da cadeia comple-
mentar (-), que permanece pareada com o mol-
de, restabelecendo, assim, a molcula genmica
dsRNA. A sntese da cadeia negativa se inicia na
extremidade 3 da molcula molde e prossegue
at a extremidade 5. Por isso, as cadeias positi-
vas e negativas so exatamente complementares
(Figura 7.11).
diretamente. A replicao tambm no ocorre
por meio de um intermedirio RNA, como nos
outros vrus RNA. Ao contrrio, a replicao do
genoma ocorre por meio de um intermedirio
DNA. Parte das etapas de replicao do genoma
ocorre no citoplasma e parte ocorre no ncleo da
clula hospedeira. Resumindo, as principais pe-
culiaridades do genoma e da replicao desses
vrus so: a) o seu genoma diplide, ou seja,
composto por duas molculas idnticas de RNA;
b) o RNA genmico possui polaridade positiva,
porm no traduzido em protenas; c) a repli-
cao do genoma ocorre por meio da sntese de
um intermedirio DNA (provrus), que incor-
5'
5'
5'
5'
5'
3'
3'
3'
3'
3'
RNA (+)
RNA (+)
RNA (-)
RNA (-)
Transcrio (1)
mRNA (+)
Traduo (2)
Protena
Genoma (ds)
Replicao (3)
Genoma (ds)
Figura 7.11. Etapas da expresso gnica e replicao dos
vrus RNA de fita dupla. A fita negativa do genoma
transcrita, originando RNAs de sentido positivo
exatamente complementares (1). Estes RNAs podem ser
traduzidos em protenas (2) e tambm servem de molde
para a sntese da molcula de sentido negativo (3),
restabelecendoa molcula genmica dedsRNA.
Figura 7.12. Ilustraoda estrutura e etapas da replicao
do genoma dos retrovrus. O genoma constitudo por
uma molcula de RNA de fita simples de 7 a 10 kb com
5'cap e poliA. Prximo s extremidades, o genoma
possui duas regies repetidas R (5' e 3') e duas regies
nicas (U5 e U3). Entre essas regies, localizam-se as
seqncias codificantes: genes . Aprimeira
etapa da replicao sntese do provrus DNA
(molcula de DNA de fita dupla correspondente ao
genoma) pela enzima viral transcriptase reversa (1). O
provrus contm as regies U3 e U5 duplicadas nas
extremidades opostas e integrado aos cromossomos
celulares pela ao da enzima viral integrase (2). Aps a
integrao, o provrus transcrito pela RNA polimerase
II celular (3) originando mRNAs idnticos ao genoma.
Estes mRNAs servem para a traduo em protenas e
tambm constituem o RNA genmico para serem
encapsidados naprognieviral.
gag, pol e env
AAAA Cap
.gag pol env
.gag pol env
.gag pol env
.gag pol env
R
R
R
R
R
R
U5
U5
U5
U5
U5
U3
U3
U3
U3
U3
Transcrio reversa (1)
Integrao (2)
Transcrio (3)
Genoma
Genoma
Provrus
Provrus Integrado
DNA
celular
DNA
celular
AAAA Cap
R R U5 U3
DNA
RNA
RNA
DNA
5 Retrovrus
Os retrovrus apresentam uma estratgia
peculiar de replicao do genoma que difere dos
demais vrus RNA (Figura 7.12). Embora esses
vrus codiquem as suas protenas no sentido do
genoma (por isso so considerados vrus RNA
de sentido positivo), o genoma no traduzido
porado aos cromossomos celulares; d) o provrus
integrado transcrito, originando mRNAs para a
sntese protica e para serem incorporados como
genoma na prognie viral; e) as etapas iniciais da
replicao do genoma ocorrem no citoplasma e
so mediadas por enzimas virais (transcritase re-
versa); f) as etapas seguintes ocorrem no ncleo
e so mediadas por enzimas virais (integrao =
integrase, IN) e celulares (transcrio = RNA pol
II celular); g) o genoma dos retrovrus o nico
genoma viral sintetizado exclusivamente por en-
zimas e fatores celulares. Por isso, a sua estrutu-
ra idntica aos mRNA celulares: possui cap na
extremidade 5 e poliadenilado na extremidade
3. As principais etapas da replicao do genoma
dos retrovrus e a estrutura das molculas inter-
medirias esto ilustradas na Figura 7.12. Maio-
res detalhes sobre a expresso gnica e replicao
do genoma podem ser encontrados no Captulo
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PATOGENIA DAS INFECES VRICAS
1
1
Colaboraram em sees especcas: Janice Ciacci Zanella (Apoptose por vrus); Luiz Carlos Kreutz
(Padres principais de infeco) e Mariana S e Silva (Imunopatologia em infeces vricas).
1 Introduo
1.1 Conceitos bsicos
2 Patologia em nvel celular

2.1 Interaes dos vrus com as clulas
2.2 Efeitos da replicao viral nas clulas hospedeiras
2.3 Apoptose por vrus
3 Patogenia em nvel de hospedeiro
3.1 Penetrao e replicao primria
3.1.1 Pele e mucosas superciais
3.1.2 Trato respiratrio
3.1.3 Orofaringe e trato digestivo
3.1.4 Mucosa urogenital
3.2 Infeces localizadas versus infeces disseminadas (ou sistmicas)
3.2.1 Disseminao local
3.2.2 Disseminao hematgena
3.2.3.Disseminao nervosa
3.3 Localizao das infeces
3.3.1 Infeces em rgos e sistemas especcos
3.3.2 Infeces da pele e tegumento
3.3.3 Infeces do trato respiratrio
3.3.4 Infeces do trato digestivo
3.3.5 Infeces do sistema nervoso central
3.3.6 Infeces do sistema linforreticular e hematopoitico
3.3.7 Infeco fetal
4 Padres principais de infeco
4.1 Infeces agudas
8
191
191
193
193
196
196
197
197
197
199
200
201
202
202
202
207
209
209
211
212
213
215
217
218
220
221
4.2 Infeces persistentes (ou crnicas)
4.2.1 Infeces latentes
4.2.2 Infeces persistentes ou crnicas
4.2.3 Infeces persistentes temporrias
4.3 Mecanismos envolvidos na manuteno das infeces persistentes
4.3.1 Restrio do efeito citopatognico
4.3.2 Infeco de clulas semipermissivas
4.3.3 Infeco de um pequeno nmero de clulas
4.3.4 Manuteno do genoma viral nas clulas hospedeiras
4.3.5 Evaso da resposta imune do hospedeiro
5 Oncognese por vrus
5.1 Oncognese por retrovrus
5.2 Pequenos vrus DNA tumorignicos
6 Imunopatologia em infeces vricas
6.1 Imunopatologia mediada por imunocomplexos
6.2 Imunopatologia mediada por linfcitos T citotxicos
6.3 Imunopatologia por induo de auto-imunidade
7 Imunossupresso por vrus
7.1 Replicao viral em clulas envolvidas na resposta imunolgica
7.2 Imunossupresso associada com a ativao do sistema imune
7.3 Produtos de moncitos e linfcitos ativados
7.4 Protenas virais
212
222
222
223
225
225
225
226
226
226
226
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230
230
230
231
232
232
232
234
1 Introduo
O termo patogenia ou patognese , apli-
cado s infeces vricas, refere-se ao conjunto
de mecanismos pelos quais os vrus produzem
doena em seus hospedeiros (pato = doena, g-
nese = origem, produo). A denio de doen-
a como sendo qualquer manifestao resultante
de alteraes da siologia do organismo abrange
um leque muito amplo de condies. Manifesta-
es patolgicas incluem desde aumentos leves
da temperatura corporal, alteraes de nimo e
apetite, at condies severas que, eventualmen-
te, resultam na morte do hospedeiro. Na maioria
das doenas, a patogenia multifatorial, resul-
tante da alterao de fatores endgenos ou ex-
genos, raramente determinadas por um fator ni-
co. Com as infeces vricas no diferente, pois
as conseqncias dependem das interaes entre
inmeros fatores do agente e do hospedeiro.
Grande parte dos sinais clnicos observados
nas doenas vricas conseqncia da resposta
do hospedeiro injria celular e tecidual. Por sua
vez, essa injria pode resultar de efeitos diretos
ou indiretos da replicao viral ou pode, ainda,
ser conseqncia da resposta imune do hospe-
deiro contra as clulas infectadas. De fato, a pa-
togenia de vrias doenas vricas est mais inti-
mamente ligada aos mecanismos imunolgicos
do hospedeiro do que s conseqncias diretas
da replicao viral nos tecidos. Em resumo, a pa-
togenia das infeces vricas determinada pela
combinao entre os efeitos diretos e indiretos da
replicao viral e as respostas do hospedeiro in-
feco.
Os mecanismos pelos quais os vrus pro-
duzem doenas em seus hospedeiros podem ser
examinados em diferentes nveis. As clulas so
as unidades fundamentais do organismo, nas
quais os vrus se multiplicam. Por isso, as clulas
se constituem nos locais de origem dos eventos
ligados infeco vrica que podem resultar em
doena. A replicao dos vrus, muitas vezes, in-
terfere com mecanismos siolgicos essenciais
da clula hospedeira, alterando as suas funes
em benefcio da replicao viral. A alterao de
processos celulares envolvidos na biossntese de
macromolculas e na manuteno da homeostase
celular, por exemplo, podem resultar em disfun-
o e at morte celular. Outras vezes, produtos da
replicao viral podem ser txicos para a clula
hospedeira. Essas alteraes esto freqentemen-
te envolvidas na origem de processos patolgicos
observados no organismo. Uma infeco pode re-
sultar em absoluta ausncia de efeitos deletrios
sobre as clulas e, conseqentemente, na ausn-
cia de manifestaes clnicas; ou pode resultar em
efeitos celulares graves, acompanhados de sinais
clnicos severos e morte do hospedeiro.
No hospedeiro, a complexidade de intera-
es que pode ou no resultar em doena
muito maior, e ainda acrescida da participao
dos componentes celulares e humorais da res-
posta imunolgica e de outros sistemas encar-
regados de manter a homeostasia e integridade
do organismo. Ao contrrio do que se imagina, a
ocorrncia de doena clnica em infeces vricas
um evento pouco freqente, considerando-se a
totalidade das infeces. Ou seja, a maioria das
infeces por vrus no resulta em alteraes or-
gnicas que se manifestem com sinais percept-
veis clinicamente. A ocorrncia ou no de doena
em uma determinada infeco vrica depende da
interao entre inmeros fatores do agente e do
hospedeiro, na qual os mecanismos imunolgi-
cos, destinados a manter a integridade e funcio-
nalidade do organismo, desempenham um papel
fundamental. A Figura 8.1 ilustra esquematica-
mente a relao entre infeco e doena em nvel
celular e de hospedeiro, com as conseqncias
derivadas da replicao nos diferentes nveis.
1.1 Conceitos bsicos
O termo patogenicidade se refere capaci-
dade de um determinado agente produzir do-
ena no hospedeiro. Vrus altamente patogni-
cos so aqueles capazes de produzir doena em
uma grande parcela dos hospedeiros infectados.
Como a patogenia das infeces depende tam-
bm das reaes do organismo, a patogenicidade
de um vrus modulada por suas interaes com
o hospedeiro. O termo virulncia, muitas vezes
utilizado como sinnimo de patogenicidade, se
refere ao nvel de severidade da doena causa-
da por um agente. Os vrus altamente virulentos
causam doena grave; enquanto vrus avirulen-
tos ou pouco virulentos (atenuados) no causam
192 Captulo 8
doena, ou causam doena leve, respectivamen-
te. A virulncia de um vrus pode ser medida de
vrias formas, incluindo o percentual de animais
que adoece ou morre aps inoculao experimen-
tal, grau de severidade dos sinais clnicos, nvel e
intensidade de alteraes histolgicas, entre ou-
tras.
A virulncia dos vrus determinada gene-
ticamente e pode variar entre isolados de uma
mesma espcie viral. No entanto, fatores do hos-
pedeiro podem interferir com e modular a viru-
lncia desses agentes. Embora em alguns vrus a
virulncia possa ser mapeada em um ou poucos
genes, para a maioria dos vrus essa uma carac-
terstica multifatorial. Em geral, os genes virais
envolvidos na virulncia podem ser divididos em
quatro classes: a) genes cujos produtos afetam a
capacidade replicativa do vrus; b) produtos g-
nicos que inuenciam a capacidade do vrus se
disseminar no hospedeiro; c) produtos virais que
se contrapem resposta imunolgica do hospe-
deiro e d) produtos virais txicos para a clula
e/ou hospedeiro. Muitos genes virais podem se
enquadrar em mais de uma classe, afetando a vi-
rulncia de mais de uma forma.
A identicao dos genes envolvidos na de-
terminao da virulncia dos vrus de importn-
cia em sade humana e animal um dos maiores
desaos da Virologia, pois pode permitir a mani-
pulao gentica desses agentes com ns vacinais
e/ou teraputicos. No entanto, essa nem sempre
uma tarefa fcil, pela complexidade das intera-
es vrus-clula, falta de sistemas apropriados
ou modelos animais adequados e pela diculda-
de de se estudar virulncia em cultivos celulares.
O termo susceptibilidade se refere s condi-
es oferecidas pelo hospedeiro para a ocorrncia
da infeco e doena. Por outro lado, resistncia
a oposio oferecida pelo hospedeiro instalao
da infeco. A susceptibilidade e resistncia de
um hospedeiro a um vrus so determinadas ge-
neticamente e podem variar entre indivduos de
uma mesma espcie, de acordo com fatores como:
raa, idade, sexo, condio corporal, estado sio-
Figura 8.1. O conceito iceberg das infeces vricas. Note que a maioria das infeces vricas no resulta em efeitos
perceptveis em nvel de hospedeiro. As manifestaes clnicas, quando ocorrem, constituem-se em reflexos da
disfunoe patologia emnvel celular e tecidual.
Efeito em nvel celular Efeito no hospedeiro
Morte do hospedeiro
Doena clssica e severa
Doena leve ou moderada
Infeco sem sinais
clnicos (assintomtica)
Exposio sem infeco
Exposio sem
infeco
Replicao viral sem
alteraes celulares visveis,
ou danos teciduais restritos
Disfuno celular,
efeito citoptico ou
transformao celular
Lise celular
Conceito das infeces iceberg
V
I
S
U
A
L
M
E
N
T
E
I
M
P
E
R
C
E
P
T
V
E
I
S
P
E
R
C
E
P
T
V
E
I
S
V
I
S
U
A
L
M
E
N
T
E
I
N
F
E
C
O
S
U
B
C
L
N
I
C
A
D
O
E
N
A
C
L
N
I
C
A
Patogenia das infeces vricas 193
lgico etc. A resistncia infeco pode ser de-
vida a mecanismos naturais (resistncia natural
ou inata) ou adquiridos (resistncia adquirida). O
termo imunidade muito utilizado para designar
a resistncia, principalmente a resistncia adqui-
rida. O termo refratariedade se refere a um grau de
resistncia absoluta a um determinado agente, e
uma caracterstica da espcie animal, e no do
indivduo.
O tropismo a predileo de um vrus por
determinadas clulas ou tecidos e pode ser de-
terminado por uma variedade de fatores celula-
res que so necessrios para a replicao viral. O
principal fator determinante do tropismo e que
possui inuncia direta no padro de distribui-
o e localizao das infeces a presena de
receptores especcos para o vrus. Maiores de-
talhes sobre os mecanismos envolvidos com o
tropismo celular dos vrus sero abordados ao
longo do texto.
2 Patologia em nvel celular
A compreenso da patogenia das doenas
vricas depende do conhecimento dos mecanis-
mos envolvidos em diferentes nveis. Os vrus
necessitam das macromolculas e de processos
biossintticos da clula hospedeira para se mul-
tiplicar. As interaes entre o vrus e os compo-
nentes celulares so complexas e, muitas vezes,
resultam em alteraes da siologia celular, po-
dendo levar injria e at mesmo morte da
clula. As patologias celulares associadas com a
replicao viral se constituem em um dos princi-
pais mecanismos de produo das doenas. Em
nvel celular, as infeces vricas podem resul-
tar em uma variedade de condies, a saber: a)
infeco no-produtiva, com bloqueio em uma
das etapas intracelulares da replicao, seguida
ou no de injria e morte celular; b) estabeleci-
mento de infeco latente, com limitada expres-
so gnica viral e persistncia do genoma viral
na clula hospedeira; c) infeco produtiva, com
produo de prognie viral infecciosa, acompa-
nhada de patologia ou morte celular; d) infeco
produtiva persistente, em que a clula sobrevive
e segue produzindo vrus em nveis baixos por
longos perodos e, at mesmo, indenidamente;
f) oncognese, seja pela incorporao de oncoge-
nes virais na clula hospedeira ou por alteraes
nas funes de genes celulares encarregados do
controle do ciclo celular.

2.1 Interaes dos vrus com as clulas

A maioria das alteraes da siologia celu-
lar resultantes da replicao viral se deve a efei-
tos secundrios das interaes entre os produtos
virais e componentes celulares; interaes estas
que so necessrias para a multiplicao dos v-
rus. Os efeitos txicos especcos de alguns pro-
dutos virais e o acmulo excessivo de protenas
e cidos nuclicos virais tambm podem levar
injria celular.
As interaes que resultam em alterao na
siologia celular podem ocorrer em qualquer eta-
pa do ciclo replicativo. A penetrao dos adeno-
vrus em clulas de cultivo acompanhada por
despreendimento das clulas da superfcie de
contato. Esse evento deve-se ligao da prote-
na penton dos vrions s molculas de integrinas
da membrana das clulas. Essa ligao altera as
interaes das integrinas com outras protenas da
membrana celular, necessrias para a aderncia
das clulas superfcie do frasco. A protena M2
dos vrus da inuenza produz canais inicos na
membrana dos endossomos durante o processo
de internalizao do vrus, atravs dos quais pr-
tons H
+
penetram para o interior das vesculas
endossmicas, acidicando o pH e facilitando o
processo de fuso/penetrao e desnudamento
do nucleocapsdeo. No entanto, as possveis con-
seqncias desse evento, para a siologia celular,
so desconhecidas.
Alguns vrus interferem com os mecanis-
mos de transcrio, processamento (splicing) e
transporte de RNA mensageiros (mRNA) celula-
res, estratgias que visam a favorecer a traduo
dos mRNA virais. Os adenovrus e herpesvrus
inibem a maturao e a exportao de mRNA ce-
lulares para o citoplasma; os vrus da inuenza
provocam a clivagem de mRNA celulares para
utilizar a extremidade 5 com cap para os seus
mRNA. Produtos dos vrus da inuenza, her-
pesvrus e poxvrus promovem a degradao de
mRNA celulares (Tabela 8.1).
Outros vrus alteram a especicidade ou
subvertem a maquinaria celular de traduo
194 Captulo 8
para a produo de suas protenas, em detrimen-
to das protenas celulares. A inibio da tradu-
o de mRNA celulares, e no de mRNA virais,
uma forma de subverso utilizada pelos vrus
para favorecer a sntese de suas protenas. Esses
mecanismos so utilizados por vrios vrus, in-
cluindo o vrus da estomatite vesicular (VSV),
o poliovrus, o vrus da febre aftosa (FMDV), os
adenovrus, entre outros. Essa interferncia pode
ter efeitos deletrios para a clula hospedeira,
que tem a sua sntese protica reduzida ou mes-
mo suprimida.
A inibio da sntese de DNA celular ou-
tro mecanismo utilizado por vrus RNA e DNA
durante a sua replicao. Essa inibio pode pro-
porcionar uma disponibilidade maior de precur-
sores (nucleotdeos), protenas e estruturas celu-
lares para a sntese dos cidos nuclicos virais e
replicao do genoma. possvel tambm que a
inibio da sntese de DNA celular, em alguns ca-
sos, seja uma mera conseqncia da inibio da
sntese protica da clula hospedeira pelo vrus.
Por outro lado, alguns vrus (poliomavrus,
papilomavrus e adenovrus) estimulam as clu-
las a entrar em fase S, com ativao da sntese de
DNA e subseqente diviso celular. Essa estra-
tgia tem por m estimular a clula a fornecer
condies e componentes (nucleotdeos, enzimas
replicativas e fatores de replicao) necessrios
replicao do genoma viral. Como conseqncia,
a clula hospedeira passa a oferecer as condies
necessrias replicao viral. Essa interferncia
com a regulao do ciclo celular, algumas vezes,
pode levar transformao tumoral dessas clu-
las.
A apoptose ou morte celular programada
um mecanismo de morte celular em resposta a
vrios estmulos, inclusive infeces vricas. Tem
sido demonstrado que vrios vrus so capazes
de desencadear a cascata de reaes que leva
apoptose da clula hospedeira. Por outro lado,
vrios vrus possuem produtos que inibem ou
retardam a apoptose, prolongando, assim, a vida
da clula e permitindo a concluso do seu ciclo
replicativo.
2A
pro
Poliovrus
Vrus Protena(s) Efeito Alvo
2A, 3A
Inibio da traduo cap-dependente
Inibio do trfego protico RER-Golgi
elF-4G
Desconhecido
2B, 2C
Proliferao de vesculas
membranosas
Desconhecido
Desconhecida Alterao do mecanismo da MAP4 MAP4
3C Inibio da transcrio Tbp, Complexo Tfflc
Vrus Sindbis
Aumento da permeabilidade da membrana
plasmtica
Na, K-ATPase? Desconhecida
Paramixovrus Fuso entre clulas formao de sinccios Membrana plasmtica F
E1B-55K, E4-34K
Adenovrus
Desconhecida Inibio da traduo cap-dependente
Bloqueio na acumulao de mRNAs
celulares no citoplasma
elF-4E
Protena celular envolvida
no transporte de mRNA
Produto do gene
(ribonuclease) vhs
Herpesvrus Desmontagem dos polissomas mRNA celular
Vrus do herpes
simplex
Inibio do transporte e
processamento de mRNA celular
Desconhecido ICP 27
Vrios vrus Despolimerizao do citoesqueleto Filamentos de actina. Desconhecida
Tabela 8.1. Protenas virais responsveis por efeitos especficos sobre mecanismos e estruturas das clulas
hospedeiras
Protenas virais podem tambm interferir
com mecanismos celulares de modicao, locali-
zao e maturao de protenas, podendo resultar
em citopatologia. As glicoprotenas do envelope,
em especial, so alvos de extensivas modicaes
ps-traduo, maturao e transporte por meca-
nismos celulares, e a sua abundncia pode inter-
ferir com os processos celulares de processamen-
to de protenas endgenas.
A alterao da estrutura de membranas ce-
lulares, resultando em fuso e/ou alterao da
permeabilidade, tambm so efeitos da replica-
o de vrios vrus. Diversos vrus com envelope
possuem glicoprotenas que so necessrias para
promover a fuso do envelope com a membra-
na celular, permitindo a sua penetrao na clu-
la hospedeira. A expresso dessas protenas em
clulas infectadas pode resultar em fuso entre
clulas vizinhas, resultando na formao de mas-
sas citoplasmticas multinucleadas denominadas
sinccios. A fuso entre clulas vizinhas tambm
possvel pela ao direta das glicoprotenas vi-
rais no processo de penetrao. A fuso celular
uma forma de citopatologia produzida por vrus,
mas tambm pode ser considerada uma forma de
disseminao do vrus entre clulas.
Os produtos de alguns vrus produzem um
aumento na permeabilidade da membrana plas-
mtica da clula infectada. Em decorrncia disso,
o aumento da concentrao de ons sdio na c-
lula pode favorecer a traduo de mRNA virais.
Ento, para alguns vrus, o aumento da permea-
bilidade da membrana pode favorecer a sntese
preferencial de protenas virais.
A infeco por diversos vrus pode provo-
car a desorganizao ou mesmo a ruptura do ci-
toesqueleto da clula hospedeira. Uma reduo
na quantidade de lamentos de actina tem sido
observada na infeco por vrios vrus, incluindo
o vrus do herpes simplex humano (HSV), vrus
da cinomose (CDV) e VSV, entre outros. As con-
seqncias da desorganizao do citoesqueleto
no so bem claras, mas provavelmente possuem
relao com algumas alteraes morfolgicas ob-
servadas em clulas infectadas. provvel que as
alteraes na estrutura e funo do citoesqueleto
sejam efeitos secundrios da replicao viral e da
interferncia do vrus com outras funes celu-
lares.
A replicao de alguns vrus resulta na for-
mao de estruturas com morfologia mais ou me-
nos denidas no citoplasma ou no ncleo da c-
lula infectada. Essas estruturas so denominadas
genericamente corpsculos de incluso e so
formadas pelo acmulo de complexos de trans-
crio e replicao, produtos intermedirios da
replicao, protenas estruturais e no-estrutu-
rais, capsdeos, nucleocapsdeos e vrions em de-
terminados locais da clula. A localizao dos cor-
psculos de incluso reete o local de replicao
do respectivo vrus. Os corpsculos de Negri so
formados no citoplasma de neurnios infectados
pelo vrus da raiva; os corpsculos citoplasmti-
cos de Lenz so caractersticos da infeco pelo
CDV. A replicao dos reovrus acompanhada
da formao de grandes estruturas citoplasmti-
cas denominadas virossomos, que podem ocupar
grande parte do citoplasma. Os virossomos so
os locais de acmulo de cidos nuclicos e pro-
tenas virais e onde ocorrem os mecanismos de
replicao do genoma e montagem das partculas
vricas. A replicao dos herpesvrus neuropa-
tognicos (herpesvrus bovino tipo 5 [BoHV-5],
vrus da doena de Aujeszky [PRV]) resulta na
formao de corpsculos nucleares em neurnios
do sistema nervoso central (SNC). A presena de
corpsculos de incluso tem sido utilizada no
diagnstico histopatolgico de algumas viroses,
pela facilidade de observao e pelas suas carac-
tersticas tintoriais (podem ser basoflicos ou aci-
doflicos).
Pelo exposto, ca evidente que as interaes
entre os produtos virais e os componentes celu-
lares, durante o ciclo replicativo dos vrus, so
extremamente complexas e podem resultar em
uma variedade de alteraes da siologia celular.
Grande parte dessas alteraes foi investigada e
caracterizada em clulas de cultivo. Conseqen-
temente as informaes provenientes desses estu-
dos devem ser analisadas com cautela. No obs-
tante, possvel que grande parte das alteraes
observadas in vitro ocorra tambm in vivo. pro-
vvel tambm que as interaes entre os vrus e
as clulas hospedeiras sejam ainda mais comple-
xas no animal, pela participao de componentes
orgnicos ausentes nos frascos de cultivo. Nesse
sentido, os componentes celulares e humorais do
sistema imunolgico (citocinas e anticorpos) de
196 Captulo 8
outros sistemas de defesa e tambm do sistema
endcrino do hospedeiro certamente possuem
participao importante nas interaes dos hos-
pedeiros com esses agentes invasores. Exemplos
de protenas virais que interferem com mecanis-
mos especcos das clulas hospedeiras esto
apresentados na Tabela 8.1.
2.2 Efeitos da replicao viral nas
clulas hospedeiras
A replicao dos vrus nas clulas hospedei-
ras freqentemente resulta em alteraes na sio-
logia celular, tanto pela interferncia com proces-
sos metablicos e estruturas celulares quanto pela
ao txica de produtos da replicao viral. Em
particular, a interferncia com a sntese de macro-
molculas pode afetar negativamente a siologia
celular e, freqentemente, resulta em patologia.
Essas alteraes podem ser detectadas visual ou
bioquimicamente e tem sido mais caracterizadas
em clulas de cultivo. As alteraes morfolgicas,
associadas com a replicao de vrus em clulas
de cultivo, so denominadas coletivamente de
efeito citoptico ou citopatognico (ECP).
Como cada grupo de vrus pode afetar fun-
es e mecanismos celulares diferentes, o tipo de
ECP produzido tambm caracterstico de cada
espcie ou grupo de vrus. A patologia mais ex-
trema a lise ou destruio celular, e os vrus que
a induzem so denominados citolticos. A lise
celular caracterizada pela morte e desintegra-
o celular, freqentemente devida absoro
excessiva de lquido extracelular. Alguns vrus
produzem alteraes morfolgicas, como cito-
megalia ou arredondamento celular. A citomegalia
pode ser devida absoro de lquido, enquanto
o arredondamento geralmente conseqncia
de alteraes na estrutura e funo das bras do
citoesqueleto. Alteraes no citoesqueleto tam-
bm resultam em desprendimento das clulas do
substrato, efeito que pode ocorrer em estgios
avanados de patologia celular, por mecanismos
diversos. Os vrus que possuem glicoprotenas
fusognicas no envelope promovem fuso celu-
lar, com a formao de clulas gigantes multinu-
leadas, denominadas sinccios. Clulas fusiona-
das possuem vida curta e eventualmente sofrem
lise. A formao de vacolos outro tipo de ECP
produzido por vrus que replicam no citoplasma.
Corpsculos de incluso citoplasmticos ou nuclea-
res tambm so formados como resultado da re-
plicao de alguns vrus e podem ser observados
sob microscopia tica.
Embora a lise celular seja o mecanismo mais
atraente e fcil para explicar as patologias induzi-
das pelos vrus nos seus hospedeiros, certamente
no se constitui no nico mecanismo responsvel
pela produo das doenas. Vrus no citolticos
tambm podem causar patologias severas e at
a morte do hospedeiro. Nesse sentido, prov-
vel que outras formas de citopatologia que no
necessariamente a lise celular tambm possam
ser responsveis por patologias observadas em
animais doentes. Acredita-se que grande parte
das patologias observadas em doenas causadas
por vrus no-citopticos sejam conseqncias da
resposta imune do hospedeiro.

2.3 Apoptose por vrus
Apoptose ou morte celular programada
um processo bioqumico que funciona como uma
cascata que leva a morte ou suicdio celular.
Esse mecanismo ocorre naturalmente durante o
desenvolvimento embrionrio e fetal, manuten-
o da imunidade e da homeostase em organis-
mos multinucleados. Muitos vrus interferem
no processo de apoptose da clula hospedeira,
alterando reaes e componentes-chave desse
processo. Produtos de diferentes vrus promo-
vem ou inibem a apoptose atravs de diversos
mecanismos de ao. bvio que os vrus se be-
neciam ao evitar a apoptose, pois isso permite a
sobrevivncia da clula at que o ciclo replicativo
seja concludo. Porm, em alguns casos, a ocor-
rncia de apoptose vantajosa para o vrus. Em
tais casos, a formao de corpos apoptticos, con-
tendo vrus, resulta em fagocitose dessas estrutu-
ras e liberao do vrus no uido extracelular, o
que favorece a sua disseminao.
Os adenovrus, vrus da peste suna africana
(ASFV), vrus da anemia infecciosa das galinhas
(CAV) e os vrus da peste suna clssica (CSFV)
so exemplos de vrus que produzem protenas
indutoras da apoptose. Protenas que inibem a
apoptose tambm so produzidas pelos adenov-
rus e ASFV e pelos vrus da vaccinia, herpesv-
rus bovino tipo-4 (BoHV-4), herpesvrus eqino
(EHV), vrus da doena de Marek, dentre outros.
3 Patogenia em nvel de hospedeiro
O resultado de uma infeco vrica de hos-
pedeiro depende de vrios fatores, a saber: a) ca-
pacidade de o vrus penetrar em um hospedeiro
susceptvel pela via adequada; b) realizar uma
replicao primria em tecidos prximos ao local
de entrada; c) escapar dos mecanismos naturais
de defesa do organismo; d) disseminar-se para os
tecidos e rgos-alvo; e) replicar ecientemente
nesses tecidos e f) produzir ou no injria tecidu-
al (provocar patologia). Embora os vrus apresen-
tem uma diversidade muito grande e participem
de interaes de especicidade e complexidade
diferentes com os seus hospedeiros, algumas eta-
pas da patogenia parecem ser comuns maioria
das infeces vricas. A seguir, sero abordadas
essas etapas.
3.1 Penetrao e replicao primria
O estabelecimento da infeco no hospedei-
ro depende da penetrao e replicao do vrus
em clulas prximas aos locais de entrada. Essa
replicao denominada primria necessria
para a amplicao do agente, de modo a supe-
rar as barreiras impostas pela resposta inata do
hospedeiro. A replicao primria geralmente
ocorre no prprio local de penetrao, em tecidos
prximos ou nos linfonodos regionais. Em geral,
os vrus podem utilizar mais de uma via para pe-
netrar nos seus hospedeiros. As principais vias de
penetrao de vrus nos animais sero apresenta-
das a seguir e esto ilustradas na Figura 8.2.
3.1.1 Pele e mucosas superciais
A pele se constitui em uma importante bar-
reira para a penetrao de vrus, pois a sua ca-
mada externa formada por clulas mortas e
no suporta a replicao viral. Alm disso, a sua
superfcie seca, levemente cida e possui uma
ora bacteriana permanente/residente que atua
como uma barreira natural. No entanto, solu-
Mucosa
conjuntival
Mucosa
respiratria
Pele
Mucosa
urogenital
Mucosa
intestinal
Mucosa
orofarngea
Figura8.2. Vias depenetraodevrus emseus hospedeiros.
Fonte: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
198 Captulo 8
es de continuidade mesmo imperceptveis
provocadas por abrases, pequenas incises ou
puncturas podem permitir a penetrao e insta-
lao de vrios vrus. Dentre os vrus que podem
penetrar atravs da pele semi-ntegra incluem-se
os papilomavrus, alguns poxvrus e herpesvrus
(Tabela 8.2). Esses vrus so geralmente transmi-
tidos por contato direto ou indireto, ou tambm
mecanicamente atravs de insetos. Se a penetra-
o for supercial, a replicao geralmente li-
mitada ao stio de penetrao, pois a epiderme
desprovida de vasos sangneos e linfticos que
poderiam servir para disseminar a infeco. No
entanto, a infeco de camadas mais profundas
da derme pode levar disseminao sangnea,
pois essa camada altamente vascularizada (Fi-
gura 8.3A). Em especial, os vrus que so trans-
mitidos por insetos hematfagos (alfavrus, avi-
vrus, buniavrus, alguns rabdovrus e orbivrus)
ou por procedimentos iatrognicos (retrovrus e
hepadnavrus) podem alcanar as camadas mais
internas e encontrar condies propcias para a
sua replicao primria. A abundncia de vasos
sangneos e linfticos na derme e em camadas
mais internas oferece condies para a dissemi-
nao desses agentes a partir do stio primrio de
replicao. Aps a replicao primria no tecido
drmico ou subdrmico, os vrions podem se dis-
seminar para os linfonodos regionais no interior
de clulas fagocticas ou livres na linfa e/ou san-
gue. Os herpesvrus invadem terminaes nervo-
sas localizadas nesses locais e so transportados
ao longo dos axnios ou dentritos at o corpo dos
neurnios. O transporte dos herpesvrus por -
bras nervosas ser abordado na seo 3.2.3.
Tabela8.2. Vrus animais quepenetramnohospedeiroatravs dapeleoudesuperfcies mucosas
Papilomavrus de vrias espcies;
Herpesvrus de vrias espcies;
Poxvrus de bovinos, sunos e ovinos; vrus da
estomatite papular bovina; poxvrus avirios;
Vrus da doena vesicular de sunos;
Vrus da estomatite vesicular (VSV).
Pequenas leses (puncturas,
abrases)
Via de penetrao Vrus
Picada de insetos (transmisso
mecnica)
Vrios poxvrus (mixomavrus, poxvrus suno, poxvrus
avirios);
Alguns retrovrus (vrus da anemia infecciosa eqina [EIAV],
vrus da leucose bovina [BLV]);
VSV.
Picada de insetos (transmisso
biolgica)
Vrus da peste suna africana (ASFV);
Vrus da lngua azul (BTV);
VSV, outros rabdovrus;
Vrus da febre do vale Rift (RVFV), outros buniavrus;
Todos os alfavrus;
Vrus do gnero flavivrus.
Mordeduras de vertebrados
Vrus da imunodeficincia felina (FIV);
Vrus da raiva (RabV);
Arenavrus (entre roedores);
Herpesvrus smio B.
Transmisso iatrognica
Papilomavrus de vrias espcies animais;
Retrovrus (BLV, EIAV);
Vrus da diarria viral bovina (BVDV), vrus da peste suna
clssica (CSFV).
Contato com a conjuntiva
Herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1), herpesvrus eqino 1(EHV-1);
Adenovrus canino tipos 1 e 2 (CAdV-1, CAdV-2).
Fonte: adaptada de Murphy et al. (1999).
Aparentemente, as membranas mucosas su-
perciais poderiam se constituir em uma barreira
menos eciente para impedir a penetrao viral.
Ainda assim, so recobertas por uma camada de
muco que, pela sua natureza viscosa e pela pre-
sena de IgA, pode dicultar a penetrao dos
vrus. Os herpesvrus parecem ser capazes de
penetrar em mucosas intactas para iniciar a in-
feco, embora a ocorrncia de leses certamente
favorea a instalao da infeco.
Determinados vrus so introduzidos atra-
vs da pele diretamente no tecido subcutneo
ou mesmo no tecido muscular. O vrus da raiva
inoculado profundamente pela mordedura de
animais infectados; os arenavrus tambm so
transmitidos entre os roedores silvestres atravs
de mordidas; o herpesvrus smio B e o vrus da
imunodecincia felina (FIV) tambm podem ser
transmitidos por mordeduras. Essa inoculao
profunda facilita ainda mais a replicao prim-
ria e o estabelecimento da infeco.
Alguns vrus penetram no organismo pela
mucosa conjuntival e podem estar associados
com conjuntivite ou com infeces sistmicas. Os
adenovrus caninos tipos 1 e 2 (CAdV-1; CAdV-
2) podem penetrar por essa via; o herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1) pode causar conjuntivite
pela infeco direta da conjuntiva ou por conta-
minao a partir da cavidade nasal.
Os principais vrus de animais que penetram
nos seus hospedeiros atravs da pele e mucosas
superciais esto apresentados na Tabela 8.2.
3.1.2 Trato respiratrio
A mucosa do trato respiratrio provavel-
mente se constitui na principal via de penetrao
de vrus, por causa de sua grande superfcie e
grande quantidade de patgenos potencialmente
presentes no ar inspirado. No obstante, o siste-
ma respiratrio apresenta barreiras que limitam
ou reduzem as chances dos vrus que penetram
Herpesvrus de vrias espcies. Herpesviridae
Famlia Vrus
Adenovrus de vrias espcies. Adenoviridae
Vrus da parainfluenza (PIVs) e vrus
respiratrios sinciciais (RSVs).
Paramyxoviridae
Orthomyxoviridae Vrus da influenza suna e eqina.
Coronaviridae
Vrus da bronquite infecciosa das
galinhas (IBDV).
Picornaviridae
Vrus da febre aftosa (FMDV);
rinovrus de vrias espcies.
Caliciviridae Calicivrus felino (FCV).
P
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o
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Herpesviridae
Vrus da doena de Aujeszky (PRV), vrus da
doena de Marek, vrus da febre catarral
maligna (MCFV).
Paramyxoviridae
Vrus da cinomose (CDV), vrus da peste
bovina (rinderpest).
Orthomyxoviridae Vrus da influenza aviria (AIV).
Flaviviridae
Vrus da diarria viral bovina (BVDV)*; vrus
da peste suna clssica (CSFV).
* O BVDV pode tambm causar doena respiratria.
Tabela8.3. Principais vrus quepenetrampelotratorespiratriopara iniciar a infecodohospedeiro
200 Captulo 8
pelo ar inspirado conseguirem atingir e penetrar
nas clulas epiteliais. As vias areas superiores e
inferiores contm um epitlio ciliado recoberto
com muco, cuja funo reter e, eventualmente,
expulsar as partculas inaladas. Alm de reter as
partculas vricas, o muco pode conter IgA espec-
ca, que pode neutralizar a infectividade dos v-
rus. Os alvolos so desprovidos dessas defesas,
porm possuem macrfagos residentes encarre-
gados de fagocitar e digerir partculas exgenas.
Alm disso, a temperatura nas vias areas supe-
riores aproximadamente 3 a 5C inferior tem-
peratura corporal, o que pode restringir a replica-
o de alguns vrus. Por isso, os vrus incapazes
de replicar temperatura corporal (rinovrus),
replicam somente no trato respiratrio superior.
J os vrus capazes de replicar sob temperatura
corporal, podem causar infeco no trato respira-
trio inferior.
Os vrus geralmente penetram no trato res-
piratrio atravs de aerossis produzidos por ex-
pectoraes (tosse e espirro) ou pelo contato nasal
com fmites contaminados. O hbito investigati-
vo olfatrio de vrias espcies animais se constitui
em um fator de risco que favorece as infeces da
mucosa nasal e do focinho. A maioria dos vrus
que penetra por essa via realiza a replicao pri-
mria em clulas epiteliais das vias respiratrias;
alguns podem replicar em macrfagos livres no
lmen respiratrio ou em espaos subepiteliais.
A replicao dos vrus que penetram pelas vias
areas pode car restrita ao epitlio respiratrio
ou se disseminar para outros tecidos e rgos. Ou
seja, os vrus que penetram pelo trato respirat-
rio podem produzir infeces localizadas ou dis-
seminadas (Tabela 8.3). Os tecidos subjacentes ao
epitlio respiratrio possuem vasos linfticos e
sangneos que facilitam a disseminao dos v-
rus at os rgos linfides secundrios e da para
o sangue (Figura 8.3B).

3.1.3 Orofaringe e trato digestivo
A mucosa do trato digestivo, desde a orofa-
ringe at os segmentos nais do intestino, pode
se constituir em local de penetrao para vrios
vrus, que produzem tanto infeces localizadas
como sistmicas. Os vrus adquiridos pela inges-
to de alimentos ou gua contaminada, ou pelo
contato oral com fmites, podem ser deglutidos
e alcanar o estmago e intestinos; ou podem
infectar as clulas superciais da orofaringe. Os
vrus que replicam na orofaringe podem ser, pos-
teriormente, deglutidos ou podem se disseminar
sistemicamente pela via hematgena. Os rotav-
rus, coronavrus, calicivrus e muitos enterov-
rus produzem infeces localizadas no intestino
delgado; o parvovrus canino penetra na muco-
sa da orofaringe e, por via hematgena, atinge o
epitlio intestinal, onde replica e provoca distr-
bios celulares que resultam em doena; o vrus
da diarria viral bovina (BVDV) pode penetrar
na mucosa da orofaringe e se disseminar sistemi-
camente. Alguns vrus podem penetrar atravs
da mucosa intestinal e causar doena sistmica,
como alguns adenovrus de aves e de mamferos
e alguns enterovrus.
O trato digestivo apresenta vrias barrei-
ras que restringem ou dicultam a infeco por
determinados vrus. O pH cido do estmago,
a alcalinidade do intestino delgado, as enzimas
digestivas presentes na saliva e no suco pancre-
tico, e as enzimas lipolticas presentes na bile
restringem o nmero de vrus que capaz de in-
fectar o hospedeiro por essa via.
Como regra, os vrus no-envelopados so
mais resistentes ao pH cido do estmago. Ex-
cees incluem os rinovrus e o FMDV (picorna-
vrus), que so lbeis pH cido e no resistem
ao pH do estmago. Para estabelecer a infeco,
portanto, esses vrus devem penetrar na muco-
sa orofarngea ou nasal. Embora sejam sensveis
ao pH baixo e ao da bile, os coronavrus de
vrias espcies animais resistem s condies do
estmago e intestino e podem estabelecer infec-
es intestinais. Em geral, os vrus que causam
infeces intestinais, como os rotavrus, caliciv-
rus e enterovrus, so resistentes ao pH baixo e
ao da bile e, por isso, podem penetrar a partir
do lmen intestinal.
As enzimas proteolticas presentes no l-
men intestinal podem tambm favorecer a infec-
o por alguns vrus, pela clivagem e ativao de
protenas da superfcie dos vrions que so envol-
vidas na penetrao do vrus na clula hospedei-
ra. Como exemplos, citam-se: a tripsina, pancrea-
tina e elastina que aumentam a infectividade dos
rotavrus; e outras enzimas que ativam os proces-
sos de penetrao dos reovrus e de alguns coro-
navrus. Enzimas presentes em secrees respira-
trias tambm tm sido envolvidas na ativao
de protenas de fuso dos paramixovrus.
Os vrus associados com gastrenterite po-
dem infectar uma variedade de clulas do trato
gastrintestinal. Os adenovrus, rotavrus, caliciv-
rus e coronavrus infectam predominantemente
entercitos maduros quiescentes. Outros vrus
possuem tropismo por clulas das criptas que
esto em diviso (parvovrus) ou por clulas epi-
teliais especializadas, como as clulas M (polio-
vrus e reovrus). As clulas M podem tambm
capturar vrions no lmen intestinal e transport-
los para clulas mononucleares adjacentes, onde
ocorrer a replicao primria (Figura 8.3C).
Dentre os vrus animais que penetram pelo
trato digestivo e esto associados com diarria
esto os parvovrus (canino e felino), os rotav-
rus de vrias espcies, os coronavrus entricos,
os astrovrus e calicivrus. Outros vrus penetram
pelo trato digestivo e esto associados com doen-
a disseminada, geralmente sem diarria, como
os adenovrus de vrias espcies, os enterovrus,
o vrus do exantema vesicular de sunos, entre
outros. Estes vrus utilizam o epitlio intestinal
para a replicao primria e amplicao, de
onde ganham acesso ao sistema linftico e sang-
neo (Figura 8.3C).
3.1.4 Mucosa urogenital
A mucosa do trato genital da fmea pode
servir de local de penetrao tanto para vrus
sistmicos, que so excretados no smen, como
para vrus que produzem infeces localizadas
no trato genital masculino. No primeiro caso, a
transmisso pode ser pela monta natural ou pela
inseminao articial, j que os vrus encontram
condies ideais de sobrevivncia em smen in-
dustrializado. Os herpesvrus de vrias espcies
animais podem ser transmitidos pelo smen e/ou
pela cpula; o vrus da sndrome respiratria e
reprodutiva dos sunos (PRRSV) foi amplamente
disseminado pela inseminao articial; a monta
natural uma importante forma de transmisso
do vrus da arterite viral eqina (EAV). Os pa-
pilomavrus que causam leses genitais tambm
podem ser transmitidos pela cpula, por causa
do contato entre as mucosas. Embora o BoHV-1
possa ser excretado pelo smen durante a infec-
o aguda respiratria, a transmisso venrea
desse vrus est mais freqentemente associada
com a infeco genital (balanopostite).
Os tecidos submucosos so altamente ir-
rigados e fornecem condies propcias para a
disseminao dos vrus pela linfa ou pelo sangue
para os linfonodos regionais ou para tecidos mais
distantes. As terminaes nervosas, localizadas
na submucosa, constituem-se em alvos para a pe-
202 Captulo 8
netrao pelos herpesvrus, que so, ento, trans-
portados at gnglios nervosos regionais.
Embora com menor freqncia, fmeas que
desenvolvem infeces genitais tambm podem
transmitir o vrus para o macho durante a cpu-
la, o que favorece a disseminao do agente, pois
o macho infectado pode transmitir o agente para
outras fmeas.
3.2 Infeces localizadas versus
infeces disseminadas (ou sistmicas)
Os padres de distribuio e envolvimento
de diferentes rgos e tecidos variam amplamen-
te com os vrus e esto intimamente associados
com a biologia do agente, sendo dependentes de
suas interaes com o hospedeiro. Alguns vrus
produzem infeces localizadas, geralmente li-
mitadas s proximidades dos stios de penetrao
e replicao primria. Esse padro de infeco
caracterstico dos vrus respiratrios (rinovrus,
vrus da inuenza e parainuenza), gastrintesti-
nais (coronavrus e rotavrus) e de alguns vrus
que infectam a derme e epiderme (papilomav-
rus, alguns poxvrus, vrus da mamilite herptica
[BoHV-2]). Essas infeces esto geralmente limi-
tadas ao epitlio, mas a penetrao e envolvimen-
to de tecidos subjacentes e disseminao sistmi-
ca podem ocasionalmente ocorrer. As infeces
que se restringem aos stios de replicao prim-
ria e suas proximidades so ditas localizadas.
Outros vrus so capazes de se disseminar
a longas distncias pelo sangue ou pela linfa e
produzir infeces em rgos especcos ou in-
feces generalizadas. Exemplos incluem o CDV,
os parvovrus canino (CPV) e felino (FPLV), o
BVDV, os retrovrus, entre outros. As infeces
que se estendem alm dos stios de replicao
primria so chamadas de disseminadas; e as que
atingem vrios rgos ou sistemas so denomi-
nadas sistmicas ou generalizadas.
3.2.1 Disseminao local
Aps a replicao primria, muitos vrus se
disseminam localmente pela transmisso entre
clulas vizinhas. Essa forma de transmisso, no
entanto, no permite uma disseminao a longas
distncias e essas infeces so geralmente con-
troladas pela resposta imune do hospedeiro. Os
vrus que penetram na mucosa respiratria ou di-
gestiva e que so liberados pela superfcie apical
de clulas epiteliais podem ser transportados por
uidos ou pelo muco e se disseminar rapidamen-
te pelo lmen do rgo. A replicao de muitos
desses vrus ca restrita ao epitlio, com nenhu-
ma ou pouca invaso dos tecidos subjacentes. Pa-
ralelamente, os vrions podem ser transportados
at os linfonodos regionais, livres na linfa ou no
interior de clulas fagocticas. Esta geralmente
a primeira etapa na disseminao das infeces
sistmicas. Em geral, os vrus que so liberados
apenas na superfcie apical das clulas epiteliais
tendem a car restritos localmente, enquanto
aqueles que so liberados tambm pela superf-
cie basolateral so mais provveis de produzirem
infeces sistmicas.
3.2.2 Disseminao hematgena
O transporte pelo sangue oferece aos vrus
a oportunidade de atingir virtualmente todos os
rgos e tecidos em poucos minutos a partir dos
stios de replicao primria. Os vrions podem
penetrar no sangue diretamente atravs da pare-
de capilar, aps a infeco de clulas endoteliais
ou pela inoculao direta por insetos ou por ins-
trumentos contaminados. A disseminao hema-
tgena se inicia quando os vrions produzidos
nos stios primrios de replicao so liberados
no lquido extracelular e drenados pelo sistema
linftico, cujos capilares so mais permeveis do
que os capilares sangneos. Os vrions veicula-
dos pela linfa eventualmente ganham acesso
corrente sangnea, seja como partculas livres
no plasma, seja no interior de linfcitos ou mo-
ncitos/macrfagos infectados durante a sua
passagem pelos linfonodos regionais. De fato,
a patogenia de vrias infeces vricas est inti-
mamente associada com a infeco de clulas do
sistema imunolgico, que ocorre devido ao seu
contato com os vrions nos rgos linfides pe-
rifricos. Uma vez no sangue, os vrions se dis-
seminam rapidamente pelo organismo. O trajeto
utilizado pelos vrus que penetram no organismo
atravs de superfcies cutneas ou mucosas para
atingir a corrente sangnea est ilustrado na Fi-
gura 8.4.
A presena de vrus no sangue denomi-
nada viremia e, dependendo da origem do vrus,
pode ser classicada em passiva ou ativa. A vire-
mia passiva resulta da introduo do vrus dire-
tamente no sangue, sem a prvia replicao em
tecidos. Esta introduo pode resultar de inocu-
lao direta por insetos hematfagos, por trans-
fuso sangnea ou por outras formas de inocu-
lao de sangue. Essas viremias so geralmente
transitrias e no duram mais de 12-24 h, mas
podem ser de tal magnitude a ponto de provocar
a infeco macia de alguns rgos. As viremias
ativas resultam da replicao viral em tecidos e
rgos do hospedeiro e geralmente atingem uma
maior magnitude e durao. Os vrus presentes
no sangue podem ter vrias origens, tais como: a)
partculas vricas presentes nos tecidos prximos
aos locais de penetrao podem ser capturadas
pelo sistema linftico e ter acesso ao sangue; b)
vrios vrus replicam em clulas localizadas nos
linfonodos, podendo ser liberados e ter acesso ao
sangue; c) alguns vrus so capazes de replicar
em clulas endoteliais e so liberados diretamen-
te na circulao; d) vrios vrus replicam em c-
lulas mononucleares do sistema linforreticular
(moncitos/macrfagos; linfcitos) e podem ser
liberados no sangue.
Em vrias infeces vricas, duas etapas de
viremia ativa podem ser detectadas. A viremia pri-
mria resulta da replicao viral nos stios iniciais,
geralmente atinge baixa magnitude, mas permite
a disseminao do vrus aos rgos secundrios
de replicao, denominados rgos-alvo. A repli-
cao viral nesses tecidos produz uma viremia se-
cundria, caracterizada por uma presena macia
de vrus no sangue e disseminao ainda maior
da infeco. Os resultados da viremia so vari-
veis e, freqentemente, resultam em infeco de
vrios tecidos perifricos, com resultados que de-
pendem do tropismo, da patogenicidade e viru-
lncia do vrus. Uma conseqncia freqente de
viremia em animais a transmisso transplacen-
tria do vrus ao feto, podendo resultar em uma
variedade de condies que vo desde uma infec-
o transitria at a morte fetal, seguida de abor-
tamento. As etapas da patogenia das infeces v-
ricas localizadas e disseminadas esto ilustradas
na Figura 8.5.
Capilar
sangneo
Tecido
conjuntivo
Histicito
Vaso
linftico
aferente
Superfcie corporal
Capilar
linftico
Seios linfticos
revestidos por
macrfagos
Tecido
linfide
Vaso
linftico
eferente
Ducto
torcico
Veia
Linfonodo
Figura 8.4. Trajeto dos vrus que penetram pela pele ou mucosas superficiais para atingir o sangue e se distribuir
sistemicamente.
Fonte: adaptada de Mims e White (1984).
204 Captulo 8
Figura 8.5. Etapas da patogenia das infeces vricas localizadas e sistmicas: papel da viremia na disseminao das
infeces.
Pele
Mucosas
Trato respiratrio
Trato digestivo
Infeco
Excreo
Herpesvrus
Influenza
Paramixovrus
Rotavrus
Papilomavrus
Coronavrus
Linfonodos
Sangue
Sangue
R
e
p
l
i
c
a
o
p
r
i
m
r
i
a
Transmisso
iatrognica
ou por vetores
Viremia
primria
Viremia
secundria
Fgado
Msculo
Medula
ssea Bao
Endotlio
vascular
Epitlio
respiratrio Pele
Trato respiratrio
(pulmes)
CDV
Rinderpest
Lumpy skin
CDV,
Togavrus
Flavivrus
Encfalo
Glndula salivar
ou rins
Raiva (g.salivar)
Arenavrus
Arenavrus
hantavrus
Excreo
S
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Fonte: adaptada de Mims e White (1984).
No sangue, os vrions podem ser transporta-
dos livres no plasma, no interior de leuccitos ou
aderidos membrana de leuccitos, eritrcitos ou
plaquetas. Os avivrus, togavrus, enterovrus e
parvovrus circulam livres no plasma e produ-
zem a chamada viremia plasmtica. A concentra-
o de partculas vricas no sangue depende de
um equilbrio entre a sua produo nos tecidos
infectados e a taxa de remoo ou inativao no
sangue. A tarefa de remover vrions circulantes
cabe s clulas fagocticas do sistema retculo-en-
dotelial, principalmente s clulas de Kpfer no
fgado e, em menor proporo, aos macrfagos
dos pulmes, bao e linfonodos.
Os vrus que circulam livres no plasma po-
dem entrar em contato e infectar uma grande
variedade de clulas, mas dois tipos celulares
desempenham um papel importante para a con-
tinuidade da infeco: as clulas endoteliais e os
macrfagos adjacentes aos vasos. As interaes
entre os vrions circulantes e as clulas de Kpfer
no fgado podem resultar em: a) internalizao e
inativao dos vrions; b) internalizao, trans-
porte transcitoplasmtico e liberao dos vrions
na bile; c) infeco dessas clulas e liberao da
prognie viral de volta ao sangue, incrementan-
do a viremia; d) infeco celular e liberao dos
vrions recm-produzidos pela superfcie basal,
resultando na infeco macia de hepatcitos. A
infeco das clulas endoteliais pode favorecer a
invaso viral nos tecidos a partir do sangue.
Em etapas mais avanadas da infeco, os
anticorpos produzidos so capazes de se ligar e
neutralizar as partculas vricas livres no plasma
sangneo. A ligao dos anticorpos aos vrions
tambm facilita a fagocitose dos complexos an-
ticorpo-vrions por macrfagos adjacentes aos
vasos sangneos teciduais. Esses macrfagos se
ligam aos complexos imunes por meio de recep-
tores para a poro Fc das imunoglobulinas. A
maioria das viremias plasmticas possui durao
limitada e o seu trmino coincide com o apareci-
mento de anticorpos neutralizantes no soro.
Vrios vrus replicam em clulas sang neas,
particularmente moncitos e linfcitos B e T, e a
sua presena no sangue est predominantemente
associada com essas clulas. As viremias associa-
das a clulas apresentam algumas caractersticas
que as distinguem das viremias plasmticas, tais
como: a) no interior das clulas os vrus esto pro-
tegidos dos anticorpos neutralizantes e podem se
propagar a grandes distncias; b) os ttulos virais
so geralmente baixos; c) o isolamento do vrus
do sangue geralmente difcil e pode requerer
o co-cultivo de leuccitos com clulas de cultivo.
Essa diculdade de isolamento pode ser devida
aos baixos nveis de replicao do vrus e/ou
presena de anticorpos neutralizantes; d) em al-
gumas infeces, a viremia persiste por toda a
vida do animal e no termina com o aparecimen-
to dos anticorpos neutralizantes. Exemplos des-
se tipo de viremia so encontrados nas infeces
por retrovrus animais, como o FIV, o vrus mae-
di-visna (MVV), o vrus da leucose bovina (BLV)
e o vrus da anemia infecciosa eqina (EIAV).
Em algumas dessas infeces, a contnua evolu-
o gentica da populao viral produz variantes
que escapam da neutralizao por anticorpos e
que podem ser isolados do plasma. Esses vrus,
no entanto, parecem representar uma pequena
parcela do total de vrus que produzido e que
neutralizado e capturado nos complexos imu-
nes. O vrus da lngua azul (BTV) produz viremia
persistente e os vrions encontram-se aderidos
membrana dos eritrcitos. Embora mais estuda-
da em infeces persistentes, a viremia associa-
da a clulas tambm observada em infeces
agudas, como a infeco de ces pelo CDV, entre
outras. O BVDV pode ser encontrado em linfci-
tos e moncitos, mas viremia plasmtica tambm
pode ser detectada em animais persistentemente
infectados. Esses animais so imunotolerantes a
antgenos virais e, por isso, no produzem an-
ticorpos contra o vrus. Com isso, o vrus infec-
cioso pode ser continuamente isolado do plasma
desses animais.
3.2.1.1 Penetrao dos vrus nos tecidos

Os vrus que se disseminam pela via hema-
tgena devem ultrapassar a parede vascular para
invadir e replicar nos tecidos e rgos-alvo. Em-
bora seja uma etapa fundamental na patogenia
das infeces por virtualmente todos os vrus pa-
tognicos que produzem viremia, poucos deta-
lhes so conhecidos sobre a penetrao dos vrus
206 Captulo 8
nos tecidos. O mecanismo de penetrao utiliza-
do pelos vrus depende da sua biologia e tambm
da estrutura e relaes do endotlio vascular, que
varia muito entre os diferentes tecidos. Os pos-
sveis mecanismos utilizados, j demonstrados
para alguns vrus, esto ilustrados na Figura 8.6 e
descritos a seguir:
1) Penetrao passiva pelo espao entre as
clulas endoteliais. Esse mecanismo possvel
em alguns endotlios que apresentam fenestras
entre as clulas endoteliais, como o plexo coride
no SNC. Aps atravessar esta barreira, os vrus
podem infectar as clulas epiteliais do plexo co-
ride e ganhar acesso ao uido crebro-espinhal
e, assim, disseminar-se pelos espaos ocupados
por esse uido. Exemplos de vrus que prova-
velmente utilizam essa via de invaso incluem
o vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV) e o
retrovrus (MVV). Os vasos dos tbulos renais,
pncreas, clon e leo tambm apresentam fenes-
tras que podem servir para a penetrao dos v-
rus nos tecidos a partir do sangue;
2) Os vrions podem ser transportados atra-
vs do endotlio vascular por endocitose, segui-
da de transporte vesicular intracitoplasmtico e
exocitose na face oposta da clula endotelial. Para
que essas duas formas de invaso possam ocor-
rer, a concentrao de vrions no sangue deve ser
alta e contnua, e o uxo sangneo no local deve
ser lento, para permitir o contato e aderncia das
partculas vricas ao endotlio e/ou penetrao
pelos espaos interendoteliais;
3) Alguns vrus podem infectar as clulas
endoteliais e/ou clulas adjacentes e completar o
seu ciclo replicativo nessas clulas. Assim, a sua
prognie pode ser liberada atravs da superfcie
basal ou basolateral dessas clulas e infectar clu-
las teciduais subjacentes. Essa forma de invaso
tecidual j foi demonstrada para os picornavrus,
retrovrus, alfavrus e parvovrus. As clulas de
Kpfer, que esto localizadas entre as clulas
endoteliais dos sinusides hepticos, servem de
porta de entrada para vrus que so veiculados
no sangue. Os vrus podem ser transportados
passivamente ou replicarem ativamente nessas
clulas;
4) Os vrus que produzem viremia associada
a clulas, em moncitos ou linfcitos, podem ser
transportados atravs da parede vascular no in-
terior das clulas infectadas. As clulas mononu-
cleares do sangue esto freqentemente atraves-
sando a parede vascular e penetrando nos tecidos
em resposta a estmulos inamatrios e podem
funcionar como verdadeiros cavalos de Tria,
transportando os vrus para os tecidos. O movi-
mento de clulas atravs do endotlio em direo
aos tecidos denominado diapedese. Essa forma
de invaso tem sido demonstrada para o CDV,
vrus da febre amarela (YFV) e tambm para ex-
plicar a penetrao do vrus da imunodecincia
humana adquirida (HIV) no encfalo.
1
2
3
4
Lmen
do vaso
Tecido
Figura 8.6. Mecanismos de penetrao de vrus nos
tecidos a partir do sangue. 1) Penetrao pelos espaos
existentes entre as clulas endoteliais; 2) Transporte
ativo atravs das clulas endoteliais; 3) Infeco das
clulas endoteliais com posterior egresso da prognie
viral na face oposta do endotlio; 4) Transporte atravs
doendotlionointerior demoncitos/linfcitos.
3.2.1.2 Infeco celular mediada por
anticorpos (antibody-dependent enhancement
of viral infection, ADE)

A ADE um mecanismo utilizado por al-
guns vrus para penetrar produtivamente e repli-
car em clulas que expressam receptores para a
poro Fc das imunoglobulinas, principalmente
os moncitos e macrfagos. Nessas clulas, os
receptores de Fc so importantes para a captura
e inativao de complexos imunes formados nos
uidos e tecidos corporais. O fenmeno de ADE
ocorre quando os vrions so recobertos por an-
ticorpos sem atividade neutralizante ou quando
os nveis de anticorpos especcos so baixos.
Assim, a ligao dos anticorpos no neutraliza
a infectividade dos vrions. No entanto, as clu-
las que expressam receptores para a regio Fc se
ligam aos complexos anticorpos-vrions atravs
da regio Fc. Essa ligao seguida pela inter-
nalizao dos complexos nas clulas, aps a qual
os vrions podem ser liberados no citoplasma e
iniciar a replicao. Ou seja, alm de no neutrali-
zar a infectividade dos vrions, os anticorpos au-
xiliam a sua penetrao nas clulas que possuem
receptores de Fc. Esse mecanismo somente ocor-
re para vrus que infectam naturalmente clulas
que expressam esses receptores. Embora a ADE
j tenha sido demonstrada para vrios vrus in vi-
tro, o seu papel na patogenia das infeces vricas
in vivo ainda controverso e parece se restringir
a poucos vrus, como o vrus da dengue em hu-
manos e o vrus da peritonite infecciosa felina
(FIPV, um coronavrus). Nesses casos, a presena
de anticorpos em nveis baixos contra um deter-
minado sorotipo do vrus resulta em um aumen-
to da severidade da doena por ocasio de uma
reinfeco com um sorotipo heterlogo. De fato,
tem sido demonstrado que a peritonite infecciosa
dos gatos mais severa em animais previamente
vacinados, reforando a possibilidade de que a
ADE contribua na patogenia da doena.
3.2.3 Disseminao nervosa
Vrios vrus se disseminam a partir dos s-
tios de replicao primria no interior de bras
nervosas cujas terminaes se distribuem nesses
locais. Essa forma de transporte utilizada por
vrus essencialmente neuropatognicos (vrus da
raiva e vrios alfaherpesvrus) e tambm por v-
rus cuja invaso do sistema nervoso representa
uma circunstncia da sua replicao e dissemina-
o hematgena (reovrus e poliovrus). Alguns
vrus, como o CDV e o vrus da artrite e encefa-
lite caprina (CAEV), replicam no SNC e produ-
zem doena neurolgica, porm parecem atingir
o encfalo pela via hematgena. Dentre os vrus
animais que utilizam a via nervosa para invadir o
encfalo e causar doena neurolgica se incluem
o BoHV-5, o PRV, o EHV, o vrus da raiva, o v-
rus da encefalite eqina venezuelana (VEEV) e
o vrus da doena de Borna (BDV). Em modelos
animais, o VEEV parece tambm utilizar a via
hematgena para invadir o encfalo e produzir
encefalite. Embora os vrus que se disseminam
pela via nervosa e replicam no sistema nervoso
sejam denominados classicamente vrus neuro-
trpicos, esses agentes so capazes de infectar
uma variedade de clulas. De fato, a replicao
inicial desses vrus ocorre geralmente no epitlio
e em tecidos adjacentes aos locais de penetrao,
aps a qual os vrions penetram nas terminaes
nervosas.
O mecanismo de penetrao dos vrus em
neurnios parece ser similar ao utilizado para
iniciar a infeco de outras clulas. Aps a pe-
netrao e desnudamento, o nucleocapsdeo
transportado passivamente ao longo dos pro-
cessos neuronais (dentritos e axnios) por trans-
porte axoplsmico rpido. O vrus pode ocasio-
nalmente replicar nos axnios ou dendritos, mas
este um processo lento e no requerido para
a disseminao. Drogas que inibem o transporte
axonal (p. ex.: colchicina) tambm bloqueiam a
progresso dos vrus o longo dos axnios.
Essa forma de disseminao tem sido estu-
dada com detalhes nos alfaherpesvrus, em que o
transporte neural at os gnglios sensoriais e au-
tonmicos essencial para o estabelecimento de
infeco latente, que, por sua vez, crtica para a
manuteno desses vrus na natureza (Figura 8.7).
Aps a replicao na mucosa nasal ou genital,
os vrions penetram em terminaes dos nervos
que se distribuem nas camadas subjacentes. Os
vrions ntegros ou partculas subvirais so trans-
portados em vesculas ao longo dos microtbulos
dos axnios ou dendritos at os corpos neuronais
que se localizam nos gnglios nervosos regionais
(gnglio trigmeo, no caso de infeco oronasal;
gnglios sacrais, no caso de infeco genital). O
transporte axonal de substncias das terminaes
nervosas em direo ao corpo neuronal deno-
208 Captulo 8
minado retrgrado. Ao alcanar os corpos neuro-
nais, os alfaherpesvrus replicam ativamente de
forma ltica ou estabelecem infeco latente. A
infeco latente caracterizada pela presena do
genoma viral inativo no ncleo dos neurnios,
sem expresso gnica ou produo de prognie
viral. Em determinadas circunstncias, geralmen-
te associadas com estresse, ocorre a reativao
da infeco, a retomada da expresso gnica e a
produo de partculas vricas infecciosas. Essas
partculas so transportadas de volta aos locais
de replicao primria pelas mesmas vias nervo-
sas que haviam servido de acesso para os vrons
aos corpos neuronais. O transporte de vesculas
e substncias do corpo neuronal em direo s
terminaes nervosas denomina-se antergrado e
permite a prognie viral alcanar os tecidos peri-
fricos, replicar e ser excretada.
Em alguns vrus (BoHV-5 e PRV), a repli-
cao nos corpos neuronais durante a infeco
aguda (e provavelmente tambm durante a re-
ativao da infeco latente) tambm pode ser
seguida pelo transporte antergrado da prognie
viral ao longo das bras nervosas em direo ao
encfalo. Esses vrus so capazes de se transmi-
tir atravs de sinapses nervosas e se disseminar
ao longo de circuitos neuronais sinapticamente
ligados, resultando em invaso e replicao no
encfalo. As infeces neurolgicas acompanha-
das de meningoencefalite severa so freqentes
em bovinos infectados pelo BoHV-5 e em sunos
jovens infectados pelo PRV. Alguns alfaherpesv-
rus que causam meningoencencefalite (BoHV-5,
por exemplo), parecem invadir o encfalo princi-
palmente pela via olfatria que, provavelmente,
se constitui em uma via mais eciente e rpida de
transporte do que a via trigeminal. Outros (PRV
e BoHV-1) parecem atingir o sistema nervoso,
principalmente pelos ramos sensoriais do nervo
trigmeo. O transporte neural permite a propa-
gao do vrus aos rgos-alvo sem exposio ao
sistema imunolgico.
Embora as vias hematgena e neural sejam
freqentemente consideradas como vias exclu-
dentes (alternativas) de disseminao viral, a
patogenia de alguns vrus parece envolver a par-
ticipao de ambas. A invaso dos vrus das en-
cefalites eqinas do leste (EEEV), oeste (WEEV) e
venezuelana (VEEV) no encfalo de animais in-
fectados experimentalmente, por exemplo, j foi
demonstrado que pode ocorrer por ambas as vias,
embora uma delas provavelmente desempenhe
um papel preponderante em infeces naturais.
Figura 8.7. Disseminao neural dos alfaherpesvrus animais do epitlio respiratrio para os gnglios sensoriais
durante a infeco aguda (transporte retrgrado) e do corpo dos neurnios para o epitlio nasal durante a reativao
da infeco latente (transporte antergrado). Durante a infeco aguda (e menos freqentemente durante a
reativao), podeocorrer transporte antergradoemdireoaoSNC, cominvasoe replicaoviral noencfalo.
Transporte retrgrado
Transporte antergrado
Latncia
Reativao
Mucosa nasal
Gnglio trigmeo
Crebro
3.3 Localizao das infeces
3.3.1 Infeces em rgos e sistemas
especcos
O padro de doena sistmica produzida
durante uma infeco depende dos rgos e teci-
dos-alvo do vrus, das populaes de clulas des-
ses rgos que so infectadas e tambm do tipo
de alteraes produzidas pela replicao viral
nessas clulas. Felizmente, nenhum vrus capaz
de infectar todos os tecidos e clulas do hospe-
deiro. Na verdade, devido a sua dependncia de
processos bioqumicos e moleculares especcos,
a maioria dos vrus infecta um nmero limitado
de tipos celulares no hospedeiro. As Figuras 8.8
a 8.12 apresentam alguns padres peculiares de
disseminao, distribuio e localizao de in-
feces vricas em ces.
O termo tropismo utilizado para designar
a predileo dos vrus por determinadas clu-
las, tecidos ou rgos. Assim, o tropismo um
dos principais determinantes da patogenia das
infeces vricas. O tropismo celular ou tecidual
de um vrus determinado pela interao entre
mltiplos fatores virais e celulares, e pode ser in-
uenciado em diferentes nveis. A constituio e
siologia da membrana plasmtica (presena de
receptores, co-receptores, atividade endoctica,
espessura do citoesqueleto cortical etc.) podem
afetar as etapas iniciais da infeco (adsoro,
penetrao, desnudamento e transporte intra-
celular dos vrions). A presena de fatores de
transcrio, de transativadores ou inibidores e
de enzimas polimerases pode afetar a expresso
dos genes virais. Proteases e nucleases celulares
podem ativar ou inativar fatores virais. Os meca-
nismos celulares de transporte e distribuio de
macromolculas podem afetar a replicao, dis-
tribuio, morfognese e liberao da prognie
viral, ou seja, o tropismo de um vrus pode ser
determinado por fatores que atuam em qualquer
etapa do ciclo replicativo, desde o seu incio at a
etapa de egresso das partculas vricas.
A presena de receptores especcos na
membrana da clula hospedeira o principal fa-
tor determinante do tropismo para a maioria dos
vrus. Em geral, os receptores virais so restritos
a determinados tipos celulares ou tecidos, e ape-
nas estes podem ser infectados naturalmente. Por
isso, a distribuio de receptores nos tecidos e r-
gos um determinante importante da patogenia
dos vrus. Existem vrios exemplos de mutaes
naturais ou induzidas nas protenas virais de li-
gao nos receptores que resultam em alterao
no tropismo e/ou na virulncia do vrus mutan-
te. Esses exemplos ilustram a importncia das
interaes vrion-receptores como determinantes
do tropismo e da patogenia das infeces vricas.
Embora aparentemente seja o principal de-
terminante do tropismo, a presena dos recepto-
res no o nico fator que determina a capacida-
de do vrus infectar um determinado tipo celular.
Para alguns vrus DNA e retrovrus, a transcri-
o dos genes virais pode ser inuenciada pela
presena de fatores de transcrio e/ou inibido-
res celulares. A penetrao em clulas que no
Figura 8.8. Patogenia da parvovirose canina. O CPV
penetra pela via oronasal e replica inicialmente na
orofaringe e nas tonsilas. Aps a replicao primria, o
vrus atinge a corrente sangnea e transportado
sistemicamente pelosangue. Os stios de predileopara
a replicao secundria so as clulas das criptas do
intestino delgado, que expressamo receptor para o vrus
e esto em multiplicao ativa. A replicao viral
acompanhada de destruio dessas clulas e reposio
deficiente das clulas absortivas das vilosidades
intestinais. Os ces com gastrenterite pelo CPV
apresentam dificuldade de absoro de nutrientes,
diarria hemorrgica e desidratao. A infeco pelo
CPV em filhotes caninos com menos de seis semanas de
idade pode ser caracterizada por miocardite, pois nessa
fase as clulas domiocrdioestoemconstantemitose.
210 Captulo 8
apresentem tais fatores pode resultar em infeco
abortiva, pois os genes virais no so expressos
ou so expressos em quantidades insucientes
vrions, que ocorre com ecincia diferente con-
forme o tipo celular. Assim, o tropismo desses v-
rus parcialmente determinado pela capacidade
de determinadas clulas de clivar a protena viral
de fuso. Esses exemplos ilustram a variedade de
fatores celulares que podem ser determinantes
do tropismo dos vrus por determinados tipos
celulares.
A distribuio dos vrus nos tecidos e rgos
do organismo depende de um balano entre o pa-
dro de disseminao e o seu tropismo celular e
tecidual. Os vrus que se disseminam pela via he-
matgena podem ter acesso a virtualmente todos
os tecidos do organismo. No entanto, a maioria
desses vrus infecta apenas alguns tecidos ou r-
gos ou podem ainda infectar apenas algumas
clulas especcas nesses rgos. Em resumo, a
disseminao hematgena permite ao vrus atin-
gir virtualmente todos os tecidos, mas no asse-
gura que a replicao ir ocorrer em todos os te-
cidos potencialmente atingidos. Por outro lado, a
disseminao neural predominantemente dire-
Os parvovrus dependem da atividade da
DNA polimerase celular e fatores associados
para a replicao do seu genoma; por isso esses
vrus apresentam tropismo marcante por clu-
las em diviso. Os papilomavrus dependem de
clulas cuja sntese e transporte de nucleotdeos
para o ncleo estejam ativos, alm da ativida-
de da DNA polimerase celular. O transporte de
nucleocapsdeos at as proximidades dos poros
nucleares uma atividade requerida para a repli-
cao dos adenovrus. A integrao do provrus
DNA de alguns retrovrus somente ocorre em
clulas em atividade mittica. A replicao dos
papilomavrus est estritamente associada com o
estgio de diferenciao dos queratincitos e dos
fatores celulares expressos por essas clulas. A
capacidade infectiva dos coronavrus e parami-
xovrus inuenciada pela clivagem e maturao
da protena envolvida na fuso e penetrao dos
Figura 8.9. Patogenia da coronavirose canina. O
coronavrus canino (CCoV) penetra pela via oral pela
ingesto de gua ou alimentos contaminados. O vrus
atinge o intestino pela passagem direta pelo trato
digestivo, pois resiste ao pH cido do estmago. No
intestino, o vrus infecta inicialmente as clulas das
vilosidades do duodeno e posteriormente se dissemina
at o leo. A replicao nas clulas absortivas das
vilosidades provoca uma enterite, que resulta em
reduo da absoro de nutrientes, diarria e
desidratao. O vrus excretado nas fezes um a dois
dias aps a infeco. OCCoVpode, ainda, disseminar-se
aos linfonodos mesentricos e, ocasionalmente, replicar
nobaoe fgado.
Figura 8.10. Patogenia da hepatite infecciosa canina. A
infeco pelo adenovrus canino tipo 1 (CAdV-1) pode
ocorrer pela via oral, nasofaringeal e/ou conjuntival,
seguida de replicao primria nas tonsilas e placas de
Peyer. Durante a viremia primria, o vrus se dissemina
no organismo e infecta as clulas endoteliais dos vasos e
as clulas parenquimais de vrios tecidos. A replicao
no parnquima heptico resulta em hepatite, com a
ocorrncia de hemorragia e necrose no rgo. Tambm
so encontradas leses na crnea e glomerulonefrite,
resultantes da deposio de imunocomplexos. Oepitlio
tubular renal um stio de acesso limitado do sistema
imune, permitindo a persistncia do CAdV-1 nesse local
por vrios meses.
ciam a sua disseminao e localizao no orga-
nismo. Cada vrus, em particular, produz um ou
mais padres caractersticos de disseminao e
localizao de suas infeces. importante res-
saltar que cepas ou isolados de um mesmo vrus
podem apresentar padres diferentes de dissemi-
nao e distribuio, podendo resultar em mani-
festaes clnico-patolgicas distintas. A seguir
sero abordadas sucintamente as caractersticas
das infeces nos principais rgos ou sistemas
do organismo. Detalhes da patogenia de cada in-
feco vrica sero abordados nos captulos espe-
ccos.
cional, pois o vrus se dissemina ao longo de cir-
cuitos neuronais sinapticamente ligados e infecta
as populaes de neurnios que recebem bras
dos neurnios previamente infectados. Durante
a transmisso transinptica, alguns vrions po-
dem se disseminar localmente e infectar clulas
vizinhas, mas esta infeco ca geralmente limi-
tada. O egresso de vrions dos corpos neuronais
no SNC, por outro lado, pode resultar em disse-
minao local e infeco de outros neurnios e
tambm de clulas da glia.
3.3.2 Infeces da pele e tegumento
As clulas da epiderme e derme se consti-
tuem em alvos de replicao de vrios vrus. Es-
ses tecidos podem se constituir nos stios de re-
plicao primria aps transmisso por contato,
A localizao especca das infeces, isto ,
a distribuio do vrus em rgos, tecidos e em
grupos de clulas especcas determinada por
vrios fatores, que incluem a via de penetrao e
replicao primria, a via de disseminao, o tro-
pismo tecidual e celular do vrus. Alm desses fa-
tores, as interaes do vrus com os mecanismos
imunolgicos do hospedeiro tambm inuen-
Figura 8.11. Patogenia da traqueobronquite infecciosa
canina. Essa enfermidade pode ser causada por vrios
agentes virais e bacterianos, incluindo o vrus da
parainfluenza canina (CPIV-2) e o adenovrus canino
tipo 2 (CAdV-2). Os agentes penetram pela via
respiratria e replicam inicialmente no epitlio da
nasofaringe. Posteriormente a infeco se dissemina
para o epitlio pseudo-estratificado ciliado da traquia.
A injria epitelial pela replicao viral e o processo
inflamatrio resultam em perda da funo ciliar,
aumentoda produode muco, coma ocorrncia de tosse
seca, engasgos e aumento da secreo nasal. A
progresso da infeco para o trato respiratrio inferior
depende da infeco concomitante com bactrias e o
quadro clnico-patolgico pode evoluir para
pneumonia, com tosse produtiva e febre. As infeces
pelo CPIV-2 e pelo CAdV-2 so geralmente restritas ao
sistema respiratrio, no causando viremia ou
disseminaosistmica.
Figura 8.12. Patogenia da cinomose canina. O CDV
penetra geralmente pela via oronasal e replica
inicialmente nos epitlios e em macrfagos das vias
areas superiores, faringe e tonsilas. A replicao
primria seguida de viremia que permite a
disseminao sistmica do vrus e infeco de uma
variedade de linfonodos e acmulos linfides, levando a
um quadro de imunossupresso. Em ces que no
conseguem montar uma resposta imune eficiente, o
vrus produz uma viremia secundria, dissemina-se e
replica em uma variedade de tecidos, incluindo clulas
epiteliais da pele, dos tratos digestivo, respiratrio e
urinrio, no sistema nervoso central e no sistema
retculo-endotelial. Esses animais podem apresentar
uma variedade de manifestaes clnicas, que possuem
correlao com os rgos/ tecidos afetados. A
incapacidade de erradicar o vrus pode resultar em
persistnciaviral noSNC.
212 Captulo 8
abrases, vetores mecnicos (alguns poxvrus e
herpesvrus, papilomavrus) ou se constituir em
stios de replicao secundria aps uma disse-
minao hematgena (alguns poxvrus, CDV).
Por outro lado, os vrus que replicam na pele
ou na transio muco-cutnea oronasal e genital
podem produzir infeces localizadas (papilo-
mavrus) ou se disseminar para outros rgos a
distncia pela via sangnea (vrios poxvrus e
alguns herpesvrus) ou neural (vrios herpesv-
rus). O tecido drmico e subdrmico so ricos em
clulas e capilares sangneos e linfticos, a partir
dos quais os vrus podem se disseminar pelo or-
ganismo (ver Figuras 8.3A e 8.4).
Os efeitos da replicao viral nesses locais
so mais pronunciados e visveis em reas des-
providas de plos, como as extremidades das
orelhas, a transio muco-cutnea do focinho, da
vulva, bere e tetas, prepcio e escroto. As in-
feces por contato freqentemente resultam em
leses delimitadas, com o desenvolvimento de
eritema e edema localizados, mculas, ppulas,
formao e ruptura de vesculas, pstulas e ero-
ses. As eroses e a contnua exsudao podem
levar ao acmulo de brina, formando membra-
nas nas que recobrem as leses e, posteriormen-
te, dessecam e formam crostas. A contaminao
bacteriana das vesculas pode levar formao
de pstulas. Na infeco por alguns vrus (p. ex.:
vrus do ectima contagioso dos ovinos), as cros-
tas que se desprendem das leses contm o vrus
e podem mant-lo vivel durante meses no meio
ambiente, servindo de fonte de infeco para ou-
tros animais.
Algumas infeces sistmicas podem resul-
tar na formao de eritema, petquias e sufuses
na pele e/ou mucosas, sem estarem necessaria-
mente associadas com a replicao viral nesses
locais. Nesses casos, essas patologias esto asso-
ciadas com alteraes/leses no endotlio vascu-
lares e/ou com decincias sistmicas na coagu-
lao sangnea (p. ex.: trombocitopenia).
Embora vrios vrus produzam infeces
cutneas e, assim, esto presentes nas leses,
nem todos utilizam esta via de excreo para se-
rem transmitidos. Excees so os herpesvrus,
alguns poxvrus e os papilomavrus, que podem
ser transmitidos de forma mecnica por vetores
ou por contato a partir das leses superciais (ver
Figura 8.5).
3.3.3 Infeces do trato respiratrio
Estima-se que aproximadamente 90%
das infeces respiratrias de animais possuam
etiologia viral, isoladamente ou em infeces
mistas. A anatomia e siologia do trato respira-
trio favorecem o estabelecimento de infeces
veiculadas por aerossis, poeiras ou transmitidas
por contato direto ou indireto. Dentre os fatores
que favorecem as infeces respiratrias pode-
se mencionar: a) a inalao contnua de grande
quantidade de ar potencialmente contaminado;
b) o hbito investigativo olfatrio de vrias esp-
cies animais; c) a grande superfcie das vias respi-
ratrias, que se estendem desde as fossas nasais
at os alvolos pulmonares; d) a diversidade do
epitlio que reveste os diferentes segmentos do
trato respiratrio; e) o gradiente de temperatura
entre as fossas nasais (33C) e os alvolos (tem-
peratura corporal), que favorece a replicao de
alguns vrus; f) alm dos aspectos que favorecem
a replicao viral no epitlio respiratrio ou em
tecidos anexos, a abundncia e acessibilidade do
tecido linfide e a irrigao presente nos tecidos
subjacentes facilita a disseminao sistmica des-
ses vrus (ver Figura 8.3B). Da mesma forma, a
anatomia especca do epitlio olfatrio fornece
uma conexo direta com o SNC, o que favorece a
invaso do encfalo por vrios vrus (ex. BoHV-
5). Por isso, apesar dos mecanismos naturais de
defesa (muco e epitlio ciliar), o epitlio do trato
respiratrio um importante local de replicao
para vrios vrus.
Os vrus que replicam no trato respiratrio
podem produzir infeces localizadas (p. ex.:
vrus da inuenza, vrus da parainuenza, v-
rus sinciciais respiratrios) ou se disseminar a
partir desse local e infectar outros rgos e sis-
temas (CDV, BoHV-1 e 5 e BVDV) (ver Tabela
8.3). Alguns vrus tendem a replicar nas vias a-
reas superiores, causando rinite ou rinotraquete
(rinovrus e BoHV-1), outros replicam em seg-
mentos intermedirios, provocando traquete ou
bronquite (vrus da inuenza), enquanto outros
atingem regies mais internas e podem estar as-
sociados com bronquiolite e pneumonia (vrus
sincicial respiratrio bovino, BRSV).
A replicao viral no epitlio respiratrio
acompanhada de edema e inamao, resultando
em interrupo da atividade ciliar, perda da in-
tegridade da camada de muco e destruio focal
ou multifocal de clulas epiteliais. A destruio
do epitlio e a perda da atividade ciliar contri-
buem para a colonizao bacteriana secundria.
O auxo de clulas inamatrias e acmulo de
transudato resultam no aumento da rea despro-
vida de muco e na exposio da superfcie celu-
lar. A infeco pode induzir a produo local de
citocinas, que exacerbam o processo inamatrio
e contribuem para a manifestao de sinais clni-
cos. Em estgios avanados, o edema da mucosa
associado com o acmulo de transudato, inl-
trado inamatrio e restos celulares necrticos
podem levar reduo importante do lmen e
conseqente diculdade respiratria. Contami-
naes bacterianas secundrias so freqentes
em vrias infeces vricas e, muitas vezes, so as
responsveis pela severidade do quadro clnico.
Alm dos vrus que produzem infeces lo-
calizadas pela sua replicao no epitlio respirat-
rio, outros vrus utilizam esse epitlio como porta
de entrada para a replicao primria e infeco
de outros rgos (ver Tabela 8.3). O BoHV-1 re-
plica no trato respiratrio e produz rinotraquete,
mas tambm pode se disseminar sistemicamente
e infectar o feto. O BoHV-5 e o PRV replicam no
epitlio nasal e invadem o SNC, onde replicam
maciamente e provocam meningoencefalite. O
BVDV pode penetrar e replicar na mucosa naso-
farngea, a partir da qual se dissemina sistemi-
camente e pode infectar o feto, podendo causar
aborto ou malformaes. O CDV tambm pode
utilizar a replicao respiratria como etapa ini-
cial de uma disseminao sistmica. Os parvov-
rus podem atingir o epitlio intestinal ou o feto
aps replicao primria e disseminao a partir
da mucosa orofarngea. Nos vrus que atingem os
rgos-alvo por viremia, a replicao secundria
ocorre no tecido linfide adjacente mucosa res-
piratria e tambm nos linfonodos regionais.
Os vrus que replicam no trato respiratrio,
produzindo infeces respiratrias ou sistmicas,
so excretados no muco nasal e/ou na saliva e
podem ser expelidos pela tosse, espirro, expecto-
raes ou durante a ingesto de gua e alimentos.
Esses agentes so transmitidos por contato direto
ou indireto e alguns podem ser veiculados por
aerossis a distncias relativamente grandes.
3.3.4 Infeces do trato digestivo
As infeces vricas do trato gastrintestinal
(TGI) so muito comuns, sendo superadas em
freqncia somente pelas infeces respiratrias.
A anatomia e siologia dos rgos que compem
o TGI tambm oferecem condies favorveis
para a instalao de infeces virais. Dentre estas
se destacam a exposio a uma grande quantida-
de de agentes ingeridos com a gua e alimentos,
a grande rea de superfcie e a existncia de dife-
rentes tipos de epitlio nos vrios segmentos do
TGI.
As infeces intestinais ocorrem de forma
direta, pela ingesto de partculas vricas (coro-
navrus, rotavrus e calicivrus), ou de forma in-
direta, por via hematgena aps a replicao viral
na orofaringe (parvovrus). Os vrus que atingem
o intestino aps a ingesto devem ser capazes de
resistir ao pH cido do estmago e aos sais bilia-
res do intestino delgado para estabelecer a infec-
o. Aps resistir a essas adversidades, o vrus
deve ultrapassar a camada de muco e penetrar
nas clulas epiteliais para iniciar a infeco.
De acordo com a sua biologia, os vrus asso-
ciados com infeco do TGI podem ser divididos
em trs grupos principais: a) os vrus associa-
dos primariamente com replicao no TGI e que
causam gastrenterite (parvovrus, calicivrus,
astrovrus, coronavrus e rotavrus); b) os vrus
excretados nas fezes, mas que no so enteropato-
gnicos (vrios enterovrus, picornavrus, alguns
adenovrus; vrus que causam hepatites); e c) v-
rus sistmicos que replicam no TGI e em outros
rgos, podendo estar associados com gastrente-
rite (exemplo: BVDV). Infelizmente, a biologia de
muitos vrus associados primariamente com gas-
trenterite muito pouco conhecida, pois muitos
deles no replicam bem em cultivo celular, o que
diculta o seu estudo e a produo de reagentes
para o diagnstico.
214 Captulo 8
Vrus de vrias famlias replicam no TGI e
esto primariamente associados com doena en-
trica e diarria. Embora esses agentes estejam
freqentemente associados com enterite com ca-
ractersticas clnicas semelhantes, a sua patoge-
nia apresenta algumas diferenas importantes. A
maioria desses vrus atinge o intestino pela via
oral e replica nos entercitos maduros das regi-
es mais altas das vilosidades do intestino del-
gado (ID) (Figura 8.13). Os vrus que replicam e
destroem essas clulas provocam a reduo da
capacidade digestiva e absortiva do rgo, re-
sultando em reteno de material parcialmente
ou no-digerido no lmen intestinal. Isso leva
reteno de gua, aumento de volume e fermen-
tao excessiva nos segmentos terminais do ID e
no intestino grosso, exacerbando o efeito osm-
tico que atrai gua para o lmen intestinal. Essa
condio conhecida como sndrome da m-ab-
soro primria.
Os parvovrus atingem o intestino delgado
pela via sangnea, aps a replicao na orofa-
ringe. Esses vrus infectam as clulas das criptas
intestinais, que so imaturas e se constituem nas
clulas progenitoras dos entercitos das vilosi-
dades (Figura 8.13). As clulas das criptas so os
alvos principais de replicao do CPV e FPLV,
pelo fato de apresentarem uma taxa acelerada de
diviso, o que favorece a replicao viral. Essas
clulas esto em diviso ativa, pois so encarre-
gadas de substituir gradativamente as clulas
das vilosidades que vo sendo esfoliadas. Com a
destruio das clulas das criptas pela replicao
viral, a substituio das clulas das vilosidades
se torna deciente. Isso leva tambm decin-
cia dos processos absortivos do ID, o que carac-
teriza a sndrome de m-absoro secundria. A
destruio das clulas das criptas pela replicao
viral resulta em achatamento das vilosidades e
reao inamatria severa. A destruio de en-
tercitos maduros leva exposio das camadas
adjacentes, hemorragia e desidratao. A presen-
a de sangue nas fezes se constitui em um achado
freqente em vrias infeces vricas intestinais,
podendo estar associada com nveis importantes
de mortalidade. Em ambos os casos, as vilosida-
des se tornam atroadas e achatadas, podendo
ocorrer necrose progressiva e descamao.
Embora a maioria desses vrus replique pre-
ferencialmente no epitlio do ID, alguns deles po-
dem infectar as clulas epiteliais das vilosidades
do intestino grosso. Em geral, a replicao desses
vrus ca restrita ao epitlio do intestino, com
pouca ou nenhuma replicao em clulas da l-
mina prpria e tecidos subjacentes. Outros vrus
infectam populaes especcas de clulas, alm
das clulas epiteliais, como os astrovrus (clulas
M e das placas de Peyer do ID).
Vilosidade
Clulas
das criptas
(mitticas,
secretrias)
m
o
v
i
m
e
n
t
o
d
o
s
e
n
t
e
r
c
i
t
o
s
e
m
m
a
t
u
r
a
o
Placas de Peyer
Linfonodo
Entercitos maduros
(no-mitticos,
absortivos)
A
Rotavrus
Astrovrus
Calicivrus
Coronavrus
Adenovrus
Torovrus
Torovrus
Astrovrus
Epitlio do Dome
(clulas M)
B
Parvovrus
Torovrus
Figura 8.13. Ilustrao simplificada da estrutura do epitlio do intestino delgado (A) e local de replicao de alguns
vrus entricos (B).
Fonte: adaptada de Conner e Ramig (1997).
O BVDV est freqentemente associado com
quadros de enterite, nos quais a replicao viral
nos epitlios e/ou no tecido linfide adjacente
resulta em leses erosivas e ulcerativas dissemi-
nadas pelo trato GI. Com certa freqncia, essas
leses podem ser observadas ao longo do TGI,
incluindo a lngua, mucosa oral, esfago, rmen,
abomaso e intestino delgado. Alm da replica-
o nas clulas epiteliais, o carter sistmico do
agente e a sua capacidade de replicar em clulas
do sistema linforreticular provavelmente contri-
buem para a patogenia dessas leses.
Os vrus que replicam no epitlio intesti-
nal ou em rgos anexos (fgado) geralmente so
excretados em altos ttulos nas fezes e so trans-
mitidos principalmente pela via fecal-oral. Esses
vrus so geralmente resistentes s condies
ambientais, o que favorece a sua sobrevivncia
no ambiente e transmisso. Os vrus hepatotr-
picos (p. ex.: CAdV-1 e hepadnavrus) tambm
so excretados nas fezes. Alguns vrus replicam
em rgos anexos ao trato digestivo e so excre-
tados pela saliva, podendo ser transmitidos por
mordeduras (vrus da raiva em ces, gatos e mor-
cegos; arenavrus entre roedores; herpesvrus B
em macacos) ou pelo contato direto ou indireto
com as secrees contaminadas (CDV, CAdV-1 e
FMDV).
3.3.5 Infeces do sistema nervoso
central
O SNC se constitui em rgo-alvo para a re-
plicao de diversos vrus, cuja infeco geral-
mente revestida de signicado especial pela sua
importncia. Os vrus que produzem infeces
neurolgicas e encefalite geralmente invadem o
encfalo atravs dos nervos, mas vrios deles po-
dem atingir esse rgo pela via hematgena. Os
vrus que replicam em clulas do sistema nervoso
so ditos neurotrpicos, mas a maioria deles tam-
bm capaz de replicar em outras clulas. Duas
propriedades devem ser denidas com relao a
infeco neurolgica por vrus. O termo neuroin-
vasividade se refere capacidade dos vrus atingir
o SNC aps a replicao em stios perifricos. Os
vrus que produzem infeces neurolgicas sob
condies naturais so neuroinvasivos, pois do
contrrio no seriam capazes de alcanar o en-
cfalo aps a sua penetrao no hospedeiro. O
termo neurovirulncia se refere capacidade dos
vrus de replicar, disseminar-se no SNC e produ-
zir doena neurolgica. Para a maioria dos vrus
que produzem infeces neurolgicas, estas duas
propriedades esto presentes simultaneamente.
No entanto, tem sido demonstrado que alguns
vrus podem ser neurovirulentos se inoculados
diretamente no SNC, mas no so capazes de
atingir o encfalo aps replicao em stios peri-
fricos. Ou seja, so potencialmente neuroviru-
lentos, mas no neuroinvasivos. Alguns isolados
do BoHV-1, por exemplo, s produzem infeces
neurolgicas em coelhos aps a inoculao intra-
tecal ou intracerebral, no sendo capazes de in-
vadir o encfalo aps a inoculao intranasal ou
intraconjuntival.
A via nervosa fornece um acesso direto ao
encfalo, pois os vrus so transportados ao lon-
go de bras conectadas sinapticamente. O trans-
porte ao longo de axnios e dentritos e a trans-
misso atravs das sinapses permite aos vrions
percorrer longas distncias e atingir o encfalo a
partir dos stios perifricos de replicao.
A penetrao de vrus no SNC a partir do
sangue oferece obstculos adicionais, representa-
dos pela barreira hematoenceflica. Essa barreira
formada pela estrutura especializada da parede
de certos capilares, que apresentam clulas en-
doteliais justapostas; pela lmina basal espessa;
pelo plexo coride; e pelo epitlio ependimal,
que no apresenta espao entre as clulas. Em-
bora estas barreiras sejam ecientes para evitar
a penetrao de alguns vrus no SNC, parecem
no serem capazes de impedir a penetrao de
outros. provvel que alguns vrus consigam ul-
trapassar essas barreiras; outros podem infectar
as clulas endoteliais e serem liberados na face
oposta; uma minoria parece ser transportada do
sangue para o tecido nervoso no interior de clu-
las sangneas.
Aps a penetrao no tecido nervoso, o v-
rus pode se disseminar localmente pela infec-
o de neurnios e clulas da glia localizadas
nas proximidades; pode se disseminar pelos
espaos intercelulares; e pode tambm atingir
regies mais profundas dos SNC por transpor-
216 Captulo 8
te tran sinptico. Embora as manifestaes clni-
co-patolgicas mais importantes das infeces
neurolgicas devam-se a distrbios funcionais e
morte dos neurnios, uma variedade de clulas
pode ser infectada e contribuir para as patologias
observadas. Ou seja, as patologias neurolgicas
nem sempre so derivadas exclusivamente da in-
feco viral dos neurnios. Para vrios vrus que
produzem infeces neurolgicas, as clulas-alvo
da replicao no SNC ainda no so perfeitamen-
te denidas. A identicao das clulas-alvo da
replicao se constitui em um ponto-chave para
o entendimento da patogenia de muitas infeces
vricas neurolgicas.
Os efeitos mais deletrios e mais estudados
das infeces neurolgicas por vrus se devem
destruio dos neurnios infectados. Dependen-
do do nmero de neurnios infectados e destru-
dos, esses eventos podem resultar em doena
severa e na morte do hospedeiro, como ocorre
em animais de laboratrio infectados experimen-
talmente com alguns buniavrus, vrus da raiva,
herpesvrus e alfavrus. A morte celular pode
dever-se a uma variedade de mecanismos, mui-
tos j descritos na seco referente s interaes
do vrus com as clulas hospedeiras (seo 2.1).
A induo de apoptose em neurnios tambm
tem sido implicada na patogenia de alguns vrus
neurovirulentos. O tropismo especco do vrus
por determinadas subpopulaes de neurnios
pode inuenciar o padro de neurovirulncia e
as conseqncias clnico-patolgicas da infeco.
O poliovrus, por exemplo, infecta preferencial-
mente neurnios do corno anterior da medula
espinhal, resultando em sintomatologia caracte-
rstica. O buniavrus La Crosse infecta as clulas
de Purkinge do cerebelo de camundongos infec-
tados experimentalmente. A via de inoculao
e penetrao no SNC tambm pode determinar
as caractersticas clnico-patolgicas da infeco.
O curso clnico e os sinais clnicos apresentados
por coelhos inoculados com o BoHV-5 variam
de acordo com a via de inoculao (intranasal e
conjuntival), provavelmente reetindo diferentes
padres temporais e espaciais de replicao viral
no encfalo.
Embora a infeco e destruio de neur-
nios seja o mecanismo mais atraente e talvez
aquele de ocorrncia mais freqente para expli-
car os distrbios neurolgicos associados com as
infeces vricas do SNC, a ocorrncia de doena
neurolgica grave sem infeco neuronal macia
tambm tem sido descrita em infeces vricas.
Isso demonstra que alguns vrus podem causar
disfuno neuronal grave sem infeco ou morte
de um nmero signicativo dessas clulas, o que
poderia explicar, em parte, os casos de recupe-
rao clnica que eventualmente ocorram aps
infeces neurolgicas. Em muitos casos, ocorre
a infeco de um nmero varivel de clulas da
micrglia, de astrcitos e de oligodendrcitos,
com um envolvimento pouco signicativo de
neurnios. possvel que produtos virais txicos
para os neurnios sejam liberados por essas clu-
las no meio extracelular. A liberao de citocinas
e outros mediadores qumicos inamatrios tam-
bm tm sido implicados na disfuno neuronal
observada nessas infeces. Em particular, o xi-
do ntrico que produzido por clulas da glia em
resposta infeco vrica pode ser deletrio para
os neurnios. De fato, tem sido demonstrado que
as interaes entre clulas inamatrias e neur-
nios podem resultar em toxicidade e disfuno
neuronal, sem necessariamente induzir a morte
de neurnios. Os mecanismos efetores celulares
e humorais da resposta inamatria tambm
podem potencialmente contribuir para a injria
e disfuno neuronal. Esses mecanismos podem
explicar, em parte, a ocorrncia de doena neuro-
lgica severa e at mesmo fatal, desacompanha-
da de infeco neuronal signicativa, como ocor-
re em algumas situaes.
Alm das infeces neurolgicas agudas
com conseqncias clnico-patolgicas variveis
e freqentemente fatais alguns vrus estabe-
lecem infeces persistentes no sistema nervoso.
Uma parte das infeces agudas resulta em mor-
te do hospedeiro dentro de poucos dias, tendo,
assim, importncia epidemiolgica limitada (p.
ex.: encefalites eqinas por alfavrus e avivrus,
raiva e cinomose). Por outro lado, as infeces
persistentes podem ter conseqncias epidemio-
lgicas mais importantes, pela perpetuao da
infeco nos hospedeiros. Para estabelecer uma
infeco persistente, o vrus no pode matar as
clulas infectadas; ele deve manter a sua replica-
o em nveis baixos e possuir estratgias para
escapar da vigilncia do sistema imunolgico.
De fato, nessas infeces, a extenso da injria
e leses geralmente muito pequena ou mesmo
ausente. Por outro lado, a persistncia viral em
clulas nervosas freqentemente associada com
imunopatologia em neurnios e clulas da glia.
O SNC apresenta caractersticas que podem
favorecer a persistncia de infeces vricas, entre
elas: possui uma populao estvel e heterognea
de clulas susceptveis a vrios vrus; uma rede
intrincada de processos (axnios e dendritos) que
permite a disseminao do vrus a longas distn-
cias; uma barreira hemato-enceflica que restrin-
ge o acesso de linfcitos T e anticorpos. No en-
tanto, alguns vrus infectam concomitantemente
clulas extraneurais e produzem viremia crnica,
indicando que o SNC pode no oferecer todas as
condies para a persistncia viral.
As infeces persistentes do SNC podem ser
classicadas em trs tipos principais, com conse-
qncias clnico-patolgicas e epidemiolgicas
diferentes: infeces latentes, infeces crnicas
defectivas e infeces crnicas produtivas. Os
alfaherpesvrus (PRV, BoHV-1, BoHV-5 etc.) es-
tabelecem infeces latentes em neurnios dos
gnglios sensoriais e autonmicos prximos ao
stio de infeco primria. Durante a infeco la-
tente, o genoma do vrus permanece inativo no
ncleo dos neurnios, sem expresso gnica ou
produo de prognie viral. Ocasionalmente, em
situaes de estresse, o vrus retoma a replicao
ativa e transportado de volta aos stios de pene-
trao, onde replica e excretado. A reativao
da infeco importante na epidemiologia des-
ses vrus, pois permite a excreo e transmisso
a outros animais. Algumas vezes a reativao
acompanhada de recrudescncia clnica, com o
desenvolvimento de leses no stio de penetra-
o, e tambm com o desenvolvimento espordi-
co de infeco neurolgica e meningo-encefalite
(BoHV-5). Ces que se recuperam da infeco
aguda pelo CDV acompanhada ou no de si-
nais clnicos podem car portadores do vrus,
que segue replicando em nveis muito baixos no
SNC, geralmente desacompanhado de excreo
viral. Eventualmente esses animais desenvolvem
um quadro de encefalite viral e vo a bito, mas
essa ocorrncia pode demorar anos. A persis-
tncia do vrus no SNC, aps a infeco aguda,
pode ser favorecida por mutaes que resultem
na produo de vrus defectivos. Outra forma de
infeco persistente no SNC a estabelecida pelo
retrovrus MVV, nos quais o vrus estabelece in-
feco crnica em clulas da linhagem macrofgi-
ca com produo de vrus ausente ou espordica.
O vrus da doena de Borna (BDV) de eqinos
tambm estabelece infeco persistente no siste-
ma nervoso, porm a produo de vrus parece
ser contnua, apesar de ocorrer em nveis baixos.

3.3.6 Infeces do sistema linforreticular
e hematopoitico
Vrios vrus utilizam clulas linforreticula-
res e/ou da linhagem hematopoitica como alvos
de replicao em infeces naturais. A variedade
de tipos celulares e a multiplicao contnua de
algumas dessas clulas favorecem a replicao
desses vrus. Da mesma forma, a contnua re-
circulao dessas clulas especialmente os lin-
fcitos favorece o carter sistmico dessas in-
feces. Em geral, a infeco se inicia nos rgos
linfides secundrios, aps a drenagem da linfa
dos tecidos ou com a passagem do sangue pelo
bao. Os vrus presentes na linfa e/ou sangue so
capturados por ou infectam clulas da linhagem
monoctica/macrofgica, clulas dentrticas ou
linfcitos dos linfonodos, bao, placas de Peyer
e outros acmulos linfides. A replicao viral
nessas clulas seguida da produo de prognie
viral que infecta um nmero adicional de clulas
prximas, alm de permitir a sua disseminao
sistmica atravs de clulas circulantes. Assim o
vrus pode se distribuir por outros rgos linfor-
reticulares e se disseminar nesses tecidos. Infec-
es de clulas progenitoras hematopoiticas da
medula ssea podem ocorrer nesses estgios da
infeco. Os macrfagos, clulas dendrticas, lin-
fcitos T e B so alvos de replicao de uma varie-
dade de vrus que causam doenas em animais.
Alm dessas, clulas progenitoras da linhagem
linfide, mielide ou hematopoitica da medu-
la ssea podem ser infectadas por alguns vrus e
comprometer a reposio das clulas sangneas
(alguns vrus induzem trombocitopenia).
218 Captulo 8
A infeco macia do sistema linforreticular
freqentemente leva depleo linfide e disfun-
o da resposta imunolgica. A disfuno do sis-
tema imunolgico pode resultar em decincias
na resposta a outros patgenos, com predisposi-
o a infeces secundrias. Vrios vrus animais
tm sido associados com infeco do sistema lin-
fide e induo de imunossupresso, incluindo o
vrus da doena de Gumboro em aves (IBDV), o
FIV e o vrus da imunodecincia bovina (BIV).
Outros vrus, como o BVDV, CSFV, CDV e CPV
podem estar associados com quadros transitrios
de supresso imunolgica. A imunossupresso
produzida por esses vrus pode dar-se em razo
de vrios mecanismos e ser abordada em seo
especca.
Alguns dos vrus mais virulentos para hu-
manos e animais esto associados com infeces
do tecido linforreticular e hematopoitico, in-
cluindo o vrus ebola (lovrus), arenavrus, han-
tavrus, o vrus da febre do vale Rift (um bunia-
vrus), o VEEV, CSFV e ASFV. Esses vrus esto
associados com doena severa, caracterizada pelo
curso agudo e pela ocorrncia de leses vascula-
res, disfunes hemodinmicas, de coagulao
sangnea e ocorrncia de eventos hemorrgicos.
Alguns isolados do BVDV tambm tm sido as-
sociados com doena aguda severa acompanhada
de componentes hemorrgicos. Essas enfermida-
des possuem algumas caractersticas em comum,
como o curso agudo, a ocorrncia de alteraes
vasculares, leses endoteliais com perda de lqui-
do vascular, proteinria e edemas. As manifesta-
es mais comuns da injria nos endotlios vas-
culares incluem hiperemia acentuada, petquias
e sufuses nas mucosas e serosas, equimoses e
hemorragias pontuais disseminadas em quadros
severos. Quadros de choque hipovolmico so
freqentes em estgios avanados da doena. As
hemorragias e extravasamento de plasma podem
ser por causa da injria nos endotlios vasculares
pela replicao viral nas clulas endoteliais, por
alteraes na coagulao sangnea (coagulao
intravascular disseminada com consumo de pla-
quetas) ou ainda por trombocitopenia primria.
3.3.7 Infeco fetal
Os tecidos embrionrios e fetais apresen-
tam uma alta taxa de multiplicao celular e, por
isso, constituem-se em stios de predileo para
a replicao de vrios vrus. Os vrus que infec-
tam o feto se disseminam pela via hematgena e
vrios deles produzem infeces inaparentes ou
leves nas fmeas prenhes. Nesses casos, as conse-
qncias maiores da infeco so devidas s per-
das reprodutivas. As conseqncias da infeco
fetal variam com a espcie e cepa do vrus, com
o status imunolgico da fmea e com a fase de
gestao em que ocorre a infeco. As infeces
que ocorrem em fases precoces da gestao so
geralmente acompanhadas de morte embrionria
ou fetal. Infeco fetal em estgios intermedirios
pode produzir teratogenia ou abortos e infeco
em fases avanadas pode induzir abortos, nati-
mortos ou resultar em resposta imunolgica e er-
radicao da infeco pelo feto.
A infeco fetal tambm pode representar
um meio para o vrus persistir na populao, pela
gerao de animais imunotolerantes e persisten-
temente infectados, capazes de disseminar o v-
rus por longos perodos. A produo de neonatos
persistentemente infectados caracterstica da
infeco fetal por cepas no-citopticas do BVDV
entre os 40 e 120 dias de gestao, e pode ocorrer
tambm com os pestivrus suno e ovino. Os efei-
tos da infeco fetal pelo BVDV esto ilustrados
na Figura 8.14.
Os efeitos observados no feto podem dever-
se replicao viral nos tecidos fetais e/ou repli-
cao na placenta e interferncia com as funes
placentrias. A mortalidade fetal pode ser segui-
da de reabsoro, mumicao fetal ou aborta-
mento. Os abortos associados com infeces vri-
cas geralmente ocorrem dias ou semanas aps a
infeco, o que diculta a deteco de vrus e/ou
produtos virais nos tecidos fetais e conseqente-
mente o diagnstico.
Dentre os vrus animais que produzem in-
feces embrionrias e fetais destacam-se:
herpesvrus de vrias espcies: mortalida-
de fetal, abortos, doena ou mortalidade neona-
tal;
pestivrus de bovinos (BVDV), sunos
(CSFV) e ovinos (border disease virus BDV): mor-
talidade fetal, abortos, malformaes, natimorta-
lidade, nascimento de animais persistentemente
infectados;
vrus da lngua azul (BTV, um orbivrus)
em ovinos e bovinos: mortalidade fetal, abortos,
malformaes congnitas;
parvovrus suno (PPV): reabsoro em-
brionria, mortalidade fetal, abortos, mumica-
o, natimortalidade;
vrus da panleucopenia felina (FPLV): hi-
poplasia cerebelar;
vrus da leucemia felina (FeLV): leucemia,
mortalidade fetal;
vrus da sndrome respiratria e reprodu-
tiva dos sunos (PRRSV) e vrus da arterite viral
eqina (EAV): mortalidade fetal, abortos;
vrus Akabane (ovinos e bovinos): morte
fetal, abortos, malformaes, natimortalidade;
vrus da febre do vale Rift (RVFV) em ovi-
nos: mortalidade fetal e abortos.
Perdas reprodutivas por alguns desses agen-
tes tambm tm sido relatadas aps o uso de va-
cinas atenuadas contendo os respectivos agentes.
Por outro lado, para os vrus que causam perdas
reprodutivas importantes, a vacinao deve ser
realizada antes da cobertura ou inseminao para
prevenir a infeco fetal e, assim, minimizar as
perdas.
Natimortos
Malformaes
Bezerros PI
Infertilidade
Abortos
BVDV
ncp ou cp
ncp
Soropositivo, sem o vrus
Bezerro PI
ncp ou cp
0 280 120 40 80 160 200 240
D I A S D E G E S TA O
Efeitos na
fertilizao,
implantao
Embrio muito
susceptvel
Imunotolerncia (PI)
Leses no SNC
Atrofia da retina
Cegueira
Abortos
Bezerros saudveis
soropositivos
Figura 8.14. Efeitos da infeco de fmeas bovinas prenhes pelo vrus da diarria viral bovina (BVDV). As
conseqncias da infeco dependem do status imunolgico da fmea, da cepa do vrus (biotipo e virulncia) e do
estgiodedesenvolvimentodoembrio/feto.
220 Captulo 8
4 Padres principais de infeco
A sobrevivncia dos vrus como espcie
depende de infeces sucessivas e contnuas de
diferentes indivduos e/ou de infeces prolon-
gadas no mesmo indivduo. Por outro lado, o re-
sultado da infeco viral em um animal depende
de interaes mltiplas entre componentes virais
e do hospedeiro. Objetivamente, depende do
balano entre as estratgias virais para se perpe-
tuar no organismo e dos mecanismos de defesa
do hospedeiro para erradicar o agente. Apesar
da diversidade dos vrus e da complexidade de
suas interaes com os hospedeiros, dois padres
principais de infeco podem ser reconhecidos:
as infeces agudas e as infeces crnicas (ou
persistentes). No entanto, variaes e combina-
es desses tipos tambm ocorrem com freqn-
cia (Figura 8.15).
Alguns vrus produzem infeces agudas, que
se caracterizam pela curta durao e rpida er-
radicao do agente pela resposta imunolgica
do hospedeiro. Outros vrus produzem infeces
persistentes ou crnicas, caracterizadas pela per-
manncia do agente no hospedeiro por longos
perodos, muitas vezes pelo resto da vida. A na-
tureza autolimitante das infeces agudas se deve
principalmente ecincia do sistema imunol-
Infeco Aguda
Infeco Latente
Infeco Persistente
Infeco Persistente
temporria
Replicao viral
Manifestaes clnicas
Figura8.15. Principais padres deinfeco.
gico do animal em combater e erradicar a infec-
o. Visto por outro ngulo, o carter transitrio
dessas infeces se deve incapacidade dos vrus
persistir no animal na presena da resposta imu-
nolgica. As infeces persistentes ou crnicas
tambm podem ser vistas sob duas ticas: a) do
ponto de vista do hospedeiro, a persistncia do
agente em seus tecidos reete a incapacidade do
sistema imunolgico de erradic-lo; e b) do ponto
de vista do agente, a persistncia o resultado
de estratgias evolutivas, que foram desenvolvi-
das para se adaptar ao hospedeiro e escapar da
vigilncia do sistema imunolgico, garantindo,
assim, a sua permanncia no animal.
4.1 Infeces agudas
A principal caracterstica das infeces agu-
das o curto perodo de tempo em que o vrus
replica no organismo do hospedeiro. o padro
de infeco mais estudado e conhecido e carac-
terstico de vrios vrus que replicam com ecin-
cia em animais e em cultivos celulares. O termo
aguda se refere rapidez de replicao e produ-
o de prognie viral, que seguida tambm por
uma rpida resoluo e erradicao da infeco.
Os nveis de replicao viral no organismo au-
mentam rapidamente, atingem um pico aps al-
guns dias e decrescem tambm com certa rapidez
(Figura 8.15). A reduo dos nveis de vrus no
organismo coincide com o desenvolvimento de
resposta imunolgica humoral (anticorpos) e ce-
lular (linfcitos T citotxicos). Em geral, a respos-
ta imunolgica capaz de erradicar o agente dos
tecidos aps alguns dias. Se, por um lado, o curto
perodo de replicao e excreo pode ser detri-
mental para a sobrevivncia do vrus na popula-
o, os altos ttulos de vrus que so excretados
favorecem a transmisso do agente.
importante ressaltar que o termo aguda se
refere cintica de replicao viral (nveis e tem-
po) e no s manifestaes clnicas. De fato, muitas
infeces agudas so absolutamente subclnicas,
ou seja, so desacompanhadas de manifestaes
clnico-patolgicas. No obstante, muitas vezes
as infeces agudas no podem ser controladas
pelo sistema imunolgico e resultam em doen-
a de severidade varivel, algumas vezes fatais.
Exemplos de infeces agudas incluem as infec-
es entricas por rotavrus em vrias espcies,
vrus da inuenza em sunos e eqinos, vrus da
raiva em vrias espcies, CPV, entre outras.
4.2 Infeces persistentes ou crnicas
As infeces crnicas ou persistentes se ca-
racterizam pela persistncia do vrus ou do ge-
noma viral no hospedeiro por longos perodos.
A maioria dessas infeces se inicia como uma
infeco aguda, caracterizada por uma rpida
replicao viral, acompanhada ou no de sinais
clnicos. No entanto, ao contrrio das infeces
agudas, a resposta imunolgica montada pelo
hospedeiro no capaz de erradicar o agente,
resultando na sua permanncia nos tecidos por
perodos variveis. Diferentes tipos de infeces
crnicas podem ser reconhecidos de acordo com a
biologia do agente, com a dinmica de replicao
viral (ausncia ou presena de replicao ativa) e
com a durao. Em geral, os nveis de replicao
e excreo viral nas infeces crnicas so muito
mais baixos do que nas infeces agudas e, algu-
mas vezes, podem ser dicilmente detectveis.
De acordo com a ocorrncia ou no de re-
plicao viral durante a persistncia, dois tipos
principais de infeces crnicas so reconheci-
dos: as infeces latentes e as infeces persisten-
tes. As infeces latentes so caracterizadas pela
permanncia do genoma viral nas clulas do hos-
pedeiro, na maior parte do tempo sem replicao
e produo de vrus. A replicao e produo de
prognie viral somente ocorrem em situaes es-
pordicas e duram horas ou poucos dias. J nas
infeces persistentes, a replicao viral ocorre
de forma contnua, em nveis variveis, e fre-
qentemente acompanhada de excreo do agen-
te. Em algumas infeces persistentes, no entan-
to, os nveis de replicao so to baixos e em
determinados tecidos do organismo que no
so acompanhados de excreo viral detectvel
(p. ex.: persistncia do CDV no encfalo de ces
adultos e persistncia do FMDV na faringe). Em
outras, a replicao e excreo viral ocorrem de
forma contnua e em nveis signicativos.
As infeces persistentes aquelas que cur-
sam com replicao viral contnua podem ser
agrupadas em duas classes, que so determina-
das pela biologia dos vrus e por suas interaes
222 Captulo 8
com o hospedeiro. Para alguns vrus, o estabe-
lecimento de infeco persistente uma regra
e ocorre em, virtualmente, todos os indivduos
infectados. Em outras palavras, a persistncia
uma caracterstica biolgica inerente s relaes
daquele vrus com os seus hospedeiros. Esse tipo
de infeco persistente se prolonga por tempo in-
determinado, provavelmente por toda a vida do
animal. Essas so as infeces persistentes clssicas
e so caractersticas das infeces pelos retro-
vrus animais, alm de outros vrus. Em outros
grupos de vrus, infeces persistentes podem
ser estabelecidas aps a infeco aguda, em um
nmero varivel de indivduos, e a persistncia
geralmente possui durao varivel, no necessa-
riamente indenida. Nesses casos, a persistncia
uma conseqncia provvel e muitas vezes
freqente da infeco, mas no se constitui em
regra ou padro biolgico da infeco por esses
vrus. Alm disso, grande parte dos animais que
se tornam portadores consegue erradicar a infec-
o aps algum tempo, determinando o m da
persistncia, ou seja, so infeces persistentes tem-
porrias (Figura 8.15).
Algumas infeces persistentes so acompa-
nhadas de sinais clnicos crnicos, que podem ser
brandos ou graves; outras vezes a infeco ab-
solutamente inaparente. Vrias infeces crnicas
resultam em patologias progressivas de desen-
volvimento lento (MVV, CAEV, vrus da pneu-
monia progressiva dos ovinos [OPPV] e FeLV),
em imunopatologia ou imunodecincia (EIAV,
FIV e LCMV) ou no desenvolvimento de neopla-
sias malignas (vrus da leucose aviria [ALV] e
BLV). Essas patologias so mais comumente ob-
servadas nas infeces persistentes clssicas.
Os locais de persistncia do vrus no so
necessariamente os mesmos em que o vrus re-
plicou e produziu patologias na fase aguda e, fre-
qentemente, incluem stios de acesso restrito do
sistema imunolgico. Os padres de replicao e
excreo viral durante as infeces crnicas tam-
bm so muito variveis. Em algumas infeces,
a replicao viral contnua e ocorre em nveis
moderados a altos; em outras, os nveis de repli-
cao so muito baixos, com pouca ou nenhuma
excreo viral. J as infeces latentes so carac-
terizadas por longos perodos de absoluta ausn-
cia de replicao viral intercaladas com episdios
espordicos de reativao, replicao e excreo
viral.
4.2.1 Infeces latentes

Esse tipo de infeco tpico dos alfaher-
pesvrus animais (BoHV-1, BoHV-5, PRV, EHV-
1, herpesvrus canino, herpesvrus felino, entre
outros) e se caracteriza pela permanncia do ge-
noma viral inativo em neurnios dos gnglios
sensoriais e autonmicos aps o trmino da repli-
cao na fase aguda. Durante a infeco latente
no ocorre produo de protenas virais, replica-
o do genoma ou produo de partculas vri-
cas. Com isso, os neurnios que abrigam o geno-
ma viral no so reconhecidos como infectados
pelo sistema imunolgico, o que permite ao vrus
escapar da vigilncia imunolgica. O genoma vi-
ral no integrado aos cromossomos celulares e
permanece como um epissomo, fortemente asso-
ciado com protenas celulares no ncleo dos neu-
rnios. Esporadicamente, geralmente associado
com situaes de estresse e produo de glico-
corticides endgenos, a infeco reativada e o
vrus replica de forma aguda e excretado. O pe-
rodo e a magnitude de excreo viral durante a
reativao so geralmente bem inferiores queles
observados durante a infeco aguda. A reativa-
o da infeco ocasionalmente acompanhada
de manifestaes clnicas, geralmente mais bran-
das do que aquelas observadas durante a infec-
o aguda. As reativaes ocorrem a intervalos
variveis (semanas, meses, anos) em uma parcela
dos indivduos e possvel que alguns hospedei-
ros no apresentem episdios de reativao. A
infeco latente representa um meio do vrus se
perpetuar no hospedeiro, e a sua reativao peri-
dica permite a sua excreo e transmisso.
4.2.2 Infeces persistentes ou crnicas
Essas infeces se caracterizam pela cont-
nua replicao e produo de partculas vricas
nos tecidos do hospedeiro por tempo ilimitado,
provavelmente por toda a vida do animal. pos-
svel se detectar o agente infeccioso em qualquer
momento aps a infeco aguda, desde que se
examinem os tecidos certos com tcnicas apro-
priadas. As infeces persistentes se estabelecem
porque o sistema imunolgico do hospedeiro no
consegue erradicar o vrus durante a infeco
aguda. Subseqentemente, por diferentes me-
canismos, o agente consegue coexistir com uma
resposta imune que mantm um controle parcial
da infeco, sem conseguir elimin-la totalmente.
Os nveis de replicao nesse tipo de infeco va-
riam de acordo com o vrus. Alguns vrus man-
tm nveis considerveis de replicao de forma
contnua; outros apresentam uma replicao
mnima, s vezes, de difcil deteco. As infec-
es pelos retrovrus animais (EIAV, BLV, FeLV,
CAEV, entre outras), BTV e infeco persistente
pelo BVDV so exemplos clssicos de infeces
vricas persistentes.
No caso dos retrovrus, a manuteno da in-
feco se deve integrao denitiva de cpias
DNA do genoma viral nos cromossomos das
clulas hospedeiras, ou seja, as clulas infecta-
das cam persistentemente infectadas e, caso se
multipliquem, transmitem o genoma viral para
a sua prognie. Assim, geraes sucessivas de
clulas produzem vrus infecciosos ao longo da
vida do animal. No caso do BLV, a manuteno
da infeco persistente deve-se principalmente a
divises celulares contnuas e transmisso do ge-
noma viral para a prognie, do que produo
de vrus infecciosos. interessante observar que
os retrovrus, alm de inserir o seu material ge-
ntico nos cromossomos do hospedeiro, tambm
sofrem contnuas mutaes que contribuem para
a sua perpetuao no animal infectado.
As infeces persistentes pelo BVDV somen-
te ocorrem em animais que tenham sido infecta-
dos intra-uterinamente, entre os 40 e 120 dias de
gestao. Esses animais se tornam imunotoleran-
tes e so incapazes de montar uma resposta imu-
nolgica contra o vrus infectante. Assim, o vrus
pode replicar continuamente em altos ttulos no
tecido linforreticular e epitlios dos animais, sem
a interferncia do sistema imunolgico.
4.2.3 Infeces persistentes temporrias
Em alguns vrus, a infeco aguda pode ser
seguida de persistncia do agente nos tecidos do
hospedeiro por perodos variveis. Em algumas
delas, a persistncia ocorre apenas em alguns
animais, no se constituindo em uma regra. Em
outros casos, as infeces crnicas que se seguem
s infeces agudas parecem ocorrer na maioria,
seno em todos os animais. Os nveis de repli-
cao e excreo viral variam de acordo com o
agente e com a resposta do hospedeiro. A dura-
o da persistncia tambm varivel, podendo
ser de meses e at anos (ou at mesmo por toda a
vida do animal). Naqueles casos em que a erradi-
cao do agente ocorre aps algum tempo, pro-
vvel que o vrus tenha esgotado o seu arsenal de
estratgias para persistir no animal, sendo even-
tualmente combatido pelo sistema imune. Vrios
vrus produzem este tipo de infeco. O PRRSV
permanece replicando nos testculos de repro-
dutores sunos por at seis meses aps a infec-
o aguda. O CAdV-1 tambm pode permanecer
durante meses replicando no epitlio dos tbulos
renais, que so locais de acesso restrito do sistema
imunolgico. A infeco pelo CDV um exemplo
de infeco que geralmente aguda na maioria
dos animais mas pode se tornar crnica em uma
parcela dos ces que no conseguem erradicar o
vrus na fase aguda. Nesses animais, o vrus per-
siste replicando em nveis baixos no SNC. Essa
replicao no acompanhada de excreo viral
em secrees ou excrees. A maioria desses ani-
mais eventualmente desenvolve doena neuro-
lgica de curso fatal, em um prazo que varia de
meses a anos. No caso do calicivrus felino (FCV),
a persistncia do vrus no hospedeiro parece ser
favorecida pela ocorrncia contnua de mutaes
genticas que resultam em variantes virais que
escapam da resposta imune do animal. O FMDV
produz uma infeco clnica aguda (febre aftosa)
que se resolve em poucos dias. No entanto, uma
parcela dos animais permanece abrigando o vrus
na faringe por um determinado tempo. Os nveis
de replicao so geralmente muito baixos e pa-
recem no ser acompanhados de excreo viral.
Alguns arenavrus e hantavrus produzem
infeces crnicas em roedores silvestres. Essas
infeces so acompanhadas por viremia prolon-
gada muitas vezes por toda a vida e de trans-
misso vertical do vrus para a prognie. J as
infeces crnicas por hantavrus so caracteriza-
das por viremia transitria seguida de excreo
prolongada de vrus pela saliva, secrees nasais,
fezes e urina. Esses vrus podem ser ocasional-
224 Captulo 8
mente transmitidos para humanos e so impor-
tantes causas de febres hemorrgicas. A Tabela
8.4 apresenta as principais caractersticas das in-
feces virais persistentes.
Retroviridae
BLV bovina Linfcitos B.
Maedi/ Visna ovina Moncitos e macrfagos.
CAEV caprina Linfcitos, SNC, epitlio alveolar, moncitos e
macrfagos.
FIV/FeLV felina Clulas mielides, linfcitos T e B.
EIAV eqina Macrfagos e linfcitos.
ALV aves Clulas linfides, mielides, renais, sseas,
endoteliais e mesenquimais.
ovina Clulas epiteliais do sistema respiratrio.
Tipo Vrus Famlia/subfamlia Espcie Local de persistncia
Herpesviridae/
Alphaherpesvirinae
BoHV-1 bovina
Gnglios sensoriais e autonmicos, tonsilas e
linfcitos T (BoHV-1.1), linfonodos da regio
sacral (BoHV-1.2).
BoHV-5 bovina Gnglio trigmeo e stios do SNC.
BoHV-2 bovina Gnglio trigmeo, pele e linfonodos.
CaHV-1 canina Gnglios sensoriais e autonmicos.
FHV-1 felina Gnglios sensoriais e autonmicos.
CpHV caprina Gnglios sensoriais e autonmicos.
PRV suna Gnglio trigmeo, bulbo olfatrio, tronco
cerebral, medula espinhal, tonsilas.
EHV-1, 3 e 4 eqina Gnglios sensoriais e autonmicos.
GaHV-1 aves Gnglios sensoriais e autonmicos.
Herpesviridae/
Betaherpesvirinae
PCMV (SHV-2) suna
Glndula salivar, epitlio vesical e clulas
mononucleares.
Herpesviridae/
Gammaherpesvirinae
MCFV (AHV-1) ruminantes Clulas linfoblastides.
EHV-2 e 5 eqina Clulas linfoblastides.
Adenoviridae DAdV-A aves Clulas da glndula da casca e do oviduto.
L
a
t
e
n
t
e
P
e
r
s
i
s
t
e
n
t
e
Coronaviridae FIPV felina Macrfagos.
Paramyxoviridae CDV* canina SNC (oligodendrcitos).
Caliciviridae FCV felina Epitlio respiratrio e anexos.
Flaviviridae
BVDV, BDV e
CSFV**
bovina, ovina e
suna
Clulas do sistema imune, SNC, medula
ssea, clulas endoteliais e clulas
epiteliais dos sistemas respiratrio e
digestrio.
Alphaherpesvirinae MDV (GaHV-2) aves Linfcitos T.
Adenoviridae EAdV-2 eqina Mucosa respiratria, adenides.
Parvoviridae PPV*** suna Tecido linfide, rins e testculos.
BTV bovina e ovina Clulas hematopoiticas.
Reoviridae
DHBV, WHBV,
GSHBV
patos, gansos,
marmotas, esquilos
ovinos
Hepatcitos. Hepadnaviridae
V Jaagsiekte
OPAV
rus
Tabela8.4 Stios depersistnciadevrus queestabeleceminfeces latentes oupersistentes nos hospedeiros
4.3 Mecanismos envolvidos na
manuteno das infeces persistentes
Os mecanismos envolvidos no estabeleci-
mento e manuteno das infeces persistentes
so muito complexos e pouco esclarecidos at o
presente. No entanto, independentemente dos
mecanismos responsveis, a manuteno de uma
infeco vrica no organismo deve preencher trs
condies essenciais: a) a infeco celular deve
ser no-citoltica (ou de citopatogenicidade limi-
tada); b) manuteno do genoma viral nas clu-
las do hospedeiro, e c) evaso da resposta imune
do hospedeiro. Vrios mecanismos adicionais ou
complementares tm sido sugeridos para expli-
car a persistncia desses agentes em tecidos do
hospedeiro, por longos perodos, a despeito da
resposta imunolgica desencadeada contra eles.
provvel que nenhuma infeco persistente seja
mantida por causa de apenas um desses mecanis-
mos; ao contrrio, provavelmente so mantidas
pela combinao de vrios deles.
4.3.1 Restrio do efeito citopatognico
Os vrus que produzem infeces no-cito-
lticas so mais propensos a estabelecerem infec-
es persistentes, pois a sua replicao no resul-
ta na destruio das clulas infectadas (ou resulta
em destruio limitada). Exemplos de vrus no-
citolticos que causam infeces persistentes so
alguns arenavrus (infeco renal persistente em
roedores), o BVDV (infeco de clulas do siste-
ma linforreticular) e o vrus da hepatite B (infec-
o no-citoltica de hepatcitos).
4.3.2 Infeco de clulas
semipermissivas
A replicao dos alfaherpesvrus em clulas
epiteliais e do tegumento altamente citoltica, o
que tambm observado em uma variedade de
clulas in vivo e in vitro. A infeco tambm ci-
toltica em vrios tipos de neurnios. No entanto,
alguns neurnios sensoriais e autonmicos no
so permissivos replicao ltica aguda. Como
Tabela 8.4 Continuao
Tipo Vrus Famlia/subfamlia Espcie Local de persistncia
P
e
r
s
i
s
t
e
n
t
e
t
e
m
p
o
r
r
i
a
Papillomaviridae
BPV-1 a 7 bovina Clulas epiteliais.
CaPV canina Clulas epiteliais.
EPV-1 e 2 eqina Clulas epiteliais.
Adenoviridae CAdV-1 canina Epitlio dos tbulos renais.
Asfarviridae ASFV suna e bubalina
Clulas mononucleares e fagocticas,
tonsilas e linfonodos.
Circoviridae PCV-1 e 2 suna
Clulas mononucleares sangneas,
macrfagos e linfcitos.
Picornaviridae FMDV
bovina, suna
e ovina
Mucosa da orofaringe.
Arteriviridae
PRRSV suna
Macrfagos, clulas germinativas
dos testculos.
EAV eqina
Macrfagos, clulas endoteliais e
mesoteliais.
TGEV suna Mucosas respiratria e intestinal.
Coronaviridae
IBV aves Clulas do epitlio renal.
* Alguns animais que se recuperam da doena ficam portadores,mas no excretam o vrus, que replica em nveis baixos no SNC.
**Fetos infectados em determinada fase de gestao ficam imunotolerantes e nascem persistentemente infectados.
***Alguns fetos infectados no tero se tornam imunotolerantes e ficam portadores, excretando o vrus por longos perodos.
BDV eqina Neurnios, astrcitos e oligodendrcitos. Bornaviridae
226 Captulo 8
conseqncia, aps penetrar e ter o seu ciclo re-
plicativo interrompido, o vrus estabelece infec-
es latentes nesses neurnios, ou seja, a infec-
o de clulas semi-permissivas infeco ltica
o mecanismo responsvel pela persistncia dos
alfaherpesvrus nos seus hospedeiros. Sob deter-
minadas condies, esses neurnios que abrigam
o genoma viral se tornam permissivos, o que de-
sencadeia a reativao e replicao viral.
4.3.3 Infeco de um pequeno nmero
de clulas
Essa forma de infeco tem sido observada
por alguns vrus in vitro e possvel que tambm
ocorra in vivo. Candidatos para esse tipo de mo-
dulao so os adenovrus e os arterivrus (EAV
em eqinos e PRRSV em sunos). A infeco per-
sistente no hospedeiro seria mantida atravs de
infeces sucessivas citolticas ou no de um
nmero pequeno de clulas a cada ciclo. Os vrus
produzidos por essas clulas infectariam outra
pequena populao de clulas e, assim, a infeco
se prolongaria sucessivamente. Provavelmente
algum mecanismo concomitante de evaso do
sistema imune seja necessrio para permitir a
ocorrncia dessas infeces continuadas, mesmo
em baixos nveis.
4.3.4 Manuteno do genoma viral nas
clulas hospedeiras
A manuteno do genoma viral nas clulas
do hospedeiro pode ocorrer por dois mecanis-
mos distintos: pela integrao do genoma viral
nos cromossomos da clula do hospedeiro, como
ocorre com as infeces pelos retrovrus, ou pela
manuteno do genoma como elemento extracro-
mossomal no ncleo da clula, como ocorre nas
infeces latentes pelos alfaherpesvrus e papilo-
mavrus.
4.3.5 Evaso da resposta imune
do hospedeiro
As estratgias de evaso do sistema imunol-
gico esto entre os mecanismos mais importantes
utilizados pelos vrus para assegurar a sua per-
sistncia no hospedeiro. Em muitos vrus, essas
estratgias provavelmente complementam os ou-
tros mecanismos envolvidos na permanncia do
agente no organismo. Os mecanismos mais utili-
zados pelos vrus para evaso da resposta imune
so: a) restrio de produo das protenas virais
(como no caso da latncia dos herpesvrus); b) in-
feco de locais imunologicamente privilegiados
(p. ex.: infeco das clulas do SNC pelo CDV e
e de clulas do epitlio seminfero dos testculos
pelo PRRSV); c) variao antignica (EIAV, FCV
e FMDV); d) tolerncia imunolgica (bovinos
persistentemente infectados pelo BVDV); f) inter-
ferncia com clulas e molculas do sistema imu-
nolgico (adenovrus e poxvrus).
5 Oncognese por vrus
A transformao celular e produo de tu-
mores esto entre as conseqncias da replicao
de alguns grupos de vrus nos seus hospedeiros.
De fato, acredita-se que uma parte considervel
dos tumores de humanos e animais possua a par-
ticipao direta ou indireta de agentes virais. De
acordo com o vrus, diferentes tipos celulares e
rgos podem ser afetados, com conseqncias
diversas. Alguns tumores induzidos por vrus
so benignos, mas uma parcela importante
constituda por neoplasias malignas que resul-
tam em doena progressiva e morte do animal.
Para alguns vrus indutores de tumores, os me-
canismos moleculares de oncognese j foram
razoavelmente esclarecidos. Para outros vrus,
no entanto, esses mecanismos permanecem obs-
curos e se constituem em temas de contnuas in-
vestigaes. Dentre os vrus animais associados
com neoplasias, encontram-se famlias de vrus
RNA (retrovrus) e DNA (poliomavrus, papilo-
mavrus, adenovrus e hepadnavrus).
5.1 Oncognese por retrovrus
Os retrovrus envolvidos com a produo
de tumores tambm chamados de oncornavrus
so amplamente distribudos na natureza e tm
sido isolados de virtualmente todas as espcies
animais. Esses vrus diferem entre si em relao
ao tropismo celular, potencial oncognico, per-
odo de incubao e mecanismo de oncognese.
Com base no tempo necessrio para a produo
dos tumores, os oncornavrus podem ser dividi-
dos em vrus transformantes no-agudos, agudos
e transindutores. Os retrovrus transformantes
no-agudos induzem a formao de neoplasias
aps um longo perodo de incubao (meses at
dcadas), assim como os transindutores. Os re-
trovrus transformantes agudos induzem tumo-
res em um intervalo menor de tempo (semanas).
Os mecanismos de oncognese tambm variam
entre os grupos.
Os retrovrus transformantes no-agudos
esto envolvidos em vrios tipos de neoplasias,
incluindo linfomas e leucemias. Esses vrus no
possuem genes especcos com atividade onco-
gnica no seu genoma. Ao contrrio, induzem
oncognese pela integrao do seu genoma (pro-
vrus DNA) nas proximidades de proto-oncoge-
nes celulares ou de genes envolvidos no controle
do ciclo e diferenciao celular. Com isso, a ex-
presso desses genes alterada e pode levar
transformao tumoral. Este processo denomi-
nado de oncognese insercional.
Os retrovrus transformantes agudos podem
induzir a formao de tumores dentro de poucos
dias. Ao contrrio do grupo anterior, esses vrus
possuem oncogenes (genes oncognicos) no seu
genoma. Mais de 30 diferentes oncogenes j fo-
ram identicados no genoma de retrovrus ani-
mais e todos eles parecem ter sido adquiridos
integralmente ou por rearranjos do genoma dos
hospedeiros em infeces passadas. As funes
dos produtos desses oncogenes so variveis e
incluem desde quinases at fatores de transcri-
o. Uma caracterstica comum a quase todos os
oncogenes retrovirais identicados at o presente
que os seus produtos esto envolvidos em me-
canismos de sinalizao intracelular (signal trans-
duction). Retrovrus com essas caractersticas j
foram identicados em vrias espcies animais e
tm sido associados com uma grande variedade
de tumores, incluindo sarcomas, carcinomas e
linfomas em aves; sarcomas e linfomas em roedo-
res; brossarcomas e linfossarcomas em felinos; e
sarcoma em primatas.
Os retrovrus transformantes transindutores
produzem leucemias monoclonais de linfcitos T
e B aps um longo perodo de incubao. Entre
esses vrus se destacam o vrus da leucemia de
linfcitos T humano (HTLV) e o BLV. O genoma
desses vrus no possui oncogenes e o mecanismo
de induo da oncognese difere daqueles dos
dois grupos anteriores. A transformao tumo-
ral induzida por esses vrus parece estar ligada
funo dos produtos de dois genes acessrios, tax
e rex, que tambm possuem papel importante no
ciclo replicativo do vrus. A protena Rex essen-
cial para o ciclo replicativo ltico do HTLV, mas a
sua participao na oncognese permanece des-
conhecida. J a protena Tax necessria para o
ciclo ltico e tambm para a transformao tumo-
ral das clulas hospedeiras. Esta protena um
potente transativador de transcrio do provrus
viral e tambm de vrios genes celulares. J foi
demonstrado que vrios genes celulares que pos-
suem um papel potencial na regulao do ciclo
celular podem ser ativados pela protena Tax. Por
isso a ativao de genes envolvidos no controle
do ciclo celular um dos provveis mecanismos
de oncognese pelos retrovrus transindutores.
5.2 Pequenos vrus DNA tumorignicos
Algumas famlias de vrus DNA possuem
membros que tm sido associados com tumores,
seja em infeces naturais ou aps inoculao
experimental. Alguns deles produzem tumores
em animais e, por isso, possuem importncia em
medicina veterinria. Em particular, alguns vrus
das famlias Polyomaviridae e Papillomaviridae tm
sido associados com tumores em seus hospedei-
ros naturais e tm comprovado o seu potencial
oncognico aps inoculao em hospedeiros he-
terlogos. O primeiro vrus DNA tumorignico
identicado foi o CRPV (papilomavrus dos co-
elhos cauda-de-algodo) que causa papilomas
cutneos benignos nos hospedeiros naturais.
Quando inoculado em coelhos domsticos, no
entanto, o CRPV induz papilomas que tendem a
progredir e se tornar carcinomas. Vrios aspectos
da tumorignese associada com infeces virais
foram estudados nesse modelo animal. O papilo-
mavrus de camundongos tambm tem sido as-
sociado com tumores mltiplos, sobretudo aps
inoculao experimental em neonatos. O vrus
228 Captulo 8
smio 40 (SV-40), tambm um membro da famlia
Polyomaviridae, capaz de produzir tumores em
hamsters recm-nascidos. O SV-40 tambm tem
sido associado com alguns tumores raros em pes-
soas que foram vacinadas h aproximadamente
50 anos com uma vacina antipoliomielite conta-
minada com o vrus. Os papilomavrus bovinos
(BPVs) tambm tm sido associados com a indu-
o de tumores nos seus hospedeiros. O BPV-1
est associado com papilomas e bropapilomas,
tumores cutneos de carter benigno e com fre-
qncia muito menor, a tumores cutneos malig-
nos. O BPV-4 est associado com a produo de
carcinomas de laringe e esfago em bovinos, cuja
etiologia parece estar combinada com a intoxica-
o por samambaia. Os papilomavrus humanos
16 e 18 (HPV-16; HPV-18) esto envolvidos na
produo de um dos tumores mais freqentes
em humanos, o carcinoma de colo de tero de
mulheres.
Os mecanismos pelos quais esses vrus in-
duzem transformao neoplsica nas clulas hos-
pedeiras tm sido intensivamente estudados nas
ltimas dcadas. A capacidade oncognica desses
vrus tem sido atribuda a uma ou mais protenas
virais que se ligam e inativam protenas celula-
res envolvidas na regulao do ciclo celular. Em
particular, as protenas celulares pRb e p53 so os
alvos para o antgeno T, dos poliomavrus, e para
as protenas E6 e E7 dos papilomavrus. As pro-
tenas da famlia da pRb e p53 exercem um papel
regulatrio-chave no controle da estabilidade do
genoma, na proliferao, diferenciao e apopto-
se em clulas de mamferos. A sua inativao pe-
las protenas virais citadas resulta no descontrole
do ciclo celular e eventualmente pode resultar
em transformao neoplsica.
Os vrus da famlia Hepadnaviridae, tambm
conhecidos como vrus das hepatites B, tambm
tm sido associados com a produo de tumores
em seus hospedeiros naturais. Alm do vrus da
hepatite B humana (HBV), os hepadnavrus de
esquilos (GSHV) e de marmotas (WHV) esto
associados com o desenvolvimento de carcino-
ma hepatocelular, que ocorre ocasionalmente em
hospedeiros com hepatite crnica. Os mecanis-
mos responsveis pela transformao neoplsica
que ocorre nas infeces crnicas pelos hepadna-
vrus no esto completamente esclarecidos. V-
rios mecanismos tm sido propostos e acredita-se
que a oncognese pode resultar da combinao
de mais de um deles. Os mecanismos propostos
incluem: a) ativao de proto-oncogenes celula-
res pela insero do genoma viral nos cromos-
somos; b) ativao de proto-oncogenes celulares
pela protena X; c) injria e inamao heptica
crnica, com produo de substncias potencial-
mente mutagnicas. Em geral, o desenvolvimen-
to do carcinoma hepatocelular precedido por
uma infeco heptica crnica de longa durao.
6 Imunopatologia em infeces
vricas
O sistema imunolgico o responsvel pela
proteo do organismo contra agentes agresso-
res, porm a ativao da resposta imune nem
sempre capaz de controlar a infeco. Alm
disso, em determinadas situaes, a resposta
produzida pode induzir leses imunomediadas,
determinando a ocorrncia da doena. Vrias do-
enas vricas, como a AIDS, a dengue, a anemia
infecciosa eqina e a artrite-encefalite caprina,
entre outras, apresentam as leses resultantes da
resposta imunolgica como componentes de sua
patogenia.
A resposta imune em infeces vricas tem
como objetivo a eliminao e/ou neutralizao
das partculas virais livres, pela ao de anticor-
pos e do complemento; alm da destruio das
clulas infectadas, pela citotoxicidade celular
dependente de anticorpo (ADCC), linfcitos T
citotxicos (CD8+) e lise por clulas natural killer
(NK). Em algumas situaes, essa resposta su-
ciente para eliminar o vrus do organismo. No
entanto, em outras situaes, essa resposta pode
causar injria tecidual, doena e at matar o hos-
pedeiro. Em alguns casos, comum a coexistn-
cia do hospedeiro com o vrus, com a ocorrncia
de injrias celulares e teciduais mnimas, muitas
vezes sem o comprometimento da sade geral do
animal.
O grau de leso que a resposta imunolgica
pode produzir no hospedeiro depende, em parte,
dos rgos envolvidos. Se a infeco ocorre no
SNC ou no corao, as leses so geralmente gra-
ves, enquanto uma resposta localizada na pele,
por exemplo, possui conseqncias limitadas.
Os vrus podem induzir imunopatologias
por diferentes mecanismos, como a induo de
auto-imunidade, imunossupresso e pela depo-
sio de imunocomplexos, que caracteriza a re-
ao de hipersensibilidade do tipo III. As leses
imunomediadas ocorrem com maior freqncia
em infeces persistentes ou crnicas, e princi-
palmente em infeces por vrus no-citolticos.
6.1 Imunopatologia mediada
por imunocomplexos
A conseqncia imunopatolgica mais fre-
qente em infeces vricas agudas ou persis-
tentes a formao de imunocomplexos. Esses
complexos so formados por anticorpos ligados
a partculas vricas ou a antgenos virais solveis.
Quando esses imunocomplexos so produzidos
em excesso, podem resultar em imunopatologia.
Isso ocorre quando os antgenos virais no so
eliminados ecientemente ou quando a replica-
o do vrus no controlada de forma eciente
pelo sistema imunolgico. Dependendo do tipo
de anticorpo e da sua capacidade neutralizante,
os complexos podem carrear vrus viveis que
podem penetrar produtivamente em clulas que
possuam receptores para anticorpos (receptores
para a poro Fc), como macrfagos e linfcitos
ativados. Leses de glomerulonefrite imunome-
diada so freqentemente observadas em infec-
es vricas como a hepatite infecciosa canina, pe-
ritonite infecciosa felina, imunodecincia felina,
peste suna clssica, peste suna africana, entre
outras.
Doenas mediadas por imunocomplexos so-
mente ocorrem quando a sua produo excede a
capacidade do organismo de remov-los dos te-
cidos e uidos corporais. Em condies normais,
os imunocomplexos produzidos so removidos
atravs de fagocitose por macrfagos e clulas
mesangiais antes que eles se depositem e causem
algum tipo de leso. Quando em excesso, a de-
posio dos imunocomplexos ocorre geralmente
em locais com funo de ltragem de lquidos
orgnicos, como os glomrulos renais, a parede
dos vasos sangneos, as membranas sinoviais e
o plexo coride. As leses causadas pela deposi-
o dos imunocomplexos no so resultantes da
sua ao fsica e sim da ativao local do com-
plemento e dos eventos inamatrios resultantes
dessa ativao.
A deposio de imunocomplexos na pare-
de dos vasos e nos tecidos seguida do aumento
da permeabilidade vascular local, mediada por
aminas vasoativas como a histamina e seroto-
nina. A ligao da regio Fc dos anticorpos dos
imunocomplexos a receptores Fc das membranas
provoca a liberao das aminas vasoativas prove-
nientes de baslos, plaquetas e mastcitos que
circulam no local da deposio. A poro Fc se
liga ao componente C1 e ativa a via clssica do
complemento. Ocorre a atrao de neutrlos
para o local de deposio, e a formao do com-
plexo de ataque membrana (MAC), o que con-
tribui para a injria local.
Os receptores para a poro Fc das imuno-
globulinas G esto presentes no plexo coride,
onde possuem distribuio periventricular. A
localizao desses receptores parece ter relevn-
cia na distribuio das leses por deposio de
imunocomplexos observadas na infeco pelo
MVV e CAEV em pequenos ruminantes (ovinos
e caprinos).
Na anemia infecciosa eqina, os anticorpos
se ligam a vrions livres no plasma, e os imuno-
complexos so depositados principalmente nos
glomrulos renais, levando glomerulonefrite
imunomediada. A circulao desses imunocom-
plexos tambm pode levar hemlise, resultan-
do em anemia.
O FeLV pode induzir deposio de imu-
nocomplexos e imunodecincia. Algumas ve-
zes ocorrem altos nveis de antgenos virais e a
formao e deposio de imunocomplexos leva
glomerulonefrite imunomediada. Em outros
casos, ocorre depleo linfide, em parte pela
ADCC. Essa depleo leva a uma maior suscepti-
bilidade a infeces secundrias, como estomati-
tes crnicas, gengivites, leses de pele e abscessos
subcutneos.
As leses imunomediadas podem ocorrer
tambm como seqelas de infeces virais, sem
envolvimento direto na patogenia da infeco,
como a sndrome oftlmica que ocorre em ces
convalescentes da infeco pelo CAdV-1. A leso
caracterizada pela deposio de imunocomple-
230 Captulo 8
xos na crnea, resultando em opacidade, conhe-
cida como olho azul.
6.2 Imunopatologia mediada por
linfcitos T citotxicos
Os linfcitos T citotxicos (CTLs, CD8+) pos-
suem um papel relevante na erradicao de infec-
es vricas dos hospedeiros, pela sua capacidade
de identicar e lisar clulas infectadas por vrus.
Os CTLs reconhecem peptdeos virais conjuga-
dos com molculas do MHC-I na superfcie das
clulas infectadas, atravs das molculas TCR +
CD8. Alm de lisar clulas infectadas, os CTLs
parecem ser capazes de erradicar certos vrus (p.
ex.: vrus da hepatite B humana), sem a necessi-
dade de lisar as clulas infectadas, provavelmen-
te interferindo (atravs de citocinas) com alguma
etapa da replicao viral. Dessa forma, a infeco
aguda pelo HBV geralmente erradicada por
uma resposta vigorosa mediada principalmente
por CTLs especcos para antgenos do vrus.
Por outro lado, a resposta imunolgica de
alguns pacientes no consegue erradicar a infec-
o e esses indivduos se tornam portadores de
infeco heptica crnica. Nesses indivduos, a
resposta mediada por CTLs fraca ou indetect-
vel, provavelmente devido a uma expanso clo-
nal deciente. Essa resposta fraca e contnua tem
sido implicada na patogenia da infeco crnica,
levando a leses necro-inamatrias crnicas no
fgado, ou seja, a injria celular de intensidade
fraca, porm contnua, resultaria em um proces-
so inamatrio persistente que resulta em hepa-
tite crnica. Eventos semelhantes ocorrem em ca-
mundongos inoculados com o LCMV.
6.3 Imunopatologia por induo de
auto-imunidade
A induo de auto-imunidade outro me-
canismo de imunopatologia que pode ocorrer em
algumas infeces virais. Nesse mecanismo, pode
ocorrer estimulao antignica por determinantes
antignicos de protenas virais que sejam seme-
lhantes a protenas do hospedeiro ou por distr-
bios na ativao de linfcitos, que podem produ-
zir anticorpos contra protenas prprias. Assim,
os linfcitos T que possuem papel essencial na
resposta imune contra vrus so responsveis
pela modulao da intensidade da resposta, li-
mitando os danos causados por uma resposta
agressiva. A expanso clonal dessas clulas em
resposta a epitopos de protenas do hospedeiro,
evento que pode ocorrer em determinadas infec-
es vricas, est envolvido na induo de auto-
imunidade. Esse processo ocorre, por exemplo,
na encefalomielite murina de Theiler, em que a
resposta especca de clulas T ao vrus ocorre
junto com uma resposta imune contra a prote-
na bsica da mielina, induzindo desmielinizao
auto-imune.
7 Imunossupresso por vrus
Grande parte das infeces vricas acom-
panhada por disfunes no sistema imunolgico,
muitas das quais podem ser detectadas in vivo e
demonstradas experimentalmente in vitro. Fre-
qentemente, essas alteraes ocorrem concomi-
tantemente com uma resposta imunolgica efeti-
va contra o vrus que as induziu. Por outro lado,
alguns vrus suprimem a resposta imunolgica
contra os seus antgenos, proporcionando condi-
es para o estabelecimento de infeces prolon-
gadas ou persistentes. As alteraes imunolgicas
causadas por infeces vricas podem aumentar
a susceptibilidade do hospedeiro a infeces se-
cundrias, dicultar ou retardar a resposta contra
a prpria infeco, ou levar a um desequilbrio
amplo e duradouro na resposta imunolgica con-
tra vrios agentes. Falha em responder a outros
antgenos, tanto por vacinao como infeco
natural, resposta deciente em provas de hiper-
sensibilidade retardada e resposta proliferativa
e citotxica decientes, tm sido associadas com
diversas infeces vricas em humanos e animais.
Ativao policlonal de linfcitos B, que pode re-
sultar em um aumento inespecco do nvel de
imunoglobulinas plasmticas e dicultar o diag-
nstico sorolgico da infeco, alm de reduzir
a resposta a antgenos recm-introduzidos, tam-
bm tem sido identicada em algumas infeces.
Os mecanismos envolvidos nesses eventos,
no entanto, nem sempre so facilmente elucid-
veis, sobretudo pela diculdade de se mimetizar
experimentalmente in vitro a complexidade das
interaes imunolgicas que ocorrem in vivo. Em
geral, os mecanismos envolvidos com imunossu-
presso por vrus podem ser devidos replica-
o viral em clulas que participam da resposta
imunolgica, alterao da resposta imunolgica
normal pela resposta especca contra o vrus ou
a efeitos indiretos da replicao e/ou de produ-
tos virais. A Tabela 8.5 apresenta um resumo das
alteraes imunolgicas j identicadas em in-
feces vricas e os mecanismos potencialmente
envolvidos.
7.1 Replicao viral em clulas
envolvidas na resposta imunolgica

Diversos vrus replicam em clulas da linha-
gem mielide e/ou linfide, cujas clulas dife-
renciadas esto envolvidas com a resposta imu-
nolgica natural e adquirida. Para alguns vrus,
essas clulas se constituem nos principais alvos
da replicao, enquanto, para outros, elas repre-
sentam apenas uma parcela das populaes celu-
lares infectadas. A infeco e destruio de clu-
las imunolgicas o mecanismo mais atraente e
lgico na tentativa de explicar a imunossupresso
causada por vrus. No entanto, este no o ni-
Famlia Vrus
Flaviviridae
Picornaviridae
Retroviridae
Parvoviridae
Adenoviridae
Arteriviridae
Coronaviridae
Orthomyxoviridae
Paramyxoviridae
Rhabdoviridae
Arenaviridae
Reoviridae
Herpesviridae
Poxviridae
Famlia/
grupo
Alteraes imunolgicas Mecanismos
Susceptibilidade
a infeces
Proliferao
linfide
reduzida
Aumento nas
imunoglobu-
linas
Replicao em
clulas
imunolgicas
Ativao do
sistema
imune
Produtos de
moncitos e
linfcitos Th
Protenas
virais
+
+ +
+
+
+
+
+
+ +
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Tabela8.5. Principais alteraes imunolgicas e seus mecanismos deinduo, por diferentes grupos devrus
Fonte: adaptada de Griffin (1997).
232 Captulo 8
co e talvez nem seja o mecanismo mais relevante
envolvido na supresso da resposta imunolgica
por vrus.
Na verdade, na grande maioria das infec-
es vricas imunossupressivas estudadas, o per-
centual de clulas de determinada populao que
infectada raramente atinge 1%. Essa pequena
proporo infectada dicilmente seria suciente
para explicar a decincia imunolgica associada
com essas infeces.
O HIV, por exemplo, infecta linfcitos
TCD4+. Em clulas quiescentes, o vrus se encon-
tra em um estado de latncia, sem o genoma in-
tegrado nos cromossomos celulares. Por ocasio
da ativao dessas clulas, que seguida da inte-
grao do provrus DNA, a replicao viral ini-
ciada. A frao de linfcitos TCD4+ circulantes
que infectada situa-se em torno de 0,01 a 1%,
sendo que menos de 10% destas produzem pro-
gnie viral. Essa proporo de clulas infectadas
no justica as severas alteraes imunolgicas
observadas nos pacientes soropositivos, indican-
do a participao de outros mecanismos na imu-
nossupresso.
J o IBDV, um birnavrus de galinhas, infec-
ta liticamente populaes de linfcitos B que es-
to em diviso, resultando em imunossupresso
profunda pela extensiva perda dessas clulas.
Nos animais afetados, ocorre uma disfuno na
resposta humoral, mediada por linfcitos B.
Dentre os vrus animais que infectam clulas
do sistema imunolgico se incluem: a) vrus que
infectam linfcitos T: vrios retrovrus animais
(p. ex.: FeLV e FIV) e GHV-2 (vrus da doena de
Marek); b) vrus que infectam linfcitos B: birna-
vrus (IPNV e IBDV), vrus da leucemia murina
(MuLV), retrovrus smio, BVDV e BLV; c) vrus
que infectam clulas da linhagem monoctica-
macrofgica: VEEV, LCMV, vrus da inuenza,
vrus Maedi-Visna, CAEV, vrus da parainuen-
za, vrus da peste suna africana (ASFV). ASFV,
vrios coronavrus, circovrus, arterivrus (PRR-
SV, EAV, LDEV), EIAV e ALV.
7.2 Imunossupresso associada com a
ativao do sistema imune
Muitas alteraes da resposta imunolgica
ocorrem no contexto da resposta desencadeada
contra o vrus infectante. Seriam, portanto, con-
seqncias inevitveis da resposta necessria
para combater este agente e montar uma respos-
ta duradoura que proteja contra reinfeces. Nes-
se sentido, decincias imunolgicas podem ser
resultantes de: a) ativao generalizada de lin-
fcitos T sem os sinais apropriados (muitos dos
quais morrem por apoptose); b) produo anor-
mal (quantitativa e qualitativamente) de citoci-
nas; c) depleo de linfcitos T vrus-especcos
pela sua ativao em resposta ao agente. A parti-
cipao desses mecanismos na imunossupresso
evidenciada pelo fato de que os nveis mximos
de supresso coincidem com o aparecimento da
resposta imunolgica especca e erradicao do
agente. Esse tipo de imunossupresso tem sido
detectado em infeces pelo vrus da inuenza,
vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV), entre
outros.
7.3 Produtos de moncitos e linfcitos
ativados
Vrias interleucinas so produzidas por c-
lulas especializadas em resposta a infeces v-
ricas, incluindo os interferons do tipoI (IFN alfa
e beta), IL-2 e receptor de IL-2, entre outras. A
maioria dessas interleucinas atua modulando
e estimulando a resposta celular e/ou humoral
contra o agente infeccioso. No entanto, j foram
identicados vrios fatores produzidos por mo-
ncitos e linfcitos ativados que inibem a resposta
imunolgica. A resposta contra o vrus de New-
castle, por exemplo, caracterizada pela reduo
da atividade dos linfcitos T citotxicos contra
um segundo vrus, associada com supresso dos
nveis de IFN. As interleucinas 4 e 10 (IL-4, IL-10)
produzidas por linfcitos ativados suprimem a
funo de moncitos/macrfagos.
7.4 Protenas virais
Diversas protenas codicadas por vrus in-
terferem com a resposta imunolgica do hospe-
deiro, retardando ou suprimindo esta resposta,
permitindo, assim, a replicao e disseminao
do vrus no hospedeiro (Tabela 8.6). Algumas
dessas protenas podem ser secretadas pelas clu-
las infectadas e interferir com a funo de clulas
no-infectadas. J foi demonstrado, por exemplo,
que a hemaglutinina do vrus da inuenza afeta
diretamente a funo de neutrlos. Outras pro-
tenas virais podem se ligar a receptores de su-
perfcie celular e interferir com a sua funo. Por
exemplo, as glicoprotenas gE e gI do HSV (e pro-
vavelmente de outros alfaherpesvrus) se ligam
na poro Fc das imunoglobulinas, impedindo
que ocorra a ativao do complemento na super-
fcie de clulas infectadas e prevenindo, assim, a
destruio dessas clulas. Protenas virais podem
tambm atuar como superantgenos, ligando-se a
receptores de linfcitos T e estimulando-os at a
exausto e depleo. A protena E3/19 K dos ade-
novrus se liga com a cadeia pesada da molcula
de MHC-I, retendo-a no retculo endoplasmti-
co. Assim, as clulas infectadas pelos adenovrus
no apresentam peptdeos virais associados com
o MHC-I e no so reconhecidas pelos linfcitos
Tc. Alguns poxvrus e herpesvrus tambm su-
primem a expresso de MHC-I na superfcie das
clulas infectadas. Os poxvrus codicam prote-
nas que so secretadas pelas clulas infectadas e
interferem com a ao de interleucinas produzi-
das em resposta infeco. Alguns desses vrus
codicam uma protena que se liga ao fator de
necrose tumoral (TNF) e o impede de se ligar
superfcie das clulas infectadas. O vrus do mi-
xoma codica uma protena homloga ao recep-
tor do interferon gama (IFN ). Os vrus da vacci-
nia e cowpox codicam protenas que se ligam e
inibem a funo da IL-1, IFN- e TNF.
Em resumo, a infeco e alterao da funo
de clulas envolvidas na resposta imunolgica
no o nico mecanismo de imunossupresso
causado por vrus. provvel que a imunossu-
presso observada nas infeces vricas, em sua
maioria, deva-se interao de mltiplos fatores,
que incluem citocinas/interleucinas, infeco e
disfuno de clulas imunolgicas e efeitos de
protenas virais especcas.
Apresentao de antgenos
peloMHC-I a linfcitos
citotxicos
Produo de citocinas por
macrfagos
Produo de citocinas por
linfcitos Th
Lise celular mediada por
anticorpos e complemento
Vrus do herpes simplex
Vrus vaccinia
Adenovrus
Vrus do mixoma (Pox)
Vrus vaccina
Cowpox
Orthopox
Tanapox
Vrus do mixoma
Vrus do herpes simplex
Cadeia pesada MHC-I
gE+gI
gC
Poro Fc das Igs
C3b
VCP C3b+C4b
E3/19K
ICP47
UL-18
?
?
crmA
orfB8R
38kDa
37kDa
?
TAP
TNF
IFN gama
IFN gama
IFN gama, IL-2, IL-5
TNF
IL-1 beta
TNF
IL-1 beta
Beta 2-microglobulina Citomegalovrus
Famlia Vrus
Mecanismo efetor Vrus Protena viral Protena-alvo
Tabela8.6. Protenas virais queinterferemcoma respostaimunolgicadohospedeiro
Fonte: adaptada de Griffin (1997).
234 Captulo 8
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Luiz Carlos Kreutz
9
1 Introduo
2 Resposta imune inata
2.1 Interferon tipo I
2.2 Sistema complemento
2.3 Clulas natural killer
2.4 Clulas dendrticas
2.4.1 Interao entre as DCs e clulas NK
2.4.2 O papel das DCs na resposta imune adquirida
3 Resposta imune adquirida
3.1 Reconhecimento de antgenos pelo sistema imunolgico
3.1.1 Reconhecimento de antgenos pelos linfcitos B
3.1.2 Reconhecimento de antgenos pelos linfcitos T
3.2 Resposta imune celular
3.2.1 Importncia dos linfcitos Tc na imunidade antiviral
3.3 Resposta imune humoral
3.4 Respostas primria e secundria/memria imunolgica
3.5 As imunoglobulinas na defesa antiviral
3.5.1 Mecanismos de ao das imunoglobulinas
3.6 O papel da resposta humoral e celular na imunidade antiviral
4 Mecanismos virais de evaso da resposta imune
4.1 Infeces latentes no sistema nervoso central
4.2 Variaes antignicas
4.3 Induo de tolerncia
4.4 Integrao do material gentico viral no genoma do hospedeiro
4.5 Infeco de stios imunologicamente privilegiados
4.6 Interferncia com funes do sistema imunolgico
239
239
240
242
242
243
243
243
244
244
244
245
249
250
250
252
253
254
255
256
256
256
257
257
257
258
5 Consideraes nais
258
258
1 Introduo
A imunidade ou resistncia do hospedeiro
contra infeces vricas depende da atuao in-
tegrada da resposta imune inata e da resposta
imune adquirida. Os mecanismos envolvidos na
resposta imune inata atuam imediatamente aps o
contato do hospedeiro com os antgenos virais,
no possuem capacidade de discriminao entre
os vrus e no necessitam de exposio prvia
para serem desencadeados. Os mecanismos en-
volvidos na resposta imune adquirida, por sua vez,
desenvolvem-se seqencialmente e de forma
mais lenta e sincronizada, resultando na induo
de clulas efetoras, que iro combater o agente, e
de clulas de memria, que possuem vida longa
e que sero efetivamente reestimuladas em expo-
sies posteriores ao mesmo agente.
A diviso entre a resposta imune inata e
adquirida no absoluta, e essas duas formas
de resposta esto interligadas, atuando conjun-
tamente no combate aos agentes agressores. Os
principais protagonistas da conexo entre essas
respostas so as clulas dendrticas (dendritic cells,
DCs). Essas clulas circulam pelos tecidos perif-
ricos, onde capturam antgenos, e se dirigem aos
rgos linfides secundrios, onde estimulam as
clulas linfides. Alm disso, as infeces vricas
so acompanhadas de estmulos qumicos e celu-
lares que formam uma intrincada rede de infor-
maes, que visam maximizar o mecanismo imu-
nolgico mais efetivo contra a maioria dos vrus:
os linfcitos T citotxicos (Tc).
Os componentes da imunidade inata so ati-
vados precocemente aps a infeco e se encarre-
gam de limitar e restringir a replicao viral at
que os mecanismos da resposta imune adquirida
tenham sido desencadeados. Na resposta inata
contra vrus, atuam principalmente o interferon
do tipo I (IFN-I), clulas natural killer (NK) e os
componentes ativos do complemento. A resposta
imune adquirida mediada por clulas (linfci-
tos T) e por molculas circulantes (anticorpos),
produzidas por clulas derivadas dos linfcitos
B. As citocinas (ou interleucinas [ILs]) so pep-
tdeos produzidos por uma variedade de clulas
que moderam e inuenciam a funo de outras
clulas do sistema imunolgico.
2 Resposta imune inata
A resposta imune inata (tambm denomina-
da natural ou inespecca) mediada por clulas e
molculas. Previamente estimulao dessa res-
posta, mecanismos naturais de proteo contra a
penetrao de patgenos, como a pele, os plos,
o muco, enzimas, peptdeos antivirais e anti-bac-
terianos representam as barreiras iniciais contra
os agentes infecciosos. A ausncia ou disfuno
desses mecanismos provavelmente resultaria em
um aumento da freqncia e da severidade das
infeces. Embora sejam considerados compo-
nentes da imunidade inata, essas barreiras no
sero abordadas nessa reviso. Aqui, ser dado
enfoque aos mecanismos imunolgicos naturais
que efetivamente participam da imunidade anti-
viral e, principalmente, que cooperam com a ati-
vao da resposta imune especca.
A resposta imune inata assim denominada
em razo de algumas caractersticas peculiares,
tais como: a) atua imediatamente aps o con-
tato com o agente; b) no discrimina diferentes
tipos de antgenos; c) atua com intensidade rela-
tivamente constante e d) no possui memria.
questionvel se, agindo isoladamente, a resposta
inata seria capaz de erradicar uma infeco vri-
240 Captulo 9
ca estabelecida. No entanto, os seus mecanismos
efetores se constituem em obstculos importan-
tes, que retardam a progresso do processo infec-
cioso, controlando-o temporariamente e, assim,
permitindo o desenvolvimento da imunidade es-
pecca. Os principais componentes da resposta
inata contra vrus so representados pelo IFN-I,
sistema complemento, clulas NK e DCs. Esses
mecanismos so desencadeados seqencialmente
aps a infeco vrica e antecedem o desenvolvi-
mento dos mecanismos especcos (Figura 9.1).
2.1 Interferon
O primeiro obstculo infeco viral re-
presentado pelos IFN-I, que foram justamente
identicados pela sua capacidade de interferir
com a replicao viral. O IFN-I compreende dois
tipos principais: interferon alfa (IFN-) e interfe-
ron beta (IFN-), que so produzidos por vrios
tipos de clulas em resposta s infeces vricas.
Vrios vrus so potentes indutores de IFN-I, e
a sua induo est associada com a produo de
RNA de ta dupla no interior da clula durante a
replicao viral. A interao de alguns vrus com
os receptores celulares tambm parece estimular
a produo de IFN-I. Qualquer clula nucleada
capaz de produzir IFN-I em resposta a uma infec-
o por vrus, mas evidncias recentes indicam
que as DCs plasmacitides (pDCs) representam a
principal fonte dessa citocina.
O IFN-I produzido por clulas infectadas
secretado no meio extracelular e se distribui lo-
calmente, interagindo com as clulas vizinhas
e induzindo um estado de resistncia antiviral
(Figura 9.2). Essa interao mediada por recep-
tores especcos na superfcie celular, que esto
amplamente distribudos nos tecidos. A ligao
do IFN-I aos receptores desencadeia uma srie
de sinais intracelulares que induzem a transcri-
o de genes cujos produtos esto envolvidos na
resposta mediada pelos IFNs. Os principais efei-
tos antivirais do IFN-I so devidos degradao
de RNAs mensageiros (mRNA) e inibio da tra-
duo. Dessa forma, esta citocina inibe a sntese
de protenas na clula-alvo, tornando-a um meio
imprprio para a replicao viral, uma vez que
os vrus dependem integralmente da maquinaria
celular de sntese protica para a sua replicao.
Ativao de:
Clulas NK;
Linfcitos Tc;
Macrfagos.
Aumento da
expresso
do MHC-I
Estado de resistncia antiviral
-
(inibio da sntese protica, degradao de mRNA)
1
2 2 3 3
4
5
6
4
2
Figura 9.2. Induo e principais funes do IFN-I na resposta imune inata. A presena de RNA de fita dupla em
clulas infectadas por vrus induz a produo de IFN-I (1), que secretado no meio extracelular (2). O IFN-I interage
com receptores nas clulas vizinhas (3) e desencadeia uma srie de reaes que resultam na induo de um estado de
resistncia antiviral (4). OIFN-I tambmpromove umaumentona expressodoMHC-I (5), almde ativar clulas NK,
linfcitos Tc e macrfagos (6).
Resposta imunolgica contra vrus 241
O IFN-I desencadeia uma srie de reaes
intracelulares que levam expresso da enzima
2-5-adenilato sintetase. Essa enzima sintetiza
oligmeros de adenina (oligo-A), que, por sua
vez, ativam a endorribonuclease RNAse L. A
ativao da RNAse L resulta na degradao de
mRNA celulares e virais. Alm disso, o IFN-I
promove a ativao da enzima protena kinase R
(PKR), que fosforila e inativa o fator de iniciao
da traduo (elongation initiation factor 2 - eIF-2).
Com isso, a traduo de mRNAs celulares e virais
tambm ca inibida. Outro grupo de IFN-I induz
um estado antiviral pela induo das protenas
Mx, que tambm contribuem para a inibio da
sntese protica celular.
O IFN-I atua tambm como fator de sobre-
vivncia para as pDCs, promove o desenvolvi-
mento, maturao e atividade microbiocida dos
macrfagos e ativa as clulas NK, que, por sua
vez, interagem sinergisticamente com as DCs.
Alm de seu papel na imunidade inata, o
IFN-I possui um papel importante no desenvol-
vimento da imunidade especca, por meio de
diferentes mecanismos, tais como: a) induo da
expresso de molculas do complexo de histo-
compatibilidade principal do tipo I (MHC-I), o
que favorece o processamento e a apresentao
de antgenos endgenos; b) ativao das DCs,
produzindo um aumento da expresso de recep-
tores e produo de citocinas; c) estimulao da
Figura 9.3. Mecanismos efetores associados com a resposta imune inata. A infeco viral (1) resulta na produo e
secreo de IFN-I pelas clulas infectadas (2). O IFN-I secretado induz um estado de resistncia antiviral nas clulas
vizinhas (3); ativa clulas NK (4), DCs (5), linfcitos Tc (6) e estimula a atividade fagoctica dos macrfagos (7).
Simultaneamente, a presena de vrions pode levar ativao do complemento (8); cujos componentes ativados
atraem e ativam fagcitos (9, 10), opsonizam vrions, facilitando a fagocitose (11) ou promovem a lise de vrus
envelopados (12).
1
2
3
4
7
6
5
8
9
10
12
11
Dcs
Linfcitos Tc
Fagcito
NK
Clula
infectada
Clulas vizinhas
242 Captulo 9
sobrevivncia e proliferao de linfcitos T de
memria; d) estimulao da produo de inter-
feron gama (IFN-) pelas DCs e linfcitos T; e)
participao direta e indireta na diferenciao e
atividade dos linfcitos B. Os mecanismos de ati-
vao e as atividades desempenhadas pelo IFN-I
na resposta imune infeces vricas esto ilus-
trados nas Figura 9.2 e 9.3.
2.2 Sistema complemento
O sistema complemento composto por um
conjunto de protenas presentes no plasma san-
gneo na forma inativa. Essas protenas podem
ser ativadas pela presena de complexos imunes,
formados pela ligao de imunoglobulinas com
antgenos (via clssica de ativao), pela deposi-
o espontnea do componente C3b do comple-
mento na superfcie de microorganismos (via al-
ternativa) ou devido ligao com protenas que
se ligam manose (via da lecitina). A ativao
do complemento por qualquer uma dessas vias
resulta em uma cascata de ativao seqencial,
com a formao de molculas intermedirias que
possuem diversas atividades biolgicas, princi-
palmente ligadas ativao do processo inama-
trio. Dentre as funes dos componentes ativa-
dos do complemento destacam-se: opsonizao;
quimiotaxia e ativao de neutrlos e outras
clulas inamatrias; degranulao de mastci-
tos com conseqente vasodilatao e aumento da
permeabilidade capilar e formao do complexo
de ataque membrana (membrane attack complex,
MAC), formado pela associao dos componen-
tes C5-9 e que se inserem na membrana de clulas
infectadas ou no envelope de vrions, resultando
na sua destruio.
O componente mais importante do comple-
mento denominado C3, que, a partir da ativa-
o da cascata, clivado de forma contnua e es-
pontnea, gerando os produtos C3a e C3b. Uma
vez produzido, o C3b se deposita em superfcies
que no possuam cido silico, como o envelope
de diversos vrus, e, assim, desencadeia a cascata
de ativao do complemento, que culmina com a
formao do MAC e com a destruio do vrion. A
presena de cido silico na superfcie das clulas
animais (e eventualmente em algumas bactrias
e fungos) torna-as resistentes ao complemento,
pois inibe a ligao de alguns componentes que
do continuidade cascata e posterior formao
do MAC.
2.3 Clulas natural killer
As clulas natural killer (NK) so derivadas
de progenitores linfides da medula ssea e foram
assim denominadas em razo de sua capacidade
de destruir clulas tumorais e clulas infectadas
por vrus na ausncia de um reconhecimento an-
tgeno-especco. Constituem o que se conven-
cionou chamar de terceira populao de linfcitos
(linfcitos B, T e clulas NK). Por no possurem
marcadores especcos de linfcitos B ou de lin-
fcitos T, foram inicialmente chamadas de clulas
nulas (null cells). As clulas NK esto presentes
principalmente nos tecidos linfides perifricos e
atuam direta, pela capacidade de destruir clulas
infectadas, e indiretamente mediante a secreo
de citocinas. A atividade das clulas NK precede
a ativao da resposta imune especca. A des-
truio de clulas infectadas por vrus realizada
inicialmente pelas clulas NK e, posteriormente,
pelos linfcitos Tc.
A capacidade das clulas NK em distinguir
clulas infectadas de clulas no-infectadas est
relacionada com a presena de receptores inibido-
res da destruio (killing inhibitory receptors = KIR)
na sua superfcie. Esses receptores reconhecem as
molculas do complexo de histocompatibilidade
principal do tipo I (MHC-I), que esto presentes
na superfcie de virtualmente todas as clulas do
organismo. A expresso do MHC-I est geral-
mente reduzida em clulas infectadas por vrus e
em clulas tumorais. Dessa forma, utilizando os
receptores KIR, as clulas NK podem detectar se
uma clula est expressando molculas do MHC-
I em nveis normais. A ligao dos KIR em mol-
culas do MHC-I inibe a ao das clulas NK. No
caso da expresso das molculas de MHC-I estar
reduzida, essa clula torna-se alvo de destruio
pelas clulas NK.
O mecanismo utilizado pelas clulas NK
para destruir as clulas-alvo semelhante ao uti-
lizado pelos linfcitos Tc. O contato com a clula
infectada estimula as NK a liberarem perforinas
no meio extracelular. As perforinas so protenas
semelhantes aos componentes C5-C9 do comple-
mento e produzem pequenos poros na membra-
na plasmtica da clula-alvo. As clulas NK libe-
ram ento as granzimas, que penetram por estes
poros e induzem morte celular por apoptose.
Durante a resposta inata, as clulas NK des-
troem clulas infectadas independentemente do
reconhecimento de antgenos especcos. No cur-
so da resposta imune especca e aps a produo
de anticorpos antivirais, as clulas NK tambm
podem participar da destruio de clulas infec-
tadas. Nesse caso, anticorpos produzidos contra
antgenos virais se ligam em antgenos virais pre-
sentes na superfcie das clulas infectadas. Essa
ligao facilita o seu reconhecimento pelas clu-
las NK, pois estas possuem receptores para a por-
o Fc das imunoglobulinas. Essa atividade de-
nominada citotoxicidade celular dependente de
anticorpos (antibody dependent cellular citotoxicity,
ADCC) e tambm pode ser mediada por outras
clulas que possuem receptores para a poro Fc
(macrfagos, neutrlos e eosinlos).
Alm de destruir clulas infectadas por v-
rus, as clulas NK contribuem para a defesa anti-
viral pela secreo de vrias citocinas, incluindo
o IFN- e fator de necrose tumoral alfa (TNF-).
Essas clulas tambm possuem receptores para
vrias citocinas (IL-2, IL-12 e TNF-) que podem
inuenciar na sua atividade.
2.4 Clulas dendrticas
As clulas dendticas (DCs) constituem uma
populao heterognea de clulas que diferem
entre si em relao origem, fentipo, localiza-
o, funo e necessidades para o desenvolvi-
mento. As DCs que se originam de progenitores
mielides da medula ssea so semelhantes aos
moncitos e so denominadas de DCs mielides
(mDCs). Por outro lado, as DCs que se originam
dos progenitores linfides so denominadas de
DCs plasmacitides (pDCs) e se assemelham aos
plasmcitos. As mDCs so encontradas em qua-
se todos os tecidos e rgos, com exceo do
crebro, dos olhos e dos testculos. So especial-
mente abundantes nos linfonodos, na pele e em
tecidos subjacentes a superfcies mucosas, locais
freqentes de penetrao de agentes virais. As
clulas de Langerhans (LC), por exemplo, esto
localizadas na epiderme; DCs intersticiais esto
localizadas na derme, nas mucosas e em tecidos
perifricos. Por outro lado, as pDCs encontram-
se principalmente nos rgos linfides, como a
medula ssea, timo, bao, tonsilas e linfonodos.
As mDCs desempenham a importante funo de
apresentar antgenos aos linfcitos T e transferir
antgenos aos linfcitos B, eventos que se consti-
tuem no principal elo entre a imunidade inata e
a imunidade adquirida. Alm disso, as pDCs so
as principais clulas produtoras de IFN-I durante
as infeces virais e participam ativamente da es-
timulao das clulas NK.
2.4.1 Interao entre as DCs e clulas NK
As DCs estimulam as clulas NK por meio
de mediadores solveis e tambm por contato di-
reto. A interao entre as DCs e as clulas NK
importante para a ativao das prprias DCs. A
ativao das DCs pelas clulas NK depende de
contato direto, da proporo NK:DCs e de citoci-
nas como o TNF-. Clulas NK pr-ativadas por
IL-2 so potentes estimuladoras das DCs, agindo
tanto de forma isolada como em sinergismo com
estmulos inamatrios, como os lipopolissaca-
rdeos (LPS). A interao entre as clulas NK e
DCs parece ocorrer nos locais da infeco, onde
existem DCs imaturas residentes e para onde
migram as clulas NK em resposta a estmulos
inamatrios. Essa interao pode ocorrer tam-
bm nos linfonodos e em outros rgos linfides
secundrios, para onde as DCs migram aps cap-
turar antgenos nos tecidos perifricos.
2.4.2 O papel das DCs na resposta
imune adquirida
As DCs constituem o principal elo entre a
imunidade inata e a imunidade adquirida. As
DCs so especializadas na captura e apresenta-
o de antgenos aos linfcitos T, evento essencial
para a estimulao dessas clulas em resposta a
antgenos. Por sua vez, a estimulao de linfcitos
Th resulta na produo de citocinas que ativam
tanto a resposta mediada por clulas (Tc) como a
resposta humoral (linfcitos B plasmcitos). Os
244 Captulo 9
estmulos para a proliferao dessas clulas so
fornecidos por mediadores solveis (citocinas ou
interleucinas) produzidos pelas prprias DCs, ou
no microambiente dos linfonodos, onde os linf-
citos so ativados.
As DCs encontram-se nos principais locais
de penetrao dos vrus e tambm nos linfonodos
e em outros tecidos linfides secundrios. Con-
seqentemente, o contato dos vrus ou de suas
protenas com as DCs praticamente inevitvel
e fundamental para que as DCs processem ade-
quadamente os antgenos virais e os apresentem
s diferentes populaes de linfcitos.
Os mecanismos envolvidos na resposta imu-
ne inata contra vrus esto ilustrados na Figura
9.3.
3 Resposta imune adquirida
Os mecanismos imunolgicos especcos
contra as infeces vricas so desencadeados
aps a estimulao direta ou indireta dos linfci-
tos T e B pelos antgenos virais e possuem como
caractersticas principais: especicidade (cada c-
lula reconhece apenas um determinante antig-
nico); diversidade (capacidade de reconhecer uma
grande variedade de antgenos) e memria imu-
nolgica (capacidade de produzir uma resposta
qualitativa e quantitativamente diferente em ex-
posies subseqentes a um determinado antge-
no). Alm disso, a resposta imune especca se
caracteriza pela tolerncia a antgenos do prprio
organismo.
De acordo com os mecanismos efetores, a
resposta imune especca pode ser dividida em
celular e humoral. A resposta celular media-
da pelos linfcitos T auxiliares (T helper ou Th)
e linfcitos Tc. A resposta humoral mediada
pelos anticorpos produzidos pelos plasmcitos,
clulas derivadas dos linfcitos B. Embora sejam
tratados separadamente com ns didticos, os
mecanismos envolvidos nessas duas respostas
so complementares e atuam conjuntamente no
combate s infeces vricas. A importncia rela-
tiva desses mecanismos, no entanto, varia entre
os diferentes vrus, de acordo com a sua biologia.
Para alguns vrus, a resposta mediada por linfci-
tos Tc fundamental na erradicao da infeco;
para outros, a resposta humoral desempenha um
papel mais importante na proteo. O conheci-
mento dos mecanismos especcos envolvidos na
resposta imunolgica contra cada vrus funda-
mental para a elaborao de vacinas.
A etapa inicial da resposta imunolgica es-
pecca o reconhecimento de antgenos pelos
linfcitos Th, Tc e B. Em resposta ao contato com
o antgeno, os linfcitos Th secretam vrias citoci-
nas, que estimulam a atividade de outras clulas
envolvidas na resposta imunolgica. Os linfcitos
Tc reconhecem e destroem clulas infectadas por
vrus e tambm secretam algumas citocinas. Esti-
mulados pelo contato com o antgeno, os linfci-
tos B proliferam e se diferenciam em plasmcitos.
Os anticorpos, produzidos pelos plasmcitos so
protenas solveis que possuem diversas funes
no combate aos agentes invasores.
3.1 Reconhecimento de antgenos pelo
sistema imunolgico
A capacidade de distinguir antgenos pr-
prios de antgenos no-prprios (neste caso, os
antgenos virais) se constitui no evento central
da resposta imune adquirida. Antgenos no-
prprios devem ser reconhecidos como tal, e o
seu reconhecimento deve induzir uma resposta
que resulte na sua eliminao e/ou inativao.
Por outro lado, os antgenos prprios devem ser
igualmente reconhecidos, porm devem ser tole-
rados. Ou seja, antgenos do prprio organismo
no devem estimular uma resposta imunolgi-
ca. A resposta imunolgica especca contra v-
rus mediada por diferentes subpopulaes de
linfcitos: os linfcitos Th, Tc e B. Essas trs po-
pulaes de linfcitos apresentam mecanismos
efetores distintos e reconhecem os antgenos de
formas diferentes. A seguir sero apresentados
os mecanismos de reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos B e T.
3.1.1 Reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos B
Os linfcitos B reconhecem os antgenos vi-
rais atravs de receptores de membrana denomi-
nados BCRs (B cell receptors). Os BCRs so mol-
culas de imunoglobulinas das classes IgD e IgM,
que possuem uma regio altamente varivel, ca-
paz de se ligar a uma variedade muito grande de
determinantes antignicos. Os BCRs podem se
ligar a antgenos de qualquer natureza qumica,
sejam protenas, carboidratos, lipdios ou outras
macromolculas, ou seja, os linfcitos B podem
reconhecer e responder a antgenos proticos e
no-proticos, desde que esses possuam regies
complementares s regies variveis dos seus
BCRs. Isso faz com que os linfcitos B reconhe-
am antgenos na sua forma nativa, solvel ou
no, sem a necessidade de processamento prvio.
No caso dos vrus, os principais antgenos reco-
nhecidos pelos linfcitos B so as protenas de
superfcie dos vrions, devido a sua localizao
e acessibilidade aos BCRs. Protenas virais inse-
ridas em membranas celulares, alm de prote-
nas secretadas pelas clulas infectadas, tambm
podem estimular os linfcitos B. Os linfcitos B
tambm podem reconhecer antgenos virais cap-
turados e armazenados na superfcie das DCs,
sob a forma de pequenas esferas (icossomos). Do
ponto de vista de proteo, os anticorpos induzi-
dos contra protenas de superfcie (do capsdeo
ou envelope) possuem importncia especial, pois
podem se ligar e neutralizar a infectividade dos
vrus.
Os locais de contato entre os antgenos e os
linfcitos B locais de reconhecimento do antge-
no so principalmente os rgos linfides peri-
fricos, dentre estes, os linfonodos.
3.1.2 Reconhecimento de antgenos
pelos linfcitos T
O reconhecimento de antgenos pelos linf-
citos T mais complexo e requer que o antgeno
seja previamente processado e apresentado por
clulas e molculas especializadas. Os linfci-
tos T no so capazes de responder a antgenos
em sua forma nativa, solvel ou no, e somente
so estimulados por antgenos proticos, ou seja,
apenas as protenas virais estimulam a resposta
celular. Dependendo da sua origem e da forma
como so processadas, as protenas virais podem
ser reconhecidas pelos linfcitos Th, pelos Tc ou
por ambos. A forma de reconhecimento de ant-
genos por esses dois tipos de linfcitos, no entan-
to, diferente:
3.1.2.1 Reconhecimento de antgeno
pelos linfcitos Th
Os linfcitos Th reconhecem antgenos virais
atravs de seus receptores de membrana, deno-
minados TCRs (T cell receptors), juntamente com
a molcula acessria CD4. Por isso, so tambm
chamados de linfcitos T CD4+. Para que um an-
tgeno protico seja reconhecido pelo complexo
TCR+CD4 e estimule o linfcito Th, ele deve ser
previamente processado e apresentado de forma
adequada por clulas especializadas. O processa-
mento do antgeno protico envolve a sua inter-
nalizao por endocitose ou fagocitose, clivagem
enzimtica em peptdeos de 12 a 16 aminocidos
e conjugao dos peptdeos com molculas do
complexo de histocompatibilidade principal do
tipo II (MHC-II). Esses processos ocorrem em
compartimentos citoplasmticos especializados
(endossomos, fagossomos e retculo endoplasm-
tico). Os complexos MHC-II + peptdeo so, en-
to, transportados at a superfcie celular, onde
cam expostos espera do reconhecimento pelos
linfcitos Th. O reconhecimento dos complexos
MHC-II + peptdeos realizado pelos receptores
TCR+CD4 existentes na membrana dos linfcitos
Th e resulta na ativao desses linfcitos. Essa
via de apresentao denominada exgena, pois
ocorre com protenas extracelulares que so pre-
viamente internalizadas e processadas. Protenas
estruturais dos vrions, protenas virais secreta-
das pelas clulas infectadas ou extravasadas no
meio extracelular aps a lise celular podem ser
processadas desta maneira e ser apresentadas
aos linfcitos Th. Em resumo, os linfcitos Th re-
conhecem antgenos virais proticos, desde que
devidamente processados e apresentados em as-
sociao com molculas do MHC-II por clulas
especializadas (Figura 9.4).
Embora um nmero grande de clulas do or-
ganismo seja capaz de capturar protenas e outras
macromolculas no meio externo e process-las,
somente um grupo restrito de clulas expressa
molculas do MHC-II. Dentre estas, incluem-se
246 Captulo 9
as clulas da linhagem monoctica/macrofgica
(moncitos, macrfagos, CDs, clulas interdi-
gitantes e LC), algumas clulas endoteliais e os
linfcitos B. Ou seja, somente essas clulas so ca-
pazes de apresentar antgenos virais presentes no
meio extracelular (exgenos) aos linfcitos Th. As
clulas que possuem como funo precpua a cap-
tura, processamento e apresentao de antgenos
aos linfcitos Th so denominadas genericamente
clulas apresentadoras de antgenos (APCs) pro-
ssionais e, dentre estas, destacam-se as DCs e os
macrfagos. Embora no se constituam em APCs
prossionais, os linfcitos B tambm apresentam
antgenos virais de forma eciente aos linfcitos
Th. A via exgena de apresentao de antgenos
aos linfcitos Th est representada esquematica-
mente na Figura 9.4.
3.1.2.2 Reconhecimento de antgeno
pelos linfcitos Tc
Os linfcitos Tc reconhecem protenas virais
atravs dos TCRs, juntamente com a molcula
acessria CD8. Por isso, essas clulas tambm so
chamadas de linfcitos T CD8+. Para que as pro-
tenas virais sejam reconhecidas pelos receptores
TCR+CD8 e estimulem os linfcitos Tc, tambm
devem ser adequadamente processadas e apre-
sentadas. No entanto, essa forma de processa-
mento e apresentao somente ocorre com as
Figura 9.4. Apresentao de antgenos virais extracelulares e resposta por linfcitos Th. Antgenos virais
extracelulares so internalizados por endocitose e/ou fagocitose (1) e processados proteoliticamente no interior de
vesculas (2), gerando peptdeos que so conjugados com molculas do MHC-II no retculo endoplasmtico (3). Os
complexos peptdeo-MHC-II so transportados at a superfcie celular (4), onde so reconhecidos pelos linfcitos Th
(5). Os linfcitos Th, estimulados por esse contato, secretam interleucinas (6) que possuem diversas aes
modulatrias sobre as clulas envolvidas narespostaimunolgica.
Clula apresentadora
de antgeno (APC)
ncleo
Linfcito Th
1
2
3
4
5
6
6
protenas sintetizadas no interior das clulas du-
rante a infeco, e no com protenas extracelu-
lares que so internalizadas. Por isso, essa via de
apresentao denominada endgena. Protenas
virais produzidas no interior das clulas durante
o ciclo replicativo so clivadas enzimaticamente
em peptdeos de 8 a 12 aminocidos, que so con-
jugados com molculas do MHC-I. Os complexos
MHC-I+peptdeos virais so transportados at
a superfcie celular, onde cam expostos (Figu-
ra 9.5). Esse um processo siolgico e resulta
tambm na apresentao de fragmentos de pro-
tenas celulares. No entanto, apenas os peptdeos
resultantes da clivagem das protenas virais so
capazes de estimular os linfcitos Tc. O reconhe-
cimento dos complexos MHC-I+peptdeo rea-
lizado pelos complexos TCR+CD8 existentes na
membrana dos linfcitos Tc. Essa interao gera
estmulos que, em conjunto com citocinas produ-
zidas pelos Th e DCs, levam ativao dos linf-
citos Tc. Resumindo, os linfcitos Tc reconhecem
protenas virais endgenas, aps o seu processa-
mento e conjugao com molculas do MHC-I.
Como, virtualmente, todas as clulas do organis-
mo com exceo dos neurnios expressam o
MHC-I, a infeco de quaisquer dessas clulas
por vrus ir resultar no reconhecimento e res-
posta mediada por linfcitos Tc. Acredita-se, no
entanto, que as DCs sejam mais efetivas na indu-
o dos linfcitos Tc, pois, alm da apresentao
Replicao viral
prossegue...
...
Qualquer clula nucleada
ncleo
1
2
3
4
5
6
7
7
Linfcito Tc
Figura 9.5. Apresentao de antgenos virais endgenos e resposta por linfcitos Tc. Aps a penetrao do vrus (1), as
protenas virais so produzidas pelo aparato celular de traduo (2). Parte dessas protenas so processadas pelos
proteassomos (3), resultando empeptdeos que so conjugados commolculas do MHC-I no RE (4). Esses complexos
so transportados at a superfcie celular (5), onde sero reconhecidos pelos linfcitos Tc (6). Ativados pelo contato
como antgeno e por citocinas, os linfcitos Tc liberamo contedo citotxico de seus grnulos (7), destruindo a clula
infectada.
248 Captulo 9
do MHC-I+ peptdeos, so capazes de fornecer
os sinais adicionais para a ativao integral dos
Tc. Essa via de apresentao e reconhecimento de
antgenos muito importante na resposta a infec-
es vricas, pois permite ao sistema imunolgico
reconhecer clulas infectadas por vrus e ativar o
mecanismo mais efetivo para a sua destruio, os
linfcitos Tc. Tanto as protenas estruturais como
as no-estruturais produzidas durante a replica-
o viral podem ser processadas e apresentadas
aos linfcitos Tc. A via endgena de apresentao
de antgenos aos linfcitos Tc est representada
esquematicamente na Figura 9.5.
As DCs desempenham um papel muito im-
portante no processo de apresentao de antge-
nos a outras clulas do sistema imunolgico. As
DCs podem ser infectadas por uma variedade de
vrus e, assim, apresentar fragmentos de prote-
nas virais conjugadas com o MHC-I aos linfcitos
Tc. Alm de apresentar esses antgenos, as DCs
fornecem estmulos qumicos (citocinas) para a
ativao integral desses linfcitos (Figura 9.6). As
DCs podem detectar vrions ou protenas virais
atravs de receptores do tipo TLR 7 e 9, resultan-
do em uma cascata de eventos intracelulares que
as induzem a produzir citocinas e acelerar o seu
Figura 9.6. Interaes entre as DCs e os linfcitos e estimulao da resposta adquirida. As DCs so capazes de
apresentar peptdeos exgenos aos linfcitos Th(1), estimulando-os a produzir citocinas do tipo Th1 (2a) ouTh2 (2b).
Oreconhecimento de antgenos emsoluo ou nos icossomos da superfcie das DCs (3), juntamente comas citocinas
do tipo Th2, estimula os linfcitos B a proliferar (4) e se diferenciar em plasmcitos, que so clulas secretoras de
anticorpos (5). Os linfcitos Tc podem reconhecer antgenos endgenos na superfcie de clulas infectadas ou nas
DCs (6). Este reconhecimento, juntamente comas citocinas do tipo Th1 (2a), ativa os linfcitos Tc que se tornamCTLs
(7). Ao reconheceremo mesmo padro antignico (MHC-I+ peptdeo viral) na membrana de clulas infectadas (8), os
CTLs descarregamoseuarsenal citotxicoqueresultaemapoptosee morte celular (9).
Clula
dendrtica
Linfcito Th
Linfcito Tc Linfcito B
Clula infectada
Plasmcito
CTL
1
2a
2b
3
3
4
5
6
7
8
9
processo de maturao. As DCs possuem pro-
longamentos citoplasmticos denominados den-
dritos, que aumentam a sua superfcie, facilitan-
do, com isso, a interao com as demais clulas
do sistema imunolgico. As DCs so capazes de
capturar e armazenar antgenos em pequenas es-
feras na sua superfcie, denominadas icossomos.
Dessa forma, as DCs podem oferecer e transferir
antgenos para outras DCs, para macrfagos e
mesmo para os linfcitos B. As interaes entre
as DCs e as clulas envolvidas na resposta imune
adquirida esto ilustradas na Figura 9.6
O contato entre os antgenos e as clulas do
sistema imunolgico apresentao e reconheci-
mento de antgenos ocorre principalmente nos
linfonodos e outros tecidos linfides secundrios.
Nesses tecidos, o microambiente existente favore-
ce as interaes entre o antgeno, as DCs e outras
APCs, linfcitos T e B e clulas acessrias, resul-
tando na estimulao eciente de uma gama de
clulas envolvidas com a resposta imunolgica
especca. Alm de se constituir no evento cen-
tral da imunidade adquirida, o reconhecimento
de antgeno e a conseqente estimulao de po-
pulaes de linfcitos T e B representa a etapa
inicial da resposta imunolgica especca.
3.2 Resposta imune celular
A resposta imune especca mediada por
clulas representada pela atividade dos linfci-
tos T, pois a participao das demais clulas (ma-
crfagos, DCs e clulas NK) faz parte da resposta
inata e ocorre de forma inespecca. Os mecanis-
mos efetores dos linfcitos Th e Tc so distintos.
Os linfcitos Th modulam a resposta imunolgi-
ca atravs das citocinas, que agem estimulando e
modulando a atividade de uma variedade de c-
lulas do sistema imune. Os linfcitos Tc possuem
a funo precpua de identicar e destruir clulas
infectadas por vrus.
De acordo com as citocinas produzidas, dois
tipos de respostas mediadas por linfcitos Th po-
dem ser identicadas: as respostas do tipo Th1 e
Th2. A resposta do tipo Th1 caracterizada pela
secreo de IFN-I, IL-2, IL-12 e TNF-. Essas ci-
tocinas atuam principalmente na estimulao
da imunidade celular (linfcitos Tc, DCs, clulas
NK e macrfagos). A resposta do tipo Th2 carac-
teriza-se pela secreo de IL-2, IL-4, IL-5, IL-10,
citocinas que atuam principalmente na ativao
da imunidade humoral. Essas citocinas possuem
papel importante na ativao, proliferao e di-
ferenciao de linfcitos B e secreo de anticor-
pos, ou seja, as citocinas produzidas pelos Th em
resposta ao antgeno estimulam tanto a resposta
celular como a resposta humoral. O balano entre
as respostas do tipo Th1 e Th2 depende da bio-
logia de cada vrus e de suas interaes com o
sistema imunolgico.
A funo principal dos Tc na resposta an-
tiviral a destruio de clulas infectadas por
vrus. Para muitas infeces vricas, a resposta
celular, mediada pelos Tc, representa a forma
mais eciente de combate e erradicao da in-
feco. A ativao dos linfcitos Tc ocorre aps
o reconhecimento de antgenos apresentados por
clulas infectadas. Esta ativao depende de dois
estmulos bsicos: a estimulao resultante do
reconhecimento dos complexos peptdeo-MHC-I
na superfcie das clulas clulas infectadas e as
citocinas produzidas pelas DCs ou pelos linfci-
tos Th ativados (Figura 9.6). Os complexos pep-
tdeo-MHC-I so reconhecidos exclusivamente
pelo TCR e CD8 dos linfcitos Tc. Aps a sua
ativao, esses linfcitos tornam-se competentes
para destruir as clulas que apresentem o mes-
mo complexo peptdeo-MHC-I que induziu a sua
estimulao. Esses complexos sero encontrados
nas clulas que albergam o vrus infectante. Os
linfcitos Tc ativados e capazes de destruir clu-
las infectadas so denominados CTLs (citotoxic T
lymphocytes). Ao entrar em contato com a clula
infectada, os linfcitos Tc aderem a ela por meio
do complexo TCR/CD8 e de outras molculas de
superfcie. Essas interaes resultam na reorga-
nizao do citoesqueleto, polarizando o linfcito
Tc com o objetivo de descarregar o seu arsenal
citotxico sobre a clula infectada. Entre os com-
ponentes citotxicos dos linfcitos Tc encontram-
se as perforinas, que possuem a capacidade de
induzir a formao de poros na clula-alvo. Os
linfcitos Tc tambm secretam as granzimas, que
penetram nas clulas atravs dos poros e ativam
mecanismos intracelulares que culminam com a
morte programada da clula (apoptose). Poste-
250 Captulo 9
riormente, o linfcito Tc desprende-se da clula
e parte em busca de novas clulas-alvo, caracte-
rstica que lhe confere o codinome de serial killer
entre as clulas do sistema imunolgico. O meca-
nismo de destruio celular pelos linfcitos Tc
similar ao desencadeado pelas clulas NK.

3.2.1 Importncia dos linfcitos Tc na
imunidade antiviral
Clulas infectadas por vrus podem produzir
milhes de novas partculas virais em um perodo
de poucas horas. A disseminao dos vrions en-
tre as clulas ocorre pela liberao de partculas
virais no meio extracelular ou pela transmisso
direta dos vrions entre clulas. A transmisso
direta entre clulas minimiza a possibilidade de
um encontro indesejado dos vrions com as c-
lulas e molculas do sistema imunolgico. Nesse
caso, as nicas defesas das clulas infectadas so
a produo de IFN-I e a apresentao dos ant-
genos virais associados ao MHC-I. Dessa forma,
a presena do vrus no interior das clulas pode
ser detectada pelas clulas vizinhas (via IFN-I) e
pelos linfcitos Tc.
A estratgia do organismo em utilizar os
linfcitos Tc para destruir precocemente clulas
infectadas muito apropriada, pois prefervel
destruir pequenas fbricas de vrions a tentar ina-
tivar milhes de partculas vricas disseminadas
no organismo e com o potencial de infectar no-
vas clulas. O processamento e apresentao de
protenas virais aos linfcitos Tc em fases iniciais
da infeco permite ao hospedeiro identicar e
destruir as clulas infectadas antes do incio da
produo da prognie viral. No obstante, alguns
vrus desenvolveram estratgias para evitar ou
retardar o reconhecimento de clulas infectadas,
a m de assegurar a concluso do ciclo replicati-
vo e a liberao de prognie viral.
3.3 Resposta imune humoral
A resposta especca humoral mediada
pelas imunoglobulinas (Igs), popularmente co-
nhecidas como anticorpos. As Igs so produzidas
e secretadas pelos plasmcitos, que so clulas
originadas da proliferao e diferenciao dos
linfcitos B em resposta a antgenos (Figura 9.7).
As Igs apresentam cinco classes principais, com
estrutura e funes diferentes: IgG, IgM, IgA, IgE
e IgD. Imunoglobulinas das classes IgM e IgD so
tambm encontradas na superfcie dos linfcitos
B, onde servem de receptores (BCRs) para o reco-
nhecimento de antgenos por essas clulas.
Devido aos mecanismos de diversidade e
especicidade, cada linfcito B e a sua prognie
possuem BCRs idnticos entre si e com a capaci-
dade para reconhecer um nico determinante an-
tignico. Felizmente, o organismo possui bilhes
de linfcitos B com BCRs diferentes e, por isso,
capazes de reconhecerem e responderem a uma
variedade virtualmente innita de antgenos. A
capacidade de reconhecimento de antgenos pe-
los linfcitos B depende exclusivamente do BCR
e, conseqentemente, os linfcitos B podem re-
conhecer antgenos solveis e tambm antgenos
no-proticos. Ou seja, os linfcitos B reconhecem
os antgenos em sua forma nativa, sem a necessi-
dade de processamento e apresentao prvios,
como ocorre com os linfcitos T.
A ativao dos linfcitos B depende da sua
interao com os antgenos virais (via BCR) e da
ao de citocinas secretadas pelos linfcitos Th,
tambm em resposta ao reconhecimento do an-
tgeno. As DCs desempenham um papel funda-
mental nesse processo, pois podem transferir an-
tgenos aos linfcitos B por meio dos icossomos
e, simultaneamente, apresentar antgenos ao lin-
fcitos Th (Figuras 9.6 e 9.7).
Por outro lado, os linfcitos B, aps reconhe-
cerem um antgeno, podem interagir diretamente
com os linfcitos Th, em um processo de estimu-
lao recproca. importante ressaltar que os lin-
fcitos B, alm de secretarem imunoglobulinas,
tambm so excelentes APCs, ou seja, podem
apresentar antgenos associados ao MHC-II aos
linfcitos Th. As citocinas produzidas pelos Th,
juntamente com o reconhecimento do antgeno
pelo BCR, resultam em estimulao, proliferao
e diferenciao dos linfcitos B em plasmcitos,
clulas secretoras de anticorpos. As DCs tambm
podem fornecer citocinas importantes para uma
adequada estimulao dos linfcitos B.
O contato com o antgeno e as citocinas pro-
duzidas pelos Th estimulam os linfcitos B a se
multiplicarem de forma rpida e abundante. As
clulas resultantes dessa proliferao podem ter
dois destinos: a grande maioria se diferencia em
plasmcitos e uma minoria se diferencia em c-
lulas de memria. Os plasmcitos possuem vida
relativamente curta; as clulas de memria pos-
suem vida longa. Tanto os BCRs presentes na
membrana dos linfcitos B de memria como as
imunoglobulinas secretadas pelos plasmcitos
possuem a mesma especicidade dos BCRs do
Figura 9.7. Mecanismos envolvidos na estimulao dos linfcitos B e produo de anticorpos. Partculas vricas ou
antgenos virais drenados pela linfa nos tecidos perifricos penetramnos linfonodos pelos vasos aferentes (1). Esses
antgenos podem ser reconhecidos diretamente pelos linfcitos B (2) ou em icossomos na superfcie das DCs (3).
Tanto as DCs como os linfcitos Bpodemprocessar e apresentar antgenos virais aos linfcitos Th(4, 5), que secretam
citocinas emresposta (6). Estas citocinas atuamnos linfcitos B, estimulando a sua proliferao (7) e diferenciao em
plasmcitos (8) ouemclulas de memria (9). Os plasmcitos secretamgrande quantidade de anticorpos (10) que tm
acesso aos lquidos corporais (11). Clulas fagocticas e/ou DCs podem tambm penetrar nos linfonodos j com
antgenos virais capturados nos tecidos perifricos e os apresentar aos linfcitos The B.
Crtex
Centros
germinativos
D
i
f
e
r
e
n
c
i
a
o
P
r
o
l
i
f
e
r
a
o
A
t
i
v
a
o
Vaso aferente
Vaso eferente
1
2
3
4
5
6
7
7
8 9
10
11
Clulas
dendrticas
B Th
Clula de
memria
Plasmcitos
Linfonodo
252 Captulo 9
linfcito B que os deu origem. A estimulao e
proliferao dos linfcitos B ocorrem nos rgos
linfides secundrios, sobretudo nos linfonodos.
Os anticorpos produzidos so secretados no meio
extracelular e atravs dos vasos eferentes podem
ter acesso corrente sangnea e, posteriormen-
te, aos tecidos. Os processos de reconhecimento
do antgeno, proliferao e diferenciao dos lin-
fcitos B esto ilustrados esquematicamente na
Figura 9.7.
3.4 Respostas primria e
secundria/memria imunolgica
Os linfcitos possuem um perodo de vida
relativamente curto aps a sua produo a par-
tir dos progenitores linfides na medula ssea.
No entanto, a sua sobrevivncia pode ser pro-
longada desde que encontrem o antgeno que os
estimule a proliferar e se diferenciar, ou seja, os
linfcitos que no encontram o antgeno que os
estimule possuem vida curta; aqueles que encon-
tram o antgeno complementar ao seu BCR tm a
sua vida prolongada. Dessa forma, a presena de
antgenos especcos no organismo literalmente
resgata os linfcitos da morte, estimulando-os a
proliferar e se diferenciar, gerando uma resposta
imune, denominada resposta primria. O principal
evento da resposta primria a expanso dos
clones de linfcitos que possuem receptores para
os antgenos introduzidos pela primeira vez no
organismo. Porm, a maioria das clulas origina-
das pela expanso clonal se diferenciar em clu-
las de vida curta, os plasmcitos. Os plasmcitos
exercem a sua funo de secreo de Igs e sobre-
vivem por algumas semanas ou meses. Felizmen-
te, aps a expanso clonal, uma frao pequena
dos linfcitos estimulados no se diferencia em
plasmcitos, e sim em clulas de memria. Es-
tas mantm a capacidade de reconhecimento do
mesmo antgeno que as estimulou (pois possuem
os BCRs com especicidade idntica aos da clu-
la original) e sobrevivem no organismo por um
longo tempo. As clulas de memria habitam a
medula ssea e circulam pelo organismo. Ao en-
contrarem o mesmo antgeno que as estimulou
previamente (vrions ou protenas virais), essas
clulas respondem rapidamente, produzindo
uma resposta proliferativa e de diferenciao r-
pida e intensa. Essa resposta denominada res-
posta imune secundria. Embora mais estudados
em linfcitos B, pela facilidade de quanticao
dos anticorpos, os eventos envolvidos na respos-
ta primria e secundria provavelmente ocorram
de forma semelhante aos linfcitos T. A resposta
primria a um determinado vrus pode resultar
de infeco natural ou de vacinao e prepara o
sistema imunolgico para responder e montar
uma resposta secundria caso ocorra uma reex-
posio posterior ao agente.
A memria imunolgica de linfcitos B e T
diferente. A produo contnua de anticorpos
especcos tem sido detectada vrias dcadas
aps a infeco por alguns vrus. Como a vida
mdia dos anticorpos no organismo de poucas
semanas, isto indica que ocorre uma produo
contnua de anticorpos para que os nveis sejam
mantidos. Uma possvel explicao para esse fato
de que linfcitos B de memria seriam cons-
tantemente reestimulados a se diferenciarem em
plasmcitos secretores de Igs, pois os plasmci-
tos possuem vida curta. O contato freqente com
o antgeno e as conseqentes reestimulaes
podem decorrer da reexposio ao prprio mi-
croorganismo ou resultar de reatividade cruzada
com antgenos semelhantes, prprios ou heter-
logos. Alm disso, recentemente foi observado
que as DCs possuem a capacidade de armazenar
antgenos em seus dendritos por perodos pro-
longados e liber-los lentamente para os linfci-
tos de memria, provocando a sua reestimulao
contnua. Isso poderia proporcionar uma estimu-
lao prolongada no somente dos linfcitos de
memria, mas tambm de linfcitos que ainda
no haviam sido estimulados (naive ou virgens).
Estes, ao chegarem aos rgos linfides, encon-
trariam com o antgeno pela primeira vez, geran-
do novamente uma resposta imune primria e,
conseqentemente, a produo de mais linfcitos
de memria.
Ao contrrio da fase efetora da resposta hu-
moral cuja produo de anticorpos pode persis-
tir por longos perodos a fase efetora da resposta
celular de curta durao. A presena prolonga-
da de linfcitos Th e Tc efetores seria deletria
para o organismo, pois a secreo persistente de
citocinas e a atividade citoltica continuada po-
deriam resultar em imunopatologia. Aps a fase
efetora, as clulas T de memria so encontradas
com freqncia mais alta e podem responder com
mais rapidez e ecincia a estmulos antignicos
secundrios. A rapidez e ecincia com que as
clulas T de memria se deslocam para os stios
de infeco e respondem a estmulos secundrios
faz com que no seja necessria a preexistncia
de clulas efetoras para gerar uma resposta pro-
tetora.
Uma das questes fundamentais na resposta
imune est relacionada com os mecanismos que
garantem a sobrevivncia e manuteno das c-
lulas T e B de memria. A estabilidade da mem-
ria dos linfcitos Tc, por exemplo, mantida por
divises celulares lentas e continuadas. As clu-
las B de memria podem ser mantidas por esti-
mulaes paralelas, ou seja, por citocinas produ-
zidas pelas clulas Th e DCs em resposta a outros
antgenos. No entanto, embora a medula ssea
apresente o ambiente ideal para a manuteno,
replicao e sobrevivncia dessas clulas, acredi-
ta-se que a reexposio e contato com o antgeno
sejam importantes para a manuteno das clulas
B de memria. Com isso, as reestimulaes con-
tribuiriam para a reposio das clulas secretoras
de Igs e a conseqente manuteno dos nveis de
anticorpos circulantes.
O conhecimento dos eventos que ocorrem
durante a resposta primria e secundria fun-
damental para o entendimento das bases imu-
nolgicas da proteo induzida por vacinas. A
vacinao induz uma resposta primria, com a
conseqente expanso de clones de linfcitos B
e T especcos para os antgenos vacinais. Com
isso, so produzidos plasmcitos e linfcitos T
efetores, que possuem vida curta; e, principal-
mente, clulas B e T de memria, que possuem
vida longa e so capazes de responder ao mesmo
padro antignico que induziu a sua prolifera-
o. A infeco subseqente de um animal vaci-
nado ir induzir uma resposta secundria, com
estimulao e proliferao muito mais rpida e
intensa de linfcitos T e B, pois o nmero dessas
clulas especcas para o antgeno agora muito
maior, resultado da expanso clonal da resposta
primria. Esta infeco resulta em estimulao
dos linfcitos de memria, que proliferam e se di-
ferenciam em clulas efetoras, a exemplo do que
ocorreu na resposta primria, porm com muito
maior ecincia e rapidez. O resultado a produ-
o de linfcitos Th e Tc efetores e de plasmcitos
secretores de anticorpos, que se encarregam de
combater o vrus invasor.
3.5 As imunoglobulinas na defesa
antiviral
A importncia dos anticorpos na imunidade
antiviral tem sido muito discutida e parece va-
riar de acordo com a biologia do vrus e tambm
com o estgio da infeco (infeco primria ver-
sus reinfeco). Como os anticorpos aparecem
apenas tardiamente durante a infeco primria,
acredita-se que desempenhem um papel secun-
drio na erradicao dessa infeco. O papel prin-
cipal nesses casos seria assumido pelos linfcitos
Tc. Os anticorpos teriam participao mais efeti-
va na proteo em casos de reinfeco, quando
atuariam limitando e restringindo a penetrao e
disseminao do vrus no organismo. Alm dessa
diferena, a importncia relativa dos anticorpos
e da imunidade celular variam de acordo com a
biologia e interaes de cada vrus com o hospe-
deiro.
Os principais locais de produo de anti-
corpos pelos plasmcitos so os centros germi-
nativos dos linfonodos e as regies equivalentes
dos outros rgos linfides secundrios. As Igs
esto presentes nos uidos do organismo (plas-
ma sangneo, saliva, lgrima, urina, colostro/
leite, muco, secrees, lquido cfalo-raquidiano
e lquido sinovial) e so capazes de se ligar es-
pecicamente no determinante antignico que
induziu a sua formao. Para vrias infeces
virais, a quantidade de Igs especcas presentes
no soro sangneo pode ser correlacionada com
proteo. Por isso, esse parmetro utilizado
para o monitoramento dos provveis nveis de
proteo e da necessidade de novas imunizaes.
Considerando-se que a resistncia antiviral deve-
se, em grande parte, atividade dos linfcitos Tc
(que efetivamente destroem clulas infectadas), a
quanticao dos anticorpos no pode ser consi-
derada o indicador nico de proteo. No obs-
254 Captulo 9
tante, a sorologia muito utilizada para se avaliar
os nveis de imunidade como um todo, visto que
os mtodos para detectar e quanticar a funo
de linfcitos T so de difcil aplicao.
3.5.1 Mecanismos de ao
das imunoglobulinas
As Igs possuem vrias atividades biolgicas
que potencialmente podem estar envolvidas na
resposta antiviral. Algumas dessas atividades j
foram demonstradas in vivo e a sua participao
na resposta antiviral parece ser inquestionvel;
outras somente foram demonstradas inequivoca-
damente in vitro e/ou possuem um papel contro-
verso na resposta imunolgica contra os vrus. A
seguir so listadas as principais atividades anti-
virais dos anticorpos (essas atividades na defesa
contra vrus esto ilustradas na Figura 9.8):
Neutralizao: a interao dos vrions com
os receptores celulares para o incio da infeco
mediada por regies especcas das protenas
de superfcie dos vrions (anti-receptores). Anti-
corpos produzidos contra essas regies possuem
a capacidade de se ligar aos vrions e impedir a
interao com os receptores celulares, neutrali-
zando a sua infectividade. Esses anticorpos so
denominados genericamente neutralizantes e
constituem uma parcela do total de anticorpos
produzidos contra os vrus. Anticorpos com ati-
vidade neutralizante so direcionados contra pro-
tenas de superfcie dos vrions. A neutralizao
de partculas virais pode ocorrer por Igs da clas-
se IgA, presente nas mucosas e em secrees; ou
por IgM e IgG, presentes no plasma sangneo.
Um dos desaos da vacinologia a induo de
proteo slida nas mucosas, pela estimulao de
IgA com capacidade de neutralizar as partculas
vricas nos locais mais freqentes de penetrao
viral (sistema respiratrio, digestrio e reprodu-
tivo) e, assim, impedir a instalao da infeco.
A neutralizao da infectividade o mecanismo
mais direto de ao dos anticorpos contra vrus e,
talvez, o mais importante;
Aglutinao: as IgM e IgG possuem a ca-
pacidade de aglutinar partculas virais e, com
isso, facilitar a sua remoo mediada pelo siste-
ma complemento e por clulas fagocticas;
Opsonizao: o revestimento de partculas
vricas por molculas de imunoglobulinas (IgM e
IgG) facilita a ligao e remoo dessas partcu-
las pelas clulas fagocticas, via receptores para a
poro Fc das Igs. A ativao do sistema do com-
plemento tambm gera fragmentos capazes de
opsonizao viral (C3b);
Ativao do complemento: a ligao das
Igs aos antgenos resulta em alteraes tridi-
mensionais na sua regio Fc, expondo stios de
ligao para o componente C1 do complemento,
iniciando a sua ativao em cascata. O resultado
a estimulao de vrios mecanismos da imuni-
dade inata (vasodilatao, aumento da permeabi-
lidade capilar, quimiotaxia para fagcitos, entre
outros) e a formao do MAC sobre a superfcie
dos vrions, o que pode resultar na inativao
da infectividade dos vrus envelopados. A liga-
o de anticorpos em protenas virais inseridas
na membrana de clulas infectadas pode ativar o
complemento e levar formao do MAC. Com
isso, a clula infectada pode sofrer lise osmtica.
Esse mecanismo pode tambm ocorrer com bac-
trias;
Citotoxicidade mediada por clulas de-
pendente de anticorpos (ADCC): durante a re-
plicao de alguns vrus, certas protenas virais
podem ser inseridas na membrana plasmtica da
clula infectada. Anticorpos especcos so pro-
duzidos contra essas protenas e se ligam a elas na
superfcie celular. Com isso, a clula infectada se
torna alvo para algumas clulas do sistema imu-
nolgico que possuem receptores para a poro
Fc das Igs (clulas NK e neutrlos) e destroem
a clula. Embora a ADCC tenha sido amplamen-
te demonstrada in vitro, a sua importncia in vivo
ainda desconhecida;
Outras atividades dos anticorpos: embo-
ra as Igs desempenhem funes bencas para a
manuteno da integridade e funcionalidade do
organismo, pelo combate a agentes infecciosos
potencialmente nocivos, eventualmente podem
participar de processos que so prejudiciais ao
hospedeiro. A presena de grande quantidade
de antgenos no plasma sangneo pode levar
formao disseminada de complexos antgeno-
anticorpo. Esses complexos geralmente so re-
movidos pelas clulas fagocticas. No entanto,
quando esto em excesso, depositam-se em locais
como as superfcies articulares e tbulos renais
e, freqentemente, causam imunopatologia. O
revestimento de vrions com anticorpos sem ati-
vidade neutralizante pode, ao invs de neutrali-
z-lo, potencializar a sua infectividade. Essas Igs
so reconhecidas por clulas que possuem recep-
tores para a poro Fc (moncitos e macrfagos),
resultando na internalizao eciente de vrions
recobertos com anticorpos, facilitando a infeco
dessas clulas, ou seja, os anticorpos aumentam
a ecincia de penetrao desses vrions. Esse
mecanismo denominado Antibody Dependent
Enhancement (ADE) e tem sido descrito para v-
rios vrus, dentre os quais o vrus da dengue, o
coronavrus felino e o vrus da imunodecincia
humana (HIV). O papel da ADE na patogenia
dessas doenas, no entanto, ainda tema de de-
bates.
3.6 O papel das respostas celular e
humoral na imunidade antiviral
Os avanos no estudo da imunologia antivi-
ral tm resultado na emergncia de importantes
componentes e mecanismos anteriormente rele-
gados a papis secundrios na resposta imune,
Figura 9.8. Atividades dos anticorpos na resposta contra vrus. Neutralizao da infectividade (1), aglutinao (2),
opsonizao e fagocitose (3), ativao do complemento (4), lise de vrus envelopados mediada por complemento (5),
ADCC(6) e lisecelular mediadapor complementodependentedeanticorpos (7).
1
2
3
6
7
5
4
Tc
256 Captulo 9
como as DCs. No entanto, o papel exato de cada
componente na intrincada cadeia de relaes ce-
lulares e moleculares que resultam na eliminao
de uma determinada infeco vrica ainda no
est satisfatoriamente esclarecido. O esclareci-
mento desses mecanismos depende do entendi-
mento detalhado da biologia e da patogenia de
cada infeco e das interaes peculiares de cada
vrus com o sistema imunolgico. No obstante,
pode-se armar que os linfcitos Tc so funda-
mentais na erradicao da infeco primria, pela
destruio das clulas infectadas. Os anticorpos
no teriam grande participao no combate in-
feco primria, pois aparecem tardiamente no
curso da infeco. Seriam de fundamental impor-
tncia por ocasio de uma reexposio ao agente,
prevenindo e/ou limitando a infeco atravs de
neutralizao viral e de outros mecanismos que
restringiriam a disseminao do vrus no orga-
nismo. Caberia aos linfcitos Th o papel de co-
ordenar e moderar as duas respostas (humoral,
mediada por linfcitos B; e celular, mediada por
linfcitos Tc) pela secreo de citocinas.
4 Mecanismos virais de evaso da
resposta imune
A ocorrncia contnua de doenas virais so-
mente possvel devido ao sucesso desses mi-
croorganismos em produzir infeces, resistir ou
escapar dos mecanismos antivirais do hospedei-
ro e se disseminar para outros hospedeiros sus-
ceptveis. Hospedeiros imunes impedem a pro-
gresso da infeco, o que reduz drasticamente
a possibilidade de transmisso do vrus para ou-
tros animais. Dezenas ou centenas de milhares de
anos de coexistncia, alm da rapidez com que
os vrus se multiplicam e evoluem geneticamen-
te, permitiram o desenvolvimento de estratgias
que lhes permitem evitar ou resistir s defesas do
hospedeiro, causando infeces produtivas, agu-
das ou crnicas, e garantindo a sua manuteno e
perpetuao na natureza. Dentre os mecanismos
utilizados pelos vrus para compatibilizar a sua
existncia e perpetuao, apesar dos mecanis-
mos imunolgicos do hospedeiro, destacam-se
os seguintes: infeces latentes no sistema ner-
voso central, variaes antignicas, induo de
tolerncia, integrao do material gentico viral
no genoma do hospedeiro, infeco de stios imu-
nologicamente privilegiados e interferncia com
funes do sistema imunolgico.

4.1 Infeces latentes no sistema
nervoso central
O estabelecimento de infeces latentes
um eciente mecanismo de perpetuao no hos-
pedeiro utilizado pelos vrus da famlia Herpesvi-
ridae. A fase de latncia, que se segue infeco
aguda, caracterizada pela presena do genoma
viral inativo em neurnios, sem sntese protica
ou produo de prognie viral. Como conseqn-
cia, a infeco desses neurnios no detectada
pelo sistema imunolgico e essas clulas podem
manter o material gentico viral indenidamen-
te. No entanto, sob determinadas circunstncias,
geralmente associadas com estresse, ocorre a
reativao e a retomada da replicao viral nos
neurnios infectados. Os vrions produzidos mi-
gram pelos axnios de volta aos locais de replica-
o primria, de onde so excretados, podendo
infectar outros hospedeiros. O estabelecimento e
reativao de infeces latentes, portanto, cons-
tituem-se em estratgias dos herpesvrus para
escapar do sistema imunolgico e garantir a sua
perpetuao no hospedeiro e na populao. In-
feces latentes ocorrem com os herpesvrus bo-
vino tipo 1 e 5 (BoHV-1 e 5), herpesvrus suno
(doena de Aujeszky), herpesvrus felino tipo 1
(FHV-1), herpesvrus eqinos tipo 1 e 4 (EHV-1 e
4), entre outros.
4.2 Variaes antignicas
Alteraes na seqncia de aminocidos de
determinantes antignicos em protenas de su-
perfcie dos vrions permite o escape da neutra-
lizao por anticorpos e uma estratgia muito
utilizada pelos vrus, principalmente os vrus
RNA. Essas alteraes surgem como resultado
dos erros cometidos pela enzima RNA polimera-
se viral durante a replicao do genoma. Como
conseqn cia, aminocidos diferentes so fre-
qentemente incorporados durante a sntese das
protenas virais, alterando a sua seqncia e es-
trutura, podendo resultar no no-reconhecimen-
to pelos anticorpos produzidos contra os epitopos
originais. Vrions com alteraes antignicas po-
dem, assim, escapar da resposta imune existente
naquele momento no hospedeiro, principalmente
da imunidade humoral, e infectar novas clulas.
A presena desses novos determinantes antigni-
cos elicitar a sntese de anticorpos com uma nova
especicidade. Porm, novas variaes podero
ser posteriormente produzidas e novamente al-
guns variantes podem escapar da neutralizao.
Essas variaes antignicas discretas, geralmente
associadas com a acumulao de mutaes em
ponto, so denominadas genericamente de anti-
genic drift e tm sido bem caracterizadas nos vrus
da inuenza, embora ocorram tambm em outros
vrus. Alteraes antignicas mais drsticas ocor-
rem quando os vrus da inuenza trocam entre si
os genes que codicam as protenas do envelope
(HA e NA), resultando em vrus antigenicamente
muito diferentes dos parentais. Esse mecanismo
denominado antigenic shift e tem sido implicado
no surgimento de vrus de maior patogenicidade,
responsveis por epidemias de grandes propor-
es.
4.3 Induo de tolerncia
Em condies normais, o sistema imunolgi-
co possui tolerncia, ou seja, no reage contra os
antgenos do prprio organismo. Ocasionalmen-
te o sistema imunolgico pode se tornar tolerante
tambm a antgenos estranhos, contra os quais
deveria produzir uma resposta. Um exemplo o
que ocorre quando fetos bovinos so infectados
por cepas no-citopticas do vrus da diarria vi-
ral bovina (BVDV) entre os 40 e 120 dias de ges-
tao. Nessa fase, o sistema imunolgico do feto
ainda est imaturo e no reconhece os antgenos
virais como estranhos. Com isso, no ocorre a esti-
mulao e proliferao de linfcitos B e T e, como
conseqncia, o feto ca incapaz de montar uma
resposta contra o vrus. Os fetos imunotoleran-
tes nascem persistentemente infectados (PI) pelo
BVDV e excretam o vrus continuamente em se-
crees e excrees. Os animais PI se constituem
no ponto-chave da epidemiologia do BVDV, pois
so fontes contnuas de vrus para os outros ani-
mais. Essa condio s possvel pela tolerncia
do sistema imunolgico aos antgenos virais.
4.4 Integrao do material gentico viral
no genoma do hospedeiro
Os vrus da famlia Retroviridae podem per-
sistir no hospedeiro durante toda a sua vida, mes-
mo na presena da resposta imune. O mecanismo
de persistncia resulta de dois aspectos da biolo-
gia desses vrus: a) possuem a capacidade de in-
serir cpias do seu genoma nos cromossomos das
clulas hospedeiras e b) possuem a enzima deno-
minada transcriptase reversa, responsvel pela
transcrio reversa do genoma (RNA para DNA),
mas que no corrige os seus prprios erros. Com
isso, a cada ciclo so produzidas populaes de
vrus compostas por indivduos com pequenas
diferenas genticas entre si (quasiespecies). A
insero do material gentico viral garante que
a infeco seja permanente, e as alteraes anti-
gnicas que resultam de cada ciclo de replicao
viral asseguram que alguns vrions produzidos
possam escapar da resposta imune para infectar
novas clulas. Dentre as infeces por retrovrus
animais destacam-se a anemia infecciosa eqina
e a imunodecincia felina.
4.5 Infeco de stios imunologicamente
privilegiados
Os tecidos e rgos aos quais os componen-
tes do sistema imunolgico no possuem acesso
imediato e irrestrito so denominados generica-
mente stios de privilgio. Os neurnios do SNC,
por exemplo, no expressam de forma constitu-
tiva as molculas do MHC-I, o que diculta o
reconhecimento da infeco celular e a ao dos
linfcitos Tc. Conseqentemente, os vrus que in-
fectam neurnios so privilegiados, pois as clu-
las hospedeiras no denunciam a sua presena.
Por outro lado, a falta de expresso de molculas
do MHC-I pode ser considerada um mecanismo
de proteo, evitando a destruio de clulas to
importantes. Da mesma forma, a barreira hemato-
enceflica restringe o acesso de algumas clulas
imunolgicas ao SNC. So tambm considerados
stios de privilgio as clulas da epiderme (onde
258 Captulo 9
ocorrem infeces pelos vrus da papilomatose),
as clulas germinativas das gnadas (onde pode
ocorrer a infeco pelo vrus da sndrome repro-
dutiva e respiratria dos sunos, PRRSV), retina,
clulas dos tbulos renais (utilizadas pelos han-
tavrus e arenavrus) e tecidos fetais (diversos v-
rus).
4.6 Interferncia com funes do
sistema imunolgico
Os estudos sobre as relaes vrus-clula e
sobre a biologia dos vrus permitiram elucidar
vrios mecanismos utilizados pelos vrus para
subverter o sistema imunolgico, por meio da in-
terferncia com a funo das clulas e molculas
imunolgicas. Essa interferncia freqentemente
leva a decincias na resposta imunolgica, con-
seqncias denominadas genericamente de imu-
nossupresso. Cada vrus utiliza uma estratgia
especca, dependendo da sua biologia, o que
torna impraticvel enumer-las aqui. No entanto,
como mecanismos gerais, citam-se: a) destruio,
inibio ou induo da maturao das DCs, o
que altera o padro de secreo de citocinas e de
expresso de receptores nas DCs, resultando em
prejuzo nas suas relaes com as demais clulas
do sistema imunolgico, principalmente os lin-
fcitos T; b) destruio ou alterao das funes
dos linfcitos T; c) interferncia com a apresenta-
o de antgenos, inibindo a ao das protenas
TAP-1 e TAP-2 e inibio da formao do com-
plexo peptdeo-MHC-I no retculo endoplasm-
tico (RE); d) produo de protenas que inibem
a funo das citocinas; e) produo de protenas
que protegem a clula infectada da ao do IFN-I
e do TNF- e f) infeco dos linfcitos B, induzin-
do alterao na secreo de imunoglobulinas.
5 Consideraes nais
inquestionvel o avano no entendimen-
to dos mecanismos imunolgicos estimulados
durante as infeces vricas. Os imunologistas
aprendem imunologia com os vrus, cujas intera-
es com o sistema imunolgico so repletas de
estratgias para driblar ou conviver com os me-
canismos imunolgicos e, assim, perpetuar-se nas
espcies animais. Observando a trajetria desses
fascinantes microorganismos e de suas comple-
xas interaes celulares e moleculares, percebe-
se o quanto ainda h para descobrir em relao
aos mecanismos imunolgicos protetores. Tanto
verdade que o surgimento do HIV renovou o
interesse dos pesquisadores pela imunologia. A
partir de ento, o descobrimento de novas infec-
es e o desao de vencer velhos conhecidos fez
da imunologia uma das reas do conhecimento
que mais rapidamente acumula informaes.
Paralelamente aos avanos no conhecimen-
to das interaes dos vrus com o sistema imu-
nolgico e dos mecanismos utilizados por es-
ses agentes para se perpetuarem no hospedeiro
surgem importantes linhas de pesquisa na rea
de desenvolvimento de vacinas. Um dos maio-
res avanos dos ltimos anos foi a elucidao do
papel central das DCs na resposta s infeces
virais. Essas clulas se constituem no elo de li-
gao entre mecanismos imunolgicos naturais
e especcos. Juntamente com a descoberta da
importncia das DCs, novos questionamentos di-
recionam as investigaes futuras que, necessa-
riamente, devero considerar a manipulao de
vetores virais para maximizar a resposta imune
com vistas produo de vacinas.
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EPIDEMIOLOGIA DAS INFECES VRICAS
10
1 Introduo
2 A cadeia do processo infeccioso
2.1 Fontes de infeco
2.2 Vias de excreo
2.3 Mecanismos de transmisso
2.4 Vias de penetrao
2.5 O novo hospedeiro
2.5.1 Patogenia e resposta imunolgica
3 Mecanismos de perpetuao dos vrus na natureza
3.1 Infeces persistentes
3.2 Infeces latentes
3.3 Infeco de vrias espcies animais
3.4 Infeco de vetores
3.5 Sobrevivncia no ambiente
3.6 Transmisso vertical
3.7 Ciclos contnuos de transmisso
4 Doenas em populaes
4.1 Denio de populao
4.2 Populao de risco
4.3 Populaes abertas e fechadas
4.4 Quanticao de doena: incidncia e prevalncia
5 Padres temporais de ocorrncia das doenas vricas
5.1 Doenas espordicas
5.2 Doenas endmicas
5.3 Doenas epidmicas
5.4 Fatores determinantes das epidemias
5.5 Outros padres de ocorrncia
263
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6 Distribuio espacial das doenas vricas
6.1 Doenas de distribuio mundial
6.2 Doenas com certa limitao geogrca
6.3 Doenas restritas geogracamente
6.4 reas livres naturais
6.5 reas livres articiais
7 Doenas vricas emergentes
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288
289
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289
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290
293
1 Introduo
A epidemiologia estuda as doenas em po-
pulaes, investigando os seus determinantes, a
sua dinmica e distribuio. Os fatores envolvi-
dos na manuteno e transmisso das infeces
vricas nas populaes so mltiplos e partici-
pam de interaes complexas, s vezes, de difcil
compreenso. A complexidade dessas interaes
muito varivel entre as viroses. Existem infec-
es vricas que so mantidas na populao por
uma cadeia sucessiva de infeces agudas entre
hospedeiros de uma nica espcie animal. Essas
infeces apresentam, portanto, uma epidemio-
logia relativamente simples. Outras viroses con-
seguem persistir na populao graas a infeces
persistentes ou latentes. Por outro lado, alguns
vrus desenvolveram a capacidade de infectar v-
rias espcies de hospedeiros e a sua manuteno,
na natureza, possvel pela ocorrncia de ciclos
alternados de infeco nessas espcies.
Infeco de espcies silvestres, transmisso
por artrpodes, longos perodos de incubao ou
de sobrevivncia no meio ambiente, transmisso
vertical, variabilidade gentica e antignica, en-
tre outras, fazem parte do arsenal de estratgias
utilizadas pelos vrus para assegurar a sua sobre-
vivncia como espcie. Alguns vrus fazem uso
concomitante de vrias dessas estratgias, o que
torna a sua epidemiologia extremamente comple-
xa, favorecendo a sua manuteno no ambiente e
dicultando o seu controle.
Os principais objetivos das investigaes
epidemiolgicas so o conhecimento dessas ca-
deias de interaes e a identicao de pontos
frgeis que sejam passveis de interveno, vi-
sando ao controle das doenas. A nfase maior
da epidemiologia a populao a sua sade e
bem-estar. A importncia do indivduo limita-
se sua condio de componente da populao,
pois, como tal, pode originar informaes teis
para a preservao da sade coletiva.
Este captulo aborda, de forma genrica, os
principais aspectos da epidemiologia das infec-
es vricas de animais. Os aspectos epidemiol-
gicos mais relevantes de cada virose sero abor-
dados oportunamente nos captulos especifcos.
A epidemiologia aplicada s doenas animais
possui uma terminologia prpria (epizootiologia,
epizootia, enzootia etc.). Este texto, no entanto,
utilizar a terminologia clssica (epidemia, en-
demia etc.), consagrada ao longo de dcadas na
descrio de doenas humanas, mas que tambm
tem sido utilizada em epidemiologia veterinria.
2 A cadeia do processo infeccioso
A sobrevivncia de um vrus como espcie
depende de sua capacidade de cumprir uma se-
qncia de etapas que se convencionou chamar
de cadeia do processo infeccioso. Para facilitar o seu
entendimento, a cadeia do processo infeccioso
pode ser dividida nas seguintes etapas: fontes de
infeco, vias de excreo, mecanismos de trans-
misso, vias de penetrao e o novo hospedeiro
(Figura 10.1).
Figura 10.1. Acadeiadoprocessoinfeccioso.
Fonte de
infeco
Excreo
Transmisso
Penetrao
Novo hospedeiro
264 Captulo 10
Inicialmente, o agente deve penetrar e se
multiplicar no hospedeiro e, mesmo na presen-
a da resposta imunolgica, produzir prognie
vivel. Essa prognie deve ser excretada do hos-
pedeiro a tempo, pela via adequada e em quanti-
dade suciente para permitir a sua transmisso a
outros indivduos (Figura 10.2). Aps a excreo,
o agente deve ser capaz de resistir no meio am-
biente o tempo necessrio para encontrar outro
hospedeiro susceptvel.
A transmisso dos vrus entre hospedeiros
pode ocorrer por diferentes meios. Alguns vrus
so transmitidos por contato direto entre hospe-
deiros. Nesses casos, a capacidade do vrus resis-
tir em condies ambientais irrelevante, pois o
tempo e espao entre os hospedeiros so virtuais.
J outros agentes no so transferidos imediata-
mente, e a sua transferncia entre hospedeiros
ocorre com o auxlio de objetos inanimados ou
de artrpodes (insetos). Nesses casos, o agente
necessita obrigatoriamente resistir no meio am-
biente e/ou replicar ou persistir vivel nos veto-
res pelo tempo necessrio, a m de assegurar a
sua transmisso ao prximo hospedeiro.
Ao contrrio de outros microorganismos
(bactrias e fungos) a maioria dos vrus no ca-
paz de manter a viabilidade por longos perodos
no meio externo. Isso crtico para muitos desses
agentes, uma vez que a viabilidade e a perspec-
tiva de transmisso so freqentemente perdidas
pela inativao no meio ambiente. Aps encon-
trar um hospedeiro susceptvel, o agente deve
penetrar pela via adequada (Figura 10.3) e mul-
tiplicar nos tecidos e rgos-alvo para produzir
prognie e ser novamente excretado.
O cumprimento dessas etapas fundamen-
tal para a perpetuao dos vrus assim como
de outros agentes infecciosos na natureza. Na
realidade, o processo evolutivo fez com que os
agentes virais que existem atualmente tenham
desenvolvido meios para cumprir essas etapas e,
assim, sobreviver como espcie. No obstante, as
estratgias utilizadas para realizar essa tarefa so
variadas e peculiares de cada vrus ou grupo de
vrus. tambm provvel que, ao longo dos tem-
pos, tenham surgido vrus que no foram capazes
de cumprir alguma dessas etapas. Tais agentes
certamente no tiveram sucesso em sua histria
natural e, conseqentemente, desapareceram.
Tecidos
Secrees
oronasais
Descamaes
cutneas
Secrees
urogenitais,
smen
Urina,
fezes
Fetos, fluidos e
membranas fetais
Sangue,
linfa
Colostro
e leite
Figura 10.2. Vias de excreo de vrus que infectam animais.
Epidemiologia das infeces vricas 265
2.1 Fontes de infeco
Dene-se como fonte de infeco qualquer
animal vertebrado que esteja infectado e seja ca-
paz de transmitir o agente para outros animais
susceptveis. Excluem-se dessa denio os ar-
trpodes, que, na maioria das infeces vricas
animais, parecem desempenhar um papel pre-
dominantemente de transmisso e no de manu-
teno do agente. Dependendo do resultado das
interaes agente-hospedeiro, que podem ou no
resultar em manifestaes clnicas, as fontes de
infeco (tambm chamados de hospedeiros) po-
dem ser classicadas em doentes e portadores.
Os doentes so os animais infectados que ma-
nifestam sinais clnicos de doena. Do ponto de
vista estritamente epidemiolgico, essas fontes
de infeco possuem uma importncia relativa-
mente menor, pois so facilmente reconhecidas
como tal, o que permite o diagnstico e a ado-
o das medidas de controle pertinentes. Alguns
exemplos so os ces, com sinais clnicos de raiva,
e os bovinos, com sinais caractersticos de febre
aftosa. No obstante, em infeces vricas, nas
quais o desenvolvimento de doena freqente,
os animais doentes se constituem nas fontes de
infeco mais comuns e epidemiologicamente
importantes.
Os portadores so os animais que abrigam e
excretam o agente sem estar manifestando altera-
es clnicas indicativas de doena. Por isso no
so facilmente reconhecveis, o que os torna mui-
to importantes na epidemiologia de cada infec-
o. Os animais portadores podem ser tambm
denominados de hospedeiros assintomticos. De-
pendendo da sua participao na disseminao
viral, dois tipos de portadores podem ser reco-
nhecidos: ativos e passivos. Os portadores ativos
so aqueles que excretam o vrus; os portadores
passivos apenas abrigam e replicam o agente sem
excret-lo ou transmiti-lo. A grande maioria dos
portadores de agentes virais enquadra-se na pri-
meira categoria. Entretanto, ces adultos podem
abrigar o vrus da cinomose (CDV) no sistema
nervoso central (SNC) de forma persistente sem
excret-lo. Aparentemente, bfalos infectados
pelo vrus da febre aftosa (FMDV) tornam-se
portadores aps a infeco aguda, mas parecem
ser incapazes de transmiti-lo. Nesses casos, esses
animais se constituem em portadores passivos.
Dependendo do perodo em que excretam o
agente, os portadores ativos podem ser classica-
dos em permanentes ou temporrios. Os portadores
ativos permanentes so aqueles que excretam o v-
rus continuamente. Alguns exemplos so os ani-
mais infectados por retrovrus e aqueles persis-
Mucosa
conjuntival
Mucosa
respiratria
Pele
Mucosa
urogenital
Mucosa
intestinal
Mucosa
orofarngea
Figura 10.3. Vias de penetrao de vrus que infectam animais.
266 Captulo 10
tentemente infectados pelo vrus da diarria viral
bovina (BVDV). Os portadores ativos temporrios
excretam o agente sem manifestar sinais clni-
cos concomitantes por determinados perodos.
Quando a excreo viral inicia-se no perodo
de incubao ou na fase prodrmica e os animais
ainda no apresentam sinais clnicos, eles so cha-
mados de portadores em perodo de incubao e por-
tadores prodrmicos, respectivamente. Exemplos
incluem os bovinos infectados com vrus respi-
ratrios, que podem iniciar a excretar o vrus de
um a trs dias antes do incio dos sinais clnicos.
Em outras infeces, os animais podem seguir
excretando o vrus aps a resoluo da doena
clnica, sendo, ento, denominados portadores em
fase de convalescena. Sunos infectados pelo vrus
da sndrome respiratria e reprodutiva (PRRSV)
e ces infectados pelo adenovrus canino (CAV)
enquadram-se nessa categoria, pois podem per-
manecer excretando o vrus por semanas ou at
meses aps o trmino dos sinais clnicos. Nesses
casos, a excreo viral pode ocorrer durante pe-
rodos em que o animal no exibe sinais clnicos,
o que caracteriza a condio de portador. Porta-
dores ativos temporrios intermitentes (ou espordi-
cos) excretam o vrus apenas esporadicamente,
por poucas horas ou dias, a intervalos variveis.
So caractersticos das infeces latentes por al-
faherpesvrus, cujas reativaes peridicas resul-
tam em excreo viral transitria, geralmente de-
sacompanhada de manifestaes clnicas.
Animais portadores podem permanecer por
longo tempo na populao excretando o vrus e
contribuindo para a perpetuao do agente no
rebanho. Vrias infeces vricas somente conse-
guem se manter na natureza graas existncia
de portadores, nos quais o agente encontra con-
dies de se multiplicar continuamente. O reco-
nhecimento e isolamento e/ou eliminao desses
portadores constituem-se nos pontos-chave do
combate a essas infeces.
Outro conceito importante em epidemiolo-
gia o de reservatrio. Denomina-se reservatrio a
espcie animal que abriga e mantm agentes in-
fecciosos em um ecossistema, podendo transmi-
ti-los para outras espcies. Embora utilizada, na
maioria das vezes, para designar espcies silves-
tres, essa denominao pode tambm ser utiliza-
da para designar animais domsticos que sirvam
de fontes de infeco e, como tal, mantenham e
transmitam agentes infecciosos. Geralmente, as
principais espcies que servem de reservatrios
de agentes virais na natureza so as espcies de
origem desses agentes, tambm chamadas de
hospedeiros ou reservatrios naturais. No entanto,
mesmo espcies que no se constituam nos hos-
pedeiros naturais de determinados vrus podem,
ocasionalmente, servir de reservatrios. Deve ser
enfatizado que algumas espcies que abrigam
agentes virais na natureza e que se constituem,
portanto, em reservatrios desenvolvem a en-
fermidade devido infeco. Nesse sentido, os
agentes que conseguem infectar e se manter em
espcies animais sem causar doena apresentam
uma grande vantagem, pois possuem uma maior
probabilidade de perpetuao e transmisso.
Exemplos de espcies reservatrios so as aves
aquticas e migratrias, para os vrus da inuen-
za A; pssaros e outras aves, para os alfavrus;
roedores silvestres, para os arenavrus e hanta-
vrus; morcegos de vrias espcies, para diversos
vrus (Nipah, Hendra, vrus da raiva).
Os morcegos hematfagos e carnvoros sil-
vestres (raposas, ces silvestres, raccons) so re-
servatrios do vrus da raiva e podem transmiti-
lo a vrias espcies silvestres e domsticas (Figura
10.4). Os pssaros e outras aves silvestres so
reservatrios do vrus do Nilo Ocidental (WNV)
e dos vrus das encefalites do leste (EEEV) e oes-
te (WEEV) e podem transmiti-los para eqinos,
aves domsticas (faises, emas) e, ocasionalmen-
te, para humanos (Figura 10.5). Sudeos silvestres
(warthogs) so reservatrios do vrus da peste su-
na africana (ASFV) e podem transmiti-lo para su-
nos domsticos. Nesses exemplos, independente-
mente se as espcies mencionadas constituem-se
nos hospedeiros naturais do agente e em alguns
casos parecem s-lo , na prtica, desempenham
o papel de reservatrios, pois abrigam e transmi-
tem o agente para outras espcies de interesse. O
termo reservatrio, portanto, teria uma denio
mais funcional do que ecolgica.
Figura 10.5. Ciclo natural dos vrus da encefalites eqina do leste (EEEV), oeste (WEEV) e vrus do Nilo Ocidental
(WNV) e infecodehospedeiros acidentais.
Ciclo
natural
Hospedeiros
acidentais
Hospedeiros terminais Hospedeiros terminais
Figura 10.4. Ciclo natural da raiva de herbvoros.
268 Captulo 10
Espcies domsticas que mantenham um
agente e o transmitam a outras espcies tambm
podem ser consideradas reservatrios. A raiva
pode ser mantida na populao de ces urbanos
e, ocasionalmente, ser transmitida para pessoas.
Nesse caso, os ces seriam os reservatrios para a
populao humana. Espcies domsticas tambm
podem servir de reservatrios de agentes virais e
transmiti-los a animais silvestres. Surtos com alta
mortalidade de mamferos marinhos (focas, lees
marinhos e cetceos) associados a um morbiliv-
rus (provavelmente o vrus da cinomose CDV)
foram relatados nos mares Mediterrneo e Cs-
pio. O CDV, provavelmente transmitido por ces
domsticos, tambm foi associado com doena e
mortalidade de lees e hienas em uma reserva na
Tanznia e com doena em mos-pelada (raco-
ons) e gatos nos Estados Unidos (Figura 10.6). Na
frica do Sul, a raiva mantida principalmente
em ces domsticos urbanos ou rurais e, ocasio-
nalmente, transmitida a carnvoros selvagens
(chacais), nos quais pode se manter por algum
tempo.
O termo hospedeiro terminal (dead end host)
utilizado para designar indivduos de uma esp-
cie que so infectados esporadicamente (ou aci-
dentalmente) por um agente, mas no possuem
participao relevante no seu ciclo de transmisso
e manuteno na natureza. Por isso, obviamente,
no podem se constituir em seus hospedeiros na-
turais. As razes pelas quais essas espcies no
participam da cadeia de transmisso podem ser
vrias, incluindo o desenvolvimento de enfermi-
dade rpida e fatal (no haveria tempo para uma
excreo e transmisso signicativa), a produo
de nveis baixos de viremia (insucientes para as-
segurar a transmisso) e incapacidade de trans-
mitir o agente (pela razo anterior ou pela natu-
reza da transmisso). O termo terminal se refere
ao nal da cadeia de transmisso e no necessa-
riamente ao curso da enfermidade. Os bovinos,
gatos e ces podem ser ocasionalmente infecta-
dos pelo vrus da doena de Aujeszky (PRV), mas
no possuem papel importante na transmisso,
devido ao curso rpido e fatal da doena. Situa-
o semelhante ocorre com a raiva nessas esp-
cies e tambm em humanos. Mesmo na hiptese
de a raiva bovina no possuir curso rpido e fa-
tal, dicilmente seria transmitida por essas esp-
cies, devido forma de transmisso (bovinos no
possuem o hbito de morder outros animais). Os
humanos, eqinos e outras espcies domsticas
so freqentemente infectados pelo WNV, EEEV
e WEEV, mas no possuem papel importante na
transmisso. Nesses casos, os nveis e durao
da viremia so geralmente incompatveis com a
Ciclo
natural
Hospedeiros
acidentais
Hospedeiros
acidentais
Figura 10.6. Ciclonatural dovrus dacinomose e transmissoacidental para espcies devida livre.
transmisso por mosquitos. Em alguns desses ca-
sos, a infeco tambm rpida e fatal, o que di-
culta a transmisso do agente a partir do animal
infectado. Casos de transmisso do WNV entre
pessoas, por transfuso sangnea, via placen-
ta e pela amamentao j foram relatados, mas
representam excees e possuem importncia
epidemiolgica restrita. Pessoas infectadas pelos
hantavrus tambm no participam ativamente
na transmisso do agente. Acredita-se que as es-
pcies em que um determinado vrus cause do-
ena severa e mortalidade considervel no se
constituam em seus hospedeiros naturais, e sim
acidentais. A tendncia que os vrus no causem
doena severa em seus hospedeiros naturais de-
vido a um processo evolutivo que, eventualmen-
te, tenha resultado em um equilbrio na interao
agente-hospedeiro, ou seja, o desenvolvimento
de doena severa nos hospedeiros desfavoreceria
a manuteno desses agentes na natureza.
2.2 Vias de excreo
Para que ocorra a transmisso entre indi-
vduos, o vrus deve ser inicialmente excretado
do hospedeiro infectado pela via adequada em
quantidade suciente. As vias pela qual o agente
excretado do organismo animal so denomina-
das vias de excreo (vias de eliminao) ou portas
de sada. A via de excreo de um vrus determi-
nada primariamente pelo seu tropismo, ou seja,
pelo tecido ou rgo-alvo onde ocorre a sua re-
plicao. Por exemplo, os vrus que replicam na
mucosa das vias respiratrias so excretados pe-
Secrees oronasais e
expectoraes
vrus respiratrios
vrus da influenza, parainfluenza, rinovrus,
herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1)
CDV, vrus da febre aftosa (FMDV),
vrus da raiva
Fezes
vrus entricos
enterovrus, coronavrus, parvovrus
canino (CPV)
vrus hepticos vrus das hepatites
Urina
vrus que replicam nos
epitlios dos tbulos renais
arenavrus, hantavrus
vrus que replicam no
epitlio vesical
CDV
outros vrus
sistmicos
Smen e/ou secrees
genitais
vrus que replicam nas
gnadas
PRRSV
vrus que replicam no
trato genital externo
PRRSV, BoHV-1, vrus do exantema
coital eqino (EHV-3)
vrus
sistmicos
vrus da leucose bovina (BLV), outros
retrovrus
Fetos/membranas e fluidos
fetais
vrus que
infectam o feto
BVDV, BoHV-1, parvovrus suno
(PPV), PRRSV
vrus sistmicos
Sangue e linfa
vrus sistmicos ou vrus que
produzem viremia permanente
ou transitria
retrovrus, BVDV, flavivrus, vrus da
lngua azul (BTV), etc.
Pele, descamaes e
exsudaes cutneas
vrus que replicam em camadas
superficiais da pele ou na
transio pele-mucosa
poxvrus, vrus do ectima contagioso,
papilomavrus, FMDV, BoHV-2
Vias de excreo Tipos de vrus/infeco Exemplos
vrus que replicam na
cavidade oral e anexos
Tabela 10.1. Vias de excreo dos principais vrus de animais
270 Captulo 10
las secrees oro-nasais e expectoraes; os vrus
que replicam no fgado e no trato intestinal so
excretados pelas fezes.
As principais vias de excreo de agentes
virais esto ilustradas na Figura 10.2, e os agen-
tes que as utilizam esto apresentados na Tabela
10.1. A grande maioria dos vrus pode ser excre-
tada por mais de uma via, embora geralmente
uma delas apresente maior importncia em de-
terminadas situaes.
A via de excreo tambm determina a for-
ma de transmisso. Os vrus que so excretados
no smen sero transmitidos pela cpula ou pela
inseminao articial; os vrus que so excreta-
dos nas fezes provavelmente sero transmitidos
pela via fecal-oral, pela contaminao de gua e
alimentos. Os vrus presentes no sangue e/ou na
linfa provavelmente sero transmitidos por veto-
res ou por procedimentos iatrognicos (agulhas e
material cirrgico contaminado).
2.3 Mecanismos de transmisso
A transferncia ou transmisso do agente
entre indivduos representa o ponto-chave na
cadeia do processo infeccioso. O agente excreta-
do deve ser capaz de resistir no meio ambiente
o tempo necessrio para encontrar e penetrar
em outro hospedeiro susceptvel. No entanto, ao
contrrio de outros microorganismos que conse-
guem sobreviver no meio ambiente por longos
perodos, a viabilidade da maioria dos vrus fora
do organismo do hospedeiro muito limitada.
Por isso, certamente, grande parte das partculas
virais produzidas pelas infeces virais inati-
vada no meio ambiente antes de ter conseguido
alcancar um novo hospedeiro.
As principais formas de transmisso dos
agentes virais esto apresentadas na Figura 10.7
e Tabela 10.2. Em termos gerais, a transmisso
dos vrus entre indivduos pode ser horizontal ou
vertical. Transmisso horizontal se refere trans-
misso entre indivduos de uma mesma gerao,
pela coabitao de um mesmo habitat. Transmisso
vertical refere-se transmisso do agente de um
hospedeiro para os seus descendentes. A trans-
misso horizontal pode ser direta ou indireta. A
transmisso horizontal direta pode ocorrer por
contato direto ou indireto. A transmisso indireta
pode ocorrer com a participao de veculos, por
vetores ou pelo ar.
A transmisso direta por contato direto ocorre
pelo contato fsico entre o hospedeiro infectado e
o novo hospedeiro. O contato entre mucosas, en-
tre pele e mucosa ou entre pele e pele permite ao
agente passar diretamente ao animal susceptvel
Figura 10.7. Formas de transmisso dos vrus de animais.
Transmisso
Horizontal
Vertical
Indireta
Transovariana
Transplacentria
Perinatal
Colostro/leite
Direta
Area
Contato direto
Contato indireto
Veculos
Vetores
Biolgicos
Mecnicos
e pode ocorrer por mordedura (transmisso do
vrus da raiva, arenavrus entre roedores), lam-
bedura (vrus entricos), contato focinho-focinho
(viroses respiratrias, FMDV, CDV), focinho-
genitlia (herpesvrus bovino tipo 1 [BoHV-1],
BVDV), focinho-pele (vrus da mamilite herp-
tica [BoHV-2]), contato pele-pele (poxvrus, pa-
pilomavrus) e pela cpula (BoHV-1, vrus do
exantema coital dos eqinos [EHV-3], PRRSV).
Nessas formas de transmisso, o agente trans-
Famlia Mecanismo de transmisso
Parvoviridae
Contato direto e indireto (fecal-oral, respiratria),
transplacentria (vrus da panleucopenia felina, parvovrus
suno).
Circoviridae Contato direto e indireto (fecal-oral, respiratria).
Papillomaviridae Contato direto e indireto (cutnea, leses de pele).
Adenoviridae Contato direto e indireto (fecal-oral, respiratria).
Poxviridae
Contato direto ou indireto (cutnea [orf, cowpox], respiratria [sheep
pox]), vetores artrpodes (vrus do mixoma).
Herpesviridae
Contato direto ou indireto (sexual [exantema coital eqino [EHV-3],
balanopostite e vulvovaginite pelo BoHV-1], respiratria (BoHV-1),
transplacentria (PRV, BoHV-1).
Asfarviridae
Contato direto ou indireto (respiratria), indireto por vetores
(carrapatos), oral (alimento contaminado).
Picornaviridae
Contato direto ou indireto (fecal-oral [enterovrus, FMDV], respiratria
[rinovirus, FMDV]), transmisso indireta por veculos (alimentos
contaminados, fmites [FMDV]).
Caliciviridae Contato direto ou indireto (fecal-oral, respiratria).
Arteriviridae
Contato direto ou indireto (respiratria, sexual), indireto (fmites,
smen contaminado [PRRSV, EAV]).
Togaviridae Indireta por vetores.
Flaviviridae
Indireta por vetores (WNV), contato direto e indireto (fecal-
oral, respiratria [BVDV, vrus da peste suna clssica
[CSFV]), transplacentria (BVDV).
Coronaviridae Contato direto ou indireto (fecal-oral, respiratria)
Arenaviridae
Contato direto ou indireto (urina contaminada,
mordeduras, respiratria)
Bunyaviridae Indireta por vetores (vrus da febre do Vale Rift)
Orthomyxoviridae Contato direto ou indireto (respiratria)
Rhabdoviridae
Contato direto (mordedura [vrus da raiva]), direto ou
indireto (vrus da estomatite vesicular [VSV]), indireta
por vetores (VSV).
Contato direto ou indireto (respiratria). Paramyxoviridae
Contato direto ou indireto (fecal-oral [rotavrus, vrus da
gastrenterite transmissvel dos sunos [TGEV]), indireta por
vetores (BTV).
Reoviridae
Contato direto ou indireto, vertical ( [leucose
aviria] ou transplacentria [BLV]), ingesto, indireta por
vetores (EIAV).
in ovo
Retroviridae
Tabela10.2. Principais mecanismos detransmissodos vrus de animais
272 Captulo 10
ferido imediatamente a outro hospedeiro, assim,
a sua capacidade de resistncia no meio ambiente
pouco relevante para o sucesso da transmisso.
Na transmisso direta por contato indireto
no ocorre contato fsico entre o corpo do ani-
mal infectado e o novo hospedeiro. Nesses casos,
ocorre o contato imediato entre o material con-
taminado recm-excretado (secrees, excrees,
lquido ou membranas fetais) e uma superfcie
mucosa (focinho, mucosa nasal, oral e genitlia)
ou pele do novo hospedeiro. A diferena entre
essa forma de transmisso e a transmisso indireta
por veculos, descrita a seguir, muito tnue e de
difcil percepo em alguns casos.
A transmisso indireta envolve a transmisso
do agente por meio de objetos inanimados (de-
nominados veculos ou fmites) ou por vetores
invertebrados (insetos). Veculos ou fmites, fre-
qentemente envolvidos na transmisso de vrus
animais, incluem agulhas hipodrmicas, mate-
rial cirrgico, luvas de palpao retal, espculos,
formigas, focinheira, tatuadores, aplicadores de
brinco, roupas e utenslios, instalaes, equipa-
mentos (ordenhadeiras), cochos, solo e outros. A
gua, leite, smen, subprodutos crneos e outros
alimentos contaminados com o agente tambm
podem servir de veculos para a transmisso de
agentes virais. No caso de transmisso por vecu-
los, o sucesso da transmisso depende da capaci-
dade de o agente preservar a sua viabilidade no
meio ambiente o tempo suciente para alcancar o
novo hospedeiro.
A transmisso de vrus por luvas de palpa-
o, espculos contaminados ou equipamento
de inseminao articial tambm pode ocorrer
(vrus da leucose bovina [BLV], BVDV, PRRSV).
Viroses respiratrias (BoHV-1, BVDV, vrus res-
piratrio sincicial bovino [BRSV], vrus da pa-
rainuenza tipo 3 [bPI3v]) ou cutneas (FMDV,
poxvrus, BoHV-2) podem ser transmitidas pelo
contato de mucosas com cochos contaminados;
viroses entricas e hepticas podem ser transmi-
tidas pela via oro-fecal atravs da contaminao
de cochos, gua e alimentos. O smen utilizado
em inseminao articial pode servir de vecu-
lo para vrios vrus (BoHV-1, PRRSV, vrus da
lngua azul [BTV], BVDV, PRV). O sangue con-
taminado, utilizado em transfuses e/ou outros
procedimentos, pode transmitir agentes como o
VLB, vrus da leucemia felina (FeLV) e vrus da
anemia infecciosa eqina (EIAV), entre outros.
A possibilidade de transmisso por veculos
maior para os vrus que possuem grande capa-
cidade de resistncia no meio ambiente. O FMDV
um exemplo de agente que possui grande capa-
cidade de disseminao por meio de veculos (sa-
patos, roupas, utenslios, alimentos etc.). A trans-
misso por aerossis a curtas distncias pode
ocorrer para os vrus que replicam na cavidade
oronasal e anexos (vrus da inuenza, vrus da
bronquite infecciosa das aves [IBV], vrus da la-
ringotraquete infecciosa [ILTV], BoHV-1, CDV,
vrus da Doena de Newcastle [NDV]).
O termo iatrognico se refere transmisso
de agentes por procedimentos mdicos e/ou re-
lacionados com a sade animal. Os retrovrus
animais (BLV, EIAV, vrus da imunodecincia
felina [FIV]), alm de outros vrus que produzem
viremia (BVDV, BTV) podem ser transmitidos
por agulhas, material cirrgico ou outros equipa-
mentos contaminados (p. ex.: tatuadores, aplica-
dores de brinco). Vrios vrus sistmicos podem
ser transmitidos por transfuso de sangue ou de-
rivados e tambm por transplante de rgos.
Vrios vrus animais so transmitidos pela
picada de artrpodes (insetos), denominados
genericamente vetores. Dependendo de sua par-
ticipao na transmisso, os vetores artrpodes
podem ser classicados em vetores biolgicos e
mecnicos. Na maioria dos casos, os insetos pos-
suem um papel mais amplo do que simples-
mente transferir o agente entre hospedeiros, ou
seja, so susceptveis replicao e amplicao
do vrus em seus tecidos, eventos que ocorrem
aps a sua contaminao e que so necessrios
para que ocorra a subseqente transmisso a ou-
tro hospedeiro. Por isso so chamados de vetores
biolgicos. Exemplos de vrus transmitidos prima-
riamente por mosquitos so os vrus das encefa-
lites eqinas (EEEV, WEEV e vrus da encefalite
venezuelana [VEEV]), o WNV, o vrus da dengue
e febre amarela (YFV), alm de vrios buniav-
rus. Os culicides transmitem o BTV, carrapatos
transmitem o ASFV, entre outros. Os vrus trans-
mitidos primariamente por insetos so chamados
genericamente de arbovrus (arthropod-borne viru-
ses).
Alm dos arbovrus, outros agentes virais
podem ocasionalmente ser transmitidos por essa
via. Nesses casos, a transmisso por insetos ape-
nas uma das formas de transmisso geralmente
no a principal e, por isso, possui importncia
epidemiolgica limitada (p. ex.: BLV).
Alguns vrus podem ser transmitidos por
insetos, de forma mecnica, pela simples con-
taminao de partes de seu corpo (probscide,
asas) (p. ex.: vrus da mixomatose, poxvrus,
BLV, BoHV-2). Por outro lado, os tabandeos e as
moscas do estbulo transmitem mecanicamente
o EIAV, e esta a principal forma de transmis-
so do vrus. Transmisso mecnica por alguns
insetos tambm pode ocorrer no ciclo natural
do VEEV. Nesta infeco, no entanto, os insetos
desempenham preponderantemente o papel de
vetores biolgicos. No caso de transmisso me-
cnica, os vetores no so susceptveis replica-
o do agente, desempenhando apenas um papel
mecnico na transferncia do agente entre hospe-
deiros. Por isso so denominados vetores mecni-
cos. Pela analogia de funo, os vetores mecni-
cos so ocasionalmente referidos como agulhas
voadoras.
A transmisso area pelo transporte de go-
tculas e/ou partculas contaminadas a longas
distncias tem sido demonstrada em algumas
viroses. Gotculas em aerossis (ou partculas
dessecadas) podem ser resultado de espirro e/ou
tosse em viroses respiratrias (inuenza) ou de
aerossolizao/dessecao de urina (hantavrus)
ou fezes (enterovrus). Essa forma de transmisso
somente possvel para os agentes que apresen-
tam grande resistncia no meio ambiente. J foi
demonstrado que o FMDV pode se disseminar
por vrios quilmetros, dependendo das con-
dices de umidade do ar e ventos. No entanto,
sabe-se que a maioria dos vrus, principalmente
os respiratrios, s se dissemina pelo ar a peque-
nas distncias. A infeco por hantavrus em hu-
manos ocorre freqentemente pela inalao e/ou
deposio conjuntival de partculas de poeira
oriundas de solo contaminado pela urina de roe-
dores portadores. Os poxvrus, por causa de sua
grande resistncia ambiental, tambm podem ser
transmitidos por via area.
A transmisso vertical de um vrus pode ocor-
rer de vrias formas (Figura 10.7). Certos retrov-
rus avirios e murinos so capazes de integrar o
seu genoma no cromossomos dos gametas (vrus
da leucose aviria [ALV], retrovrus murinos).
Esse tipo de transmisso denominada transova-
riana. Essa forma de transmisso tambm ocorre
com alguns vrus nos vetores artrpodes (p. ex.:
a fmea do mosquito Aedes aegypty transmite o
vrus da dengue aos ovos e larvas; esse tipo de
transmisso tambm ocorre com o ASFV em car-
rapatos). Outros vrus so transmitidos atravs
da placenta (transmisso transplacentria), resul-
tando em infeco fetal com conseqncias di-
versas (BVDV, BLV, PRRSV, parvovrus suno
[PPV], entre outros). A transmisso que ocorre
nas proximidades e/ou durante o parto deno-
minada de perinatal (herpesvrus canino [CHV],
PRV, FIV). A transmisso pelo colostro e/ou leite
contaminado (vrus da artrite-encefalite caprina
[CAEV], maedi-visna, VLB) tambm considera-
da uma forma de transmisso vertical se envol-
ver me e lho.
A maioria dos vrus pode ser transmitida
por mais de uma forma, embora geralmente uma
delas desempenhe um papel epidemiolgico
mais importante em cada situao.
2.4 Vias de penetrao
Aps ser excretado e transportado (se for o
caso), o vrus deve penetrar no novo hospedeiro
pela via adequada para que possa estabelecer a
infeco. Os stios por onde os vrus penetram no
hospedeiro so denominados vias de penetrao
(ou portas de entrada) (Figura 10.3). A via de pe-
netrao de um agente determinada primaria-
mente pelo mecanismo de transmisso. Assim, os
vrus transmitidos por gua e alimentos contami-
nados provavelmente iro penetrar pela via oral;
os vrus transmitidos por vetores artrpodes iro
penetrar atravs de orifcios (picadas) na pele; os
vrus transmitidos pelo smen iro penetrar na
mucosa genital feminina.
A maioria dos vrus pode utilizar mais de
uma via de penetrao, dependendo da via de
excreo e do mecanismo de transmisso; poucos
vrus utilizam uma nica via de penetrao. As
principais vias de penetrao de agentes virais
nos seus hospedeiros so:
274 Captulo 10
mucosa respiratria: vrus respiratrios
(vrus da inuenza, rinovrus, BoHV-1, NDV);
mucosa conjuntival: adenovrus, hantav-
rus, alguns herpesvrus;
mucosa orofarngea: CDV, FMDV, vrus
sistmicos;
mucosa intestinal: enterovrus, coronav-
rus, rotavrus;
pele: BoHV-2, poxvrus, papilomavrus,
arbovrus (pela picada de insetos);
mucosa genital: BoHV-1, PRRSV, EHV-3,
alm de agentes virais veiculados pelo smen.
2.5 O novo hospedeiro
A simples penetrao do agente no orga-
nismo de um animal no assegura o desenvolvi-
mento da infeco. Para que isso ocorra, o hos-
pedeiro deve ser susceptvel ao agente. O termo
susceptibilidade refere-se ao conjunto de condies
apresentadas pelo hospedeiro para permitir a
multiplicao do vrus. O termo resistncia refe-
re-se ao conjunto de barreiras que o organismo
oferece para impedir ou limitar a infeco. A sus-
ceptibilidade e resistncia so caractersticas in-
dividuais e podem variar com vrios fatores, tais
como: espcie, raca, sexo, idade, exposio prvia
ao agente, estado nutricional e siolgico, entre
outros. O termo refratariedade, por outro lado, re-
fere-se a um grau absoluto de resistncia, que
caracterstico da espcie animal. Por exemplo, a
espcie canina naturalmente refratria ao vrus
da imunodecincia humana (HIV); assim como
os eqinos so refratrios ao FMDV.
Os fatores que determinam a susceptibili-
dade (e resistncia) de uma espcie animal a um
determinado vrus so mltiplos e, em muitos
casos, no so completamente conhecidos. Nesse
sentido, deve-se fazer uma distino entre suscep-
tibilidade natural e susceptibilidade experimental. Al-
gumas espcies no so naturalmente infectadas
por um determinado agente, mas podem ser in-
fectadas experimentalmente. Como exemplo, ci-
tam-se: a) os coelhos, que no so infectados natu-
ralmente pelo BoHV-1 e BoHV-5, mas podem ser
infectados experimentalmente, desenvolvendo a
enfermidade; b) animais de laboratrio (cobaias,
coelhos, camundongos e ratos), que podem ser
infectados experimentalmente por uma varieda-
de de vrus humanos e animais, embora a infec-
o natural por esses agentes nessas espcies no
tenha sido descrita. Essa caracterstica tem sido
explorada para estudos de patogenia e outros
aspectos da biologia desses agentes. provvel
que a resistncia infeco natural (ou a ausncia
de casos de infeco natural) de algumas dessas
espcies deva-se falta de oportunidade de infec-
o mais do que resistncia propriamente dita,
ou seja, possvel que algumas dessas espcies
poderiam ser infectadas tambm in vivo, desde
que providas as condies necessrias para tal (p.
ex.: contato apropriado com animais que estejam
excretando o vrus e penetrao do agente pela
via adequada).
2.5.1 Patogenia e resposta imunolgica
Aps a penetrao no hospedeiro suscep-
tvel, o vrus deve replicar prximo ao local de
entrada (geralmente nas clulas epiteliais e/ou
no tecido linforreticular adjacente) para produzir
prognie suciente para ultrapassar as defesas
do hospedeiro. Dependendo das interaes entre
o agente e o hospedeiro, a infeco pode ou no
resultar em manifestaes clnicas. Os mecanis-
mos pelos quais os agentes infecciosos produzem
doena em seus hospedeiros so considerados
sob a denominao de patogenia ou patognese
(pato = doena, genesis = origem, formao). O
conjunto de respostas do hospedeiro infeco
vrica (resistncia natural e adquirida) denomi-
nado genericamente de resposta imunolgica. Os
mecanismos gerais da patogenia e da resposta
imunolgica s infeces vricas foram tratados
de forma geral nos Captulos 8 e 9, respectiva-
mente, e, especicamente, nos captulos de cada
famlia. Abaixo so relacionados alguns termos
relacionados com a patogenia.
O perodo de incubao de uma infeco o in-
tervalo de tempo entre a penetrao do agente e o
incio dos sinais clnicos. A sua durao varia de
acordo com fatores do vrus (espcie, cepa, dose,
virulncia etc.) e do hospedeiro (espcie animal,
condio nutricional e imunolgica, via de inocu-
lao etc.) e pode variar entre poucos dias (febre
aftosa, inuenza), meses, at anos (leucose bovi-
na). Quando a infeco for subclnica, o perodo
de incubao pode ser innito.
O periodo pr-patente o intervalo de tempo
entre a penetrao do agente e o incio da excreo
viral pelo hospedeiro. Depende principalmente
da durao do ciclo replicativo do vrus e pode
ser de horas, poucos dias (vrus respiratrios,
FMDV) at semanas ou meses (alguns gamaher-
pesvrus). O perodo patente, tambm chamado
de perodo de transmissibilidade ou comunicabili-
dade a fase da infeco em que o agente ex-
cretado e, portanto, pode ser transmitido. Em in-
feces agudas clnicas, a durao da excreo do
vrus coincide razoavelmente com o perodo cl-
nico, podendo iniciar horas ou poucos dias antes
e estender-se por algumas horas ou alguns dias
aps. Em infeces persistentes por retrovrus, o
agente pode ser excretado por um longo perodo
(at anos) antes do aparecimento de sinais clni-
cos. Em outras infeces (PRRSV, ILTV, vrus da
arterite eqina [EVAV], CAV, alguns coronav-
rus), os hospedeiros podem continuar excretan-
do o vrus por longo perodos aps o trmino das
manifestaes clnicas (Figura 10.8).
3 Mecanismos de manuteno dos
vrus na natureza
A sobrevivncia dos vrus na natureza de-
pende da sua capacidade de cumprir seqencial-
mente as etapas da cadeia do processo infeccioso.
A incapacidade da maioria dos vrus de resistir
Infeco aguda
Infeco latente
Infeco persistente
Infeco persistente
temporria
Replicao viral
Manifestaes clnicas
Figura 10.8. Padres de ocorrncia das infeces e perodo de transmissibilidade em diferentes tipos de infeces
virais.
Fonte: adaptado de Flint et al. (2000).
276 Captulo 10
por longo tempo no meio ambiente os obriga a
utilizar diferentes estratgias para prolongar e
perpetuar a sua existncia. Infeces persistentes
ou latentes, longos perodos de replicao e ex-
creo, longos perodos de incubao, infeco de
vrias espcies animais e/ou de insetos, e trans-
misso aos descendentes (transmisso vertical)
esto entre as estratgias utilizadas pelos vrus
para se perpetuar na natureza. No obstante, as
partculas vricas de diversos vrus so relativa-
mente estveis, podendo persistir viveis por pe-
rodos considerveis no meio ambiente. Muitos
vrus utilizam uma combinao de mais de uma
dessas estratgias para conseguir se perpetuar na
populao. Outros vrus no utilizam nenhuma
dessas estratgias e s conseguem se manter na
natureza por meio de infeces agudas sucessi-
vas.
3.1 Infeces persistentes
As infeces persistentes, acompanhadas
ou no de manifestaes clnicas, constituem-se
em importantes meios de manuteno de vrios
agentes virais na natureza. Durante o perodo de
infeco que pode durar toda a vida do animal
o vrus ca disponvel no organismo do ani-
mal e pode ser excretado de forma contnua ou
intermitente, podendo infectar outros animais e,
assim, alimentar a cadeia do processo infeccioso
(Figuras 10.8 e 10.9). Alguns vrus so excretados
ou cam disponveis no organismo para serem
transmitidos continuamente a partir do nal do
perodo pr-patente. Exemplos so as infeces
pelos retrovrus animais, pelo BTV, papiloma-
vrus (persistem nas leses) e calicivrus felino
(FeCV). Bezerros infectados intra-uterinamente
pelo BVDV podem nascer portadores e excretar
o vrus por toda a vida. Outros vrus podem ser
excretados por longos perodos aps a infeco
aguda (PRRSV, EVAV, CAV, alguns coronav-
rus). Por outro lado, alguns tipos de persistncia
apresentam um papel pouco relevante do ponto
de vista epidemiolgico, pois o vrus no ex-
cretado. Por exemplo, a infeco persistente pelo
CDV no SNC de ces adultos geralmente no
acompanhada de excreo viral. Da mesma for-
ma, alguns bovinos previamente imunizados
contra o FMDV e posteriormente infectados,
assim como bubalinos infectados pelo FMDV,
podem car portadores do vrus aps a infeco
primria, embora a sua capacidade de transmi-
tir o agente para outros hospedeiros ainda seja
questionvel.
3.2 Infeces latentes
Animais infectados pelos alfaherpesvrus
(BoHV-1, BoHV-5, PRV, EHV-1), entre outros,
excretam o agente por alguns dias durante a
infeco aguda, mas a replicao viral eventu-
almente cessa devido resposta imunolgica
Excreo viral
Infeco aguda Infeco persistente
Meses, anos Dias
Figura 10.9. Infeces persistentes devrus de animais: vrus daanemia infecciosaeqina(EIAV).
do hospedeiro. Esses animais, no entanto, cam
portadores do agente na forma latente para o res-
to da vida. A infeco latente se caracteriza pela
presena do genoma viral inativo, principalmen-
te em neurnios de gnglios nervosos, sem a ex-
presso de protenas e/ou produo de partculas
virais. Esporadicamente, a infeco latente pode
ser reativada por situaes de estresse, resultan-
do em replicao e excreo viral (Figura10.10). O
vrus excretado durante os eventos de reativao
pode, ento, ser transmitido a outros animais. Os
episdios de reativao e excreo podem se re-
petir peridica e indenidamente durante a vida
do animal, proporcionando inmeras ocasies
para a transmisso do agente. Assim, as infeces
latentes e suas reativaes peridicas se consti-
tuem em meios ecientes de perpetuao e disse-
minao desses vrus na natureza e representam
o principal obstculo para o estabelecimento de
medidas de combate contra essas infeces. Por
isso, a capacidade de estabelecer infeces laten-
tes possui um papel central e fundamental na epi-
demiologia das infeces pelos alfaherpesvrus.
3.3 Infeco de vrias espcies animais
Ao contrrio de alguns vrus que possuem
um espectro de hospedeiros restrito (infectam
uma nica espcie animal), vrios outros agen-
tes virais podem infectar mais de uma espcie, o
que representa uma vantagem em sua estratgia
de sobrevivncia. Alguns exemplos clssicos so
a maioria dos alfavrus (Togaviridae), alguns rab-
dovrus (vrus da estomatite vesicular, VSV) e
avivrus, que podem infectar uma variedade de
espcies de aves e mamferos (Figura 10.11). O v-
rus da inuenza A, por meio de mutaes/adap-
taes, tambm pode infectar vrias espcies de
aves domsticas e silvestres, alm de mamferos
(Figura 10.12); o VSV pode infectar vrias esp-
cies de mamferos. O WNV capaz de infectar
naturalmente mais de 180 espcies de vertebra-
dos, incluindo pssaros e outras aves silvestres e
domsticas (mais de 150 espcies) e mamferos.
A infeco alternada dessas espcies pode favo-
recer a permanncia do agente no ecossistema.
Alm dos vrus que usualmente infectam mais de
um hospedeiro como parte de seu ciclo natural,
outros podem, ocasional ou acidentalmente, in-
fectar outras espcies. Nesses casos, o hospedeiro
acidental no participa da cadeia de transmisso
do agente. A transmisso de vrus entre os reser-
vatrios silvestres e destes para a espcie hospe-
deira principal pode ocorrer por vrios mecanis-
mos e, freqentemente, envolve a participao de
vetores artrpodes. Em geral, considera-se que
quanto maior o espectro de hospedeiros suscep-
tveis, mais favorecida ser a sobrevivncia do
agente na natureza. No entanto, isso no impede
que vrus que infectem naturalmente apenas uma
espcie e os exemplos so numerosos consi-
Figura 10.10. Infeces latentes devrus animais: vrus dadoenadeAujeszky(PRV).
Excreo
viral
Situaes de
estresse etc.
Reativao da infeco
Infeco aguda Infeco latente
Estabelecimento da latncia
278 Captulo 10
Figura 10.11. Ciclo natural dos alfavrus e WNV em animais silvestres e infeco acidental de humanos e espcies
domsticas.
Ciclo natural Hospedeiros
acidentais
Hospedeiros
acidentais
Figura10.12. Evoluodovrus dainfluenzaAH5N1 por meiodeinfeces emvrias espcies.
Fonte: adaptado de Webster et al. (2006).
gam se manter indenidamente nas respectivas
populaes.
3.4 Infeco de vetores
A infeco de vetores artrpodes (mos-
quitos, carrapatos) uma importante forma de
transmisso de alguns vrus, denominados ge-
nericamente arbovrus. Aps a ingesto de san-
gue do hospedeiro infectado, o vrus replica no
intestino e/ou nas glndulas salivares do inseto,
podendo ser transmitido aps um perodo de
incubao de alguns dias (chamado de perodo
extrnseco de incubao). A transmisso consu-
mada pela picada e inoculao de saliva conta-
minada em outro hospedeiro. Embora os insetos
hematfagos tenham preferncia por determi-
nada espcie para se alimentar, podem ocasio-
nalmente transmitir o agente a animais de outra
espcie. De fato, a transmisso por vetores hema-
tfagos oferece uma oportunidade mpar para a
transmisso interespcie de vrios vrus. Mos-
quitos podem transmitir o WNV e os alfavrus
das encefalites eqinas entre aves, de aves para
mamferos (eqinos, mamferos silvestres) e de
aves para humanos. Os vrus da WNV e VEEV j
foram identicados em mais de uma dezena de
espcies de mosquitos, embora se acredite que,
em cada ecossistema, apenas uma ou poucas es-
pcies desses insetos tenham papel preponde-
rante na transmisso desses agentes. O vrus da
febre amarela pode ser transmitido pela picada
de mosquitos entre primatas, entre primatas e o
homem e entre pessoas. O ASFV transmitido
por carrapatos entre sudeos silvestres e entre es-
tes e sunos domsticos.
Em geral, acredita-se que a manuteno dos
arbovrus na natureza depende da transmisso
peridica a um hospedeiro vertebrado, ou seja, a
infeco seria mantida pela replicao seqencial
e alternada em hospedeiros vertebrados e inver-
tebrados (os vetores). A manuteno dos arbov-
rus em pocas de pouca ou nenhuma atividade
dos vetores, devido a temperaturas baixas, pode
ser explicada em parte pela transmisso transo-
variana do agente e tambm pela infeco ocasio-
nal de hospedeiros vertebrados com hbitos de
hibernao. Embora a capacidade de manuten-
o de vrus por longos perodos exclusivamente
nos hospedeiros invertebrados seja questionvel,
considera-se que esta seja uma das formas pos-
sveis de sobrevivncia desses microorganismos
na natureza. Para o VEEV e WNV, j foi demons-
trada a sobrevivncia do vrus em larvas de mos-
quitos ao longo de perodos prolongados (meses)
de clima frio.
3.5 Sobrevivncia no ambiente
Os vrus necessitam clulas vivas para se
multiplicar e a maioria deles no capaz de resis-
tir por muito tempo no meio ambiente. A sua re-
sistncia no ambiente depende da estabilidade f-
sica da partcula viral e das condices ambientais
(temperatura, umidade, radiao solar). Os vrus
sem envelope geralmente so capazes de resistir
por mais tempo fora do hospedeiro (parvovrus,
FMDV, enterovrus, adenovrus), embora alguns
vrus envelopados (poxvrus, mixomavrus) tam-
bm possam resistir por perodos considerveis.
J foi demonstrado que o parvovrus canino
(CPV) pode permanecer vivel no ambiente, des-
de que protegido por material orgnico, por per-
odos de at seis meses. O parvovrus suno (PPV)
tambm pode resistir durante dias ou semanas
em fezes e/ou em membranas e restos fetais. O
parapoxvrus, agente do ectima contagioso de
ovinos, pode permanecer vivel durante meses
nas crostas que se desprendem das leses labiais
dos animais afetados. O circovrus suno (PCV)
tambm pode permanecer vivel por dias ou at
semanas no ambiente. A contaminao de gua,
alimentos, solo, pastagens e mesmo de insetos
pode servir de meio para transmisso desses
agentes. Os vrus com envelope especialmente
aqueles que causam infeces respiratrias so
geralmente mais instveis e, por isso, so mais
rapidamente inativados por fatores sicos e/ou
qumicos ambientais. Os poxvrus esto entre
os vrus envelopados com maior resistncia am-
biental. Embora possam resistir no ambiente por
perodos considerveis e, assim, ser transmitidos
de forma indireta, esses vrus so freqentemen-
te transmitidos por contato direto ou indireto (Fi-
gura 10.13), ou seja, a transmisso indireta aps
um perodo de sobrevivncia no ambiente repre-
senta uma estratgia adicional para assegurar a
sua transmisso ao novo hospedeiro e perpetua-
o na populao.
280 Captulo 10
3.6 Transmisso vertical
A transmisso ao feto e/ou ao recm-nas-
cido constitui-se em um importante mecanismo
de prolongamento da existncia de vrios vrus
animais. Os retrovrus, arenavrus, alguns her-
pesvrus, parvovrus e alguns togavrus so fre-
qentemente transmitidos aos fetos/neonatos.
Em alguns desses vrus (retrovrus e arenavrus),
os fetos ou recm-nascidos infectados tornam-se
portadores e servem de fontes contnuas e per-
manentes de infeco. Uma forma especial de
perpetuao por esse mecanismo descrita para
o BVDV, um pestivrus (famlia Flaviviridae) de
ruminantes (Figura 10.14). A infeco de fetos
bovinos entre os 40 e 120 dias de gestao fre-
qentemente resulta na produo e nascimento
de bezerros imunotolerantes, persistentemente
infectados (PI). Os bezerros PI podem ser clinica-
mente saudveis (embora freqentemente apre-
sentem crescimento retardado e susceptibilidade
aumentada a outras doenas) e excretam o vrus
em secrees e excrees em grandes quantida-
des durante toda a vida. Os animais PI represen-
tam o principal meio de perpetuao do BVDV
na natureza, servindo de fonte de vrus para as
infeces agudas e outras infeces fetais persis-
tentes. As infeces fetais que resultam em morte
fetal e abortamento possuem um menor impacto
epidemiolgico, ainda assim os restos fetais (feto,
uidos, membranas) ou objetos inanimados con-
Figura 10.13. Sobrevivncia ambiental dos vrus
animais: parvovrus canino(CPV).
Meses
Ambientes, solo,
instalaes etc.
Infeco fetal
Excreo viral
Anos
Bezerro saudvel,
soropositivo,
no-infectado.
Bezerro persistentemente
infectado
aborto;
mumificao;
natimorto.
Figura10.14. Transmissovertical e infecopersistentepelovrus dadiarria bovina(BVDV).
taminados podem servir de veculos para a trans-
misso do agente e facilitar a sua diseminao.
3.7 Ciclos contnuos de transmisso
As estratgias mencionadas acima so ca-
ractersticas de famlias ou de grupos de vrus
e representam vantagens evolutivas que favore-
cem a perpetuao desses agentes na natureza.
No entanto, alguns vrus que no utilizam es-
sas estratgias tambm so capazes de se man-
ter indenidamente nas populaes. Como no
so capazes de persistir por longos perodos no
hospedeiro (infeco latente ou persistente) ou
de infectar vetores ou outras espcies animais,
e no resistem por muito tempo no ambiente, a
sobrevivncia desses vrus depende da infeco
seqencial, imediata e contnua de novos hos-
pedeiros de uma nica espcie (Figura 10.15).
Isso requer condies epidemiolgicas espec-
cas, que incluem a presena constante de um
percentual alto de hospededeiros susceptveis e
condies de convivncia que favoream o con-
tato freqente e, assim, a sua transmisso entre
indivduos.
Os vrus que causam infeces agudas so
geralmente excretados por secrees oronasais
(vrus respiratrios) ou pelas fezes (vrus entri-
cos) em altos ttulos durante um curto espao de
tempo. Essas caractersticas, aliadas com a dispo-
nibilidade de hospedeiros susceptveis e facilida-
de de contato, permitem a transmisso contnua e
o prosseguimento da cadeia infecciosa. Exemplos
de vrus que se mantm dessa forma so: o CDV,
os vrus respiratrios (bPI3v, NDV, BRSV), coro-
na e rotavrus bovino, vrus da inuenza (trans-
misso dentro da espcie). No obstante, vrios
vrus que so capazes de utilizar as outras estra-
tgias tambm podem ser mantidos por perodos
longos por meio de ciclos contnuos de transmis-
so.
4 Doenas em populaes
4.1 Denio de populao
Em epidemiologia, dene-se populao como
o grupo de indivduos no qual se est estudan-
do aspectos relacionados sade e doena. A
partir desse conceito, pode-se derivar duas de-
Figura 10.15. Ciclos contnuos detransmissodovrus dacinomose (CDV).
282 Captulo 10
nies, dependendo da delimitao geogrca
e do nmero de indivduos. Populao local um
grupo de indivduos que habita uma determi-
nada rea, sujeito s mesmas condies e cujos
indivduos interagem freqentemente entre si. O
termo metapopulao mais abrangente e se refe-
re a uma populao maior, geralmente composta
por vrias populaes locais, em que a migrao
de indivduos entre populaes locais possvel.
Para algumas espcies de animais sobretudo
aquelas de interesse econmico , os termos reba-
nho e criao so muito utilizados como sinnimo
de populao, principalmente quando se refere a
populaes locais.
O tamanho e as caractersticas das popula-
es-alvo de estudos epidemiolgicos so muito
variveis. Pode-se estudar os fatores que deter-
minaram a ocorrncia de cinomose em um ca-
nil, por exemplo. Nesse caso, a populao-alvo
composta apenas pelos ces presentes no canil na
poca da ocorrncia da doena. uma popula-
o limitada e sob certo controle, o que caracte-
riza uma populao local. Em um estudo da in-
feco pelo parvovrus em ces de uma cidade, a
populao-alvo abrange todos os ces da cidade.
Essa uma populao com um nmero grande
de indivduos, de difcil enumerao e identica-
o, e, por isso, sobre a qual no se tem controle.
Estudos de viroses em animais silvestres (febre
amarela em primatas, raiva em morcegos) tratam
de uma populao de tamanho desconhecido e
sobre a qual no se possui nenhum controle. Evi-
dentemente, os estudos epidemiolgicos em po-
pulaes limitadas que habitam uma rea restrita
e sobre a qual se tem controle so mais facilmente
exequveis e produzem resultados mais objetivos
e conveis. No entanto, estudos em populaes
numerosas de dimenses desconhecidas so,
muitas vezes, necessrios e, dependendo da me-
todologia empregada, podem tambm produzir
resultados conveis e de grande utilidade. Nes-
ses casos, geralmente, estuda-se apenas uma par-
cela da populao, denominada amostra.
4.2 Populao de risco
O termo populao de risco refere-se parce-
la da populao que susceptvel infeco ou
enfermidade em questo. Se todos os indiv duos
da populao forem susceptveis ao agente, a po-
pulao de risco equivale populao total. A
populao de risco para a febre aftosa em uma
populao bovina no-vacinada, por exemplo,
composta por todos os bovinos da populao,
pois todos os animais so igualmente suscept-
veis. Em outras situaes, a populao de risco
apenas uma parcela da populao, que sus-
ceptvel infeco ou enfermidade. Em estudos
de abortos por vrus em bovinos, a populao de
risco constituda apenas pelas vacas prenhes.
Estudos sobre as causas de mastite em bovinos
contemplam apenas as vacas em lactao. A de-
nio da populao de risco importante quando
se quantica os eventos de doena e se expressa
em ndices ou taxas. Esses clculos devem sem-
pre considerar a populao de risco (e no a po-
pulao total) como denominador.
4.3 Populaes abertas e fechadas
Dependendo da possibilidade de contato
com o meio exterior (e com outras populaes),
as populaes de animais podem ser classicadas
em abertas e fechadas. Populaes abertas so aque-
las sobre as quais no so impostas restries
movimentao (entrada e sada) de animais e de
subprodutos, estando, por isso, mais susceptveis
introduo e disseminao de agentes infeccio-
sos. As populaes de ces de cidades so exem-
plos de populaes abertas, pois no existem
restries entrada e movimentao de animais
oriundos de outras cidades ou regies. Muitos re-
banhos bovinos, principalmente aqueles de cria-
o extensiva, tambm se enquadram nessa cate-
goria pela ausncia de medidas de biossegurana
para impedir a entrada de agentes infecciosos.
Nesses casos, as populaes locais podem, com
maior ou menor freqncia, interagir com outras
populaes locais dentro de uma mesma meta-
populao.
As populaes fechadas so grupos de animais
mantidos sob certo isolamento do meio exterior.
As condies de isolamento em nvel e rigor
variveis geralmente so impostas pelo homem
com o intuito de evitar a introduo de agentes
infecciosos e preservar a condio sanitria da po-
pulao. possvel manter populaes fechadas
com diferentes abrangncias, desde rebanhos em
propriedades, municpios, regies, estados, pa-
ses e at mesmo continentes. Rebanhos sunos ou
granjas de aves livres de determinados patgenos
(PRV, PRRSV, NDV) e que impem restries
introduo de quaisquer fatores que possam in-
troduzir o agente so exemplos de populaes
pequenas fechadas. Por outro lado, pases como
os Estados Unidos impem restries introdu-
o de animais e subprodutos de outros pases,
com o objetivo de preservar seus rebanhos suno
e bovino livres do vrus da peste suna clssica
(CSFV) e FMDV, respectivamente. A tendncia
que criaes comerciais de vrias espcies ani-
mais se tornem progressivamente fechadas, a m
de preservar uma condio sanitria compatvel
com sade animal e atividade econmica.
4.4 Quanticao de doena: incidncia
e prevalncia
A quanticao dos eventos de doena nas
populaes se constitui em um dos instrumentos
mais utilizados em epidemiologia. Essa quanti-
cao expressa sob a forma de taxas e coe-
cientes. Dene-se taxa (ou ndice) como uma fra-
o em que o numerador nmero de casos e o
denominador a populao de risco, ou seja, a
expresso de uma freqncia relativa de casos de
uma determinada doena ou indicador de sade.
Dois ndices muito utilizados em epidemiologia
so a incidncia e a prevalncia. Embora sejam n-
dices relacionados e, muitas vezes, confundidos,
incidncia e prevalncia so ndices que possuem
composio, clculo e signicados distintos e,
como tal, devem ser considerados e analisados.
O ndice de incidncia mais utilizado para
descrever a dinmica de infeces agudas, em
que o nmero de novos casos aumenta rapida-
mente com o decorrer do tempo. Dene-se inci-
dncia como a freqncia relativa de novos casos
da doena (casos novos em relao a populao
de risco) que surgem em relao ao tempo. A in-
cidncia calculada da seguinte forma:
Incidncia (%) = _______________________ x 100

O clculo da incidncia sempre considera
o parmetro tempo, que pode ser dias, semanas,
meses ou anos, dependendo da dinmica da in-
feco. A incidncia uma freqncia relativa
que d uma idia da dinmica da infeco ou do-
ena. expressa em percentagem (exemplo: 1%
de novos casos por ms) ou frao (1/100.000 por
ms) x tempo. A incidncia tambm denomina-
da de taxa de ataque ou morbidade incidente.
A prevalncia tambm uma freqncia re-
lativa (nmero de casos/populao de risco),
porm determinada em certo momento (no con-
sidera a varivel tempo). utilizada principal-
mente para expressar a freqncia de infeces
ou doenas crnicas, ou de doenas que ocorram
h algum tempo na populao e cujo incio no
foi monitorado. Dene-se prevalncia como uma
freqncia relativa de casos de uma doena (ou
de outro fator relacionado) em um determinado
momento. O clculo da prevalncia no considera
o parmetro tempo e tambm pode ser expresso
em percentual (p. ex.: 1% de infectados) ou frao
(1/10.000).
Prevalncia (%) = ______________________ x 100

A prevalncia de infeces em rebanhos
freqentemente determinada por exames sorol-
gicos que detectam anticorpos e indicam que hou-
ve uma exposio prvia ao agente. A freqn cia
relativa de animais reagentes chamada de soro-
prevalncia. Ao contrrio da incidncia, o ndice
de prevalncia no fornece informaes acerca
da dinmica da infeco, e sim da situao mo-
mentnea, ou seja, constitui-se em uma informa-
o esttica, pois no acompanha a evoluo do
processo infeccioso.
Outras taxas comumente utilizadas em epi-
demiologia so morbidade, mortalidade e letalidade.
Taxa de morbidade o percentual (ou frao) dos
N de casos novos
Populao de risco (mdia) x tempo
N de casos
Populao de risco
284 Captulo 10
animais expostos a um determinado agente que
desenvolvem a doena. O clculo dessa taxa pode
considerar, como denominador, a populao po-
tencialmente exposta (abrange todos os animais
do rebanho ou populao) ou a populao que
realmente entrou em contato com o agente (so-
mente os animais que foram infectados). No se-
gundo caso, a taxa de morbidade seria um reexo
direto da patogenicidade do agente; no primei-
ro caso, seria o produto da patogenicidade e da
transmissibilidade. Taxa de mortalidade a frao
dos animais (potencial ou realmente expostos)
que vai a bito em decorrncia da infeco. Taxa
de letalidade o percentual dos animais doentes
que vai a bito ( uma medida da severidade da
doena).
5 Padres temporais de ocorrncia
das doenas
Os eventos de doena ocorrem continua-
mente com o decorrer do tempo, com freqn-
cia e distribuio temporal que podem variar de
acordo com diversos fatores. Dependendo da
distribuio da freqncia ao longo do tempo,
trs padres principais de ocorrncia podem ser
reconhecidos: doenas de ocorrncia espordica,
endmica e epidmica (Figura 10.16). Os termos en-
demia e epidemia so utilizados para designar do-
enas de ocorrncia endmica e epidmica, res-
pectivamente. Os termos enzotica e epizotica
so utilizados para referir-se a doenas animais.
Porm, como mencionado anteriormente, os ter-
mos epidemiolgicos clssicos (endemia, epide-
mia) so tambm utilizados em epidemiologia
veterinria.
5.1 Doenas espordicas
As doenas espordicas so aquelas que no
esto presentes na populao a maior parte do
tempo e a sua ocorrncia caracterizada pelo
aparecimento de um nmero geralmente peque-
no de casos a intervalos variveis, irregulares e
imprevisveis (Figura 10.16A). Tratando-se de
doenas infecciosas, algumas possveis explica-
es para esse comportamento so: a) o agente
est sempre presente no ecossistema, porm em
N
d
e
n
o
v
o
s
c
a
s
o
s
Tempo
Doena Espordica A
N
d
e
n
o
v
o
s
c
a
s
o
s
Tempo
Doena Endmica B
N
d
e
n
o
v
o
s
c
a
s
o
s
Tempo
C
Epidemia de
propagao
Epidemia
em ponto
Doena Epidmica
Figura 10.16. Padres temporais de ocorrncia de
doenas.
reservatrios (outras espcies animais). Esses re-
servatrios apenas ocasionalmente entram em
contato e transmitem o agente para a espcie em
questo, desencadeando o aparecimento da do-
ena (p. ex.: casos de infeco pelo vrus ebola em
pessoas na frica, hantavirose em humanos no
Brasil); b) o agente est sempre presente na po-
pulao, porm causando infeces subclnicas
na maioria e doena em uma minoria dos indiv-
duos, ou seja, a infeco raramente causa a doen-
a. Assim, a infeco seria endmica e a doena
seria espordica (p. ex.: a infeco pelo BLV em
bovinos endmica; a ocorrncia do linfossarco-
ma causado pelo BLV espordica); c) o agente
no est presente na populao na maior parte
do tempo, sendo esporadicamente introduzido.
Quando introduzido, ocasiona os eventos de
doena (p. ex.: casos de febre aftosa nos estados
do Rio Grande do Sul e Mato Grosso do Sul nos
ltimos anos).

5.2 Doenas endmicas
Doenas endmicas ou endemias (enzootias)
so aquelas que ocorrem continuamente, com
freqncias pouco variveis e, portanto, razo-
avelmente previsveis na populao ao longo
do tempo (Figura 10.16B). Em outras palavras, a
infeco dita nativa da populao. Infeces en-
dmicas so geralmente mantidas pela ocorrn-
cia simultnea e contnua de mltiplas cadeias
de transmisso do agente entre hospedeiros sus-
ceptveis. Trs componentes so absolutamente
necessrios para que uma infeco seja endmica
em uma populao: a) a presena do agente; b) o
nmero/proporo adequado(a) de hospedeiros
susceptveis e c) a presena dos mecanismos de
transmisso. A ausncia de um desses compo-
nentes preclude a ocorrncia endmica da doen-
a. Uma infeco ou doena pode ser endmica
em diferentes nveis (hipoendmica [incidncia
baixa], mesoendmica [incidncia moderada],
hiperendmica [incidncia alta] e holoendmica
[incidncia altssima]), dependendo do nme-
ro/proporo de animais que afeta. Exemplos de
infeces vricas endmicas em populaes ani-
mais so abundantes: cinomose e parvovirose em
ces, infeco pelo BVDV e BoHV-1 em bovinos
de muitos pases, rotavirose e parvovirose suna,
leucose enzotica bovina, entre outras.
O termo endmico refere-se ao padro tem-
poral de ocorrncia de uma doena em uma de-
terminada populao. Por isso, quando se refere
uma doena endmica, preciso, necessariamen-
te, mencionar a populao em questo, pois essa
doena pode no ser endmica em outras popu-
laes. A infeco pelo BoHV-1, por exemplo,
endmica na populao bovina do Brasil. Para
infeces que ocorram endemicamente em todo o
mundo, no necessrio especicar a populao.
Por exemplo, a parvovirose uma doena end-
mica na populao canina (ca implcito que se
trata da populao mundial).
5.3 Doenas epidmicas
Doenas de ocorrncia epidmica ou epide-
mias (epizootias) so aquelas que se caracterizam
pela ocorrncia de um nmero excessivo e ines-
peradamente alto de casos em um determinado
perodo em uma populao (Figura 10.16C), ou
seja, ocorre com uma freqncia inesperada em
certo intervalo de tempo. Os termos epidemia (epi-
zootia) e surto so comuns e indistintamente uti-
lizados para designar esses eventos. Surto um
termo popular e tem sido utilizado mais amide
para referir-se a eventos restritos geogracamen-
te; enquanto epidemia um termo tcnico, mais
comumente (mas no exclusivamente) utilizado
para designar eventos mais abrangentes geogra-
camente. No entanto, deve-se enfatizar que no
existe uma distino clara entre esses dois concei-
tos e ambos so utilizados indistintamente para
se referir a esses eventos.
A caracterizao de uma epidemia necessa-
riamente requer a considerao dos parmetros
freqncia (nmero excessivo de casos), tempo
(dia, semana, ms, ano) e espao (populao).
Uma epidemia no pode ser denida pelo nme-
ro absoluto de casos, e sim pelo nmero relativo,
que deve ser comparado com o nmero de casos
esperado para o respectivo perodo naquela po-
pulao. Por exemplo, um nico caso de febre af-
tosa nos Estados Unidos (EUA), em 2006, pode
congurar estatisticamente uma epidemia, pois
a freqncia esperada era zero. Por outro lado,
1.000 casos de doena causada pelo PRRSV no es-
tado de Nebraska, EUA, em maio de 2006, pode
no congurar uma epidemia, pois pode ser se-
melhante freqncia observada nos meses ante-
riores. Estatisticamente, considera-se uma epide-
mia sempre que o nmero de casos exceder 1,96
desvio padro acima da mdia de casos espera-
dos para aquele intervalo de tempo.
286 Captulo 10
As dimenses de uma epidemia podem va-
riar amplamente de acordo com o nmero de
animais afetados e rea ocupada pela popula-
o. A introduo de um animal infectado pelo
BVDV em um rebanho de cria, por exemplo,
pode resultar em um surto localizado de abortos
naquela propriedade. Mordeduras de morcegos
em bovinos e eqinos produzem surtos de rai-
va que, freqentemente, atingem uma ou mais
propriedades vizinhas. O surto de febre aftosa
no Rio Grande do Sul (RS), em 2000, e no Mato
Grosso do Sul (MS), em 2005, envolveu vrios
municpios; na Argentina, em 2000, houve o en-
volvimento de vrias provncias e, na Inglaterra,
atingiu praticamente todo o pas. Epidemias pe-
quenas (envolvendo rebanhos ou populaes pe-
quenas) provavelmente ocorram continuamente
em populaes animais do mundo inteiro, sem
despertar a ateno. No entanto, algumas epide-
mias atingem grandes propores por envolver
pases e at mesmo continentes. A epidemia de
SARS (2003-2004) atingiu grande parte da sia,
alguns pases europeus e o Canad. Epidemias
que atingem populaes de continentes ou even-
tualmente de todo o mundo so denominadas
pandemias, das quais a parvovirose canina (a par-
tir da dcada de 1980) e a infeco pelo HIV cons-
tituem-se em exemplos contemporneos.
Dois tipos de epidemia podem ser reconhe-
cidos de acordo com a dinmica (taxa de aumen-
to da incidncia de acordo com o tempo) e dura-
o, reetindo doenas com diferentes formas de
transmisso e propagao. As epidemias em ponto
so caracterizadas por um aumento brusco, de
magnitude varivel e curta durao, no nmero
de novos casos (Figura 10.16C). Geralmente so
resultantes de exposio simultnea de vrios
indivduos ao agente, seja diretamente na fonte
de infeco (animal infectado), em gua, alimen-
tos, aerossis ou em produtos contaminados. So
caractersticas de infeces altamente transmis-
sveis (FMDV, CSFV, inuenza) ou de infeces
transmitidas macia e simultaneamente por uma
fonte comum de infeco. Ocorrem freqente-
mente pela ingesto de gua ou alimentos conta-
minados aos quais os animais tm acesso simul-
taneamente. Caracterizam-se por uma grande
concentrao de novos casos em um curto espaco
de tempo. A introduo de um animal infectado
pelo FMDV em um rebanho pequeno susceptvel
provavelmente resultar em uma epidemia com
essas caractersticas. Essas epidemias geralmente
possuem curta durao. Epidemia em torre, ma-
cia, de fonte comum ou hdrica so sinnimos
utilizados para designar eventos com essas carac-
tersticas.
As epidemias de propagao so aquelas em
que a incidncia aumenta gradualmente e no
de forma explosiva medida que novos ani-
mais vo sendo infectados, transmitem o agente
a novos hospedeiros e apresentam sinais clnicos
(Figura 10.16C). So caractersticas de infeces
transmitidas por contato direto ou indireto. A
epidemia da AIDS em humanos, a parvovirose
em ces e a PRRS em sunos so exemplos recen-
tes de epidemias de propagao. Epidemias de
propagao geralmente possuem durao pro-
longada.
Acredita-se que, mesmo em populaes de
animais silvestres e sem a interveno humana, as
epidemias sejam autolimitantes e no continuem
indenidamente. O m das epidemias ocorre
eventual e inevitavelmente pelo esgotamento dos
susceptveis, tanto pela morte como pelo desen-
volvimento de imunidade pelos indivduos.
Algumas enfermidades epidmicas em seu
incio, principalmente aquelas causadas pela
introduo de um agente novo na populao,
podem se tornar endmicas com o decorrer do
tempo. Exemplos so a parvovirose canina e a
PRRS, que, aps um incio explosivo, se torna-
ram endmicas nas populaes canina e suna de
vrios pases, respectivamente. A infeco pelo
WNV foi introduzida nos EUA, em 1999, quando
resultou em epizootias/epidemias em aves e hu-
manos. Aps esta introduo e incio epidmico,
a infeco se estabeleceu no ecossistema e se tor-
nou endmica em vrios estados norte-america-
nos. Recentemente o WNV foi detectado no noro-
este da Amrica do Sul e tambm na Argentina.
Outras epidemias se tornam restritas temporal-
mente (por fatores naturais ou por medidas de
controle) e no persistem de forma endmica na
populao. Exemplos recentes incluem a SARS e
as ocorrncias de febre aftosa no RS, em 2000; no
MS, em 2005; e na Inglaterra, em 2001, cujas me-
didas de combate resultaram na erradicao do
agente e no trmino das respectivas epidemias.
5.4 Fatores determinantes das
epidemias
Os surtos de doenas vricas resultam do
desequilbrio das interaes agente-hospedei-
ro-meio ambiente e podem ser potencialmente
determinados por inmeros fatores que podem
atuar individualmente ou em conjunto. Os surtos
de febre aftosa no RS e Gr-Bretanha, em 2000-
2001, por exemplo, foram determinados pela in-
troduo do agente em populaes susceptveis.
A pandemia de parvovirose canina, a partir da
dcada de 1980, foi determinada pelo surgimento
de um novo vrus na espcie canina, a partir da
mutao/evoluo do vrus da panleucopenia fe-
lina. A pandemia de AIDS provavelmente origi-
nou-se h decadas pela transmisso e adaptao
de um vrus de primatas (vrus da imunodeci-
ncia smia [SIV]) para humanos. Os surtos anu-
ais de gripe em humanos devem-se, entre outros
fatores, contnua evoluo e variao antignica
do vrus. A inuenza denominada gripe do fran-
go, que acomete pessoas e aves na sia desde
1997, deve-se a um vrus de aves que sofreu mu-
taes sucessivas e tornou-se mais virulento para
aves silvestres e domsticas e capaz de infectar
pessoas. O PRRSV de sunos provavelmente se
originou de um vrus de roedores (lactate dehi-
drogenase elevating virus, LDEV) que sofreu mu-
taes e adaptao em sudeos silvestres, sendo
posteriormente transmitido e disseminado entre
sunos domsticos. O vrus da SARS que infectou
milhares de pessoas na sia, Europa e Canad,
em 2003-2004, provavelmente se originou e foi
transmitido a humanos a partir de espcies de
animais silvestres.
Alterao em fatores ambientais, sem mo-
dicaes evidentes no agente, tambm podem
resultar em um aumento expressivo da freqn-
cia de doenas. A superpopulao de morcegos
hematfagos em determinadas reas, devido a
alteraes ecolgicas, so acompanhadas de sur-
tos de raiva em herbvoros. Mudanas ecolgi-
cas relacionadas com a agricultura tm causado
aumento da populao e mudana de hbitos de
roedores silvestres que servem de reservatrios
para os hantavrus e arenavrus. Essas alteraes
tm sido implicadas na ocorrncia de hantavirose
e doena hemorrgica por arenavrus em huma-
nos. O estresse do transporte e aglomerao ao
qual bezerros so submetidos aps o desmame
tem sido associado com surtos de viroses respi-
ratrias (BoHV-1, BRSV) e encefalite herptica
(BoHV-5). A temperatura e umidade no vero
favorecem a proliferao de vetores e a conse-
qente ocorrncia de arboviroses (WNV, encefa-
lites eqinas, dengue). A aglomerao de ces em
canis e pet shops pode favorecer o contato entre os
animais e a conseqente transmisso do CDV e
vrus respiratrios, entre outros.
A falha de cobertura vacinal na populao
em um determinado ano pode resultar em sur-
tos de doenas que normalmente so endmicas
e cuja freqncia geralmente baixa. A reativa-
o de infeces latentes, geralmente associada
com fatores ambientais (estresse, m nutrio,
aglomerao, mudana de alimentao) tem sido
freqentemente responsabilizada por surtos de
doenas associadas ao BoHV-1 e BoHV-5 em bo-
vinos. Esses fatores ambientais podem tambm
atuar em conjunto sobre o sistema imunolgico,
predispondo os animais a outras enfermidades.
Em resumo, virtualmente, qualquer fator do
agente, do hospedeiro e do meio ambiente que
determine direta ou indiretamente o aumento
na freqncia esperada de uma doena pode ser
considerado o fator determinante de uma epi-
demia. A origem e os fatores determinantes de
surtos podem ser freqentemente determinados
pela realizao de investigaes epidemiolgicas
criteriosas e sistemticas. No entanto, em mui-
tas situaes, as interaes que produzem esses
eventos so muito complexas e no permitem a
identicao da origem e dos fatores respons-
veis.
5.5 Outros padres de ocorrncia
Alm dos padres clssicos de ocorrncia,
algumas infeces vricas agudas apresentam
variaes de incidncia diferentes dos descritos
acima. Vrias infeces vricas agudas apresen-
tam aumentos de incidncia coincidentes com
288 Captulo 10
determinadas estaes do ano. Viroses respira-
trias (BRSV, parainuenza canina) geralmente
apresentam picos de incidncia no inverno; em
contraste, algumas viroses entricas e arboviro-
ses apresentam picos no vero. Esse tipo de com-
portamento denominado sazonal ou estacional, e
o aumento de incidncia vericado nessas po-
cas deve-se geralmente ao direta ou indireta
de fatores climticos sobre os hospedeiros, veto-
res e/ou agentes. A maior incidncia de viroses
respiratrias no inverno deve-se a fatores como
aglomerao de indivduos, ventilao deciente,
estresse trmico, umidade, temperatura e facili-
dade de transmisso dos vrus. A maior incidn-
cia de arboviroses nos meses quentes deve-se ao
aumento da populao e atividade dos artrpo-
des vetores. A causa de sazonalidade de algumas
infeces vricas, no entanto, no facilmente
explicvel e pode envolver mltiplas interaes
de fatores climticos com o hospedeiro e com o
agente.
Doenas com variaes cclicas apresentam
aumentos de incidncia a intervalos maiores do
que um ano. Os picos geralmente ocorrem quan-
do a imunidade da populao, que atinge o seu
mximo logo aps cada pico, atinge nveis cri-
ticamente baixos aps um perodo de reduo
gradativa. Esse padro de ocorrncia mais fa-
cilmente reconhecido em populaes humanas (o
sarampo apresenta picos a cada 2-3 anos; rubola
a cada 5-7 anos) e de animais silvestres, pois os
animais domsticos de interesse econmico fre-
qentemente tm o seu ciclo de vida interrompi-
do devido nalidade produtiva.
Doenas com tendncia secular so aquelas
cuja incidncia apresenta uma reduo ou au-
mento muito lento ao longo de anos e dcadas.
Essas variaes devem-se, em geral, a alteraes
ecolgicas graduais e progressivas, mudanas de
hbitos e de prticas de manejo, e a medidas ge-
rais de prolaxia e controle das doenas animais.
6 Distribuio espacial das infeces
vricas
As infeces vricas apresentam distribui-
es geogrcas diversas que dependem da
presena e da interao entre vrios fatores. Os
requerimentos mais bvios para a ocorrncia
de uma infeco e doena em uma determinada
populao so a presena do agente e de hospe-
deiros susceptveis. No entanto, outros fatores
epidemiolgicos so determinantes da distribui-
o geogrca das viroses animais. A existncia
e nmero de reservatrios e vetores, condies
favorveis para a sobrevivncia e transmisso do
agente, barreiras naturais ou articiais, medidas
de controle e/ou erradicao (incluindo vacina-
o), sistemas de produo, entre outros, contri-
buem para os diferentes padres de distribuio
e localizao das infeces vricas.
6.1 Doenas vricas de distribuio
mundial
As viroses de animais de companhia, sobre
os quais geralmente no se impe restries
movimentao e que no se constituem em al-
vos de programas sanitrios ociais, geralmente
possuem uma distribuio ampla, muitas vezes
mundial. Enquadram-se nessa categoria as prin-
cipais infeces vricas de ces e gatos. Embora
amplamente difundidas na populao, essas vi-
roses certamente apresentam diferenas de pre-
valncia e de incidncia entre populaes, ree-
tindo peculiaridades epidemiolgicas locais e
medidas voluntrias de controle eventualmente
praticadas. Populaes de ces e gatos que vivem
em condies isoladas (ilhas, comunidades re-
motas) podem ocasionalmente ser livres de algu-
mas dessas viroses. Algumas infeces vricas de
animais de interesse econmico (BoHV-1, bPI3v,
BVDV, rotavirose, coronavirose, parvovirose
suna) tambm possuem distribuio mundial,
embora algumas delas tenham sido alvos recen-
tes de programas de erradicao e, atualmente,
estejam erradicadas de alguns pases. A maioria
das viroses humanas tambm possui distribuio
mundial, embora possam apresentar nveis vari-
veis de ocorrncia nas diferentes subpopulaes.
Algumas viroses humanas j foram erradicadas
mundialmente (varola) ou esto em vias de er-
radicao em vrios pases (poliomielite, saram-
po).
6.2 Doenas vricas com certa limitao
geogrca
Algumas infeces vricas sobretudo as ar-
boviroses embora possam apresentar uma dis-
tribuio relativamente ampla e possam acometer
populaes de vrios continentes, possuem certa
limitao geogrca. A delimitao da ocorrncia
dessas infeces geralmente determinada pela
existncia de condies climticas para a sobre-
vivncia e atividade dos insetos envolvidos na
transmisso do agente. Enquadram-se nessa ca-
tegoria a dengue, a febre amarela, algumas infec-
es por alfavrus, avivrus e outras arboviroses
(WNV, VEEV). A distribuio dessas infeces
coincide com uma faixa territorial de certa am-
plitude laditudinal, onde as condies climticas
so favorveis sobrevivncia e atividade dos
vetores. Essas enfermidades podem, ocasional-
mente, ser detectadas em reas remotas e que
no apresentam condies para a perpetuao
dos vetores, mas dicilmente se tornam endmi-
cas nessas regies.
6.3 Doenas vricas restritas
geogracamente
Algumas infeces vricas apresentam uma
distribuio geogrca restrita, cando limita-
das a determinadas regies ou pases. A peste
suna africana ocorre endemicamente na frica,
provavelmente pelas condies epidemiolgicas
favorveis (populao susceptvel, reservatrios,
vetores, falta de medidas de biossegurana). Es-
poradicamente introduzida na Europa e no Brasil
no passado, a doena foi rapidamente erradicada
e no se tornou endmica. A doena do vale Rift,
enfermidade zoontica que afeta vrias espcies
de mamferos domsticos e silvestres, tem sido
historicamente restrita a uma regio da frica.
Ocasionalmente detectada fora do continente
africano (Oriente Mdio e sia), aparentemente
no encontrou condies para se manter ende-
micamente. A retrovirose Maedi-Visna foi ini-
cialmente identicada em ovinos/caprinos da
Islndia e tem cado praticamente restrita a esse
pas insular. O vrus Hendra (um morbilivrus de
morcegos) ultrapassou a barreira interespcies e
infectou humanos e eqinos na Austrlia, estan-
do, at ento, limitado quele continente. Evento
similar ocorreu na Malsia e Indonsia, onde o
vrus Nipah (tambm um morbilivrus de mor-
cegos) infectou e provocou doena em pessoas e
grande mortalidade em sunos. Outro exemplo
de infeco vrica restrita geogracamente o as-
sociado ao vrus ebola, cujos eventos epidmicos
concentram-se quase que exclusivamente na fri-
ca Central. As infeces pelos vrus das encefali-
tes eqinas do leste e oeste (EEEV, WEEV) tam-
bm possuem certa delimitao geogrca, que
determinada pelas interaes do agente com seus
vetores e hospedeiros. Esses agentes, no entanto,
tm sido tambm detectados fora de seus nichos
ecolgicos originais, o que pode, eventualmente,
caracterizar uma expanso de sua abrangncia.
A restrio geogrca de muitas dessas vi-
roses pode possuir carter apenas circunstancial
e pode ser modicada ocasionalmente, acompa-
nhando alteraes ecolgicas ou epidemiolgi-
cas. A doena do Nilo Ocidental (WNV), causada
por um avivrus transmitido por insetos e cujos
hospedeiros naturais so vrias espcies de ps-
saros e outras aves silvestres, por exemplo, esta-
va historicamente restrita ao nordeste do conti-
nente africano, a alguns pases do Oriente Mdio
e europa mediterrnea (casos isolados). Intro-
duzida, em 1999, nos Estados Unidos, a infeco
pelo WNV rapidamente se disseminou e se tor-
nou endmica no pas e est avanando na dire-
o sul em pases da Amrica Central e Caribe.
Outro exemplo recente de expanso geogrca
foi o vrus da lngua azul (BTV), que atingiu re-
banhos ovinos da Holanda, Alemanha e Blgica,
em 2006, provavelmente a partir da frica, onde
a infeco endmica.
6.4 reas livres naturais
Algumas populaes de animais so natu-
ralmente livres de determinadas infeces vricas.
Essas populaes (ou as reas que habitam) so
ditas indenes sem relao doena e livres em rela-
o ao agente. Essas reas foram mantidas livres
do agente ao longo de dcadas, sobretudo, pela
existncia de barreiras naturais que dicultavam
a sua introduo. A Austrlia naturalmente in-
290 Captulo 10
dene raiva animal (silvestre e urbana) e febre
aftosa, condies favorecidas pela sua localizao
geogrca. O Chile manteve-se livre de febre af-
tosa durante dcadas, apesar da situao endmi-
ca da infeco na Amrica do Sul, tambm graas
cordilheira dos Andes, que serviu de barreira
natural contra a introduo do agente. Embora
muitas dessas reas tenham se mantido histori-
camente livres de doenas graas existncia de
barreiras naturais, a manuteno dessa condio,
nos ltimos anos, tambm deveu-se imposio
de barreiras articiais. A condio de rea livre
tambm pode ser meramente circunstancial, pois
o agente pode ser potencialmente introduzido a
partir de reas endmicas.
6.5 reas livres articiais
Vrios pases tm envidado esforos e con-
seguido erradicar viroses outrora endmicas em
seus rebanhos. O BLV, BoHV-1 e PRV foram erra-
dicados de alguns pases europeus; a febre aftosa
e a peste suna clssica (PSC) foram erradicadas
de grande parte do Brasil. Embora existam apenas
alguns relatos remotos de ocorrncia de casos, a
PSC e febre aftosa foram erradicadas dos EUA h
muitas dcadas. O PRV foi erradicado de vrios
pases europeus e recentemente da populao su-
na comercial dos EUA. Esforos de erradicao
de doenas vricas tm sido empreendidos por
vrios pases e, se bem-sucedidos, resultaro em
novas reas livres. As principais viroses-alvo de
programas de erradicao so aquelas sob regu-
lao internacional que restringe a movimenta-
o de animais e subprodutos.
7 Doenas vricas emergentes
As ltimas dcadas tm testemunhado o
surgimento e ressurgimento de vrias enfermi-
dades vricas em populaes humanas e animais.
As causas da emergncia de algumas dessas en-
fermidades j foram parcialmente esclarecidas
e parecem envolver diversos fatores que atuam
individualmente ou em conjunto. Em geral, a
emergncia/reemergncia de enfermidades v-
ricas est associada com: a) surgimento de um
novo vrus na populao ou espcie; b) muta-
o/variao gentica de um vrus j existente na
populao; c) alteraes ecolgicas que afetam as
interaes entre os hospedeiros, reservatrios e
vetores, ou d) ao do homem atravs dos siste-
mas de criao, manejo, transporte e comerciali-
zao/utilizao de animais.
O HIV surgiu na frica, entre 1940 e 1950,
provavelmente a partir de um vrus de primatas
no-humanos (simian immunodeciency virus, SIV).
Acredita-se que o SIV tenha sido transmitido de
macacos a pessoas pelo contato com o sangue ou
outros uidos corporais, proporcionado por pr-
ticas como caa, abate e alimentao. Aps atra-
vessar a barreira interespcies, o novo vrus foi
gradativamente se adaptando e disseminando na
populao humana. Atualmente o HIV est am-
plamente difundido na populao humana e re-
presenta um dos principais problemas de sade
pblica em todo o mundo, ou seja, a epidemia de
AIDS deveu-se ao surgimento de um novo vrus
na populao humana.
Outro exemplo de vrus que atravessou a
barreira entre espcies e alterou o seu espectro
de hospedeiros foi o parvovrus canino (CPV). O
CPV surgiu como patgeno de ces no nal dos
anos 1970, a partir de mutaes nas protenas
do capsdeo do parvovrus causador da panleu-
copenia felina (FLPV). Como conseqncia des-
sas alteraes genticas, o parvovrus teve a sua
gama de hospedeiros alterada, adquirindo a ha-
bilidade de infectar e causar doena em ces. Nos
anos que se seguiram ao surgimento desse novo
vrus na espcie canina, as cepas de parvovrus
eram altamente virulentas. Ao longo dos anos, no
entanto, as cepas de alta virulncia foram sendo
gradativamente substitudas na populao por
cepas menos virulentas, o que indica uma adap-
tao gradativa aos novos hospedeiros.
O vrus da encefalite eqina venezuelana
(VEEV), um alfavrus zoontico transmitido por
insetos, tem sido implicado em epidemias e epi-
zootias (em eqdeos) de grandes propores no
norte e noroeste da Amrica do Sul nas ltimas
dcadas. Esses eventos se repetem a intervalos
de aproximadamente 10 anos. No intervalo entre
os surtos, no h evidncia de atividade viral nas
populaes de eqinos ou de humanos, mas o v-
rus provavelmente permanea circulando no seu
ambiente natural, infectando pequenos mamfe-
ros silvestres. Os vrus que circulam nas popu-
laes silvestres nesses perodos denominados
enzoticos , embora capazes de infectar eqinos
e pessoas, produzem baixos nveis de viremia e
so virtualmente apatognicos para essas esp-
cies. Periodicamente esses vrus sofrem mutaes
que os tornam patognicos e capazes de produzir
altos nveis de viremia em eqinos. Esses vrus
denominados epizoticos so, ento, transmi-
tidos aos eqinos, nos quais so amplicados e
disseminados nessa espcie e tambm para hu-
manos, causando epidemias/epizootias de gran-
des propores. Os surtos peridicos de VEE so
exemplos da reemergngia de doenas devido a
mutaes/alteraes genticas de vrus preexis-
tentes no ecossistema.
O PRRSV foi inicialmente identicado como
patgeno de sunos no nal dos anos 1980, nos
EUA, e no incio dos anos 1990, na Europa. A hi-
ptese mais aceita que o agente tenha se origi-
nado de um vrus muito semelhante de roedores
(lactate dehidrogenase elevating virus, LDEV). O
LDEV teria sido transmitido de roedores para su-
deos silvestres na Europa h, aproximadamente,
um sculo. Posteriormente, teria sido transmitido
a sunos domsticos e introduzido nos EUA no
incio de sculo 20 pela importao de animais.
A partir da, o vrus teria evoludo na espcie
suna paralelamente nos dois continentes. Qual
a razo, ento, para o seu surgimento apenas
nos anos 1980-1990? A explicao mais plausvel
que, embora presente nesses pases h dcadas,
a grande disseminao teria apenas ocorrido nas
duas ltimas dcadas, por modicaes drsticas
nas prticas de manejo, comercializao, inter-
cmbio intensivo de reprodutores e uso indiscri-
minado da inseminao articial.
O coronavrus causador da SARS (SARS-
CoV) emergiu na sia, em 2003, como um vrus
novo na populao humana. O seu surgimento
parece ter envolvido a interao de fatores eco-
lgicos e virais. Estudos epidemiolgicos ini-
ciais indicavam as civetas (civet cats) pequenos
carvvoros silvestres domesticveis e utilizados
tambm para alimentao humana como pro-
vvel origem do agente. Estudos mais recentes,
no entanto, indicam uma espcie de morcego
(Rhinonophus sinicus) como provvel hospedeiro
natural do vrus. No obstante, a anlise loge-
ntica desse vrus sugere que eventos de mutao
ou recombinao, envolvendo coronavrus avi-
rios e de mamferos, tenham ocorrido no passa-
do. Aliado a fatores ambientais e culturais, esses
eventos genticos podem ter contribudo para a
capacidade do agente de infectar diferentes esp-
cies silvestres e, eventualmente, ser transmitido a
humanos. A transmisso a humanos foi seguida
de uma rpida disseminao no sudeste asiti-
co, extendendo-se para alguns pases europeus
e para o Canad pela movimentao de pessoas.
Felizmente as medidas prolticas adotadas fo-
ram capazes de restringir a disseminao e, even-
tualmente, resultaram no nal na epidemia.
Dois exemplos de doenas que emergiram
devido a alteraes ecolgicas foram as causadas
pelos vrus Nipah e Hendra. Esses vrus cruza-
ram a barreira interespcies e causaram doena
e mortalidade em animais e pessoas na Malsia
e Austrlia, respectivamente. O desmatamen-
to indiscriminado, seguido de queimadas nas
orestas da Malsia em 1997-1998, desalojou
populaes de morcegos frugvoros da espcie
Pteropus (conhecidos como raposas voadoras)
de seu habitat natural. Essas populaes foram,
ento, procurar abrigo e alimento em pomares
domsticos, alguns deles localizados em granjas
de sunos. Como conseqncia da proximida-
de, os sunos se infectaram ao ingerir restos de
frutas contaminadas com a saliva dos morcegos
infectados. O vrus Nipah se disseminou rapi-
damente em granjas com alta concentrao de
animais, contaminando e causando doena grave
em sunos e humanos. Evento similar ocorreu na
Austrlia em 1994-1995, quando eqinos foram
contaminados com outro morbilivrus, o vrus
Hendra, pelo contato com excreta e restos pla-
centrios de morcegos contaminados. Essa enfer-
midade foi mais restrita, mas atingiu e ocasionou
a morte de vrios eqinos e de algumas pessoas
que tinham contato com esses animais. O vrus
da febre do Vale Rift (RVFV), um vrus buniav-
rus zoontico transmitido por insetos, tambm
tem sido associado com eventos epidmicos de
propores considerveis em humanos e animais
domsticos em alguns pases da frica. Um des-
292 Captulo 10
ses eventos foi associado com a abertura de uma
grande represa no Egito, seguida de enchentes e
alagamentos. Essas condies propiciaram uma
proliferao rpida e abundante de insetos e a
conseqente disponibilidade de vetores para a
transmisso do agente.
O WNV emergiu na Amrica do Norte no
ano de 1999, inicialmente produzindo doena e
mortalidade em aves silvestres (corvos, pardais)
e de zoolgicos, acompanhada de alguns casos de
doena humana. At ento, a infeco pelo WNV
estava restrita ao nordeste do continente africa-
no e a alguns pases do Oriente Mdio e Europa
mediterrnea. Nesses locais, a infeco ocorria
sob a forma de surtos restritos geogracamente e
atingindo um nmero limitado de pessoas e/ou
de animais. O vrus provavelmente foi introdu-
zido no continente americano pelo movimento
migratrio de aves a partir da frica (aves silves-
tres so os seus hospedeiros naturais), importa-
o ilegal de aves ornamentais contaminadas ou
pelo transporte de mosquitos contaminados em
navios e/ou avies. Aps a introduo, o WNV
encontrou condies ecolgicas e rapidamente
se disseminou nos EUA, ocasionando doena em
aves (mais de 150 espcies de pssaros e outras
aves so naturalmente susceptveis), humanos
(aproximadamente 700 mortes at meados de
2007) e em animais domsticos (mais de 25 mil
casos em eqinos at julho de 2007). A infeco
em humanos tem assumido caractersticas at
ento no relatadas, como ocorrncia espordica
de transmisso transplacentria e neonatal, alm
de transmisso por transfuso sangnea e trans-
plante de rgos. O vrus j foi detectado em al-
guns pases da Amrica Central e, recentemente,
foi detectado na Colmbia (2004-2005) e Argenti-
na (2006).
So vrios os exemplos de doenas vricas
emergentes de animais domsticos e humanos
cujos agentes se originaram de animais silves-
tres. O caminho inverso, ou seja, transmisso
de agentes vricos de animais domsticos para
espcies silvestres, embora menos freqente,
tambm tem sido bem documentada. O vrus da
cinomose (CDV), um morbilivrus canino, tem
sido freqentemente associado com eventos de
doena em animais silvestres. O vrus foi asso-
ciado com surtos de alta mortalidade em focas
(>10.000) e outros mamferos nos mares Mediter-
rneo e Cspio no incio do sculo 21, e no lago
Baikal, Rssia, em 1997/1998. O CDV tambm
foi associado com mortalidade de lees e hienas
em uma reserva natural da Tanznia, e tem sido
esporadicamente isolado de doena em mos-pe-
ladas (racoons), feldeos e outros animais silves-
tres de vida livre ou de zoolgicos. Um estudo
retrospectivo demonstrou antgenos do CDV em
amostras de, aproximadamente, 50% dos lees e
tigres que morreram entre 1972 e 1992 em zool-
gicos da Sua.
O vrus da inuenza A de aves (H5N1), pro-
vavelmente por meio de mutaes sucessivas e
adaptao gradativa, tornou-se virulento para
aves domsticas e silvestres e infeccioso para hu-
manos, causando centenas de mortes na sia a
partir de 1997. Durante esse surto, dois tigres e
dois leopardos de zoolgicos da Tailndia foram
infectados com o H5N1 e morreram. A reemer-
gncia do H5N1 a partir de 2004 tem resultado
em uma disseminao maior, atingindo aves sil-
vestres e domsticas e pessoas de pases da sia,
Oriente Mdio e Leste Europeu. Esse vrus est
sendo considerado o candidato mais provvel e
temido a causar uma pandemia de gripe na popu-
lao humana nos prximos anos.
provvel que o surgimento e ressurgimen-
to de enfermidades vricas continuem a ocorrer
com o decorrer do tempo em razo de alteraes
ecolgico-ambientais, modernizao de sistemas
de manejo, produo e reproduo e tambm
por causa da evoluo natural (mutao + sele-
o) desses agentes. O exemplo mais recente foi a
transmisso de um vrus da inuenza (H3N8) de
eqinos para ces nos Estados Unidos em 2004.
Relatos iniciais indicaram que o novo vrus est
se disseminando ecientemente da populao de
ces de carreira naquele pas. A recente transmis-
so do vrus da inuenza para feldeos domsti-
cos (gatos) e selvagens cativos (tigres e leopardos)
tambm se constituiu em um evento inusitado.
Para vrios vrus, a linha que delimita o seu
espectro de hospedeiros parece ser mais epide-
miolgica do que biolgica, ou seja, a restrio
de alguns agentes aos seus hospedeiros natu-
rais ocorreria mais por falta de oportunidade de
transmisso do que pela sua incapacidade de in-
fectar outras espcies. Nesses casos, a barreira in-
terespcies seria circunstancial e tnue e, por isso,
potencialmente temporria. Exemplos de agentes
virais que ultrapassam a barreira entre espcies
e se tornam capazes de infectar novos hospedei-
ros tm sido cada vez mais freqentes. Nesse
sentido, acredita-se que mais de 70% das viroses
emergentes em humanos teve origem zoontica,
tendo sido adquirida de animais em um passa-
do mais ou menos recente. De especial interesse
para a sade humana e animal a imensurvel
gama de agentes infecciosos existentes em ani-
mais silvestres. A histria recente tem demons-
trado que essa gama freqentemente contempla
populaes humanas e de animais domsticos
com novos vrus potencialmente patognicos.
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DIAGNSTICO LABORATORIAL
DAS INFECES VRICAS
11
1 Introduo
2 Aplicaes do diagnstico virolgico
3 Propriedades das tcnicas diagnsticas
4 Mtodos de diagnstico
4.1 Mtodos diretos
4.1.1 Microscopia eletrnica
4.1.2 Isolamento e identicao
4.1.3 Hemaglutinao e inibio da hemaglutinao
4.1.4 Deteco de antgenos
4.1.5 Deteco de cidos nuclicos
4.2 Mtodos indiretos diagnstico sorolgico
4.2.2 Soro-neutralizao
4.2.3 Inibio da hemaglutinao
4.2.4 ELISA
4.2.5 Imunouorescncia/imunoperoxidase
4.2.6 Imunoblots
4.2.7 Fixao do complemento
4.2.8 Outras tcnicas sorolgicas
5 Coleta e remessa de material
5.1 Eleio do material a ser coletado
5.2 Cuidados na coleta e acondicionamento
5.3 Conservao e remessa
5.4 Histrico
5.5 Fluxograma dos procedimentos de diagnstico
5.6 Processamento das amostras
5.7 Interpretao dos resultados
297
298
299
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323
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325
326
1 Introduo
A elaborao do diagnstico laboratorial das
infeces vricas animais depende de aes coor-
denadas do veterinrio de campo e dos tcnicos
de laboratrio. Os resultados dos testes laborato-
riais, isoladamente, possuem pouco signicado
se no forem interpretados luz de conhecimen-
tos de epidemiologia, patogenia e imunologia
das doenas. Por isso, o diagnstico laboratorial
contribui com uma parte das informaes neces-
srias soluo do problema sanitrio sob inves-
tigao. A outra parte, necessariamente, deve ser
provida pelos tcnicos encarregados da investi-
gao clnico-patolgica e epidemiolgica; e da
coleta e remessa do material.
A coleta e acondicionamento adequados do
material a ser examinado so crticos para o su-
cesso do diagnstico laboratorial. Se as tcnicas
laboratoriais j apresentam diculdades intrnse-
cas, a sua realizao com material em condies
imprprias diculta a realizao das tcnicas
e reduz a probabilidade de obter o diagnsti-
co correto. Por essa razo, amostras cuja coleta
e acondicionamento tenham sido inadequados
possuem um valor limitado para a realizao do
diagnstico.
O material para exame deve ser acompanha-
do de um histrico clnico e epidemiolgico deta-
lhado. O histrico importante para a formulao
de hipteses sobre os possveis determinantes da
doena e para o planejamento e direcionamento
das tcnicas e reagentes a serem empregados. Ou
seja, grande parte da estratgia laboratorial de
diagnstico depende das informaes que acom-
panham a amostra.
A elaborao do diagnstico pode ser com-
parada com a montagem de um quebra-cabea.
As informaes clnicas, patolgicas e epidemio-
lgicas colhidas a campo se constituem em parte
das peas; e as informaes obtidas com a reali-
zao das tcnicas laboratoriais representam as
peas restantes. Essa analogia ilustra bem a im-
portncia dos diferentes componentes do intrin-
cado complexo de informaes necessrias para
a elucidao dos fatores que levam ocorrncia
das doenas.
O nmero de agentes virais que causam do-
enas de importncia sanitria e econmica em
animais muito grande. Isso torna virtualmente
impossvel que um nico laboratrio disponha
de tcnicas, reagentes e pessoal capacitado para
o diagnstico de todas as viroses. Por isso, existe
uma tendncia de laboratrios se especializarem
em viroses de determinadas espcies animais.
Esse direcionamento , em grande parte, deter-
minado pela demanda de servios na sua regio
de abrangncia.
Durante a realizao do diagnstico, deve-se
considerar que agentes diferentes podem causar
doenas semelhantes e que a elaborao do diag-
nstico deve, necessariamente, considerar outros
patgenos, tais como: bactrias, fungos e proto-
zorios. Por isso, o encaminhamento do material
para exame deve contemplar tambm as outras
reas da microbiologia.
Embora as tcnicas clssicas de diagnstico
virolgico (isolamento, microscopia eletrnica)
continuem sendo utilizadas, a crescente deman-
da por diagnstico em nvel populacional tem
impulsionado o desenvolvimento de tcnicas
rpidas, sensveis e automatizveis. O diagns-
tico de um evento de doena determina, muitas
vezes, as medidas de controle a serem adotadas.
Nesses casos, a rapidez na obteno dos resulta-
dos pode ser crtica para o sucesso da estratgia
escolhida.
O desenvolvimento de kits diagnsticos
para uso em clnicas e consultrios de peque-
nos animais tem auxiliado a difundir e popula-
rizar o diagnstico virolgico como uma prtica
necessria para um adequado direcionamento
da conduta do mdico veterinrio. Da mesma
forma, tcnicas de baixo custo e que podem ser
automatizadas para uso em animais de interesse
econmico tm sido incorporadas ao arsenal de
tcnicas j disponveis. As tcnicas moleculares
tambm tm contribudo para a realizao de
diagnsticos mais rpidos, seguros e conveis,
embora a utilizao dessas tcnicas ainda no es-
teja amplamente difundida.
A seguir sero abordados os aspectos gerais
do diagnstico laboratorial de infeces vricas,
com enfoque para a aplicao das tcnicas com
298 Captulo 11
ns diagnsticos. A descrio detalhada das tc-
nicas aqui abordadas foi apresentada no Captulo
3, e a sua aplicao no diagnstico individual das
doenas ser abordada nos captulos especcos.
2 Aplicaes do diagnstico
virolgico
O diagnstico laboratorial de infeces vri-
cas possui aplicaes muito mais amplas e abran-
gentes do que a de suporte investigao clnica.
Mesmo em enfermidades que possam ser diag-
nosticadas clinicamente e/ou com auxlio da his-
topatologia, a conrmao da etiologia por mto-
dos virolgicos e/ou sorolgicos recomendvel
e, em muitos casos, imprescindvel.
A investigao clnica e epidemiolgica de
eventos de doena em indivduos ou em popula-
es freqentemente requer a complementao ou
conrmao por tcnicas laboratoriais. As varia-
es na apresentao clnica das viroses, a ocorrn-
cia de sndromes distintas associadas com o mes-
mo agente ou, ainda, a ocorrncia de manifestaes
clnicas semelhantes produzidas por diferentes
vrus, fazem dos testes laboratoriais importantes
recursos auxiliares ao diagnstico clnico. Alm
disso, as infeces vricas freqentemente cursam
sem sinais clnicos perceptveis ou com sinais ines-
peccos, tornando a conrmao laboratorial um
requisito essencial para o seu diagnstico.
Criaes em diferentes nveis (propriedades,
regies, pases e continentes) tm empregado esfor-
os para erradicar e/ou evitar a introduo de do-
enas vricas de importncia sanitria estratgica,
como a febre aftosa, peste suna clssica e africana,
doena de Aujeszky, inuenza aviria, entre ou-
tras. Nesses casos, a existncia de um sistema inte-
grado e gil de monitoramento, capaz de detectar e
identicar esses agentes rapidamente, constitui-se
em uma ferramenta essencial para a manuteno
da condio sanitria dessas criaes.
As zoonoses vricas, como a raiva, inuen-
za H5N1, hantavirose, febres hemorrgicas, febre
amarela, encefalomielites eqinas, doena do Nilo
Ocidental, entre outras, possuem grande importn-
cia em sade pblica, o que justica a manuteno
de sistemas integrados e contnuos de vigilncia
e diagnstico nas regies endmicas ou de risco.
O monitoramento constante da evoluo gentica
dos vrus da inuenza, que infectam aves aquti-
cas e migratrias, tem fornecido informaes im-
portantes sobre o potencial zoontico desses vrus
e tambm tem direcionado a elaborao de vacinas
e a adoo de medidas preventivas. O acompanha-
mento da histria natural de outros vrus zoon-
ticos, como o coronavrus causador da SARS, o
vrus ebola e os paramixovrus Nipah, Menangle
e Hendra tambm se baseia na disponibilidade de
mtodos virolgicos de diagnstico.
A comercializao, especialmente interna-
cional, de animais de interesse econmico geral-
mente requer a certicao de que esses animais
so livres de infeces persistentes ou latentes,
como as infeces pelo vrus da leucose bovina
(BLV), herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1), vrus
da lngua azul (BTV), vrus da doena de Au-
jeszky (PRV), vrus da anemia infecciosa eqina
(EIAV), entre outras. O mesmo ocorre com ani-
mais enviados a feiras, exposies, centrais de
coleta de smen e hipdromos. Em reas end-
micas, o mais comum que as propriedades que
comercializem reprodutores erradiquem essas
infeces e obtenham a certicao ocial. Para
isso, necessrio um sistema de diagnstico efe-
tivo, capaz de identicar os animais infectados e
certicar as propriedades ou reas livres do agen-
te. Da mesma forma, os reprodutores e/ou smen
destinados comercializao devem ser testados
e certicados livres de determinados agentes.
Em infeces por retrovrus (BLV, EIAV,
vrus da artrite e encefalite caprina [CAEV]) e
por herpesvrus (BoHV-1/5, PRV), entre outras,
possvel reduzir gradativamente a prevalncia
da infeco e, eventualmente, erradicar o agente
atravs de programas de identicao e remoo
dos animais soropositivos. Para isso, necessrio
um sistema efetivo e sistemtico de diagnstico,
aliado a polticas pblicas ou privadas que viabi-
lizem o descarte dos animais e a indenizao dos
proprietrios, medidas freqentemente adotadas
nesses programas.
O estabelecimento de programas de sani-
dade animal depende do conhecimento das en-
fermidades prevalentes em uma determinada
regio. Portanto, estudos epidemiolgicos para
Diagnstico laboratorial das infeces vricas 299
determinar a ocorrncia, prevalncia e distribui-
o de enfermidades vricas especcas so fre-
qentemente realizados e utilizam testes diag-
nsticos, principalmente testes sorolgicos.
A deciso de se adotar medidas de controle
e/ou erradicao de doenas vricas depende do
conhecimento prvio sobre a situao da respec-
tiva infeco na populao. Este conhecimento
pode ser obtido por estudos soro-epidemiolgi-
cos que fazem parte de um estudo descritivo ini-
cial, denominado diagnstico de situao. A toma-
da de decises, a natureza das medidas adotadas
e avaliaes peridicas do andamento e sucesso
de programas de controle tambm dependem
dos resultados obtidos em testes diagnsticos.
As aplicaes do diagnstico virolgico la-
boratorial so amplas e abrangentes e contem-
plam desde investigaes clnicas em nvel indi-
vidual at programas de controle e erradicao
de doenas em nvel nacional ou continental. Por
essa razo, as tcnicas de diagnstico esto sob
contnuo aperfeioamento para contemplar os
diferentes graus de exigncia. Novas tcnicas e
variaes de tcnicas j existentes so relatadas
continuamente em publicaes especializadas e
muitas delas acabam sendo incorporadas ao ar-
senal de tcnicas disponveis para o diagnstico
de viroses animais.

3 Propriedades das tcnicas
diagnsticas
A aplicao de uma determinada tcnica la-
boratorial em diagnstico requer o preenchimen-
to de alguns requisitos bsicos. A tcnica deve
possuir predicados como sensibilidade, especi-
cidade, rapidez, simplicidade (ou praticidade),
reprodutibilidade, automatizao e custo baixo
(Figura 11.1). Sensibilidade refere-se capacidade
da tcnica de detectar quantidades mnimas do
agente ou de seus produtos. Como freqentemen-
te a quantidade de vrus (ou antgenos) presente
nas amostras clnicas muito pequena, as tcni-
cas devem ser sucientemente sensveis para de-
tect-los. Em nvel populacional, a sensibilidade
se refere capacidade de deteco de um nmero
maior ou menor dos indivduos que so realmen-
te positivos. Especicidade refere-se capacidade
da tcnica de identicar um determinado vrus e,
simultaneamente, distingui-lo de outros agentes,
mesmo que sejam muito semelhantes. A rapidez
de obteno do diagnstico essencial, pois, mui-
tas vezes, o resultado determina as medidas a se-
rem adotadas. A conabilidade de qualquer teste
diagnstico depende tambm da sua repetibilida-
de (ou reprodutibilidade), ou seja, da consistn-
cia dos resultados obtidos pela repetio de sua
execuo. Para possurem utilizao na rotina, as
tcnicas devem tambm ser simples e prticas de
executar, de preferncia automatizveis para pos-
sibilitar o teste simultneo de um grande nmero
de amostras. Alm disso, devem apresentar um
custo baixo, sobretudo, para o diagnstico de en-
fermidades de animais de interesse econmico e,
quando necessrio, o teste de um nmero grande
de amostras.
Tcnica
diagnstica
Sensibilidade
Especificidade
Repetibilidade
Custo baixo
Rapidez
Praticidade
Capacidade de
Automatizao
Simplicidade
Figura 11.1. Propriedades desejveis nos testes diagnsticos.
4 Mtodos de diagnstico
Os mtodos de diagnstico virolgico po-
dem ser classicados em diretos e indiretos. Os
mtodos diretos so utilizados para detectar o v-
rus, antgenos ou cidos nuclicos virais. A detec-
o pode ser realizada diretamente em amostras
clnicas ou aps a multiplicao do agente em
cultivos celulares, ovos embrionados ou animais
susceptveis. Os mtodos indiretos detectam anti-
corpos especcos contra o vrus, isto , detectam
a resposta do hospedeiro infeco e, por isso, a
sua denominao.
300 Captulo 11
Dentre as tcnicas diretas, destaca-se a mi-
croscopia eletrnica (ME) que permite a visuali-
zao de partculas vricas diretamente no ma-
terial clnico ou aps a multiplicao do agente
em cultivo celular. Esse mtodo rpido e per-
mite a identicao de partculas vricas viveis
e tambm inviveis. No entanto, a tcnica exige
equipamento caro e pessoal altamente treinado,
aplicvel somente a alguns vrus e no possui
boa sensibilidade.
O isolamento em cultivo celular (ICC) per-
manece sendo o mtodo mais utilizado para in-
vestigar a presena de vrus em material clnico.
Aps a multiplicao em clulas de cultivo, o v-
rus pode ser identicado pela produo de efeito
citoptico (ECP) caracterstico ou pela deteco
de antgenos ou cidos nuclicos nas clulas in-
fectadas, ou, ainda, por neutralizao com soro
imune especco. O ICC um dos mtodos mais
sensveis de deteco de vrus, porm a demora
na obteno dos resultados se constitui na sua
principal restrio em relao a outros mtodos.
Uma das vantagens do mtodo a obteno do
vrus vivel, o que permite a sua caracterizao e
estudos posteriores.
A inoculao de ovos embrionados (OE) ou de
animais susceptveis j foi amplamente utilizada
para o diagnstico e deteco de vrus. No en-
tanto, atualmente esse mtodo possui aplicao
restrita a poucos vrus e a algumas situaes es-
peccas. Mtodos que se utilizam da capacidade
hemaglutinante (hemaglutinao) ou hemadsor-
vente (hemadsoro) de alguns vrus tambm tm
sido utilizados em diagnstico virolgico, porm
so aplicveis somente a um grupo restrito de
agentes.
A deteco de antgenos virais pelo uso de an-
ticorpos especcos um dos mtodos mais utili-
zados para a deteco e identicao de vrus. A
deteco pode ser realizada em amostras clnicas
(secrees, smen, sangue, urina, fezes etc.), te-
cidos (obtidos por bipsia ou necropsia) ou em
clulas de cultivo aps a multiplicao do agente.
As tcnicas de imunouorescncia (IFA) e imuno-
peroxidase (IPX) tm sido amplamente utilizadas
em diagnstico, sobretudo, pela boa sensibili-
dade, especicidade, rapidez, custo baixo e fa-
cilidade de execuo. O desenvolvimento de kits
diagnsticos para uso em consultrios, clnicas
veterinrias ou mesmo a campo popularizaram
essas tcnicas e ampliaram o seu uso. A deteco
de antgenos atravs de mtodos imunoenzim-
ticos (ELISA), imunocromatogrcos e imunoblot
(Western/dot blot) tambm tem se popularizado
ultimamente e somaram-se IFA e IPX como tc-
nicas importantes de diagnstico.
Nas ltimas dcadas, o desenvolvimento de
tcnicas moleculares contribuiu de forma notvel
para o diagnstico de enfermidades infecciosas.
Tcnicas de deteco de cidos nuclicos atravs
de hibridizao (Southern, Northern, dot/slot blot) e
reao da polimerase em cadeia (PCR) so mui-
to sensveis e especcas, permitindo uma iden-
ticao rpida e segura do cido nuclico viral
em amostras clnicas. A substituio dos isto-
pos radioativos por substncias no-radioativas
para a marcao das sondas moleculares tambm
contribuiu para a popularizao e difuso dessas
tcnicas. A adaptao da PCR para o diagnstico
rpido a campo (PCR em tempo real) ampliou as
perspectivas para o diagnstico aplicado inves-
tigao de infeces vricas de importncia sani-
tria estratgica. Os mtodos diretos de diagns-
tico virolgico esto apresentados na Figura 11.2
Tecidos
Secrees
Excrees
Isolamento
e identificao
Microscopia
eletrnica
Hemaglutinao
Pesquisa de
antgenos
Pesquisa de
cidos nuclicos
Figura 11.2. Mtodos de deteco de vrus ou produtos
virais emamostras clnicas.
A deteco de anticorpos antivirais no soro
ou em secrees (leite, colostro) tambm ampla-
mente utilizada em tcnicas de diagnstico. Esse
procedimento se constitui em mtodo indireto,
pois detecta os produtos da reao do organismo
animal contra o agente. As tcnicas de deteco
de anticorpos, tambm chamadas de testes sorol-
gicos, possuem aplicao ampla em estudos epi-
demiolgicos, sobretudo, quando o objetivo a
determinao da prevalncia e distribuio de in-
feces vricas em populaes. Dentre as tcnicas
sorolgicas, destacam-se a imunodifuso em gel
de gar (IDGA), ELISA, soroneutralizao (SN),
xao do complemento (FC) e inibio da hema-
glutinao (HI).
O signicado da sorologia para o diagnsti-
co varia de acordo com a biologia de cada vrus.
Por isso, os resultados dos exames sorolgicos
devem ser interpretados luz dos conhecimen-
tos sobre a biologia e epidemiologia do agente e
da resposta imunolgica do hospedeiro. Detalhes
sobre a interpretao dos resultados de exames
sorolgicos para diferentes vrus sero aborda-
dos na seo 4.2.
Os principais mtodos diretos e indiretos de
diagnstico, com o seu princpio, propriedades,
restries e aplicaes esto apresentados nas Ta-
belas 11.1 e 11.2, respectivamente.
Mtodo Aplicaes
Microscopia
eletrnica
Rpida (poucas horas);
Detecta vrions viveis e
inviveis;
til para vrus que no
replicam em cultivo;
Pode permitir a
identificao do agente.
Princpio Propriedades Restries
Visualizao das
partculas vricas
coradas com metais
pesados em um
microscpio
Equipamento caro;
Exige pessoal
treinado;
Baixa sensibilidade;
Aplicao restrita a
alguns vrus.
Infeces entricas
(rotavrus, coronavrus,
astrovrus);
Infeces cutneas
(poxvrus, herpesvrus).
Isolamento em
cultivo celular
Sensvel;
O agente fica disponvel
para estudos posteriores;
Implementao e
execuo relativamente
simples.
Observao do efeito
citoptico e/ou deteco
de produtos virais aps
a sua multiplicao em
clulas de cultivo.
Demorado (at semanas);
No aplicvel a alguns
vrus;
Somente detecta vrus
que estejam viveis;
Contaminao bacteriana
e fngica;
Contaminao com vrus
adventcios.
Todos os vrus que
replicam em cultivos
celulares;
Qualquer material clnico
pode ser submetido ao
isolamento.
Hemaglutinao
(HA)
Rpida;
Boa sensibilidade;
Boa especificidade;
Fcil execuo.
Observao da
capacidade do vrus de
aglutinar eritrcitos.
Aplicvel ao um grupo
restrito de vrus;
Hemaglutinao
inespecfica;
Necessidade de
espcies doadoras de
hemcias;
No automatizvel.
Aplicvel aos vrus
hemaglutinantes de aves e
mamferos (ver tabela no
captulo 3);
Fluidos corporais,
de tecidos. suspenses
Rpida (minutos ou
poucas horas);
Simples, baixo custo;
Boa sensibilidade e
especificidade;
Detecta tambm vrus
invivel;
Pode informar sobre
sorotipos;
Disponvel em kits;
Aplicvel a virtualmente
todos os vrus.
Protenas virais so
detectadas por
anticorpos especficos
conjugados com um
marcador fluorescente
(IFA) ou com uma
enzima (IPX).
Equipamento caro (IFA);
Reaes inespecficas
(uso de anticorpos
policlonais);
Reagentes para alguns
vrus podem no ser
disponveis.
Aplicvel a qualquer vrus
para o qual se disponha de
anticorpos especficos;
Materiais: tecidos
(frescos, congelados,
fixados), esfregaos
(sangneos, de secrees),
clulas de cultivo.
Imunofluorescn-
cia (IFA).
Imunoperoxidase
(IPX).
Simples e prtica;
Disponvel em kits;
Rpida;
Boa sensibilidade e
especificidade.
A presena do antgeno
que reage com o
anticorpo especfico
imobilizado ou aps
migrao, revelada
pela mudana de cor.
No automatizvel;
Especificidade e
sensibilidade podem
deixar a desejar;
Custo alto por amostra.
Aplicvel a vrios vrus de
pequenos animais;
Kits disponveis para uso
em clnicas;
Tambm para alguns vrus
de aves, sunos e bovinos.
Testes imunoenzi-
mticos/cromatogr
ficos
Especfica;
Sensvel;
Necessita quantidades
mnimas da amostra;
Potencialmente aplicvel
a todos os vrus;
Rpida (PCR);
Automatizvel (PCR).
cidos nuclicos (RNA,
DNA) do vrus so
detectados por sondas
marcadas (hibridizao)
ou aps amplificao por
reaes enzimticas
(PCR).
Custo alto;
Requer equipamento
e pessoal treinado;
Tcnica sofisticada.
Aplicvel a virtualmente
todos os vrus conhecidos;
Pode ser realizada em
qualquer amostra clnica.
Deteco de
cidos nuclicos
(PCR,
hibridizao).
Tabela11.1. Princpios, propriedades e restries dos principais mtodos diretos dediagnsticovirolgico
302 Captulo 11
4.1 Mtodos diretos
4.1.1 Microscopia eletrnica
A tcnica de microscopia eletrnica (ME)
permite a visualizao das partculas vricas em
material clnico ou aps a sua amplicao em
cultivo celular (Figura 11.3). A simples observa-
o das caractersticas morfolgicas dos vrions
(morfologia, dimetro, estrutura do capsdeo e
envelope), aliada com a sua distribuio no ma-
terial examinado (ncleo ou citoplasma), permi-
te, algumas vezes, a identicao denitiva do
agente. Por isso, a ME constitui-se em um dos
mtodos mais notveis de diagnstico de infec-
es vricas. O mtodo particularmente til
para infeces entricas (rotavrus, coronavrus,
Mtodo Aplicaes
Imunodifuso
em gar (IDGA)
Simples execuo e
implementao;
Custo baixo;
Sensibilidade razovel;
Resultados em 24-72 h.
Princpio Propriedades Restries
Observao de linhas
de precipitao no
gar, produzidas pela
formao de
complexos antgeno-
anticorpos.
Reaes inespecficas
freqentes;
Sensibilidade limitada;
Qualidade do antgeno
crtica;
Somente qualitativa (no
permite a quantificao dos
anticorpos).
- Anemia infecciosa eqina,
lngua azul, leucose
enzotica bovina.
Soroneutralizao
(SN)
Sensvel;
Especfica;
Custo reduzido;
Qualitativa (sim/no) e
quantitativa (ttulo de
anticorpos);
Similar neutralizao
.
in
vivo
Anticorpos presentes
no soro previnem a
replicao do vrus e a
produo de efeito
citoptico nos cultivos.
Exige cultivos celulares;
Implementao/execuo
podem ser problemticas;
Contaminao bacteriana;
Toxicidade do soro;
Detecta somente
anticorpos neutralizantes.
Virtualmente todos os
vrus que replicam em
cultivo celular.
ELISA Rpida (2-3 h);
Sensvel;
Especfica;
Automatizvel;
Disponvel em kits;
Pode detectar classes
especficas (IgG, IgM etc.).
Anticorpos presentes no
soro ligam-se aos
antgenos imobilizados
em placas de poliestireno
e so detectados por
anti-anticorpos
conjugados com
enzimas.
Requer equipamento;
Kits comerciais podem
ter custo alto;
No disponvel para
todos os vrus;
Qualidade do antgeno
crtica.
Utilizada para inmeros
vrus;
Pode ser qualitativa e
quantitativa;
Utilizada para detectar
anticorpos totais ou
classes especficas no
soro ou secrees (leite);
Variaes da tcnica
so disponveis para a
deteco de antgenos.
Inibio da
hemaglutinao
(HI).
Rpida;
Sensvel;
Especfica;
Custo baixo.
Anticorpos antivirais
impedem a atividade
hemaglutinante do vrus.
Somente aplicvel a
vrus hemaglutinantes;
Requer animais
doadores de eritrcitos;
Inibidores inespecficos
podem dar falso positivo;
No-automatizvel.
Vrus
hemaglutinantes de
aves e mamferos (ver
tabela captulo 3).
Fixao do
Complemento.
Boa sensibilidade e
especificidade.
A presena de anticorpos
leva ativao do
complemento e lise de
eritrcitos.
Demorada;
Trabalhosa;
No automatizvel;
Requer animais doadores
de eritrcitos.
J foi muito usada para
vrios vrus, atualmente
est em desuso.
Imunofluorescn-
cia (IFA) para
anticorpos.
Rpida;
Boa sensibilidade;
Simples.
Anticorpos presentes no
soro se ligam em
antgenos especficos
imobilizados e so
detectados por anticorpos
marcados com FITC.
Reaes inespecficas;
Exige microscpio de UV;
Pode no detectar nveis
baixos de anticorpos;
No automatizvel.
J foi usada para vrios
vrus;
Uso atual restrito a
alguns vrus.
Imunocromatografia Simples e prtica;
Disponvel em kits;
Rpida;
Boa sensibilidade e
especificidade.
A presena do anticorpo
que reage com o antgeno
revelada pela mudana
de cor.
No automatizvel;
Especificidade e
sensibilidade podem deixar
a desejar;
Custo individual alto.
Aplicvel a vrios vrus
de pequenos animais;
Kits disponveis para uso
em clnicas;
Tambm para alguns
vrus de aves, sunos e
bovinos.
Tabela11.2. Princpios, propriedades e restries dos principais mtodos indiretos dediagnsticovirolgico
astrovrus), cutneas (poxvrus, herpesvrus) e
tambm para a identicao de vrus de difcil
multiplicao em cultivo celular (torovrus, he-
padnavrus, circovrus, alguns adenovrus, astro-
vrus, coronavrus e rotavrus).
O dimetro, a morfologia dos vrions e deta-
lhes da sua superfcie so os aspectos principais
observados no diagnstico por ME. Essas carac-
tersticas variam muito entre as famlias de vrus,
mas so pouco variveis entre vrus de um mes-
Figura 11.3. Fotos de microscopia eletrnica de material enviado para diagnstico virolgico. A) Bipsia de pele de
glndula mamria de vacas commamilite. Partculas tpicas de herpesvrus (setas) (magnificao 60.000x); B) Clulas
de cultivo inoculadas com macerado de crebro de bezerros com doena neurolgica. Partculas vricas envelopadas
tpicas de herpesvrus (42.000x); C) Crostas na juno mucocutnea oral de ovinos com doena vesicular-crostosa.
Partculas tpicas de parapoxvrus (100.000x). D) Fezes de bezerro com diarria. Partcula de 75-80 nm semelhante a
rotavrus (75.000x); E) Fezes de bezerro comdiarria. Partcula envelopada comaproximadamente 80 nm, sugestiva de
coronavrus (120.000x). E) Sobrenadante de cultivo inoculado com secrees nasais de bezerros com doena
respiratria. Partculaenvelopada semelhantea herpesvrus (260.000x).
C
B
E
A
D
F
304 Captulo 11
mo gnero ou espcie. No entanto, alguns vrus
so de difcil visualizao e deteco atravs da
ME, devido a sua morfologia pouco denida (po-
dendo ser confundidos com estruturas celulares)
ou pela baixa concentrao de partculas vricas
no material. Isso faz com que a ME no possua
aplicabilidade universal.
Dentre as amostras clnicas mais comumen-
te submetidas ME esto o material fecal (fezes
ou contedo intestinal), uidos ou escaras de le-
ses cutneas ou mucosas, tecidos coletados na
necropsia, clulas ou sobrenadante de cultivos
previamente inoculadas com o material suspeito.
A realizao de ME em tecidos de animais infec-
tados tambm pode indicar o local da clula onde
ocorre a replicao do vrus, podendo fornecer
informaes sobre a patogenia dessas infeces.
Quando a concentrao mnima requerida para a
visualizao das partculas no atingida (apro-
ximadamente 10
6
partculas virais por mL de ui-
do ou por grama do material), pode-se realizar a
ultracentrifugao do material para concentrar os
vrions. O uso de anticorpos especcos conjuga-
dos com micropartculas de ouro (tcnica de im-
munogold) aumenta a probabilidade de deteco e
visualizao do agente. Como a ME requer gran-
de quantidade de vrus para poder detect-lo,
resultados negativos nessa tcnica no indicam
necessariamente a ausncia de vrus na amostra.
Dentre as propriedades deste mtodo desta-
cam-se a rapidez de execuo, a possibilidade de
reconhecimento da morfologia viral (s vezes, a
identicao da famlia e espcie do vrus) e a pos-
sibilidade de deteco de vrus viveis e tambm
aqueles que eventualmente j estejam inviveis
no material submetido. A ME tambm muito
til para detectar vrus que no replicam ecien-
temente em cultivo celular. As maiores restries
referem-se a sua baixa sensibilidade, aplicabili-
dade restrita a alguns vrus, equipamento caro
e necessidade de pessoal altamente treinado. A
Figura 11.3 apresenta fotograas de ME obtidas
pelo exame de amostras clnicas e cultivos celula-
res inoculados com o material suspeito.
4.1.2 Isolamento e identicao
Apesar do desenvolvimento de tcnicas mo-
dernas e sosticadas de diagnstico, a identica-
o de vrus, aps o seu isolamento em cultivo
celular, continua sendo o mtodo direto mais
utilizado em diagnstico virolgico. Tambm
o mtodo mais fascinante utilizado em Virolo-
gia, pois permite a obteno do agente vivel
para estudos posteriores. O isolamento em ovos
embrionados somente aplicvel para alguns
vrus; j o isolamento em animais de laboratrio
encontra-se atualmente em desuso e possui apli-
cao muito restrita.
4.1.2.1 Isolamento em cultivo
celular
Como os vrions freqentemente esto pre-
sentes em pequenas quantidades no material cl-
nico, a inoculao em clulas susceptveis permite
a sua multiplicao para posterior identicao.
Alm do uso em diagnstico, a multiplicao de
vrus em cultivos celulares muito utilizada com
diversas nalidades em laboratrios de virolo-
gia, ou seja, os cultivos celulares so instrumen-
tos indispensveis prtica virolgica. A maior
restrio para a utilizao do isolamento com ns
diagnsticos o tempo necessrio para se obter o
resultado nal pode levar at semanas.
O ICC aplicvel a maioria dos vrus de
interesse veterinrio e possui boa sensibilidade.
O material suspeito inoculado em clulas ani-
mais cultivadas in vitro e a replicao do vrus
evidenciada pela produo de efeito citoptico
(ECP) ou pela deteco de protenas ou cidos
nuclicos virais nas clulas inoculadas.
O material enviado ao laboratrio deve ser
acompanhado de um histrico clnico que permi-
ta a formulao de hipteses sobre os vrus sus-
peitos. Isto facilita a tomada de deciso com rela-
o ao tipo de clula e da tcnica utilizada para a
identicao, por exemplo, em casos de doena
respiratria de bovinos, quatro agentes virais es-
to associados com maior freqncia: BoHV-1,
vrus da diarria viral bovina (BVDV), vrus da
parainuenza 3 (bPI-3) e vrus sincicial respira-
trio bovino (BRSV). Portanto, o procedimento a
ser adotado dever ser direcionado para a detec-
o desses agentes. O material dever ser inocu-
lado em cultivos celulares que sejam susceptveis
aos quatro agentes para que, se algum deles esti-
ver presente no material, possa se multiplicar e
ser identicado.
A escolha das clulas crtica para o sucesso
do procedimento. Em geral, clulas primrias so
mais sensveis para o isolamento do que linha-
gens celulares. Apesar disso, muitos laboratrios
utilizam linhagens celulares pela facilidade de
manuteno e multiplicao mais eciente. Como
regra, deve-se preferir clulas da espcie animal
de origem do material. Amostras oriundas de bo-
vinos devem ser inoculadas em clulas de origem
bovina, e assim por diante. Alguns vrus so es-
tritamente espcie-especcos e somente se mul-
tiplicam em clulas da espcie homloga; outros
so capazes de replicar em clulas de diferen-
tes espcies (o BVDV, por exemplo, replica em
clulas de bovinos, ovinos, sunos, carnvoros,
primatas etc.). Poucos vrus se multiplicam bem
somente em clulas de outras espcies. O vrus
da sndrome respiratria e reprodutiva dos su-
nos (PRRSV) replica ecientemente em clulas da
linhagem MARC-145, de origem primata; os her-
pesvrus eqinos so amplicados nas linhagens
VERO (de primatas) e RK-13 (coelho); os vrus da
inuenza de eqinos e humanos se multiplicam
bem na linhagem MDCK (canina). Esses exem-
plos representam excees. As clulas utilizadas
para o isolamento e multiplicao dos principais
vrus animais e o ECP produzido por esses vrus
esto apresentados na Tabela 3.3 (Captulo 3).
Os materiais mais freqentemente enviados
para a deteco de vrus so fragmentos de teci-
dos (coletados em necropsias ou de fetos aborta-
dos), secrees (leite, secrees nasais, vaginais,
prepuciais, smen), fezes, contedo intestinal ou
uterino, lquido de vesculas, soro e sangue inte-
gral. Previamente inoculao, cada material
submetido a um determinado procedimento, que
pode incluir macerao e homogeneizao (teci-
dos); centrifugao para a remoo de sujidades
(secrees) ou para a separao dos leuccitos
(sangue integral); ou ltrao para a remoo de
bactrias e outros contaminantes (fezes, conte-
do intestinal).
Os cultivos celulares so inoculados com
o material suspeito e devem ser monitorados
diariamente para o aparecimento de alteraes
morfolgicas que caracterizam o ECP. O no
aparecimento de ECP ao nal de 4 a 5 dias deve
ser seguido da reinoculao do sobrenadante do
cultivo em cultivos frescos (subcultivados 18 a
24 h antes). Cada etapa de inoculao e monito-
ramento, que leva entre 4 e 5 dias, denomina-
da passagem. Para alguns vrus, previamente
reinoculao, recomenda-se proceder trs ciclos
de congelamento e descongelamento rpido do
material, para provocar a ruptura das clulas e a
liberao dos vrions intracelulares. O material ,
ento, centrifugado baixa rotao, o sedimen-
to desprezado e o sobrenadante inoculado
em um novo cultivo. A maioria dos protocolos
recomenda a realizao de trs passagens antes
de considerar o material negativo. A necessidade
da realizao dessas passagens explicada pelo
fato de que alguns vrus de campo replicam len-
tamente em cultivo. Alm disso, a quantidade de
vrus vivel no material original pode ser mui-
to pequena, sendo necessria uma amplicao
substancial que permita a visualizao do ECP.
A replicao da maioria dos vrus animais
em cultivo celular produz ECP caracterstico do
seu gnero ou espcie. Esses vrus so denomina-
dos citopticos (ou citopatognicos, CP). Por isso,
com freqncia, possvel identicar o agente
viral pelo tipo de ECP produzido, aliado com o
histrico clnico-patolgico. Os ECPs produzidos
pelos principais vrus animais esto apresenta-
dos na Tabela 3.3 (Captulo 3). As caractersticas
do ECP podem apresentar variaes entre dife-
rentes isolados do vrus e entre diferentes clu-
las. Alguns vrus apresentam replicao rpida e
produzem ECP bem pronunciado e caractersti-
co. Outros replicam lentamente e produzem um
ECP pouco evidente e nem sempre reconhecvel.
Quando no h a produo de ECP, ou quando
este no caracterstico, necessria a identica-
o do agente pelo uso de tcnicas de deteco de
antgenos (IFA ou IPX). O agente detectado pela
produo de ECP pode tambm ser identicado
por neutralizao com anti-soro especco. A
identicao de alguns vrus, aps a produo de
ECP, pode ser realizada tambm por ME. Uma
minoria de vrus no produz citopatologia, sen-
do denominados no-citopticos (ncp, exemplos:
circovrus suno, BVDVncp). Nesses casos, a exe-
cuo de tcnicas de deteco de antgeno ou de
cidos nuclicos indispensvel para a deteco
e identicao do agente.
306 Captulo 11
O isolamento de vrus em cultivo a partir de
material clnico apresenta algumas diculdades,
como a toxicidade do material e contaminao
bacteriana ou fngica. A toxicidade de materiais,
como o smen, pode ser reduzida pela sua dilui-
o em meio de cultivo ou em soro fetal bovino
(smen); a contaminao das fezes pode ser mini-
mizada pela ltrao ou por centrifugao previa-
mente inoculao, alm do uso de antibiticos
e antifngicos no meio de cultivo. Outros fatores
que inuenciam o sucesso do ICC so: a coleta,
conservao e remessa adequadas do material.
Como o mtodo detecta apenas partculas vricas
viveis, e, portanto, capazes de replicar em culti-
vo, determinadas temperaturas, pH e exposio
a condies ambientais que sejam prejudiciais
viabilidade do agente podem afetar negativa-
mente o teste. O material a ser submetido deve
ser mantido sob refrigerao (ou congelado) at a
submisso ao laboratrio, para preservar a viabi-
lidade do vrus. As recomendaes para a coleta
e remessa de material para diagnstico virolgi-
co encontram-se ao nal deste captulo.
O protocolo para o isolamento e identica-
o de vrus em cultivo celular est ilustrado na
Figura 11.4.
4.1.2.2 Isolamento em ovos
embrionados
Os tecidos de embries de galinha represen-
tam sistemas ideais para a multiplicao de v-
rios vrus. Por isso, ovos embrionados tm sido
utilizados para o isolamento e tambm para o
cultivo de alguns vrus de aves e de mamferos.
Dependendo do vrus suspeito, o material pode
ser inoculado por diversas vias e em diferentes
estgios de desenvolvimento do embrio. Aps
a inoculao, a viabilidade do embrio monito-
rada diariamente em um ovoscpio. Em caso de
morte, realiza-se a necropsia do embrio busca
de alteraes macroscpicas. A identicao do
agente pode requerer a realizao de outros tes-
tes (hemaglutinao, deteco de antgenos e/ou
cidos nuclicos virais) em material coletado do
embrio.
As principais propriedades desse mtodo
so: boa sensibilidade, facilidade de manipula-
o e custo relativamente baixo. As maiores res-
tries se referem diculdade de obteno de
ovos embrionados livres de patgenos, contami-
nao bacteriana e/ou fngica e impossibilidade
de automao. Alm disso, a sua aplicao res-
trita aos vrus que se multiplicam em embries
Figura 11.4. Protocolo para isolamento e identificao de vrus pela inoculao em cultivo celular. As amostras so
inicialmente processadas e inoculadas em clulas susceptveis aos vrus suspeitos. Os cultivos so monitorados por
alguns dias para o aparecimento de efeito citoptico (ECP). Ao final da terceira passagem do material ou quando
aparecer ECP os cultivos so submetidos identificao do agente por tcnicas de deteco de antgeno ou de cidos
nuclicos. A presena de vrus no-citopticos deve ser monitorada por IFA ou IPX. Deve-se proceder trs passagens
domaterial antes deconsider-lonegativopara vrus.
Efeito citoptico (ECP)
Antgenos virais
cidos nuclicos
Tecidos
rgos
Sangue
Secrees
Smen
Soro
Fezes
Cultivo celular
3 - 5 dias
Processamento
(ver texto)
Inoculao
de galinha. Na Tabela 3.2 (Captulo 3), esto lista-
dos os vrus que replicam em ovos embrionados,
as vias de inoculao e as alteraes produzidas
nos embries.
4.1.2.3 Isolamento em animais
Com o advento dos cultivos celulares, a
inoculao de animais para o diagnstico de in-
feces por vrus foi sendo gradativamente subs-
tituda. Alm das questes operacionais (custo,
espao, diculdade de manuteno de animais
com este propsito), o uso de animais tem sido
restrito por questes ticas. No entanto, esse m-
todo ainda possui aplicao em alguns casos es-
peccos, geralmente associados com outras tc-
nicas de diagnstico. Em casos suspeitos de raiva,
pesquisa-se inicialmente a presena de antgenos
em fragmentos de crebro por IFA. Este teste
seguido pela inoculao de um macerado do c-
rebro suspeito em camundongos lactentes (6-10
dias de idade), o que constitui a prova biolgica,
permitindo o diagnstico denitivo da enfermi-
dade. Os camundongos so inoculados pela via
intracerebral com o material suspeito e monito-
rados por at 28 dias. A presena do vrus rbico
no material resulta no desenvolvimento de doen-
a neurolgica severa e morte entre o 8 e 21 dias
aps a inoculao. A conrmao da identidade
do agente pode ser realizada por imunouores-
cncia do crebro dos camundongos que morre-
ram. O protocolo padro para o diagnstico da
raiva est ilustrado na Figura 11.5.
A encefalite eqina venezuelana (VEE), cau-
sada por um alfavrus, alm de infeces neuro-
lgicas causadas por alguns avivrus, tambm
pode ser diagnosticadas pela inoculao intrace-
rebral do material suspeito em camundongos lac-
tentes. A inoculao de camundongos tambm
realizada em algumas situaes para o diagns-
tico da febre aftosa. A inoculao de leites tam-
bm tem sido ocasionalmente realizada como
teste conrmatrio da presena do PRRSV, do
vrus da peste suna clssica (CSFV) e da peste
Figura 11.5. Protocolo para o diagnstico de raiva animal. Impresses do crebro do animal suspeito so submetidas
imunofluorescncia direta (IFD) para a deteco de antgenos virais. Em caso positivo, o diagnstico comunicado
imediatamente. Aps, uma suspenso do crebro macerado inoculada pela via intracerebral em camundogos
lactentes, que soobservados por at 30 dias. Emcasos positivos, os animais apresentamsinais neurolgicos severos e
morremgeralmente entre os dias 8 e 20. Aausncia de manifestaes clnicas e morte ao final do perodo indicamque
o material negativo para vrus. A prova biolgica deve ser realizada nas amostras que foram positivas na IFD e,
principalmente, nas amostras queforamnegativas.
IFD
Positivo
Negativo
Inoculao
intracerebral
Camundongos
lactentes
Prova biolgica (10-20 dias)
Doena neurolgica
Morte
Sem manifestaes
+
-
Resultado
Prova rpida (1 hora)
308 Captulo 11
suna africana (ASFV). Esse mtodo j foi utili-
zado para a deteco de vrios vrus, incluindo o
BTV, vrus da estomatite vesicular (VSV), poxv-
rus ovino, entre outros. No entanto, este sistema
tem sido gradualmente substitudo por mtodos
que no utilizam animais e que produzem resul-
tados equivalentes ou superiores.
4.1.3 Hemaglutinaco e inibio
da hemaglutinao
Alguns vrus possuem a capacidade de se
ligar a molculas da membrana plasmtica de
eritrcitos de determinadas espcies animais e
provocar a sua aglutinao. Essa atividade, de-
nominada hemaglutinao (HA), pode ser utili-
zada como indicador da presena desses vrus
em amostras clnicas. A hemaglutinao o re-
sultado da ligao de glicoprotenas da super-
fcie dos vrions, denominadas genericamente
hemaglutininas, com receptores da superfcie dos
eritrcitos. Os vrus que possuem essa atividade
so chamados de hemaglutinantes. A tcnica de
HA tem sido muito utilizada para pesquisar e
quanticar vrus em diversos materiais, porm
aplicvel somente aos vrus que apresentam essa
propriedade biolgica. Essa propriedade tambm
utilizada para a pesquisa de anticorpos capazes
de inibir a hemaglutinao, na tcnica sorolgica
denominada inibio da hemaglutinao (HI).
Ao contrrio da reao de HA, que somente
revela uma atividade biolgica do vrus, a rea-
o de HI uma prova sorolgica e, dessa forma,
pode ser empregada tanto para a identicao do
agente como para o diagnstico sorolgico de in-
feces por esses vrus. O princpio da HI baseia-
se na capacidade de anticorpos se ligarem nas
hemaglutininas virais e inibirem a sua atividade
hemaglutinante. A HI realizada com um soro-pa-
dro conhecido frente a um material positivo re-
cm-detectado na HA possibilita a identicao
do agente. Por exemplo, a deteco de atividade
hemaglutinante em lquidos provenientes de fe-
tos sunos abortados indica a presena de vrus.
A inibio dessa atividade hemaglutinante com
um soro-padro para o parvovrus suno (PPV)
indica que o agente presente nos uidos o PPV.
Por outro lado, a deteco de anticorpos inibido-
res da hemaglutinao contra um determinado
vrus no soro de um animal indica que este j foi
exposto ao agente.
As tcnicas de HA e HI so realizadas em
tubos ou em placas de microtitulao, requerem
eritrcitos frescos (galinha, cobaias ou coelhos,
dependendo do vrus) e permitem a obteno
do resultado em uma a duas horas. Tanto a HA
como a HI so tcnicas simples, rpidas e de bai-
xo custo, possuindo boa sensibilidade e especi-
cidade. No entanto, so aplicveis somente aos
Figura 11.6. Teste de hemaglutinao (HA) para
demonstrao de vrus hemaglutinantes em amostras
clnicas. A amostra suspeita (fluido corporal ou
macerado de tecido) misturada e incubada com uma
suspenso de eritrcitos. Na presena do vrus
hemaglutinante, os eritrcitos aglutinam-se e se
depositam como uma fina camada de contorno irregular
no fundo da cavidade. Na ausncia do vrus suspeito, os
eritrcitos livres rolam para o fundo da cavidade,
formandoumbotoespessodecontornobemdefinido.
+
Incubao
1 hora
Amostra
suspeita
Eritrcitos
Amostra
negativa
Amostra
positiva
A B
vrus que possuem atividade hemaglutinante,
alm de no serem automatizveis. A HI pode
ser relativamente trabalhosa se houver a necessi-
dade de pr-tratamento do soro para a remoo
de inibidores inespeccos da hemaglutinao. A
diculdade de se obter eritrcitos da espcie indi-
cada tambm pode representar uma restrio ao
uso dessas tcnicas na rotina diagnstica. A HA
e a HI so utilizadas para os vrus da inuenza e
parainuenza, para alguns poxvrus e togavrus,
picornavrus, parvovrus, reovrus e adenovrus.
Os principais vrus que possuem atividade he-
maglutinante e as espcies dos eritrcitos que so
aglutinados por esses vrus esto apresentados
na Tabela 3.1 (Captulo 3). A Figura 11.6 apresen-
ta uma ilustrao da tcnica de HA.
4.1.4 Deteco de antgenos
A multiplicao dos vrus nos tecidos do
hospedeiro resulta na produo de grande quan-
tidade de protenas virais. Uma parte dessas pro-
tenas as chamadas protenas estruturais
incorporada nas partculas vricas produzidas,
mas grande parte delas e tambm as protenas
no-estruturais permanecem nas clulas infec-
tadas. Como conseqncia, os tecidos infectados
geralmente possuem uma quantidade consider-
vel de antgenos virais. Os uidos corporais (san-
gue, secrees, excrees) tambm podem conter
clulas infectadas e/ou protenas virais solveis.
A deteco desses antgenos pelo uso de anticor-
pos especcos um dos mtodos mais utilizados
no diagnstico de infeces vricas. A disponibi-
lidade de anticorpos para virtualmente todos os
vrus de interesse veterinrio possibilita a apli-
cao universal desse mtodo. Alm do uso em
diagnstico, as tcnicas de deteco de antgeno
possuem uma ampla aplicabilidade em diversas
reas da Virologia.
A complementaridade qumica entre os an-
ticorpos e determinantes antignicos e exclusivos
de cada espcie de vrus confere a especicida-
de do mtodo. Vrias tcnicas que utilizam este
princpio foram desenvolvidas e so utilizadas
na rotina de laboratrios de virologia. Em geral,
so tcnicas simples, rpidas, de custo baixo e
com boa sensibilidade e especicidade. A maior
restrio refere-se diculdade de automao, o
que torna trabalhosa a sua realizao em um n-
mero grande de amostras. No obstante, algumas
etapas dessas tcnicas podem ser automatizadas,
o que reduz a diculdade para se testar vrias
amostras simultaneamente.
As tcnicas mais utilizadas para a deteco
de antgenos virais so a IFA, a IPX, os ELISAs
e imunocromatogrcos, alm dos imunoblots
(Western blot, dot e slot blot). O princpio de cada
uma dessas tcnicas foi descrito no Captulo 3.
Em resumo, as protenas virais so detectadas
por anticorpos especcos, conjugados com subs-
tncias indicadoras que permitam a sua deteco.
Na IFA, os anticorpos so conjugados com um
marcador uorescente (uorescena), que pode
ser visualizado sob UV. No caso da IPX e ELISAs,
os anticorpos so marcados com uma enzima,
que reage com o substrato e promove a mudana
de cor deste ou emite luminosidade. A luminosi-
dade emitida pode ser detectada por aparelhos
(luminmetros) ou captada em lmes de raios X.
Protenas virais presentes em uma variedade de
amostras podem ser detectadas por esses mto-
dos. O desenvolvimento de kits diagnsticos para
a utilizao em consultrios, clnicas ou mesmo a
campo popularizou e ampliou o uso dessas tc-
nicas.
Exemplos de aplicao dessas tcnicas na ro-
tina diagnstica incluem a deteco de antgenos
virais em impresses de crebro (raiva, BoHV-5,
cinomose); em clulas descamativas em secrees
nasais (BoHV-1, BoHV-5, BRSV, BVDV, vrus
da cinomose [CDV]), em esfregaos sangneos
(BVDV); conjuntivais (CDV) e genitais (PRRSV,
BoHV-1). Esses testes so realizados em seces
ou impresses de tecidos, em clulas imobilizadas
em placas de cultivo ou em lminas histolgicas. A
deteco de antgenos virais em cortes histolgicos
possui uma grande aplicao para estudos retros-
pectivos, pois as protenas previamente xadas e
includas em parana preservam a sua estrutura
antignica por longos perodos. Nesses casos, uti-
liza-se a tcnica de IPX, associada com protocolos
para a recuperao/renaturao dos antgenos
e com sistemas de amplicao do sinal emitido
(sistema avidina-biotina).
310 Captulo 11
Outra importante aplicao desse mtodo a
deteco e identicao de antgenos aps a mul-
tiplicao do vrus em cultivos celulares. A conr-
mao da identidade do agente importante para
os vrus que produzem citopatologia pouco carac-
terstica e, principalmente, para aqueles que no
produzem ECP. Nesses casos, a deteco das pro-
tenas virais nos cultivos se constitui no indicador
da presena do agente no material suspeito.
Para a pesquisa de antgenos em uidos (san-
gue, smen, secrees nasais), podem ser utilizadas
tcnicas imunoenzimticas (ELISA), imunocroma-
togrcas e imunoblot. As tcnicas imunoenzim-
ticas do tipo ELISA possuem diversas variaes
(deteco de antgenos e anticorpos ver Captu-
lo 3), so geralmente muito sensveis, especcas
e automatizveis, permitindo o teste simultneo
de um nmero grande de amostras. Possuem es-
pecial aplicao para o diagnstico em rebanhos.
Um exemplo desse uso a triagem de rebanhos
busca de animais persistentemente infectados pelo
BVDV. Existem kits comerciais para a deteco de
antgenos do BVDV no soro sangneo, no leite ou
em bipsias de pele. Os fragmentos de pele, geral-
mente coletados da orelha, podem ser submetidos
IPX ou a ensaios imunoenzimticos em placas, o
que facilita o diagnstico pelo teste simultneo de
um nmero grande de amostras. Essa tcnica tem
apresentado grande aplicao em programas de
controle e erradicao dessa enfermidade na Euro-
pa e Amrica do Norte. Tambm tem sido utiliza-
da para identicar rebanhos positivos, atravs do
teste de amostras de leite coletadas na indstria.
Antgenos do BLV e de outros retrovrus (CAEV,
EIAV) tambm podem ser detectados no sangue
por tcnicas imunoenzimticas ou por imunoblots.
A Figura 11.7 lista os mtodos diretos de deteco
de antgenos virais em amostras clnicas.
O princpio dos mtodos cromatogrcos e
imunoenzimticos foi utilizado para o desenvol-
vimento de testes aplicveis em clnicas e consul-
trios. Vrios testes para a deteco de antgenos
e tambm de anticorpos, sob a forma de kits, esto
disponveis comercialmente. So testes rpidos
(15-30 min), de execuo simples e geralmente
possuem boa sensibilidade e especicidade. Den-
tre os testes disponveis em kits para a deteco de
antgenos se incluem aqueles para a deteco dos
parvovrus canino (CPV) e felino (FLPV) em fe-
zes; rotavrus tipo A em fezes de bovinos, sunos
e caninos; vrus da raiva na saliva ou no encfalo
de ces, bovinos e de fures; vrus da leucemia
Secrees
Sangue
Excrees
Tecidos
rgos
Fresco
Material
Fluidos Clulas Parafinizado Congelado
ELISA
Cromatografia
Imunoblot
IFA
IPX
Imunoblot
IFA
IPX
Cromatografia
Imunoblot
IFA
IPX
- IFA
- IPX
Figura 11.7. Tcnicas dedetecodeantgenos virais emamostras clnicas.
felina (FeLV) no sangue, plasma ou soro; vrus
da gastrenterite transmissvel (TGEV) em fezes
de sunos; vrus da inuenza aviria em fezes de
aves; coronavrus em fezes de bovinos e caninos;
CDV em secrees nasais, conjuntivais ou urina
de ces, entre outros. A grande vantagem desses
testes a realizao in loco, como suporte inves-
tigao clnica, ou seja, paralelamente ao exame
clnico, o veterinrio pode recorrer ao exame la-
boratorial para dar suporte ao seu diagnstico. O
custo individual dos testes relativamente alto, o
que restringe o seu uso em nvel populacional.
A tcnica de radioimunoensaio (RIA) j teve
importante aplicao na deteco e diagnstico
de vrus, mas, atualmente, encontra-se em desu-
so, pela disponibilidade de outras tcnicas equi-
valentes e que no requerem o uso de marcadores
radioativos. Assim, possui aplicao restrita e es-
pecca em algumas situaes. A aglutinao em
ltex, tcnica de execuo simples que se popu-
larizou no diagnstico de gestao em mulheres,
tem sido difundida em kits para uso no diagnsti-
co de viroses de pequenos animais. No entanto, a
sua rapidez e simplicidade so contrabalanadas
por problemas de sensibilidade e especicidade.
Em geral, protocolos que resultem em au-
mento de sensibilidade, especicidade e permi-
tam maior facilidade de execuo tm sido con-
tinuamente desenvolvidos. Com isso, tcnicas
modicadas e aperfeioadas a maioria delas
baseada em princpios j bem estabelecidos tm
sido continuamente incorporadas aos mtodos
tradicionais de deteco de antgenos.
4.1.5 Deteco de cidos nuclicos
A multiplicao dos vrus nos tecidos do
hospedeiro resulta na produo de grande quan-
tidade de cidos nuclicos virais, incluindo RNA
mensageiro (mRNA), RNAs intermedirios (v-
rus RNA), alm do RNA e DNA genmicos. Por-
tanto, os tecidos infectados e uidos corporais e
excrees freqentemente contm quantidades
considerveis de cidos nuclicos de origem
viral. A deteco desses cidos nuclicos, com
base na especicidade das seqncias e na com-
plementaridade de bases, constitui-se no funda-
mento das tcnicas moleculares de diagnstico.
Essas tcnicas foram desenvolvidas a partir da
dcada de 1980 e tiveram um impacto notvel na
pesquisa e no diagnstico de inmeras doenas
humanas e animais. A sua versatilidade e a apli-
cabilidade praticamente universal resultaram em
rpida difuso e adoo como tcnicas preferen-
ciais de diagnstico em inmeros laboratrios. O
princpio das tcnicas de hibridizao (Southern e
Northern blot, dot/slot blot) foi utilizado e ampliado
para o desenvolvimento da tcnica de PCR, uma
tcnica altamente especca que capaz de de-
tectar quantidades mnimas do genoma viral em
amostras clnicas. A universalidade de aplicaes
do PCR foi ampliada e adaptada para deteco
rpida e possibilidade de quanticao do cido
nuclico presente na amostra (PCR em tempo
real). Por outro lado, as tcnicas de hibridizao
in situ (ISH) e PCR in situ, que se constituem em
variaes das tcnicas originais, possuem aplica-
o restrita em diagnstico, sendo mais utilizadas
em pesquisa e em estudos de patogenia.
Quando a amostra clnica contm uma de-
terminada quantidade do cido nuclico viral,
pode-se detect-lo pelas tcnicas de hibridizao,
utilizando-se sondas moleculares marcadas com
istopos radioativos ou com enzimas. Quando a
quantidade de cidos nuclicos muito pequena
para ser detectada diretamente, a tcnica de PCR
pode ser utilizada para multiplicar/amplicar o
nmero de molculas presentes na amostra.
As tcnicas de deteco de cidos nuclicos
podem ser utilizadas para detectar DNA e RNA
e so aplicveis a qualquer vrus, desde que se
conheam algumas seqncias do seu genoma.
Atualmente, as seqncias genmicas parciais ou
totais de virtualmente todos os vrus de interesse
veterinrio encontram-se disponveis em bancos
genmicos acessveis via Internet. Da mesma for-
ma, existe uma variedade de softwares destinados
ao desenho de primers e sondas utilizando essas
seqncias.
As tcnicas moleculares podem ser utiliza-
das para detectar cidos nuclicos virais em ma-
terial clnico de qualquer natureza, incluindo te-
cidos, sangue (soro/plasma), clulas sang neas,
secrees (leite, saliva, secrees nasais, urina,
smen), descamaes cutneas, entre outros. Po-
dem tambm ser utilizadas para detectar o geno-
312 Captulo 11
ma viral em cultivos celulares previamente ino-
culados com o material suspeito. Essas tcnicas
possuem especial utilidade para detectar quanti-
dades muito pequenas do material gentico; para
vrus que no multiplicam com ecincia em
cultivo celular e tambm para detectar o agente
j inativado em amostras inadequadamente con-
servadas. Tambm possuem aplicao especial
para a deteco de infeces latentes, nas quais
o genoma do vrus permanece inativo nas clulas
do hospedeiro.
A seguir ser dado enfoque para a utilizao
das tcnicas de deteco de cidos nuclicos com
ns diagnsticos.
4.1.5.1 Hibridizao (Southern/Northern
blot)
Para a deteco por hibridizao, os ci-
dos nuclicos devem ser inicialmente extrados
da amostra clnica e, posteriormente, imobiliza-
dos em membranas. A deteco realizada por
sondas moleculares especcas que so seqn-
cias de nucleotdeos complementares s do cido
nuclico do agente pesquisado. A especicidade
da reao deve-se especicidade e complemen-
taridade do pareamento de bases. Para permitir a
deteco, as sondas so conjugadas com istopos
radioativos ou com enzimas. Esses marcadores
so, ento, detectados pela captao da radiao
emitida (marcao radioativa) ou pela observa-
o da ao enzimtica em substratos. Dentre
as vantagens dessas tcnicas, destacam-se a boa
sensibilidade, especicidade e relativa rapidez
na obteno dos resultados. So aplicveis a
qualquer agente infeccioso desde que se conhea
parte da seqncia do genoma; e podem ser exe-
cutadas em vrios tipos de material clnico. As
suas restries referem-se principalmente ne-
cessidade de equipamentos e tecnologia, alm de
serem tcnicas relativamente recentes e, por isso,
ainda no assimiladas por muitos laboratrios.
A tcnica de hibridizao para a deteco
de DNA, aps a sua separao por eletroforese,
denomina-se Southern blot. aplicvel para a de-
teco de vrus com genoma DNA. A deteco de
RNA por um mtodo equivalente denominada
Northern blot. aplicvel a qualquer vrus, pois
tanto os vrus RNA como os vrus DNA neces-
sitam da produo de RNAs durante a sua re-
plicao. O dot/slot blot so verses simplicadas
dessas tcnicas, nas quais o cido nuclico de-
tectado diretamente na membrana, sem a separa-
o prvia por eletroforese.

4.1.5.2 Reao da polimerase
em cadeia
A PCR uma tcnica de amplicao de
cidos nuclicos que, quando utilizada com ns
diagnsticos, permite a deteco e identicao
de quantidades mnimas do material gentico do
agente suspeito. Pode ser aplicada em qualquer
material clnico que, potencialmente, contenha o
agente ou o seu cido nuclico. Possui aplicabili-
dade universal, ou seja, pode ser realizada para
qualquer vrus, desde que se disponha de suas
seqncias nucleotdicas. As principais vanta-
gens da tcnica so: a) sensibilidade (pode detec-
tar mnimas quantidades do agente); b) especi-
cidade (altamente especca para o agente); c)
rapidez (pode ser realizada em poucas horas); d)
universalidade (pode ser aplicada para qualquer
vrus); e) pode ser realizada em quantidades m-
nimas da amostra; f) capaz de detectar tambm
vrus que j esteja invivel; g) pode ser adapta-
da para detectar vrios subtipos do mesmo vrus
ou vrus diferentes em uma mesma reao (PCR
multiplex); h) pode ser padronizada para aumen-
tar a sensiblidade e especicidade (nested PCR); i)
pode ser utilizada para detectar cidos nuclicos
em tecidos includos em parana (til em estu-
dos retrospectivos) ou j) pode ser realizada em
amostras conservadas de forma imprpria para a
realizao de outras tcnicas.
O custo dos testes tem se reduzido ao longo
do tempo e j no representa uma restrio im-
portante para o diagnstico. Dentre as restries
se incluem o risco de contaminao e a produo
de resultados falso-positivos; a necessidade de se
utilizar substncias txicas para extrair os cidos
nuclicos, necessidade do aparelho termociclador
(pode ser limitante para laboratrios pequenos) e
diculdades na padronizao.
Pela suas vantagens, essa tcnica tem sido
padronizada e utilizada para o diagnstico de
inmeras viroses. Possui especial aplicao para
a deteco de quantidades pequenas de cido nu-
clico, quando outras tcnicas so incapazes de
faz-lo. muito til para a deteco de bovinos
portadores do BoHV-1 e BoHV-5 e de sunos por-
tadores do PRV em programas de erradicao;
e tambm para a deteco de vrios vrus no s-
men ou em secrees. Pode ser aplicada em fases
precoces da infeco, para detectar vrus difceis
de se isolar e quando ainda no h indicadores
sorolgicos. Ou seja, a PCR encontra aplicao
em todas as situaes em que exista a necessida-
de de se detectar especicamente um agente viral
em material suspeito. Tambm possui um amplo
espectro de aplicao em vrias reas da Biologia
e Medicina, constituindo-se em uma das tcnicas
mais teis e de maior impacto nas Cincias Bio-
lgicas.
4.1.5.3 PCR em tempo real
A tcnica tradicional de PCR envolve as eta-
pas de extrao do cido nuclico, amplicao
e deteco do produto amplicado. O procedi-
mento integral pode demandar vrias horas at a
obteno do resultado. Da mesma forma, a quan-
tidade de cido nuclico presente na amostra ori-
ginal de difcil quanticao. Nos ltimos anos,
foi desenvolvida a tcnica de PCR em tempo real,
na qual as etapas de amplicao podem ser
monitoradas medida que vo ocorrendo, pela
utilizao de sondas marcadas com substncias
indicadoras que so liberadas a cada ciclo de am-
plicao. O sinal emitido a cada ciclo , ento,
captado e quanticado por um software acoplado
a um microcomputador. Isso permite o acompa-
nhamento da reao e a visualizao do acmulo
dos produtos medida que so produzidos, isto
, o resultado pode ser obtido bem antes do nal
da reao, o que reduz signicativamente o tem-
po de realizao. Alm de abreviar o tempo da
reao, no necessrio analisar os produtos por
eletroforese em gis de agarose. Essa tcnica tam-
bm permite a quanticao dos cidos nuclicos
presentes na amostra. A tcnica de PCR em tem-
po real tem sido tambm adaptada para a realiza-
o a campo, na qual as amostras so coletadas,
processadas e rapidamente testadas, fornecendo
o resultado ainda na propriedade. Termociclado-
res portteis, acoplados a microcomputadores,
tm sido desenvolvidos com essa nalidade. Essa
estratgia pode ser muito til na investigao de
surtos de doenas de importncia sanitria estra-
tgica, como a febre aftosa, peste suna clssica,
inuenza aviria, entre outras. Nesses casos, a
investigao clnica e epidemiolgica no rebanho
pode j ser acompanhada do diagnstico deniti-
vo, o que agiliza a tomada de decises e a adoo
de medidas para o controle da infeco.

4.1.5.4 Hibridizao in situ/ PCR in situ
A tcnica de hibridizao in situ (ISH) uma
tcnica de deteco de cidos nuclicos, a exemplo
do Southern e Northern blot. A diferena fundamen-
tal que a ISH realizada em cortes histolgicos
e os cidos nuclicos so detectados diretamente
nos tecidos. Alm da boa sensibilidade e especi-
cidade, essa tcnica permite a identicao das
clulas infectadas. Em razo disso, a ISH muito
utilizada em estudos de patogenia de infeces
vricas. Tambm permite a deteco de vrus em
tecidos conservados por longo tempo em blocos
de parana ou em lminas histolgicas, possibili-
tando estudos retrospectivos. As suas aplicaes
diagnsticas, no entanto, so restritas, sobretudo,
pela sua complexidade, necessidade de pessoal
treinado e tempo requerido para a sua execuo.
Em geral, as tcnicas de imunoistoqumica (IHC)
tm substitudo a ISH com ns diagnsticos. Em
alguns casos, especialmente quando a m conser-
vao dos antgenos virais nos tecidos prejudica
o reconhecimento das protenas virais pelos anti-
corpos, a ISH pode substitu-la com vantagens.
A tcnica de PCR in situ tambm realizada
em cortes de tecidos, e a amplicao dos cidos
nuclicos virais pode ser detectada diretamente
nas clulas infectadas. A exemplo da ISH, essa
tcnica possui aplicao restrita em diagnstico,
sobretudo, pela sua complexidade e requerimen-
to de equipamento especco. Possui algumas
aplicaes em estudos de patogenia e biologia de
determinadas infeces vricas.
314 Captulo 11
4.2 Mtodos indiretos diagnstico
sorolgico
A deteco de anticorpos no soro muito
utilizada com ns diagnsticos em Virologia. As
infeces vricas induzem uma resposta imuno-
lgica especca, mediada por anticorpos (alm
de clulas), que persiste por um tempo varivel e
que pode ser detectada por diversas tcnicas. Os
anticorpos produzidos contra um determinado
vrus so estritamente especcos para este agen-
te. Por isso, as tcnicas de deteco de anticorpos
so tambm especcas, permitindo distinguir a
resposta sorolgica produzida contra vrus dife-
rentes. Da mesma forma, as tcnicas sorolgicas
podem ser altamente sensveis, capazes de de-
tectar quantidades mnimas de anticorpos e de
identicar quase a totalidade dos animais que
os possuem. Variaes dessas tcnicas permitem
no s a deteco, mas tambm a quanticao
dos anticorpos presentes no soro. Os nveis de
anticorpos so geralmente expressos como t-
tulos, que representam a recproca da maior di-
luio do soro, na qual os anticorpos ou o seu
efeito podem ser detectados. Algumas tcnicas
so tambm automatizveis, permitindo o teste
de um nmero grande de amostras simultanea-
mente, sendo muito teis para estudos de reba-
nhos. As tcnicas de deteco de anticorpos so
denominadas genericamente tcnicas sorolgicas,
e a anlise da resposta sorolgica a antgenos
denominada genericamente sorologia.
Os testes sorolgicos possuem aplicaes
tanto individuais como em rebanhos ou em po-
pulaes. O seu uso individual, como mtodo au-
xiliar investigao clnica, possui repercusso
limitada. No entanto, a deteco de anticorpos
possui aplicaes importantes na identicao
de animais portadores de alguns vrus, na detec-
o de infeco intra-uterina e na identicao da
fase aguda de algumas viroses. Por outro lado,
o seu uso populacional pode apresentar uma re-
percusso sanitria mais importante, por permi-
tir o conhecimento sobre a situao da infeco
e, ao mesmo tempo, indicar a necessidade e/ou
viabilidade de programas de combate. As tcni-
cas sorolgicas tm aplicao especialmente rele-
vante em estudos epidemiolgicos, em triagens e
monitoramentos de rebanhos. Testes sorolgicos
tambm so utilizados para se vericar a condi-
o imunolgica de rebanhos e para avaliar o po-
tencial imunognico e a cobertura conferida por
vacinas.
Os resultados dos exames sorolgicos reali-
zados em cada situao devem ser interpretados
luz de conhecimentos sobre a biologia e respos-
ta imunolgica a cada vrus. Testes sorolgicos
realizados em uma amostra nica podem ter sig-
nicados diferentes, dependendo do vrus. Para
os vrus que produzem infeces agudas autoli-
mitantes que constituem a maioria , o resul-
tado positivo em um teste isolado indica apenas
exposio prvia ao agente (ou vacinao). Em
populaes, resultados positivos em uma amos-
tragem nica podem indicar a circulao prvia
ou atual do agente na populao. Em alguns ca-
sos, a quanticao dos anticorpos pode indicar
se a exposio foi recente ou remota. Para infec-
es cuja resposta humoral de curta durao,
a deteco de altos ttulos de anticorpos indica
uma exposio recente ao agente. Para os vrus
que estabelecem infeces persistentes (todos os
retrovrus) e latentes (herpesvrus), um teste so-
rolgico positivo indica a condio de portador.
Em monitoramentos sorolgicos da febre aftosa,
a deteco de anticorpos reagentes no teste VIA
indica que houve infeco, e no vacinao. Ao
se interpretar o resultado de um teste sorolgico
deve-se considerar tambm a possibilidade dos
anticorpos detectados terem sido adquiridos pas-
sivamente (via placenta e/ou colostro) ou terem
sido induzidos por vacinas.
A sorologia tambm pode ser utilizada
como mtodo auxiliar clnica, em investigaes
de eventos de doena isolada ou em grupos de
animais. Nesses casos, podem-se adotar duas es-
tratgias: a realizao de sorologia pareada ou
a deteco de IgM especca para o agente sus-
peito. A sorologia pareada deve ser realizada
com duas amostras coletadas com intervalo de
duas a trs semanas (uma durante a fase aguda
e a outra na fase de convalescena). Um aumento
de quatro vezes ou mais no ttulo de anticorpos
entre as coletas denominado soroconverso
um indicativo de que a doena foi causada pelo
agente sob investigao. A deteco de IgM espe-
cca para o vrus suspeito em amostras nicas,
coletadas durante a fase aguda, tambm permite
o diagnstico da infeco. Nesse caso, um nico
teste j suciente para o diagnstico, pois os
nveis sricos de IgM s se encontram aumenta-
dos durante a infeco aguda. Essa estratgia tem
sido utilizada no diagnstico de vrias viroses
(hantavirose, infeco pelo vrus Junin, dengue,
encefalites eqinas pelos togavrus encefalite
eqina venezuelana, VEE, por exemplo e pelo
vrus do Nilo Ocidental [WNV]) e encontra apli-
cabilidade especial para os vrus que produzem
viremia transitria e cujo isolamento difcil. No
caso da VEE, a deteco de IgM por um teste ELI-
SA o mtodo mais utilizado para o diagnstico
da infeco aguda.
A realizao de testes sorolgicos em ani-
mais recm-nascidos, no soro coletado previa-
mente ingesto de colostro, um indicativo de
infeco intra-uterina. Testes sorolgicos tambm
so teis para monitorar os nveis de imunidade
adquiridos passivamente pela placenta ou pelo
colostro.
De acordo com o seu princpio, as tcnicas
sorolgicas podem ser divididas em trs grupos:
a) tcnicas que detectam diretamente a interao
entre os anticorpos com os antgenos virais (RIA,
ELISA, imunoblots, IFA, IPX); b) tcnicas em que
a interao anticorpo-antgeno resulta em efeitos
no relacionados com o vrus (xao do com-
plemento, aglutinao em ltex) e c) tcnicas que
mensuram diretamente a capacidade dos anticor-
pos de bloquear ou alterar alguma atividade bio-
lgica do vrus (SN, HI). Algumas dessas tcnicas
tambm esto amplamente difundidas e popula-
rizadas, estando disponveis em kits para uso em
clnicas e consultrios veterinrios.
Ao se padronizar uma tcnica sorolgica
para um determinado agente, deve-se considerar
e avaliar as seguintes propriedades: sensibilida-
de, especicidade, valores preditivo positivo e
negativo. A sensibilidade se refere ao percentual
de animais que possuem anticorpos e que so
detectados pelo teste. Individualmente, a sen-
sibilidade depende da capacidade do teste em
detectar quantidades mnimas de anticorpos. A
sensibilidade de um teste em padronizao ou
implementao pode ser avaliada comparando-
se os seus resultados com os resultados de um
teste padro (gold standard). A especicidade de um
teste sorolgico medida pelo percentual de ani-
mais negativos (sem anticorpos) que so conside-
rados positivos no teste. Uma tcnica sorolgica
para ser utilizada em diagnstico deve resultar
em um nmero mnimo de falso-negativos (boa
sensibilidade) e mnimo de falso-positivos (boa
especicidade). A sensibilidade e especicidade
so propriedades intrnsecas de cada teste sorol-
gico e podem variar entre as diferentes tcnicas.
O valor preditivo positivo mede a probabilidade
de resultados positivos no teste serem realmente
positivos; o valor preditivo negativo um indi-
cador da probabilidade de resultados negativos
serem realmente negativos.
A Figura 11.8 ilustra a utilizao de tcnicas
sorolgicas para o diagnstico de infeces vri-
cas.
Soro
Plasma
Secrees
Pesquisa de
anticorpos
Imunodifuso
ELISA
Soroneutralizao
Inibio da hemaglutinao
Fixao do complemento
Imunocromatografia
Aglutinao em ltex
Imunofluorescncia
Radioimunoensaio
Imunoblots
Figura 11.8. Tcnicas utilizadas para a pesquisa de
anticorpos antivirais nosoroouemsecrees.
A seguir, esto descritas as principais tcni-
cas sorolgicas, seus princpios e aplicaes:
316 Captulo 11
O princpio da imunodifuso em gel de gar
(IDGA) insolubilizao e precipitao de com-
plexos formados pela reao antgeno-anticorpo.
Esses complexos podem ser visualizados sob a
forma de linhas de precipitao no gel de agaro-
se (Figura 11.9). A IDGA uma tcnica simples,
de custo baixo, possui boa sensibilidade e espe-
cicidade. Pela sua simplicidade e praticidade,
pode ser implementada em qualquer laboratrio.
Foi inicialmente desenvolvida para a deteco
de antgenos, mas a sua maior aplicao atual
como teste sorolgico. particularmente til
para inquritos sorolgicos de grandes popula-
es animais, sobretudo, pela sua praticidade e
custo baixo. Essa tcnica tem sido utilizada para
o diagnstico sorolgico de vrias viroses, mas
possui aplicao particular para o vrus da EIAV
(teste de Coggins), BLV, BTV, doena de Gum-
boro e bronquite infecciosa aviria. A IDGA se
constitui no teste ocial de diagnstico da infec-
o pelo EIAV, BLV e BTV em vrios pases. As
suas maiores restries referem-se a problemas
de sensibilidade (pode no detectar nveis baixos
de anticorpos), especicidade (reaes inespec-
cas), repetibilidade e tempo para a obteno dos
resultados (at 72 horas).
4.2.2 Soro-neutralizao
O teste de soro-neutralizao (SN) utiliza-
do para se detectar anticorpos que possuem ca-
pacidade de neutralizar a infectividade do vrus.
O teste geralmente utilizado com soro sang-
neo, mas pode ocasionalmente utilizar outros
uidos corporais que possuam anticorpos. Nesse
teste, examina-se o soro suspeito frente a um v-
rus-padro previamente conhecido e quantica-
do. O teste realizado em microplacas de 96 cavi-
dades, nas quais se incubam diluies crescentes
do soro-teste com uma quantidade constante do
vrus (geralmente 100-200 DICC
50
por cavidade)
por um determinado tempo. Aps esse perodo,
durante o qual os anticorpos presentes no soro se
ligam e neutralizam o vrus, so adicionadas as
clulas de cultivo. As placas, contendo a mistura
soro-vrus-clulas, so incubadas a 37C em at-
mosfera com 5% de C0
2
por 48 a 96 h. A presena
de anticorpos neutralizantes na diluio testada
previne a produo de ECP pelo vrus nos culti-
vos (Figura 11.10). O aparecimento de ECP indica
a ausncia de anticorpos neutralizantes sucien-
tes para neutralizar o vrus, na respectiva dilui-
o. Os cultivos podem ser corados com cristal
violeta para facilitar a leitura dos resultados. Os
Soro-teste Antgeno-padro
Reao antgeno-anticorpo
Figura 11.9. Tcnica de imunodifuso em gel de gar (IDGA). O antgeno padro depositado no orifcio central e as
amostras-teste so colocadas nos orifcios perifricos da roseta perfurada na camada de gar. Durante as 48-72 h de
incubao, antgeno e anticorpos se difundem radialmente a partir dos respectivos orifcios. O encontro entre
antgenos e anticorpos resulta emprecipitao e formao de uma linha opaca no local. Aformao desta linha indica
queaamostra positiva para anticorpos contra oantgenoespecfico.
tapetes ntegros (pela presena de anticorpos que
preveniram a replicao viral) se coram em azul;
a ausncia de colorao indica a destruio do ta-
pete celular pela atividade do vrus (ausncia de
anticorpos). Dependendo do objetivo, o teste de
SN pode ser realizado para a obteno de resul-
tado qualitativo (positivo/negativo) ou quantita-
tivo (ttulo de anticorpos). No teste qualitativo,
testa-se apenas uma diluio do soro; no teste
quantitativo, testam-se vrias diluies.
Dentre as tcnicas sorolgicas, o princpio da
SN o que mais se assemelha s interaes entre
anticorpos e vrus que ocorrem in vivo. A neutra-
lizao viral reete uma atividade dos anticorpos
com maior signicado biolgico. Por isso, a SN
uma das tcnicas sorolgicas mais utilizadas em
Virologia. Como a neutralizao de um determi-
nado vrus s ocorre por anticorpos especcos
contra ele, essa tcnica altamente especca. A
SN tambm possui boa sensibilidade. As maiores
restries referem-se necessidade de cultivos
celulares (possibilidade de contaminao bacte-
riana e fngica, toxicidade do soro), tempo para
obteno dos resultados (at uma semana) e a di-
culdade de automao. A SN possui aplicao
potencial para qualquer vrus que replique bem
em cultivo celular, mas possui aplicao prefe-
rencial para determinados vrus, tais como: o
BoHV-1, BVDV, bPI-3, BRSV, vrios adenovrus,
CDV, coronavrus canino (CCoV), PRV, adenov-
rus canino (CAdV), calicivrus felino, herpesvrus
eqinos (EHV), entre outros.
4.2.3 Inibio da hemaglutinao
A deteco de anticorpos capazes de inibir
a atividade hemaglutinante de alguns vrus tem
sido muito utilizada no diagnstico virolgico. A
tcnica de deteco denominada HI e foi des-
crita na seo 4.1.3. Resumidamente, o soro-tes-
te (puro ou em diluies crescentes) incubado
com uma quantidade predeterminada do vrus
padro em questo (4 ou 8 unidades hemagluti-
nantes) por uma hora, seguido da adio de uma
suspenso de eritrcitos de uma determinada es-
pcie animal, e outra incubao de 1-2 horas. Ao
nal procede-se a leitura: a presena de anticor-
pos contra o vrus padro impede a sua atividade
hemaglutinante, e os eritrcitos rolam formando
um boto circular de borda bem denida no fun-
do da cavidade da placa. A ausncia de anticor-
pos resulta na atividade hemaglutinante do v-
rus, provocando a aglutinao dos eritrcitos e a
sua precipitao, formando uma camada difusa,
recobrindo todo o fundo da cavidade da placa.
A incubao de diferentes diluies do soro per-
mite a quanticao dos anticorpos inibidores da
hemaglutinao. A maior diluio do soro capaz
Figura 11.10. Tcnica qualitativa de soro-neutralizao
para a deteco de anticorpos antivirais. Cada soro
suspeito geralmente diludo 1:2 ou 1:10 incubado
por 2-24 h com uma quantidade constante do vrus em
questo. Aseguir, so adicionadas clulas emsuspenso
a cada cavidade que contm a mistura soro + vrus. As
placas so incubadas em estufa de CO por 72-96 h e,
ento, examinadas sob microscopia tica para a presena
de efeito citoptico (ECP). A presena do tapete ntegro
indica neutralizao viral (amostra positiva para
anticorpos). A produo de ECP indica ausncia de
anticorpos neutralizantes (amostra negativa para
anticorpos).
2
+
Soro-teste Vrus-padro
Incubao
(2 - 24 h)
Inoculao
em cultivo
Soro positivo Soro negativo
2-4 dias
ECP - ECP +
318 Captulo 11
de prevenir a hemaglutinao denominada t-
tulo inibidor da HA. A tcnica de HI est repre-
sentada esquematicamente na Figura 11.11.
4.2.4 ELISA
Os testes do tipo ELISA (enzyme-linked immu-
nosorbent assay) so realizados em microplacas de
poliestireno de 96 cavidades e utilizam anticor-
pos marcados com enzimas (peroxidase ou fosfa-
tase alcalina). Embora tenham sido originalmen-
te planejados para a deteco de antgenos (pela
ligao especca de anticorpos marcados), a sua
maior utilizao atual tem sido para a deteco
de anticorpos. Desde a sua descrio inicial, em
1971, essa tcnica tem tido uma aplicao not-
vel nas diversas reas da pesquisa e diagnstico
em Biologia. A sua adaptao para uso como tes-
te sorolgico literalmente revolucionou o campo
do diagnstico e controle de infeces humanas e
animais. A tcnica possui muitas variaes, cujas
aplicaes so indicadas para casos especcos.
Como tcnica sorolgica, tem sido utilizada para
a deteco de anticorpos contra praticamente
todos os vrus de interesse veterinrio, por isso
a sua enumerao se faz desnecessria. No en-
tanto, a sua aplicabilidade e utilidade no so
as mesmas para todos os vrus, principalmente
por questes relacionadas pureza do antgeno e
ocorrncia de reaes inespeccas, entre outras.
Pode ser utilizada individualmente ou em reba-
nhos, constituindo-se em uma tcnica de grande
aplicao em estudos epidemiolgicos e progra-
mas de combate a viroses em grandes popula-
es. Tambm tem sido usada para a deteco
de anticorpos no leite, como forma de identicar
rebanhos positivos para determinados vrus. As
principais vantagens da tcnica incluem a espe-
cicidade, sensibilidade, rapidez (resultados em
2-3 horas), custo relativamente baixo, praticidade
e capacidade de automao (em uma placa po-
dem ser testadas 96 amostras). Geralmente pro-
duz resultados qualitativos (positivo/negativo),
mas pode ser adaptada para uma avaliao semi-
quantitativa dos anticorpos. A tcnica pode ser
adaptada tambm para a deteco de isotipos es-
peccos de imunoglobulinas (IgG, M, E), sendo
particularmente til no diagnstico de algumas
infeces vricas agudas (p. ex: dengue, hantavi-
rose, infeco pelo vrus Junin, WNV, encefalites
eqinas), nos quais os nveis de IgM esto au-
Figura 11.11. Teste de inibio da hemaglutinao (HI).
O soro suspeito incubado com o vrus padro, que
possui atividade hemaglutinante. Aps 1-2h,
adicionada uma suspenso de eritrcitos, seguida de
outra incubao. A ocorrncia de hemaglutinao
(camada difusa de eritrcitos no fundo da cavidade)
indica a ausncia de anticorpos inibidores da
hemaglutinao no soro-teste. A formao de um boto
de eritrcitos no fundo do poo indica a inibio da
atividade hemaglutinante do vrus por anticorpos
presentes nosoro.
+
Soro-teste
Vrus-padro
hemaglutinante
Incubao
1 hora
Adio de
eritrcitos
Incubao
1 hora
Amostra
negativa
Amostra
positiva
mentados na fase aguda. Possui aplicao espe-
cial quando utilizada em conjunto com vacinas
com marcadores antignicos, em programas de
controle de doenas de importncia sanitria es-
tratgica como a doena de Aujesky. Nesse caso,
o vrus vacinal contm deleo em um dos genes
que codica as glicoprotenas do envelope. Ani-
mais vacinados com essa vacina podem ser dife-
renciados dos animais infectados pelo vrus de
campo pelo uso de um teste ELISA que detecta
anticorpos contra a protena deletada. Esse siste-
ma tem sido utilizado nos programas de controle
e erradicao da doena de Aujeszky na Europa,
Estados Unidos e Japo. Tambm tem sido utili-
zado na erradicao dessa doena de granjas de
sunos no estado de Santa Catarina.
As maiores restries ao uso tecnologia de
ELISA para o diagnstico se referem necessi-
dade dos aparelhos para a lavagem das placas
e para a leitura da reao (espectofotmetro).
Para laboratrios com grande rotina diagnstica,
no entanto, esses custos se diluem pelo teste de
grande nmero de amostras. Uma ilustrao es-
quemtica da tcnica de ELISA est apresentada
na Figura 11.12.
4.2.5 Imunouorescncia/
imunoperoxidase
Embora seja mais utilizada para a deteco
de antgenos, a IFA tambm tem sido utilizada
com sucesso para a deteco de anticorpos contra
vrios vrus. O antgeno (protenas puricadas ou
clulas infectadas) , inicialmente, imobilizado
sobre um suporte slido (placa de poliestireno ou
lminas de microscopia). O soro-teste incubado
por um determinado perodo (geralmente 30 min
a 1 h), seguido da lavagem para a remoo dos
anticorpos no-ligados e pela adio do anticor-
po secundrio marcado com uorescena (FITC).
O anticorpo secundrio deve ser especco para
a espcie animal do soro-teste. A leitura do teste
realizada sob microscopia de UV, na qual se ob-
serva a emisso de luz uorescente quando h a
presena de anticorpos especcos contra o ant-
geno imobilizado. uma tcnica rpida e de fcil
execuo, porm freqentemente resulta em re-
sultados de difcil interpretao, pela ocorrncia
de reaes inespeccas. J foi utilizada para a de-
teco de anticorpos contra vrios vrus, porm,
atualmente, tem a sua utilizao restrita, princi-
palmente pelo desenvolvimento de tcnicas mais
especcas e objetivas e que no resultam em rea-
es inespeccas. No entanto, ainda possui apli-
cao no diagnstico sorolgico de alguns vrus,
como o circovrus suno, o PRRSV e o ASFV. A
tcnica de IPX tambm pode ser adaptada com
essa nalidade. Nesse caso, os anticorpos anties-
pcie so conjugados com as enzimas peroxidase
ou fosfatase alcalina.
Figura 11.12. Teste imunoenzimtico do tipo ELISApara
a deteco de anticorpos. As cavidades das placas esto
recobertas com o antgeno viral. O soro suspeito
adicionado e incubado por um determinado tempo (1-2
h), seguido de lavagem para a remoo dos anticorpos
no-ligados. Adiciona-se um anticorpo antiespcie do
primeiro anticorpo, conjugado com a enzima
peroxidase. Incuba-se e procede-se uma nova lavagem.
A seguir, adiciona-se o substrato. A mudana de cor no
substrato indica a presena de anticorpos no soro
suspeito.
Incubao
- soro-tes
Lavagem
te
Antgeno
viral
Anticorpos no
soro-teste
Anticorpo
antiespcie
Lavagem
Anticorpos
marcados
Adio do
substrato
Positivo
Negativo
Mudana
de cor
320 Captulo 11
4.2.6 Imunoblots
As tcnicas de imunoblot (Western, dot/slot
blots) podem ser utilizadas para a deteco de
anticorpos. Para tal, os antgenos do vrus sus-
peito devem ser solubilizados e imobilizados
em membranas de nitrocelulose ou nylon. Essa
imobilizao pode ser realizada diretamente pela
deposio do material em pontos na membrana
ou ser precedida pela separao das protenas
por eletroforese e posterior transferncia para a
membrana. A membrana , ento, incubada com
o soro-teste, seguida de lavagem e incubao
com um anticorpo espcie-especco marcado
com uma enzima (geralmente a peroxidase). A
presena do anticorpo especco no soro revela-
da pela ao da enzima no substrato, que resulta
em mudana de cor (substratos cromgenos) ou
em emisso de luminosidade (substrato lumines-
cente). Essa tcnica possui aplicaes especcas,
como o monitoramento da evoluo dos nveis
de anticorpos no curso da infeco, mas possui
limitada aplicao no diagnstico sorolgico de
rotina.
4.2.7 Fixao do complemento
A observao de que os anticorpos ao se
ligarem ao antgeno especco so capazes de
interagir com componentes do sistema do com-
plemente da espcie homloga e desencadear a
cascata de ativao, levou ao desenvolvimento da
tcnica de xao do complemento (FC). O efeito
dos componentes ativados do complemento (p.
ex: lise de eritrcitos) pode ser observado e um
indicador da presena de anticorpos na amostra-
teste. Na ausncia de anticorpos contra o agente,
no h ativao do complemento pela ausncia
da formao de complexos antgeno-anticorpo.
Nesse caso, no ocorre a lise dos eritrcitos. Essa
tcnica teve grande aplicao no diagnstico de
infeces vricas e bacterianas. Atualmente, po-
rm, possui aplicao bastante restrita e utili-
zada apenas em situaes especiais. As maiores
restries tcnica referem-se ao tempo para ob-
teno dos resultados (24 h) e ao fato de ser uma
tcnica muito trabalhosa e no-automatizvel.
4.2.8 Outras tcnicas sorolgicas
Vrios testes sorolgicos, baseados em cro-
matograa e imunoensaio, tambm se encontram
disponveis em kits, para a realizao a campo
(consultrios, clnicas). Dentre eles incluem-se o
teste para a deteco de IgG contra o CDV; an-
ticorpos totais contra o vrus da peritonite infec-
ciosa felina; anticorpos grupo-especcos contra
o vrus da imunodecincia felina. Esses testes
podem ser realizados com sangue total, plasma
ou soro e permitem a obteno do resultado em
minutos. Possuem, em geral, boa sensibilidade e
especicidade. A sua grande vantagem a pos-
sibilidade de uso em clnicas, paralelamente
investigao clnica. O custo de cada exame, no
entanto, relativamente alto, o que restringe o
seu uso populacional.
As tcnicas de radioimunoensaio e agluti-
nao em ltex, desenvolvidas inicialmente para
a deteco de antgenos, foram posteriormente
adaptadas para a deteco de anticorpos e uti-
lizadas em diagnstico sorolgico. A tcnica de
RIA foi sendo gradualmente substituda com
vantagem pelas tcnicas imunoenzimticas e atu-
almente encontra-se em desuso. A aglutinao
em ltex tem sido popularizada em kits, princi-
palmente para o diagnstico de viroses de peque-
nos animais. Esse mtodo tem sido utilizado em
clnicas e consultrios, tanto para a deteco de
antgenos como de anticorpos. As suas principais
vantagens so a simplicidade e a rapidez de exe-
cuo. Em geral, possuem sensibilidade e especi-
cidade compatveis com a sua nalidade.
5 Coleta e remessa de material
A qualidade do material que ingressa no la-
boratrio crtica para o sucesso do diagnstico.
Por isso, as etapas de coleta, acondicionamento,
conservao e remessa so to importantes quan-
to a realizao e interpretao dos testes laborato-
riais. E, assim, o papel dos prossionais de cam-
po e dos tcnicos de laboratrios envolvidos no
diagnstico se equivale em importncia.
A eleio do material adequado para a cole-
ta depende de conhecimentos sobre a biologia e
patogenia do agente. Uma vez eleito, o material
deve ser adequadamente coletado, acondiciona-
do e remetido ao laboratrio. O material destina-
do pesquisa de vrus vivel deve ser enviado
com a maior brevidade possvel. Na impossibi-
lidade de faz-lo em um curto espao de tempo,
este material deve ser armazenado sob condies
adequadas para preservar a viabilidade do agen-
te.
Descries detalhadas dos aspectos epide-
miolgicos, clnicos e patolgicos observados
a campo so muito teis para a elaborao do
diagnstico e devem fazer parte do histrico que
acompanha as amostras ao laboratrio.
A seguir, so apresentadas algumas regras
bsicas para orientar a tarefa de coleta e submis-
so de amostras clnicas para o diagnstico viro-
lgico. A Figura 11.13 ilustra, de maneira simpli-
cada, a seqncia de eventos que acompanham
as infeces vricas agudas e que devem ser con-
siderados para se determinar o tipo de material a
ser coletado e o momento mais apropriado para
faz-lo.
5.1 Eleio do material a ser coletado
A escolha do material a ser enviado para
exame depende de conhecimentos bsicos de cl-
nica e de patogenia das enfermidades vricas. Em
geral, coleta-se material dos sistemas e rgos
afetados pela patologia, nos quais h maior pro-
babilidade de se detectar o agente ou seus pro-
dutos. A coleta de material de animais doentes
deve ser realizada to logo se observe os sinais
clnicos, quando os nveis de replicao viral ge-
ralmente atingem os valores mais altos. Na ne-
cropsia, deve-se dar preferncia aos rgos e teci-
dos que apresentam alteraes macroscpicas. A
coleta de sangue para a sorologia recomendada
para uma variedade de infeces. A seguir, so
listados os materiais mais indicados para coleta,
de acordo com os sistemas afetados:
enfermidades respiratrias: secrees na-
sais, aspirados nasofarngeos, trato respiratrio
superior, pulmes;
enfermidades entricas: fezes, contedo
intestinal, segmentos intestinais, linfonodos re-
gionais;
doena genital: secrees genitais, smen;
conjuntivite: raspados conjuntivais, secre-
es;
pele: raspados cutneos, uidos vesicula-
res, fragmentos de pele;
doena neurolgica: secrees nasais, cre-
bro, uido crebro-espinhal;
doena sistmica: secrees nasais, fezes,
soro, sangue integral, linfonodos, bao;
fetos abortados: placenta, lquidos fetais,
timo, bao, pulmo, crebro;
outras doenas: soro, rgo ou tecido afe-
tado, secrees/excrees do sistema afetado.

5.2 Cuidados na coleta e
acondicionamento

Devem-se observar os seguintes cuidados
no momento da coleta de material e no seu acon-
dicionamento:
secrees nasais, oculares ou genitais de-
vem ser coletadas com o auxlio de suabes. Ape-
sar de existirem suabes para esse uso especco,
2 4 6 8 10 12 14 16 18
Vrus
Dias aps a infeco
Sinais clnicos
Resposta
imunolgica
Material
para:
Isolamento viral
Antgenos
cidos nuclicos
Sorologia
Sorologia pareada
Figura 11.13. Cintica da infeco viral e resposta
imunolgica, com indicao do momento de coleta de
material para diagnstico.
322 Captulo 11
muitas vezes no se encontram disponveis a
campo. Nesses casos, pode-se utilizar cotonetes
de uso humano, com a ressalva de que no de-
vem conter antisspticos e/ou outras substncias
qumicas. Os suabes devem ser coletados agres-
siva e profundamente na cavidade nasal, para
se aumentar a possibilidade de coletar material
que contenha o vrus e/ou clulas descamativas.
Aps a coleta, os suabes devem ser acondicio-
nados em meio apropriado, soluo siolgica
estril ou PBS e mantidos sob refrigerao (ver
abaixo);
tecidos e fragmentos de rgos devem ser
coletados individual e assepticamente, para mi-
nimizar a possibilidade de contaminao bacte-
riana e fngica. Para isso, pode-se utilizar lmi-
nas de bisturi, tesouras ou outros tipos de lmina.
Quando o rgo for volumoso (fgado, crebro),
deve-se coletar fraes representativas de vrias
reas. Os fragmentos de diferentes rgos devem
ser acondicionados em tubos ou em sacos plsti-
cos individuais e bem fechados;
fetos abortados podem ser enviados intei-
ros ou submetidos necropsia para a coleta de
tecidos e rgos;
fezes devem ser preferencialmente coleta-
das da ampola retal. Segmentos de intestino de-
vem ser coletados com o seu contedo. Para isso,
as extremidades da seo intestinal devem ser
bem amarradas com barbante;
sangue integral deve ser coletado com an-
ticoagulante (citrato, heparina ou EDTA). Geral-
mente, 2 a 3 mL (pequenos animais) e 5 a 10 mL
(grandes animais) so sucientes para os prop-
sitos a que se destinam;
a coleta de sangue para exames sorolgi-
cos deve ser realizada de modo a minimizar a
hemlise. Tubos estreis de plstico ou vidro so
recomendveis. Em geral, 1 a 2 mL de soro so
sucientes para a maioria dos testes;
raspados cutneos ou de mucosas devem
ser obtidos pelo uso de lminas estreis. Em algu-
mas situaes, lminas de vidro podem ser ade-
quadas para essa nalidade. A raspagem deve
ser capaz de coletar as clulas superciais da pele
e/ou das mucosas;
as embalagens (tubos e sacos plsticos) em
que as amostras sero acondicionadas devem ser
bem fechadas, para evitar o vazamento e mistura
do material ou a entrada de gua originada do
derretimento do gelo;
as embalagens devem ser rotuladas e
identicadas individualmente com caneta ou l-
pis. Deve-se evitar o uso de rtulos de papel que
se desprendam pelo umedecimento e de cane-
tas cuja tinta seja removida pelo contato com a
gua;
tubos de vidro ou de outro material fr-
gil devem ser acondicionados de forma a evitar a
sua ruptura durante o transporte.
5.3 Conservao e remessa
Os maiores cuidados com a conservao de-
vem ser dispensados aos materiais destinados ao
isolamento viral. Essas amostras devem ser pron-
tamente acondicionadas em recipientes estreis
(tubos, sacos plsticos, placas) e conservadas sob
temperaturas baixas. A resistncia dos vrus sob
temperaturas ambientais varia muito: certos v-
rus so muito resistentes (pox, polio, entero), en-
quanto outros so muito sensveis (BRSV, outros
paramixovrus). Por isso, o tempo entre a coleta
do material e a inoculao deve ser o mais breve
possvel. Se o intervalo entre a coleta e entrega ao
laboratrio for curto (at 2 a 3 dias), prefervel
manter o material refrigerado (a 4C). Se o tem-
po necessrio para a remessa e entrega do ma-
terial for superior a trs dias, deve-se optar pelo
seu congelamento. O sangue integral destinado
ao isolamento viral nunca deve ser congelado.
Alguns vrus (p. ex.: BRSV) so extremamente
sensveis a temperaturas ambientais altas, alm
de no resistirem a congelamentos/descongela-
mentos sucessivos. Em geral, pode-se adotar a se-
guinte regra: para horas ou at 2 a 3 dias, conser-
var o material a 4C; para mais tempo, congelar a
-20C ou -70C. Para a remessa, o material deve
ser acondicionado em caixas trmicas com gelo
reciclvel em abundncia. Tambm como regra:
quanto menor o tempo decorrido entre a coleta e
a inoculao do material, maior ser a probabili-
dade de se isolar o vrus.
Quando o sangue for destinado a exames so-
rolgicos, deve-se proceder separao do soro
( temperatura ambiente ou a 4-6C) previamente
ao envio. Aps a sua separao, o soro pode ser
conservado a 4-6C por vrios meses, sem afetar
a viabilidade e atividade biolgica das imuno-
globulinas. Quando o tempo at o teste for muito
prolongado, pode-se optar pelo congelamento
do soro. Nunca se deve congelar o sangue antes
da separao do cogulo, pois pode inutilizar a
amostra para ns diagnsticos.

5.4 Histrico
Todo o material para exame deve ser acom-
panhado por um histrico detalhado, no qual
devem constar informaes referentes amostra,
que podem ser necessrias para a elaborao do
diagnstico. Laboratrios de diagnstico geral-
mente possuem formulrios prprios que espe-
cicam as informaes requeridas em cada caso.
O histrico deve ser anexado na parte exterior
do recipiente, para evitar o seu umedecimento e
inutilizao. Se includo no interior do recipiente,
deve ser acondicionado em sacos plsticos pro-
va dgua.
5.5 Fluxograma dos procedimentos de
diagnstico
Cada laboratrio possui o seu prprio uxo-
grama de encaminhamento das amostras desti-
nadas ao diagnstico. A seguir sero descritas as
etapas de um protocolo-modelo (Figura 11.14):
logo aps o recebimento, o material deve
ser removido da embalagem de transporte e
acondicionado provisoriamente sob temperatura
adequada (geralmente em geladeira a 4-6C);
a seguir, deve-se registr-lo em um proto-
colo interno (livro ou arquivo);
a prxima etapa o encaminhamento para
a realizao do teste pertinente. O encaminha-
mento do material ao mtodo indicado depende
de uma anlise preliminar que objetiva denir o
agente (s) suspeito (s) e a metodologia a ser utili-
zada para diagnostic-lo. Nessa etapa, o histrico
que acompanha a amostra fundamental para a
tomada de deciso.
Ao se encaminhar a amostra para o diag-
nstico, deve-se considerar outros possveis pa-
tgenos e encaminhar parte do material para a
bacteriologia, micologia, toxicologia entre outras
(Figura 11.14).
Figura 11.14. Fluxograma de procedimentos realizados
narotina diagnstica.
Recebimento da
amostra e histrico
Registro
Formulao da hiptese
etiolgica
Encaminhamento
Realizao da tcnica
Leitura do teste
Interpretao do resultado
Envio do resultado
Bacteriologia
micologia
Patologia
toxicologia
Virologia
Amostras de soro geralmente so acompa-
nhadas de uma requisio especca (p. ex.: so-
rologia para BLV). Nesses casos, o encaminha-
mento simples. Algumas vezes, as amostras
so acompanhadas de um histrico clnico, sem
a indicao do exame requerido. Nesses casos, o
tcnico deve denir, com base no histrico, qual
o agente suspeito e encaminhar a amostra para o
respectivo exame. Pode-se tambm contatar o ve-
terinrio que submeteu a amostra para inquiri-lo
sobre a natureza do exame solicitado. Em labora-
324 Captulo 11
trios que realizam testes sorolgicos como parte
de programas de monitoramento de rebanhos,
comum a submisso de centenas ou milhares de
amostras de soro simultaneamente, as quais so
diretamente encaminhadas para a realizao dos
testes a que se destinam.
Quando a amostra submetida de outra na-
tureza (tecidos, secrees, fetos), pode-se exigir
uma anlise mais detalhada do histrico para for-
mular uma hiptese diagnstica e encaminhar o
material ao destino apropriado. Amostras desse
tipo podem ser acompanhadas pela requisio de
um determinado exame, o que simplica a toma-
da de deciso. Crebros de caninos ou bovinos
so freqentemente enviados com a solicitao
especca de diagnstico de raiva; fezes bovinas
so acompanhadas de uma requisio de diag-
nstico para rotavrus; smen bovino encami-
nhado para a pesquisa de herpesvrus, entre ou-
tros. Nesses casos, cabe ao tcnico do laboratrio
simplesmente encaminhar o material para a rea-
lizao do teste solicitado. Os tipos de exames a
serem realizados para cada material (e para cada
agente suspeito) so geralmente predetermina-
dos pelo laboratrio.
Outras vezes, o material enviado sem a
indicao de um agente suspeito e sem a requi-
sio especca de um exame. Nesses casos, cabe
ao laboratorista analisar o histrico e formular a
hiptese etiolgica a ser investigada. Com base
nessa hiptese, indicar o exame mais apropria-
do. A formulao da hiptese e o encaminha-
mento correto do material exigem conhecimentos
de Virologia, clnica, patogenia e epidemiologia
das doenas vricas e nem sempre so tarefas
fceis. Especialmente nesses casos, um histrico
detalhado reveste-se de grande importncia. Em
geral, a anlise do histrico, realizada luz dos
conhecimentos acima mencionados, permite a
formulao de uma hiptese, que pode envolver
um ou mais agentes suspeitos. Assim, o encami-
nhamento dever ser realizado objetivando a pes-
quisa e comprovao da hiptese. A seguir, sero
mencionados alguns exemplos de procedimentos
dessa natureza freqentemente adotados, e os di-
recionamentos indicados:
Caso 1. Material: secrees nasais.
Espcie: bovina.
Histrico: bezerros com sinais de doena
respiratria.
Hiptese etiolgica: quatro agentes virais
so mais comumente associados com doena res-
piratria em bezerros: BoHV-1, bPI-3, BVDV e
BRSV.
Encaminhamento: pesquisa de vrus por iso-
lamento em cultivo celular.
Caso 2. Material: crebro.
Espcie: bovina.
Histrico: doena neurolgica seguida de
morte.
Hiptese: dois agentes virais so mais fre-
qentemente associados com doena neurolgica
em bovinos: o vrus da raiva e o BoHV-5.
Encaminhamento: inicialmente investiga-se
o vrus da raiva por IFA. Em caso de resultado
negativo, investiga-se o BoHV-5, por IFA em im-
presses de crebro, PCR ou por isolamento vi-
ral.

Caso 3. Material: secrees nasais e raspa-
dos oculares.
Espcie: canina.
Histrico: lhotes com sinais respiratrios.
Hiptese: pode-se suspeitar de cinomose ou
de outra virose respiratria (adenovrus, parain-
uenza canina).
Encaminhamento: pode-se inicialmente pes-
quisar antgenos virais em clulas descamativas
nas secrees ou raspados por IFA ou por mto-
dos cromatogrcos (kits). Posteriormente pode-
se encaminhar para PCR ou isolamento, depen-
dendo do protocolo de cada laboratrio.
Caso 4. Material: feto abortado e membra-
nas fetais.
Espcie: suna.
Histrico: rebanho com problemas de abor-
to, mumicaes, natimortos.
Hiptese: dois agentes so mais comumente
associados com perdas reprodutivas em sunos:
o parvovrus e o PRRSV. No Brasil, ainda no foi
descrita a presena do PRRSV, ento, deve-se,
inicialmente, investigar o parvovrus.
Encaminhamento: pesquisa de atividade
hemaglutinante (HA) nos tecidos, membranas e
lquidos fetais.
Caso 5. Material: fezes.
Espcie: bovina.
Histrico: diarria em bezerros com poucos
dias de vida.
Hiptese: dois vrus so mais freqente-
mente associados com esses casos: o rotavrus e
coronavrus.
Encaminhamento: pesquisa de partculas v-
ricas por microscopia eletrnica.
Esses exemplos ilustram a importncia do
histrico clnico-patolgico junto com a amos-
tra submetida. A anlise do histrico pode ser
decisiva para direcionar o procedimento e mes-
mo para descartar possveis suspeitos. Algumas
vezes, amostras so enviadas sem o mnimo de
informaes, nem mesmo relativas natureza do
material ou espcie animal do qual foram cole-
tadas. Nesses casos, a formulao da hiptese e
o encaminhamento do material cam muito pre-
judicados, tornando muito difcil a obteno do
diagnstico correto.
5.6 Processamento das amostras
Dependendo da natureza das amostras e
dos testes a que se destinam, diferentes processa-
mentos so realizados previamente realizao
do exame. Para o isolamento de vrus em cultivo
celular, fragmentos de tecidos ou rgos devem
ser macerados com areia estril, homogeneizados
e centrifugados baixa rotao. O sobrenadan-
te deve, ento, ser inoculado. Secrees (nasais,
oculares, genitais) devem ser centrifugadas para
a remoo de debris celulares e sujidades; o so-
brenadante deve ser inoculado. Material conta-
minado (secrees, contedo intestinal, fezes)
deve ser ltrado em ltros acoplveis a seringas
para remover bactrias e fungos contaminantes
que possam interferir com o isolamento. As fe-
zes devem ser previamente diludas em meio de
cultivo ou PBS para reduzir a sua toxicidade. O
sangue integral deve ser centrifugado baixa ro-
tao, e a capa ogstica deve ser cuidadosamen-
te removida, ressuspendida em meio de cultivo e
inoculada nos cultivos. O smen deve ser diludo
em soro fetal bovino (1:5 ou 1:10) para reduzir a
toxicidade. Materiais destinados a outros mto-
dos de diagnstico so submetidos a um proces-
samento apropriado a cada tipo de exame.
5.7 Interpretao dos resultados
Os resultados dos testes laboratoriais devem
ser analisados conjuntamente com as informaes
que acompanham a amostra e interpretados luz
de conhecimentos de patogenia, clnica e epide-
miologia. Se analisados isoladamente, podem
conduzir a interpretaes incompletas e conclu-
ses equivocadas. A deteco de cidos nucli-
cos do BoHV-5 por PCR no crebro de bovinos
acometidos de doena neurolgica, por exemplo,
no deve ser considerada prova denitiva do en-
volvimento desse vrus na etiologia deste caso de
doena. Bovinos portadores da infeco latente
possuem o DNA viral em vrias partes do enc-
falo, sem que isso tenha signicado patolgico
ou que possa estar associado com ocorrncia da
doena em questo. Por outro lado, o resultado
negativo em um determinado teste laboratorial
no signica necessariamente que o material era
realmente negativo, pois as tcnicas apresentam
certo limite de sensibilidade e podem, ocasional-
mente, falhar em detectar o agente ou seus pro-
dutos. Da mesma forma, o resultado negativo no
isolamento viral no descarta denitivamente o
agente suspeito, pois condies inadequadas de
coleta e conservao do material podem ter afeta-
do negativamente a viabilidade do agente e pre-
judicado o teste. Por essas razes, os resultados
laboratoriais devem ser considerados como uma
parte de um conjunto de informaes necessrias
elaborao do diagnstico e no como o diag-
nstico em si.
Em todas as situaes, os resultados e a sua
interpretao devem ser transmitidos com a maior
brevidade possvel ao pessoal que os requisitou,
para que as medidas apropriadas muitas vezes
326 Captulo 11
dependentes dos resultados e de sua interpreta-
o possam ser adotadas.
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VACINAS VRICAS
Cludio Wageck Canal & Clarissa Silveira Luiz Vaz
12
1 Introduo
2 Formas de imunizao
2.1 Imunizao passiva
2.2 Imunizao ativa
3 Objetivos da vacinao
4 Tipos de vacinas
4.1 Vacinas replicativas
4.1.1 Vacinas com vrus patognico
4.1.2 Vacinas com vrus de espcie heterloga
4.1.3 Vacinas com vrus atenuado
4.1.4 Vetores vacinais
4.2 Vacinas no-replicativas
4.2.1 Vacinas com vrus inativado
4.2.2 Vacinas de subunidades virais
4.2.3 Vacinas de protenas recombinantes
4.2.4 Vacinas de peptdeos sintticos
4.3 Vacinas de DNA e RNA
4.4 Vacinas monovalentes e polivalentes
5 Adjuvantes
6 Controle de qualidade
7 Conservao e administrao de vacinas
8 Falhas vacinais
9 Reaes adversas da vacinao
10 Drogas antivirais
329
329
329
331
331
332
333
334
334
334
339
342
342
343
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345
346
347
347
350
350
352
353
354
11 Vacinas vricas licenciadas no Brasil
356
358
1 Introduo
No sculo 18, a varola afetava e matava mi-
lhes de pessoas em todo o mundo. Naquela po-
ca, a prtica utilizada para evitar a doena era a
exposio das pessoas a uma pequena quantidade
de material obtido de leses cutneas de varola.
Isto tinha como objetivo provocar uma infeco
controlada, que seria seguida de resposta imuno-
lgica e proteo frente a uma nova exposio ao
agente. A prtica, conhecida como variolao, era
originria da China e, embora bastante difundida
nas reas endmicas, no era considerada segura,
j que uma signicativa parcela dos indivduos
que eram submetidos ao procedimento desenvol-
via a doena aps a exposio.
Em seus estudos sobre a varola humana,
o mdico Edward Jenner observou que os orde-
nhadores de vacas afetadas pela varola bovina
no desenvolviam a forma humana da enfer-
midade, o que sugeria algum tipo de proteo
cruzada. Em 1796, para comprovar a sua teoria,
Jenner coletou material de leses de varola do
bere de uma vaca e o administrou a um menino
de oito anos de idade. Alguns meses mais tarde,
ele exps esta criana ao vrus da varola humana
(smallpox) que, conrmando suas suspeitas, no
produziu a doena. Jenner demonstrou, com esta
prtica, que a exposio prvia ao vrus da va-
rola bovina, um patgeno de baixa virulncia,
conferia proteo frente ao desao com o vrus
da varola, antigenicamente relacionado ao vrus
bovino, porm mais virulento. Posteriormente,
na dcada de 1870, Louis Pasteur utilizou o ter-
mo vacina (do Latim, vaccinia; termo derivado de
vaca) como forma de homenagem a Jenner, para
designar a prtica da administrao de patge-
nos a indivduos sadios com o objetivo de indu-
zir resposta imunolgica, numa poca em que as
bases tericas da imunizao ainda eram pouco
conhecidas.
As vacinas consistem em microorganismos
ou fraes destes que, quando administradas a
um indivduo, induzem uma resposta imunol-
gica capaz de proteger frente ao contato posterior
com o agente original. A resposta imunolgica
que induzida resulta do desenvolvimento de
clulas efetoras e de clulas de memria. A va-
cinao constitui-se na estratgia mais efetiva de
preveno e controle de vrias enfermidades hu-
manas e veterinrias causadas por vrus. Diver-
sas viroses animais e humanas j foram ou esto
sendo controladas e erradicadas de pases e con-
tinentes graas vacinao. A varola foi erradi-
cada do mundo h trs dcadas. Doenas como a
poliomielite e sarampo esto em vias de erradica-
o. Doenas animais como a febre aftosa, peste
suna clssica, doena de Aujeszky, entre outras,
tambm foram erradicadas de pases e continen-
tes inteiros pelo uso sistemtico da vacinao.
A tecnologia empregada para a produo
de vacinas contra vrus apresentou um valioso
avano com o domnio das tcnicas de cultivo de
clulas, a partir das quais foi possvel otimizar a
atenuao e a multiplicao de diversos agentes
virais. No entanto, apesar dos avanos recentes na
vacinologia, muito ainda pode ser obtido atravs
da tecnologia de DNA recombinante, que permite
a manipulao do genoma viral e a produo de
vacinas cada vez mais ecientes e seguras. Entre
os desaos para a indstria de imunobiolgicos,
est a adequao das tecnologias surgidas nas l-
timas dcadas frente demanda cada vez maior
por segurana, bem-estar e produtividade.
2 Formas de imunizao
O termo imunizao se refere induo de
imunidade frente a um determinado agente ou
antgeno. De acordo com a participao do siste-
ma imunolgico na produo dessa imunidade,
dois tipos principais de imunizao podem ser
reconhecidos: imunizao passiva ou ativa. A
imunizao passiva pode ser natural (pela pla-
centa, colostro ou gema) ou articial (adminis-
trao de soro hiperimune). A imunizao ativa
ocorre pela exposio do animal ao agente infec-
cioso (infeco) ou por vacinao.
2.1 Imunizao passiva
A imunizao passiva resulta da transfern-
cia de anticorpos especcos pr-formados atra-
vs da placenta ou do colostro materno ao lhote
mamfero; da gema do ovo em aves, ou da admi-
nistrao de soro hiperimune. Nesses casos, no
330 Captulo 12
h a produo de resposta especca pelo siste-
ma imunolgico do hospedeiro. Ao contrrio, o
hospedeiro recebe os anticorpos pr-formados.
A imunidade passiva de extrema importncia
para neonatos e em situaes em que necessria
uma rpida resposta frente a um patgeno ou an-
tgeno especco, como nos casos de exposio a
toxinas ou doenas de carter letal, como a raiva.
A capacidade de transferncia de imunida-
de humoral atravs da placenta varia de acordo
com caractersticas peculiares de cada espcie.
A placenta humana, de outros primatas, de roe-
dores e de carnvoros permite a transferncia de
anticorpos da classe IgG durante a gestao. A
placenta de ruminantes, eqdeos e sudeos, no
entanto, virtualmente impermevel passagem
de imunoglobulinas. Nessas espcies, a imuniza-
o passiva depende exclusivamente da ingesto
do colostro nas primeiras horas de vida, quando o
epitlio intestinal permevel absoro dessas
molculas. Neste caso, o perodo que os anticor-
pos sero capazes de proteger depende da quan-
tidade de colostro ingerida pelo lhote em tempo
hbil. A durao da imunidade passiva recebida
pelo colostro varia entre as espcies e depende
de vrios fatores, incluindo o ttulo de anticorpos
maternos, concentrao de imunoglobulinas no
colostro, quantidade de colostro ingerida, quan-
tidade de imunoglobulinas efetivamente absorvi-
das e taxa de crescimento corporal.
Por outro lado, a imunidade passiva pode
interferir na produo de imunidade ativa resul-
tante de uma subseqente vacinao dos animais
jovens. Em geral, quanto maior a concentrao
plasmtica de anticorpos maternos, menor ser
a eccia da vacinao. A imunidade induzida
por vacinas com vrus atenuado menos afetada
pela imunidade passiva do que a induzida por
vacinas inativadas. A imunidade colostral pode
ser sistmica, quando mediada por IgG que so
absorvidas na mucosa intestinal e ganham acesso
ao sangue. Por outro lado, IgAs ingeridas com o
colostro podem conferir proteo local pela neu-
tralizao de microorganismos no lmen intes-
tinal. O decrscimo gradual dos nveis de anti-
corpos adquiridos passivamente seguido pelo
surgimento de anticorpos produzidos ativamen-
te, frente infeco natural ou vacinao (Figura
12.1).
A avicultura industrial um bom exemplo
da utilizao em larga escala da imunidade passi-
va para o controle de doenas virais importantes.
As fmeas reprodutoras recebem vrias doses
de vacinas que visam proteger passivamente a
sua prognie contra a infeco por alguns pat-
genos aos quais os pintos so expostos nos pri-
meiros dias de vida. Apesar de ser inicialmente
dispendioso, o custo-benefcio deste programa
de vacinao acaba sendo favorvel, pois cada
fmea gera aproximadamente 150 pintos imu-
nizados passivamente. Este tipo de imunidade
fundamental para a proteo dos pintos contra o
vrus da doena infecciosa da bursa de Fabricius
(IBDV), reovrus das aves e vrus da encefalomie-
lite aviria.
A vacinao de fmeas, antes ou depois da
cobertura, para induzir a produo de anticorpos
que sejam posteriormente transferidos aos re-
cm-nascidos pelo colostro, tambm um mto-
do muito utilizado para prevenir doenas vricas
de neonatos, como a rotavirose e coronavirose
suna e bovina. Em tese, fmeas imunes contra
qualquer agente viral iro transferir essa imuni-
dade aos fetos ou neonatos, conferindo proteo
nas primeiras semanas de vida.
A resposta imunolgica conferida pela imu-
nizao passiva tipicamente de curta durao,
pois baseada nos anticorpos que so adminis-
trados e no na resposta do hospedeiro. Essa imu-
nidade no possui memria e perdura somente o
Figura 12.1. Evoluo da imunidade passiva e ativa nas
primeiras semanas/meses devida.
N
v
e
l
d
e
a
n
t
i
c
o
r
p
o
s
Semanas (meses)
Imunidade passiva
Imunidade ativa
Vacinas vricas 331
perodo em que os anticorpos transferidos no so
degradados pelo organismo do hospedeiro. Ape-
sar dessas caractersticas, a imunidade passiva
fundamental no s para a defesa de neonatos,
mas tambm em situaes na quais necessria
uma resposta imediata. Para combater a infec-
o pelo vrus da cinomose (CDV), por exemplo,
pode-se administrar soro hiperimune especco
aos ces doentes, na tentativa de auxiliar o seu
organismo a combater a infeco. Tambm os in-
divduos expostos ao vrus da raiva (RabV) de-
vem receber a aplicao do anti-soro especco,
j que uma imunizao ativa provavelmente no
teria tempo hbil para proteger antes do nal do
perodo de incubao.
2.2 Imunizao ativa
A imunidade ativa pode resultar tanto da ex-
posio ao patgeno por infeco natural quanto
da administrao do antgeno em vacinas espec-
cas. Como resultado, o sistema imunolgico do
hospedeiro estimulado pelo antgeno ao qual
foi exposto. A magnitude e durao da respos-
ta imunolgica dependem de fatores do hospe-
deiro, como a presena de anticorpos adquiridos
passivamente, idade e imunocompetncia do
hospedeiro; e de vrios fatores da vacina. Como
regra, considera-se que a resposta imunolgica
mais efetiva e duradoura aquela induzida pela
infeco natural. Portanto, quanto mais as vaci-
nas mimetizarem a infeco natural, melhor ser
a resposta imunolgica. Por isso, acredita-se que
as vacinas com vrus replicativos (ou vivos) se-
jam as mais efetivas, pois so as que mais se asse-
melham infeco natural.
Alm da vacinao clssica, outras formas
de imunizao ativa tm sido ocasionalmente uti-
lizadas em alguns sistemas. Por exemplo, leitoas
susceptveis ao parvovrus suno (PPV) podem
ser expostas a fezes ou a ambientes contamina-
dos com o vrus, de modo a adquirirem a infec-
o (que benigna nesses animais) e se tornarem
imunes. Posteriormente, se forem expostas ao
agente durante a gestao, estaro imunizadas e
os seus fetos estaro protegidos contra a infeco.
Da mesma forma, alguns pecuaristas mantm o
hbito de expor os cordeiros s crostas de ectima
contagioso obtidas de ovinos adultos, buscando
a proteo contra uma subseqente exposio
ao vrus. Essas formas empricas de imunizao
apresentam alguns riscos, pois podem expor os
animais a outros agentes patognicos, alm da
incerteza com relao inocuidade do vrus ad-
ministrado.
De acordo com o tipo de antgeno envolvido
na exposio inicial, a imunidade resultante pode
ser do tipo humoral, celular ou ambas. Na imuni-
zao passiva, a imunidade obtida tipicamente
humoral e de curta durao. Na imunizao ati-
va, a resposta imunolgica geralmente de maior
magnitude e durao. A maior durao da imu-
nidade ativa deve-se principalmente produo
de linfcitos especcos de vida longa, chamados
genericamente de linfcitos de memria.
3 Objetivos da vacinao
As vacinas so utilizadas com o objetivo de
induzir a formao de uma resposta imunolgi-
ca especca capaz de combater o agente frente
a uma nova exposio. Assim, as vacinas devem
ser efetivas para induzirem proteo e segu-
ras, para no produzirem doena no hospedeiro.
Nesse sentido, as vacinas inativadas so consi-
deradas mais seguras se comparadas com as va-
cinas vivas atenuadas, uma vez que no ocorre
replicao do agente ou risco de reverso viru-
lncia. Por outro lado, os vrus presentes nas va-
cinas vivas possuem a capacidade de replicao
no organismo hospedeiro, estimulando a imuni-
dade humoral e celular. Por isso, as vacinas vivas
(ou replicativas) so consideradas mais ecientes
na induo de proteo.
A efetividade vacinal est relacionada com a
capacidade de estimulao de clulas apresenta-
doras de antgenos, seguida da liberao das ci-
tocinas apropriadas. As vacinas devem estimular
linfcitos T e B, gerando um nmero adequado
de clulas de memria especcas para o antge-
no inoculado. Devem ainda estimular a produo
de linfcitos T auxiliares (Th) e T citotxicos (Tc)
especcos para diferentes epitopos do antge-
no vacinal. O antgeno contido na vacina dever
persistir, preferivelmente, em locais especcos
do tecido linfide, permitindo que continue esti-
mulando as clulas do sistema imunolgico.
332 Captulo 12
A induo de resposta imunolgica media-
da por linfcitos T (imunidade celular), que pode
ser obtida de acordo com o tipo de vacina utiliza-
da, uma das mais efetivas defesas do organismo
contra os vrus. Igualmente importante a capa-
cidade de estimular a produo de anticorpos
neutralizantes, capazes de neutralizar os vrions
circulantes e, dessa forma, evitar a infeco de
novas clulas.
De modo ideal, espera-se que uma vacina
seja capaz de conferir proteo prolongada do in-
divduo frente a uma nova exposio ao agente,
caracterizando a imunidade de longa durao.
Espera-se, portanto, a estimulao de memria
imunolgica, que ir permitir uma resposta imu-
nolgica mais intensa frente a uma nova expo-
sio ao vrus. Vacinas contra vrus de animais
devem apresentar caractersticas especcas, tais
como: facilidade de administrao, custo de aqui-
sio acessvel, estabilidade do produto durante
o armazenamento e, aps a inoculao no orga-
nismo, adequao para programas de vacinao
em massa e capacidade de estimular imunidade
forte e duradoura. Devem ainda causar o menor
nmero possvel de efeitos colaterais, e no afetar
o desempenho produtivo dos animais.
Em termos prticos, os objetivos da vacina-
o incluem: a) prevenir a infeco (imunidade
esterilizante), o que virtualmente impossvel
com as vacinas atuais. Mesmo em animais ade-
quadamente vacinados, a exposio subseqen-
te seguida de replicao inicial do agente; b)
prevenir a doena clnica e suas conseqncias
(esse objetivo pode ser alcanado por vrias va-
cinas animais); c) atenuar a doena clnica e suas
conseqncias (para algumas viroses, as vacinas
somente conseguem atenuar ou reduzir a inten-
sidade e severidade dos sinais, reduzindo as con-
seqncias da doena); d) proteger o feto. Para
vrias viroses (diarria viral bovina e parvoviro-
se suna, por exemplo), as maiores conseqncias
da infeco resultam das perdas fetais. Nesses
casos, a vacinao objetiva imunizar as mes
para que a sua resposta imunolgica proteja e
impea a infeco fetal; e) proteger os neonatos.
Para viroses que afetam os animais nas primei-
ras semanas de vida (rotavirose, coronavirose),
a imunizao das fmeas visa conferir proteo
passiva aos recm-nascidos; f) reduzir a excre-
o viral. Animais vacinados, se posteriormente
expostos ao agente, devem excretar o vrus em
menores quantidades e por menos tempo, redu-
zindo, assim, a sua disseminao e transmisso;
g) erradicar o agente da populao. A vacinao
contra determinados vrus, mais do que prevenir
e/ou atenuar a doena clnica, objetiva criar, na
populao, uma imunidade protetora que torne
invivel a circulao e perpetuao do agente.
Esse tipo de cobertura denomina-se imunidade de
populao ou de rebanho.
Em situaes em que o uso de imungenos
pode dicultar o diagnstico sorolgico da doen-
a e, com isso, dicultar programas de controle
ou erradicao, a deciso sobre o uso de vacina-
o deve ser criteriosamente avaliada.
4 Tipos de vacinas
Diferentes tipos de vacina contra vrus esto
licenciados para uso veterinrio, sendo a maio-
ria composta por vrus inativados ou por vrus
vivos atenuados. A utilizao de novas tecnolo-
gias, principalmente envolvendo a manipulao
gentica (tecnologia de DNA recombinante), tem
originado inmeros estudos e expectativas no
surgimento de novas opes de vacinas. Algu-
mas vacinas recombinantes j esto no mercado,
enquanto vrias outras esto em fase de desen-
volvimento ou de testes. Para algumas dessas
vacinas, no entanto, muitos estudos ainda so ne-
cessrios para a comprovao de sua segurana e
eccia; motivo pelo qual ainda possuem pouca
participao no mercado veterinrio. Por outro
lado, algumas vacinas produzidas por mtodos
clssicos, h dcadas, ainda conservam o seu es-
pao devido sua eccia e segurana. Vacinas
autgenas de uso individual, produzidas com
material coletado do animal a ser vacinado, so
ainda uma das melhores formas de controle da
papilomatose bovina e canina, demonstrando
maior ecincia se comparadas com outros tipos
de vacinas. Os diferentes tipos de vacinas contra
vrus, j licenciadas ou ainda em fase de desen-
volvimento, esto apresentados na Tabela 12.1.
Vacinas vricas 333
4.1 Vacinas replicativas
So vacinas que contm o vrus vivel (vivo,
replicativo) e, por isso, proporcionam a replicao
do agente no organismo hospedeiro, resultando
na amplicao viral e no aumento da quanti-
dade de antgeno que apresentada ao sistema
imunolgico. Essas vacinas comportam-se de
modo semelhante ao vrus em infeces naturais.
Os vrus vivos podem ser utilizados como vaci-
nas em diferentes apresentaes (Figura 12.2).
Gnero
1. Replicativas
(vrus vivo)
Vrus patognicos
Vrus heterlogos
Vrus atenuados
Vetores virais
Vrus naturalmente atenuados;
Vrus atenuados por passagens em cultivo celular;
Vrus atenuados por passagens em ovos embrionados;
Vrus atenuados por passagens em espcie heterloga;
Vrus temperatura-sensveis;
Vrus modificados pela deleo de genes;
Vacinas com marcadores antignicos.
Vrus inativado
Produtos de vrus
Subunidades de vrus;
Protenas recombinantes;
Peptdeos sintticos.
2. No-replicativas
(sem vrus vivo)
3. DNA/RNA Contm o gene da protena de interesse.
Tabela 12.1. Tipos devacinas vricas
Tipo Caractersticas/propriedades
Figura 12.2. Tipos devacinas quecontmovrus vivel, replicativo.
Vrus
patognico
Vacinas replicativas
(vrus vivo)
Vrus
heterlogo
Vrus
atenuado
Vetores
vacinais
Vetores
virais
Vetores
bacterianos
Naturalmente
atenuado
Atenuao por
mtodos clssicos
Atenuao por
manipulao gentica
Vrus temperatura-
sensvel
Passagens
em cultivo
celular
Passagens
em ovos
embrionados
Passagens
em animais
Deleo
de genes
Vacinas
diferenciais
334 Captulo 12
4.1.1 Vacinas com vrus patognico
Em casos especcos, os prprios vrus com
potencial patognico, sem atenuao ou trata-
mento prvio, podem ser utilizados como vacina.
Ovinos infectados pelo vrus do ectima contagio-
so apresentam leses na regio oral e focinho,
desenvolvendo uma resposta imunolgica pro-
tetora aps a primeira exposio ao vrus. Ain-
da freqente a prtica de expor os cordeiros s
leses de ectima contagioso (crostas), buscando
induzir o desenvolvimento de imunidade. Este
procedimento se assemelha muito prtica re-
alizada na poca da variolao humana. Outra
forma de vacinao contra o ectima o uso de
uma vacina comercial contendo o vrus patogni-
co, porm inoculado atravs de escaricao na
pele da face interior da coxa, onde o vrus no
causa os sintomas indesejveis. Para a parvoviro-
se suna, a exposio prvia de leitoas primparas
s fezes de sunos adultos (que provavelmente j
entraram em contato com o vrus) pode conferir
imunidade e prevenir a ocorrncia de perdas re-
produtivas, caso sejam infectadas posteriormen-
te, durante a gestao.
4.1.2 Vacinas com vrus de espcie
heterloga
Alguns vrus, que so antigenicamente rela-
cionados com outros vrus, podem ser utilizados
para induzir imunidade em determinadas esp-
cies nas quais no causam doena. O poxvrus
bovino antigenicamente semelhante ao vrus da
varola humana e, como comprovado pelos estu-
dos clssicos de Jenner, pode induzir imunidade
em humanos. Os poxvrus de outras espcies de
aves tambm tm sido utilizados para induzir
proteo de galinhas contra a bouba (varola avi-
ria). Um herpesvrus de perus j foi utilizado
para imunizar galinhas contra a doena de Ma-
rek, causada por um herpesvrus antigenicamen-
te relacionado. Da mesma forma, o rotavrus bo-
vino j foi utilizado para imunizar sunos contra
a rotavirose suna. O vrus da parainuenza 3 de
bovinos j foi utilizado para imunizar crianas
contra o vrus da parainuenza 3 de humanos.
Nesses casos, o vrus vacinal apatognico para
a espcie vacinada e induz proteo cruzada con-
tra um vrus antigenicamente semelhante ao da
espcie.
4.1.3 Vacinas com vrus atenuado
Vrus que apresentam maior patogenicida-
de e virulncia precisam ser submetidos a proce-
dimentos especcos para reduzir o seu potencial
patognico e viabilizar a sua utilizao como va-
cinas replicativas. Do contrrio podem produzir
doena e, at mesmo, mortalidade nos animais
vacinados. Esses procedimentos devem preservar
as suas caractersticas antignicas e a capacidade
replicativa. A reduo do potencial patognico
do agente denomina-se genericamente atenuao,
e o agente com a patogenicidade reduzida dito
atenuado. As vacinas que contm o vrus replicati-
vo, capaz de se multiplicar no organismo do ani-
mal inoculado, so denominadas genericamente
de vacinas vivas, vacinas atenuadas ou vacinas
com vrus vivo modicado.
Em geral, os vrus vacinais atenuados repli-
cam nos tecidos prximos ao local da inoculao,
produzem pouca ou nenhuma disseminao sis-
tmica e, por isso, geralmente no produzem do-
ena nos animais vacinados, ou seja, a vacinao
com vrus atenuado se constitui em uma infeco
controlada ou restrita.
A imunidade conferida por vacinas atenua-
das , geralmente, de maior magnitude, amplitu-
de (resposta celular e humoral) e durao do que
a imunidade induzida pelas vacinas com vrus
inativado. Vacinas atenuadas esto disponveis
contra a doena de Marek das galinhas, parvo-
virose e cinomose canina, rinotraquete felina,
encefalomielite aviria, rinotraquete infecciosa e
diarria viral bovina, entre muitas outras.
A imunidade conferida geralmente prolon-
gada e reduz ou mesmo elimina a necessidade de
se realizar revacinaes com a mesma vacina. A
resposta vacinal ser melhor quando a vacina for
capaz de mimetizar a infeco natural e estimular
uma resposta imunolgica especca; de magni-
tude, espectro e durao adequados. As vacinas
de vrus atenuados tm a capacidade de induzir
uma replicao viral limitada no organismo hos-
pedeiro, que, no entanto, de boa amplitude e
Vacinas vricas 335
capaz de estimular resposta imunolgica sem re-
sultar no desenvolvimento de sinais clnicos im-
portantes. O tipo de imunidade obtido aquele
considerado ideal para uma vacina, havendo es-
timulao dos mecanismos da resposta imunol-
gica inata e adaptativa. Nesta ltima, so geradas
respostas celular (linfcitos Th e Tc) e humoral
(linfcitos B, anticorpos), alm de imunidade
de mucosas, o que conveniente no caso de se
buscar proteo contra uma infeco natural que
ocorra em superfcies mucosas.
Esse tipo de vacina, entretanto, no consi-
derado totalmente seguro para todos os vrus, em
razo da possibilidade, embora rara, de reverso
virulncia da cepa viral original. Por esse moti-
vo, a sua administrao no recomendada para
indivduos imunodeprimidos, nos quais pode
causar a doena. Cabe ressaltar que as mutaes
que so induzidas nos processos de atenuao vi-
ral so produzidas ao acaso e, na maioria das ve-
zes, so desconhecidas. Isso signica que difcil
prever as circunstncias nas quais poderia ocor-
rer a reverso virulncia. Por exemplo, algumas
cepas atenuadas de vrus da laringotraquete in-
fecciosa das galinhas (ILTV) so capazes de rever-
ter-se forma virulenta aps algumas passagens
em aves no vacinadas. Dessa forma, a utilizao
dessa vacina reservada somente para as regies
onde o vrus endmico ou em surtos da doena.
Vacinas atenuadas contra o herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1) e vrus da diarria viral bovina
(BVDV) retm a sua capacidade de infectar o feto
e causar perdas reprodutivas, por isso no devem
ser administradas a fmeas prenhes.
Os vrus atenuados utilizados em vacinas
podem ser pouco patognicos naturalmente ou
podem ser atenuados por mtodos articiais. A
maioria das vacinas atenuadas disponveis atu-
almente foi obtida pela atenuao proposital do
agente, por diferentes mtodos.
4.1.3.1 Vrus naturalmente atenuado
Determinadas cepas virais so naturalmente
pouco virulentas e, assim, podem ser utilizadas
em vacinas vivas sem a necessidade de atenua-
o prvia. Um exemplo est na utilizao de
vrus dos sorotipos 2 e 3 do vrus da doena de
Marek, para proteger os pintos contra o soroti-
po 1 oncognico. O sorotipo 2 pode ser isolado
de galinhas, e o tipo 3 pode ser isolado de pe-
rus, sendo ambos apatognicos, mas capazes de
proteger as galinhas contra os tumores induzidos
pelo vrus patognico. Provavelmente a grande
maioria dos vrus animais apresente alguma cepa
pouco virulenta circulando na populao ou na-
turalmente atenuada e que poderia ser utilizada
como vacina. No entanto, o procedimento mais
utilizado para a produo de vacinas atenuadas
a induo de atenuao de cepas originalmente
patognicas.
4.1.3.2 Atenuao por passagens em
cultivo celular
Em 1974, foi desenvolvida uma vacina ate-
nuada contra a varicela, a partir de uma cepa vi-
ral denominada Oka, obtida de um isolado clnico
do vrus da varicela-zoster (VZV). Essa cepa foi
propagada sucessivamente em cultivos de bro-
blastos de embrio de cobaias e em clulas WI38.
O objetivo da propagao em cultivo celular era
obter a atenuao do vrus, de modo a adapt-lo
a um ambiente diferente daquele encontrado no
hospedeiro natural, sem eliminar a capacidade
de replicao viral. No caso da cepa Oka, utiliza-
da na prolaxia da varicela, a vacina resultante
capaz de induzir uma forte imunidade frente ao
vrus sem produzir sinais clnicos nos indivduos
vacinados, ou seja, o vrus vacinal desprovido
de patogenicidade e virulncia, propriedades que
caracterizam a atenuao viral.
Seguindo esse mesmo princpio, passagens
sucessivas de vrus em cultivos de clulas se cons-
tituem, atualmente, na maneira mais comum de
se obter atenuao de vrus para uso em vacinas.
Essa prtica tem sido adotada para a atenuao
da maioria das vacinas vricas vivas disponveis
para uso veterinrio. As passagens podem ser
realizadas em linhagens celulares de espcies di-
ferentes daquela para a qual a vacina se destina.
Alternativamente, pode-se realizar passagens em
clulas da mesma espcie, porm de tecido ou r-
go diferente daqueles infectados naturalmente
pelo vrus. Uma das formas de se obter a atenu-
ao do CDV, que naturalmente infecta clulas
336 Captulo 12
linfides, a realizao de passagens sucessivas
do vrus em cultivo de clulas renais de origem
canina.
Aps vrias passagens em cultivo celular,
existe uma tendncia ao acmulo de mutaes
pontuais no genoma viral, e a freqncia dessas
mutaes maior nos vrus RNA. O acmulo de
mutaes, algumas provavelmente em genes as-
sociados com a virulncia, eventualmente resulta
na atenuao do vrus, ou seja, o vrus se adapta
aos cultivos e perde algumas funes necessrias
para a sua virulncia na espcie hospedeira. Uma
vez atenuado, este vrus pode ser utilizado em
vacinas. Uma das maiores restries a esse tipo
de vacina o desconhecimento da base gentica
da atenuao. Se a atenuao for devida a uma ou
a poucas mutaes, existe o risco de reverso ao
fentipo virulento aps a administrao ao ani-
mal. Dentre as vacinas vricas com vrus vivo de
uso humano e veterinrio, a grande maioria foi
obtida por este mtodo.
ovos embrionados
A realizao de mltiplas passagens em
embries de galinha tambm tem sido utilizada
como forma de se atenuar vrus para uso em va-
cinas. Esse procedimento pode ser utilizado tanto
para vrus de aves como para vrus de mamfe-
ros que replicam em embries de galinha. Dentre
os vrus avirios que foram atenuados por pas-
sagens em ovos embrionados destacam-se o v-
rus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV) e
o vrus da inuenza. Vacinas contra a inuenza
de mamferos (sunos e eqinos) tambm foram
produzidas pela atenuao do vrus em ovos em-
brionados. A exemplo das vacinas atenuadas por
passagens em cultivos celulares, a restrio maior
desse tipo de vacina o desconhecimento da base
gentica da atenuao, havendo o risco potencial
de reverso virulncia.
Alm de vrus avirios, diversos outros v-
rus podem ser atenuados desse modo. Vacinas
atenuadas atravs da passagem do vrus em
embries de galinha j foram produzidas con-
tra o CDV, vrus da lngua azul (BTV) e da raiva
(RabV). A reduo da virulncia, aps um deter-
minado nmero de passagens, pode ser conr-
mada por ensaios laboratoriais e pela inoculao
do vrus na espcie de interesse. Essa uma etapa
indispensvel para a certicao da vacina como
atenuada e estvel.
espcie heterloga
Os vrus destinados para uso em vacinas
tambm podem ser atenuados por mltiplas pas-
sagens em uma espcie heterloga, geralmente
animais de laboratrio (coelhos, camundongos,
cobaias). Esse mtodo, embora seja pouco prtico
e cada vez menos desejvel quando comparado
ao uso de cultivo celular, o mais adequado para
a atenuao de determinados vrus, como o RabV
e alguns arbovrus.
A espcie animal utilizada para a atenuao
viral pode tambm ser prxima espcie para a
qual a vacina destinada. Vacinas contra o CDV
podem ser atenuadas por passagens sucessivas
do vrus em fures. J a cepa chinesa do vrus da
peste suna clssica (CSFV), mundialmente uti-
lizada como vacina viva, foi atenuada por pas-
sagens sucessivas em coelhos. H algumas dca-
das, vacinas contra a raiva eram produzidas pela
inoculao sucessiva em crebro de coelhos.
4.1.3.5 Vrus temperatura-sensveis (TS)
Vrus atenuados para uso em vacinas podem
tambm ser obtidos pela seleo de variantes que
apresentam capacidade limitada de replicar sob
temperatura corporal (37C), mas que replicam
com ecincia sob temperaturas mais baixas (30-
33C). Os vrus que apresentam essas caracters-
ticas so denominados vrus TS. Para a obteno
dos variantes TS, o vrus cultivado em clulas
sob temperaturas mais baixas que a temperatura
do organismo hospedeiro (geralmente 30-33C).
Isso resulta na seleo de variantes virais capazes
de replicar ecientemente nessa temperatura. Es-
ses vrus, geralmente, no so capazes de replicar
temperatura corporal e, por isso, no causam
infeco sistmica quando administrados ao hos-
pedeiro. Esse tipo de vacina possui aplicao es-
pecial em viroses respiratrias, como a inuenza
Vacinas vricas 337
(gripe) humana e na infeco pelo BoHV-1 em
bovinos.
As vacinas TS so geralmente indicadas para
administrao intranasal. Aps a administrao,
o vrus vacinal replica prximo superfcie cor-
poral (na mucosa nasal), onde a temperatura
inferior temperatura corporal. Uma vacina TS
contra o vrus da inuenza foi licenciada para uso
humano nos Estados Unidos, enquanto uma va-
cina TS contra o BoHV-1 j utilizada em vrios
pases, inclusive no Brasil. Uma das principais
vantagens das vacinas TS contra o BoHV-1 a se-
gurana, pois o vrus vacinal infecta as clulas do
local da inoculao, mas no capaz de replicar
temperatura corporal. Com isso, o BoHV-1 TS
teoricamente incapaz de se disseminar de for-
ma sistmica e infectar o feto, cuja infeco pode
causar aborto.
4.1.3.6 Vrus atenuados por deleo de
genes
Quando os genes envolvidos na virulncia
de um vrus so conhecidos, possvel introduzir
alteraes direcionadas no genoma viral atravs
de manipulao gentica. Vacinas deletadas so
obtidas pela remoo ou inativao de genes re-
lacionados com a virulncia, utilizando tcnicas
de DNA recombinante. Os mutantes virais que
so produzidos preservam a capacidade de re-
plicao e, por isso, retm a sua capacidade imu-
nognica. No entanto, so incapazes de causar
doena porque apresentam pouca ou nenhuma
virulncia.
O vrus deve se manter vivel aps a mani-
pulao gentica e a estabilidade desta mutao
pode ser evidenciada aps vrias passagens em
cultivo celular. Como em qualquer outra meto-
dologia empregada para se obter a atenuao
viral, sempre existe a preocupao de evitar a re-
verso para a forma virulenta. Assim, procura-se
fazer a excluso de um gene inteiro ou de mais de
um gene de virulncia no mesmo vrus, sempre
preservando a capacidade de replicao viral.
Essa estratgia reduz a possibilidade de o vrus
recuperar a virulncia e torna a vacina deletada
mais segura do que as demais vacinas de vrus
atenuados.
A atenuao que pode ser obtida nos herpes-
vrus um bom exemplo da produo de vacinas
atenuadas por deleo. Esses vrus possuem um
gene que codica a enzima timidina quinase (TK),
associada com a capacidade do vrus de replicar
em neurnios e ser neurovirulento. J os genes
que codicam as glicoprotenas do envelope gE,
gI e gC no so essenciais viabilidade e repli-
cao viral. A eliminao do gene da TK produz
um vrus mutante atenuado, com capacidade re-
duzida ou nula de produzir infeces neurolgi-
cas. A deleo simultnea de outro gene resulta
em um vrus vacinal ainda mais atenuado e mais
seguro e, ao mesmo tempo, capaz de estimular a
resposta imunolgica do hospedeiro. No Brasil,
uma vacina atenuada obtida por deleo de genes
(gE negativa) est licenciada para uso contra a
doena de Aujeszky dos sunos. Outras vacinas
desse tipo encontram-se em desenvolvimento
para o BoHV-1 e BoHV-5. Vacinas contra alguns
poxvrus animais tambm foram obtidas pela de-
leo do gene da TK, enzima que tambm est
envolvida na capacidade de replicao e viruln-
cia desses vrus.
4.1.3.7 Vrus com marcadores
antignicos
Vacinas com marcadores antignicos tam-
bm denominadas vacinas diferenciais so
aquelas que induzem uma resposta sorolgica
nos animais vacinados que pode ser distinguida
da resposta infeco natural (Figura 12.3). Essas
vacinas so muito teis em programas de con-
trole e erradicao de infeces vricas que pro-
duzem infeces persistentes ou latentes. Nesses
programas, a vacinao utilizada paralelamen-
te a outros procedimentos, como a identicao e
eliminao dos animais portadores. Nesses casos,
crtico que se diferenciem os animais vacinados
daqueles que so portadores do vrus. O car-
ter diferencial em um vrus vacinal geralmente
obtido pela deleo do gene que codica uma
protena do envelope do vrion. A diferenciao
realizada pelo uso de um teste sorolgico ge-
ralmente um teste de ELISA que detecta anti-
corpos contra a protena ausente no vrus vacinal,
mas presente no vrus de campo. Ou seja, a detec-
o de anticorpos especcos contra esta protena
338 Captulo 12
indica que os animais foram infectados com o v-
rus de campo. Animais somente vacinados no
reagem positivamente no teste.
As vacinas diferenciais so comercializadas
acompanhadas do teste diagnstico especco,
que permite diferenciar a resposta vacinal da
resposta induzida pelo vrus de campo. Esta es-
tratgia possibilita a implantao de programas
de vacinao em reas de risco, sem prejudicar a
perda da condio de rebanho livre ou prejuzo
ao trnsito de animais.
Como citado anteriormente, na vacina dife-
rencial licenciada contra a doena de Aujeszky, o
herpesvrus suno (PRV) sofreu a deleo do gene
da glicoprotena E (gE). Esta glicoprotena, alm
de no ser essencial replicao do vrus, capaz
Vacinas vricas 339
de induzir a produo de anticorpos no hospe-
deiro. Portanto, animais vacinados com a cepa
gE negativa no formaro anticorpos especcos
contra esta glicoprotena, mas os animais que
forem infectados com o vrus de campo desen-
volvero anticorpos contra a gE. Atravs do teste
imunoenzimtico, fornecido com a vacina, pode-
se, subseqentemente, diferenciar os sunos vaci-
nados daqueles infectados pelo vrus de campo.
Por suas caractersticas, as vacinas diferen-
ciais so adequadas para programas de controle
e erradicao de infeces, j que no impedem o
trnsito e comrcio de animais. A erradicao da
PRV, na Alemanha e em outros pases europeus,
foi obtida com o uso de vacinas diferenciais. O
programa de erradicao da PRV, nos Estados
Unidos, em fase nal de execuo, tambm se
valeu dessa estratgia. No Brasil, o programa de
erradicao dessa doena, em Santa Catarina, uti-
lizou uma vacina deletada na gE, associada com
um teste imunoenzimtico. Vacinas diferenciais
esto sendo utilizadas em vrios pases euro-
peus em programas de controle e erradicao do
BoHV-1. A possibilidade de se manipular geneti-
camente os vrus e modic-los antigenicamen-
te abre a possibilidade da confeco e utilizao
deste tipo de vacina contra outros vrus animais.
O princpio das vacinas deletadas diferenciais e a
sua utilizao para diferenciar animais vacinados
daqueles infectados com o vrus de campo est
ilustrado na Figura 12.3.
Embora as vacinas diferenciais clssicas te-
nham sido concebidas para utilizao do vrus
deletado como vacina viva, o vrus com marca-
dor antignico pode tambm ser utilizado em
uma vacina inativada. Da mesma forma, vacinas
de subunidades e vacinas de vetores tambm per-
mitem a diferenciao entre animais vacinados e
infectados naturalmente. Ou seja, o carter dife-
rencial pode ser obtido tanto por vacinas vivas
ou inativadas geneticamente manipuladas como
por vacinas de subunidades ou de vetores.
Em algumas vacinas tradicionais, possvel
se diferenciar a resposta vacinal da resposta in-
feco. Um exemplo a vacina inativada contra o
vrus da febre aftosa (FMDV). Utilizando um tes-
te que detecta anticorpos contra uma protena do
vrus produzida durante a sua replicao, pos-
svel reconhecer os animais que foram infectados
e diferenci-los daqueles que foram vacinados,
pois a referida protena retirada da formulao
vacinal durante o seu processamento.
4.1.4 Vetores vacinais
Vrus natural ou articialmente atenuados
podem ser utilizados para carrear um ou mais
genes que codicam antgenos virais imunopro-
tetores de outros vrus. Esses vrus funcionam,
assim, como vetores vivos para a imunizao de
animais. O gene de interesse pode ser inserido no
genoma do vrus vetor por manipulao gentica.
O resultado um microorganismo recombinante
que expressa as suas prprias protenas e tam-
bm a protena heterloga. Como conseqncia,
a vacinao com este vrus induz resposta imu-
nolgica contra as protenas do vetor e tambm
contra a protena do vrus heterlogo.
Os vetores de eleio devem possuir capa-
cidade replicativa, porm devem ser pouco ou
nada patognicos. De preferncia, os vrus ve-
tores devem replicar e estimular a resposta imu-
nolgica em stios equivalentes aos infectados
pelo vrus de interesse. Dessa forma, a resposta
imunolgica ser produzida nos locais naturais
de infeco. Em geral, os vetores virais utilizados
so aqueles que j tm o genoma seqenciado e
caracterizado, alm de serem capazes de receber
a insero do gene heterlogo que ir codicar
o antgeno de interesse. Sendo assim, os poxv-
rus, os herpesvrus e os adenovrus so os vrus
mais freqentemente empregados como veto-
res vacinais. Alm desses, diversos outros vrus
vm sendo estudados como vetores para vaci-
nas humanas e animais, como os alfavrus (vrus
da encefalite eqina venezuelana [VEEV], vrus
Sindbis), avivrus (vrus da febre amarela) e o
poliovrus (cepa atenuada Sabin, a mesma que
utilizada contra a poliomielite).
O vrus da varola das galinhas, pertencente
famlia Poxviridae, utilizado como vetor de an-
tgenos do vrus da doena de Newcastle (NDV)
das aves, recentemente licenciada nos EUA. Ou
seja, a imunizao das aves com o vetor vacinal
induz proteo contra o NDV. O vrus vaccinia
e o vrus da bouba dos canrios, tambm poxv-
rus, so exemplos de vetores virais utilizados em
vacinas j comercializadas no Brasil e em outros
340 Captulo 12
pases. O vrus da bouba dos canrios apresenta
baixo ndice de replicao e incapacidade de dis-
seminao quando inoculado em clulas de ma-
mferos. Esse vrus tambm capaz de expressar
antgenos heterlogos de maneira muito eciente
e, por este motivo, usado como vetor para vaci-
nas destinadas a outras espcies animais.
Um exemplo de uso desse vrus a vacina
recombinante contra a cinomose canina, j dispo-
nvel no comrcio. Os genes das glicoprotenas
hemaglutinina (H ou HA) e de fuso (F) do CDV
foram inseridos no genoma do poxvrus do can-
rio, que multiplicado at atingir altos ttulos. O
vrus recombinante , ento, utilizado para imu-
nizar ces. O resultado a induo de resposta
imunolgica contra os antgenos do poxvrus ir-
relevante neste caso, pois este no um vrus de
ces mas principalmente contra as protenas H
e F, conferindo proteo aos ces contra o CDV
(Figura 12.4). O poxvrus do canrio tambm ser-
ve de vetor para vacinas contra o vrus do Nilo
Ocidental (WNV) para uso em eqinos.
A raiva em carnvoros silvestres da Blgica e
Frana tem sido controlada com o emprego de um
vetor poxvrus (vaccinia) expressando a glicopro-
tena G do RabV. Esta vacina de administrao
Figura 12.4. Princpio das vacinas replicativas baseadas em vetores virais. Os genes de protenas estruturais
imunognicas do vrus de interesse so sintetizados como cDNA e inseridos no genoma de um vrus vetor,
geralmente de outra espcie animal. Este vrus vetor amplificado emcultivo celular at atingir altos ttulos e, ento,
utilizado para imunizar os animais da espcie de interesse. Os animais imunizados desenvolvem resposta
imunolgica contra as protenas do vrus vetor e contra a protena heterloga, conferindo proteo contra o vrus de
interesse. Oexemplo se refere vacina contra a cinomose, emque as glicoprotenas He F do CDVforaminseridas no
genoma dopoxvrus docanrio, que, ento, utilizadopara imunizar ces.
H
F
Genes da
protenas
H e F
Sntese
de cDNA
cDNA
Vrus da cinomose (CDV) Poxvrus do canrio
3
Multiplicao
Imunizao
Y
Y
Y
Y
H F
Y
Y
Y
Y
Y
Y
|
|
|
|
|
|
|
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|
Vacinas vricas 341
oral fornecida por meio de iscas alimentares
distribudas nas orestas. As raposas que rece-
beram a vacina no apresentaram sinais clnicos
de raiva ou leses de pox. A raiva silvestre em
vrios pases europeus tem sido controlada pelo
uso desta vacina.
Os adenovrus bovino, ovino e suno so
tambm bons vetores vacinais, pois so vrus
de manipulao relativamente fcil e de geno-
ma bem caracterizado, que permite a insero
de grandes seqncias de genes sem necessitar
a remoo de seqncias originais do vrus. Os
adenovrus apresentam tropismo para diferentes
tipos celulares e facilidade de replicar em altos
ttulos em cultivos celulares. Esta estratgia foi
utilizada para a produo de uma vacina con-
tra a FMDV, na qual um adenovrus humano
no-replicativo expressa protenas do capsdeo
do FMDV. Uma vacina contra o papiloma geni-
tal humano causador do carcinoma de colo de
tero foi produzida pela insero de genes do
papilomavrus humano no genoma de um ade-
novrus. Uma vacina contra a gripe humana foi
produzida utilizando um adenovrus no repli-
cativo como vetor para a hemaglutinina do vrus
da inuenza.
Os herpesvrus tambm tm sido explora-
dos como vetores potenciais para carrear antge-
nos de outros vrus pela facilidade de atenu-los
(por deleo de genes) e pela grande capacidade
do genoma (permite a insero de um ou mais
genes). Dentre os usos experimentais de herpes-
vrus como vetores vacinais incluem-se: BoHV-1
expressando antgenos do RabV, do BVDV e do
vrus sincicial respiratrio bovino (BRSV). O re-
sultado uma vacina polivalente para bovinos
que estimula o sistema imune no local de entrada
desses vrus.
Umas das caractersticas desejveis nos ve-
tores virais a ausncia de excreo ou excreo
mnima do vrus no ambiente. No caso dos ve-
tores de herpesvrus, existe ainda a preocupao
com a possibilidade do vrus vetor estabelecer
latncia no animal vacinado. Estudos realizados
com o herpesvrus canino (CHV) como vetor va-
cinal para uso em raposas demonstraram que,
embora o vrus tenha sido detectado nos stios de
latncia, no foi observada a reativao viral.
O genoma do herpesvrus suno apresenta
boas caractersticas para a insero de genes he-
terlogos e, por isso, vem sendo utilizado expe-
rimentalmente como vetor para genes de outros
vrus sunos, como o CSFV e o circovrus suno
(PCV). O resultado um herpesvrus atenuado
que atua como vacina multivalente e apresenta
timas perspectivas para vacinao em sunos.
O herpesvrus suno tambm pode ser utilizado
como vetor para outras espcies animais, haven-
do estudos que o utilizam como vetor de genes
do FMDV.
As vacinas que utilizam vetores virais apre-
sentam a vantagem de no sofrerem interferncia
da imunidade passiva materna, pois os animais
geralmente no possuem imunidade contra ant-
genos do vrus vetor. Da mesma forma, se o vrus
vetor for um vrus no-patognico para a espcie
animal vacinada, no existe o risco de tornar-se
virulento. Eles tambm so boas alternativas de
vacinas contra vrus que replicam de maneira
insatisfatria em cultivos celulares. Conforme o
local de replicao do vetor utilizado, haver o
estmulo de imunidade de mucosas (penetrao
em mucosas) ou imunidade mediada por linf-
citos T (penetrao intracelular). Certamente, no-
vas vacinas de vetores virais sero incorporadas
ao mercado nos prximos anos, pelas vantagens
e aplicaes potenciais que apresentam.
Algumas bactrias tambm podem ser uti-
lizadas como vetores para a expresso de antge-
nos virais. Nesse caso, o gene que codica uma
protena viral imunoprotetora pode ser inserido
no genoma bacteriano, atravs de manipulao
gentica. A bactria recombinante , ento, am-
plicada em cultura e administrada pela via oral
ao hospedeiro. Ao atingir o intestino, a bactria
se multiplica e produz o antgeno viral, que
apresentado ao sistema imunolgico. Enterobac-
trias, como Escherichia coli (E. coli) e Salmonella,
so consideradas boas candidatas a vetores de
antgenos de vrus entricos devido perspecti-
va de apresentao do antgeno viral diretamente
no tecido linfide que est associado ao intestino.
Vetores bacterianos para antgenos virais apre-
sentam boas perspectivas para uso em humanos,
pois alm de induzirem resposta imunolgica lo-
342 Captulo 12
cal (IgA), podem ser administrados pela via oral,
o que tambm representa uma vantagem.
4.2 Vacinas no-replicativas
As vacinas no-replicativas no contm o
agente vivel e, por isso, so mais seguras do que
as vacinas com vrus replicativo. Assim, no ofe-
recem a possibilidade de reverso virulncia e
de causar doena. No entanto, por no resulta-
rem em amplicao do antgeno como ocor-
re com as vacinas vivas e por no induzirem
resposta mediada por linfcitos Tc, apresentam
efetividade geralmente inferior s vacinas com
vrus replicativo. No entanto, essas vacinas pos-
suem inmeras aplicaes e tm contribudo para
o controle e erradicao de vrias doenas vricas
importantes, como a febre aftosa. Vrias vacinas
no-replicativas esto disponveis no mercado e
outras tantas esto em fase de desenvolvimento
ou testes. As vacinas no-replicativas podem ser
compostas por vrions inativados, por fraes
ou protenas extradas dos vrions, por protenas
virais recombinantes, por peptdeos sintticos
correspondentes aos determinantes antignicos
imunoprotetores das protenas e, nalmente, por
DNA ou RNA que codica a protena de interes-
se (Figura 12.5). Dentre estas, a maioria contm
partculas vricas ntegras, porm desprovidas de
infectividade (vacinas inativadas ou mortas).
4.2.1 Vacinas com vrus inativado
Vacinas inativadas, tambm chamadas de
vacinas mortas, so obtidas a partir do vrus in-
fectivo original, que passa pela eliminao irre-
versvel da sua infectividade por mtodos fsicos
ou qumicos. So, portanto, vacinas compostas de
partculas vricas ntegras, porm inertes e sem
capacidade replicativa. So consideradas vacinas
seguras porque possveis vrus contaminantes,
se presentes no estoque original de vrus, so
tambm inativados durante o processo de inati-
vao. Alm disso, aps a inativao, no existe
possibilidade de retorno do vrus vacinal forma
virulenta.
Para a produo da vacina, o vrus ini-
cialmente amplicado em um sistema biolgico
(cultivo celular, ovos embrionados) at atingir
altos ttulos. Esses vrus so, ento, submetidos
ao processo de inativao, que objetiva eliminar
a sua viabilidade. Durante a eliminao da capa-
cidade infectiva do vrus, procura-se preservar a
capacidade antignica, de modo que a resposta
imunolgica seja devidamente estimulada. A
manuteno da integridade da conformao dos
antgenos imunoprotetores um fator que pode
inuenciar na resposta imunolgica. Produtos
qumicos, como o formaldedo, etilenemina e -
propiolactona, so utilizados para inativar vrus
para uso em vacinas. Esses qumicos, contudo,
se empregados em concentraes e tempo exces-
sivos, podem alterar a conformao de epitopos
virais e, conseqentemente, resultar em reduo
da imunogenicidade do antgeno. Atualmente,
a -propiolactona e os derivados da etilenemina
so os inativantes mais utilizados pela indstria
de vacinas.
A imunidade decorrente da aplicao de
vacinas inativadas tipicamente humoral, uma
vez que as partculas inativadas so incapazes de
replicar no organismo hospedeiro e, deste modo,
desencadear a resposta celular mediada por lin-
Vacinas
inativadas
Vacinas no-replicativas
(sem vrus vivo)
Vacinas de
subunidades
Protenas
recombinantes
Vacinas de
peptdeos
sintticos
Vacinas de
DNA e RNA
Figura 12.5. Tipos devacinas quenocontmovrus replicativo.
Vacinas vricas 343
fcitos Tc. Aps a administrao de uma vacina
inativada, ocorre a estimulao de clones espec-
cos de linfcitos B, parte dos quais se transfor-
mam em plasmcitos secretores de anticorpos e
parte se transformam em clulas de memria, de
longa durao. Clones de linfcitos Th so tam-
bm estimulados e auxiliam a proliferao e di-
ferenciao dos linfcitos B por meio da secreo
de citocinas (interleucinas). Em uma exposio
posterior ao mesmo agente, as clulas de mem-
ria so rapidamente estimuladas e se diferen-
ciam em plasmcitos. Os plasmcitos secretam
grandes quantidades de anticorpos, muitos dos
quais com atividade neutralizante, que so res-
ponsveis pelo combate ao agente e controle da
infeco.
Atualmente a maioria das vacinas virais
utilizadas em medicina veterinria so inativa-
das. O controle e a erradicao da febre aftosa, no
Brasil, so baseados na poltica de vacinao com
uma vacina inativada. A vacina contra a raiva,
que utilizada em diferentes espcies, tambm
obtida pela amplicao do vrus em clulas de
cultivo e posterior inativao. Vrias vacinas ina-
tivadas esto atualmente em uso para proteger
animais de viroses.
Ainda que sejam seguras e estveis tem-
peratura ambiente, a magnitude e a durao da
imunidade resultante do uso dessas vacinas so
relativamente menores do que as produzidas pe-
las vacinas atenuadas. A incapacidade de repli-
cao do vrus determina a necessidade de rea-
lizar reforos vacinais, alm de se incluir grande
quantidade de antgeno na vacina, o que pode
elevar o seu custo. Apesar dessas estratgias, os
resultados so geralmente inferiores aos obtidos
com vacinas vivas. Alm disso, as vacinas inati-
vadas requerem o uso de potencializadores da
resposta imunolgica denominados adjuvantes
que tambm aumentam o seu custo e provo-
cam efeitos colaterais. No obstante, as vacinas
inativadas continuam sendo a nica opo contra
algumas doenas, seja pela impossibilidade de
se obter suciente atenuao do agente ou pela
impossibilidade de se usar o vrus replicativo em
algumas situaes, como em fmeas prenhes ou
em reas livres.
4.2.2 Vacinas de subunidades virais
O sistema imunolgico por meio de suas
clulas e molculas no reconhece a estrutura
completa do vrus. Ao contrrio, reconhece e in-
terage com pequenas regies das protenas que
compem as partculas vricas. Essas regies, que
na realidade so determinadas seqncias de
aminocidos, so denominadas epitopos ou de-
terminantes antignicos. Dentre os epitopos que
um vrion possui, alguns so mais imunognicos
do que outros. Alm disso, a maioria dos epito-
pos virais no gera imunidade protetora, capaz
de neutralizar os vrions ou provocar a lise das
clulas infectadas. No entanto, existem protenas
e epitopos altamente imunognicos, contra os
quais a resposta imunolgica altamente efeti-
va. Dessa forma, possvel produzir vacinas com
fraes ou protenas do vrus, selecionadas den-
tre as mais imunoprotetoras. Para isso, o vrus
deve ser inicialmente cultivado e produzido em
grande quantidade. A seguir, uma ou mais des-
sas protenas virais so puricadas por mtodos
qumicos e administradas junto com adjuvantes
na forma de vacina (Figura 12.6). Por conterem
apenas fraes do vrus, essas vacinas so deno-
minadas vacinas de subunidade. Portanto, as va-
cinas de subunidade contm apenas pores ou
protenas do vrus, e no o vrus completo, sendo
desprovidas de capacidade replicativa e so mui-
to seguras.
Essa metodologia tem sido utilizada para a
produo de vacinas contra a inuenza humana.
Para tal, diferentes cepas do vrus so cultiva-
das em ovos embrionados de galinhas seguido
de inativao e subseqente puricao das he-
maglutininas virais que iro constituir a vacina.
Uma outra opo disponvel a vacina contendo
as glicoprotenas da superfcie do vrus (hema-
glutinina), que so reunidas e administradas na
mesma vacina. A vacina clssica contra o vrus
da hepatite B humana (HBV) era produzida pela
puricao de partculas subvirais inertes, obti-
das do plasma de indivduos portadores. Con-
tudo, apesar dos diversos trabalhos de pesquisa
descritos, ainda no h opes de vacinas de su-
bunidades disponveis no comrcio para vrus de
interesse veterinrio.
344 Captulo 12
4.2.3 Vacinas de protenas
recombinantes
A base dessas vacinas semelhante s an-
teriores, com a diferena que a protena viral de
interesse no extrada dos vrions, e sim pro-
duzida em organismos recombinantes. O gene
de interesse removido do vrus e inserido no
genoma de bactrias ou leveduras, que passam a
produzir a protena em grande quantidade, pos-
sibilitando a sua puricao e administrao na
forma de vacina (Figura 12.7). Este sistema, alm
de produzir uma maior quantidade da protena
imunoprotetora, tambm seguro e de baixo cus-
to. A vacina atual contra a HBV, licenciada e dis-
ponvel para a imunizao humana, foi produzi-
da a partir da clonagem de genes que codicam
o antgeno de superfcie do HBV (HBsAg) em
levedura. Os antgenos produzidos pelas levedu-
ras recombinantes so subseqentemente puri-
cados e utilizados como vacina. A administrao
dessa protena ao hospedeiro estimula o desen-
volvimento de resposta imunolgica especca
contra o vrus.
Utilizando o sistema de bactrias ou levedu-
ras, genes que codicam capsdeos virais tambm
podem ser clonados em plasmdeos e produzi-
dos em grande escala. As protenas produzidas
se organizam em uma estrutura semelhante ao
vrus original, porm vazio (virus-like particles), e
podem ser utilizadas como vacina. Como essas
partculas virais no possuem cidos nuclicos
e capacidade de replicao, so desprovidas de
infectividade e totalmente seguras. Embora essas
partculas j tenham sido produzidas experimen-
talmente para vrias espcies de rotavrus, calici-
vrus, picornavrus e orbivrus, ainda no esto
licenciadas no mercado veterinrio. Alternativa-
mente, vrus de plantas, como o vrus do mosaico-
tabaco, podem servir como vetores de antgenos
vacinais, que so administrados a plantas trans-
gnicas que produzem o antgeno. Vacinas que
utilizam esta estratgia de plantas transgnicas j
foram desenvolvidas contendo genes do FMDV
e do BoHV-1. Recentemente, foi produzida e est
disponvel no comrcio uma vacina recombinan-
Figura 12.6. Princpio das vacinas de subunidades virais.
O vrus de interesse amplificado at atingir altos
ttulos. As protenas de interesse so, ento, purificadas
por mtodos qumicos e utilizadas para imunizar os
hospedeiros. O exemplo se refere s vacinas de
subunidades contra o vrus da influenza humana, que
contm fraes purificadas das glicoprotenas
hemaglutinina(HA) e neuraminidase(NA).
HA
HA
NA
NA
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Purificao
das protenas
Administrao
ao hospedeiro
Vrus de interesse
Vacinas vricas 345
te contra o papilomavrus humano (HPV), agente
associado com carcinoma de colo uterino em mu-
lheres. A protena do capsdeo do HPV produ-
zida em levedura, e as suas unidades se associam
formando estruturas semelhantes aos vrions (vi-
rus like particles, VLPs). Essas partculas so, en-
to, utilizadas como imungeno e induzem boa
proteo contra a infeco. Uma vacina contra
o vrus da leucemia felina (FeLV) foi produzida
pela expresso da glicoprotena viral gp70 em E.
coli (Figura 12.7).
Vacinas que utilizam protenas puricadas
estimulam linfcitos Th CD4+, alm de resposta
humoral mediada por linfcitos B e anticorpos,
contudo, no geram uma resposta relevante de
linfcitos Tc. A ausncia de resposta citotxica
deve-se ao fato de essas protenas serem proces-
sadas e apresentadas quase exclusivamente asso-
ciadas ao complexo de maior de histocompatibi-
lidade (MHC) classe II. Como resultado, no h
a adequada estimulao e resposta mediada por
linfcitos Tc, que dependem de estimulao via
MHC-I. Vacinas contendo protenas recombinan-
tes apresentam perspectivas promissoras para
uso em vrias doenas vricas animais e huma-
nas.
4.2.4 Vacinas de peptdeos sintticos
Por maior que seja a molcula do antgeno,
somente alguns epitopos so importantes para o
reconhecimento pelos linfcitos B e induo da
resposta imunolgica. Assim, os epitopos virais,
que so bem conhecidos e caracterizados por
apresentarem maior capacidade imunoprotetora,
podem ser sintetizados em laboratrio, resultan-
do em uma vacina de peptdeos sintticos. Ou
seja, essas vacinas contm apenas as seqncias
de aminocidos correspondentes aos epitopos
relevantes, produzidas sinteticamente em labo-
ratrio.
Os peptdeos produzidos so quimicamente
anlogos aos determinantes antignicos originais
e, em geral, contm de 3 a 10 aminocidos. Por
meio desta metodologia, foi possvel estimular
a produo de anticorpos neutralizantes contra
RabV, FMDV e parvovrus canino.
Figura 12.7. Princpio das vacinas de protenas
recombinantes. O gene que codifica uma protena
estrutural imunognica do vrus inserido no genoma
de bactrias ou leveduras, que passam a expressar a
protena. Esses organismos so cultivados em grande
escala e a protena de interesse purificada e utilizada
para imunizar os animais. O exemplo se refere vacina
de protena recombinante contra o FeLV, em que a
glicoprotena gp70 produzida em um sistema
heterlogoe utilizadacomovacina.
Clonagem do
gene da gp70
em bactria ou
levedura
Multiplicao
em grande
escala
Purificao
da protena
Administrao
ao hospedeiro
Vrus de interesse
gp70
gp70
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346 Captulo 12
Os linfcitos B reconhecem antgenos na sua
conformao natural. Assim, muitos dos epito-
pos capazes de estimular resposta humoral ne-
cessitam manter esta conformao. No entanto,
grande parte dos peptdeos que so sintetizados
apresenta-se como cadeias curtas de forma linear,
no dispondo de conformao terciria ou qua-
ternria. Como conseqncia, o nvel de induo
dos linfcitos B e a atividade dos anticorpos que
induzida pelas vacinas de peptdeos sintticos
so baixos e insatisfatrios quando comparados
com aqueles induzidos pelas vacinas compostas
por partculas virais completas ou por protenas
puricadas. Uma das estratgias usadas para
contornar esta baixa imunogenicidade a ligao
dos peptdeos a protenas maiores para induzir
uma melhor resposta e produo de anticorpos.
4.3 Vacinas de DNA e RNA
No incio dos anos 1990, foi demonstrado
que a administrao intramuscular de um DNA
plasmideal contendo um gene sob a regulao de
um promotor de eucariotas era capaz de levar
expresso da protena codicada pelo gene nas
clulas do animal inoculado. Dessa forma, fo-
ram criadas as vacinas de DNA, que consistem
de DNA exgeno contendo o gene da protena de
interesse sob regulao de um promotor. A ino-
culao desse DNA em animais resulta na pro-
duo da protena viral nos tecidos do hospedei-
ro, o que desencadeia uma resposta imunolgica
contra ela. A natureza da resposta desencadeada
altamente desejvel: alm de resposta humoral,
essa estratgia permite a estimulao de linfci-
tos Tc, que so importantes na resposta contra
vrus.
A elaborao de uma vacina de DNA neces-
sita a identicao prvia de um gene que codi-
ca uma determinada protena imunodominante e
indutora de resposta protetora, o qual inserido
em um plasmdeo de expresso. Esse plasmdeo,
que serve como vetor vacinal, contm um pro-
motor eucaritico forte e um marcador de sele-
o para a produo do DNA em grande escala
em bactrias. Uma grande quantidade desses
plasmdeos produzida em E. coli, sendo, ento,
puricada e inoculada no hospedeiro. Uma vez
no organismo hospedeiro, o DNA transporta-
do at o ncleo das clulas locais, onde o gene
ser transcrito, a protena produzida e, posterior-
mente, apresentada ao sistema imunolgico. O
resultado a estimulao de resposta imunolgi-
ca humoral e celular contra esta protena e, como
conseqncia, contra o vrus que a possui em sua
estrutura.
As vias de administrao mais utilizadas
para as vacinas de DNA so a intramuscular e
a intradrmica, atravs das quais os plasmdeos
podem ser injetados associados a lipdeos cati-
nicos ou atravs da metodologia de balstica
(gene-gun).
Nos experimentos realizados at o presente,
os nveis de anticorpos detectados aps a vacina-
o ainda so baixos. De fato, para induzir uma
resposta imunolgica satisfatria, necessria a
inoculao de uma grande quantidade de DNA.
Por isso, a administrao das vacinas atravs de
gene-gun tem se mostrado mais eciente frente s
demais vias, j que possibilita administrar gran-
des quantidades de DNA, capazes de gerar res-
posta imune de maior magnitude. Porm, as di-
culdades prticas da adoo desse mtodo para
aplicao da vacina tornam remota a sua adoo
na rea veterinria.
Embora o mecanismo de ao das vacinas de
DNA seja aparentemente simples, pouco ainda
conhecido sobre a maneira exata pela qual de-
sencadeiam a resposta imunolgica. Sabe-se que
a produo dos antgenos imunognicos ocorre
intracelularmente no organismo hospedeiro, por-
tanto, no existem os riscos observados nas va-
cinas vivas, tais como infeco, produo de la-
tncia e desenvolvimento de imunidade contra o
vetor vacinal. Os peptdeos resultantes so reco-
nhecidos como no-prprios, sendo, ento, pro-
cessados por clulas apresentadoras de antgenos
e expostos s clulas do sistema imune, via MHC
classe I e II, resultando na induo de resposta de
linfcitos Tc e Th, respectivamente. A resposta de
linfcitos Tc uma das principais vantagens das
vacinas de DNA em relao aos outros tipos de
vacinas no-replicativas, que somente estimulam
linfcitos Th. Diversos estudos indicam que a res-
posta humoral e celular resultante bastante sa-
tisfatria e, experimentalmente, no foram detec-
Vacinas vricas 347
tadas interferncias com a imunidade passiva.
Uma variao das vacinas de DNA so as
vacinas de RNA. Nesses casos, o RNA mensa-
geiro (mRNA) que codica protenas virais de
interesse produzido in vitro e incorporado em
lipossomos ou em micropartculas. A inoculao
dessas partculas ou lipossomos no animal resul-
ta em transporte do mRNA para o interior das
clulas, onde ocorre a traduo e produo da
protena. Esta protena , ento, apresentada ao
sistema imunolgico, resultando em estimulao
de resposta humoral e celular.
Embora as vantagens e aplicaes original-
mente vislumbradas, as vacinas de DNA e RNA
ainda no encontraram a aplicao inicialmen-
te prevista. Atualmente, apenas uma vacina de
DNA encontra-se disponvel para uso veterin-
rio. Esta vacina disponvel nos EUA dire-
cionada para proteger eqinos contra o vrus do
Nilo Ocidental (WNV), infeco emergente nas
Amricas.
4.4 Vacinas monovalentes
e polivalentes
Vrias vacinas de uso humano e animal con-
tm antgenos de mais de um vrus e tambm
de bactrias em sua formulao. O objetivo de
se formular vacinas di-, tri-, tetra- ou polivalentes
o de facilitar o manejo da vacinao, ou seja,
imunizar os animais contra vrios patgenos em
apenas uma ocasio. Dentre as vacinas multiva-
lentes, podem-se mencionar dois tipos, de acordo
com o objetivo e abrangncia: a) vacinas multi-
valentes direcionadas contra sndromes clnicas
denidas; b) vacinas multivalentes direciona-
das contra vrus no-relacionados, mas que so
prevalentes na populao. Dentre as primeiras,
incluem-se as vacinas contra os vrus que com-
pem o complexo respiratrio bovino (BoHV-1,
BVDV, vrus da parainuenza 3 e BRSV), que fre-
qentemente esto associados na etiologia dessa
patologia. Nessa categoria tambm se incluem as
vacinas contra diarrias neonatais de bovinos e
sunos, que possuem rotavrus e coronavrus em
sua formulao, alm de antgenos bacterianos.
Dentre as vacinas multivalentes contra vrus no-
relacionados, incluem-se as vacinas contra viro-
ses de ces, que contm antgenos de at cinco
vrus diferentes em sua formulao, alm de an-
tgenos bacterianos. Estas apresentam como obje-
tivo imunizar os animais contra os agentes mais
prevalentes da espcie, mesmo que alguns no
apresentem relao epidemiolgica entre si. So
disponveis comercialmente tambm vacinas di-
e trivalentes, contra vrus de maior importncia
em determinadas situaes epidemiolgicas.
A maior vantagem das vacinas multivalen-
tes a praticidade, pois permitem a imunizao
dos animais contra vrios agentes na mesma
aplicao. Essas vacinas, no entanto, apresen-
tam algumas restries potenciais do ponto de
vista imunolgico: a) exigem a resposta simult-
nea do sistema imunolgico contra um nmero
muito grande de antgenos; b) mesclam antge-
nos imunodominantes com antgenos menos do-
minantes; c) incluem agentes imunosupressores
em algumas delas; d) unicam a ocasio da apli-
cao, que pode no ser tima para vrios dos
antgenos presentes; e) algumas mesclam vrus
vivo com vrus inativado. Mesmo assim, vrias
vacinas de uso animal contm antgenos de mais
de um vrus em sua formulao e muitas delas
tm sido usadas com sucesso para o m a que se
destinam.
As vacinas replicativas e no-replicativas
apresentam propriedades e restries, de acordo
com a sua formulao e nalidade a que se des-
tinam. As principais vantagens e desvantagens
desses dois tipos de vacina esto apresentadas na
Tabela 12.2.
5 Adjuvantes
Os adjuvantes so substncias que tm a fun-
o de potencializar a resposta imunolgica in-
duzida por vacinas no-replicativas, constitudas
por vrus inativados, subunidades ou protenas
recombinantes. As protenas na forma solvel e
os antgenos puricados e de baixo peso molecu-
lar que compem essas vacinas podem ser pou-
co imunognicos, mas apresentam um aumento
acentuado na sua imunogenicidade quando so
combinadas com adjuvantes. Por isso, com exce-
o das vacinas atenuadas (compostas de vrus
vivo) e das vacinas de DNA e RNA, as outras for-
348 Captulo 12
mas de vacinas no-vivas devem, necessariamen-
te, incluir adjuvantes em sua formulao.
Alm de aumentar a magnitude da resposta
imune, alguns adjuvantes so capazes de promo-
ver a induo da imunidade de mucosas e esti-
mular linfcitos Tc, aumentando a ecincia de
macrfagos e clulas dendrticas na apresentao
de antgenos e prolongando a expresso do com-
plexo peptdeo/MHC-II na superfcie de clulas
apresentadoras de antgenos. Por outro lado, a
maioria dos adjuvantes no capaz de formar li-
gaes estveis com o antgeno.
Diversas substncias tm sido utilizadas
como adjuvantes, diferindo na sua composio,
que geralmente determina o modo de ao (Ta-
bela 12.3). Em geral, existem dois mecanismos
principais de atuao: sistemas de entrega do an-
tgeno e adjuvantes imunoestimuladores.
Caracterstica Replicativas
Sim Imunidade mediada por linfcitos TcD8+
N-replicativas
No
Longa Durao da imunidade Curta
No Necessidade de adjuvante Sim
Pequena Quantidade de antgeno por dose Grande
Uma (geralmente) Nmero de doses Vrias
Injetvel ou oral Via de administrao Injetvel
Lbil Estabilidade trmica Estvel
Raro Reverso forma virulenta No
No recomendado Uso em fmeas em gestao Sim
Tabela12.2. Propriedades e restries das vacinas vricas replicativas (vivas) e no-replicativas (no-vivas)
Tipo de adjuvante Forma de ao
Armazenamento e liberao
gradual do antgeno.
Sais inorgnicos
Exemplos
Hidrxido de alumnio, fosfato
de alumnio, fosfato de clcio.
gradual do antgeno,
estimulao de macrfagos
Componentes de
bactrias
Adjuvante completo de
Freund.
Estimulao de macrfagos
e induo da liberao de
citocinas.
LPS, BCG (linhagem atenuada
de ). Micobacterium bovis
gradual do antgeno.
Partculas lipdicas
Adjuvante incompleto de Freund
(emulso de gua). leo em
Liberao do antgeno
encapsulado no citosol,
estimulando linfcitos T
citotxicos.
Lipossomos, virossomos,
ISCOMs.
Estmulo de clulas T
citotxicas ou de clulas
dendrticas.
Citocinas Interleucinas 1, 2 e 12;
Interferon alfa e gama.
Tabela12.3. Principais adjuvantes utilizados emvacinas deusoveterinrioe seumecanismodeao
Vacinas vricas 349
Sais inorgnicos, como o hidrxido de alu-
mnio, promovem a precipitao e a deposio
do antgeno no local da aplicao da vacina, de
onde ser liberado gradualmente. A liberao
lenta do antgeno tambm o princpio de ao
das emulses de gua em leo, como o adjuvante
incompleto de Freund, que forma depsitos no
tecido inoculado.
Fraes de origem bacteriana podem ser
timos adjuvantes. Os lipopolissacardeos (LPS)
bacterianos desencadeiam sinais que tornam as
clulas apresentadoras de antgeno mais ativas.
Esses compostos induzem ainda a produo de
citocinas inamatrias e, conseqentemente, a
resposta imunolgica local de magnitude su-
perior. O adjuvante completo de Freund contm,
alm do leo mineral, micobactrias inativadas,
cujos componentes da parede celular so capazes
de aumentar a imunoestimulao.
Vesculas articialmente produzidas a partir
de lipdeos, denominadas lipossomos, podem in-
corporar antgenos no seu interior ou superfcie.
Se os lipossomos forem envoltos por protenas
do envelope viral, sero capazes de mimetizar o
envelope natural do vrus, sendo chamados de
virossomos. Vacinas contra a inuenza e vrus da
hepatite A humana, baseadas em virossomos, j
foram licenciadas em vrios pases europeus.
Complexos imunoestimuladores (ISCOMs)
resultam da mistura do antgeno ao colesterol,
fosfolipdeos e saponina Quil A, um glicosdeo
puricado de plantas. Os ISCOMs apresentam
estrutura esfrica, com cerca de 40 nm de dime-
tro, e j existem algumas vacinas para uso vete-
rinrio que utilizam este complexo como adju-
vante. Outra possibilidade que surgiu atravs da
tecnologia de DNA recombinante foi a fuso de
protenas ou peptdeos imunoprotetores de vrus
com diferentes citocinas. Esses complexos agi-
riam como adjuvantes e direcionariam a resposta
imune desejada.
As clulas apresentadoras de antgenos, par-
ticularmente as clulas dendrticas e os macrfa-
gos, so os principais alvos da ao dos adjuvan-
tes, resultando em efeitos diversos que produzem
um aumento na resposta imune (Figura 12.8).
Alguns efeitos adversos decorrentes do uso
de adjuvantes devem ser considerados. Os sais
inorgnicos geralmente desencadeiam reao gra-
nu lo matosa no local da aplicao. O adjuvante
completo de Freund no utilizado em animais
de produo, devido possibilidade de induzir
reao cruzada com o teste de tuberculinizao e
intensa reao local. As reaes adversas locais,
bem como a possibilidade de desenvolver efei-
tos carcinognicos, fazem com que este tipo de
adjuvante tambm no seja utilizado em vacinas
humanas.
Somente compostos contendo alumnio, hi-
drxido de alumnio ou fosfato de alumnio es-
to atualmente aprovados para uso humano. J
na rea veterinria, as substncias mais utiliza-
das como adjuvantes so o leo mineral e os sais
minerais baseados em alumnio, embora outros
compostos estejam sendo testados experimen-
talmente. A principal diculdade em identicar
Figura 12.8. Mecanismos de potencializao da resposta
imunolgica, desencadeados pelos principais
adjuvantes utilizados emvacinas deusoveterinrio.
Macrfago,
clula dendrtica
Persistncia
do antgeno
Emulses gua
em leo
Sais de
alumnio
LPS,
adjuvante
de Freund
Lipossomos,
polmeros de
manose
Sntese de
citocinas
Processamento
e apresentao
de antgeno
Estimulao de linfcitos
Th, Tc e B
Potencializao
da imunidade
Fonte: adaptado de Tizard (2001).
350 Captulo 12
novos adjuvantes que, embora muitos resulta-
dos experimentais em animais demonstrem boa
capacidade imunoestimuladora, esses compostos
freqentemente so txicos para os animais.
6 Controle de qualidade
Durante o processo de desenvolvimento e
produo, as vacinas devem ser submetidas a
testes para assegurar a sua inocuidade e capaci-
dade imunognica. Dentre os testes realizados
incluem-se os de esterilidade (para assegurar
a ausncia de contaminao bacteriana ou fn-
gica), inocuidade (para certicar que no causa
efeitos indesejveis), estabilidade (para vericar
a estabilidade gentica e fenotpica dos vrus ate-
nuados; ou para atestar a estabilidade do ant-
geno, no caso de vacinas inativadas) e potncia
(capacidade imunognica).
Dentre esses testes, os de potncia assumem
uma importncia especial, pois avaliam a capa-
cidade da vacina de induzir uma resposta imu-
nolgica adequada. Em geral, esses testes so
realizados na espcie animal para qual a vacina
destinada. No entanto, animais de laboratrio
(cobaias, coelhos) podem tambm ser utilizados,
desde que se avalie previamente a resposta imu-
nolgica dessas espcies e se compare esta com
a resposta do hospedeiro natural. A capacidade
imunognica de uma vacina pode ser avaliada
pela deteco e quanticao dos anticorpos pro-
duzidos em resposta imunizao ou por testes
de desao.
A quanticao da resposta sorolgica in-
duzida o mtodo mais utilizado para se avaliar
o potencial imunognico de antgenos vacinais.
Para isso, um grupo de animais vacinado e anti-
corpos especcos contra o vrus so pesquisados
por tcnicas sorolgicas como soroneutralizao
(SN) ou ELISA, a diferentes intervalos aps a va-
cinao. Alm da quanticao da resposta soro-
lgica a curto prazo (30, 60 dias), pode-se acom-
panhar os animais por um perodo mais longo, a
m de monitorar-se a durao da resposta indu-
zida. A maior restrio desse mtodo refere-se ao
fato de que quantica apenas a resposta humoral.
Portanto, mais apropriado para a avaliao de
vacinas no-replicativas, que induzem resposta
predominantemente humoral. Para alguns vrus,
os ttulos de anticorpos que conferem proteo j
foram razoavelmente determinados. Assim, a de-
teco de anticorpos com ttulos desta magnitude
nos animais vacinados pode ser utilizada como
indicativo de proteo e da eccia da vacina.
Para vacinas replicativas, no entanto, o parme-
tro sorolgico nem sempre reete a magnitude da
resposta imunolgica, pois no avalia a resposta
celular. Embora tambm utilizado para avaliar a
potncia de vacinas replicativas, a sorologia deve
ser considerada um indicador apenas parcial da
imunogenicidade, pois essas vacinas induzem
tambm resposta mediada por linfcitos Tc.
O mtodo mais objetivo de se avaliar a ec-
cia de uma vacina a vacinao seguida de desa-
o. Nesse teste, um grupo de animais vacinado
de acordo com as recomendaes do fabricante,
e outro grupo permanece no-vacinado (contro-
le). Aps algum tempo (geralmente 30-60 dias),
os animais dos dois grupos so inoculados com
o vrus patognico pela via natural de infeco.
Essa inoculao denominada desao e objetiva
mimetizar uma situao de infeco natural que
os animais podem, eventualmente, enfrentar a
campo. Aps o desao, os animais vacinados e
os controles so monitorados quanto excreo
viral e, principalmente, quanto manifestao de
sinais clnicos de doena. A eccia da vacina
medida por sua capacidade de reduzir a excre-
o viral (magnitude e durao) e, sobretudo, por
prevenir a ocorrncia de doena nos animais va-
cinados. Se a vacina objetiva prevenir a infeco
fetal e a ocorrncia de abortos, por exemplo, f-
meas prenhes previamente vacinadas devem ser
desaadas, e o efeito da infeco nos fetos deve
ser monitorado. Embora seja o mtodo mais ob-
jetivo de avaliao de eccia vacinal, este m-
todo apresenta algumas diculdades, tais como:
custo elevado, diculdade crescente do uso de
animais para experimentao, incerteza quanto
cepa e dose viral a ser utilizada no desao, entre
outras.
7 Conservao e administrao de
vacinas
As vacinas podem ser administradas por
diferentes vias, que so denidas pelas caracte-
rsticas do antgeno ou do vrus vacinal, do tipo
Vacinas vricas 351
de imunidade que se deseja estimular, da doena
contra a qual se destinam e tambm da espcie
animal na qual so aplicadas. As principais vias
de administrao de vacinas vricas so: intramus-
cular, subcutnea, intradrmica, cutnea, ocular,
oral e nasal. A maioria das vacinas animais ad-
ministrada por via parenteral (intramuscular ou
subcutnea); algumas so administradas por via
oral (na gua de bebida ou rao) ou por meio de
aerossis; e poucas so administradas atravs de
escaricaes na pele. Vacinas de aplicao in-
traprepucial e intravaginal tambm j foram de-
senvolvidas para a doena genital causada pelo
BoHV-1. A vacina contra o ectima contagioso de
ovinos aplicada em gotas, aps escaricao
da pele da face interna da coxa. A vacinao em
massa a forma mais adequada para a imuniza-
o de animais de produo, como sunos e aves,
e pode ser realizada por meio da gua de beber e
por aerossol.
A via pela qual a vacina administrada in-
uencia o tipo de imunoglobulina que produ-
zida, sendo um fator de grande importncia na
preveno da infeco, pois o estmulo da imu-
nidade deve ocorrer preferencialmente nos lo-
cais de penetrao do vrus no organismo. Como
exemplo, as vacinas de vrus atenuados que so
administradas pelas vias nasal e oral devem re-
plicar no trato respiratrio e intestinal, respecti-
vamente.
Nas infeces de mucosas, como a respira-
tria, intestinal, genital, urinria e ocular, a IgA
secretada nessas mucosas a imunoglobulina
mais importante para a preveno da infeco.
Portanto, h situaes em que a imunidade local
mais importante do que a imunidade sistmica,
o que inuencia diretamente na via de adminis-
trao da vacina. Vacinas atenuadas, administra-
das pela via oral contra o NDV das aves, tm a
vantagem de favorecer a replicao viral no trato
intestinal, promovendo o estmulo e sntese de
IgA local por um perodo prolongado. O vrus
da poliomielite humana replica no epitlio intes-
tinal, que o mesmo stio de replicao da vaci-
na atenuada de uso oral, conhecida como Sabin.
A imunidade resultante , portanto, vantajosa
em relao administrao injetvel da vacina.
Vacinas inativadas contra a inuenza, que so
administradas na forma parenteral, podem no
estimular a resposta de IgA na mucosa respirat-
ria, stio no qual a imunidade mais importante
frente a uma subseqente exposio ao vrus.
Um importante avano foi obtido na inds-
tria avcola com a demonstrao de que embries
de galinha podem ser vacinados ainda dentro do
ovo e, assim, desenvolver precocemente uma res-
posta imunolgica. A vacinao in-ovo estimula a
imunidade dos pintos antes dos primeiros dias
de vida, momento em que, provavelmente, tero
o primeiro contato com o vrus de campo. Nesse
caso, os ovos so vacinados entre os 17 e 18 dias
de incubao, exatamente no momento em que
feita a transferncia para os nascedouros. A vaci-
nao in-ovo realizada de modo automatizado,
atravs de um equipamento capaz de imunizar
at 50.000 ovos a cada hora. Atualmente, essa via
de vacinao est disponvel apenas para a doen-
a de Marek, mas h perspectiva de se estender
o mtodo para outros patgenos importantes de
aves.
A correta conservao desempenha um pa-
pel muito importante na eccia das vacinas. As
vacinas com vrus replicativo apresentam menor
estabilidade, pois o vrus pode perder a sua via-
bilidade sob condies inadequadas de tempe-
ratura e exposio radiao solar. As vacinas
no-replicativas so geralmente mais estveis,
porm tambm necessitam ser adequadamente
conservadas para evitar a degradao dos antge-
nos e reduo da sua potncia. Como regra, reco-
menda-se conservar as vacinas no-vivas a 4-6C,
evitando-se o congelamento e descongelamento.
A maioria das vacinas vricas vivas comerciali-
zada de forma liolizada e deve ser conservada
sob congelamento (-20C). Estas vacinas devem
ser ressuspendidas imediatamente antes do uso,
para evitar a perda da viabilidade do vrus vaci-
nal. Recomenda-se a sua aplicao no menor in-
tervalo de tempo possvel aps a ressuspenso.
Se necessrio, podem ser mantidas resfriadas
por algumas horas, evitando-se o congelamento
e descongelamento. Exposio a desinfetantes,
gua clorada, irradiao solar e altas temperatu-
ras so altamente prejudiciais viabilidade dos
vrus e possuem efeitos altamente deletrios so-
bre a eccia vacinal.
352 Captulo 12
8 Falhas vacinais
As vacinas vricas so utilizadas para con-
ferir proteo contra exposies posteriores ao
agente, impedindo que as infeces resultem em
doena clnica. Se a resposta imunolgica decor-
rente da vacinao for de amplitude e magnitu-
de adequadas, dever minimizar a replicao e a
disseminao do vrus no organismo e prevenir
a ocorrncia de manifestaes clnicas. No entan-
to, algumas vezes, no se obtm o efeito protetor
esperado, por razes diversas. Em geral, as fa-
lhas vacinais podem ser atribudas a problemas
intrnsecos da vacina, de sua conservao ou ad-
ministrao, ou tambm a falhas do animal em
responder vacinao (Figura 12.9).
Vrias famlias de vrus, principalmente as
de genoma RNA, possuem sorotipos ou varian-
tes antignicos que possuem distribuio variada
na populao. Dessa forma, pode ser importan-
te tipicar a cepa de campo de algumas espcies
de vrus antes de se recomendar a vacina mais
apropriada para uma determinada regio. Um
exemplo disto tem sido o IBV, contra o qual es-
to disponveis vrias cepas vacinais diferentes.
Os isolados tm sido caracterizados por SN ou
PCR, seguido de seqenciamento ou clivagem
do genoma com enzimas de restrio. O resulta-
do da caracterizao comparado com a das ce-
pas vacinais e pode-se optar pela cepa que mais
se assemelhe ao vrus de campo. Outro exemplo
tem sido a vacina autgena utilizada para o con-
trole do PCV, j que isolados de outras regies
ou empresas produtoras conferem uma proteo
menos eciente. O mesmo ocorre com o BVDV,
cujas vacinas disponveis no comrcio brasileiro
contm isolados norte-americanos, que so an-
tigenicamente diferentes dos isolados locais. In-
felizmente, para muitas espcies de vrus, ainda
existe pouca informao sobre as caractersticas
genmicas e antignicas das cepas que circulam
na populao animal local.
Alguns mtodos utilizados para a produo
de vacinas podem resultar em antgenos que so
menos ecientes na ativao do sistema imuno-
lgico se comparados com o vrus original. De
fato, a destruio parcial ou completa dos epito-
pos imunoprotetores, que pode ocorrer durante
o processamento e inativao do vrus vacinal,
capaz de reduzir a sua capacidade imunognica.
Ainda que o antgeno inativado permanea es-
tvel, se estiver presente em quantidade insu-
ciente, poder resultar no comprometimento da
eccia vacinal. Em grande parte, esses efeitos
podem ser minimizados com base nos testes de
qualidade a que as vacinas comerciais devem ser
submetidas. Esses testes devem incluir necessa-
riamente provas de potncia vacinal, nos quais
avaliada a capacidade imunognica da vacina
produzida.
Muitas vezes, as causas de falhas vacinais
esto relacionadas ao animal e decorrem da va-
cinao em perodo imprprio. Uma das causas
mais freqentes da falta de resposta vacinal a
vacinao dos animais no perodo de incubao
da doena, quando a vacina no ser efetiva. O
momento de vacinar tambm deveria ser con-
siderado na deciso de vacinar animais jovens.
Figura12.9. Principais causas defalhas vacinais.
Falhas
da vacina
Falhas vacinais
Falhas na conservao/
administrao
Falhas
do animal
cepa incorreta;
pouco antgeno;
antgeno no-protetor;
pouco adjuvante/
adjuvante incorreto.
conservao inadequada;
administrao inadequada;
animal com imunidade passiva;
animal j infectado.
imunidade passiva;
animal j infectado;
animal imunodeprimido;
animal doente;
variao individual.
Vacinas vricas 353
Se realizada no momento em que os animais
ainda esto protegidos pela imunidade passiva,
a vacinao ser parcialmente efetiva devido
interferncia dos anticorpos maternos. De fato,
a presena de imunidade passiva provavelmen-
te se constitui em uma das causas mais comuns
de falhas vacinais. A resposta vacina pode ser
prejudicada ainda por condies desfavorveis
do animal vacinado, principalmente situaes de
estresse, presena de doenas imunodepressoras,
subnutrio ou intensa infestao por parasitas.
Por todos os aspectos que inuenciam a
imunidade que decorre da vacinao, sabe-se
que a resposta imunolgica no ser de magni-
tude igual em todos os indivduos vacinados. Ou
seja, cada animal responder de maneira indivi-
dual. Assim, a maioria dos animais montar uma
resposta moderada ou mdia; e alguns animais
respondero de forma excelente e outros de for-
ma insatisfatria. Os animais que respondem de
maneira insuciente so epidemiologicamente
importantes em doenas altamente contagiosas,
como a febre aftosa, e representam uma possibi-
lidade de disseminao da doena. J em viroses
pouco insidiosas e de evoluo lenta, como a rai-
va, uma populao vacinada que responde de
forma parcial vacina pode ser sucientemente
capaz de impedir a disseminao da doena.
A eccia das vacinas pode ser prejudicada
pelo armazenamento inadequado, principalmen-
te no caso de vacinas contendo vrus vivos man-
tidas sob temperaturas superiores recomenda-
da. Mesmo que armazenadas de modo correto,
o ttulo viral das vacinas vivas tende a reduzir
devido inativao de vrus ao longo do prazo
de validade do produto. Por exemplo, as vacinas
associadas a clulas que so utilizadas contra a
doena de Marek sofrem acentuada reduo do
ttulo viral durante o perodo de armazenamen-
to a -20C. Dessa forma, devem ser estocadas em
nitrognio lquido e, uma vez descongeladas, de-
vem ser aplicadas em um curto perodo de tem-
po.
Por outro lado, a vacinao por mtodos al-
ternativos ao parenteral, como a via nasal, oral ou
por aerossis, pode dicultar no s a adminis-
trao da dose vacinal correta, como tambm a
imunizao uniforme de todos os animais de um
lote. Para espcies criadas em grandes concentra-
es, como na avicultura industrial, a viabilidade
de vacinas orais compostas de vrus sensveis ao
cloro pode ser comprometida com a excessiva
clorao da gua, que utilizada como veculo
vacinal. Finalmente, deve ser considerada a inter-
ferncia de desinfetantes empregados excessiva-
mente para a antissepsia que precede a adminis-
trao parenteral de vacinas vivas.
Cabe ressaltar que a ocorrncia de doena
branda em animais vacinados no signica ne-
cessariamente uma falha vacinal. As vacinas so
produzidas para proteger os animais da doena
clnica. No entanto, algumas delas no conse-
guem cumprir integralmente este objetivo e, mes-
mo animais vacinados, podem desenvolver um
quadro clnico discreto. Se esta vacina for efetiva
na reduo signicativa da gravidade da doena,
quando comparada com animais no-vacinados,
pode-se armar que a mesma cumpriu parcial-
mente o seu objetivo.
9 Reaes adversas da vacinao
Embora os benefcios obtidos pelo uso da
vacinao sejam inquestionveis, como a erradi-
cao de vrias doenas virais, nenhuma vacina
totalmente isenta de riscos. Apesar de relativa-
mente raros, efeitos indesejveis e prejudiciais
sade do hospedeiro tm sido relatados pelo uso
de vacinas. Por isso, a possibilidade de efeitos
colaterais no deve ser negligenciada e os bene-
fcios advindos da vacinao devem superar os
riscos possveis resultantes de seu uso.
Efeitos residuais de virulncia em vacinas
vivas devem ser considerados. Um sorotipo avi-
rulento do poliovrus, utilizado na vacina oral in-
fantil, pode sofrer mutaes e tornar-se virulento,
causando poliomielite pela administrao da va-
cina numa taxa de um caso a cada milho. Casos
de encefalite ps-vacinal, atribuda ao vrus pre-
sente na vacina, j foram relatados em bovinos
vacinados contra o BoHV-1 e em ces vacinados
contra o CDV.
Vacinas vivas devem ser utilizadas com
muito critrio em animais imunodeprimidos.
Por outro lado, a vacinao contra um agente
pode causar imunodepresso, que pode ser de-
354 Captulo 12
terminante na resposta vacinao contra outros
microorganismos. Vacinas atenuadas contra a
parvovirose canina causam imunodepresso em
lhotes, os quais podem adoecer aps a aplicao
de vacina viva contra a cinomose. Tambm o es-
tresse causado pelo manejo dos animais durante
a vacinao uma causa comprovada de reativa-
o das infeces latentes pelos herpesvrus.
A vacinao de fmeas em gestao deve ser
precedida de cuidados com relao deciso de
vacinar contra determinados vrus, assim como
na escolha do tipo de vacina a ser utilizada. Vaci-
nas com vrus atenuados administradas a fmeas
gestantes que no foram anteriormente imuniza-
das podem prejudicar o desenvolvimento fetal e
mesmo causar abortos, como no caso do vrus da
panleucopenia felina (FPLV), BoHV-1 e BVDV.
Sendo assim, vacinas contendo vrus inativados
so as mais indicadas para a vacinao das f-
meas nesse perodo.
Por outro lado, possvel que vacinas inati-
vadas potencializem a doena decorrente de um
contato posterior com o vrus de campo por parte
do lhote vacinado. Esse fato j foi observado em
crianas previamente vacinadas contra o vrus
respiratrio sincicial (RSV) e em potros vacina-
dos contra o vrus da encefalite eqina do leste
(EEEV).
Reaes de hipersensibilidade podem surgir
aps a administrao de vrias doses de vacina;
principalmente tratando-se de vacinas inativadas
ou de anti-soro. Essas reaes podem variar de
hipersensibilidade do tipo III, com intensa reao
inamatria local, at distrbio vascular generali-
zado. Pacientes expostos ao RabV passavam pelo
tratamento ps-exposio com o soro anti-rbico
produzido em coelhos, que exigia mltiplas apli-
caes abdominais, as quais, muitas vezes, desen-
cadeavam reaes de hipersensibilidade. Reaes
de hipersensibilidade retardada, com formao
de granulomas, podem ser ocasionadas pelo uso
de determinados tipos de adjuvantes, como os
que agem pela formao de depsitos. Por isso,
esses tipos de adjuvantes no so utilizados na
formulao de vacinas para uso humano e ani-
mal. Qualquer componente da vacina pode ser
responsvel pelo desencadeamento da reao, j
que a resposta de cada organismo muito pecu-
liar. Contudo, os mais envolvidos so os antge-
nos derivados dos cultivos de clulas ou de ovos
embrionados utilizados para o cultivo do vrus.
Pessoas ou animais alrgicos a albumina do ovo
podem apresentar hipersensibilidade imediata
e desenvolver choque analtico em resposta a
vacinas cujo vrus foi amplicado em ovos em-
brionados. Um efeito adverso menos deletrio
a opacidade da crnea em ces decorrente da va-
cinao contra a hepatite viral canina com o ade-
novrus canino tipo 1 (CAdV-1). Este problema
tem sido evitado pela utilizao do CAdV-2 na
formulao vacinal, em vez do CAdV-1.
O uso de vacinas pode favorecer a seleo
de novas variantes antignicas dos vrus. A imu-
nizao parcial do rebanho apontada como uma
das causas de presso seletiva que favorece o sur-
gimento de novas variantes do vrus, as quais po-
dem substituir o vrus de campo. Em galinhas,
tem sido bem evidente o surgimento peridico
de novas variantes do IBV e do IBDV, apesar da
massiva utilizao de vacinas contra esses pat-
genos.
10 Drogas antivirais
A abordagem convencional para o controle
das doenas virais tem sido o desenvolvimen-
to de vacinas efetivas, o que no tem sido pos-
svel para um nmero considervel de agentes.
Em virtude disso, uma nfase muito grande tem
sido dada para a busca de drogas antivirais, so-
bretudo em medicina humana. No entanto, o
desenvolvimento de drogas antivirais muito
mais difcil do que o desenvolvimento de drogas
antibacterianas, embora as perspectivas a longo
prazo sejam encorajadoras. A diculdade de se
obter drogas antivirais aplicveis a humanos e
animais se deve principalmente ao fato de a re-
plicao viral utilizar fundamentalmente o me-
tabolismo das clulas hospedeiras para replicar.
Desse modo, o equilbrio para evitar a replicao
viral e no causar toxicidade para a clula mui-
to sensvel. Apesar disso, o conhecimento sobre
a bioqumica da replicao viral tem aumentado
sensivelmente e permitido o desenvolvimento de
Vacinas vricas 355
drogas que so fundamentais para o tratamento
de algumas viroses humanas (Tabela 12.4). Ain-
da no existem drogas licenciadas para uso vete-
rinrio, embora existam perspectivas de que isto
possa ocorrer em breve.
Teoricamente, todas as enzimas e processos
essenciais para a replicao viral so alvos po-
tenciais para a terapia antiviral. Uma abordagem
que tem sido utilizada para o desenvolvimento
de novas drogas a sntese de substncias que
inibam essas etapas, como os inibidores da trans-
criptase, replicase e protease. Aps, variaes
dessas drogas so sintetizadas e testadas para se
obter um inibidor mais potente e menos txico.
Assim como ocorre nas drogas antibacteria-
nas, a resistncia s drogas antivirais tambm tem
sido descrita. Por exemplo, existem dois tipos de
drogas contra o vrus da inuenza A: os inibido-
Droga Vrus
anlogo de nucleosdeo Vidarabina
Tipo qumico
polimerase viral
Alvo
herpesvrus
anlogo de nucleosdeo Aciclovir polimerase viral herpes simplex
(HSV)
anlogo de nucleosdeo Ganciclovir e
valganciclovir
polimerase viral citomegalovrus
anlogo de nucleosdeo
Anlogos de
nucleosdeo inibidores
da transcriptase
reversa: Zidovudina
(AZT), Didanosina
(ddI), Zalcitabina (ddC),
Stavudina (d4T),
Lamivudina (3TC)
transcriptase reversa retrovrus (HIV)
anlogo de nucleosdeo
No nucleosdeos
inibidores da
transcriptase reversa:
Nevirapina, Delavirdina
transcriptase reversa retrovrus (HIV)
anlogo de peptdeo
Inibidores da protease:
Saquinavir, Ritonavir,
Nelfinavir
protease do HIV HIV
triazol carboxamida Ribavirina mutgeno de RNA
amplo espectro:
HSV, HCV,
rubola, sarampo
triazol carboxamida Ribavirina mutgeno de RNA
amplo espectro:
HSV, HCV,
rubola, sarampo
amina tricclica
Amantadina,
Rimantadina
protena da matriz,
hemaglutinina
vrus da
influenza A
mimtico do cido
neuramnico
Relenza, Tamiflu
inibidor da
neuraminidase
vrus da
influenza A e B
cclico pequeno Meconaril
vrions (bloqueia a ligao
e desnudamento)
picornavrus
protena Interferons
ativa protenas de
defesa
vrus da hepatite
B e C
Tabela12.4. Drogas antivirais disponveis para otratamentodeinfeces vricas humanas
356 Captulo 12
res da neuraminidase e os derivados da adaman-
tina (amantadina e rimantadina). Um estudo do
Centers for Disease Control (CDC), nos EUA, em
2005, demonstrou que ambos os princpios ativos
eram ecazes na reduo da durao da sintoma-
tologia clnica, contudo, no eram ecazes con-
tra todas as cepas circulantes. De fato, algumas
cepas possuam resistncia contra mais de uma
dessas drogas. Outra desvantagem que as drogas
antivirais apresentam a de que so efetivas na
fase mais intensa de replicao viral. No entanto,
quando os sinais clnicos so mais aparentes e
por isto atraem o interesse do mdico ou veteri-
nrio grande parte da replicao viral respons-
vel pelas patologias observadas j ocorreu.
O interesse pelo desenvolvimento de drogas
antivirais foi renovado aps o surgimento de v-
rus para os quais a obteno de vacinas efetivas
parece ser muito difcil, como o vrus da imuno-
decincia humana (HIV) e o vrus da hepatite
C (HCV), entre outros. O desenvolvimento de
drogas antivirais para vrus de interesse huma-
no certamente trar consigo importantes avanos
para a obteno de drogas aplicveis tambm em
viroses animais.
11 Vacinas vricas licenciadas
no Brasil
O Brasil um dos principais produtores pe-
curios e est entre os principais pases exporta-
dores de carne bovina, suna e de frango. Parale-
lamente, no mbito interno, foi possvel observar,
nas ltimas dcadas, o aumento expressivo do
interesse por animais de companhia, estimulan-
do o desenvolvimento de um mercado bastante
especco de produtos alimentares e de medica-
mentos.
Nesse sentido, as vacinas desempenham
um papel fundamental no controle e erradicao
de vrias doenas virais humanas e animais. No
mercado veterinrio de vacinas, os animais de
produo apresentam a maior parcela no fatura-
mento (88,1%), enquanto os animais de compa-
nhia j respondem por 9,3%. Somados todos os
tipos de vacinas contra patgenos de animais, no
ano de 2004, esse tipo de produto foi o que apre-
sentou o maior faturamento (31,5%) no mercado
de produtos veterinrios no Brasil. Atualmente,
so licenciadas 433 diferentes vacinas para a li-
nha veterinria, sendo que nem todas esto no
mercado. Na Tabela 12.5, encontram-se listadas
as vacinas vricas licenciadas no pas.
Diante da perspectiva futura de desenvol-
vimento e licenciamento de novas vacinas ba-
seadas na metodologia de DNA recombinante,
muito provavelmente algumas das vacinas atuais
podero ser, gradativamente, substitudas por
opes mais seguras e ecientes para proteger os
animais de doenas vricas.
Espcie Vrus
Sunos
Tipo
parvovrus suno inativada
herpesvrus suno (doena de
Aujeszky)
atenuada por deleo gnica (TK- e gE-);
inativada (inativao de mutante viral gE-)
Eqinos
herpesvrus eqino tipo 1 inativada
vrus da influenza eqina inativada
vrus da encefalite Leste e Oeste inativada
vrus da raiva inativada por mtodos qumicos
Ovinos e Caprinos
vrus do ectima contagioso vrus vivo patognico
Tabela 12.5. Vacinas de uso veterinrio, para as diferentes espcies animais, licenciadas para produo e
comercializaonoBrasil
Vacinas vricas 357
Espcie Vrus Tipo
Aves
vrus da doena infecciosa da bursa atenuada
vrus da bronquite infecciosa aviria
vrus da doena de Marek atenuada por passagens em clulas; vrus
naturalmente atenuado (HVT)
vrus da doena de Newcastle
adenovrus avirio (sndrome da
queda de postura)
vrus da encefalomielite aviria atenuada por passagens em embries de galinha;
cepa naturalmente atenuada
reovrus avirio inativada,
atenuada por termossensibilidade
pneumovrus avirio
inativada
atenuada, inativada
atenuada, inativada
vrus da bouba aviria atenuada
atenuada, inativada
vrus da laringotraquete atenuada por passagens em clulas
Tabela12.5. Continuao
vrus da cinomose atenuada por passagens em clulas; poxvrus
como vetor dos antgenos HA e F do vrus da
cinomose
adenovrus canino tipo 2
(traqueobronquite)
atenuada por passagens em
clulas
parvovrus canino
vrus da raiva
coronavrus canino inativada por mtodos fsicos
calicivrus felino atenuada por passagens em clulas
herpesvrus felino (rinotraquete)
inativada por mtodos qumicos
clulas
atenuada por passagens em clulas
vrus da leucemia felina antgeno recombinante purificado
Caninos
adenovrus canino tipo 1 (hepatite
infecciosa canina)
clulas
vrus da parainfluenza tipo 2 atenuada por passagens em clulas
vrus da panleucopenia felina atenuada por passagens em clulas
Felinos
Bovinos
vrus da febre aftosa inativada por mtodos qumicos
herpesvrus bovino tipo 1 e 5 inativada por mtodos qumicos,
atenuada por termosensibilidade
vrus da diarria viral bovina inativada por mtodos qumicos
vrus da parainfluenza tipo 3
vrus sincicial respiratrio bovino atenuada (amostra viva modificada)
rotavrus bovino inativada por mtodos qumicos
coronavrus bovino inativada por mtodos qumicos
atenuada por alteraes qumicas,
atenuada por termossensibilidade,
inativada
358 Captulo 12
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PARTE II
VIROLOGIA ESPECIAL
CIRCOVIRIDAE
Janice Reis Ciacci Zanella
13
1 Introduo
2 Classicao
3 Estrutura do vrion e do genoma
4 Replicao
5 Circovrus de interesse veterinrio
5.1 Circovrus suno tipo 2
5.1.1 Epidemiologia
5.1.2 Patogenia, sinais clnicos, patologia e imunidade
5.1.3 Diagnstico
5.1.4 Controle e prolaxia
5.2 Anemia infecciosa das galinhas
5.2.1 Epidemiologia
5.2.3 Diagnstico
5.2.4 Preveno e controle
363
363
364
366
367
368
368
369
371
371
372
372
373
374
374
374
1 Introduo
Os membros da famlia Circoviridae pos-
suem vrions icosadricos, sem envelope, com 14
a 26 nm de dimetro. O genoma DNA circular de
ta simples (1.7-2.3 kb) um dos menores entre
os vrus animais. Os circovrus so encontrados
com freqncia em vrias espcies, mas os sunos
se constituem nos nicos mamferos nos quais o
vrus j foi isolado. A famlia dos circovrus ani-
mais composta por trs vrus avirios e dois su-
nos. Os circovrus avirios so: o vrus da anemia
infecciosa das galinhas (CAV), o vrus da doen-
a das penas e bicos dos psitacdeos (BFDV) e o
circovrus dos pombos (PiCV). Dois circovrus j
foram identicados em sunos: o PCV-1 e o PCV-
2. O PCV-1 um contaminante comum de clulas
de cultivo de rim (PK-15) e no tem sido asso-
ciado com doena em animais. J o PCV-2 tem
sido associado com diferentes sndromes clnicas,
denominadas conjuntamente de circovirose su-
na. Com exceo do PCV-1, as infeces com os
circovrus animais so associadas com doenas
potencialmente fatais. Nessas doenas, as leses
nos tecidos linfides e imunossupresso so fre-
qentes.
Na dcada de 1990, houve vrias descries
de outros circovrus ou circovirus-like vrus, prin-
cipalmente em aves (canrios, avestruzes, gan-
sos, dentre outros). O nico circovrus humano
at hoje classicado, o torquetenovrus (TTV),
foi isolado de casos de hepatite ps-transfuso.
Esse vrus foi previamente classicado na fam-
lia Circoviridae e recentemente foi reclassicado
em um novo gnero, denominado Anellovirus. A
exemplo dos circovrus de animais, os TTV pos-
suem vrions pequenos, no-envelopados, com
DNA circular de ta simples. O genoma possui
entre 3.3 e 3.9 kb. Os TTV so vrus ubquos e
60 a 100% de pessoas saudveis mundialmente
j tiveram contato com o vrus. Semelhanas ge-
nmicas tambm existem entre os circovrus ani-
mais (PCV-1) e vrus de plantas (Geminiviridae),
atualmente reclassicados como nanovrus de
plantas.
2 Classicao
Os circovrus foram identicados, pela pri-
meira vez, em 1974, como contaminantes de uma
linhagem de clulas renais de sunos (PK-15) e
foram inicialmente descritos como partculas
semelhantes aos picornavrus. Posteriormente,
a caracterizao do cido nuclico extrado de
partculas vricas puricadas demonstrou que os
vrions continham uma molcula de DNA de ta
simples circular. O nome circovrus suno ou cir-
covrus porcino (PCV) foi proposto por Tischer
e colegas (1974), em reconhecimento ao primeiro
vrus animal a possuir um genoma DNA circu-
lar. Essa denominao foi, posteriormente, ado-
tada pelo Comit Internacional de Taxonomia de
Vrus (ICTV) quando os membros da Circoviridae
foram descritos como uma famlia de vrus (Ta-
bela 13.1). Em seguida, o BFDV e o CAV foram
tambm caracterizados e classicados conjunta-
Vrus Doena
PCV1 Sunos
Gnero Espcie
Ano de reconhecimento
(caracterizao)
Circovirus 1974 (1982) Nenhuma
Galinha Gyrovirus
Anemia infecciosa
das galinhas
CAV 1979 (1989)
Pssaros psitacdeos Circovirus
Doena das penas e
bicos dos psitacdeos
BFDV 1984 (1989)
Pombos Circovirus
Mortalidade associada
com definhamento e
anorexia
PiCV 1993 (2000)
Sunos Circovirus
Circovirose suna ou
sndrome multissistmica
do definhamento dos
sunos (SMDS)
PCV2 1997 (1998)
Fonte: adaptada de Todd (2000).
Tabela 13.1. Reconhecimento e classificao de membros da famlia Circoviridae
364 Captulo 13
mente na famlia Circoviridae. O BFDV e os PCVs
so classicados no gnero Circovirus, enquanto
o CAV o nico membro do gnero Gyrovirus,
com base em diferenas moleculares. Um segun-
do circovrus suno, o PCV-2, com caractersticas
antignicas e genticas diferentes do PCV-1, foi
descrito posteriormente e est comprovadamen-
te associado com doena em sunos.
Os circovrus possuem vrions pequenos
(14-26 nm de dimetro), icosadricos, sem enve-
lope. Pequenas diferenas estruturais podem ser
observadas entre os vrions dos dois gneros (Fi-
gura 13.1). Em geral, os vrions do CAV so um
pouco maiores do que os do PCV-2 e do BFDV
(Tabela 13.2). A superfcie do CAV tambm pos-
sui um aspecto diferenciado quando analisada
em estudos de mapas tridimensionais com amos-
tras crio-preservadas. Os capsdeos desses vrus
possuem uma estrutura icosadrica, contendo
60 molculas da protena do capsdeo arranjadas
em 12 unidades pentamricas. Porm, enquanto
o PCV-2 e o BFDV possuem capsmeros planos
bastante similares, os capsmeros do CAV pos-
suem aparncia pontiaguda em forma de trom-
pete. Essas caractersticas morfolgicas distintas
demonstram que os vrus dos gneros Gyrovirus e
Circovirus no so estruturalmente relacionados.
O capsdeo do CAV composto por cpias
mltiplas de uma nica protena viral, a VP1. A
VP1 possui uma regio N-terminal altamente b-
sica de 50 aminocidos, que interage com o DNA
viral encapsidado. A regio C-terminal da VP1
possui seqncias funcionais associadas com a
replicao do DNA pelo mecanismo de crculo
rolante (RCR ou rolling circle), o que indica que a
VP1 desempenha tanto papis estruturais como
funcionais.
Figura 13.1. Vrions da famlia . Esquerda: criomicroscopia eletrnica do CAV (A); PCV-2 (B) e
CAV/BFDV(C). Direita: mapa tridimensional dos respectivos vrions.
Circoviridae
CAV
PCV2
CAV
BFDV
Criomicroscopia Mapa tridimensional
A
B
C
Fonte: Crowter et al. (2003).
Circoviridae 365
O capsdeo do PCV-2 consiste de mltiplas
cpias de uma protena codicada pela ORF2, a
qual encapsida um genoma de 1.7 kb. As prote-
nas codicadas pela ORF2 do PCV-1 e do PCV-
2 possuem 66% de identidade de aminocidos.
Essa protena possui uma regio N-terminal bsi-
ca, capaz de interagir com o DNA viral, porm
desprovida da regio envolvida na RCR. A repli-
cao do genoma do PCV-2 realizada com aux-
lio de outra protena (Rep). O BFDV possui uma
organizao genmica semelhante aos PCVs, e
a protena codicada pela sua ORF2 apresenta
uma identidade de aminocidos de 26% com a
protena homloga do PCV-2.
As partculas dos circovrus podem ser puri-
cadas em gradientes de cloreto de Csio a uma
densidade de 1.35 a 138 g/ml e possuem um
coeciente de sedimentao de 91S (CAV) e de
57S (PCV-1) em gradiente de sacarose. Os circo-
vrus so extremamente estveis sob condies
ambientais. Cultivos celulares, contendo esses
vrus, conservam o seu potencial infectivo aps
incubao a 56 ou 70C, e tratamentos a pH 3 ou
clorofrmio, por 15 minutos. Essa resistncia
inativao desempenha um importante papel na
epidemiologia do agente e possui implicaes
para o controle das infeces por esses vrus. As
principais caractersticas fsico-qumicas dos v-
rions dessa famlia esto apresentadas na Tabela
13.2.
O genoma dos circovrus uma molcula de
DNA de ta simples circular, com 1.7 kb (circo-
vrus suno), 1.99 kb (PFDV) ou 2.3 kb (CAV). O
genoma dos PCVs e do PFDV possui genes que
so codicados tanto pela cadeia de sentido ge-
nmico como pela cadeia complementar, estra-
tgia denominada ambissense. No genoma dos
PCVs, trs ORFs esto presentes no sentido do
DNA complementar ao genoma (C1, 2 e 3) e uma
ORF est presente na seqncia correspondente
ao DNA genmico (V1) (Figura 13.2A).
O genoma do CAV possui polaridade ne-
gativa, ou seja, as seqncias codicadoras esto
presentes no DNA complementar (e nos mRNAs
transcritos a partir da cpia genmica). O DNA
complementar apresenta trs ORFs que codi-
cam uma protena estrutural (VP1) e duas no-
estruturais (VP2 e VP3) (Figura 13.2B). A VP3
est associada com a induo de apoptose em
clulas do timo de galinhas infectadas. A VP2
atua auxiliando a VP1 a adotar uma conformao
adequada para a construo do capsdeo. Todos
os isolados do CAV identicados at o presente
pertencem ao mesmo sorotipo, e todos so pato-
gnicos quando inoculados experimentalmente
em animais.
Os genomas do PCV-1 e PCV-2 so seme-
lhantes na sua organizao e apresentam 76% de
homologia. Nesses genomas, existem seis ORFs
potenciais, mas apenas trs codicam protenas
j identicadas: ORF1, ORF2 e ORF3 (Figura
13.2A). A ORF1 codica uma protena, a Rep, es-
sencial para replicao do DNA viral, enquanto
a ORF2 codica a protena do capsdeo. A ORF3
codica uma protena viral no essencial para
replicao, mas com um papel importante na in-
duo de apoptose. A anlise do genoma de v-
rios isolados do PCV-2 da Europa, Amrica do
Norte, sudeste asitico e do Brasil demonstraram
que esses vrus so muito semelhantes entre si,
Tabela13.2. Caractersticas fsicas e bioqumicas dos circovrus
Vrus BFDV
Dimetro da partcula (nm) 16.8-20.7
CAV PCV1 PCV2
19.1-26.5 15-16 14-20.7
1.33-1.37 1.33-1.37 1.378 Densidade (g/ml em CsCl) -
57S 91S Coeficiente de sedimentao
1759 2298/2319 1993 Extenso do genoma (nt) 1768
36 50 27, 23, 17
Massa da protena do
vrion (kDa)
28
- -
Fonte: adaptada de Todd (2000).
366 Captulo 13
com homologia mdia de 96% entre os isolados.
Estudos recentes, realizados na Sucia e Canad,
indicam a existncia de dois gentipos diferentes
do PCV2 (PCV2a e PCV2b) com uma alta identi-
dade de nucleotdeos.
O genoma dos circovrus apresenta algumas
caractersticas em comum, como a presena de
uma estrutura secundria em forma de grampo
(stem-loop) que est associada com a iniciao da
replicao do DNA viral.
4 Replicao
Os circovrus so os menores vrus capazes
de replicao autnoma em clulas de mamferos.
Devido sua simplicidade genmica e estrutural,
a replicao requer a participao de vrias pro-
tenas das clulas hospedeiras e ocorre durante
a fase S do ciclo celular. A replicao do genoma
ocorre no ncleo das clulas e envolve a sntese
de uma molcula de DNA de ta dupla (replica-
tivo intermedirio). Aps a sntese do replicativo
intermedirio, o genoma , provavelmente, repli-
cado pelo mecanismo de crculo rolante.
A replicao do genoma do CAV se inicia
logo aps a penetrao do vrus na clula, pela sn-
tese da ta complementar de DNA (Figura 13.3).
Essa molcula de DNA de ta dupla possui 2.298
ou 2.319 pares de bases, de acordo com a presen-
a de quatro ou cinco seqncias repetidas de 21
nucleotdeos (nt). Uma seqncia TATA locali-
zada na posio 324 e outros stios de ligao de
fatores de transcrio possuem papel importante
na regulao da transcrio do genoma (regio
do promotor) e constituem a parte no-transcrita
do genoma do CAV (Figura 13.2B). Aps a sua
sntese, o DNA replicativo intermedirio trans-
crito em um RNA mensageiro (mRNA) de 2.1 kb.
Este mRNA policistrnico e contm trs ORFs
sobrepostas entre si, cada uma codicando uma
das trs protenas do CAV: VP1 (51.6 kDa), VP2
(24 kDa) e VP3 (13.6 kDa). A partir do DNA repli-
cativo intermedirio, so produzidas molculas
de DNA de ta simples circulares, corresponden-
tes ao DNA genmico. Essas molculas so en-
capsidadas por mltiplas cpias da protena VP1
(Figura 13.3). A morfognese ocorre no ncleo
por mecanismos ainda no esclarecidos.
Figura 13.2. Estrutura e organizaodogenoma dos circovrus. A) Estrutura e regies codificantes dogenoma doPCV-
2; B) Estrutura e regies codificantes do genoma do CAV; C - ORFs presentes no DNA complementar; V - ORF
presente no DNAde sentido genmico. No genoma do CAV, o mRNAcorrespondente as trs ORFs est representado
internamente.
PCV-2
1.767 nt
V1
C2
C3
Stem-loop
C1
CAV
2.298 nt
C2
C3
Regio do promotor
C1
AA
5'
A B
Fonte: adaptado de Todd et al. ( 2001).
Circoviridae 367
Os PCVs replicam em uma variedade de
clulas primrias e de linhagem suna e, geral-
mente, no produzem citopatologia evidente.
Por isso, tm sido freqentemente detectados
como contaminantes de cultivos celulares. Essa
propriedade possui implicaes tambm para o
diagnstico, pois o isolamento viral em cultivo
deve ser necessariamente seguido da deteco de
antgenos ou de cidos nuclicos virais nas clu-
las inoculadas.
O CAV replica em clulas MDCC-MSB1 (li-
nhagem linfoblastide derivada de tumores de
doena de Marek). Em passagens iniciais, o vrus
no produz efeito citoptico. O CAV pode tam-
bm ser cultivado em pintos de um dia e em ovos
embrionados de galinha.
5 Circovrus de interesse veterinrio
As infeces com os quatro membros da
famlia Circoviridae so associadas com doenas
potencialmente fatais em animais. Este captulo
abordar apenas as duas doenas mais importan-
tes para a produo pecuria no Brasil: as infec-
es pelo PCV-2 e pelo CAV.
Figura 13.3. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo do CAV. A etapa inicial a sntese da cadeia de DNA
complementar ao DNA genmico (1). O DNA de fita dupla (replicativo intermedirio) transcrito pela maquinaria
celular, originando ummRNAde 2.1 kb(2). Este mRNAcontmtrs ORFs e traduzido emtrs protenas (3). ODNA
de fita dupla serve de molde para a replicao, com a produo de cpias genmicas do DNA (4). Este DNA , ento,
encapsidadopor mltiplas cpias daVP1(5).
ORF3
ORF1
ORF2
DNA circular
fita simples
Prognie
viral
DNA fita dupla
(replicativo
intermedirio)
VP1
Vp3
Vp2
5' 3' AAAAn
1
2
4
5
5
3
Fonte: adaptado de Brentano (2000).
368 Captulo 13
5.1 Circovrus suno tipo 2
A sndrome da circovirose suna a denomi-
nao dada ao conjunto de manifestaes clnicas
causadas pelo PCV-2, um vrus que est dissemi-
nado em rebanhos sunos de todo o mundo. Esta
doena foi diagnosticada pela primeira vez no
Brasil, em 2000, no Laboratrio de Sanidade da
Embrapa Sunos e Aves em Concrdia, SC. Atu-
almente, a circovirose considerada uma doena
endmica no pas, e um aumento do nmero de
casos clnicos com conrmao laboratorial tem
sido observado. Apesar de ter sido reportada
pela primeira vez em 2000, a circovirose suna foi
diagnosticada em materiais de arquivo de 1988,
sugerindo que a infeco j estava presente an-
teriormente no Brasil. Os fatores que determina-
ram o surgimento da circovirose como uma do-
ena emergente, nos ltimos anos, permanecem
desconhecidos.
Seis formas clnicas ou sndromes esto re-
lacionadas com a circovirose suna, sendo a sn-
drome multissistmica do denhamento (SMDS)
a mais freqente e a mais bem caracterizada.
5.1.1 Epidemiologia
A SMDS foi diagnosticada inicialmente em
rebanhos de alto padro sanitrio no Canad,
porm tambm pode atingir plantis de ciclo
completo ou unidades produtoras de leites de
tamanhos variados (maiores que 50 matrizes) ou,
ainda, unidades de segundo e terceiro stios de
produo (crechrios e terminadores). Os sunos
so mais freqentemente afetados entre as 5 e 16
semanas de idade, e a morbidade e mortalidade
variam de acordo com a fase em que a doena
surge e com o manejo da criao. Cerca de 50%
dos sunos afetados morrem em menos de oito
dias. Os demais animais podem sobreviver, mas
a maioria evolui para o denhamento extremo,
sem perspectiva de recuperao. Poucos animais
sobrevivem e, mesmo assim, apresentam um
mau desempenho produtivo.
O principal problema da SMDS a sua du-
rao nos rebanhos, podendo persistir por vrios
meses se medidas apropriadas de controle no
forem adotadas. Na mdia, h um aumento de
trs vezes nas taxas de mortalidade na creche e
no crescimento-terminao. Em alguns rebanhos,
essas taxas retornam normalidade dentro de al-
guns meses.
Co-fatores infecciosos e no-infecciosos, as-
sim como fatores de risco predisponentes ao es-
tresse, como densidade elevada, variaes trmi-
cas extremas, frio, baixa qualidade do ar, ar seco
e misturas de lotes com idades diferentes podem
exacerbar os sinais e a severidade da doena. Nos
pases onde o vrus da sndrome reprodutiva e
respiratria dos sunos (PRRSV) endmica, a
co-infeco com o PRRSV foi detectada na maio-
ria dos plantis, exacerbando a SMDS. Outros
agentes, como o Haemophilus parasuis, at ento
pouco diagnosticados na suinocultura brasileira,
passaram a possuir grande importncia aps o
surgimento da circovirose. A infeco pelo par-
vovrus suno (PPV) tambm parece ser um im-
portante co-fator para o agravamento da SMDS.
A identicao e classicao de isolados do
PCV-2, oriundos de vrios rebanhos do mundo
em dois gentipos diferentes (PCV2a e PCV2b),
indicam diferenas na virulncia, o que impor-
tante na evoluo da infeco e epidemiologia da
circovirose suna.
O PCV-2 pode ser transmitido de forma ho-
rizontal ou vertical, sendo a via oronasal a rota
mais freqente de transmisso. O PCV-2 ex-
cretado nas fezes por at 13 dias aps a infeco.
Os circovrus so muito resistentes s condies
ambientais e aos desinfetantes. Portanto, o con-
tato direto ou indireto com sunos infectados,
instalaes, equipamentos, pessoal contaminado
e fmites tambm podem transmitir o agente. O
DNA do PCV-2 pode ser detectado no smen de
machos infectados, mas ainda no se detectou
a presena de infectividade nessa secreo. Em
caso positivo, esses reprodutores poderiam re-
presentar uma fonte potencial de disseminao
da infeco para matrizes, pela monta natural ou
inseminao articial.
Estudos de prevalncia, formas de transmis-
so, excreo e tropismo do vrus ainda esto sen-
do realizados. Estudos sorolgicos no Brasil e em
outros pases indicaram que anticorpos contra o
PCV-2 esto presentes na maioria dos rebanhos
sunos (rebanhos SPF, unidades de terminao e
criaes de fundo de quintal) e a maior parte dos
animais se infecta ao redor da terceira e quarta
Circoviridae 369
semanas aps o desmame. Sudeos selvagens,
como os javalis, tambm so susceptveis infec-
o pelo PCV-2 e desenvolvem a SMDS quando
submetidos a estresse e a outros fatores de risco.
5.1.2 Patogenia, sinais clnicos,
patologia e imunidade
O PCV-2 geralmente infecta os sunos com
5 a 16 semanas de idade, freqentemente pela
via oronasal. O vrus infecta clulas do sistema
imunolgico, como macrfagos, linfcitos e clu-
las dendrticas, e capaz de replicar em vrios
tipos celulares, preferencialmente em clulas
com diviso ativa. Aps a infeco e replicao
em clulas do sistema imunolgico, o PCV-2
produz viremia e se dissemina sistemicamente
no organismo. Devido incapacidade do animal
infectado desenvolver uma resposta imunolgi-
ca efetiva, o PCV-2 pode infectar clulas em v-
rios rgos, produzir leses e, assim, agravar o
quadro clnico. Um desequilbrio das substncias
mediadoras da imunidade, morte de linfcitos e
falhas na reposio de clulas linfides colabo-
ram para esta imunodecincia. Ainda no est
claro porque apenas uma parcela dos leites in-
fectados desenvolve a doena. A explicao pode
estar relacionada com a presena de co-fatores in-
fecciosos e no-infecciosos, que so responsveis
pelo aumento dos nveis de replicao do PCV-2
nos sunos com SMDS (Figura 13.4). Sabe-se que
os animais que desenvolvem a infeco subcl-
nica apresentam uma carga viral inferior quela
presente nos animais que desenvolvem a SMDS.
Estes animais tambm desenvolvem ttulos supe-
riores de anticorpos neutralizantes contra o PCV-
2.
Transmisso viral: via oro-nasal ou outra
Infeco pelo PCV-2
Suno de 5-16 semanas
Infeco de macrfagos, APCs, clulas epiteliais
VIREMIA
Distribuio sistmica: moncitos do sangue
Infeco subclnica
PCV-2
rgos
Sem leses
Sangue
CD8+
SMDS
Co-fatores
infecciosos
Co-fatores
no-infecciosos
PCV-2
Sangue
B e T
Moncitos
Tecido
Linfide
Tecido
no-linfide
Pneumonia
Hepatite
Nefrite
Enterite
Moncitos
Atrofia do timo
Clulas dendrticas
B (apoptose) e T
Fagcitos
Depleo linfocitria
Infiltrao histiocitria
Figura13.4. Patogenia das infeces pelocircovrus suno-2 (PCV-2).
Fonte: adaptado de Darwich et al. (2004).
370 Captulo 13
Do ponto de vista clnico, trs fatores prin-
cipais so sugeridos para explicar a grande va-
riao no nmero de animais afetados por lote:
o efeito individual, o efeito leitegada e o efeito
manejo (fatores de risco). O efeito individual
decorrente da gentica individual do animal,
da herana imunolgica e da sua capacidade de
responder adequadamente s infeces. O efeito
leitegada sugere um importante papel da ma-
triz como possvel reservatrio do vrus e/ou na
transferncia de imunidade passiva aos leites.
O efeito manejo ou fatores de risco causadores
de estresse, como densidade elevada, ambiente
inadequado, baixa qualidade do ar, da gua e
da rao, misturas de leites com procedncias e
idades diferentes, falhas na limpeza/desinfeco
e a no-realizao de vazio sanitrio so muito
importantes. A considerao desses fatores in-
dispensvel no planejamento de medidas de con-
trole da SMDS.
A SMDS a forma clnica mais importante
associada com o PCV-2, mas o vrus tambm est
relacionado com outras manifestaes clnicas.
Os sinais mais importantes so o emagrecimento
progressivo, anorexia, aumento de volume dos
linfonodos, diarria crnica e dispnia, que no
regridem com tratamentos antimicrobianos. Pa-
lidez nas mucosas, ictercia e lcera gstrica tam-
bm podem ocorrer. Outros sinais, alguns deles
relacionados com infeces secundrias como
a pneumonia enzotica, colibaciloses, doena de
Glasser (H. parasuis), salmonelose, infeces de
pele por Staphylococcus podem estar presentes.
Infeces causadas por outros vrus, como o PPV
e o PRRSV, podem exacerbar os sinais clnicos,
resultando em doena mais severa e taxa maior
de mortalidade.
As leses macroscpicas mais importantes
incluem a hipertroa de linfonodos (inguinais,
submandibulares, mesentricos e mediastnicos),
atroa do timo e ausncia de colabamento pul-
monar. Entretanto, essas leses nem sempre esto
presentes e, portanto, no podem ser utilizadas
como um indicador seguro da SMDS. O infar-
tamento dos linfonodos geralmente acompanha
os estgios precoces da infeco, e esses rgos
podem retornar ao tamanho normal ou mesmo
reduzido. Alguns linfonodos podem apresentar
pequenas reas multifocais de necrose (pontos
branco-amarelados), provavelmente devido a in-
feces concomitantes. O fgado de animais ict-
ricos tambm pode apresentar hipotroa e reas
de descolorao. Pontos multifocais brancacentos
podem ser observados na superfcie e no parn-
quima dos rins, porm a hipertroa renal pode
ser apenas discreta. Leses de pele (manchas
avermelhadas) tambm podem ser observadas
em alguns casos. Muitos animais com sinais de
denhamento apresentam lcera gastresofgi-
ca, responsvel por hemorragias internas e pela
palidez da pele e das mucosas. Alteraes como
poliserosite, hepatizao pulmonar e colite po-
dem ser observadas, dependendo das infeces
intercorrentes.
O PCV-2 tambm est associado com a forma
epidmica da sndrome da dermatite e nefropatia
suna (SDNS) e pode ser identicado em tecidos
de sunos afetados por essa sndrome. Geralmen-
te, a SDNS a primeira manifestao clnica da
infeco pelo PCV-2 observada em um rebanho,
que , ento, seguida pela SMDS. A SDNS tam-
bm pode ocorrer isoladamente, acometendo
principalmente sunos com idade superior a trs
meses. Os sinais da SDNS so: anorexia, edema
subcutneo ventro-caudal e reas eritematosas
na pele dos membros plvicos e na regio peria-
nal. Ainda no est esclarecida a participao do
PCV-2 na patogenia da SDNS. Alm das leses
necrticas da pele, ocorrem leses bilaterais nos
rins, que aparecem plidos, com severa hipertro-
a, aderncia difusa da cpsula, superfcie irre-
gular e, s vezes, petquias disseminadas pela
cortical. Estrias brancacentas, que se prolongam
do crtex at a medula renal, so observadas ao
corte. Em alguns casos no so observadas leses
macroscpicas, e o diagnstico da doena rea-
lizado pela deteco de vasculite necrtica sist-
mica.
O PCV-2 est geralmente associado com
outros agentes patognicos em infeces mistas.
Isoladamente, o agente pode causar pneumonias,
enterites e distrbios reprodutivos. Essas infec-
es se caracterizam por pneumonia intersticial
proliferativa e necrosante; enterite granulomato-
sa; falhas reprodutivas que resultam em abortos,
mumicao fetal, natimortalidade e mortalidade
Circoviridae 371
de leites pr-desmame com miocardite. Tremor
congnito em leites e doenas do sistema nervo-
so central (SNC) que levam leites desmamados
morte sbita tambm j foram relatados.
A conrmao do PCV-2 como o agente etio-
lgico da SMDS veio de infeces experimentais
que resultaram em: a) leses caractersticas de
SMDS em sunos inoculados; b) presena de altas
concentraes de antgenos virais em tecidos; c)
presena do DNA viral nas leses; d) isolamento
do PCV-2 dos animais infectados; e) desenvolvi-
mento de anticorpos especcos contra o agente.
Nas infeces experimentais em que o PCV-2 o
nico agente, os sinais clnicos e as leses foram
brandos. Isso indica que co-fatores infecciosos e
no-infecciosos so importantes para a manifes-
tao do quadro clnico observado a campo. Por-
tanto, parece que o PCV-2 necessrio, porm
no suciente para reproduzir a doena, o que
indica que a circovirose uma doena multifa-
torial.

5.1.3 Diagnstico
O diagnstico da SMDS deve ser realizado
com base na anlise dos sinais clnicos, leses ma-
cro e microscpicas e deteco de antgenos ou
cidos nuclicos virais nos tecidos. A imunoisto-
qumica (IHC) e reao em cadeia da polimerase
(PCR) so muito utilizadas para demonstrar a
presena do agente.
Como esta sndrome cursa com sinais varia-
dos e produz imunossupresso que predispe a
ocorrncia de outras doenas, trs aspectos de-
vem ser considerados para o diagnstico:
sinais clnicos: emagrecimento progressi-
vo, problemas respiratrios e/ou diarria;
leses macroscpicas: aumento de volume
de linfonodos, hipotroa do timo e consolidao
pulmonar com pulmes no-colabados. Leses
microscpicas: depleo de linfcitos nos lin-
fonodos e bao, inltrao de histicitos, pneu-
monia intersticial. A presena de corpsculos de
incluso basoflicos no citoplasma de macrfagos
possui valor diagnstico limitado, pois aparece
somente em cerca de 30% dos casos;
deteco de antgenos ou de cidos nucli-
cos do agente associados com as leses, por IHC
ou PCR, respectivamente.
O isolamento do vrus pode ser realizado
em clulas de linhagem, tais como: PK-15, ST
(testculo suno) e SK-6 (rins de suno). Como o
vrus replica com mais ecincia em clulas com
replicao ativa, o tratamento de clulas de cul-
tivo com substncias indutoras do ciclo celular,
como a D-glucosamina, til para induzir nveis
de replicao que permitam a multiplicao do
agente. O PCV-2 no produz efeito citoptico em
clulas de cultivo, sendo necessria a deteco de
antgenos virais por imunouorescncia (IFA) ou
imunoperoxidase (IPX). Anticorpos monoclonais
especcos para o PCV-2 e PCV-1 so utilizados
nesses testes.
Anticorpos presentes no soro podem ser de-
tectados por imunouorescncia indireta (IFI) ou
por imunoperoxidase indireta, podendo ocorrer
reaes cruzadas entre o PCV-1 e o PCV-2. Testes
de ELISA especcos para o PCV-2 tm sido utili-
zados em estudos de prevalncia, porm no so
recomendados para o diagnstico da doena.
Em resumo, o diagnstico denitivo de
SMDS deve ser realizado pela identicao de
antgenos ou cidos nuclicos virais, associados
com o quadro clnico-patolgico compatvel com
as descries da enfermidade.
O diagnstico diferencial deve ser realizado
para alguns patgenos que tambm produzem
sinais clnicos semelhantes, principalmente o
denhamento. Inclui-se, nesses casos, a diarria
causada por Lawsonia e Brachyspira. Devido
possvel co-infeco pelo PCV-2 e PRRSV, algu-
mas leses atribudas ao PRRSV podem ter sido
causadas pelo PCV-2.
Vacinas especcas para o PCV-2 esto apre-
sentando resultados promissores em pases da
Europa e Amrica do Norte. No entanto, no es-
to disponveis comercialmente no Brasil, o que
diculta o controle da doena. As vacinas, em
diferentes preparaes, so disponveis para uso
em porcas marrs. A vacinao das fmeas po-
tencialmente confere proteo para a sndrome
da circovirose suna atravs da transferncia pas-
siva de anticorpos. As vacinas tambm so indi-
cadas para uso em leites, com aplicao antes da
fase de maior exposio ao agente.
372 Captulo 13
O controle da circovirose baseia-se na iden-
ticao e eliminao dos fatores de risco e na
reduo dos fatores de estresse. Fatores compli-
cadores para o controle da enfermidade incluem
a grande resistncia do agente no meio ambiente
e a inexistncia de tratamento especco para os
sunos afetados. Os melhores resultados para a
reduo da mortalidade e das perdas podem ser
obtidos atravs de mudanas de manejo baseadas
nos 20 pontos de Madec, o que permite redues
de taxas de mortalidade abaixo dos 5% em cre-
ches. A observncia das recomendaes de Madec
melhora a biossegurana da granja e reduz o po-
tencial patognico de outros agentes de doenas
que afetam os sunos, especialmente os entricos
e os respiratrios.
Esses pontos podem ser resumidos em:
reduo do estresse: especialmente am-
biental (variaes de temperatura, correntes de
ar, excesso de gases e excesso de densidade ani-
mal);
limitao dos contatos entre sunos: evitar
enxertias e misturas de leites com idades e/ou
origens diferentes, e pronta remoo dos animais
doentes para baias-hospital;
adoo de medidas de higiene: adotar o
sistema todos dentro-todos fora com vazio sa-
nitrio rigoroso entre lotes, utilizando desinfe-
tantes ecazes para o PCV-2, alm de melhorar
as medidas de biossegurana;
boa nutrio: assegurar-se da ingesto
adequada de colostro nas primeiras horas de
vida e de nutrio de boa qualidade para auxiliar
a siologia do sistema imunolgico (uso de anti-
oxidantes, por exemplo);
estabilizao imunitria: auto-reposio,
adaptao das marrs por seis semanas antes
da cobertura e realizao de um programa de
vacinao efetivo das fmeas para as outras en-
fermidades prevalentes no rebanho. Outra reco-
mendao importante a ampliao da idade de
desmame para acima de 25 dias.
Medidas bsicas de higiene, como a limpeza
e desinfeco de instalaes, seguidas de vazio
sanitrio, so prioritrias. Os circovrus so mui-
to resistentes aos desinfetantes de uma maneira
geral, principalmente por carem protegidos na
matria orgnica. Dessa forma, importante que
se realize uma limpeza geral com o uso de de-
tergentes, antes do uso dos desinfetantes. Estes
devem ser utilizados na dosagem recomendada
para inativao do vrus. Os desinfetantes mais
ecazes para o PCV-2 so aqueles base de uma
mistura de peroximonosulfato de potssio e clo-
reto de sdio, seguidos pelos desinfetantes base
de hidrxido de sdio, de amnia quaternria, de
hipoclorito de sdio e dos derivados fenlicos.
Para prevenir a entrada do PCV-2 em gran-
jas livres, deve-se seguir risca as medidas de
biossegurana. Essas medidas devem ser tanto
externas (controle de visitantes, veculos, acesso
de animais, introduo de sunos e smen), quan-
to internas (uso de desinfetantes, controle de
vetores, manejo das instalaes e reduo de es-
tresse). Estudos recentes demonstraram a presen-
a do PCV-2 no smen de cachaos de algumas
centrais de inseminao articial do pas, achado
que deve merecer ateno especial.
5.2 Vrus da anemia infecciosa das
galinhas
A anemia infecciosa das galinhas (AIG)
uma doena de aves jovens, que produz per-
das signicativas, principalmente em frangos
de corte. Apesar de a infeco ser freqente em
galinhas poedeiras, a doena clnica no muito
comum nessa categoria. A enfermidade mais
freqente em pintinhos jovens, que se infectam
de forma vertical (via ovo) a partir de matrizes
com a infeco subclnica. O CAV associado
AIG foi identicado, pela primeira vez, no Japo
e, atualmente, est disseminado mundialmente.
No Brasil, o CAV j foi identicado e a doena foi
reproduzida em aves SPF (specic pathogen free).
Anticorpos especcos contra o CAV foram de-
tectados no soro de matrizes e frangos de corte
no incio dos anos 1990 no Sul do Brasil.

5.2.1 Epidemiologia
O CAV est presente em praticamente todos
os pases que possuem avicultura comercial, e a
infeco mais freqente em lotes de matrizes
acima de 20 a 25 semanas de idade. As galinhas
se constituem na nica espcie susceptvel in-
Circoviridae 373
feco, e a doena no apresenta riscos sade
pblica. No Brasil, estudos realizados em vrios
estados demonstraram uma soroprevalncia de
aproximadamente 90% nas matrizes de corte. A
transmisso do CAV ocorre principalmente de
forma vertical, da matriz para o embrio, mas
o agente tambm pode ser transmitido horizon-
talmente pela via fecal-oral. O vrus excretado
nas fezes e pode contaminar a cama e instalaes,
podendo persistir no ambiente devido sua alta
resistncia inativao. A maioria das matrizes
se infecta ao redor das cinco semanas de idade,
provavelmente pela ingesto de material conta-
minado.
As taxas de morbidade, mortalidade e a se-
veridade da doena variam de acordo com o ttu-
lo do vrus, via de infeco, com a idade das aves,
imunidade passiva, presena de co-fatores infec-
ciosos (outros vrus imunossupressores) e no-
infecciosos (ambincia, estresse, nutrio). Alm
desses fatores, alguns relatos indicam a existncia
de amostras do CAV de maior patogenicidade e
virulncia que podem produzir quadros clnicos
mais severos.
As matrizes infectadas, geralmente, no
apresentam sinais clnicos, e os primeiros sinais
da doena aguda so observados quando os pin-
tinhos esto com 7 a 14 dias de idade. As aves ge-
ralmente cam deprimidas, apresentando taxas
de morbidade prximas a 100% e de mortalidade
entre 5 e 15%, apesar de taxas de at 60% j terem
sido relatadas.
O CAV infecta clulas do timo e da medula
ssea, mas pode tambm ser detectado em outras
clulas linfides. A replicao do CAV ocorre em
clulas precursoras dos linfcitos T no crtex do
timo, em clulas T maduras no bao, e em hemo-
citoblastos na medula ssea. A infeco de clulas
progenitoras da medula, tais como os eritroblas-
tos, hemocitoblastos e trombocitoblastos, resulta
em anemia e hemorragias. O efeito imunossu-
pressor do CAV se deve depleo de linfcitos
e a alteraes na produo de mediadores qumi-
cos da resposta imunolgica. Por isso, surtos da
doena podem ser acompanhados por infeces
bacterianas secundrias (dermatites e colibacilo-
ses), pelo agravamento de outras doenas imu-
nossupressoras (doena de Gumboro e reoviro-
ses) e por falhas vacinais a outras infeces virais,
como as doenas de Marek e Newcastle.
Em aves com idade superior a trs semanas,
a infeco geralmente subclnica, mas, mesmo
assim, pode causar perdas signicativas. A infec-
o produz alteraes na funo de macrfagos
e de outras clulas responsveis pela fagocitose,
apresentao de antgenos e produo de citoci-
nas.
A forma clnica mais importante associada
com a infeco pelo CAV ocorre em pintinhos
jovens. Nesses animais, so observados diversos
graus de anemia, palidez na musculatura, barbe-
la e crista, depresso e desuniformidade do lote.
Esses sinais podem ser confundidos com outras
doenas. Hemorragias musculares e dermatites
secundrias tambm podem ocorrer.
As leses macroscpicas mais importantes
incluem hipotroa de timo e alteraes da colo-
rao da medula do fmur. Hemorragias mus-
culares, subcutneas ou no proventrculo podem
tambm ser observadas. A co-infeco pelo CAV
e o reovrus pode resultar em um quadro deno-
minado doena da asa azul, ilustrando mais
uma vez o carter multifatorial das infeces
pelos circovrus. Microscopicamente, pode-se
observar depleo linfocitria no timo, na bursa
de Fabricius e no bao. Uma reduo de clulas
hematopoiticas na medula, degenerao de he-
patcitos e inltrao de macrfagos no fgado
tambm podem ser observados.
Estudos recentes avaliaram a persistncia
do CAV nas gnadas de matrizes de corte que
possuam nveis variveis de anticorpos neu-
tralizantes e tambm a capacidade do vrus ser
transmitido para a prognie. Foi observado que a
transmisso do vrus ao embrio pode ocorrer in-
dependentemente dos altos nveis de anticorpos
neutralizantes nas matrizes. Ainda no se tem
estabelecido qual o ttulo de anticorpos neutra-
lizantes necessrios para prevenir a transmisso
vertical. Tambm desconhecido se a vacinao
das matrizes, que vem sendo realizada atualmen-
te, efetiva para proteger a prognie.
374 Captulo 13
5.2.3 Diagnstico
O diagnstico da AIG deve ser realizado
com base nas combinaes entre os sinais clni-
cos, leses macro e microscpicas e na deteco
de antgenos ou cidos nuclicos do CAV nos r-
gos das aves afetadas. As tcnicas de IHC, IFA
e PCR so amplamente utilizadas para demons-
trar a infeco pelo CAV. O isolamento viral no
um mtodo recomendado para o diagnstico,
pois demorado e caro. No entanto, o vrus re-
plica em clulas MDCC-MSB1, que so clulas
de linhagem de linfoma que se multiplicam em
suspenso. O vrus tambm pode ser isolado pela
inoculao de ovos embrionados. Anticorpos no
soro podem ser detectados por imunouorescn-
cia indireta, soroneutralizao ou ELISA (testes
comerciais j esto disponveis).
A infeco pelo CAV muito comum em
plantis avcolas de todo o mundo. A preveno
da doena clnica pode ser obtida pela induo
de ttulos altos de anticorpos nas matrizes antes
do incio da idade de postura. Dessa forma, evita-
se a transmisso vertical do CAV. Todavia, ainda
no esto claros quais os nveis de anticorpos que
so necessrios para prevenir a transmisso ver-
tical do vrus. Vacinas vivas atenuadas esto dis-
ponveis no Brasil e so recomendadas em uma
ou duas aplicaes, entre as 16 e 20 semanas de
idade, desde que os animais recebam a ltima
dose pelo menos quatro semanas antes do incio
da postura.
Medidas como o controle de outros agentes
imunossupressores e associados com infeces
secundrias, limpeza e desinfeco das instala-
es tambm auxiliam a minimizar as perdas e a
melhorar a biossegurana da granja.
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PARVOVIRIDAE
Mauro Pires Moraes & Paulo Renato dos Santos Costa
14
1 Introduo
2 Classicao
4 Replicao
5 Parvovrus de interesse veterinrio
5.1 Vrus da panleucopenia felina
5.1.1 Epidemiologia
5.1.2 Patogenia, sinais clnicos e patologia
5.1.3 Diagnstico
5.2 Parvovrus canino
5.2.1 Epidemiologia
5.2.3 Diagnstico
5.3 Parvovrus suno
5.3.1 Epidemiologia
5.3.3 Diagnstico
5.4 Parvovrus bovino
377
377
378
381
381
384
384
384
384
387
388
388
388
389
391
391
392
392
393
394
395
395
395
1 Introduo
Os membros da famlia Parvoviridae so v-
rus pequenos, esfricos, com capsdeo icosadri-
co, que possuem uma molcula de DNA linear de
ta simples como genoma. O nome da famlia de-
riva do tamanho dos vrions (parvus = pequeno).
Uma caracterstica marcante dos parvovrus
a dependncia de clulas na fase S do ciclo celu-
lar ou em diviso, para a sua replicao. Essa de-
pendncia se deve ao requerimento da maquina-
ria celular para a sntese de DNA e replicao do
genoma viral, devido ao nmero restrito de ge-
nes e funes codicadas pelo genoma do vrus.
Os parvovrus possuem somente quatro genes,
distribudos em duas regies codicantes (open
reading frames ORFs) sobrepostas no genoma
DNA de ta simples de 5 quilobases (kb). Alm
disso, alguns vrus dessa famlia dependem de
infeco conjunta com outros vrus (adenovrus
ou herpesvrus) para completarem o seu ciclo re-
plicativo. Esses vrus so agrupados no gnero
Dependovirus e no h relatos de enfermidades
animais associadas com esses agentes.
A dependncia de clulas na fase S do ci-
clo celular exerce uma grande inuncia sobre a
patogenia das infeces pelos parvovrus. As in-
feces por esses vrus afetam preferencialmente
rgos que apresentam clulas em multiplicao,
como as clulas da medula ssea, clulas embrio-
nrias e clulas precursoras do epitlio intestinal
(clulas das criptas intestinais). Os parvovrus
apresentam uma grande estabilidade no ambien-
te, podendo manter a sua infectividade durante
meses, em determinadas condies, e so muito
restritos quanto espcie hospedeira.
Os primeiros relatos de enfermidades cau-
sadas por parvovrus em animais datam de mais
de 100 anos e se referiam panleucopenia felina
(FPL). Posteriormente, foram descritos o vrus
da enterite dos visons (MEV), em 1947, e o par-
vovrus canino (CPV) em 1978. As enfermidades
causadas por esses trs agentes so muito seme-
lhantes e cursam com enterite e leucopenia. A in-
feco por esses agentes pode, ainda, estar asso-
ciada com mortalidade e malformaes fetais.
O parvovrus suno (PPV) produz infeces
subclnicas em animais jovens e adultos, porm
responsvel por perdas reprodutivas importan-
tes quando infecta fmeas prenhes. Outros par-
vovrus tambm so responsveis por enfermi-
dades em gansos, roedores e humanos. Existem
tambm os parvovrus isolados em galinhas, coe-
lhos e eqinos, porm ainda no foram relatadas
enfermidades associadas com esses agentes. O
parvovrus bovino (BPV) encontra-se amplamen-
te disseminado na populao bovina, no entanto,
a sua importncia clnico-patolgica question-
vel. Alm de sua importncia como patgenos,
vrios parvovrus tm sido utilizados como ve-
tores para a transferncia de DNA em animais.
Em geral, esses vetores podem carrear at 5 kb de
DNA heterlogo, tendo como vantagem a ausn-
cia ou fraca resposta imune do animal contra o
vetor, permitindo a sua ampla utilizao.
2 Classicao
Segundo o Comit Internacional de Taxo-
nomia Viral (ICTV), a famlia Parvoviridae com-
posta por duas subfamlias: Parvovirinae e Den-
sovirinae. A primeira agrupa os parvovrus que
infectam vertebrados e, por isso, os seus mem-
bros sero discutidos mais detalhadamente neste
captulo. A segunda contm vrus que infectam
insetos e, aparentemente, no possuem impor-
tncia em medicina veterinria. Os principais
parvovrus de interesse veterinrio esto listados
na Tabela 14.1.
A subfamlia Parvovirinae dividida em
cinco gneros: Parvovirus, Erythrovirus, Dependo-
virus, Amdovirus (ADMV-like viruses) e Bocavirus
(BPV-like viruses). O gnero Erythrovirus repre-
sentado pelo parvovrus humano, o B19, que cau-
sa abortos e doena exantematosa em crianas; e
por outros vrus de primatas, como o parvovrus
do macaco rhesus (RhPV) e o parvovrus smio
(SPV).
A maioria dos gneros abriga vrus que re-
plicam de forma autnoma. Por outro lado, os De-
pendovirus so dependentes de adenovrus para
replicar e, por isso, so chamados adeno-associated
virus (AAV). Os AAV tm sido utilizados como
vetores de expresso, por serem apatognicos e
por no induzirem resposta imune nos animais
inoculados.
378 Captulo 14
No gnero Parvovirus, so classicados os
agentes associados com doenas em animais,
como o vrus da panleucopenia felina (FPLV), o
CPV e o parvovrus suno (PPV). Originalmente,
era reconhecido apenas um parvovrus de ces,
o canine minute virus (CnMV), que pertence ao
gnero Bocavirus e possui ocorrncia espordi-
ca. Na dcada de 1970, surgiu outro parvovrus
nesta espcie, denominado parvovrus canino
tipo 2 (CPV-2). Este vrus, denominado generi-
camente de CPV, originou-se a partir do FPLV,
disseminou-se rapidamente na populao canina
e, atualmente, constitui-se em um dos principais
patgenos da espcie canina.
Tem sido proposto que o grupo do FPLV,
que inclui o CPV, o parvovrus das martas (MEV)
e da mo-pelada ou racoon (RPV), constitui-se, na
verdade, em uma espcie viral, e que os vrus in-
dividuais seriam subespcies. Neste caso, o CPV
seria, na verdade, uma subespcie do FPLV. De
fato, existem evidncias biolgicas (como a repli-
cao em clulas de origem felina), sorolgicas e
logenticas de que o CPV realmente deriva do
FPLV. A diferena entre os vrus felino e canino
parece estar restrita substituio de dois amino-
cidos em uma protena do capsdeo, respons-
vel pela interao dos vrions com os receptores
das clulas hospedeiras.
Os vrions dos parvovrus so pequenos (18
a 26 nm de dimetro), aproximadamente esfri-
cos, com simetria icosadrica e so desprovidos
de envelope (Figura 14.1). As partculas virais
possuem uma massa de 5,5 a 6,2 x 10
6
daltons,
distribudas em uma poro protica (80%) e
DNA (20%). A densidade situa-se entre 1,39 e
1,42 g/cm
3
em gradiente de cloreto de csio, o
que permite a separao dos Dependovirus dos v-
rus associados, como os adenovrus.
Abreviatura
Parvovrus de galinha
Espcie Gnero
ChPV galinhas
Hospedeiros Manifestaes Clnicas
subclnica
Vrus da panleucopenia
felina
FPLV gatos panleucopenia, enterite,
hipoplasia cerebelar
Parvovrus canino CPV ces leucopenia, miocardite,
enterite
Vrus da enterite das
martas
MEV martas ( ) M. vision panleucopenia, enterite
Parvovrus dos mos-
peladas
RPV mo-pelada
(racoon)
panleucopenia, enterite
Vrus minuto dos
camundongos
MMV ou MVM camundongos deformidades congnitas
Parvovrus suno PPV sunos infertilidade, aborto,
mumificao fetal
Parvovrus de gansos GPV gansos hepatite, miocardite
Parvovrus de patos
Muscovy
MDPV patos
Vrus adeno-associados AAV-1 a 6 vrias espcies subclnica
D
e
p
e
n
d
o
v
i
r
u
s
hepatite, miocardite
Aleutian mink disease
virus
AMDV martas ( ) M. Vision encefalopatia
Parvovrus bovino BPV bovinos subclnica
Vrus minuto canino CnMV ces diarria
P
a
r
v
o
v
i
r
u
s
A
m
d
o
v
i
r
u
s
B
o
c
a
v
i
r
u
s
Tabela14.1. Principais parvovrus animais, hospedeiros e manifestaes clnicas
Parvoviridae 379
Os vrions apresentam uma grande resis-
tncia inativao no meio ambiente, que pode
ser creditada sua estrutura simples e compacta,
desprovida de envelope. A estrutura vrica es-
tvel sob pH entre 3 e 9, e a temperatura de 56
C
por 60 minutos. Por outro lado, a infectividade
pode ser inativada com desinfetantes base de
formalina, hipoclorito de sdio e agentes oxi-
dantes. Outra caracterstica dos parvovrus a
capacidade de aglutinar eritrcitos de sunos, de
cobaias e/ou de macacos rhesus, dependendo da
espcie do vrus. A maioria dos parvovrus pos-
sui uma gama de hospedeiros e tropismo muito
restritos. No entanto, alguns vrus podem sofrer
mutaes e ampliar a sua gama de hospedeiros.
Um exemplo foi a substituio de dois amino-
cidos na protena VP2 do FPLV, que permitiu ao
vrus utilizar o receptor da transferrina (TfR) pre-
sente em clulas de ces e, assim, estabelecer o
CPV como um novo patgeno canino.
As partculas virais so formadas por trs
classes de protenas: VP1, VP2 e VP3, com ex-
ceo do AMDV (vrus da doena das martas
Aleutian), que possui apenas as duas primeiras.
A massa molecular das protenas varia entre 80 e
86 kDa (VP1), 64-75 kDa (VP2) e 60-62 kDa (VP3).
Essas protenas so codicadas a partir de uma
nica ORF no genoma viral, sendo a VP1 e VP2
originadas por splicing alternativo do RNA men-
sageiro (mRNA). A VP3 formada a partir da
clivagem de 15 a 20 aminocidos da regio ami-
no-terminal da VP2. A VP3 somente detectada
em partculas inteiras, ou seja, em partculas que
contm o genoma viral completo, pois h produ-
o de grande quantidade de partculas defec-
tivas que apresentam genomas incompletos ou
ausentes.
O capsdeo formado por 60 cpias da VP2
e poucas cpias da VP1 e da VP3. Quando obser-
vada por cristalograa, a protena VP2 apresen-
ta oito cadeias estruturais em forma de barril-,
estrutura que conservada em outros vrus ico-
sadricos. Essas estruturas so ligadas por alas
que esto expostas na superfcie do vrion e so
responsveis pela estabilidade das partculas no
ambiente. A VP2 possui ainda epitopos que in-
duzem a produo de anticorpos neutralizantes
juntamente com a VP3, e pequenas diferenas
nesta protena podem determinar o tropismo por
diferentes tecidos e hospedeiros.
Na superfcie dos vrions, podem ser obser-
vadas estruturas caractersticas, como protube-
rncias (spikes), depresses (dimples) e estruturas
na forma de cilindros circundados por depres-
ses (canyons) (Figura 14.1). Essas estruturas
possuem funes biolgicas importantes, como o
reconhecimento e ligao a receptores celulares
(depresses) e determinao das caractersticas
imunognicas (projees).
Figura 14.1 Vrions da famlia . A)
Fotografia de microscopia eletrnica de partculas
vricas; B) Reconstruo de crio-eletromicroscopia, com
indicao das estruturas na superfcie do vrion.
Depresses, chamadas de dimples (2); projees ou
spikes (3) e cilindros (5). As depresses que circundam
os cilindros soconhecidas comocanyons.
Parvoviridae
A
B
Fonte: A) web.uct.ac.za; B) Muzyczka e Berns (2001).
380 Captulo 14
O genoma dos parvovrus composto por
uma molcula de DNA linear de cadeia simples,
com aproximadamente 5 kb. Os Dependovirus
apresentam um genoma de 4.5 kb. Em geral, a
molcula de DNA que incorporada aos vrions
de polaridade negativa (complementar aos mR-
NAs), mas alguns parvovrus podem encapsidar
qualquer uma das cadeias em propores varia-
das. Os vrions do BPV, por exemplo, apresentam
molculas de DNA de polaridade positiva em
aproximadamente 20 a 30% das partculas.
O genoma dos parvovrus de importn-
cia veterinria possuem apenas duas ORFs, que
codicam quatro protenas: duas protenas no-
estruturais (NS1 e NS2) e duas ou trs protenas
estruturais (VP1 e VP2/VP3) (Figura 14.2).
As protenas no-estruturais (NS1 e NS2)
so produzidas pela traduo de mRNAs que so-
frem splicing alternativo. A NS1 essencial para
a replicao do genoma viral, e a NS2 est asso-
ciada com a formao dos capsdeos, controle da
expresso gnica e tambm participa da replica-
o do genoma. As protenas produzidas a par-
tir da outra ORF (VP1 e VP2) fazem parte da es-
trutura do capsdeo. As protenas VP1 e VP2 so
traduzidas a partir de um mesmo mRNA, aps
splicing, e compartilham a maior parte de sua se-
qncia de aminocidos. A diferena entre a VP1
e VP2 resulta da utilizao de diferentes cdons
de iniciao pelos ribossomos. A VP3 compos-
ta por uma seqncia de aminocidos da regio
amino-terminal da VP2. Os mRNAs, produzidos
pela transcrio do genoma, possuem 5 cap e so
poliadenilados na extremidade 3.
O genoma viral apresenta de 6 a 10 seqn-
cias palindrmicas, que possibilitam a formao
de estruturas em forma de grampo nas regies
terminais (Figura 14.2). Essas estruturas so es-
Figura 14.2 Ilustrao esquemtica da estrutura e organizao do genoma e dos transcritos do parvovrus canino
(CPV). A figura superior representa o DNA genmico com as extremidades 5' e 3' flexionadas sobre si; a localizao
das duas ORFs e os stios de iniciaoda transcrio(setas). Afigura inferior mostra os trs transcritos (1, 2 e 3), comas
respectivas ORFs e locais de processamento. As linhas contnuas representam a cadeia de RNA, e os retngulos
representam as ORFs codificantes das respectivas protenas. NS1 e NS2: protenas no-estruturais; VP1 e VP2:
protenas docapsdeo.
NS1 e NS2 VP1 e VP2
5
3
NS1
NS2
VP1
VP2
5kb 4 3 2 1
A
n
1
A
n
2
A
n
3
A
n
3
ORF
Parvoviridae 381
senciais para a replicao do genoma viral e para
a encapsidao do genoma na prognie viral.
4 Replicao
A replicao dos parvovrus autnomos
ocorre no ncleo das clulas hospedeiras e de-
pende de fatores celulares que esto presentes so-
mente quando a clula est em fase S ou G2. Al-
gumas caractersticas da patogenia das infeces
por parvovrus dependem das clulas em mitose.
Por exemplo, a infeco de fetos (parvovrus su-
no e felino) ou de animais recm-nascidos (CPV)
favorecida pela presena de um grande nmero
de clulas em diviso. A infeco pode ser sist-
mica em fetos e em animais recm-nascidos, mas
geralmente restrita a tecidos com clulas em mi-
tose, como o epitlio intestinal, em animais com
mais idade.
Em fetos felinos ou em gatos recm-nasci-
dos, a infeco afeta o cerebelo; enquanto em ces
com at seis semanas de idade, o miocrdio o s-
tio preferencial de infeco pelos parvovrus. Em
animais mais velhos, as clulas que se encontram
em diviso so, principalmente, as clulas linfi-
des e as clulas das criptas do intestino. A repli-
cao do parvovrus nessas clulas pode produ-
zir linfopenia ou enterite, respectivamente.
Usualmente, a replicao dos parvovrus in
vitro restrita a clulas da espcie hospedeira,
como as PK-15 (rim de suno) para o PPV; CRFK
(rim de gato) para o FPLV. O CPV constitui-se
em exceo, pois replica em clulas MDCK (rim
de co o hospedeiro) e pode multiplicar-se tam-
bm em clulas da linhagem CRFK.
A determinao do tropismo celular ou teci-
dual do vrus depende de seqncias especcas
de aminocidos na superfcie dos vrions, impor-
tantes para o reconhecimento e ligao aos recep-
tores celulares. No CPV, o tropismo determi-
nado por trs aminocidos da VP2 (posies 93,
300 e 323). O tropismo de cepas no-patognicas
do PPV, como a NADL-2, e patognicas, como a
Kresse, determinado por diferenas em um ami-
nocido na projeo da VP2 (posio 436), e em
dois aminocidos que circundam a depresso.
O ciclo replicativo dos parvovrus inicia-
se pelo reconhecimento e ligao dos vrions a
receptores celulares. O receptor utilizado pelo
FPLV e CPV provavelmente seja o TfR, que
expresso preferencialmente em clulas em divi-
so, que so dependentes de transferrina para
realizarem a sua multiplicao. O BPV e alguns
AAVs utilizam sialoglicoprotenas como recep-
tores, ligando-se ao componente cido silico. O
parvovrus humano B19 liga-se a carboidratos; e
o AAV-2 utiliza o sulfato de heparina ou uma in-
tegrina como receptor.
A penetrao ocorre pela via endoctica, e
os vrions so transportados rapidamente at as
proximidades do ncleo da clula. Durante esse
trajeto, as partculas virais so expostas a pH pro-
gressivamente mais baixo no interior dos endos-
somos, o que induz alteraes na conformao
das protenas do capsdeo.
No interior dos endossomos, as partculas
virais sofrem trs alteraes importantes: expo-
sio da regio amino-terminal da VP1, clivagem
da regio amino-terminal da VP2 e, nalmente, o
desnudamento do genoma. Essas alteraes ocor-
rem simultaneamente e podem ser detectadas
aos 30 minutos aps a internalizao dos vrions.
As partculas que permanecem nessas vesculas
at a fuso com os lisossomos so degradadas. A
regio amino-terminal da VP1 possui sinais de
localizao nuclear, promovendo a sinalizao
para o transporte do complexo nucleoprotena
(DNA + protenas) para o ncleo da clula.
No ncleo, a primeira etapa da replicao
a sntese da ta de DNA complementar ao geno-
ma viral, resultando em uma molcula de DNA
de ta dupla (Figura 14.3). Essa sntese realiza-
da por DNA polimerases celulares e fatores auxi-
liares, tambm de origem celular. A abundncia
da DNA polimerase e de nucleotdeos a prin-
cipal razo da dependncia dos parvovrus por
clulas em multiplicao. A molcula de DNA
de ta dupla produzida pode, ento, ser utiliza-
da como molde pela RNA polimerase II celular
para a transcrio e conseqente produo dos
mRNAs.
382 Captulo 14
Apesar da variao entre a posio especca
de cada elemento, trs transcritos so produzidos
durante a replicao dos parvovrus autnomos.
A sua produo dependente de promotores dis-
tribudos ao longo do genoma viral. Em contras-
te, existe apenas um sinal para a poliadenilao
desses transcritos, que est localizado na regio
terminal do genoma. Os mRNAs originados por
splicing dos transcritos R1 e R2 sero traduzidos
nas protenas no-estruturais NS1 e NS2, respec-
tivamente. O outro transcrito primrio (R3) o
responsvel pela codicao das protenas VP1 e
VP2/VP3. Estes transcritos tambm so subme-
tidos a processamento por splicing. A utilizao
de um determinado cdon para incio da tra-
duo resulta na produo da VP1; a utilizao
de um cdon mais adiante resulta na sntese da
VP2. Alm desses, j foram detectados outros seis
transcritos, que so produzidos de forma estvel
em clulas infectadas, mas a sua funo ainda
no foi estabelecida.
A expresso gnica dos parvovrus regu-
lada de forma que a produo da protena NS1
ocorra somente na fase S do ciclo celular. Na re-
gio anterior ao sinal de transcrio deste gene,
existe uma seqncia especca de nucleotdeos
que reconhecida pelo fator de transcrio celu-
lar Sp1. No entanto, somente a presena deste ele-
mento no explica a regulao da expresso gni-
ca. Essa regulao fundamental para o sucesso
da infeco pelos parvovrus, pois a produo da
NS1 de forma contnua txica para a clula. No
entanto, o acmulo da protena NS1 durante a
fase S necessrio para a ativao dos genes que
NS1
NS2
Vrion
VP1, VP2/3
-
+
+
-
-
1
2
3 4
6
5
7
+
+
-
-
-
NS1 e NS2 VP1 e VP2
5
3
Figura 14.3. Etapas da expresso gnica e replicao dos parvovrus autnomos. O genoma DNA de fita simples
(ssDNA) , inicialmente, convertido emDNAde fita dupla (dsDNA) por enzimas celulares (1), seguido da expresso
(transcrio, traduo) das protenas NS1 e NS2 (2). A protena NS1 essencial nas etapas seguintes da replicao do
genoma (3), para a expresso das protenas estruturais (4) e tambm na fase final da replicao do DNA (5). Os
genomas recm-replicados so encapsidados pelas protenas estruturais VP1 e VP2/3, originando as novas partculas
vricas (6,7).
Parvoviridae 383
codicam as protenas estruturais. Essa funo
realizada pela ligao da NS1 a fatores de trans-
crio celulares, alguns deles j descritos (TBP e
TFIIA). A protena NS1 tambm essencial para
a replicao do genoma viral, atuando em dife-
rentes etapas do processo. Entre outras funes,
a NS1 participa da replicao atravs de suas fun-
es helicase e endonuclease. Esta ltima funo
est relacionada com a maturao do DNA viral e
com a interferncia com a replicao do DNA ce-
lular. A fosforilao da NS1 necessria para que
suas funes sejam exercidas de forma plena.
As etapas seguintes do ciclo envolvem a ex-
presso das protenas estruturais (VP1, VP2/3),
a complementao da replicao do genoma e,
nalmente, a morfognese das partculas vricas,
pela interao das protenas do capsdeo com
monmeros de DNA (Figura 14.3).
Vrios grupos tm estudado com detalhes
os mecanismos de replicao do genoma dos par-
vovrus. O conhecimento adquirido importan-
te para o desenvolvimento de vetores baseados
em parvovrus dependentes (principalmente os
AVV) e tambm para a produo de vacinas. O
modelo de replicao mais aceito o de produo
de cpias genmicas por um mecanismo de crcu-
lo rolante modicado. Neste modelo, as seqn-
cias palindrmicas repetidas da regio terminal
3 do genoma serviriam como iniciadores para a
sntese da cadeia complementar, ao formar estru-
turas terminais semelhantes a grampos de cabelo
(hairpins). Esse processo ocorreria no incio do ci-
clo replicativo, logo aps o ingresso do DNA no
ncleo celular, resultando na sntese de cadeias
de DNA complementares, que seriam utilizadas
como molde para a transcrio (Figura 14.4).
Com a produo das protenas no-estru-
turais NS1 e NS2 e uma vez completada a pri-
meira cadeia de DNA ta dupla, a polimerizao
continuaria, produzindo uma cpia linear dupla
que corresponderia a quatro cpias do genoma
viral (duas de polaridade positiva, duas negati-
vas). Essa estrutura tetrmera pode no ser a ni-
ca produzida, e alguns pesquisadores acreditam
que estruturas maiores, contendo um nmero
maior de cpias do genoma, podem ser tambm
produzidas. Essa macromolcula composta por
mltiplas cpias do genoma seria, ento, resol-
vida pela atividade endonuclease da NS1, que
clivaria o multmero em unidades genmicas de
polaridade positiva e negativa (Figura 14.4). Em
geral, as molculas de DNA de polaridade nega-
tiva so preferencialmente encapsidadas. No en-
tanto, algumas espcies virais podem encapsidar
uma mistura das duas ou tambm uma propor-
o varivel de DNAs de polaridade positiva/
negativa.
A maturao dos vrions ocorre no ncleo e
leva aproximadamente 60 minutos para ser com-
1
Monmero
ssDNA
Monmero
dsDNA
Dmero dsDNA
+
-
+
-
+
-
+
-
-
Clivagem
enzimtica
-
+
2
3
4
5
Figura 14.4 Ilustrao simplificada da replicao do
genoma dos parvovrus. A replicao se inicia na
extremidade 3' livre e prossegue ao longo do genoma (1),
resultando inicialmente na formao de um monmero
de DNAde fita dupla (dsDNA) (2). Oprosseguimentoda
polimerizao (3) leva formao de uma molcula
dimrica de dsDNA, que contmquatromolculas coma
extenso genmica (4). A clivagem deste multmero
resulta em quatro molculas genmicas de ssDNA,
sendo duas de sentido positivo e duas de sentido
negativo (5). Acredita-se que multmeros contendo um
nmero maior de unidades genmicas possam ser
formados durante a replicao do genoma dos
parvovrus.
384 Captulo 14
pletada, no entanto, a produo de capsdeos va-
zios pode ocorrer em menos tempo. Os capsdeos
vazios apresentam uma conformao diferente
das partculas virais completas. O processo de re-
plicao dos parvovrus produz corpsculos de
incluso intranucleares grandes. A liberao dos
vrions ocorre por lise das clulas infectadas.
5 Parvovrus de interesse veterinrio
Os parvovrus que possuem importncia
como patgenos de animais de produo e com-
panhia pertencem subfamlia Parvovirinae. Nes-
te captulo, sero abordados o vrus da panleuco-
penia felina (FPLV), o parvovrus canino (CPV),
o parvovrus suno (PPV) e o parvovrus bovino
(BPV), pela sua importncia clnico-patolgica e
sanitria nas respectivas espcies.
5.1 Vrus da panleucopenia felina
A panleucopenia felina (FPL) uma doena
infecciosa de distribuio mundial, que afeta os
feldeos domsticos e selvagens, e tambm outras
espcies (visons e guaxinins). A FPL uma das
principais doenas virais de felinos e encontra-se
controlada nas comunidades onde a vacinao
realizada de forma rotineira. Entretanto, a doen-
a clnica em sua forma mais grave ainda fre-
qentemente observada em gatos no-vacinados,
geralmente provenientes de gatis. Nesses ani-
mais, as taxas de morbidade e mortalidade so
elevadas.
A panleucopenia felina causada pelo FPLV,
um vrus muito semelhante ao CPV. Nos ltimos
anos, foram isoladas as cepas a e b do CPV de ga-
tos sadios e tambm de gatos com sinais clnicos
de FPL. Da mesma forma, diferentes cepas de
CPV foram capazes de reproduzir uma doena
compatvel com a FPL em gatos inoculados ex-
perimentalmente. possvel que o FPLV e o CPV
apresentem transmisso mtua entre as espcies
felina e canina e, eventualmente, alguns desses
animais desenvolvam a doena clnica.
Os vrions do FPLV so muito resistentes
sob condies ambientais, sendo capazes de man-
ter a viabilidade por at um ano sob temperatura
ambiente. O vrus resiste a vrios desinfetantes,
porm inativado pelo hipoclorito de sdio a 6%,
formol a 4% e glutaraldedo a 1% quando exposto
por 10 minutos.
5.1.1 Epidemiologia
O FPLV pode causar doena em todos os
membros da famlia dos feldeos. O vrus possui
distribuio mundial pela sua natureza altamen-
te contagiosa e pela alta capacidade de persistir
no meio ambiente. Cerca de 75% dos gatos com
um ano de idade, no-vacinados e clinicamente
saudveis, apresentam anticorpos contra o FPLV.
Portanto, a maioria dos gatos susceptveis ex-
posta e infectada pelo vrus durante seu primeiro
ano de vida. Nesses animais, a infeco geral-
mente subclnica.
A doena com sinais clnicos tpicos ocorre
mais freqentemente nos animais jovens no va-
cinados, embora os lhotes vacinados tambm
possam desenvolver a enfermidade. Isso ocorre
pela interferncia da imunidade materna com a
resposta vacinal. Na verdade, existe uma relao
inversa entre a incidncia da doena e a idade
dos animais, ou seja, a incidncia da enfermidade
diminui medida que a faixa etria aumenta.
A transmisso do vrus ocorre pelo contato
direto ou indireto dos animais susceptveis com
os animais infectados ou com as suas secrees.
O vrus pode estar presente em todas as secrees
corpreas de gatos infectados, porm mais con-
sistentemente encontrado nas fezes diarricas. A
rota fecal-oral considerada a principal forma
de transmisso. Pela alta resistncia do FPLV no
ambiente, a transmisso por fmites contamina-
dos pode desempenhar um importante papel na
propagao da infeco.
5.1.2 Patogenia, sinais clnicos
e patologia
Aps a exposio oronasal, o vrus se multi-
plica inicialmente nos linfonodos regionais. Aps
a replicao primria, o vrus atinge a corrente
sangnea e dissemina-se para os tecidos que pos-
suem clulas em diviso, como a medula ssea,
epitlio das criptas intestinais e rgos linfides
Parvoviridae 385
(Figura 14.5). O tropismo do vrus pelas clulas
hematopoiticas explica um dos eventos caracte-
rsticos da doena, a panleucopenia. Da mesma
forma, a replicao viral no epitlio intestinal
responsvel pelo quadro de enterite. Quando a
infeco ocorre no tero nal da gestao ou no
neonato, alm do tecido linfide e medula ssea,
o sistema nervoso, incluindo o crebro, cerebelo,
nervo ptico e tambm a retina, podem ser infec-
tados.
As infeces experimentais de gatos SPF (li-
vres de patgenos especcos) tm demonstrado
quadros mais brandos do que aqueles observados
em infeces naturais. Isso sugere que outros fato-
res podem participar no agravamento da doena.
Acredita-se que os animais SPF apresentem uma
taxa menor de renovao das clulas linfides e
intestinais do que os animais com microora in-
testinal preservada. Na ausncia de patgenos, a
renovao celular seria menor, com isso, a replica-
o viral e a destruio celular seriam reduzidas,
resultando em doena de severidade moderada.
As infeces bacterianas secundrias pela micro-
ora intestinal parecem contribuir para o agrava-
mento da doena. A endotoxemia resultante da
absoro de toxinas das bactrias gram-negativas
intestinais, acompanhada ou no de bacteremia,
e o desenvolvimento da coagulao intravascular
disseminada (CID) so complicaes comuns da
FPL e, provavelmente, responsveis pela evolu-
o fatal da doena (Figura 14.5).
Figura 14.5 Patogenia dapanleucopeniafelina. CID: coagulaointravascular disseminada.
Anticorpos
insuficientes
Necrose do
tecido linfide
Atrofia linfide
Exposio ao vrus
Gatos SPF
(> 3 semanas de idade)
Replicao nos linfonodos
oronasais (18-24 h)
Viremia
(2 a 7 dias)
Anticorpos
suficientes
Infeco
subclnica
Necrose
das criptas
Medula ssea
Jejuno
e leo
Leucopenia
Infeces
bacterianas
secundrias
Recuperao bito
Septicemia,
CID
Fonte: adaptado de Greene (1998).
386 Captulo 14
Durante a infeco intestinal, a replicao
do FPLV destri as clulas das criptas do epit-
lio. Essas clulas normalmente se diferenciam em
clulas de absoro medida que migram para o
pice das vilosidades. A conseqncia imediata
desta destruio celular atroa das vilosidades,
pela perda e no reposio das clulas epiteliais, e
o conseqente colapso dos vilos com exposio da
lmina prpria da mucosa. A diarria resultante
devida decincia de absoro e aumento da
permeabilidade. A diarria freqentemente he-
morrgica pelo sangramento de capilares a partir
da destruio do revestimento epitelial da muco-
sa. Esse sangramento tambm resulta em perda
de protenas para a luz intestinal. A conseqncia
nal das leses provocadas pelo vrus a quebra
da barreira de proteo intestinal e a translocao
de bactrias, que atingem a circulao sangnea
e stios extra-intestinais, podendo ocorrer septi-
cemia e CID. A isquemia intestinal ocorre devido
hipovolemia, pelas perdas lquidas por vmito
e diarria; e pode ser agravada pela septicemia,
causando o choque sptico. Pode tambm ocor-
rer uma resposta inamatria sistmica e falncia
mltipla de rgos.
A replicao viral provoca tambm lise de
linfcitos, resultando em depleo marcante dos
folculos linfides dos linfonodos, bao, tecido
linfide intestinal e timo. A atroa dos tecidos
linfides foi associada capacidade do FPLV de
induzir apoptose em clulas linfides felinas. Foi
demonstrado in vitro que o FPLV pode provocar
lise de clulas das linhagens eritride e mielide.
possvel que essa lise ocorra tambm in vivo e
seja responsvel pela leucopenia intensa.
A infeco intra-uterina pelo FPLV, no incio
da gestao, pode resultar em morte e reabsor-
o dos embries ou fetos, infertilidade, abortos
ou no nascimento de fetos mumicados (Figura
14.6). A infeco no tero nal da gestao ir re-
sultar no nascimento de lhotes vivos com graus
variveis de decincias neurolgicas. Em uma
mesma ninhada, podem estar presentes animais
com diferentes graus de decincia e mesmo ani-
mais sem alteraes aparentes, devido aquisi-
o de imunidade. O cerebelo a rea mais afe-
tada, pois parte do desenvolvimento deste rgo
em gatos ocorre na fase nal da gestao e no pe-
rodo neonatal. Os lhotes infectados nessa fase
apresentam hipoplasia cerebelar e aqueles que
sobrevivem apresentam sinais permanentes de
doena cerebelar.
Uma grande parcela dos gatos infectados
parece no manifestar sinais clnicos da infeco.
A doena, com os sinais clssicos, observada,
principalmente, em animais jovens e sem hist-
rico de vacinao, embora animais mais velhos
e mesmo vacinados possam desenvolver a en-
Exposio ao vrus
Feto
(estgio de gestao)
Filhotes
(2-3 semanas)
Incio Tero
mdio
Tero
final
Infertilidade
Morte fetal
Reabsoro
Abortos
Mumificao
fetal
Crebro
Nervo tico
Retina
Tecido linfide/medula ssea
(panleucopenia)
Cerebelo (hipoplasia)
Figura14.6 Patogenia dapanleucopeniafelina aps infecofetal e neonatal.
Parvoviridae 387
fermidade. A faixa etria de maior incidncia da
doena situa-se entre os trs e cinco meses. A taxa
de letalidade em animais com menos de um ano
de idade varia de 50 a 90%.
Os sinais clnicos iniciais da doena, com
evoluo de trs a quatro dias, incluem depres-
so profunda, anorexia, hipertermia (40
C), v-
mito e desidratao. A diarria, com ou sem he-
morragia, pode ocorrer em uma fase mais tardia.
Muitas vezes os gatinhos podem morrer antes
de apresentarem diarria hemorrgica. Quando
submetidos palpao abdominal, os animais
podem demonstrar dor abdominal, alas intes-
tinais espessadas e rudos intestinais. Petquias
e equimoses podem ser observadas em animais
que desenvolvem CID. Em estgios terminais, po-
dem ser observadas hipotermia, estupor e coma.
Animais que sobrevivem por mais de cinco dias
geralmente evoluem para a recuperao clnica.
Os gatinhos que adquirem a infeco no -
nal da gestao ou logo aps o nascimento po-
dem apresentar apenas o quadro neurolgico. Os
sinais tpicos de leso cerebelar, como ataxia, hi-
permetria, tremor, estao em base larga (mem-
bros afastados) e quedas pela incoordenao dos
membros e tronco, so observados aps trs ou
quatro semanas de vida. A intensidade dos sinais
pode variar entre lhotes da mesma ninhada. As
anormalidades neurolgicas no so progres-
sivas, porm so permanentes. Os animais com
sinais brandos podem se adaptar sua decin-
cia e viver normalmente, apesar dos seus decits
neurolgicos. O exame de fundo de olho pode
revelar reas de degenerao da retina, que apa-
recem como pequenos focos acinzentados com
bordas escurecidas.
O principal achado laboratorial a panleu-
copenia, observada em 100% dos casos de doena
sistmica. A panleucopenia pode ser detectada a
partir do segundo dia da infeco, podendo atin-
gir nmeros extremamente baixos (200 leucci-
tos/dl) entre o quarto e o sexto dia. Quanto mais
intensa for a leucopenia, mais desfavorvel ser o
prognstico. Anemia e trombocitopenia tambm
ocorrem. Outros achados laboratoriais, como hi-
perbilirrubinemia e aumento das enzimas hepti-
cas, podem eventualmente ser detectados.
Os achados patolgicos incluem congesto e
reduo da espessura do intestino delgado, reas
de necrose, vilosidades atroadas, muco e debris
celulares. Incluses intranucleares podem ser en-
contradas nas clulas das criptas intestinais. Os
linfonodos podem estar aumentados de volume,
edematosos, com destruio de linfcitos e inl-
trao massiva de neutrlos. Nos fetos e lhotes
com sinais neurolgicos, so observadas leses
na lmina granular externa do cerebelo, alm de
hipoplasia cerebelar.
5.1.3 Diagnstico
O achado de intensa leucopenia em gatos
com histrico e sinais clnicos compatveis com
a FPL suciente para se estabelecer um diag-
nstico presuntivo. Entretanto, o diagnstico de-
nitivo depende da realizao de outros testes,
como a microscopia eletrnica (ME) das fezes,
isolamento viral, sorologia e imunouorescncia
(IFA). Nos casos fatais, as alteraes histopatol-
gicas intestinais so consideradas patognomni-
cas.
Podem ser realizados testes de hemaglutina-
o (HA) a partir de amostras fecais, uma vez que
o FPLV aglutina eritrcitos de sunos. O isola-
mento viral em cultivo celular tambm pode ser
utilizado para a conrmao da etiologia. Nesse
caso, clulas primrias felinas ou clulas de li-
nhagem de origem felina, como a CRFK, podem
ser utilizadas.
Testes comerciais de ELISA para a deteco
de antgenos virais nas fezes esto disponveis
no comrcio. Pode-se tambm realizar a tcnica
de IFA em tecidos para a deteco de antgenos
virais. Outro recurso diagnstico a tcnica de
PCR, para a identicao de DNA viral em teci-
dos, fezes ou em clulas infectadas.
A pesquisa de anticorpos pode ser realizada
por soroneutralizao (SN), imunouorescncia
indireta (IFI) e ELISA, porm os resultados de-
vem ser interpretados com cautela, em razo da
grande disseminao da infeco. Nesse sentido,
somente a sorologia pareada ou a deteco de
IgM so indicativos de infeco recente. A tcni-
ca de inibio da hemaglutinao (HI) tambm
388 Captulo 14
pode ser utilizada para titular amostras nicas
ou pareadas.

O tratamento da FPL tipicamente de supor-
te, pois no existem drogas antivirais especcas.
Aps aproximadamente cinco dias da infeco,
os animais desenvolvem mecanismos imunolgi-
cos adequados para controlar a infeco. Os obje-
tivos principais da terapia incluem a manuteno
do equilbrio hdrico e eletroltico, a reduo das
perdas lquidas por vmito e diarria e o combate
s infeces bacterianas secundrias.
A vacinao se constitui em um mtodo e-
ciente para proteger os animais e reduzir a inci-
dncia da FPL. Para isso, existem vacinas inativa-
das e com vrus vivo modicado. Estas ltimas
produzem imunidade mais rpida e efetiva do
que as vacinas inativadas. A primeira vacinao
deve ser realizada com seis a oito semanas de ida-
de e repetida com intervalos de quatro semanas.
Recomenda-se a revacinao anual, porm acre-
dita-se que as vacinas atenuadas possam pro-
duzir imunidade duradoura, e as possveis ex-
posies naturais permitiriam a manuteno de
ttulos adequados de anticorpos por toda a vida
do animal. Em animais vacinados adequadamen-
te quando jovens, uma revacinao a cada trs
anos pode oferecer uma segurana adicional.
5.2 Parvovrus canino
A parvovirose canina considerada uma
das principais causas de diarria de origem in-
fecciosa em ces com idade inferior a seis meses.
A doena causada pelo parvovrus canino (cani-
ne parvovirus, CPV) que surgiu no nal dos anos
1970 e disseminou-se rapidamente por todos os
continentes. A incidncia da infeco elevada
em todo o mundo. A parvovirose canina carac-
teriza-se por enterite grave, com anorexia, vmi-
tos, diarria hemorrgica e choque. O CPV deve
ser diferenciado do outro parvovrus que infecta
ces, o canine minute virus (CnMV), que foi descri-
to em 1970, possui ocorrncia pouco freqente e
considerado pouco patognico.
Aps o seu surgimento a partir do FPLV,
o CPV continuou sofrendo alteraes genticas,
dando origem a novas cepas, designadas como
subtipos CPV-2a e CPV-2b. Felizmente, as dife-
renas antignicas entre essas cepas so mnimas
e as vacinas protegem contra ambas. Um terceiro
subtipo tem sido proposto, o CPV-2c. O CPV-2b
amplamente difundido nos Estados Unidos,
enquanto na Europa encontram-se tanto o CPV-
2b como o CPV-2a. No Brasil, existem relatos da
circulao de ambos os subtipos. O CPV-2a pre-
dominou na dcada de 1980, porm entre 1990 e
1995 a infeco pelo CPV-2b ocorreu com maior
freqncia.
Assim como os demais parvovrus, o CPV
muito resistente no ambiente e maioria dos de-
sinfetantes. Uma das excees o hipoclorito de
sdio, comercializado como gua sanitria, em
concentraes que variam de 2 a 3%. O hipoclo-
rito de sdio a 0,175% efetivo para a inativao
do CPV. Para assegurar a ao do produto, a so-
luo deve permanecer em contato com o agente
por tempo prolongado (horas).

5.2.1 Epidemiologia
A parvovirose canina surgiu no nal dos
anos 1970, apresentando altas taxas de morbida-
de e mortalidade. A gravidade da doena obser-
vada nessa poca foi atribuda falta de imuni-
dade natural da populao canina contra o novo
vrus. Atualmente, os ces so mais resistentes
ao CPV, provavelmente pelas vacinaes e pela
resistncia natural contra a doena. Entretanto, a
incidncia da infeco se mantm alta em animais
com idade entre seis semanas e seis meses.
Os lhotes dessa faixa etria, quando no-
vacinados, so altamente susceptveis ao desen-
volvimento da doena. Os anticorpos maternos
so protetores contra a infeco nas primeiras se-
manas de vida. No entanto, em um determinado
momento, os nveis de anticorpos so insucien-
tes para proteger da doena e, em contrapartida,
bloqueiam o desenvolvimento de uma resposta
imune efetiva pelas vacinas. Esse perodo co-
nhecido como janela de susceptibilidade e
pode explicar porque alguns animais, mesmo
Parvoviridae 389
adequadamente vacinados, desenvolvem a infec-
o e a doena.
Os lhotes so mais propensos ao desen-
volvimento da gastrenterite hemorrgica (GEH)
pelo CPV, porm ces de qualquer idade, sexo ou
raa podem ser acometidos. Animais de algumas
raas de porte mdio e grande, como dobermann,
rottweiler, labrador, pastor alemo e pitbull, pa-
recem apresentar a doena mais severa quando
infectados. A incidncia maior em animais sem
raa denida provavelmente est ligada vaci-
nao inadequada, associada com o acesso livre
rua, o que aumenta o risco desses animais adqui-
rirem a infeco.
O CPV altamente contagioso, e a infeco
geralmente ocorre por exposio oro-nasal a fe-
zes, fmites ou ambientes contaminados. O vrus
pode permanecer por longos perodos (mais de
seis meses) no ambiente e nos plos dos animais
que tiveram contato com fezes contaminadas. As
pessoas, equipamentos veterinrios, insetos e ro-
edores podem atuar como veculos para a propa-
gao do vrus.
Estudos sorolgicos realizados em vrios
pases indicam uma grande disseminao do
agente, com ndices variveis de soropositivida-
de em ces urbanos, geralmente entre 60 e 95%.

e patologia
Aps a exposio oronasal, o vrus replica
nos tecidos linfides prximos ao local de entra-
da (geralmente na orofaringe) e atinge a corren-
te sangnea. Durante a disseminao virmica,
o vrus se localiza preferencialmente em tecidos
com rpida diviso celular, como a medula ssea,
rgos linfopoiticos e criptas do jejuno e leo (Fi-
gura 14.7). O perodo de incubao varia de 2 a
14 dias, mas, na maioria dos casos, de 4 a 7 dias.
A viremia intensa do primeiro ao quinto dia da
infeco e cessa por volta do quinto ou sexto dia,
quando anticorpos neutralizantes j podem estar
presentes no soro. Os animais com imunidade
parcial apresentam infeco subclnica ou formas
clnicas mais brandas.
Durante a infeco intestinal, o parvovrus
replica nas clulas epiteliais das criptas da muco-
sa intestinal. Essas clulas esto em constante mi-
tose e so responsveis pela reposio do epitlio
absortivo das vilosidades. As clulas das criptas
se diferenciam em clulas de absoro medida
que migram para superfcie das vilosidades. A
conseqncia imediata da infeco pelo CPV o
achatamento das vilosidades, o colapso e a necro-
se epitelial, com exposio da lmina prpria da
mucosa (Figuras 14.7 e 14.8). A diarria, resultan-
te da m absoro intestinal, costuma ser hemor-
rgica, pelo sangramento de capilares subjacen-
tes ao revestimento epitelial da mucosa.
A perda do epitlio intestinal permite a pe-
netrao de bactrias na circulao sangnea,
que facilitada pela leucopenia. A replicao do
vrus nas clulas linfides e na medula ssea re-
sulta em linfopenia e neutropenia. A imunossu-
presso decorrente permite o estabelecimento de
infeces secundrias por outros vrus, bactrias,
fungos ou parasitas. Essas infeces podem con-
tribuir para o agravamento dos sinais clnicos.
A excreo do vrus nas fezes inicia no ter-
ceiro ou quarto dia aps a infeco e se intensica
com o surgimento da doena. O CPV excretado
em grandes quantidades por at 20 dias. O tr-
mino da excreo viral fecal est provavelmente
relacionado com o desenvolvimento de imunida-
de.
Duas sndromes clnicas so descritas em
ces infectados com o CPV: a miocardite e a gas-
trenterite hemorrgica (GEH). A miocardite pode
ocorrer em neonatos, aps a infeco intra-uteri-
na ou nas primeiras seis semanas de vida. Esses
animais apresentam morte sbita ou sinais ines-
peccos e, posteriormente, desenvolvem sinais
de insucincia cardaca. Essa forma clnica da
doena ocorreu com freqncia quando foram
relatados os primeiros surtos de parvovirose no
nal dos anos 1970. Atualmente essa manifes-
tao considerada muito rara, provavelmente
pela alta prevalncia de anticorpos contra o CPV
na populao canina. A imunidade passiva pro-
tege os lhotes na fase de ocorrncia dessa forma
clnica. A principal manifestao da parvovirose
canina a gastrenterite.
390 Captulo 14
Exposio ao vrus
Viremia
Medula
ssea
Tecido
linfide
Criptas
intestinais
Outros tecidos
(miocrdio,
esfago, rins,
fgado, pulmes)
Neutropenia
Imunossupresso
Linfopenia Necrose
epitelial
Quebra da
barreira
intestinal
Bacteremia, endotoxemia,
septicemia, SIRS, CID, FMO
Diarria
hemorrgica
Recuperao bito
Figura 14.7 Patogenia da parvovirose canina. SIRS= sndrome da resposta inflamatria sistmica, CID= Coagulao
intravascular disseminada, FMO=Falnciamltipla dergos.
B A
Vilosidade
Clulas
das criptas
(mitticas,
secretrias)
m
o
v
i
m
e
n
t
o
d
o
s
e
n
t
e
r
c
i
t
o
s
e
m
m
a
t
u
r
a
o
Cripta
Entercitos maduros
(no-mitticos,
absortivos)
Figura 14.8 Ilustrao da patogenia das leses provocadas pelo parvovrus canino (CPV) no epitlio intestinal. A)
Vilosidade intestinal com estrutura normal; B) Vilosidade afetada. A destruio das clulas das criptas pela
replicao viral resulta em reposio deficiente das clulas absortivas das vilosidades. Com isso, ocorrem necrose e
descamaoepitelial, achatamentodas vilosidades e exposiodalmina prpria.
Fonte: adaptado de Conner & Ramig (1997).
Parvoviridae 391
A apresentao tpica da GEH geralmente
ocorre em ces jovens no-vacinados, e carac-
terizada pelo surgimento brusco de prostrao,
anorexia, vmitos freqentes, sialorria, febre,
dor abdominal e diarria hemorrgica. Os sinais
de prostrao, anorexia e vmitos precedem o
quadro de diarria, geralmente em 12 a 24 horas.
Ces com diarria podem apresentar desidra-
tao, hipovolemia e choque. Os sinais clnicos
iniciais de choque incluem taquicardia, pulso
normal ou fraco, palidez das mucosas, tempo
de preenchimento capilar aumentado, hipoten-
so, nvel de conscincia reduzido e temperatu-
ra corporal baixa. Os animais que no recebem
tratamento (uidoterapia) nesse estgio evoluem
para o estgio terminal do choque, apresentando
bradicardia, mucosas plidas e cianticas, hipo-
tenso grave, pulso muito fraco ou ausente, hipo-
termia, anria e estupor ou coma. Nessa situao,
a parada cardaca e respiratria iminente e os
animais que atingem esse estgio dicilmente so-
brevivem.
O hemograma de animais infectados de-
monstra leucopenia, neutropenia e linfopenia.
Na fase de recuperao, pode ocorrer leucocitose.
Anemia pode ocorrer pela perda sangnea intes-
tinal. Hipoproteinemia, pela perda de protenas
plasmticas pelo intestino, elevao dos nveis de
uria e creatinina por azotemia pr-renal e redu-
o dos nveis de potssio tambm podem estar
presentes.
Na necropsia, observa-se a mucosa intesti-
nal congesta, hemorrgica e freqentemente re-
coberta por uma pseudomembrana. As placas de
Peyer encontram-se atroadas. A medula ssea
pode apresentar-se liquefeita e hipermica. A
histopatologia intestinal revela necrose epitelial,
colapso das vilosidades e aumento do inltrado
inamatrio na lmina prpria.
5.2.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo na rotina clnica
geralmente feito pelo histrico, sinais clnicos
e hemograma. Porm, o diagnstico denitivo
de parvovirose exige a identicao do vrus por
testes especcos. Testes de ELISA para a detec-
o de antgenos virais nas fezes esto dispon-
veis no mercado brasileiro. Outros testes, como
a identicao do vrus por HA, sorologia parea-
da por HI e SN, testes de ELISA para a deteco
de IgM, deteco dos vrions por ME podem ser
utilizados para o diagnstico denitivo. Em ca-
sos clnicos, a grande concentrao de partculas
virais nas fezes (pode chegar at 10
9
partculas/
grama) e a estabilidade viral favorecem a utili-
zao da ME. Uma alternativa a imunomicros-
copia (IME) eletrnica, na qual os anticorpos so
adicionados s suspenses fecais para a formao
de complexos que favorecem a visualizao.
O isolamento do vrus a partir de fezes ou
de tecidos pode ser realizado em clulas de ori-
gem canina, como as MDCK e A-72, e/ou em c-
lulas CRFK de origem felina.

O tratamento da gastrenterite pelo CPV de
suporte e se baseia na reposio de uidos e ele-
trlitos, na antibioticoterapia de amplo espectro e
no controle dos vmitos, para minimizar as per-
das lquidas e eletrolticas. Terapias especcas
com antivirais tm sido estudadas, sendo que o
interferon-omega felino apresentou bons resulta-
dos em ces com parvovirose. possvel que es-
sas substncias possam fazer parte do tratamento
de rotina no futuro.
Ces com parvovirose devem ser isolados
e receber tratamento em um local especco. A
limpeza e desinfeco do ambiente e equipamen-
tos devem ser feitas com hipoclorito de sdio a
0,175%.
A maneira mais efetiva de preveno da
parvovirose canina a vacinao sistemtica de
lhotes, que devem receber a primeira dose da
vacina com seis a oito semanas de idade, receben-
do duas doses de reforo a cada quatro semanas.
Uma quarta dose pode ser efetuada aos seis me-
ses de vida. A revacinao anual recomendada.
Esse esquema recomendado para estimular a
imunidade ativa medida que a imunidade pas-
siva declina, o que geralmente ocorre entre seis
e 20 semanas de vida. Por um perodo de duas
a quatro semanas, os ttulos de anticorpos atin-
gem nveis no-protetores, que interferem com a
eccia das vacinas. Ou seja, h um perodo em
que os anticorpos passivos inativam o vrus va-
cinal, porm no so sucientes para proteger os
392 Captulo 14
animais contra a infeco natural. Recomenda-se
manter os animais isolados at completarem a
fase de imunizao, sempre observando a desin-
feco do local.
Vacinas com cepas pouco atenuadas po-
dem diminuir a janela de susceptibilidade, pois
o vrus replica e estimula uma imunizao ativa
nos lhotes, mesmo com a presena de imunida-
de passiva. Nesses casos, alguns animais podem
apresentar uma forma branda da enfermidade.

5.3 Parvovrus suno
A infeco pelo parvovrus suno (PPV) pro-
vavelmente a causa mais freqente e importan-
te de falhas reprodutivas em sunos. Essas falhas
so relacionadas com a infeco de embries e fe-
tos, que resulta em mortalidade embrionria, mu-
micao fetal, abortamentos, natimortalidade e
o nascimento de leites inviveis. Alm disso, a
infeco pode resultar em infertilidade e repeti-
es de cio. Em animais adultos no-gestantes, o
PPV replica no intestino sem causar manifesta-
es clnicas. As maiores conseqncias da infec-
o devem-se infeco de fmeas soronegativas,
geralmente primparas, durante a gestao.
At o presente, somente um sorotipo do
PPV foi identicado. Entretanto, existem diferen-
as de patogenicidade entre isolados de campo.
O PPV relacionado antigenicamente com outros
membros do gnero Parvovirus, podendo ser di-
ferenciado por testes de SN e HA. A capacidade
hemaglutinante do PPV tem sido utilizada no
diagnstico da infeco, pelas tcnicas de HA e
HI. Outra caracterstica importante do agente a
resistncia a temperaturas ambientais e a varia-
es de pH, o que garante que o vrus permanea
vivel no ambiente por vrios meses.
5.3.1 Epidemiologia
A infeco pelo PPV est amplamente distri-
buda na populao suna de todo o mundo. Uma
das razes para isso a grande estabilidade do
vrus no ambiente. Dessa forma, uma granja in-
fectada pode manter o vrus durante meses, mes-
mo quando a higiene aparentemente satisfat-
ria. Nas maiores regies produtoras de sunos,
como o meio oeste dos Estados Unidos, a infeco
pelo PPV enzotica na maioria dos rebanhos e,
com poucas excees, todas as porcas apresen-
tam imunidade contra o agente. Alm disso, uma
grande proporo das leitoas naturalmente in-
fectada com o PPV antes da cobertura, desenvol-
vendo imunidade protetora contra o vrus, que
provavelmente persiste por toda a vida.
A introduo do PPV no rebanho pode ocor-
rer pela aquisio de reprodutores infectados.
Quando o agente introduzido em um rebanho
negativo, a disseminao rpida e muitas fme-
as apresentam falhas reprodutivas. Em alguns
casos, a infeco pode ser controlada e o vrus
pode at ser erradicado da propriedade, princi-
palmente em criaes pequenas (com menos de
100 matrizes). Nesses casos, a reduo da incidn-
cia da doena ocorre pela reduo ou ausncia de
animais susceptveis, uma vez que a imunidade
conferida pela infeco natural longa e slida.
Os surtos em granjas em que no h controle por
vacinao podem ocorrer em perodos cclicos
(normalmente a cada trs a quatro anos), pela re-
duo gradativa dos nveis de anticorpos.
As maiores fontes de infeco, para os ani-
mais susceptveis dentro de uma granja, so as
instalaes contaminadas. O PPV muito resis-
tente a variaes de temperatura e a vrios de-
sinfetantes comuns. Pode, portanto, permanecer
infeccioso em excrees e secrees de animais
infectados por vrios meses. A ampla distribui-
o do agente tambm levanta hipteses sobre a
possibilidade de alguns sunos serem persisten-
temente infectados e excretarem o vrus periodi-
camente. Alm disso, h evidncias da ocorrncia
de portadores imunotolerantes que sobreviveram
infeco durante a fase fetal. No entanto, esses
casos so raros e ainda no esto comprovados.
Os machos podem desempenhar um papel im-
portante na disseminao do PPV, uma vez que
o vrus pode ser encontrado nos testculos. Alm
disso, os machos tambm podem atuar como ve-
tores para a disseminao do vrus entre fmeas
susceptveis.
Estudos sorolgicos demonstraram a gran-
de prevalncia e disseminao do vrus no Bra-
sil, principalmente nos estados de Minas Gerais,
Santa Catarina e Rio Grande do Sul. No entanto,
acredita-se que o PPV esteja disseminado em to-
das as regies criadoras de sunos.
A transmisso do vrus ocorre pelas vias
oronasal e transplacentria. A imunidade passiva
Parvoviridae 393
protege os leites por longos perodos, podendo
interferir com a imunidade ativa. Algumas f-
meas podem permanecer susceptveis e, se forem
infectadas durante a gestao, podem apresentar
falhas reprodutivas. At 50% das primparas po-
dem ser susceptveis na poca da primeira cober-
tura.
5.3.2 Patogenia, sinais clnicos e
patologia
A infeco pelo PPV inicia-se principalmen-
te pela via oronasal, pelo contato com fezes ou
com restos de aborto. No entanto, a transmisso
por smen contaminado durante o coito tambm
pode ocorrer. No h evidncias diretas de que
a transmisso por smen produza problemas re-
produtivos nas fmeas infectadas. No entanto,
acredita-se que as alteraes que ocorrem no te-
ro durante a infeco possam interferir em est-
gios avanados da gestao.
Aps a penetrao, o vrus replica em teci-
dos linfides, na medula ssea e nas criptas do
intestino delgado. A infeco pode ser crnica,
com a replicao do vrus nas clulas intestinais
e excreo nas fezes por perodos prolongados,
contribuindo para a contaminao ambiental.
Tecidos fetais e membranas de abortos possuem
grande importncia na transmisso e contamina-
o ambiental, devido quantidade macia de
vrus presentes nesses fmites.
A infeco transplacentria ocorre durante
a fase de viremia na fmea gestante. Apesar da
diculdade de se detectar o vrus no epitlio ute-
rino, no se descarta a possibilidade de infeco
direta por replicao neste rgo e nas membra-
nas placentrias. Outro mecanismo sugerido se-
ria a transferncia do vrus ao feto no interior de
macrfagos.
O PPV apresenta particular avidez pelos te-
cidos do embrio e/ou do feto e seus envoltrios.
O feto sensvel aos efeitos do vrus durante a
primeira metade da gestao. Aps este perodo,
torna-se imunologicamente competente e capaz
de eliminar a infeco pelo desenvolvimento de
uma resposta imune ativa contra o vrus. A infec-
o embrionria ou fetal ocorre 10 a 15 dias aps a
infeco da fmea, e a evoluo depende do est-
gio de gestao. Na fase embrionria (at 30 dias
depois da concepo), a infeco geralmente leva
morte embrionria e reabsoro. Se a maioria
dos embries morrer, a fmea pode retornar ao
cio com intervalo prolongado. Se a maioria dos
embries resistir, o resultado ser o nascimento
de leitegadas pequenas, pois os embries mortos
so reabsorvidos.
A infeco fetal entre os 30 e 55 dias geral-
mente leva morte e mumicao fetal. A ges-
tao pode ser levada a termo, e a fmea pode
produzir uma leitegada composta por alguns
leites saudveis e outros mumicados (Figura
14.9). A freqncia de natimortos tambm pode
estar aumentada e pode ser conseqncia do re-
tardo na pario. A infeco fetal aps os 70 dias
geralmente no causa efeito deletrio sobre os fe-
tos, pois, nessa fase, j esto com o sistema imune
desenvolvido e so capazes de responder imuno-
logicamente infeco.
Durante a infeco intra-uterina, o vrus
transmitido de um feto a outro, atingindo os dife-
rentes fetos a determinados intervalos de tempo.
Ou seja, a infeco de toda a leitegada no ocorre
simultaneamente. Este fato pode explicar a pre-
sena de fetos mumicados em diferentes fases
de desenvolvimento, muitas vezes mesclados
com fetos normais (Figura 14.9).
A B
Figura 14.9. Efeitos do PPV na reproduo. A) Leitegada
de uma porca inoculada experimentalmente com o PPV
aos 34 dias de gestao. L: fetos do corno uterino
esquerdo; R: fetos do corno direito. A foto foi tirada do
animal abatido no dia 114 de gestao. B) Leitegada de
uma porca infectada naturalmente com o PPV. Note o
avanadograudedesidrataodos fetos.
Fonte: Mengeling (2006).
394 Captulo 14
Cabe ressaltar que a ocorrncia de abortos
rara durante a infeco pelo PPV, e essa carac-
terstica pode auxiliar no diagnstico diferencial
de outras infeces que causam perdas reprodu-
tivas.
Os sinais da infeco geralmente so restri-
tos s fmeas primparas e caracterizam-se por
falhas reprodutivas, como o retorno ao cio, trs a
oito semanas aps a inseminao ou coito. Algu-
mas fmeas permanecem sem retorno ao cio por
perodos maiores. Geralmente no h descrio
de sinais clnicos em outros animais da granja.
Dentre os sinais indicativos da infeco pelo
PPV em uma granja destacam-se: a) nascimen-
to de leitegadas pequenas, associadas com fetos
mumicados de diferentes tamanhos, geralmen-
te resultantes de fmeas no-vacinadas ou de
primeira cria; b) aumento das taxas de retorno
ao cio; c) ausncia de sinais clnicos nas fmeas
afetadas; d) gestao falsa em algumas fmeas;
e) leitegadas com fetos mumicados e normais;
f) natimortalidade aumentada. Um resumo dos
achados clnico-reprodutivos, em granjas afeta-
das de forma aguda pela parvovirose suna, est
apresentado na Tabela 14.2.
de autlise e mumicados. Microscopicamente,
observa-se necrose generalizada nos tecidos fe-
tais com a presena de corpsculos intranuclea-
res. Inamao e hipertroa endotelial, alm de
inltrao de clulas mononucleares nas mem-
branas placentrias e no epitlio uterino tambm
so observados.
5.3.3 Diagnstico
A presena da infeco pelo PPV deve ser
investigada sempre que houver aumento nos n-
dices de retorno ao cio e atraso na data de pari-
o, associados com a presena de fetos mumi-
cados e leitegadas com nmero reduzido de
leites, especialmente em fmeas de primeiro
ou segundo parto. Leitegadas, contendo alguns
leites normais e outros mumicados, freqente-
mente em diferentes estgios de desenvolvimen-
to, so fortes indicativos da infeco. Esses sinais
geralmente no so acompanhados por outras
manifestaes clnicas nas fmeas.
O material a ser remetido para o laboratrio
para conrmao do diagnstico deve incluir fe-
tos mumicados, restos fetais e fragmentos de te-
cidos necrticos. Pode-se, ainda, enviar amostras
de soro pareado das fmeas (isto , uma amos-
tra coletada no momento da falha reprodutiva e
outra coletada com 2 a 4 semanas de intervalo),
amostras de soro dos fetos abortados, dos leites
natimortos ou dos leites antes da ingesto do
colostro.
Os fetos mumicados podem apresentar
grande quantidade de antgenos virais, que po-
dem ser detectados por ELISA e IFA. Pode-se,
ainda, detectar o vrus por HA, realizada com
eritrcitos de cobaias. Tecidos e uidos fetais so
indicados para serem testados por esta tcnica.
Nos casos em que a infeco ocorre no perodo
inicial da gestao, a presena do vrus de difcil
deteco.
Em geral, os testes sorolgicos so recomen-
dados apenas quando tecidos de fetos mumica-
dos no so disponveis. O uso de sorologia apre-
senta restries devido ampla disseminao
da infeco, o que diculta a interpretao dos
resultados. Nesse sentido, testes como a HI, SN
e ELISA podem ser utilizados para o diagnsti-
As leses so bem caractersticas e restritas
aos fetos e tero. Os fetos podem apresentar di-
ferentes aspectos e, pela infeco em diferentes
fases, podem ser observados, em uma mesma lei-
tegada, animais sadios, natimortos, em processo
Rebanho
afetado
Nmero total de leites
nascidos
Rebanho
normal
Parmetro
Normal Reduzido
Vivos e mortos 11.5 < 9.5
% de leitegadas c/ < 9
Porcas (< 10%);
marrs (< 18%)
20-40%
Natimortos 4-7% 7-12%
Fetos mumificados < 0,6% 1-4%
Porcas sem cria/vazias 1,0% 2-6%
Retorno retardado ao cio < 3% > 4%
Intervalo desmame-cio Normal Normal
Tabela 14.2 Achados clnico-reprodutivos observados
durante surtos de infeco aguda pelo parvovrus suno
(PPV)
Parvoviridae 395
co. No entanto, o seu uso restrito a amostras de
soro pareado e anlise da variao dos ttulos de
anticorpos entre uma amostra e outra. A deteco
de anticorpos no soro fetal, de natimortos e de
leites antes da primeira mamada so evidncias
da infeco intra-uterina, uma vez que anticorpos
maternais no atravessam a barreira transplacen-
tria nessa espcie.
O diagnstico diferencial deve considerar
outras infeces que cursam com perdas repro-
dutivas, como a doena de Aujeszky, infeco
pelo vrus da sndrome respiratria e reproduti-
va (PRRSV), leptospirose, entre outras. Deve-se
levar em considerao que, na infeco pelo PPV,
no ocorrem manifestaes clnicas de doena em
qualquer categoria animal e os abortos so raros.

Como a infeco pelo PPV endmica na
maioria dos rebanhos sunos, o controle deve ser
baseado na vacinao. Para esta nalidade, exis-
tem vacinas atenuadas e inativadas. No Brasil, s
existem vacinas inativadas no comrcio, podendo
ser monovalentes ou combinadas com antgenos
de outros agentes virais e/ou bacterianos. Reco-
menda-se a vacinao das fmeas pelo menos 30
dias antes do perodo de cobertura (duas doses
com 30 dias de intervalo) e a aplicao de refor-
os anuais. A imunidade passiva pode interferir
com a vacinao de fmeas em cobertura antes
dos sete meses de idade. A vacinao de repro-
dutores machos jovens tambm tem sido indi-
cada para aumentar a eccia do programa de
controle.
A prtica de fornecimento de restos fetais e
membranas placentrias para fmeas no-gestan-
tes no recomendvel, pelo risco de dissemina-
o de outros agentes.

5.4 Parvovrus bovino
A infeco pelo parvovrus bovino (BPV),
recentemente classicado no gnero Bocavirus,
encontra-se disseminada mundialmente. Apesar
de o agente ser freqentemente isolado de fezes
de bovinos sadios, existem relatos de associao
do isolamento do BPV com doena entrica em
neonatos e em bovinos jovens. Existem, ainda,
evidncias de hipoplasia cerebelar congnita e
de doena respiratria associadas com a infeco
pelo BPV.
Acredita-se que a diculdade em esclarecer
o impacto patognico desse agente est associada
dependncia de outros fatores, tais como: ma-
nejo, falha da imunidade passiva e a presena de
infeces concomitantes. Pode-se especular que a
alta prevalncia de anticorpos contra o agente em
animais pode dicultar o aparecimento de casos
clnicos decorrentes da infeco por este vrus.
No Rio Grande do Sul, um inqurito sorol-
gico realizado com aproximadamente 4.000 bovi-
nos leiteiros revelou 97% de positividade, sendo
que 66,3% dos animais apresentavam um ttulo
maior que 160 pela tcnica de HI.
Tambm existem evidncias de resposta
imune, tanto por anticorpos hemaglutinantes
como neutralizantes, contra o BPV em fetos e ter-
neiros recm-nascidos de vacas leiteiras sorologi-
camente positivas.
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PAPILLOMAVIRIDAE
Amauri A. Aleri, Sheila R. Wosiacki & Alice F. Aleri
15
1 Introduo
2 Classicao
3 Estrutura e propriedades dos vrions
4 Estrutura e organizao genmica
5 O ciclo replicativo
5.1 Adsoro, penetrao e desnudamento
5.2 Transcrio e expresso das protenas virais
5.4 Montagem do capsdeo e egresso
6 Patogenia
7 Patologia
8 Papilomavrus e tumores
9 Diagnstico
10 Imunologia
11 Imunoprolaxia
12 Doenas de importncia em medicina veterinria causadas por papilomavrus
12.1 Papilomatose
12.2 Hematria enzotica e tumores no trato digestrio superior de bovinos
399
400
402
402
404
404
404
404
405
405
405
406
407
407
408
409
409
410
411
1 Introduo
Os vrus da famlia Papillomaviridae infectam
diferentes espcies de mamferos e aves e carac-
terizam-se pela propriedade oncognica, que
responsvel pela produo de leses tumorais,
benignas e malignas, nos epitlios cutneo e mu-
coso. Em medicina veterinria, as leses ocasio-
nadas pela infeco com os papilomavrus de-
terminam prejuzos econmicos considerveis
bovinocultura tanto por perdas diretas, causadas
pela morte de animais, quanto indiretas, repre-
sentadas por redues na produtividade e no va-
lor comercial dos animais e subprodutos como o
couro. Em bovinos, a correlao entre a infeco
pelo papilomavrus e o desenvolvimento de neo-
plasias tem sido extensivamente avaliada, no
apenas pela repercusso econmica da infeco,
mas tambm por ser um modelo experimental in-
teressante para o estudo do sinergismo com fato-
res ambientais na etiologia das neoplasias.
A infeco por membros da famlia Papillo-
maviridae ocasiona enfermidades semelhantes nas
diversas espcies acometidas e est amplamente
distribuda em todo o mundo. As leses cut-
neas so comumente denominadas papilomatose
ou apenas verrugas, e so relatadas em quase to-
das as espcies de mamferos e em algumas aves
e animais marinhos. A infeco do epitlio muco-
so geralmente est associada com a formao de
tumores malignos. Em seres humanos, a infeco
pelo papilomavrus est intimamente associada
ao cncer do colo do tero; e, em bovinos, a tu-
mores vesicais (hematria enzotica bovina) e no
trato digestrio superior (caraguat).
A ocorrncia de papilomas cutneos em hu-
manos descrita h sculos e est presente em re-
latos de origem grega e romana. As leses muco-
sas do colo do tero foram amplamente relatadas
na Idade Mdia, ocasio em que todas as doenas
sexualmente transmissveis eram consideradas
como ocasionadas por um nico agente. O estu-
do do papilomavrus animal tambm tem uma
longa histria. Em 1898, MFadycan e Hobday re-
lataram a etiologia infecciosa do papilomavrus
oral canino (COPV). No entanto, o primeiro pa-
pilomavrus animal foi identicado somente em
1933, por Richard Shope, que estudou o cottontail
rabbit papillomavirus (CRPV), que foi o primeiro
vrus DNA oncognico identicado. O CRPV foi
um importante modelo para os estudos pioneiros
sobre a oncognese viral. Entretanto, assim como
todos os outros membros dessa famlia, o CRPV
tambm se manteve refratrio aos estudos virol-
gicos padres pela incapacidade de propagao
do vrus em sistemas de cultivos celulares. Na
dcada de 1950, os estudos com os papilomav-
rus perderam campo para os membros da famlia
Polyomaviridae, que podem ser cultivados e multi-
plicados em cultivos de clulas convencionais.
Por muitos anos, os papilomavrus, tanto na
medicina humana quanto na veterinria, foram
considerados de pouco interesse. Com o advento
da tecnologia do DNA recombinante e clonagem
gnica na dcada de 1970, o primeiro genoma
de papilomavrus foi clonado com sucesso. Esse
passo foi importante para o reincio das pesqui-
sas com os papilomavrus, que possuem vrios
genes com potencial oncognico e so de grande
importncia no estudo da oncologia molecular.
As mudanas na percepo da importncia das
infeces, em conjunto com o avano tecnolgico
da biologia molecular, conduziram intensica-
o das pesquisas que proporcionaram aos papi-
lomavrus uma posio de destaque no estudo do
cncer e da virologia molecular.
Historicamente, os papilomavrus foram
agrupados em conjunto com os poliomavrus,
constituindo a famlia Papovaviridae, cujo nome
derivado das iniciais de seus trs membros
(Papillomavirus, Polyomavirus e Simian Vacuola-
ting Agent SV40). Todos os trs diferentes vrus
apresentam propriedades semelhantes (tamanho
e forma do vrion, ausncia de envelope e genoma
constitudo por DNA ta dupla circular). Apenas
com base no dimetro mdio dos vrions, a fam-
lia Papovaviridae inicialmente inclua dois gne-
ros: o Polyomavirus, com as espcies poliomavrus
e o SV40, e o Papillomavirus. Estudos moleculares
comparativos indicaram diferenas fundamentais
entre eles, destacando-se o tamanho do genoma
e a organizao genmica, na qual, praticamen-
te, no so observadas similaridades na seqn-
cia de nucleotdeos. Com isso, no ano 2000, o 7
Comit Internacional de Taxonomia Viral (ICTV)
reclassicou a famlia Papovaviridae em famlias
400 Captulo 15
Papillomaviridae e Polyomaviridae. Nessa ocasio, a
famlia Papillomaviridae continha apenas um g-
nero, o Papillomavirus. Em 2004, o 8 ICTV props
a existncia de 16 gneros (Tabela 15.1).
2 Classicao
A famlia Papillomaviridae encontra-se em
ativa expanso. Uma caracterstica viral de gran-
de importncia para a classicao a impossi-
bilidade de isolamento dos papilomavrus em
cultivo celulares convencionais, o que diculta o
processo de identicao e experimentao, as-
sim como a caracterizao de alteraes celulares
e patolgicas da infeco. Nos ltimos 30 anos,
com os avanos da biotecnologia, a taxonomia
dessa famlia viral tem evoludo com base em
algoritmos logenticos para a comparao de
seqncias genmicas e subgenmicas. Existem
fortes evidncias de que o genoma dos papiloma-
vrus relativamente estvel e de que pequenas
variaes provavelmente ocorram na mesma fre-
qncia que em outros vrus DNA.
De acordo com o ICTV, a atual classicao
dos papilomavrus teve o objetivo de estabelecer
a relao entre os tipos de papilomavrus, com-
Tabela 15.1. Classificaoe doenas associadas comos papilomavrus
Gnero Biologia/patologia
Leses cutneas e mucosas em
humanos e primatas.
15 Alphapapillomavirus
Espcies Espcies/n de tipos
Papilomavrus humano 32
Leses cutneas em humanos,
geralmente de forma latente.
ativado aps eventos
imunossupressivos.
5 Betapapillomavirus Papilomavrus humano 5
Leses cutneas em humanos com
corpsculos de incluso
intracitoplasmticos caractersticos.
5 Gammapapillomavirus Papilomavrus humano 4
Leses fibropapilomatosas em
ungulados. Infeces interespcies
so relatadas.
4 Deltapapillomavirus Papilomavrus do alce
europeu
Leses cutneas em bovinos. 1 Epsilonpapillomavirus Papilomavrus bovino 5
Leses cutneas em eqinos. 1 Zetapapillomavirus Papilomavrus eqino 1
Leses cutneas em aves. 1 Etapapillomavirus Papilomavrus do Fringilla coelebs
Leses cutneas em roedores. 1 Lotapapillomavirus Papilomavrus Mastomys
natalensis
Leses cutneas em aves. 1 Thetapapillomavirus Papilomavirus Psittacus erithacus
timneh
Leses cutneas e de mucosas em
coelhos.
2 Kappapapillomavirus Papilomavrus do coelho cauda-
de-algodo
Papilomavrus animal que causa leses
cutneas e de mucosas.
2 Lambdapapillomavirus Papilomavrus oral canino
Leses cutneas em humanos com
corpsculos de incluso
intracitoplasmticos caractersticos.
2 Mupapillomavirus Papilomavrus humano 1
Leses cutneas benignas e malignas
em humanos.
1 Nupapillomavirus Papilomavrus humano 41
Papilomavrus que induz verdadeiros
papilomas no hospedeiro, causando
leses cutneas e de mucosas.
1 Xipapillomavirus Papilomavrus bovino 3
Isolado de leses genitais em cetceos. 1 Omikronpapillomavirus Papilomavrus do Phocoena
spinipinnis
Leses mucosas em hamsters. 1 Pipapillomavirus Papilomavrus oral dos hamsters
Fonte: ICTV (2004).
Papillomaviridae 401
parar o termo tipo de papilomavrus nos pa-
dres taxonmicos espcie e gnero e inves-
tigar a relao entre a classicao taxonmica e
as propriedades biolgicas e patolgicas. Assim,
a famlia Papillomaviridae foi avaliada em bases -
logenticas e, atualmente, composta por 16 g-
neros (Tabela 15.1). Alguns desses agrupamentos
logenticos coincidem com as propriedades bio-
lgicas e patolgicas, enquanto outros divergem,
mostrando apenas relaes moleculares.
Os papilomavrus so altamente espcie/
tecido-especcos e tm sido descritos em diver-
sas espcies de mamferos, como seres humanos,
animais domsticos e selvagens, assim como em
algumas espcies de aves. Infeces entre dife-
rentes espcies hospedeiras so relatadas; no
entanto, nenhum caso de infeco produtiva foi
comprovado na segunda espcie. As espcies de
papilomavrus que infectam animais esto apre-
sentadas na Tabela 15.2. A classicao por soro-
tipos no utilizada para a sistemtica dos papi-
lomavrus, que se baseia na espcie hospedeira,
na origem e extenso das leses, e no genoma
viral, sendo referido como gentipos virais.
O gene L1, que codica a principal protena
do capsdeo, o mais conservado do genoma viral
e tem sido utilizado para a identicao de novos
tipos de vrus. Um novo isolado de papilomav-
rus reconhecido quando, aps o seqenciamen-
to da seqncia codicante L1 (ORF, seqncia
aberta de leitura, L1), houver diferena superior
a 10% com os papilomavrus conhecidos e com
seqncias disponveis em bancos genmicos.
Diferena entre dois e 10% na homologia dene
um subtipo, e inferior a 2% dene uma variante
viral.
Tabela 15.2. Espcies depapilomavrus queinfectamanimais
Gnero Espcie/tipo
Papilomavrus do alce europeu
(EEPV)
1
Deltapapillomavirus
Espcies Outros papilomavrus
Papilomavrus do cervo reindeer
Papilomavrus do cervo (DPV) 2
-
Papilomavrus ovino 1 (OvPV-1) 3 OvPV-2
Papilomavrus bovino 1 (BPV-1) 4 BPV-2
Epsilonpapillomavirus Papilomavrus bovino 5 (BPV-5) 1
-
Zetapapillomavirus Papilomavrus eqino 1 (EcPV-1) 1
-
Etapapillomavirus Papilomavrus do Chaffinch (ChPV) 1
-
Thetapapillomavirus Papilomavrus dos papagaios (PePV) 1
-
Kappapapillomavirus
Papilomavrus do coelhos cauda-de-
algodo (CRPV)
1
-
Papilomavrus oral dos coelhos
(ROPV)
2
-
Lambdapapillomavirus
Papilomavrus oral canino (COPV) 1
-
Papilomavrus felino (FDPV) 2
-
Xipapillomavirus Papilomavrus bovino 3 (BPV-3) 1 BPV-4 e BPV-6
Pipapillomavirus
Papilomavrus oral dos hamsters
(HaPV)
1 -
No-classificado Papilomavrus bovino 7 (BPV-7) - -
402 Captulo 15
Embora ainda no utilizada com muita fre-
qncia, a classicao dos papilomavrus em
gnero e espcie tambm foi recentemente de-
nida em bases logenticas. Diferentes gneros
apresentam menos de 60% de similaridade na
seqncia de nucleotdeos da ORF L1 e entre 23
e 43% de similaridade na seqncia completa do
genoma viral. Entre as espcies virais pertencen-
tes ao mesmo gnero, devem ser encontradas se-
melhanas entre 60 e 70% na seqncia da ORF
L1.
Atualmente, os bancos genmicos dispem
da seqncia completa do genoma de 118 tipos
de papilomavrus. Porm, esse nmero deve ser
constantemente reavaliado, uma vez que novos
estudos tm conduzido determinao de novos
tipos, subtipos e variantes virais com grande fre-
qncia.
3 Estrutura e propriedades
dos vrions
Os papilomavrus so pequenos vrus on-
cognicos no-envelopados, com 52 a 55 nm de
dimetro. O capsdeo viral, com simetria icosa-
drica, composto por 72 capsmeros, sendo 60
capsmeros que se ligam de forma hexavalente
e 12, de forma pentavalente. Os capsmeros so
arranjados em superfcies com triangulao T = 7,
originando microscopia eletrnica o aspecto ar-
redondado (Figura 15.1). Cada capsmero com-
posto por duas protenas codicadas pelo vrus:
a protena principal (L1) e a protena secundria
(L2). Partculas semelhantes ao vrus (VLPs) po-
dem ser produzidas pela expresso somente da
protena L1 ou pela combinao das protenas L1
e L2. Os vrions apresentam coeciente de sedi-
mentao (S
20
, W) de 300 e densidade no cloreto
de csio de 1.34 g/mL.
O cido nuclico dos papilomavrus consiste
de uma molcula de DNA de ta dupla circular,
com 7.3 a 8 kpb. Nos vrions e nas clulas hos-
pedeiras, o genoma est conjugado com histonas,
formando um complexo semelhante cromatina
celular. A massa molecular do cido nuclico
de 5.0 x 10
6
daltons e representa 12% da massa do
vrion. A partcula viral resistente s condies
do meio ambiente e a solventes lipdicos, como o
ter e o clorofrmio.
4 Estrutura e organizao genmica

Apesar do tamanho relativamente pequeno,
a organizao do genoma dos papilomavrus
muito complexa (Figura 15.2). No so observa-
Figura 15.1. Fotomicrografia eletrnica de um
papilomavrus humano.
Fonte: www.oralcancerfoundation.org
Regio conservada e
expressa aps a integrao
Regio interrompida
aps a integrao
Regio pouco, ou
no-expressa
aps a integrao
L2
L1
E2
E5
E4
E1
E7
E6 L
C
R
p
r
o
m
o
to
r
e
s
e
r
e
g
u
la
d
o
r
e
s
BPV - 1
1000
2000
4000
5000
6000
3000
7000
7945
Figura 15.2. Ilustrao esquemtica da organizao do
genomadopapilomavrus bovinotipo1.
Fonte: Alfieri, A.A.
das diferenas na organizao genmica entre os
gneros de papilomavrus. Todas as ORFs esto
localizadas em uma das tas do DNA viral, in-
dicando que apenas uma ta utilizada como
molde para codicar as protenas virais. A ta co-
dicante contm cerca de 10 ORFs, classicadas
em dois segmentos principais, conforme a fase de
transcrio: o segmento E contm oito ORFs a se-
rem traduzidas, chamadas de iniciais (early E), e
o segmento L contm duas ORFs tardias (late L).
As ORFs E e L so encontradas em locais distin-
tos do genoma. O segmento E representa 45%
do genoma viral e codica protenas necessrias
para as fases iniciais de replicao e transcrio
viral. Nesse segmento, esto as ORFs que codi-
cam as protenas regulatrias e as protenas onco-
gnicas dos papilomavrus. As protenas iniciais
so expressas em clulas recm-infectadas, em
infeces no-produtivas, assim como em clulas
transformadas. O segmento L representa 40% do
genoma viral e codica as protenas do capsdeo
(L1 e L2), que so produzidas nas fases tardias
da replicao viral e so encontradas apenas nas
infeces produtivas. As ORFs dos papilomav-
rus esto sobrepostas e aninhadas, compactando
vrios genes em uma pequena extenso do geno-
ma. A massa molecular e a funo das protenas
virais so bem conservadas entre as diferentes
espcies de papilomavrus.
Entre os segmentos genmicos L e E existe
outro segmento, denominado LCR (long control
region), que representa 15% (500-1.000 pb) do
genoma viral. Essa regio no codica prote-
nas, mas contm elementos promotores e regies
regulatrias da replicao viral. A maioria dos
elementos cis de regulao da replicao e trans-
crio do material gentico, assim como o ponto
de origem (ori) da replicao esto contidos nessa
regio.
Em sntese, no genoma dos papilomavrus,
so encontrados trs oncogenes (E5, E6 e E7), que
Tabela 15.3. Protenas codificadas pelopapilomavrus bovinotipo1
Protena
Tamanho
(aminocidos)
605
Em conjunto com a E2, a primeira protena a ser produzida.
uma helicase dependente de ATP que separa as cadeias do DNA
viral e age como fator de elongao na replicao do DNA. Atua
como protena regulatria de oncogenes virais.
E1
Funo
306
Est envolvida tanto no controle da transcrio quanto na replicao
do DNA. Atua como protena regulatria de oncogenes virais.
E2
120
So pequenas protenas, expressas tardiamente, produzidas por
alternativo e modificada aps a traduo. Esto envolvidas na
transformao da clula hospedeira, desregulando a mitognese.
splicing
E4
44
Protena de transformao celular que interage com receptores de
fatores de crescimento, obstruindo os mecanismos de supresso do
crescimento. Altera o controle do ciclo celular.
E5
137
Protena de transformao celular que ao se ligar p53 (protena
de supresso de tumores), ocasiona a sua degradao. Altera o
controle do ciclo celular.
E6
127
Protena de transformao celular que ao se ligar pRb ou p107
(protenas de supresso de tumores) ocasiona a sua degradao.
Altera o controle do ciclo celular.
E7
495
Protena principal do capsdeo. Representa 80% do capsdeo protico
e contm epitopos que induzem anticorpos neutralizantes.
L1
469
Protena secundria do capsdeo viral. Tambm contm epitopos
que induzem anticorpos neutralizantes.
L2
404 Captulo 15
mltiplos promotores e formas alternativas de
transcrio. Os primeiros indicadores de trans-
crio do genoma aparecem cerca de quatro se-
manas aps a infeco, quando pode ser detec-
tada a expresso dos genes iniciais E1 e E2. Na
infeco produtiva, as clulas da camada basal da
epiderme, que possuem a capacidade de se mul-
tiplicar, aumentam a taxa de proliferao. Esse
efeito, provavelmente, deva-se combinao das
aes das protenas expressas pelo gene E5, que
atuam em conjunto com receptores de fator de
crescimento epidrmico; protena viral E6, que se
liga protena p53; e protena E7, que se liga
protena retinoblastoma (Rb). As oncoprotenas
virais interferem, dessa forma, no ciclo vegetati-
vo celular.
A transformao promovida pelos papilo-
mavrus complexa e depende dos produtos dos
genes iniciais. As protenas de transformao po-
dem ser diferentes entre os vrios tipos virais, e
o mecanismo de ao dessas protenas ainda no
est totalmente elucidado. O princpio geral con-
siste em duas ou mais protenas iniciais coope-
rando para formar o fentipo transformado. Al-
guns vrus podem transformar clulas por si s,
como o papilomavrus bovino tipo 1 (BPV-1), e
outros requerem a cooperao com um oncogene
celular ativado, como o papilomavrus humano
tipo 16 (HPV-16). Na maioria dos casos, parte ou
todo o genoma do papilomavrus mantido nas
clulas tumorais. Em casos excepcionais, como o
papilomavrus bovino tipo 4 (BPV-4), o DNA vi-
ral pode ser perdido antes da transformao.
5.3 Replicao do genoma viral
A replicao do genoma viral ocorre no n-
cleo celular e realizada em diferentes etapas, de
acordo com as fases de diferenciao das clulas
do epitlio. Inicialmente, nas clulas abaixo da
superfcie da derme, o DNA viral amplicado
at um total de 50 a 400 cpias por clula. Aps
esta fase inicial de replicao, o DNA viral passa
a ser replicado em conjunto com o ciclo de divi-
so celular e o nmero de cpias virais por clu-
la permanece constante. Nas clulas diferencia-
das da epiderme, o DNA viral amplicado em
grande nmero de cpias por clula e de forma
descontrolada.
modulam os processos de transformao celular;
dois genes que codicam protenas reguladoras
(E1 e E2), que modulam a transcrio e a replica-
o; e dois outros genes que codicam as prote-
nas estruturais (L1 e L2) que compem o capsdeo
viral. As ORFs E1, E2, L1 e L2 so particularmen-
te bem conservadas entre todos os membros des-
sa famlia. Na Tabela 15.3, esto apresentadas as
protenas codicadas pelos papilomavrus bovi-
no tipo 1 e suas respectivas funes.
O genoma dos papilomavrus pode ser en-
contrado no ncleo da clula infectada sob duas
formas fsicas: a epissomal e a integrada. A epis-
somal encontrada em leses iniciais e benignas,
sob a forma circular e em mltiplas cpias. A
forma integrada encontrada apenas em clulas
transformadas. Nessa forma, o genoma do papi-
lomavrus encontra-se integrado ao cromossomo
da clula hospedeira, com uma nica cpia por
clula. A integrao do genoma viral ao cromos-
somo celular ocorre de forma aleatria, porm to-
das as clulas infectadas apresentam a integrao
no mesmo stio.
5.1 Adsoro, penetrao
e desnudamento
A infeco pelo papilomavrus iniciada
com a adsoro dos vrions superfcie das c-
lulas basais do epitlio. O receptor responsvel
pela ligao dos vrions uma molcula conser-
vada, presente na membrana celular, porm a
sua identidade no conhecida. O vrus penetra,
provavelmente, por meio de endocitose e trans-
portado pelo citoesqueleto em direo ao ncleo.
Durante essa etapa, ocorre a desestruturao e a
perda do capsdeo viral, processo ainda pouco
compreendido. Utilizando os poros nucleares, o
DNA viral penetra no ncleo da clula hospedei-
ra.
5.2 Transcrio e expresso
das protenas virais
A expresso das protenas codicadas pelos
papilomavrus complexa devido presena de
5.4 Montagem do capsdeo e egresso
A montagem, maturao e a subseqente
produo de vrions ocorrem no ncleo celular.
As protenas tardias, L1 e L2, so expressas e a
montagem do capsdeo ocorre mesmo sem a pre-
sena do DNA viral. Essa caracterstica de gran-
de importncia para a produo de VLPs que
apresentam potencial para utilizao em vacinas.
As partculas virais so liberadas por interfern-
cia da protena codicada a partir do gene E4,
que desestabiliza a rede de queratina intracelu-
lar. Os vrions so, ento, agrupados e liberados
das clulas.
6 Patogenia
Cada papilomavrus apresenta especici-
dade por uma nica espcie animal, na qual se
replica de forma produtiva. Alguns tipos virais
podem infectar uma segunda espcie animal.
Nesses casos, produzem uma infeco no-pro-
dutiva, ou seja, sem a produo de vrions infec-
ciosos, como ocorre no sarcide eqino, que um
exemplo de infeco heterloga ocasionada pelos
BPV-1 e BPV-2.
Os papilomavrus so tambm tecido-es-
peccos, com tropismo por clulas do epitlio
escamoso. Os receptores celulares responsveis
por esse tropismo ainda no so conhecidos, no
entanto, alguns tipos de papilomavrus apresen-
tam tropismo pelo epitlio cutneo e outros pelo
epitlio mucoso. Outro aspecto importante que
os papilomavrus necessitam da diferenciao
celular do epitlio. Portanto, o cultivo em clu-
las indiferenciadas no pode ser realizado com
xito, visto que as clulas podem ser infectadas,
mas no ocorre a infeco produtiva. O ciclo de
replicao viral completado nos processos de
diferenciao das clulas epiteliais. Inicialmente,
o vrus infecta os queratincitos basais, provavel-
mente por meio de microleses; expressa parte
dos seus genes nas camadas basal e suprabasal;
replica o genoma viral na regio de diferenciao
das camadas espinhosa e granular; expressa os
genes estruturais e transfere o DNA para as c-
lulas da camada escamosa, onde a prognie viral
nalmente liberada aps a descamao celular
normal do epitlio. Ou seja, as diferentes etapas
da replicao ocorrem sucessivamente de acordo
com o estgio de diferenciao celular (Figura
15.3).
O perodo de incubao das patologias in-
duzidas pelos papilomavrus varia de acordo
com o local da clula infectada. As verrugas nas
mos e ps de seres humanos apresentam longo
perodo de incubao (6 a 18 meses), enquanto as
verrugas genitais tm perodo de incubao de 2
a 6 meses.
Os papilomavrus podem tambm ser encon-
trados em clulas polimorfonucleares do sangue
perifrico, no entanto, no existem evidncias da
sua multiplicao nessas clulas. Essa observao
importante pela implicao que pode ter na pa-
tognese da infeco, pois sugere que a corrente
sangnea pode carrear o vrus para diferentes
tecidos.
7 Patologia
A infeco pelo papilomavrus pode oca-
sionar alteraes na morfologia e funo celular.
Essas alteraes so reexos das mudanas gen-
ticas e siolgicas que se acumulam por longos
perodos de tempo, levando perda progressiva
do controle do ciclo celular, imortalizao celular
e transformao tumoral.
Nas clulas epiteliais transformadas, podem
ser observadas alteraes do tipo hiperplasia e
hipertroa. As clulas germinativas no so per-
missivas replicao viral e, ao se dividirem e se
deslocarem para a superfcie, disseminam o vrus
a todas as clulas irms que, ento, passam por
processos de transformao e de proliferao de
forma displsica, induzidos pelo vrus. A cama-
da celular ca mais espessa, com clulas vacuo-
lizadas, adquirindo a aparncia clssica de papi-
loma. Assim, o aspecto de verruga deve-se
proliferao e no destruio celular. medida
que as clulas infectadas passam pelo processo
de diferenciao e queratinizao, elas se tornam
permissivas replicao viral. Os vrions podem
reinfectar as clulas adjacentes, sendo esta a razo
pela qual os papilomas cutneos so contagiosos
e aparecem agrupados. A infeco de vrias clu-
las basais origina colnias celulares sobrepostas,
com a aparncia de verruga em forma de cou-
ve-or.
406 Captulo 15
8 Papilomavrus e tumores
A progresso neoplsica um processo sem
perspectiva para o vrus, visto que a clula trans-
formada no mais permissiva maturao dos
vrions. O genoma viral incorporado pela clula,
mantido como um elemento extracromossmico,
com replicaes sincronizadas com o ciclo celu-
lar, ou pode at mesmo ser perdido pelas clulas
transformadas.
O papilomavrus est associado com neo-
plasias, incluindo carcinomas urogenitais e cn-
cer do trato respiratrio superior em humanos,
cncer de pele em humanos e coelhos, cncer do
canal alimentar superior e de bexiga em bovinos,
carcinoma oral em ces e, possivelmente, cncer
do trato alimentar e de bexiga em humanos.
Embora a etiologia viral de tumores esteja
bem estabelecida, os mecanismos moleculares
induzidos pelo vrus sobre a clula transforma-
da ainda no so bem compreendidos. O DNA
viral pode no estar presente em muitos tumores
e em clulas transformadas in vitro. Essa caracte-
rstica sugere que o vrus possa ser o responsvel
pelos eventos iniciais da carcinognese, mas no
pela continuidade das transformaes fenotpi-
cas, quando a informao gentica do vrus no
necessria para a manuteno da malignidade.
Tambm no est claro como os fatores carcino-
gnicos e os agentes promotores da carcinog-
Figura 15.3. Ilustraoesquemticadainfecopelopapilomavrus emepitliocutneo.
Estrato crneo
Camadas
granulares
Camadas
espinhosas
superiores
Camadas
espinhosas
inferiores
Clulas amplificadores
em trnsito (mitticas)
Clulas basais
e de reserva
(subsitituem as
ampllficadoras)
Membrana basal
Derme
(tecido conjuntivo,
fibroblastos, endotlio
vascular)
Diferenciao dos
queratincitos
Replicao dos
papilomavrus
Liberao de vrions maduros
Vrions maduros
Morfognese dos vrions
Produo das protenas tardias
Amplificao vegetativa do DNA
Nveis altos de protenas iniciais (E4)
Protenas dependentes
da diferenciao E6 e E7
Protenas iniciais E1, E2, E3 e E4
Possvel stio alternativo
de infeco
Infeco primria
Estabelecimento da replicao
Vrus introduzido
por microleses
Fonte: adaptada de Frazer (2004) e Chow e Braker (1997).
nese esto envolvidos nos diferentes estgios de
desenvolvimento dos papilomas e carcinomas.
Dois estgios da carcinognese a iniciao e a
promoo que apresentam componentes inde-
pendentes j foram descritos.
Como a maior parte dos papilomas no pro-
gride para o cncer e o desenvolvimento maligno
somente ocorre aps longo perodo de latncia, a
infeco viral considerada como condio neces-
sria, mas no suciente, para o desenvolvimen-
to dos diferentes tipos de neoplasias epiteliais
associados com os papilomavrus. O papiloma
um tumor benigno, mas as alteraes displsicas
ocasionadas pelo vrus podem originar a lenta
progresso para uma doena maligna.
9 Diagnstico
A maioria das viroses pode ser diagnostica-
da por tcnicas tradicionais de Virologia, como
os cultivos celulares, a microscopia eletrnica ou
a sorologia. Entretanto, nenhum desses mtodos
rotineiramente utilizado para a deteco do pa-
pilomavrus.
A histologia possibilita a identicao de
neoplasia intra-epitelial, que pode estar associa-
da com vrus de potencial oncognico e que so
de risco para a progresso do cncer. Por meio
da histologia, no possvel identicar o tipo de
papilomavrus associado com o efeito citoptico.
A interpretao histolgica tambm dicultada
quando as alteraes vrus-associadas so mni-
mas, alm de no permitir a identicao de in-
feco latente.
A tcnica de imunoistoqumica um mto-
do com baixa sensibilidade e especicidade e que
exige a presena de grande concentrao de pro-
tenas virais. Apesar de ainda estar sob avaliao,
a sorologia para o diagnstico de rotina do HPV
tem mostrado algumas vantagens. No momento,
a tcnica de VLP-ELISA (ensaio imunoenzim-
tico com partculas semelhantes a vrus) ainda
apresenta baixa especicidade e sensibilidade.
A impossibilidade do cultivo dos papiloma-
vrus em sistemas in vitro de cultivos celulares
tem direcionado o desenvolvimento de tcni-
cas de diagnstico baseadas na identicao do
DNA viral. As principais tcnicas utilizadas para
a deteco do papilomavrus so: a hibridizao
do cido nuclico e a reao em cadeia da poli-
merase (PCR).
Diferentes mtodos de hibridizao foram
desenvolvidos para a deteco do DNA do pa-
pilomavrus em fragmentos de tecidos e em es-
fregaos. O limiar de deteco varivel e, em
sua maioria, esses mtodos apresentam baixa
sensibilidade e especicidade. A tcnica de Sou-
thern blot considerada o padro ouro para
a deteco do genoma do papilomavrus. Esse
mtodo um valioso instrumento de pesquisa,
mas no tem aplicao para a rotina diagnstica.
Algumas variaes de mtodos de hibridizao
j foram utilizadas para a deteco do DNA do
papilomavrus, como o Dot blot, a hibridizao in
situ, a hibridizao in situ com ltro, entre outras.
Porm, todas essas tcnicas somente detectam in-
feces com mais de 10 a 20 cpias do genoma
viral por clula e tambm no so utilizadas na
rotina diagnstica.
A PCR tem sido amplamente utilizada para
o diagnstico e caracterizao molecular dos pa-
pilomavrus com bons nveis de sensibilidade e
especicidade. A PCR possibilita ainda que os
produtos amplicados sejam avaliados por anli-
ses do polimorsmo dos fragmentos de restrio
(RFLP) e, mais comumente, por seqenciamento,
permitindo, assim, a elaborao de anlises lo-
genticas. Segmentos do gene L1 so os mais uti-
lizados para a amplicao tanto com o objetivo
de diagnstico quanto para a caracterizao mo-
lecular de novas espcies e tipos virais.
10 Imunologia
As leses benignas produzidas na infeco
cutnea e mucosa pelo papilomavrus apresentam
tendncia de regresso espontnea. No entanto,
algumas infeces com curso clnico prolongado
e que determinam leses extensas podem, ocasio-
nalmente, progredir para o cncer.
Infeces pelo papilomavrus, ocasionando
leses benignas, podem ser encontradas tanto
em animais imunossuprimidos quanto imuno-
competentes. Casos de papilomatose persistente
geralmente so observados em animais imunos-
suprimidos. Um grande nmero de animais com
408 Captulo 15
papilomatose em um rebanho pode estar relacio-
nado com fatores qumicos ou mecanismos imu-
nomodulados, que podem ativar o vrus laten-
te. A relao entre o nmero de clulas CD4+ e
CD8+ no sangue perifrico de animais infectados
com o papilomavrus signicativamente menor
quando comparada com animais no-infectados,
sugerindo uma depleo linfocitria.
A maior susceptibilidade de animais jovens
infeco pelo papilomavrus deve-se falta de
reconhecimento do patgeno pelo sistema imu-
ne. Aps a infeco primria, os animais tornam-
se menos susceptveis ou mesmo resistentes a
novas infeces.
A regresso e o desaparecimento de leses
benignas apresentam evidncias do desenvol-
vimento de imunidade sistmica, uma vez que
todas ou a maioria das leses regridem simulta-
neamente. Aps o desaparecimento das leses,
ocorre um perodo de resistncia reinfeco
pelo mesmo tipo viral que ocasionou as leses.
Entretanto, outro tipo viral pode produzir nova
infeco com a produo de leses. A imunidade
reinfeco mediada por anticorpos neutrali-
zantes produzidos contra as protenas do caps-
deo viral, principalmente contra a protena L1. A
imunidade humoral tem importncia na preven-
o de infeco, mas no efetiva para a regres-
so das leses.
Anticorpos contra as protenas iniciais E1 e
E2 (encontradas no incio da infeco e respons-
veis pelos eventos primrios da replicao viral)
e contra E6 e E7 (que so protenas envolvidas na
transformao celular), so detectados em dife-
rentes estgios da infeco. Os anticorpos contra
E1 e E2 permanecem constantes e os anticorpos
contra E6 e E7 declinam mais tardiamente.
A regresso dos papilomas se deve a even-
tos celulares da imunidade, onde so encontrados
inltrados de linfcitos T nas leses em processo
de regresso. Os tipos celulares (CD8+/CD4+),
predominantes nas diferentes camadas celulares
do epitlio, podem variar de acordo com o tipo
de papilomavrus envolvido na infeco.
Por m, deve-se, ainda, considerar que as-
pectos genticos, nutricionais e imunolgicos
relacionados ao hospedeiro e caractersticas pr-
prias de cada tipo viral podem inuenciar na
forma de manifestao clnica e na evoluo da
infeco pelo papilomavrus, bem como no pro-
cesso de recuperao do animal infectado.
11 Imunoprolaxia
As pesquisas de vacinas contra o papilo-
mavrus so prejudicadas pela incapacidade do
vrus de replicar em cultivos celulares e tam-
bm pela diculdade de adaptao em cultivos
de tecidos. Os primeiros estudos realizados com
vacinas contra os diferentes tipos de papilomav-
rus bovino foram realizados na dcada de 1990,
quando se sugeriu a existncia de imunidade
tipo-especca para esse vrus.
Sucessos na prolaxia e na regresso de
tumores epidermais e do trato digestrio foram
obtidos em bovinos, tanto utilizando vacinas
convencionais quanto vacinas produzidas por
engenharia gentica. Inicialmente, dois tipos de
vacinas foram considerados: vacinas prolticas,
que induziriam anticorpos vrus-neutralizantes
prevenindo a infeco, e vacinas teraputicas,
que promoveriam a regresso das leses j esta-
belecidas, antes que a progresso maligna tivesse
incio.
Diferentes estratgias para a elaborao de
vacinas tm sido utilizadas para o controle da in-
feco pelo papilomavrus, destacando-se entre
elas: a) vacina autgena, preparada a partir de
macerado de papilomas cutneos do animal de
origem. Esse tipo de vacina tem sido utilizado em
bovinos, caninos e coelhos, e experimentos con-
trolados indicam um efeito positivo na regresso
das leses; b) extratos heterlogos de papilomas
cutneos, semelhantes a vacinas autgenas, pre-
parados a partir de leses obtidas de diversos
animais; c) vacina de vrus puricado. Este foi o
primeiro tipo de vacina testada em bovinos e pro-
tege contra subseqentes desaos com vrus ho-
mlogos; d) protenas recombinantes expressas
em bactrias induzem a formao de anticorpos
neutralizantes produzidos contra epitopos con-
formacionais. Como vacina proltica, utiliza-se
a protena L1 do capsdeo viral; e, para a regresso
tumoral, so utilizadas as protenas iniciais E1,
E2, E6 e E7. Para o BPV-4, a vacina com a protena
L2 promove a regresso tumoral, provavelmente
por estimular a resposta imune do hospedeiro a
outras protenas virais; e) protenas recombinan-
tes produzidas em sistema baculovrus tambm
podem ser utilizadas como vacinas induzindo
resposta imune celular; f) VLPs, produzidas a
partir da expresso dos genes L1 ou L1 e L2 em
bactrias. A protena L1 de forma isolada ou a as-
sociao das protenas L1 e L2, expressas a partir
de clulas bacterianas recombinantes, produzem,
por anidade qumica, o capsdeo viral e indu-
zem a formao de anticorpos neutralizantes; g)
vacina de DNA. Fragmentos de DNA plasmidial,
codicando antgenos virais, so bombardeados
juntamente com partculas de ouro diretamente
no ncleo celular. Podem ser utilizados somente
os genes L1 e E6 ou a sua associao com os ge-
nes iniciais E1, E2, E6 e E7, que apresenta maior
ecincia. A imunidade induzida por essa vacina
pode ser longa.
12 Doenas de importncia em
medicina veterinria causadas por
papilomavrus
12.1 Papilomatose
A papilomatose cutnea caracterizada pela
formao de tumores benignos no epitlio cut-
neo e mucoso de vrias espcies animais, des-
tacando-se as domsticas (bovinos, ovinos, su-
nos, eqinos e caninos), de laboratrio (coelhos
e hamsters), selvagens (ursos, alces), mamferos
aquticos (golnhos, peixes-boi), outros animais
aquticos (tartarugas marinhas), aves (papagaios)
e tambm os seres humanos.
A papilomatose cutnea geralmente acome-
te indivduos jovens e/ou imunocomprometidos.
Os papilomas cutneos podem ser encontrados
em diversas localizaes anatmicas e com os
mais variados tamanhos e morfologias, incluindo
desde papilomas planos at em forma de gro
de arroz e couve-or.
A papilomatose bovina uma enfermidade
infecto-contagiosa de grande importncia na pe-
curia mundial, tanto para as exploraes leitei-
ras quanto de corte. A enfermidade pode causar
prejuzos econmicos considerveis, destacando-
se a reduo no consumo de alimentos e conse-
qente perda de peso e/ou queda na produo
de leite, predisposio a mastites e a outras infec-
es secundrias e reduo na qualidade do cou-
ro. Os prejuzos esto intimamente relacionados
com a localizao anatmica e extenso das leses
encontradas. Surtos de papilomatose cutnea bo-
vina com prevalncias variadas so relatados em
diversos estados brasileiros.
O BPV-1 causa bropapilomas em tetos, p-
nis e em outras localizaes anatmicas; o BPV-2
tambm causa bropapilomas em diversas locali-
zaes anatmicas, inclusive no esfago e rmen.
Alm disso, responsvel pelo desenvolvimento
de papilomas cutneos comuns. Em associao
com a ingesto crnica de samambaia (Pteridium
aquilinum), o BPV-2 tambm implicado na etio-
logia da hematria enzotica bovina; o BPV-3
tem sido isolado de papilomas cutneos comuns;
o BPV-4 tambm isolado de leses cutneas e,
quando em associao ao consumo crnico de
samambaia, pode causar tumores no trato diges-
trio superior, popularmente conhecidos como
caraguat; o BPV-5 causa bropapilomas em
forma de gro de arroz no bere e tetos; e o BPV-
6 tambm o agente etiolgico de papilomas
localizados na glndula mamria. Em 2007, no
Japo, foram descritos dois novos tipos de BPV
(BPV-7 e BPV-8) em leses cutneas, ainda no
classicados em nvel de espcie.
A papilomatose eqina um distrbio der-
matolgico no muito comum, causada pelo pa-
pilomavrus eqino tipo 1 (EqPV-1). A infeco
geralmente autolimitante e caracterizada por
pequenas leses localizadas na regio da cabea
e pescoo. Mais comum que a papilomatose cut-
nea em eqinos a infeco heterloga de eqi-
nos com o BPV-1 ou BPV-2, resultando na pro-
duo do sarcide eqino. Essa infeco, mesmo
no sendo produtiva, promove o aparecimento
de grandes massas tumorais. O tratamento pode
ser realizado por extirpao cirrgica ou com
produtos imunoestimulantes, tais como a aplica-
o intralesional de BCG. A papilomatose ovina,
causada pelo OvPV-1 e OvPV-2, no uma doen-
a de importncia econmica, ocorre em uma pe-
quena parcela da populao ovina e no provoca
leses extensas.
410 Captulo 15
A papilomatose suna ocorre com maior fre-
qncia na bolsa escrotal e interfere com a libido,
tanto pela dor localizada quanto pela presena de
aderncias. O agente etiolgico da papilomatose
suna ainda no foi caracterizado.
A papilomatose canina pode ser encontrada
sob duas formas. A primeira e mais importante
a forma oral, conhecida como papilomatose oral
canina. Essa forma ocasionada pela infeco
com o COPV, e caracteriza-se pelo aparecimento
de pequenos papilomas pedunculados (1-2 cm de
comprimento) na cavidade oral, podendo esten-
der-se desde a gengiva at o palato. Os animais
podem apresentar tambm leses ao redor da
boca e olhos. As implicaes dessa forma de pa-
pilomatose so: a diculdade de alimentao e o
mal-estar. A segunda forma, menos comum, a
papilomatose cutnea propriamente dita, causa-
da pelo CPV-1. Essa infeco pode causar leses,
geralmente em pequeno nmero, distribudas em
vrias regies do corpo do animal.
12.2 Hematria enzotica e tumores
no trato digestrio superior de bovi-
nos
Historicamente, a etiologia da hematria
enzotica bovina foi relacionada a diversos fato-
res, incluindo decincias nutricionais, ingesto
de plantas txicas, falta ou excesso de molibd-
nio no solo e agentes infecciosos, como bactrias
(Corynebacterium renale), fungos (Fusarium spp),
protozorios e at endoparasitos. Atualmente, a
interao do papilomavrus bovino tipo 2 com
carcingenos presentes na planta samambaia
(Pteridium aquilinum) reconhecida mundial-
mente como a mais provvel causa da hematria
enzotica bovina.
A hematria enzotica bovina apresenta
carter enzotico em determinadas regies ge-
ogrcas que renem condies ideais para o
crescimento da samambaia. Essa planta invaso-
ra se desenvolve em solos pobres, cidos, com
baixos teores de clcio e de fsforo e em regies
com umidade relativa do ar elevada. A samam-
baia uma pteridta do gnero Pteridium, esp-
cie aquilinum, e, no Brasil, encontrada apenas
a subespcie caudatum, variedade arachnoideum.
A samambaia cosmopolita em todas as regies
tropicais e, no Brasil, sua presena registrada
em praticamente todos os estados.
A samambaia apresenta em sua composio
diversas substncias mutagnicas, carcinogni-
cas e imunossupressivas. A toxicidade da planta
comprovada experimentalmente, no entanto, a
sua associao com a patogenia dos tumores vesi-
cais e do trato digestrio ainda no est totalmen-
te esclarecida. Substncias potencialmente muta-
gnicas e/ou carcinognicas foram isoladas da
samambaia, incluindo a quercetina, ptaquilosde-
os, -ecdysone, cido shikmico, aquildeo A, ta-
nino, prunasina e camferol. A carcinogenicidade
da planta tem sido atribuda quercetina, cido
shikmico e ao ptaquilosdeo. Porm, a baixa fre-
qncia de atividade citotxica desses compostos
sugere que no sejam os provveis agentes etio-
lgicos diretos na intoxicao pela samambaia
em bovinos. A natureza dos carcingenos no foi
completamente elucidada e nenhum dos cons-
tituintes txicos isolados foi capaz de reprodu-
zir, individualmente, todas as sndromes tpicas
dessa intoxicao. Apesar da baixa palatabilida-
de, so vrias as condies em que a intoxicao
natural pela samambaia pode ocorrer, como pela
ingesto de fenos contaminados, superpastoreio,
secas, geadas ou queimadas e a necessidade da
ingesto de bras. A intoxicao pela samambaia
em bovinos pode apresentar trs formas clnicas:
intoxicao aguda, hematria enzotica crnica e
tumores no trato digestrio superior.
A hematria enzotica caracterizada pela
presena de sangue na urina. As primeiras mani-
festaes ocorrem em animais adultos, com idade
superior a trs ou quatro anos, sem preferncia
de raa ou de sexo. A doena evolui devido s cri-
ses de hematria, associadas poliria e disria,
intercaladas por perodos de remisso, que po-
dem perdurar semanas, meses ou mesmo anos.
A fase da hematria varivel, o volume de san-
gue perdido inconstante, e os animais tambm
podem apresentar acentuada proteinria. Em
algumas situaes, a hematria enzotica bovina
pode ocorrer em associao com neoplasias do
trato alimentar.
Os tumores do trato digestrio superior
obstruem a passagem de alimentos e, no exame
clnico, so observados sinais de disfagia, regur-
gitao, dilatao do esfago proximal massa
tumoral, perda de peso e timpanismo crnico re-
cidivante. A ocorrncia desses tumores, embora
de etiologia no conrmada experimentalmente,
tem sido atribuda ingesto da samambaia, com
uma possvel associao etiolgica com o BPV-4.
Uma porcentagem signicativa dos animais com
leses do trato digestrio superior tambm apre-
senta leses neoplsicas na bexiga urinria.
Vrias observaes sobre a ocorrncia do pa-
pilomavrus bovino e carcinomas no trato diges-
trio superior de bovinos, associados com sinais
de hematria enzotica e com ingesto da sa-
mambaia, j foram relatadas no Brasil e em outros
pases. As toxinas da samambaia foram capazes
de produzir tumores em animais de laboratrio
livres da infeco pelo vrus, e este, isoladamen-
te, foi capaz de produzir neoplasias na bexiga de
bezerros que no tinham acesso samambaia.
Resultados de vrios experimentos conrmaram
que tanto o vrus quanto a samambaia esto en-
volvidos na carcinognese da bexiga.
O efeito clastrognico dos componentes da
samambaia tem sido avaliado in vitro e in vivo.
No entanto, a contribuio potencial da clastro-
genicidade do papilomavrus ainda no foi escla-
recida. A anlise citogentica de clulas do san-
gue perifrico de animais alimentados em pastos
infestados com samambaia demonstra um au-
mento signicativo na freqncia de aberraes
na estrutura dos cromossomos, quando compa-
rados com animais em pastos no infestados.
Como os linfcitos so clulas-alvo da infeco
latente do papilomavrus, sugere-se que o vrus
possa contribuir para a produo de anormalida-
des cromossmicas nessas clulas.
No se conhece um tratamento efetivo para
esses distrbios, porm a retirada dos animais
dos pastos infestados com a planta pode propi-
ciar uma lenta recuperao, desde que no exis-
tam leses neoplsicas em estgios avanados de
evoluo.
Possibilidades de imunoprolaxia contra o
BPV-2 e o BPV-4 para o controle e preveno da
hematria enzotica bovina e de tumores no tra-
to digestrio superior esto sendo desenvolvidas
e avaliadas. Porm, resultados conclusivos ainda
no foram produzidos.
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ADENOVIRIDAE
Mauro Pires Moraes & Paulo Renato dos Santos Costa
16
1 Introduo
2 Classicao
4 Replicao
6 Adenovrus de interesse veterinrio

6.1 Adenovrus canino
6.1.1 Adenovrus canino tipo 1
6.2 Adenovrus bovino
6.3 Adenovrus eqino
6.4 Adenovrus de ruminantes silvestres
6.5 Adenovrus avirios
6.5.1 Aviadenovirus
6.5.2 Siadenovirus
6.5.3 Atadenovirus
415
415
417
419
419
421
421
422
426
427
427
428
428
428
428
429
430
1 Introduo
A famlia Adenoviridae abriga um grupo de
vrus icosadricos grandes, sem envelope, com
genoma DNA de ta dupla linear. A denomina-
o dessa famlia originou-se do primeiro vrus
do grupo, que foi isolado a partir de explantes
de glndulas adenides humanas em 1953. No
ano seguinte, o primeiro adenovrus de interesse
veterinrio foi isolado de casos de hepatite cani-
na. Desde 2002, o International Committee on Taxo-
nomy of Viruses (ICTV) classica os membros da
famlia em quatro gneros: Mastadenovirus, Avia-
denovirus, Atadenovirus e Siadenovirus.
A partir do primeiro isolado, o vrus serviu
de modelo para estudos de composio e orga-
nizao estrutural dos capsdeos com simetria
icosadrica. Alm disso, os adenovrus tambm
foram os primeiros modelos para a descrio das
interaes entre vrus e receptores celulares, em
estudos de cristalograa.
O conhecimento acerca da estrutura e orga-
nizao dos vrions e do genoma favoreceu a uti-
lizao desses vrus como vetores de expresso
e viabilizou a produo de vrus quimricos, em
esforos para o desenvolvimento de vacinas no-
convencionais, assim como para a terapia gen-
tica. Alm disso, esses conhecimentos impulsio-
naram o desenvolvimento de mtodos baseados
em DNA desnudo, pois foi demonstrado que o
sucesso desta abordagem estava associado com a
ecincia da introduo articial do genoma nas
clulas hospedeiras. A exemplo do primeiro iso-
lado, a maioria dos adenovrus est envolvida em
infeces respiratrias, mas esses vrus podem
tambm estar associados com infeces do trato
digestivo, de clulas parenquimatosas do fgado
e de clulas endoteliais, com diferentes nveis de
patogenicidade em vrias espcies.
Alguns membros da famlia possuem im-
pacto na medicina veterinria. Como exemplo,
pode-se citar o adenovrus canino (CAdV), que
apresenta dois representantes: o CAdV-1 e o
CAdV-2. O primeiro o agente causal da hepatite
infecciosa canina, e o segundo est envolvido na
etiologia de uma doena respiratria multicau-
sal, conhecida como tosse dos canis. Alm destes,
os adenovrus produzem perdas importantes na
avicultura. A sndrome da queda de postura, a
enterite hemorrgica dos perus, a bronquite das
codornas, entre outras, so exemplos de efermi-
dades provocadas por adenovrus nas aves.
2 Classicao
Seguindo os critrios de classicao preco-
nizados pelo ICTV, os adenovrus so agrupados
de acordo com vrias caractersticas, que incluem
a morfologia do vrion, estrutura e organizao
do genoma, replicao, reatividade antignica e
propriedades biolgicas. So reconhecidos qua-
tro gneros na famlia Adenoviridae: Mastadeno-
virus (com 25 espcies, das quais 20 ocialmente
aceitas e cinco em estudo), Avianadenovirus (nove
espcies, seis aceitas), Atadenovirus (sete espcies,
uma aceita) e Siadenovirus (duas espcies). Vrias
dessas espcies apresentam isolados que podem
ser diferenciados entre si em sorotipos, de acordo
com a reatividade sorolgica.
Uma lista das espcies j descritas em ani-
mais est apresentada na Tabela 16.1. Existe um
consenso, no entanto, que essa lista provavel-
mente subestimada, com base no nmero de iso-
lados j identicados em humanos. Seis espcies
de adenovrus j foram descritos em humanos
(adenovrus humano tipo A at F), abrangendo
mais de 50 sorotipos.
As caractersticas genmicas e antignicas
podem ser complementares e, algumas vezes,
resultam em novas classicaes e agrupamen-
tos de vrus, inclusive em novos gneros, como o
Atadenovirus e Siadenovirus. O gnero Atadenovi-
rus, que possui como prottipo o adenovrus ovi-
no 287 (adenovrus ovino tipo D) foi criado, agru-
pando tambm vrus de bovinos anteriormente
classicados como Mastadenovirus e com vrus
de origem aviria, como o vrus da sndrome da
queda de postura (adenovrus de patos tipo A),
classicado anteriormente como Aviadenovirus.
Essa nova classicao baseada principalmente
em diferenas na organizao genmica e na si-
milaridade do gene que codica a protena hexon
desses vrus.
416 Captulo 16
Adenovrus bovino
(3 espcies)
BAdV-A, BAdV-B, BAdV-C
Infeco subclnica ou doena
respiratria leve em bovinos
Vrus Abreviatura Enfermidade/hospedeiro
G
n
e
r
o
M
a
s
t
a
d
e
n
o
v
i
r
u
s
P
r
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i
p
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A
d
e
n
o
v
r
u
s
h
u
m
a
n
o
C
(
H
A
d
V
-
C
)
Adenovrus canino
CAdV-1 Hepatite infecciosa canina
CAdV-2
Traqueobronquite infecciosa (tosse dos
canis) em ces
Adenovrus eqino
(2 espcies)
EAdV-A, EAdV-B
respiratria leve. Broncopneumonia e
doena generalizada com
imunodeficincia em eqinos
Adenovrus ovino
(3 espcies)
OAdV-A, OAdV-B, OAdV-C
respiratria leve em ovinos
Adenovrus suno
(3 espcies)
PAdV-A, PAdV-B, PAdV-C
respiratria leve em sunos
Adenovrus caprino
(Proposto)
GAdV-A
respiratria leve em caprinos
G
n
e
r
o
A
v
i
a
d
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n
o
v
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r
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s
P
r
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A
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n
o
v
r
u
s
a
v
i
r
i
o
A
(
F
A
d
V
-
A
)
Adenovrus avirio
(5 espcies)
Hepatite, doena respiratria
em galinhas
FAdV-A, FAdV-B, FAdV-C,
FAdV-D, FAdV-E
Adenovrus de
gansos
Isolado de fgado e intestino
de gansos
GoAdV
Adenovrus bovino
(2 espcies)
Infeco assintomtica ou doena
respiratria em bovinos
BAdV-D, BAdV-E
G
n
e
r
o
A
t
a
d
e
n
o
v
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P
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t
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A
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n
o
v
r
u
s
o
v
i
n
o
D
(
O
A
V
-
2
8
7
)
Adenovrus cervdeo
Edema pulmonar, hemorragia e
vasculite em veados
DeAdV
Adenovrus de patos A
Hepatite em patos e sndrome da queda
de postura em galinhas
DAdV-A
Adenovrus ovino D
Infeco assintomtica ou doena
respiratria leve em ovinos
OAV-D
G
n
e
r
o
S
i
a
d
e
n
o
v
i
r
u
s
P
r
o
t
t
i
p
o
A
d
e
n
o
v
r
u
s
d
e
p
e
r
u
s
A
(
T
A
d
V
-
A
)
Adenovrus de perus A
Enterite hemorrgica em perus e
pacreatite em faises
TAdV-A
Tabela16.1. Adenovrus associados comenfermidades emanimais
Adenoviridae 417
As propriedades sorolgicas foram as pri-
meiras utilizadas para a classicao dos adeno-
vrus que apresentam caractersticas peculiares.
Por exemplo, alguns determinantes antignicos
presentes na regio interna dos hexons determi-
naram a classicao em gneros. H epitopos
presentes nos pentons, localizados nos vrtices
do capsdeo icosadrico, que tambm denem
a especicidade de gneros. A classicao em
sorotipos determinada pela reatividade com
anticorpos neutralizantes e tambm com anticor-
pos inibidores da hemaglutinao. Os epitopos
envolvidos com essas propriedades esto locali-
zados na superfcie dos hexons e bras. Uma ca-
racterstica interessante que anticorpos contra
os epitopos localizados na bra e no seu boto
terminal possuem fraca atividade neutralizan-
te. Assim, a determinao estrutural sorolgica
da famlia baseada na dominncia relativa de
alguns determinantes, dependendo dos testes
utilizados, mais do que na sua localizao nos
vrions.
Os adenovrus possuem vrions hexagonais,
icosadricos, sem envelope, com dimetro apro-
ximado de 80 nm, sem considerar as bras dos
pentons. Na Figura 16.1, est apresentada uma
representao esquemtica dos vrions da fam-
lia Adenoviridae. A composio dos vrions de
aproximadamente 13% de DNA e 87% de pro-
tenas. Os vrions no apresentam membranas
lipdicas e, por isso, so resistentes a condies
ambientais e a solventes orgnicos. No entanto, a
infectividade dos adenovrus pode ser inativada
por desinfetantes comuns. Os vrions apresentam
densidade de 1,34 g.cm
-3
em cloreto de csio; so
resistentes a vrios desinfetantes e podem so-
breviver temperatura ambiente por vrios dias
em fmites. A infectividade inativada por gua
quente (50 a 60C por mais de cinco minutos) e
por desinfetantes base de iodo, fenol ou hidr-
xido de sdio.
O capsdeo constitudo por 252 capsme-
ros, sendo 240 hexons e 12 pentons. Os hexons
(trmeros do gene II, 120 kDa) formam as superf-
cies dos 20 tringulos eqilteros e so associados
s protenas IIIa, IX, VI e VIII. Os vrtices desses
tringulos so compostos pelos pentons (prote-
na III, 85 kDa). Em cada vrtice, h um prolon-
gamento protico conhecido como bra (protena
IV, 62 kDa). Essas projees apresentam exten-
so varivel entre as espcies de vrus e podem
A
III
II
IV
IIIa
VIII
VI
IX
PT
V
VII
X
DNA
Capsdeo
Ncleo
B
Figura 16.1. Estrutura dos vrions da famlia A) Microscopia eletrnica de um adenovrus.
Representaoesquemticadeuma partculavricacomos seus constituintes.
Adenoviridae.
Fonte: A) Dra Linda Stannard;www.uct.ac.za
418 Captulo 16
possuir entre 20 e 50 nm. Na poro terminal de
cada bra, h uma pequena estrutura globular
formando um boto terminal. Essa extremidade
da bra responsvel pela ligao do vrion aos
receptores celulares.
Na regio interna do vrion, localiza-se o
genoma associado com quatro protenas (V, VII,
X e protena terminal). As mltiplas cpias das
protenas V (48,5 kDa, 180 cpias) e VII (18,5 kDa,
1070 cpias) apresentam-se conjugadas com o
DNA viral e esto envolvidas no empacotamen-
to e compactao do genoma. Em complexos de
seis cpias, as protenas VII so muito similares
estruturalmente e funcionalmente aos complexos
de histonas da cromatina de eucariotas. A pro-
tena V medeia as interaes entre o ncleo e o
capsdeo e tambm se associa aos pentons, estan-
do provavelmente envolvida na localizao do
genoma durante a morfognese das partculas
vricas. A protena terminal (55 kDa) apresenta
ligao covalente em cada uma das extremidades
5 do DNA genmico e possui funo de primer
durante a replicao do genoma.
O genoma viral uma molcula nica de
DNA de ta dupla linear, com 36 a 44 kbp (1 kpb
= 1.000 pares de bases), possuindo entre 48 e 61%
de G + C. A transfeco do genoma desprovido
de protenas em clulas permissivas resulta no
ciclo replicativo completo, com formao e libe-
rao de prognie viral infecciosa. Por isso dito
que o genoma dos adenovrus infeccioso.
O genoma codica aproximadamente 40
protenas, com genes presentes nas duas cadeias
de DNA, transcritos em direes opostas (Figura
16.2). Vrios desses genes originam transcritos
que so processados pelo mecanismo de splicing
Figura 16.2. Representao grfica da organizao genmica e dos transcritos dos adenovrus. Os transcritos iniciais
so designados E(early), e os transcritos tardios so denominados L(late). Cada seta representa ummRNAs diferente
produzidoa partir datranscrioe processamentodos transcritos primrios.
1 2 i 3 Leader:
ML
IX
E1B
L1
L2
L3
L4
L5
x y z
E1A
L1 (iniciais)
VA
E3 (tardio)
E3
10 100 20 30 40 50 60 70 80 90
IV a2
E2A
E2B
E4
Fonte: adaptada de Shenk (2001).
Adenoviridae 419
antes de serem exportados para o citoplasma,
onde sero traduzidos. Uma mesma regio trans-
crita pode originar diferentes RNAs mensageiros
(mRNAs), que so produzidos por clivagem e re-
moo de seqncias internas (introns). A organi-
zao genmica e os transcritos primrios produ-
zidos pela transcrio dos genes dos adenovrus
esto representados na Figura 16.2. O genoma
dividido em 11 regies de transcrio, baseadas
na regulao temporal da expresso, sendo cinco
delas iniciais (E1A, E1B, E2, E3 e E4), duas inter-
medirias (IX e IVa2) e uma tardia (que origina
cinco mRNAs L1 a L5). Destas regies, os genes
iniciais codicam protenas no-estruturais, e as
tardias codicam protenas estruturais.
4 Replicao
Os adenovrus possuem representantes em
vrias espcies de hospedeiros. A replicao do
genoma desses vrus ocorre no ncleo das clulas
hospedeiras e resulta na produo de corpscu-
los de incluso basoflicos. Em geral, a replica-
o in vivo associada aos sistemas respiratrio
ou gastrintestinal, mas outros tecidos e clulas
tambm podem ser envolvidos. A replicao dos
adenovrus pode interferir ou modular a respos-
ta imunolgica do hospedeiro, podendo resultar
em infeces persistentes e oportunistas.
Vrios adenovrus so capazes de produzir
tumores quando inoculados experimentalmente
em hamsters recm-nascidos, porm ainda no fo-
ram descritos como agentes de tumores em seus
hospedeiros naturais. Os adenovrus geralmente
replicam em altos ttulos em clulas primrias e
linhagens celulares, independentemente da fase
do ciclo celular. A replicao acompanhada por
alteraes na siologia celular e produo de efei-
to citoptico (ecp), culminando com a lise celular,
que necessria para a liberao dos vrions.
As linhagens celulares utilizadas para am-
plicao dos adenovrus in vitro geralmente so
espcie-especcas. O CAdV replica em clulas
da linhagem MDCK (Madin Darby canine kidney);
enquanto o adenovrus eqino amplicado em
clulas primrias de rim, pulmo e ovrio de
eqinos. O vrus da sndrome de queda de pos-
tura de galinhas (adenovrus de patos tipo A) re-
plica em clulas de embrio de pato, hospedeiro
natural do vrus. Os vrus isolados de perus e fai-
ses podem ser cultivados em clulas de linha-
gem de pncreas ou em clulas linfoblastides de
perus (MDCT-RP19).
A interao inicial dos vrions com a superf-
cie das clulas-alvo ocorre pela ligao das extre-
midades globulares das bras dos pentons com
os receptores celulares, que so molculas de
integrinas especcas. Essas integrinas so deno-
minadas receptores de adenovrus e vrus Coxsa-
ckie (CAR) e so os receptores para os adenovrus
humanos mais estudados. Existem aproximada-
mente 10
5
molculas de receptores na superfcie
de cada clula. A ligao inicial aos receptores
seguida por uma segunda interao, entre a base
da protena penton e um co-receptor presente na
membrana plasmtica, pertencente famlia das
integrinas. Uma delas seria a vitronectina.
A internalizao do complexo vrion/recep-
tor ocorre por endocitose dependente de clatrina.
As vesculas endocticas so transportadas em
direo ao ncleo. Durante o trnsito, ocorre a re-
duo gradativa do pH no interior das vesculas.
A reduo no pH promove alteraes na estrutu-
ra da partcula viral, a desintegrao do capsdeo
e a liberao do genoma associado com protenas.
H evidncias de que o transporte para o ncleo
da clula mediado pelos hexons, que se associa-
riam aos microtbulos celulares. A desintegrao
completa das partculas ocorre nas proximidades
dos poros nucleares, atravs dos quais o genoma,
ainda associado com algumas protenas, trans-
locado para o interior do ncleo. Entre a ligao
dos vrions aos receptores at a penetrao do ge-
noma no ncleo podem transcorrer aproximada-
mente duas horas.
A transcrio dos genes virais realizada
pela RNA polimerase II e fatores celulares, que
reconhecem mltiplos promotores dos genes
iniciais e intermedirios, alm de um promotor
que controla a expresso dos genes tardios. Esses
genes esto distribudos nas duas tas do DNA
genmico do vrus (Ver Figura 16.2).
420 Captulo 16
Os produtos dos genes de expresso ime-
diata (E1A) esto envolvidos no controle do ciclo
celular, pela expresso de fatores de transcrio
e de replicao do DNA viral, promovendo um
ambiente favorvel para a replicao do vrus.
Nesta regio genmica, encontram-se os genes
que modulam a resposta imune inata do hospe-
deiro e o ciclo celular, interferindo na atividade
de interleucinas, como o fator de necrose tumoral
(TNF), na produo de molculas do complexo
de histocompatibilidade maior tipo 1 (MHC-I)
ou, ainda, no mecanismo de induo da apopto-
se. As interaes dos adenovrus com as clulas
hospedeiras, especialmente na regulao do ciclo
celular e no antagonismo da resposta imunolgi-
ca, foram tratadas com maior profundidade no
captulo referente replicao dos vrus DNA
(Captulo 6).
Na regio E2, esto presentes os genes cujos
produtos esto envolvidos na replicao do DNA
viral, como as protenas de ligao s tas sim-
ples de DNA, que esto associadas aos comple-
xos de replicao; e tambm a DNA polimerase
viral. A protena precursora da protena terminal
(pTP), que se encontra ligada covalentemente s
extremidades do genoma viral, tambm perten-
ce a este grupo de genes. Acredita-se, ainda, que
a pTP tambm esteja associada ao processo de
morfognese dos vrions.
A regio E3 do genoma dos adenovrus pos-
sui genes que codicam fatores de virulncia.
Um dos principais produtos um polipeptdeo
de 19 kDa que se liga cadeia pesada do com-
plexo maior de histocompatibilidade I (MHC-I),
provocando a sua reteno em compartimentos
intracelulares e reduzindo a sua expresso na su-
perfcie celular. Como conseqncia, ocorre uma
reduo na capacidade dos linfcitos T citotxicos
reconhecerem e destrurem clulas infectadas pe-
los adenovrus. Outro produto dessa regio (14,5
kDa) inibe a cascata de eventos ativados pelo fa-
tor de necrose tumoral (TNF), que promove a lise
de clulas infectadas. Finalmente, os produtos da
regio E4 esto envolvidos na regulao da repli-
cao viral e do ciclo celular.
Aps a expresso dos genes iniciais, a pr-
xima fase do ciclo replicativo a replicao do
genoma. Esse processo ocorre com o acmulo da
pTP que se liga s extremidades 5 das cadeias
de DNA e serve como iniciador da replicao a
partir das regies terminais. Essa protena possui
um resduo oxidrila (OH) que serve de substrato
para a DNA polimerase viral iniciar a polimeriza-
o da cadeia de deoxiribonucleotdeos (dNTPs),
formando a nova cadeia de DNA. A replicao
das cadeias inicia nas extremidades e ocorre de
forma contnua, ao contrrio da replicao semi-
descontnua do DNA celular, e ocorre em duas
etapas. Na primeira etapa, apenas uma das ca-
deias replicada, originando uma molcula de
ta dupla. A cadeia restante circulariza, pelo pa-
reamento das regies repetidas localizadas pr-
ximo s extremidades, formando uma estrutura
semelhante a um cabo de frigideira (panhandle).
A DNA polimerase reconhece a extremidade 5
e inicia a sntese da cadeia complementar. Um
esquema mostrando as etapas da replicao do
genoma dos adenovrus est apresentado na Fi-
gura 16.3.
Aps a replicao do DNA viral e produo
dos transcritos dos genes iniciais e intermedi-
rios, a expresso gnica muda para a produo
dos transcritos tardios. O controle dessa mudan-
a complexo, e parece ser dependente do ac-
mulo de fatores de transcrio, produtos dos ge-
nes da regio E1A e pela utilizao preferencial
da ta que codica os genes tardios. O nico pro-
motor dos transcritos tardios muito eciente e,
por essa caracterstica, utilizado em vetores de
expresso. Ocorre um grande acmulo de prote-
nas estruturais e, nesta fase, aproximadamente
20 horas aps o incio do ciclo viral, ocorre a ini-
bio da sntese de protenas celulares. Os trans-
critos tardios so exportados para o citoplasma e,
aps a traduo nos ribossomos, as protenas so
transportadas at o ncleo, onde participam da
montagem dos vrions.
Acredita-se que o genoma associado com
protenas ingresse j em capsdeos pr-forma-
dos. Conseqentemente, possvel ocorrer a for-
mao de partculas incompletas, sem a presen-
a do genoma. O acmulo de protenas virais e
a condensao da cromatina celular formam os
corpsculos de incluso intranucleares que so
observados nas clulas infectadas.
Adenoviridae 421
Primeira
etapa
Segunda
etapa
Circulariza
Lineariza
Tp
Tp
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
-OH
-OH
OH
OH
.pTp
+
.pTp
Figura 16.3. Ilustrao esquemtica da replicao do genoma dos adenovrus. Na primeira etapa, apenas uma das
cadeias replicada, de maneira contnua, a partir de uma das extremidades. Acadeia no-replicada circulariza para a
formao de uma nova origemde replicao. Areplicao desta cadeia inicia na extremidade e prossegue ao longo da
cadeia, que, em seguida, assume a topologia linear. Ao final das duas etapas, as duas cadeias de DNA esto
replicadas.
Os vrions recm-formados se acumulam no
ncleo celular e a sua liberao depende da morte
e lise celular. A morte celular ocorre pela falncia
de mltiplas funes, principalmente pela inter-
ferncia do vrus com a expresso de protenas
celulares, que ocorre na fase nal do ciclo repli-
cativo. O nmero de vrions infecciosos produzi-
dos por clula infectada varia para os diferentes
adenovrus. Estima-se que sejam produzidas en-
tre 10 e 2.300 partculas totais para cada vrion
infeccioso. O ciclo replicativo do adenovrus est
representado esquematicamente na Figura 16.4.
6 Adenovrus de interesse veterinrio

Os adenovrus geralmente causam infeces
inaparentes ou com sinais clnicos leves, autoli-
mitantes e so considerados estritamente esp-
cie-especcos. Alguns adenovrus, porm, so
oportunistas e causam infeces em associao
com outros agentes, ou servindo como fatores
predisponentes para infeces secundrias virais
ou bacterianas. Vrios adenovrus possuem im-
portncia como patgenos de animais.
6.1 Adenovrus canino
Dois tipos de adenovrus canino j foram
descritos em ces: os adenovrus canino tipos 1 e
2 (CAdV-1 e CAdV-2), sendo considerados entre
os principais adenovrus de animais. O CAdV-1
o agente etiolgico da hepatite infecciosa cani-
na (HIC). A infeco pelo CAdV-2 caracteriza-
da por sinais respiratrios de baixa severidade e
422 Captulo 16
este vrus est associado com outros agentes na
etiologia da traqueobronquite infecciosa canina
(TIC).
A hepatite infecciosa canina (HIC) apresen-
ta ocorrncia rara em regies onde a vacinao
realizada regularmente. Entretanto, em popu-
laes humanas com condies socioeconmicas
baixas, a imunizao dos animais de estimao
no uma prtica freqente, o que concorre para
uma freqncia maior da infeco. A maioria das
infeces pelo adenovrus canino so inaparentes
ou acompanhadas de sinais respiratrios leves.
A HIC acomete principalmente animais no-va-
cinados com idade inferior a seis meses. A doen-
a se apresenta geralmente de forma aguda, e os
animais que sobrevivem a essa fase apresentam
um prognstico favorvel.
A HIC causada pelo adenovrus canino
tipo 1 (CAdV-1), que pertence ao gnero Masta-
denovirus. Esse vrus antigenicamente relacio-
nado com o CAdV-2, agente associado com a
traqueobronquite infecciosa ou tosse dos canis.
A extenso da reatividade antignica cruzada
pode ser evidenciada pela utilizao do CAdV-2
em formulaes de vacinas para ambas as enfer-
Figura 16.4. Representao esquemtica do ciclo de replicao dos adenovrus. O vrion se liga a receptores
especficos na membrana plasmtica (1) e internalizado por endocitose mediada por clatrina (2). A acidificao
progressiva do interior do endossoma (3) leva desestruturao da partcula vrica e liberao do genoma prximo
aos poros nucleares (4). Atranslocao do genoma para o ncleo seguida da transcrio dos genes iniciais (5), cujos
mRNAs so traduzidos nos ribossomos (6), resultando em protenas que atuam na replicao do genoma (7). Aps a
replicao do genoma, so transcritos os genes tardios (8), cujos mRNAs so traduzidos nas protenas estruturais (9),
que penetram no ncleo e, juntamente com as cpias do DNA genmico recm-produzidas, participam da
morfognese das partculas vricas (10). Aprognie viral liberadapor lisecelular (11).
H+
H+
H+
H+
Ncleo
Citoplasma
Egresso por
lise celular
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Adenoviridae 423
midades. Essa relao antignica tambm pode
interferir no diagnstico, e a diferenciao entre
estes dois agentes requer a utilizao de anticor-
pos monoclonais ou tcnicas moleculares.
6.1.1.1 Epidemiologia
O vrus excretado nas secrees e excre-
es dos ces infectados. A excreo pela urina
pode persistir por mais de seis meses aps a re-
cuperao clnica, e estes animais so a principal
fonte de disseminao do CAdV-1. Os animais
susceptveis adquirem a infeco pelo contato
direto, pela via oronasal ou conjuntival; ou indi-
reto, a partir de fmites contaminados. Alm dos
ces domsticos, as raposas e outros candeos sil-
vestres so susceptveis infeco pelo CAdV-1,
e so considerados potenciais reservatrios do
vrus.
A infeco pelo CAdV-1 tem sido descrita
em vrios pases europeus, nos EUA e tambm
no Brasil. Acredita-se que esse agente apresente
distribuio mundial. No entanto, a utilizao
massiva de vacinas contra o CAdV a partir da d-
cada de 1960, aliada com proteo cruzada por
anticorpos decorrentes da infeco natural pelo
CAdV-2, tm reduzido a ocorrncia de casos da
HIC em populaes caninas de vrias partes do
mundo. Estudos prvios ao uso extensivo de
vacinas em vrios pases (Alemanha, pases es-
candinavos, EUA e Japo) demonstraram que a
prevalncia de anticorpos contra o CAdV variava
entre 30 e 60% entre os ces testados. Um estudo
sorolgico realizado, em 2006, com ces sem his-
trico de vacinao em Santa Maria, Rio Grande
do Sul, revelou 43% (353/817) de amostras posi-
tivas.
6.1.1.2 Patogenia, sinais clnicos
e patologia
Aps a exposio pela via oronasal ou con-
juntival, o vrus replica inicialmente nas tonsilas
e nas placas de Peyer, disseminando-se para os
linfonodos regionais e, eventualmente, atinge a
circulao sangnea. A fase de viremia ocorre
entre o quarto e o oitavo dia aps a infeco e
resulta na disseminao do vrus para vrios r-
gos, como o fgado, os rins, o bao e os pulmes.
As clulas parenquimatosas e as clulas endote-
liais do organismo so os alvos principais para a
replicao do CAdV-1.
No fgado, so observadas congesto e ne-
crose de coagulao multifocal, com o envolvi-
mento dos hepatcitos da zona trs do cino de
Rappaport (regio centrolobular) ou necrose lo-
bular generalizada em casos graves. A extenso e
a gravidade das leses hepticas esto relaciona-
das com a imunidade humoral. Ces experimen-
talmente infectados, que possuem ttulos baixos
de anticorpos (<4), freqentemente desenvolvem
insucincia heptica fulminante, coagulao in-
travascular disseminada (CID) e vo a bito (Fi-
gura 16.5).
Ces com ttulos altos de anticorpos neutra-
lizantes desenvolvem uma infeco clinicamente
leve ou inaparente, e podem erradicar o vrus do
sangue e do fgado na semana seguinte infeco.
Foi demonstrado que os ces com ttulos modera-
dos de anticorpos neutralizantes (entre 16 e 500)
podem desenvolver hepatite crnica com inltra-
do mononuclear periportal e brose progressiva.
Nesse mesmo estudo, os animais sobreviventes
foram tratados com interferon humano (IFN), re-
sultando na erradicao do vrus do organismo e
na resoluo das leses hepticas. Nas infeces
crnicas, o CAdV-1 pode ser identicado somen-
te nos primeiros dias aps infeco, o que dicul-
ta o diagnstico virolgico em fases avanadas.
Um estudo retrospectivo por imunohisto-
qumica e PCR em amostras de fgado de 45 ces
com hepatite crnica e cirrose no demonstrou a
presena do CAdV-1 ou de produtos virais, ques-
tionando a participao do agente na etiopatoge-
nia das hepatites crnicas em ces.
Ces naturalmente infectados e tambm
ces que recebem vacina atenuada (mais rara-
mente) com o CAdV-1 podem desenvolver leses
oculares. Na fase de viremia, o vrus atinge o hu-
mor aquoso e replica no endotlio do trato uveal
e da crnea, causando uvete anterior e edema
de crnea. medida que os nveis de anticorpos
neutralizantes aumentam, ocorre a deposio
de imunocomplexos nos endotlios, ativao do
sistema complemento e migrao de clulas in-
amatrias, resultando em extravasamento de
lquido para o estroma da crnea.
424 Captulo 16
Na fase de viremia, o vrus pode se localizar
e replicar nas clulas do endotlio glomerular e
no epitlio dos tbulos renais. A leso inicial dos
glomrulos causada pela deposio de com-
plexos imunes (complexos antgeno-anticorpos),
produzindo glomerulonefrite.
Os ces jovens e no-vacinados so mais sus-
ceptveis doena. Entretanto, ces de qualquer
idade, raa ou sexo podem ser infectados, caso
no tenham sido previamente vacinados ou ex-
postos ao agente. A doena pode se manifestar de
forma superaguda ou aguda. A hepatite crnica
pode ocorrer aps a infeco inicial pelo CAdV-
1, sem necessariamente ocorrer a manuteno do
vrus no fgado.
Os ces com a doena superaguda podem
morrer dentro de poucas horas aps o surgimen-
to dos sinais clnicos. Os sinais nesta fase incluem
apatia, anorexia, palidez das mucosas e pet-
quias, convulses e coma. Sinais neurolgicos
podem ocorrer e esto associados com hemorra-
gia cerebral.
A forma aguda da doena ocorre com maior
freqncia. Essa forma caracterizada por apa-
tia, anorexia, hipertermia, linfoadenopatia, taqui-
cardia, taquipnia, tosse, dor abdominal, hepato-
megalia, vmitos, diarria, edema subcutneo e
ditese hemorrgica. A ictercia no comum na
fase inicial da infeco, porm pode ser pronun-
ciada em ces que sobrevivem hepatite aguda.
A infeco pelo CAdV-1 pode produzir
encefalopatia heptica ou encefalite no-supu-
rativa. A encefalopatia heptica compreende as
alteraes neurolgicas causadas por toxinas de
origem gastrintestinal (p. ex.: amnia), que no
so metabolisadas adequadamente pelo fgado
comprometido. A encefalite no-supurativa
mais rara e geralmente ocorre aps a infeco do
sistema nervoso central (SNC). Esta forma mani-
festa-se clinicamente por estupor, ataxia, convul-
ses e coma.
Exposio ao vrus
Tonsilas e linfonodos regionais
Sangue (viremia)
Olho Fgado Rins
Endotlio
Endotlios dos
demais rgos
Ttulo de anticorpos
Coagulao intravascular
disseminada (CID),
Falncia mltipla de rgos
bito
Imunocomplexos
Glomerulonefrite
Nefrite
intersticial
Hepatite
crnica
Infeco
inaparente
Necrose
centrolobular
Hepatite aguda
bito ou
recuperao
Imunocomplexos
Edema de crnea
uvete
Complicaes
oculares
Baixo Alto
Dias
Figura 16.5. Achados clnicos e laboratoriais em casos de hepatite infecciosa canina. As barras horizontais
correspondem ocorrncia cronolgica e duraodos respectivos achados clnicos e laboratoriais.
Fonte: adaptada de Greene (1998).
Adenoviridae 425
A uvete anterior e o edema de crnea, tam-
bm conhecidas como olho azul, podem ser as
nicas alteraes clnicas observadas em ces
com infeces inaparentes (Figura 16.5). O edema
de crnea pode ser acompanhado por dor ocular,
blefaroespasmo e fotofobia. As leses oculares
geralmente so brandas, com resoluo espon-
tnea aps duas a trs semanas. Em casos mais
severos, podem ocorrer glaucoma e/ou lcera de
crnea. O surgimento das alteraes oculares so
um indicativo de que o animal apresenta respos-
ta imunolgica contra o vrus, e pode ser consi-
derado um indicativo de bom prognstico. Essas
alteraes ocorrem pela deposio de complexos
imunes no endotlio vascular do corpo ciliar.
Corpsculos de incluso podem ser obser-
vados nos tecidos-alvo de replicao viral. As in-
cluses no ncleo dos hepatcitos so estruturas
arredondadas, escuras, circundadas por um halo
claro, resultante da migrao da cromatina e do
nuclolo para a periferia nuclear. As incluses
tambm podem ser encontradas no encfalo de
ces que morrem com sinais de encefalite e nas
clulas do epitlio tubular renal de ces com ne-
frite por deposio de complexos imunes.
Os ces com HIC podem apresentar vrias
alteraes na necropsia. Os linfonodos podem
estar edemaciados e hemorrgicos. Na cavidade
abdominal, pode-se observar lquido de colora-
o clara ou avermelhada. Petquias ou equimo-
ses podem ser observadas nas serosas. O fgado
geralmente apresenta-se aumentado de volume,
escuro, com exsudato brinoso depositado sobre
a superfcie. A ictercia no observada com fre-
qncia em ces que morrem na fase aguda da
doena.
6.1.1.3 Diagnstico
Os achados clnicos e de patologia clnica
no so patognomnicos para a hepatite infec-
ciosa canina. Os achados hematolgicos iniciais
so de leucopenia, neutropenia e linfopenia, pela
infeco dos linfonodos e da medula ssea. Du-
rante a fase de recuperao, geralmente ocorrem
neutrolia e linfocitose (Figura 16.6). Tromboci-
topenia com ou sem alterao da funo plaque-
tria ocorrem freqentemente.
Figura 16.6. Patogenia dahepatiteinfecciosacaninaemordemcronolgica.
Pirexia
Leucopenia
Linfocitose
Neurotrofilia
ALT
FA
Coagulopatia
Proteinria
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Dias a partir do incio da infeco
Fonte: adaptada de Greene (1998).
426 Captulo 16
Os nveis das enzimas hepticas e de bilir-
rubina podem estar elevados, dependendo do
grau da necrose do parnquima heptico. Tam-
bm podem ocorrer proteinria e bilirrubinria
(Figura 16.6). Na prtica clnica, os achados da
anamnese dos exames clnicos e laboratoriais po-
dem ser indicativos da enfermidade. Entretanto,
o diagnstico denitivo s pode ser elaborado
mediante o isolamento do vrus, a deteco de
cidos nuclicos ou de antgenos virais ou, ainda,
pela demonstrao dos corpsculos de incluso
intranucleares.
Dentre as tcnicas de diagnstico utilizadas
para a conrmao da infeco pelo CAdV-1 in-
cluem-se o isolamento viral a partir de secreo
nasal, urina, sangue e fezes. Aps a necropsia,
pode-se isolar o vrus dos rins, bao, pulmo, lin-
fonodos e do encfalo. O isolamento do vrus do
fgado dicultado pela interferncia de enzimas
hepticas, como a arginase, que inibe a replicao
do vrus nas clulas de cultivo.
O CAdV replica em clulas de origem cani-
na, e a linhagem celular mais utilizada a MDCK
(Madin-Darby canine kidney). Aps o isolamento,
deve-se identicar o vrus por imunouorescn-
cia (IFA), imunoperoxidase (IPX) ou PCR. Essas
tcnicas podem ser realizadas diretamente nas
amostras suspeitas, com a possibilidade de dife-
renciao entre os dois tipos de adenovrus cani-
nos.
A deteco de anticorpos pode ser realiza-
da por testes de ELISA, soroneutralizao (SN) e
inibio da hemaglutinao (HI), uma vez que o
CAdV aglutina eritrcitos de galinha, de perus,
de cobaias e de humanos. No possvel diferen-
ciar-se os anticorpos contra o CAdV-1 daqueles
contra o CAdV-2.
6.1.1.4 Controle e prolaxia
Ao contrrio de algumas hepatites virais em
humanos, a HIC no possui nenhum tratamento
especco. Portanto, o tratamento de casos sus-
peitos ou conrmados tipicamente de suporte.
Atualmente existem, no mercado brasileiro,
vacinas com vrus vivo modicado, contendo o
CAdV-2, que conferem imunidade cruzada con-
tra o CAdV-1. Essas vacinas so multivalentes
e contm antgenos de outros agentes virais e
bacterianos. O desenvolvimento de leses ocula-
res em ces vacinados com cepas atenuadas de
CAdV-1 levou troca desse vrus pelo CAdV-2
nas formulaes das vacinas multivalentes.
O protocolo de vacinao recomendado
consta de duas ou mais aplicaes com intervalos
de trs a quatro semanas. A primeira aplicao
deve ser realizada entre a sexta e a dcima sema-
na de vida dos lhotes.

A traqueobronquite infecciosa canina, ou
tosse dos canis, um enfermidade multifatorial
em que um dos agentes envolvidos o CAdV-
2. Alm deste, j foram relatados os seguintes
agentes associados com a enfermidade: Bordetella
brochisseptica, parainuenzavrus canino (CPIV),
reovrus canino tipos 1, 2 e 3, Mycoplasmas spp e
Ureaplasmas spp. No entanto, os agentes mais fre-
qentemente isolados de casos da doena so o
CPIV e a Bordetella bronchisseptica. Alguns fatores,
como produtos de limpeza base de formol, po-
eiras, alteraes bruscas de temperatura e aglo-
merao de ces tambm podem favorecer o de-
senvolvimento da doena. A infeco resulta em
leso do epitlio respiratrio, inamao aguda e
perda da funo dos clios das vias areas.
A transmisso do CAdV-2 ocorre por aeros-
sis e freqente em locais que abrigam ces (ex-
posies, abrigos, lojas, hospitais veterinrios e
instalaes de pesquisa). O agente tambm pode
ser transmitido por contato direto ou indireto por
fmites (gaiolas, comedouros, bebedouros, fun-
cionrios entre outros). O perodo de incubao
varia entre cinco e sete dias, com extremos de trs
e dez dias.
Os sinais clnicos podem variar desde sinais
respiratrios leves at doena respiratria severa.
O principal sinal observado uma tosse seca e in-
termitente, de aparecimento sbito, podendo ser
confundida com obstrues esofgicas. Pode-se
observar ainda tonsilite, laringite, faringite e au-
mento das secrees nasal e ocular. Casos graves
podem ocorrer aps infeces bacterianas secun-
drias, com o desenvolvimento de broncopneu-
monia, anorexia, tosse produtiva, febre e descar-
ga culo-nasal mucopurulenta.
Adenoviridae 427
As tcnicas de diagnstico da infeco pelo
CAdV-2 so as mesmas recomendadas para o
CAdV-1. Nesses casos, pode-se utilizar como
material o lavado laringotraqueal ou amostras de
pulmo.
O controle da enfermidade baseado no uso
de vacinas multivalentes, cuja primovacinao
deve ser realizada entre a sexta e dcima sema-
nas de vida. Existem dois tipos de vacina contra
a traqueobronquite infecciosa; uma de aplicao
intranasal e outra injetvel (IM ou SC). As duas
contm antgenos do CAdV-2 e do CPIV, alm de
antgenos bacterianos (Bordetella bronchiseptica).
A vacina intranasal considerada a mais efetiva,
pois induz imunidade local (IgA). As vacinas no
so capazes de prevenir a infeco, e mesmo os
ces vacinados podem apresentar sinais clnicos
leves ou infeco subclnica, podendo transmitir
os agentes para outros ces. Outras recomenda-
es para o combate enfermidade incluem o
isolamento dos animais afetados e o controle dos
fatores ambientais mencionados.
6.2 Adenovrus bovino
O adenovrus bovino (BAdV) pode ser clas-
sicado em dez tipos e esses vrus esto geral-
mente associados com conjuntivite, pneumonia,
enterite e/ou poliartrite. No entanto, alguns tipos
tm sido isolados de bovinos sem sinais clnicos.
Estudos sorolgicos demonstram que a infeco
pelos BAdVs apresenta distribuio mundial.
O adenovrus bovino tipo 3 (BAdV-3) con-
siderado um importante patgeno respiratrio
de bovinos jovens. Os sinais clnicos da infeco
aguda incluem hipertermia, diculdade respi-
ratria e descarga nasal e ocular. As leses so
encontradas com maior freqncia nos pulmes,
com reas de consolidao, colapso e ensema.
Na microscopia, observa-se bronquiolite proli-
ferativa, necrose e ocluso dos brnquios, alm
de colapso dos alvolos. Corpsculos de incluso
so encontrados nos tecidos pulmonares e das
vias areas.
O diagnstico da infeco pode ser reali-
zado por isolamento do vrus ou por sorologia.
Amostras de fezes e secrees oculares podem
ser utilizadas para o isolamento viral. As tcni-
cas sorolgicas utilizadas so a SN, a IDGA, HI
e xao do complemento (FC). Na Europa, uma
vacina contendo o BAdV-1, o BAdV-3 e o BAdV-
4 tem sido utilizada de forma limitada para o
controle da enfermidade. O BAdV-3 tem sido ex-
tensivamente utilizado como vetor para vacinas
recombinantes.
6.3 Adenovrus eqino
As infeces pelo adenovrus eqino tipo 1
(EAdV-1) so usualmente inaparentes ou acom-
panhadas por sinais respiratrios leves. A trans-
misso ocorre por contato direto, principalmente
pelas vias oral e nasofarngea. Estudos sorolgi-
cos indicam que a prevalncia da infeco varia
entre 60 e 75% entre diferentes raas, sendo de
90% em animais da raa rabe. Isso demonstra
a ampla disseminao do agente nos rebanhos
eqinos.
Os cavalos da raa rabe que apresentam
imunodecincia primria severa uma doena
autossomal que cursa com ausncia de linfcitos
T e B funcionais apresentam uma maior sus-
ceptibilidade ao EAdV-1, principalmente aps
o trmino da imunidade passiva. Animais com
idade inferior a trs meses apresentam infeco
generalizada aguda e fatal. Nesses casos, a mor-
bidade da doena varia entre 10 e 15%, e a leta-
lidade pode chegar a 100%. As leses podem ser
encontradas em vrios rgos, como o pncreas,
glndulas salivares, epitlio intestinal, renal, be-
xiga e clulas do trato respiratrio.
A patogenia e a patologia das infeces pelo
EAdV-1 so pouco conhecidas, pois em animais
imunocompetentes essas infeces so geralmen-
te autolimitantes. Alteraes macroscpicas e mi-
croscpicas podem ser observadas quase exclusi-
vamente nos eqinos da raa rabe que morrem
como resultado da infeco. No sistema respi-
ratrio, observa-se bronquiolite, atelectasia pul-
monar e pneumonia. Alteraes microscpicas
incluem hiperplasia, corpsculos de incluso e
necrose de clulas epiteliais do trato respiratrio
e do epitlio de transio da pelve renal, ureter,
bexiga urinria e uretra.
O diagnstico da infeco pode ser realizado
por isolamento viral em clulas de origem eqi-
428 Captulo 16
na, a partir de secrees nasais ou de fragmentos
de tecidos do sistema respiratrio. Tcnicas de
deteco do DNA viral (PCR, hibrizao in situ,
hibridizao) e de antgenos virais (ELISA e IFA)
tambm podem ser realizadas em amostras de
tecido. Testes sorolgicos pareados, como a SN
e HI, tambm podem ser utilizados para o diag-
nstico da infeco. No h descries de progra-
mas de controle para esse agente, pois a maioria
das infeces inaparente e autolimitante.
6.4 Adenovrus de ruminantes silvestres
(Deer adenovirus ou black tail deer adenovirus)
Alguns adenovrus tambm tm surgido
como vrus emergentes. Em uma epidemia em
1993, um desses vrus se disseminou entre cer-
vdeos (mule deer; Odocoileus hemionus) no estado
da Califrnia, EUA. A infeco foi caracterizada
por eroses no epitlio respiratrio e intestinal,
hemorragias e abscessos no intestino. Histologi-
camente, foi observada vasculite sistmica e pre-
sena de corpsculos de incluso intranucleares.
O diagnstico laboratorial foi baseado na detec-
o de antgenos virais nos tecidos por IFA e pela
deteco do vrus por microscopia eletrnica.
6.5 Adenovrus avirios
Vrios adenovrus infectam aves, produ-
zindo doenas como a sndrome da queda de
postura, bronquite, imunossupresso, artrite e
pancreatite. Dentre os adenovrus avirios exis-
tem representantes dos gneros Aviadenovirus,
Siadenovirus e Atadenovirus, alm de referncias
que classicam os Aviadenovirus em sorogrupos
I, II e III.
6.5.1 Aviadenovirus
A infeco de aves pelos aviadenovirus cursa
principalmente com manifestaes respiratrias e
digestivas. A etiopatogenia dessas doenas pode
estar relacionada com infeces concomitantes
com outros vrus, como o birnavrus (doena de
Gumboro) ou o circovrus (vrus da anemia in-
fecciosa).
Dentre as infeces respiratrias por adeno-
vrus em aves, destaca-se a bronquite das codor-
nas, produzida pelo adenovrus avirio A (Fowl
adenovirus A; FAdV-A). A infeco de codornas
jovens pelo FAdV-A pode resultar em mortalida-
de de 100%. No entanto, as taxas de mortalidade
em aves com mais de quatro semanas de idade
so reduzidas para menos de 25%. A infeco
tambm pode produzir enterite e diarria. Os
sinais clnicos so mais freqentes nas codornas
de cabelo branco (Colinus virgianianus) e nas co-
dornas japonesas (Coturnix coturnix japonica). Os
efeitos so devastadores e podem inviabilizar a
criao aps a ocorrncia de surtos. As aves que
se recuperam da infeco desenvolvem imunida-
de duradoura. O controle da enfermidade baseia-
se em medidas preventivas, destinadas a evitar a
introduo do vrus na criao, como a quaren-
tena de aves a serem introduzidas e desinfeco
das instalaes.
O diagnstico pode ser realizado pelo isola-
mento do vrus do trato respiratrio e do intesti-
no de aves durante a infeco aguda.
Cinco adenovrus avirios tm sido asso-
ciados com surtos de doena em frangos (FAdV
tipos A, B, C, D e E). Essas epidemias se carac-
terizam por mortalidade elevada, podendo atin-
gir at 30%. O curso da doena de trs a quatro
dias e caracteriza-se por hepatomegalia e hemor-
ragias. A hepatite pode ser demonstrada pela
presena de corpsculos de incluso intranucle-
ares eosinoflicos e material granular e brilar. A
infeco pelos adenovrus avirios A ou B (Fowl
adenovirus B; FAdV-B) pode ocorrer concomitan-
temente com a infeco pelo birnavrus ou pelo
circovrus.
6.5.2 Siadenovirus
Apenas uma espcie de siadenovirus tem
sido associada com enfermidade em aves, o ade-
novrus de perus A (Turkey adenovirus A; TAdV-
A). Essa espcie de vrus possui trs membros
que infectam aves: o adenovrus de perus tipo 3
(Turkey adenovirus 3; TAdV-3), o adenovrus de
faises (Pheasant adenovirus 1; PAdV-1) e o vrus
da enterite hemorrgica dos perus (Turkey hae-
morrhagic enteritis virus; THEV). Esses vrus esto
Adenoviridae 429
associados com trs sndromes distintas: a esple-
nomegalia dos frangos de corte (TAdV-3), a do-
ena do bao marmreo dos faises (PAdV-1) e a
enterite hemorrgica dos perus (THEV).
Em faises, a doena do bao marmreo aco-
mete aves com 12 a 32 semanas. Em frangos, a es-
plenomegalia geralmente se desenvolve em aves
com mais idade. A enterite hemorrgica acontece
em perus com idade superior a quatro semanas,
com maior freqncia entre as sete e nove se-
manas. Aparentemente, as aves mais jovens so
mais resistentes.
Os sinais comuns s infeces por esses trs
agentes incluem depresso, diarria hemorrgica
e morte, geralmente uma semana aps a infec-
o. Existem evidncias de imunossupresso. O
curso da doena em perus pode ser de 10 dias,
apresentando-se de forma aguda ou superaguda.
A mortalidade pode atingir 60% em perus; 20%
em faises e at 10% em frangos, dependendo do
isolado do vrus. A principal forma de transmis-
so desses vrus a horizontal, pela via fecal-oral,
no existindo evidncias de transmisso vertical.
As leses no bao dos faises so conside-
radas patognomnicas, com hiperplasia retculo-
endotelial e a presena de corpsculos de inclu-
so intranucleares nas clulas. Esplenomegalia,
edema pulmonar e congesto com contedo he-
morrgico nos intestinos podem ser observados
na necropsia. Os corpsculos de incluso podem
ser detectados tambm em linfcitos B e em clu-
las mononucleares.
O diagnstico da infeco pode ser realizado
pelo isolamento dos TAdV-A aps a inoculao
de material suspeito em clulas linfoblastides ou
por inoculao de perus com cinco a dez semanas
de idade (para o THEV). Antgenos virais podem
ser detectados por IFA no bao, no intestino e em
rgos linfides. As tcnicas de ELISA e IDGA
podem ser utilizadas para deteco de antgenos
em macerados de tecidos. A tcnica de PCR tem
sido descrita para a deteco do genoma viral em
amostras de tecidos. A sorologia pareada pode
tambm ser empregada, podendo ser utilizadas
as tcnicas de HI ou SN.
O controle baseado principalmente na va-
cinao. Existe uma vacina atenuada disponvel
para faises e perus. Essa vacina fornecida na
gua de bebida e deve ser administrada em aves
com quatro a cinco semanas de idade, pela pos-
sibilidade de interferncia de anticorpos adquiri-
dos passivamente.
6.5.3 Atadenovirus
A infeco mais importante por adenovrus
em frangos a causada pelo adenovrus de patos
A (Duck adenovirus A, DAdV-A). Alm de fran-
gos, esse vrus produz infeces em patos e gan-
sos. A doena causada pelo DAdV-A conhecida
como sndrome da queda da postura (EDS, egg
drop syndrome) ou EDS-76, em referncia ao ano
do primeiro diagnstico realizado na Irlanda do
Norte e Holanda, em 1976. Nesse mesmo ano, a
doena foi descrita em aves reprodutoras do Rio
Grande do Sul. As aves afetadas apresentaram
queda de postura aps a aplicao de vacinas
contra a doena de Marek, importadas, e que ha-
viam sido produzidas em embries de pato.
Atualmente, a infeco encontra-se disse-
minada mundialmente. A disseminao ocorreu
principalmente por transmisso vertical a partir
de reprodutoras infectadas e/ou pela utilizao
de vacinas contaminadas. Na Amrica do Norte,
onde no houve a utilizao de vacinas conta-
minadas, o impacto econmico foi menor. No
obstante, neste continente, o vrus j foi isolado
de patos e gansos selvagens. Os vrus isolados de
pintos e patos da Europa apresentam maior vi-
rulncia se comparados com aqueles isolados de
patos nos EUA.
Tem sido observada uma associao da do-
ena com matrizes de ovos marrons em compa-
rao com matrizes poedeiras de ovos brancos,
e o primeiro sinal observado a despigmentao
dos ovos. A maioria dos pases desenvolvidos
conseguiu a erradicao do vrus de criaes co-
merciais de aves reprodutoras.
A principal forma de transmisso do DAdV-
A a vertical, e a fmea geralmente permanece
soronegativa at o incio da postura. A transmis-
so horizontal, pela via orofecal, tambm pode
ocorrer, porm a disseminao do vrus lenta.
As aves positivas no transmitem o vrus aps a
45 semana de idade. A transmisso pode ocor-
rer entre galinhas, entre patos e entre gansos por
430 Captulo 16
contato direto ou por contato indireto, por meio
de fmites contaminados.
A replicao viral ocorre nos tecidos linfi-
des, em um perodo de trs a quatro dias aps a
infeco. Aos sete dias, o vrus pode ser detec-
tado na glndula da casca e no oviduto. O vrus
no replica na mucosa intestinal, portanto, as
partculas virais encontradas nas fezes provavel-
mente so provenientes do oviduto.
As leses ocorrem principalmente nas aves
infectadas pela forma vertical, uma vez que a
infeco natural de animais adultos limitada
mucosa oral. Nesses casos, porm, pode tambm
ocorrer viremia. As leses macroscpias incluem
a atroa do oviduto, perda da funo ovariana
e edema uterino. Raramente observa-se espleno-
megalia, acidez do ovrio e presena de vulos
na cavidade abdominal. Microscopicamente, ob-
servam-se corpsculos de incluso e necrose em
clulas epiteliais da glndula da casca e do ovi-
duto e inltrao de clulas inamatrias. Esses
corpsculos so considerados achados patogno-
mnicos da EDS.
As patologias produzidas pelo vrus deter-
minam a queda de postura de 10 a 30%, por seis
a oito semanas. Tambm ocorre despigmentao
da casca dos ovos, alm de postura de ovos com
casca frgil ou sem casca. Na fase de crescimento
das aves, pode-se observar diarria entre a 15 e
25 semanas de idade. Formas endmicas da in-
feco, produzidas por cepas pouco virulentas,
podem se resumir em queda discreta da postura,
que pode passar despercebida.
O diagnstico pode ser realizado pelo iso-
lamento do vrus em embries e broblastos de
patos ou de gansos. Clulas de fgado de pintos
so mais sensveis do que as clulas de origem
renal para o isolamento. Fibroblastos de pinto
ou ovos embrionados no so indicados para a
amplicao do vrus. A presena do vrus pode
ser detectada por hemaglutinao, utilizando-se
eritrcitos de aves.
Dentre os testes sorolgicos que podem ser
utilizados esto a HI, ELISA, SN, IDGA e imuno-
uorescncia indireta (IFI). As tcnicas de HI e
SN possuem especicidade adequada, pois no
detectam anticorpos contra outros adenovrus.
Alguns animais infectados pela via vertical no
desenvolvem anticorpos at o incio da fase re-
produtiva. Portanto, aves positivas para o vrus
podem ser soronegativas; e a deteco de anti-
corpos deve ser realizada principalmente aps o
pico da postura.
A eliminao de matrizes positivas o m-
todo denitivo para a erradicao da infeco
das criaes. Pode-se tambm recorrer a mtodos
mais conservadores, como a incubao somente
de ovos de reprodutoras com idade superior a 45
semanas. A vacinao de lotes realizada com va-
cina inativada (adjuvante oleoso) e deve ser rea-
lizada antes da 18 semana de idade. Essa doena
tem sido eliminada em alguns pases mediante a
preveno do contato de frangos com aves aqu-
ticas, pela desinfeco regular dos equipamentos
e pela clorao da gua de bebida.
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HERPESVIRIDAE
Ana Cludia Franco
1
& Paulo Michel Roehe
1
Colaboraram com sees especcas: Eduardo Furtado Flores (BoHV-2, BoHV-4);
Renata Dezengrini (FeHV-1); Letcia F. da Silva (CpHV-1).
17
1 Introduo
2 Classicao e nomenclatura
2.1 Subfamlia Alphaherpesvirinae
2.2 Subfamlia Betaherpesvirinae
2.3 Subfamlia Gammaherpesvirinae
3 Propriedades gerais dos herpesvrus
4 Estrutura dos vrions
4.1 O ncleo
4.2 O capsdeo
4.3 O tegumento
4.4 O envelope
4.5 O genoma
5 Replicao
5.2 Infeco latente
6 Herpesvrus de interesse veterinrio
6.1 Herpesvrus de bovinos
6.1.1 Herpesvrus bovino tipo 1
6.1.5 Herpesvrus associados com a febre catarral maligna
6.2 Herpesvrus de caprinos
6.2.1 Herpesvrus caprino tipo 1
435
435
436
436
436
438
438
439
439
439
439
440
440
441
445
447
447
447
454
457
459
463
465
465
6.3 Herpesvrus de sunos
6.3.1 Herpesvrus suno tipo 1 (vrus da doena de Aujeszky)
6.4 Herpesvrus de eqinos
6.4.1 Herpesvrus eqino tipo 1
6.5 Herpesvrus de ces
6.5.1 Herpesvrus canino tipo 1
6.6 Herpesvrus de felinos
6.6.1 Herpesvrus felino tipo 1
6.7 Herpesvrus de aves
6.7.1 Vrus da doena de Marek
6.7.2 Vrus da laringotraquete infecciosa
467
467
472
472
475
476
478
478
479
479
481
481
484
485
1 Introduo
A palavra herpes origina-se da palavra gre-
ga herpein, que signica rastejar ou rastejamento.
Esta palavra est relacionada com as primeiras
observaes das leses causadas por vrus desta
famlia, leses que pareciam rastejar na super-
fcie da pele das pessoas afetadas. Alm desta,
outra propriedade muito importante apresenta-
da por, virtualmente, todos os herpesvrus a ca-
pacidade de causarem infeces inaparentes ou
latentes. Assim, uma vez infectado por um her-
pesvrus, o hospedeiro permanece portador do
vrus na forma latente. A latncia caracterizada
pela ausncia de replicao viral e de sinais clni-
cos, e dura toda a vida do hospedeiro. Durante
esse perodo, o animal pode no apresentar sinais
clnicos e raramente excreta o vrus. No entanto,
a infeco latente pode ser ocasionalmente reati-
vada por situaes de estresse, ocasies em que
o vrus re-excretado pelo hospedeiro e pode se
disseminar para indivduos susceptveis.
Os herpesvrus so muito antigos e, aparen-
temente, vm co-evoluindo com os seus hospe-
deiros h quase um bilho de anos. As vrias se-
melhanas observadas na estrutura de diferentes
herpesvrus sugerem que eles tenham surgido de
um ancestral comum, que parece ter dado origem
a duas linhagens: uma representada pelo herpes-
vrus alfa, beta e gama, que infectam aves e ma-
mferos; e a outra representada pelos herpesv-
rus de animais de sangue frio. Estudos genticos
sugerem que os herpesvrus evoluram paralela-
mente aos seus hospedeiros, o que explica o alto
nvel de adaptao observado entre esses agentes
e os seus hospedeiros naturais.
A capacidade dos herpesvrus de causar in-
feces latentes duradouras nos seus hospedeiros
naturais, sem causar doena grave ou mortalida-
de, possibilita a transmisso viral entre hospe-
deiros de forma altamente ecaz. Esse no o
caso das infeces de hospedeiros acidentais, aos
quais os herpesvrus no se encontram to bem
adaptados. Nesses casos, infeces fatais podem
ocorrer, como nas infeces de bovinos e ces
com o herpesvrus suno tipo 1 (SuHV-1).
Os herpesvrus esto amplamente distribu-
dos na natureza. A maioria das espcies animais
serve de hospedeiro natural de pelo menos um
membro da famlia. Apesar disso, os herpesvrus
identicados at o momento ainda so em peque-
no nmero, compreendendo aproximadamente
130 espcies. Existem vrios herpesvrus de im-
portncia veterinria, visto que cada espcie do-
mstica alberga pelo menos um desses agentes.
Como exemplos, podem-se citar: os herpesvrus
bovino tipos 1, 2, 4 e 5 (BoHV-1, BoHV-2, BoHV-
4 e BoHV-5); os herpesvrus eqino tipos 1, 3 e 4
(EHV-1, EHV-3, EHV-4); o SuHV-1 (tambm de-
nominado de vrus da doena de Aujeszky ou da
pseudoraiva, PRV); o herpesvrus caprino tipo 1
(CpHV-1); o herpesvrus canino tipo 1 (CaHV-1);
o herpesvrus felino tipo 1 (FeHV-1); os herpes-
vrus de galdeos tipo 1 e tipo 2 (GaHV-1 e 2).
Dentre os membros dessa famlia que infectam
humanos, pode-se citar o herpesvrus humano 1
(HHV-1 ou vrus do herpes simplex, HSV-1); o
herpesvrus humano 2 (HHV-2 ou HSV-2); o her-
pesvrus humano 3 (HHV-3, agente da varicela-
zoster,VZV); o citomegalovrus (HCMV); o vrus
Epstein-Barr (EBV) e os herpesvrus humanos 6A,
6B, 7 e 8 (HHV-6A, HHV-6B, HHV-7, e HHV-8).
A maioria dos herpesvrus de animais do-
msticos produz geralmente infeces inapa-
rentes ou leves nos seus hospedeiros. Alguns
herpesvrus so estreitamente associados com c-
lulas, e um pequeno nmero deles tm capacida-
de oncognica, cuja infeco resulta na produo
de tumores, como o GaHV-2 (agente da doena
de Marek).
Em geral os herpesvrus esto disseminados
nas populaes animais e so detectados com fre-
qncia em laboratrios de diagnstico, pois se
multiplicam com facilidade em cultivos celulares
(ex: SuHV-1, BoHV-1 e BoHV-5) ou em membra-
na corioalantide (ex: GaHV-2).
Este captulo ir abordar somente as infec-
es causadas por herpesvrus que afetam ani-
mais de importncia em medicina veterinria.
2 Classicao e nomenclatura
Os membros da famlia Herpesviridae so
classicados em trs subfamlias, de acordo com
suas propriedades biolgicas: Alphaherpesvirinae,
Betaherpesvirinae e Gammaherpesvirinae. Alm des-
436 Captulo 17
ses, existem vrios herpesvrus que ainda no
foram denitivamente classicados, entre eles
destaca-se o SuHV-2, o citomegalovrus de su-
nos. Os membros das respectivas subfamlias so
agrupados em gneros, de acordo com a homo-
logia das seqncias de DNA, similaridades na
estrutura e organizao genmica e relao anti-
gnica. A Tabela 17.1 apresenta os principais her-
pesvrus que afetam animais e que sero aborda-
dos neste captulo.
A nomenclatura dos herpesvrus, assim
como de outras famlias virais, tem sido alvo de
alteraes nas ltimas dcadas, fruto de tentati-
vas de estabelecer uma nomenclatura universal
para esses agentes. Assim, o vrus do herpes sim-
plex tipo 1 (HSV-1), que o prottipo da famlia,
foi recentemente denominado HHV-1 (herpesv-
rus humano tipo 1). Outros vrus foram tambm
renomeados, buscando adaptar-se s instrues
do ICTV (International Committee for Taxonomy of
Viruses). Para evitar confuso e contradio com
os demais captulos, nos quais tais vrus so men-
cionados, este captulo utilizar a nomenclatura
clssica consagrada. Os casos em que a nova no-
menclatura for empregada sero assinalados.
2.1 Subfamlia Alphaherpesvirinae
A classicao dos herpesvrus nessa subfa-
mlia feita com base em suas caractersticas bio-
lgicas: os alfaherpesvrus possuem uma gama
varivel de hospedeiros, apresentam um ciclo
replicativo relativamente curto (< 24 horas), des-
troem rapidamente as clulas de cultivo e esta-
belecem infeces latentes primariamente em
neurnios dos gnglios sensoriais e autonmicos.
Essa subfamlia abriga os gneros Simplexvirus
(cujo prottipo o HHV-1 ou HSV-1, agente do
herpes labial), Varicellovirus (prottipo: HHV-3
ou VZV, agente da varicela-zoster), Mardivirus
(prottipo: GaHV-2, agente da doena de Marek)
e Iltovirus (prottipo: GaHV-1, agente da laringo-
traquete infecciosa [ILTV]). A maioria dos her-
pesvrus de importncia veterinria pertence ao
gnero Varicellovirus (Tabela 17.1).
2.2 Subfamlia Betaherpesvirinae
Os vrus que pertencem a essa subfamlia
possuem uma gama restrita de hospedeiros e
apre sentam um ciclo replicativo longo, ou seja,
a infeco progride lentamente em cultivos ce-
lulares. As clulas infectadas freqentemente
apre sentam aumento de volume (citomegalia) e a
infec o natural resulta na produo de animais
portadores. O vrus pode ser mantido de forma
latente em tecidos glandulares, clulas linforre-
ticulares, rins e outros tecidos. Esta subfamlia
dividida nos gneros Cytomegalovirus (cujo prot-
tipo o herpesvrus humano 5 [HHV-5], tambm
denominado citomegalovrus humano [HCMV]),
Muromegalovirus (prottipo: citomegalovrus
murino) e Roseolovirus (cujo prottipo o her-
pesvrus humano 7, HHV-7). Esta famlia abriga
importantes patgenos humanos, alm de abri-
gar vrus que afetam algumas espcies animais,
como primatas e roedores.
2.3 Subfamlia Gammaherpesvirinae
Os vrus classicados nessa subfamlia tam-
bm possuem uma gama restrita de hospedeiros.
Alm disso, estabelecem infeces latentes prin-
cipalmente em clulas linfoblastides. Alguns
membros podem produzir infeces lticas em
clulas epiteliides e broblsticas. Esses vrus
possuem potencial oncognico e podem ser es-
pecicamente adaptados a linfcitos B ou T. In-
feces latentes so freqentemente observadas
em tecidos linfides. Essa subfamlia contm
trs gneros: Lymphocryptovirus (cujo prottipo
o herpesvrus humano tipo 4 [HHV-4] ou vrus
Epstein-Barr [EBV]), Rhadinovirus (cujo prottipo
o herpesvrus saimiri 2 [SaHV-2]) e Ictalurovirus
(cujo prottipo o herpesvrus do catsh [IcHV-
1]). Vrios vrus classicados nessa subfamlia
afetam espcies animais e alguns possuem im-
portncia em medicina veterinria, como o agen-
te da febre catarral maligna associada a ovinos
(MCFV ou OvHV-2).
Herpesviridae 437
Subfamlia
Gnero
Alphaherpesvirinae
Enfermidade
Varicellovirus
Rinotraquete infecciosa
bovina/vulvovaginite pustular
infecciosa/balanopostite pustular
infecciosa, abortos.
Espcie
Herpesvrus bovino
tipo 1 (BoHV-1)
Simplexvirus
Mamilite herptica bovina Herpesvrus bovino
tipo 2 (BoHV-2)
Herpesvrus bovino
tipo 5 (BoHV-2)
Encefalite herptica bovina
Infeco herptica em ces Herpesvrus canino
tipo 1 (CaHV-1)
Infeco herptica em caprinos Herpesvrus caprino
tipo 1 (CpHV-1)
Aborto herptico eqino Herpesvrus eqino
tipo 1 (EHV-1)
Exantema coital eqino Herpesvrus eqino
tipo 3 (EHV-3)
Rinopneumonite viral eqina Herpesvrus eqino
tipo 4 (EHV-4)
Rinotraquete viral dos felinos Herpesvrus felino
tipo 1 (FeHV-1)
Doena de Aujeszky ou
pseudoraiva
Herpesvrus suno
tipo 1 (SuHV-1)
Mardivirus
Doena de Marek Herpesvrus galdeo
tipo 2 (GaHV-2)
Doena de Marek Herpesvrus galdeo
tipo 3 (GaHV-3)
Iltovirus Laringotraquete viral infecciosa Herpesvrus galdeo
tipo 1 (GaHV-1)
Gammaherpesvirinae
Febre catarral maligna H alcelaphine
tipo 1 (AlHV-1)
erpesv rus
Associao com doena?
Sinais respiratrios, abortos
Herpesvrus bovino
tipo 4 (BoHV-4)
Febre catarral maligna
associada a ovinos
Herpesvrus ovino
tipo 2 (OvHV-2)
Vrus
no-classificados
Adenomatose pulmonar
associada a herpesvrus
Herpesvrus ovino
tipo 1 (OvHV-1)
Citomegalovrus de sunos Herpesvrus suno
tipo 2 (SuHV-2)
Tabela17.1. Herpesvrus deimportncia emmedicinaveterinria.
438 Captulo 17
3 Propriedades gerais
dos herpesvrus
A incluso de um vrus na famlia Herpes-
viridae realizada com base na estrutura da par-
tcula viral, no tipo e estrutura do genoma. Os
vrions dos herpesvrus consistem de um ncleo
(ou core) contendo uma molcula de DNA de ta
dupla linear; um capsdeo icosadrico de apro-
ximadamente 100 a 110 nm de dimetro envol-
vendo o ncleo; uma camada protica amorfa,
chamada tegumento, que recobre o capsdeo; e
um envelope lipoprotico contendo espculas de
glicoprotenas na sua superfcie (Figura 17.1). O
dimetro dos vrions varia entre 120 e 300 nm.
As partculas no possuem uma forma bem de-
nida, podendo ser aproximadamente esfricas
ou apresentar contorno irregular. Dentre as ra-
zes para a variao do dimetro e da forma dos
vrions esto a presena de quantidade varivel
de tegumento e a sua distribuio irregular nas
partculas.
Os herpesvrus conhecidos apresentam al-
gumas caractersticas biolgicas em comum, a
saber:
codicam um grande nmero de enzimas
relacionadas com o metabolismo de nucleot-
deos, sntese do cido nuclico e processamento
de protenas;
a sntese do DNA viral e a montagem do
capsdeo ocorrem no ncleo da clula hospedei-
ra. A aquisio do envelope viral ocorre durante
o trnsito dos nucleocapsdeos atravs da mem-
brana nuclear ou atravs de organelas citoplas-
mticas envelopadas (p. ex.: complexo de Golgi);
so capazes de permanecer latentes nos
seus hospedeiros naturais. Nas clulas infectadas
de forma latente, os genomas virais se mantm
na forma circular epissomal, ocorrendo pouca ou
nenhuma expresso gnica. Esses genomas retm
a capacidade de replicar, o que ocorre por oca-
sio da reativao da infeco latente.
Os herpesvrus so vrus facilmente inativa-
dos por lcoois e detergentes, em razo da presen-
a do envelope lipoprotico. Os vrions perdem a
infectividade aps o contato com isopropanol ou
etanol a 70-80% por cinco minutos; formaldedo
a 0,2-08% e glutaraldedo a 2%. Alm disso, os
vrions so inativados pelo contato por dez mi-
nutos com substncias de pH abaixo de 3 e acima
de 11.
Os vrions dos herpesvrus variam de 120
a 300 nm em dimetro. Parte dessa variao se
deve variabilidade na espessura do tegumento.
Figura 17.1. Vrions de membros da famlia A) Fotografia de microscopia eletrnica dovrus doherpes
simplex humano (HSV-1), o prottipo da famlia. B) Ilustrao simplificada de uma partcula vrica com os seus
componentes.
Herpesviridae.
capsdeo
tegumento
ncleo
(core)
protenas
genoma
membrana
lipdica
glicoprotenas
envelope
A
B
Fonte: A) Dra Linda Stannard. Web.uct.ac.za. B) Adaptada de Dr. Marko Reschkes Group, Marburg.
Herpesviridae 439
Outra fonte de variao no dimetro dos vrions
o estado do envelope. Envelopes virais intac-
tos so impermeveis e, em geral, conferem uma
forma praticamente esfrica s partculas. Enve-
lopes danicados so permeveis a corantes. V-
rions permeveis apresentam uma aparncia de
ovo frito, com morfologia indenida e dime-
tro maior do que vrions intactos. A Figura 17.1
ilustra a estrutura de uma partcula vrica dos
herpesvrus com os seus componentes.
4.1 O ncleo
O ncleo (ou core) de um vrion maduro
contm o genoma viral conjugado com algumas
protenas codicadas pelo vrus. Em alguns her-
pesvrus, o DNA parece estar suspenso por uma
massa proteincea, que consiste de brilas que -
cam tambm embebidas na parte interna do cap-
sdeo viral. O genoma parece estar compactado
em uma forma toride ou de fuso e possui as ex-
tremidades livres, o que caracteriza os genomas
lineares.
4.2 O capsdeo
Os capsdeos dos herpesvrus so icosadri-
cos e possuem um dimetro aproximado de 100
nm. Esta estrutura composta por 162 capsme-
ros, sendo 12 capsmeros pentamricos localiza-
dos nos 12 vrtices e 150 capsmeros hexamricos
constituindo as faces triangulares do icosaedro.
Os capsmeros so arranjados formando uma
simetria icosadrica do tipo T = 16. Em prepa-
raes de vrions, trs tipos de capsdeos podem
ser observados sob microscopia eletrnica (ME):
os capsdeos do tipo A so desprovidos da es-
trutura toride (ncleo) interna; os capsdeos do
tipo B contm as protenas que se conjugam
ao genoma, mas so desprovidos de DNA e, -
nalmente, os capsdeos que contm o DNA e as
protenas associadas so denominados C. Pelo
menos quatro tipos de protenas virais esto pre-
sentes na estrutura dos capsdeos.
4.3 O tegumento
O tegumento a camada protica que pre-
enche o espao entre o capsdeo e o envelope.
Estudos iniciais demonstraram que o tegumento
apresentava aparncia amorfa, mas recentemen-
te observou-se, por imunomicroscopia, que esse
componente apresenta certa organizao estru-
tural, sobretudo nas proximidades dos vrtices
do capsdeo. O tegumento pode estar distribudo
assimetricamente, e sua espessura pode variar
de acordo com a localizao do vrion dentro
da clula infectada. Com isso, a morfologia e as
dimenses das partculas vricas podem variar.
Pelo menos oito tipos de protenas codicadas
pelo genoma viral esto presentes no tegumento.
Destas, duas apresentam funes importantes na
replicao viral, a VP16 (TIF) e a VHS, envolvi-
das na ativao da transcrio dos genes alfa e na
supresso da sntese protica celular, respectiva-
mente.
4.4 O envelope
Estudos de microscopia eletrnica tm de-
monstrado que o envelope dos herpesvrus pos-
sui uma aparncia tipicamente trilaminar. O en-
velope viral origina-se de seces de membranas
celulares alteradas e contm numerosas protru-
ses de glicoprotenas. Essas protruses so mais
numerosas e mais curtas do que as presentes na
superfcie de outros vrus envelopados. Alm de
conter vrias glicoprotenas, o envelope tambm
contm lipdeos. O nmero e a quantidade rela-
tiva de glicoprotenas do envelope viral variam
de acordo com o vrus. Assim, o HSV-1 codica
pelo menos onze glicoprotenas, enquanto o n-
mero de molculas de glicoprotenas individuais
pode chegar a 1.000 por vrion. As glicoprotenas
do HSV-1 j identicadas so: a gB, gC, gD, gE,
gG, gH, gI, gK e gM. Essas glicoprotenas desem-
penham importantes funes, incluindo a liga-
o a receptores celulares, fuso, penetrao e
transporte das partculas virais entre clulas. No
entanto, algumas delas no so essenciais para a
replicao do vrus in vitro e podem ser deletadas
experimentalmente sem afetar a capacidade do
vrus replicar em cultivo celular. As glicoprote-
nas do envelope tambm medeiam as interaes
dos vrions com o sistema imunolgico e se cons-
tituem em importantes alvos de anticorpos, mui-
tos deles com atividade neutralizante.
440 Captulo 17
4.5 O genoma
Os genomas extrados de vrions e caracte-
rizados at o presente so constitudos por mol-
culas de DNA lineares de ta dupla. Nos vrions,
essas molculas so compactadas ou empacota-
das na forma de um toride ou fuso, com as ex-
tremidades livres, porm prximas. Os genomas
lineares circularizam imediatamente aps a sua
liberao no interior das clulas hospedeiras.
O genoma possui entre 125 e 235 quilopares
de bases (kbp), dependendo da espcie viral. O
genoma do HSV-1 j foi seqenciado inteiramen-
te e possui 152.2 kpb. Os genomas dos herpesv-
rus variam com relao extenso, composio
(contedo de GC-AT) e presena de seqncias
repetidas. A composio de bases do DNA dos
herpesvrus varia de 31 a 75% de G-C em relao
ao total de nucleotdeos. A composio de GC no
genoma do HSV-1 de 68%. Alm disso, a dis-
tribuio do contedo de GC tambm pode ser
desigual ao longo do genoma. A variao na ex-
tenso do genoma est associada principalmente
com a presena de seqncias terminais e inter-
nas repetidas. Por outro lado, delees parciais
tambm j foram relatadas, o que tambm pode
resultar em variaes na extenso do genoma.
Os genomas dos herpesvrus so organiza-
dos de formas diferentes com relao localiza-
o e nmero de seqncias repetidas terminais e
internas. De acordo com a organizao genmica,
esses vrus so divididos em seis grupos designa-
dos pelas letras A a F (ver Figura 6.9; Captulo 6).
A Figura 17.2 apresenta genomas representativos
de trs desses grupos.
O genoma dos herpesvrus possui mais de
70 genes, sendo que a maioria das protenas co-
dicadas e as suas funes j foram identicadas
ou deduzidas. Curiosamente, parte desses genes
(35 genes no caso do HSV-1) codica protenas
que no so essenciais para a replicao do vrus
em cultivo celular. Os genes situados nas regies
nicas (UL e US) esto presentes em apenas uma
cpia no genoma, enquanto os genes localizados
nas seqncias repetidas esto presentes em mais
cpias. O signicado biolgico dessas duplica-
es gnicas no conhecido. Os genes esto dis-
tribudos nas duas cadeias do DNA em orienta-
es obviamente opostas. Assim, a expresso dos
genes envolve a transcrio das duas cadeias. Os
promotores de alguns genes esto situados nas
regies codicantes de genes adjacentes, o que
faz com que manipulaes genticas do genoma
tenham que ser feitas com critrios cuidadosa-
mente determinados. Os genes so transcritos
pela maquinaria celular de transcrio (RNA poli-
merase II e fatores de transcrio), possivelmente
assistida por fatores virais. A transcrio de cada
gene origina um RNA mensageiro (mRNA), que
possui cap na extremidade 5 e poliadenilado na
extremidade 3. Poucos transcritos dos herpes-
vrus sofrem splicing antes de serem exportados
para o citoplasma.
5 Replicao
Considerando-se que os membros da subfa-
mlia Alphaherpesvirinae so os que apresentam
maior importncia em medicina veterinria,
esta seo abordar a replicao dos vrus dessa
subfamlia.
Dois ciclos replicativos com caratersticas
distintas podem ser reconhecidos na biologia dos
alfaherpesvrus: a infeco aguda ou produtiva
(ciclo ltico) e a infeco latente (Figura 17.3).
Regio UL
Regio UL
Regio UL
US
US
a a' b b'
IR IR
DR DR
HSV-1 (152kb)
BoHV-1 (137kb)
EHV-2 (192kb)
A
B
C
Figura 17.2. Organizao do genoma de alguns
herpesvrus. A) Genoma do tipo A: herpesvrus eqino
tipo 2 (EHV-2); B) Genoma do tipo D: herpesvrus
bovino tipo 1 (BoHV-1); C) Genoma do tipo E:
herpesvrus humano tipo 1 (HSV-1). UL) regio nica
longa; US) regio nica curta; IR) repeties invertidas;
DR) repeties diretas.
Herpesviridae 441
dos gnglios sensoriais e autonmicos, mas pa-
rece ocorrer tambm em menor escala em outros
tipos celulares. O estabelecimento da infeco
latente caracterizado pela interrupo do ciclo
replicativo logo aps a penetrao do genoma no
ncleo celular. Com isso, no h expresso gnica
signicativa, no ocorrendo produo de prote-
nas virais, replicao do genoma ou produo
de prognie viral. Assim, o genoma viral perma-
nece inativo no ncleo dos neurnios pelo resto
da vida do animal. Em determinadas situaes,
geralmente associadas com estresse, o genoma
ativado e a expresso gnica reiniciada, resul-
tando na retomada da infeco produtiva e na
produo de prognie viral. O estabelecimento
e reativao da latncia representam pontos-cha-
ve na biologia dos herpesvrus, pois permitem a
permanncia indenida do vrus nos hospedei-
ros, acompanhada de episdios espordicos de
reativao e excreo viral.
O ciclo replicativo se inicia pela interao
dos vrions com receptores da membrana plas-
mtica das clulas-alvo. Os alfaherpesvrus uti-
lizam molculas de glicosaminoglicanos, como o
sulfato de heparina, como receptores celulares. A
interao dos vrions com as molculas de sulfato
de heparina mediada pela glicoprotena C (gC).
Entretanto, foi observado que clulas que no ex-
pressam esses receptores podem ser infectadas
pelo HSV-1, porm, com menor ecincia. Isso
indica que outras molculas tambm podem de-
sempenhar o papel de receptores para a adsoro
desses vrions. J foi demonstrado, por exemplo,
que em vrus mutantes que no expressam a gC,
a gD assume o papel de ligao aos receptores.
A adsoro seguida da ligao de outra
protena viral provavelmente a gD com co-
receptores da membrana plasmtica. Um desses
co-receptores membro da famlia de receptores
do fator de necrose tumoral (TNF), chamado de
HveA, presente principalmente em clulas lin-
fides. Outro co-receptor pertence famlia dos
receptores para poliovrus, do grupo das necti-
nas. A ligao com os co-receptores seguida de
fuso do envelope viral com a membrana plas-
mtica, evento que ocorre na superfcie celular,
A replicao produtiva ltica ocorre nos lo-
cais de penetrao do vrus no hospedeiro (epi-
tlios e tecidos subjacentes) e, provavelmente,
tambm em neurnios, antes do estabelecimento
e durante a reativao da infeco latente. Esse
ciclo caracteriza-se pela expresso de todos os ge-
nes virais, replicao do genoma e produo de
prognie viral infecciosa. A ocorrncia do ciclo
replicativo completo incompatvel com a sobre-
vivncia das clulas hospedeiras.
A infeco latente ocorre em classes espec-
cas de neurnios, principalmente em neurnios
Expresso dos
genes alfa
Expresso dos
genes alfa
bloqueada
Expresso dos
genes beta
Expresso do LAT
Infeco latente
estabelecida
Replicao
do genoma
Expresso dos
genes gamma
Manuteno
da latncia
Infeco
produtiva
Infeco
latente
Infeco primria
Repressores
celulares
Ativadores
celulares
Reativao
Estresse,
Corticides
Prognie
viral
?
?
Figura 17.3. Etapa dos ciclos replicativos produtivo
(ltico) e latente dos alfaherpesvrus. O ciclo replicativo
ltico ocorre em clulas totalmente permissivas
replicao e resulta na produo de prognie infecciosa.
A infeco latente ocorre em clulas semipermissivas,
principalmente neurnios, e resulta na manuteno do
genoma viral sem expresso gnica ou produo de
prognie viral. Em determinadas situaes, a infeco
latente pode ser reativada e o vrus reassume a replicao
produtiva.
442 Captulo 17
sem a necessidade de internalizao por endoci-
tose e acidicao dos endossomos. A fuso entre
o envelope e a membrana plasmtica ocorre com
a participao da gD, do heterodmero gH-gL e
da gB. A transio entre o processo de adsoro e
a penetrao muito rpida e ocorre em poucos
minutos.
Aps a fuso, algumas protenas do tegu-
mento se dissociam do nucleocapsdeo e perma-
necem no citoplasma, enquanto outras so trans-
portadas at o ncleo. O nucleocapsdeo, ainda
associado com algumas protenas do tegumen-
to, liga-se aos microtbulos celulares e , assim,
transportado at as proximidades dos poros nu-
cleares. Os nucleocapsdeos, ento, associam-se
aos complexos dos poros nucleares, ocorrendo
a sua desintegrao e a liberao do genoma no
interior do ncleo. Os restos do capsdeo cam
retidos no lado citoplasmtico da membrana nu-
clear.
Acredita-se que o genoma circularize ime-
diatamente aps a penetrao no ncleo. Assim,
os mecanismos de transcrio e replicao do
DNA viral ocorreriam em genomas circulariza-
dos. A transcrio do genoma viral se inicia logo
aps a sua penetrao no ncleo. O DNA viral
transcrito pela RNA polimerase II celular com
o auxlio de fatores celulares e virais. A sntese
de protenas virais regulada de forma precisa,
pois a expresso de genes virais ocorre de forma
coordenada e em ordem seqencial, em forma de
uma reao em cascata. Vrios produtos dos ge-
nes virais so enzimas e protenas que se ligam
ao DNA, envolvidas no processo de replicao
do genoma.
De acordo com a cintica de expresso e
com a funo de seus produtos, os genes virais
so divididos em trs grupos principais: genes
alfa (immediate early ou de transcrio imediata),
beta (early ou iniciais) e gama (late ou tardios). Os
genes alfa e beta so expressos abundantemente
antes da replicao do genoma, enquanto os ge-
nes gama somente so expressos em quantidades
signicativas aps a replicao do DNA viral.
Os primeiros genes a serem transcritos so
os genes alfa, e a sua transcrio inicia imediata-
mente aps a liberao do genoma no interior do
ncleo. A transcrio desses genes requer a pre-
sena de uma protena que componente do te-
gumento viral, chamada VP16 ou TIF. Essa pro-
tena se conjuga com um fator celular e estimula
a transcrio de quatro genes, cujos produtos so
as protenas ICPO, ICP4, ICP22, ICP27 e ICP47.
Essas protenas tm, como principal funo, esti-
mular a transcrio dos genes beta.
Os produtos dos genes beta, por sua vez,
so, principalmente, enzimas e protenas acess-
rias envolvidas no metabolismo de nucleotdeos
e na replicao do genoma, incluindo a polime-
rase viral. Dentre esses produtos incluem-se as
enzimas timidina quinase (TK) e ribonucleotdeo
redutase (RR), que catalisam a sntese de nu-
cleotdeos trifosfato. As protenas beta tambm
incluem protenas de ligao ao DNA, helicase
(UL9) e a prpria DNA polimerase viral. Assim,
a expresso dos genes beta seguida de intensa
sntese de nucleotdeos e replicao do genoma.
Aps a replicao do genoma, o terceiro gru-
po de genes expresso (genes tardios ou gama).
Os produtos desses genes se constituem princi-
palmente em protenas estruturais do ncleo,
capsdeo e envelope, que so, ento, utilizadas na
construo das partculas vricas. De acordo com
a cintica de expresso e funo, os genes tardios
podem ser divididos em gama-1 e gama-2.
Vrias protenas virais so modicadas aps
a sua sntese, modicaes que incluem clivagem
proteoltica, fosforilao e glicosilao, entre ou-
tras. A maioria dessas modicaes ocorre por
ao de enzimas celulares, embora algumas en-
zimas virais possam tambm estar envolvidas
nesses processos.
Simultaneamente expresso das protenas
virais, ocorre a inibio da transcrio de genes,
do processamento e transporte de mRNAs e
sntese de protenas da clula hospedeira. Esses
eventos so induzidos por protenas virais e tm
como objetivo subverter a maquinaria celular
para o processamento e transporte de mRNA vi-
rais e sntese de protenas virais.
A maioria das protenas dos genes beta im-
portada para o ncleo celular, onde se conjugam
com o genoma, formando os stios pr-replicati-
vos. Esses stios so os locais de iniciao da sn-
Herpesviridae 443
tese de DNA. Enquanto a sntese ocorre, as mo-
lculas de DNA recm-produzidas se acumulam
em compartimentos replicativos, localizados em
determinadas reas do ncleo, juntamente com
os complexos de replicao. A sntese de DNA,
a partir da molcula genmica parental, origina
concatmeros, que so macromolculas lineares
contendo vrias unidades genmicas unidas en-
tre si pelas extremidades, as quais se acumulam
no ncleo da clula hospedeira.
A replicao do genoma viral depende de,
pelo menos, sete protenas codicadas pelo v-
rus, mas provavelmente envolve tambm a par-
ticipao de fatores celulares, como a DNA poli-
merase-primase, DNA ligase e topoisomerase II.
Trs origens de replicao foram identicadas no
genoma do HSV-1, sendo uma delas situada na
regio repetida invertida S (e, portanto, em duas
cpias) e a outra localizada no componente L. Os
primeiros passos da replicao do genoma envol-
vem a ligao e alterao das seqncias de ori-
gem da replicao pela protena UL9. A protena
ICP8 liga-se, ento, UL9 ou a regies de DNA
de ta simples, e a UL9 inicia a sua atividade de
helicase, separando as tas do DNA viral. O com-
plexo helicase-primase, que contm as protenas
virais UL5, UL8 e UL52, , ento, recrutado para
o local onde se inicia a polimerizao das cadeias-
lhas pela polimerase viral. A DNA polimerase
do HSV-1 um heterodmero, composto pela
protena UL30 associada com a protena UL42.
A subunidade UL30 possui o stio cataltico res-
ponsvel pela polimerizao das novas cadeias e
tambm possui atividade de proofreading (corre-
o dos erros). A protena UL42 necessria para
a processividade da UL30.
Com base em informaes disponveis, foi
proposto um modelo para a replicao do geno-
ma do HSV-1 (Figura 17.4). Esse modelo prope
o incio da replicao em uma molcula de DNA
circularizada, seguida de replicao bidirecional
que, posteriormente, alterada para um mecanis-
mo de crculo rolante. O resultado da replicao
a produo de molculas longas, formadas por
cpias genmicas mltiplas. Esses concatmeros
so posteriormente clivados, originando as mol-
culas genmicas individuais.
A montagem dos nucleocapsdeos ocorre
em vrias etapas. Aps a sntese das protenas
tardias que participam da estrutura das partcu-
ICP8
UL9
UL9
Complexo
polimerase
Helicase/
primase
5'
5'
3'
Replicao
tipo Theta
Iniciao
Replicao
por crculo
rolante
1
2
3
4
5
Figura 17.4. Modelo para a replicao do genoma dos
alfaherpesvrus. O DNA genmico circularizado logo
aps a penetrao no ncleo (1). A UL9 se liga na origem
de replicao, inicia a separao das cadeias e recruta a
US8 (protena de ligaoemDNAde fita simples) para se
ligar nas cadeias separadas (2). A US9 e US8 recrutam as
cinco protenas restantes, formando os complexos de
iniciao (3), que iniciam a replicao bidirecional do
tipo Theta (4). Areplicao muda para o modo de crculo
rolante por mecanismos desconhecidos (5). A replicao
por crculo rolante produz multmeros do genoma que
so, posteriormente, clivados emunidades genmicas.
Fonte: adaptada de Roizman e Knipe (2001).
444 Captulo 17
las, inicia-se o processo da montagem ainda no
citoplasma. Essas protenas pr-associadas entre
si so transportadas para o ncleo, onde a mon-
tagem do capsdeo nalizada pela incluso do
DNA genmico no seu interior. A introduo do
genoma viral nos capsdeos pr-formados envol-
ve um processo no qual grandes concatmeros de
DNA so clivados em monmeros e empacota-
dos nos capsdeos pr-formados.
Aps o encapsidamento do genoma, os nu-
cleocapsdeos podem realizar o brotamento atra-
vs da membrana nuclear interna. Esse processo
mediado pela interao entre protenas do tegu-
mento, adquiridas durante o brotamento e prote-
nas do capsdeo; e entre protenas do tegumento
e glicoprotenas virais presentes na membrana
nuclear interna.
O mecanismo pelo qual os nucleocapsde-
os saem do espao entre as membranas nuclea-
res interna e externa ainda no claro, existindo
dois modelos possveis. O primeiro sugere que os
nucleocapsdeos adquirem o envelope ao brota-
rem atravs da membrana nuclear interna. Este
envelope seria perdido quando os vrions fusio-
nam com a membrana nuclear externa, liberando
os nucleocapsdeos desprovidos de envelope no
citoplasma. O outro modelo sugere que nucleo-
capsdeos no citoplasma so diretamente enca-
minhados ao complexo de Golgi, onde adquirem
o envelope por brotamento. Vesculas derivadas
do aparelho de Golgi, contendo vrions envelo-
pados, seriam, ento, transportadas at a super-
fcie celular, onde os vrions seriam liberados por
exocitose. Estudos recentes demonstraram que
a aquisio do envelope por vrions do SuHV-1
segue o primeiro modelo. Foi demonstrado que
nucleocapsdeos do SuHV-1 recebem o tegumen-
to no citoplasma da clula infectada e so reen-
velopados no complexo de Golgi. Aps a adio
do envelope, os vrions so liberados das clulas
infectadas por fuso de vacolos, contendo os v-
rions com a membrana plasmtica, ou pela fuso
entre clulas infectadas e no-infectadas, o que
ocorre provavelmente atravs de junes celula-
res. O complexo formado entre as glicoprotenas
I e E necessrio para esse tipo de dissemina-
o viral, provavelmente porque o complexo gI-
gE pode se ligar s junes celulares e mediar o
movimento de vrions ao longo dessas junes.
Quando os herpesvrus se multiplicam em clulas
completamente permissivas, o ciclo replicativo
completado em aproximadamente 18-20 horas. O
ciclo replicativo produtivo dos alfaherpesvrus
est ilustrado na Figura 17.5.
As clulas infectadas com os alfaherpesvrus
no sobrevivem infeco, por causa de severas
alteraes estruturais e bioqumicas que ocorrem
em conseqncia da replicao viral. Entre as al-
teraes estruturais, podem-se citar as alteraes
na cromatina celular, duplicao e dobramento
de membranas celulares, fragmentao e disper-
so das membranas do complexo de Golgi, inser-
o de protenas virais em membranas celulares,
rearranjo da rede de microtbulos e formao de
corpsculos de incluso intranucleares. Entre as
alteraes bioqumicas celulares, incluem-se o
bloqueio da sntese de protenas celulares, degra-
dao de mRNAs celulares, bloqueio da transcri-
o e reduo da sntese de RNA celular, inibio
do processamento de mRNA e degradao seleti-
va de protenas celulares. Ainda, os herpesvrus
podem interferir com o ciclo de diviso celular.
Foi demonstrado que protenas codicadas pelo
HSV-1 e tambm pelo BoHV-1 se ligam a prote-
nas envolvidas no ciclo de diviso celular, como
a ciclina D3. Neste caso especco, os produtos
virais acabam por interferir com o processo de
morte celular programada, ou apoptose, manten-
do a clula viva durante a infeco.
Os alfaherpesvrus replicam em uma varie-
dade de clulas in vitro, incluindo clulas prim-
rias e linhagens celulares da espcie homloga. A
replicao caracterizada por disseminao r-
pida nos cultivos e destruio dos tapetes celula-
res, em razo da lise celular induzida pelo vrus.
Alm de replicar em clulas da espcie homlo-
ga, os diferentes herpesvrus podem ser adapta-
dos para replicar em clulas de outras espcies
animais. Os cultivos celulares utilizados para o
isolamento e multiplicao dos diferentes her-
pesvrus sero abordados nas respectivas sees.
Herpesviridae 445
5.2 Infeco latente
O estabelecimento de infeces latentes
um dos aspectos mais marcantes e provavelmen-
te uma propriedade de todos os herpesvrus.
Essa propriedade est relacionada com a capaci-
dade desses vrus se adaptarem aos hospedeiros
de forma a mant-los vivos e, periodicamente,
utiliz-los para se disseminar para novos hospe-
deiros. Na infeco latente, o genoma viral per-
manece inativo em clulas neuronais do hospe-
deiro, no resultando em produo de prognie
viral infecciosa. A expresso gnica ausente ou
muito restrita. Obviamente, a ausncia de repli-
cao viral resulta na absoluta ausncia de sinais
clnicos, caracterizando uma infeco totalmente
subclnica e de difcil deteco.
A infeco latente pelos alfaherpesvrus es-
tabelecida principalmente em neurnios dos gn-
glios sensoriais e autonmicos, para onde os nu-
Ncleo
Citoplasma
Protenas alfa Protenas beta Protenas gama
mRNA-
mRNA-
mRNA-
1
2
3
4
5
6
7
8
9
11
10
12
13
14
15
16
Figura 17.5. Ciclo replicativo dos alfaherpesvrus. Aps a ligao aos receptores, a penetrao ocorre por fuso do
envelope com a membrana plasmtica na superfcie celular (1). Os nucleocapsdeos so transportados ao longo dos
microtbulos (2) at os poros nucleares, onde ocorre o desnudamento e a liberao do genoma no interior do ncleo
(3). Segue-se a transcrio dos genes alfa (4) que so traduzidos nas protenas alfa (5), cuja funo principal ativar a
transcrio dos genes beta (6). As protenas beta (7) esto envolvidas na sntese de nucleotdeos trifosfato e na
replicao do genoma (8). Os genes gama somente so transcritos aps a replicao do DNA (9) e codificam
principalmente protenas estruturais (10). Parte dessas protenas penetra noncleoe forma pr-capsdeos, nos quais o
genoma introduzido (11). Os nucleocapsdeos adquirem o envelope por brotamento atravs da membrana nuclear
interna (12). Podemperder o envelope ao atravessar a membrana nuclear externa e seremreenvelopados no aparelho
de Golgi (13), ou so enviados em vesculas at o Golgi (14). Os vrions envelopados so transportados em vesculas
dotrans-Golgi at a superfciecelular (15), ondesoliberados por exocitose (16).
446 Captulo 17
cleocapsdeos so transportados pelos axnios ou
dendritos aps a replicao produtiva nas muco-
sas. Este transporte ocorre pelo uxo axoplsmi-
co retrgrado, atravs do qual os nucleocapsde-
os atingem os corpos neuronais (Figura 17.6). Em
determinadas classes de neurnios, a expresso
dos genes alfa suprimida precocemente. Como
os produtos desses genes so necessrios para as
etapas seguintes de expresso gnica e replicao
do genoma, o ciclo interrompido (ver Figura
17.3). Como resultado, o genoma viral persiste no
ncleo desses neurnios na forma epissomal pelo
resto da vida do animal.
A infeco latente caracterizada pela pre-
sena do genoma sem expresso gnica signi-
cativa, replicao do genoma ou produo de
prognie viral. Animais examinados durante a
infeco latente no apresentam indcios de in-
feco, com exceo da presena de anticorpos
produzidos em resposta infeco aguda. Como
todos os animais infectados cam portadores, a
deteco de anticorpos contra os herpesvrus in-
dica a condio de portador de infeco latente.
Os principais stios de latncia so os gn-
glios sensoriais e autonmicos, dependendo do
local de replicao primria do vrus. Assim,
infeces respiratrias ou orais resultam em co-
lonizao dos neurnios sensoriais do gnglio
trigmeo com o DNA viral. Os gnglios sacrais
so os stios de predileo para a infeco latente
que se segue s infeces genitais. Alm desses,
alguns locais do sistema nervoso central (SNC) e
perifrico, alm de tonsilas e linfcitos circulan-
tes, dentre outros, podem abrigar o DNA viral la-
tente. A importncia desses stios adicionais para
a manuteno e reativao da latncia ainda so
desconhecidos.
Durante a maior parte do tempo, o geno-
ma permanece inativo nos locais de latncia, no
ocorrendo produo e excreo de vrus infeccio-
so. No entanto, em situaes geralmente associa-
das com estresse, a infeco latente reativada.
A reativao se caracteriza pela retomada da re-
plicao ltica nos neurnios hospedeiros e pro-
duo de prognie viral. Os vrions produzidos
so transportados pelas mesmas vias nervosas de
volta aos stios de infeco primria, onde o vrus
replica produtivamente e excretado (ver Figura
17.6). A reativao da infeco , ocasionalmente,
acompanhada de sinais clnicos e leses nos lo-
cais de replicao, que correspondem aos stios
de infeco primria. A ocorrncia de sinais cl-
Figura 17.6. Patogenia da infeco latente dos alfaherpesvrus. Aps a replicao primria, os nucleocapsdeos so
transportados pelo fluxo axoplsmico retrgrado at os corpos neuronais localizados nos gnglios sensoriais e
autonmicos. Nestes neurnios, o vrus replica produtivamente ou estabelece infeco latente. Sob certas condies,
a infeco latente pode ser reativada e resulta em replicao produtiva. Os vrions produzidos so transportados de
volta aos locais de replicao primria, onde replicame so excretados. Oacesso dos vrions ao encfalo pode ocorrer
tantodurantea infecoagudaquantoaps a reativao.
Transporte retrgrado
Transporte antergrado
Latncia
Reativao
Mucosa nasal
Gnglio trigmeo
Crebro
Infeco
Excreo
Herpesviridae 447
nicos associada com a reativao denominada
recrudescncia e, geralmente, caracterizada por
sinais mais brandos do que aqueles resultantes
da infeco aguda. A recrudescncia clnica, no
entanto, parece no ser uma ocorrncia freqente
nas infeces por todos os herpesvrus. Na maio-
ria das vezes, a reativao no acompanhada de
manifestaes clnicas evidentes.
Os mecanismos envolvidos no estabeleci-
mento, manuteno e reativao das infeces
latentes pelos alfaherpesvrus tm sido exausti-
vamente estudados, porm muitos detalhes mo-
leculares so ainda desconhecidos. O estabeleci-
mento de latncia depende da supresso precoce
da expresso dos genes alfa, sem a qual prosse-
gue o ciclo ltico. Durante a latncia, um nico
transcrito viral detectado nos neurnios infecta-
dos, denominado transcrito relacionado latn-
cia (LAT ou LTR). Aparentemente, esse transcrito
no traduzido em protena, e a sua funo na
manuteno e reativao da infeco latente per-
manece deconhecida. Sabe-se que a reativao
experimental da infeco pela administrao de
corticosterides acompanhada da reduo tran-
sitria da transcrio do LAT-LTR, o que sugere
a participao desse transcrito na manuteno e
reativao da latncia. De qualquer forma, acre-
dita-se que o LAT-LTR seja um componente im-
portante, porm no o nico, do mecanismo de
latncia dos alfaherpesvrus. Interaes adicio-
nais entre produtos virais e os neurnios, assim
como a participao de mecanismos imunolgi-
cos, tm sido sugeridos para explicar a infeco
latente.
importante ressaltar que animais latente-
mente infectados, que podem ser identicados
por testes sorolgicos, so considerados fontes
potenciais de infeco, sendo muito importantes
do ponto de vista epidemiolgico, pois atuam
como disseminadores do vrus.
6 Herpesvrus de interesse
veterinrio
A seguir, sero abordadas as principais do-
enas animais causadas por herpesvrus, dando
nfase quelas que afetam animais de produo
e de companhia. As doenas sero apresentadas
por espcie animal, seguindo-se a ordem de clas-
sicao taxonmica das subfamlias.
6.1 Herpesvrus de bovinos
Dentre os herpesvrus de bovinos, destacam-
se os vrus pertencentes subfamlia Alphaherpes-
virinae. O herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1)
tem sido associado com doena respiratria, ge-
nital e abortos; o BoHV-2 o agente da mamili-
te herptica e o BoHV-5 o agente da encefalite
herptica (Figura 17.7). A espcie bovina tam-
bm hospedeira natural ou pode ser infectada
naturalmente por herpesvrus que pertencem
subfamlia Gammaherpesvirinae: o BoHV-4, o her-
pesvrus ovino tipo 2 (OvHV-2) e o herpesvrus
alcelano tipo 1 (AlHV-1). O OvHV-2 e AlHV-1
so os agentes etiolgicos da febre catarral malig-
na (MCF). O AlHV-1 est associado com a forma
africana da enfermidade, que acomete bovinos,
cervdeos e outros ruminantes no continente afri-
cano, enquanto o OvHV-2 o agente da MCF
associada com ovinos, doena que acomete bo-
vinos e outros ruminantes e possui distribuio
mundial.
Meningo-encefalite
BoHV-5
Abortos
BoHV-1 BoHV-2
Mamilite
BoHV-1
Doena genital
(IPV/IBP)
BoHV-1
Doena
respiratria (IBR)
Figura 17.7 Alfaherpesvrus de bovinos e enfermidades
associadas.
O BoHV-1 um alfaherpesvrus e perten-
ce ao gnero Varicellovirus. O vrus possui um
genoma de aproximadamente 137 kbp, cuja se-
qncia completa de nucleotdeos j foi deter-
448 Captulo 17
minada. A organizao do genoma do BoHV-1
que pertence ao grupo D est apresentada na
Figura 17.2. O BoHV-1 tem sido associado com
diversas manifestaes clnicas em bovinos, que
incluem a rinotraquete infecciosa (IBR), vulvo-
vaginite pustular/balanopostite pustular infec-
ciosa (IPV/IPB), abortos e infeco generalizada
em neonatos (Figura 17.7.). Os isolados de cam-
po do BoHV-1 podem ser subdivididos em trs
diferentes gentipos: 1 (BoHV-1.1), 2a (BoHV-
1.2a) e 2b (BoHV-1.2b). Esta subdiviso em ge-
ntipos foi proposta com base em caractersticas
genmicas e antignicas. Entretanto, associaes
de determinados gentipos com certos quadros
clnicos foram tambm evidenciadas. Assim, o
BoHV-1.1 refere-se s amostras clssicas de vrus
geralmente associadas com a doena respirat-
ria (IBR). Esse subtipo tem sido freqentemente
isolado de casos de IBR, assim como de abortos,
sendo prevalente em muitos pases na Europa e
nas Amricas. O BoHV-1.2a tem sido associado
a uma ampla variedade de manifestaes clni-
cas, incluindo doena do trato genital (IPV e IPB),
abortos e tambm infeces no trato respiratrio.
O BoHV-1.2a tem prevalncia aparentemente ele-
vada no Brasil, sendo o subtipo mais freqente-
mente isolado nos laboratrios de diagnstico vi-
rolgico. Esse subtipo estava presente na Europa
antes da dcada de 1970 e, aps, tornou-se raro
naquele continente. O BoHV-1.2b, por sua vez,
tem sido associado com doena respiratria leve
e IPV/IPB, mas at o presente no foi associado
com abortos. Por isso, amostras do subtipo 2b so
consideradas menos patognicas do que as amos-
tras do subtipo 1. Os vrus do subtipo BoHV-.2b
tm sido freqentemente isolados na Austrlia e
Europa, mas so incomuns no Brasil, onde, at o
presente, somente uma amostra desse subtipo foi
identicada. Os isolados dos diferentes subtipos
apresentam extensa reatividade sorolgica cruza-
da, que pode ser evidenciada por testes de soro-
neutralizao (SN). Nesses testes, o anti-soro pro-
duzido contra o vrus de um subtipo reage em
ttulos semelhantes ou iguais tanto contra o vrus
homlogo como contra o vrus heterlogo.
O vrus causador da IBR foi isolado pela
primeira vez nos Estados Unidos em 1956. A
partir de ento, inmeros estudos tm revelado
a sua ampla distribuio em praticamente todo
o mundo. Alguns pases europeus, como a Di-
namarca e a Finlndia, conseguiram erradicar a
infeco, tendo obtido essa condio por meio da
identicao e eliminao de animais soroposi-
tivos. Outros pases, como a Alemanha e Sua,
tm implementado programas de erradicao do
BoHV-1 por meio da vacinao compulsria dos
rebanhos, identicao e eliminao gradual dos
animais portadores.
No Brasil, o BoHV-1 foi isolado, pela pri-
meira vez, de um caso de vulvovaginite na Bahia,
em 1978. Vrios relatos posteriores conrmaram
a ampla distribuio do vrus no pas, tanto pelo
isolamento viral quanto pela deteco de anticor-
pos. Dados sobre prevalncia de infeces pelo
BoHV-1 demonstram variaes entre 8 e 82% em
vrias regies do pas. provvel que exista atu-
almente, no Brasil, uma parcela muito pequena
de rebanhos livres do BoHV-1 (ou BoHV-5, como
ser comentado a seguir). Estima-se, ainda, que o
nvel mdio de prevalncia da infeco nos reba-
nhos situe-se entre 30 a 70%. Para uma populao
bovina de aproximadamente 190 milhes de ca-
beas, pode-se estimar uma populao potencial-
mente infectada de 57 a 133 milhes de cabeas.
As infeces pelo BoHV-1 podem ser trans-
mitidas pelo contato direto e indireto entre ani-
mais, porque o vrus disseminado atravs de
secrees respiratrias, oculares e genitais, sendo
excretado em grandes quantidades por animais
durante a infeco aguda. Nessa fase, os animais
excretam o vrus por at 15-16 dias em ttulos de
at 10
7
TCID
50
/ml. Em casos de reativao da in-
feco latente, a excreo de vrus ocorre por um
perodo menor (2 a 7 dias, geralmente) e em me-
nores quantidades. No obstante, a excreo viral
que ocorre durante a reativao representa uma
importante forma de transmisso e perpetuao
do vrus na natureza. Por isso, os animais latente-
Herpesviridae 449
mente infectados so fontes potenciais de infeco
para outros animais. As causas dos episdios de
reativao permanecem parcialmente desconhe-
cidas. No entanto, alguns fatores desencadeantes
so notrios, como o estresse (p. ex.: induzido
por transporte, desmame, descorne, parto, carn-
cias nutricionais graves ou excesso de trabalho)
e aplicao de drogas imunossupressoras (p. ex.:
corticosterides).
O vrus pode, ainda, estar presente no smen
de touros infectados, podendo ser disseminado
tanto por monta natural como por inseminao
articial. A excreo pode ocorrer durante a in-
feco aguda ou nos episdios de reativao. A
dose infecciosa mnima necessria para infectar
uma fmea foi calculada em torno 10
2
TCID
50
. O
smen contaminado durante a ejaculao, e o
vrus no excretado de forma uniforme ou con-
tnua por machos soropositivos. Logo, nem to-
das as amostras de smen de um touro portador
tero vrus sucientes para infectar uma fmea.
Entretanto, todos os touros soropositivos devem
ser considerados potenciais transmissores da in-
feco a fmeas susceptveis. Alm do smen, o
vrus tem sido eventualmente detectado no lei-
te de vacas, chamando a ateno para mais este
possvel veculo de transmisso.
Apesar de os bovinos serem os principais
reservatrios do BoHV-1, inquritos sorolgicos
tm demonstrado a presena de anticorpos em di-
versas espcies de ruminantes silvestres, ovinos
e caprinos. Alm disso, ovinos e caprinos desen-
volvem infeces agudas e latentes e so poten-
cialmente capazes de excretar vrus quando sub-
metidos imunossupresso pela administrao
de corticosterides. Alm das espcies domsti-
cas citadas, bubalinos tambm so considerados
como potenciais reservatrios do BoHV-1. Entre-
tanto, a sua importncia na epidemiologia dos
herpesvrus bovinos permanece desconhecida e
merece ser investigada.
e patologia
Aps a penetrao na mucosa nasofarngea
ou genital, o vrus realiza uma replicao pri-
mria nas clulas epiteliais locais, provocando
lise celular e levando ao aparecimento dos pri-
meiros sinais clnicos da infeco (congesto lo-
cal, presena de secrees, leses vesiculares ou
erosivas). Durante essa fase, altos ttulos virais
so produzidos e excretados nas secrees, o que
favorece a transmisso do vrus para outros ani-
mais.
Aps a replicao inicial, o vrus invade as
terminaes nervosas de neurnios sensoriais e
transportado atravs de uxo axnico retrgrado
at os corpos neuronais nos gnglios regionais.
Nesses locais, o vrus estabelece infeco laten-
te, durante a qual no h expresso de antgenos
virais ou replicao. Existem tambm evidncias
de que, aps a infeco primria, o vrus possa
realizar uma viremia, provavelmente associada
a moncitos e linfcitos, atravs da qual o vrus
poderia disseminar-se no organismo animal e
causar infeces fetais e abortos.
Eventualmente, sob a inuncia de fatores
externos, como estresse ou tratamento com glico-
corticides, pode ocorrer a reativao da infeco
latente, ocasio em que ocorre a produo de par-
tculas virais infecciosas nas clulas nervosas e o
transporte dessas partculas de volta ao stio de
infeco primria. Nesses stios, o vrus replica e
excretado em secrees, podendo ser transmiti-
do para outros animais. A reativao da infeco
latente pode, ocasionalmente, ser acompanhada
de sinais clnicos geralmente moderados.
Rinotraquete infecciosa bovina
A infeco respiratria pode apresentar-se
de forma subclnica, leve ou severa, podendo
resultar em morbidade de at 100%, com mor-
talidade geralmente ausente ou baixa (<5%). As
manifestaes clnicas incluem febre, depresso,
anorexia, dispnia, taquipnia, tosse e descargas
nasais serosas, que podem tornar-se mucopuru-
lentas com a progresso da enfermidade e a ocor-
rncia de infeces bacterianas secundrias. A
inamao local pode levar ao bloqueio das vias
respiratrias superiores. Pela diculdade respi-
ratria, os animais tendem a forar a respirao
pela boca, levando salivao abundante. A mu-
cosa nasal pode se apresentar hipermica e com
leses vesiculares a erosivas. As eroses podem
ser transitoriamente recobertas com membranas
brinosas. Em animais em lactao, ocorre que-
450 Captulo 17
da na produo de leite. Em machos, pode ha-
ver prejuzos temporrios qualidade do smen,
como anomalias morfolgicas e funcionais dos
espermatozides.
O curso da enfermidade rpido, e a recu-
perao clnica ocorre em at dez dias, caso no
ocorram infeces bacterianas secundrias graves
ou outras infeces virais associadas. Os animais
afetados podem, ainda, apresentar conjuntivite
uni ou bilateral que, em algumas circunstncias,
pode ser a nica manifestao clnica da infec-
o.
Surtos de IBR so mais freqentemente ob-
servados em animais jovens e esto geralmente
associados com situaes de estresse e aglomera-
o de animais, incluindo eventos de transporte
e connamento. Outros agentes virais e bacteria-
nos podem estar associados com o BoHV-1 nesses
episdios de doena respiratria, genericamente
chamados de complexo respiratrio de bovi-
nos. Os agentes virais freqentemente associa-
dos so o vrus da diarria viral bovina (BVDV),
vrus da parainuenza 3 (bPI-3V) e o vrus respi-
ratrio sincicial (BRSV), alm de pasteurelas.
A infeco de fmeas soronegativas gestan-
tes, com amostras virais de alta virulncia (BoHV-
1.1 ou 1.2a), pode resultar em abortos, que ocor-
rem principalmente entre o quinto e oitavo ms
da gestao. Os abortos ocorrem geralmente aps
um perodo de incubao de trs a seis semanas,
durante o qual o vrus alcana o feto durante a
viremia. At 25% das fmeas em gestao de um
rebanho podem abortar durante um surto, cons-
tituindo-se em uma importante causa de perdas
econmicas nas criaes de bovinos.
Vulvovaginite pustular/balanopostite
pustular
A maioria das infeces genitais por herpes-
vrus em bovinos esto associadas com amostras
de BoHV-1.2b. A IPV aguda se desenvolve aps
a infeco do trato genital da fmea durante a
cobertura ou inseminao articial. Pode, ainda,
ocorrer por contato da mucosa com secrees con-
taminadas com o vrus. Aps um curto perodo de
incubao (1 a 3 dias), a vulva se apresenta hipe-
rmica, edemaciada e com vesculas distribudas
na mucosa. As vesculas evoluem para pstulas,
que podem coalescer e formar lceras. As lceras
freqentemente cam recobertas com material
brinoso, de colorao branco-amarelada. Febre,
anorexia e depresso podem estar presentes e po-
dem ser agravadas por infeces bacterianas se-
cundrias. Os animais apresentam dor ao urinar,
apresentando a cauda erguida e freqentemente
exionada lateralmente. As leses progridem at
o 7-8 dia ps-infeco, regredindo rapidamente
a partir de ento.
Em reprodutores machos infectados com o
BoHV-1, as leses desenvolvidas so semelhan-
tes s descritas nas fmeas. Aps um perodo de
um a trs dias de incubao, a mucosa do pnis
e/ou prepcio apresenta-se hipermica e com
pequenos pontos amarelados, que crescem e,
eventualmente, coalescem, formando vesculas
ou pstulas que, posteriormente, rompem-se,
formando eroses ou ulceraes. Essas leses -
cam recobertas por material brinoso que pode
recobrir extensas reas da mucosa. Em casos gra-
ves, hemorragias podem ocorrer na mucosa pe-
niana. Durante a fase aguda, o animal se recusa
a montar, freqentemente exterioriza o pnis e
apresenta corrimento prepucial. A enfermidade
geralmente regride rapidamente aps os dias 7-
8 ps-infeco e, no havendo complicaes, o
animal apresenta cura clnica ao redor dos dias
10-14 pi. Em infeces naturais, o quadro clnico
pode ser mais brando, com evoluo mais rpida
e sem complicaes clnicas. Formas subclnicas
da infeco genital tambm podem ocorrer, o que
diculta o diagnstico e o controle da infeco.
6.1.1.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo da infeco por
herpesvrus bovinos feito com base no histrico
da propriedade, sinais clnicos e leses observa-
das ao exame clnico. A suspeita clnico-patolgi-
ca, no entanto, deve ser conrmada por exames
laboratoriais. Durante infeces agudas, devem
ser realizados testes para a deteco de vrus, an-
tgenos ou DNA viral em amostras clnicas. As
amostras geralmente utilizadas para a deteco
de vrus so: suabes nasais e oculares, vaginais,
de prepcio ou coletadas das reas com leses
Herpesviridae 451
evidentes; tecidos (traquia, pulmes) e fetos
inteiros ou tecidos de fetos abortados (pulmes,
fgado e rins). As amostras devem ser remetidas
em gelo com a maior brevidade possvel. No
recomendado congelar as amostras a -20C, pois
esta temperatura pode inativar o vrus.
Diagnstico virolgico
Um diagnstico rpido pode ser realizado
por imunouorescncia (IFA) com anticorpos es-
peccos, em cortes ou impresses de tecidos ou,
ainda, em esfregaos de secrees. Nesses casos,
o resultado pode ser obtido dentro de uma a duas
horas. Usualmente, alm da IFA, suspenses de
tecidos ou secrees so preparadas e inocula-
das em cultivos celulares, visando ao isolamen-
to do agente. Este o procedimento padro de
diagnstico virolgico para o BoHV-1. Tanto o
BoHV-1 como o BoHV-5 produzem um efeito ci-
toptico (ECP) bastante evidente em vrios tipos
de clulas, incluindo cultivos primrios e linha-
gens estabelecidas. Via de regra, os cultivos pri-
mrios so mais sensveis para o isolamento viral
do que linhagens contnuas. Entretanto, em razo
de maior praticidade, clulas de linhagem (p. ex.:
clulas da linhagem de rim de bovino, MDBK)
so as mais utilizadas para o isolamento viral. O
BoHV-1 e BoHV-5 geralmente causam ECP vi-
svel entre 24 e 72 horas aps a inoculao. Em
alguns casos, quando a concentrao de vrus no
material original muito baixa, pode ser necess-
rio fazer mais de uma passagem do material ino-
culado. Raramente so necessrias mais do que
duas ou trs passagens. Ao nal da terceira pas-
sagem, caso no haja evidncia de ECP, o mate-
rial considerado negativo para vrus. Se houver
ECP compatvel com herpesvrus, a identidade
do agente deve ser conrmada por IFA ou imu-
noperoxidase (IPX), utilizando-se conjugados ou
anticorpos monoclonais apropriados.
A deteco de DNA viral em amostras cl-
nicas por PCR tambm pode ser utilizada, apre-
sentando as vantagens de rapidez, especicida-
de e sensibilidade. Esta tcnica, no entanto, tem
aplicao restrita para o diagnstico de infeces
agudas pelo BoHV-1. Possui aplicao importan-
te na deteco da infeco latente, quando a pre-
sena do DNA viral nos stios de latncia pode
ser o nico e mais seguro indicativo da infeco.
Diagnstico sorolgico
Caso no tenha sido possvel obter amostras
de tecidos ou secrees na fase aguda, a infeco
pode ser diagnosticada por meio de testes soro-
lgicos. Para tal, devem-se realizar duas coletas
de soro: a primeira durante a fase aguda e a se-
gunda trs a quatro semanas aps. Um aumento
de quatro vezes no ttulo de anticorpos entre as
duas coletas indicativo da infeco e pode con-
rmar o diagnstico. Em fmeas em reproduo,
conveniente fazer uma coleta de soro antes da
gestao e manter a amostra congelada. Se hou-
ver qualquer problema reprodutivo de natureza
infecciosa suspeita, uma nova coleta, aps o sur-
gimento do problema (p. ex.: aborto), deve ser
realizada, sendo ambas as amostras remetidas ao
laboratrio.
Por outro lado, a deteco de anticorpos no
soro, em um teste isolado, indica somente que o
animal teve contato prvio com o agente, seja por
infeco natural (ou seja, potencial portador) ou
por vacinao. Portanto, a deteco de anticorpos
em uma amostra isolada de soro possui signica-
do limitado quando o objetivo diagnosticar um
evento de doena clnica.
As tcnicas sorolgicas mais utilizadas para
o diagnstico sorolgico do BoHV-1 so o ELISA
e a soro-neutralizao (SN). importante ressal-
tar que esses testes no so capazes de diferen-
ciar os anticorpos produzidos contra o BoHV-1
daqueles produzidos contra o BoHV-5.
Alm do seu uso como suporte investi-
gao clnica, esses testes tm sido amplamente
utilizados em inquritos epidemiolgicos, certi-
cao de rebanhos e triagem de reprodutores
destinados coleta e comercializao de smen.
importante enfatizar que a deteco de an-
ticorpos contra o BoHV-1 com exceo de anti-
corpos induzidos por vacinao indicativa da
condio de portador.
A Tabela 17.2 apresenta um resumo das ma-
nifestaes clnicas associadas com os herpesv-
rus bovinos, o material a ser enviado para o labo-
ratrio e as tcnicas de diagnstico utilizadas.
452 Captulo 17
As medidas de controle em relao ao
BoHV-1 devem ser relacionadas com a severida-
de da infeco no rebanho, prticas de manejo e
com a prevalncia da infeco. Em geral, podem-
se adotar duas principais estratgias de controle,
de acordo com a situao epidemiolgica e his-
trico clnico dos rebanhos: controle com ou sem
vacinao. Rebanhos com histrico comprovado
da infeco, com sorologia elevada, sistemas de
recria e connamento que agregam novilhos de
vrias procedncias, alm de propriedades com
alta rotatividade de animais (compra-venda-
transporte etc.) so recomendados a implementar
a vacinao. Nessas situaes, a vacinao cont-
nua e regular pode reduzir a circulao de vrus
e a ocorrncia de doena clnica, reduzindo, con-
seqentemente, as perdas econmicas.
Rebanhos de baixo risco, sem histrico da
enfermidade/infeco ou sem sorologia positiva
devem ser encorajados a implementar medidas
de biossegurana para evitar a introduo da in-
Manifestao Material/diagnstico Agente provvel
Doena respiratria
Diagnstico laboratorial
BoHV - 1.1 Secrees nasais 1. Isolamento
2. Imunofluorescncia (IFA) de clulas
descamativas
3. PCR
Tecidos (pulmo, traquia)
Soro pareado
1. Isolamento
2. Imunoistoqumica (IHC)
3. Histopatologia
Aborto BoHV - 1.1 Tecidos fetais (timo, bao,
pulmo, traquia, crebro),
placenta
1. Isolamento
2. PCR
3. IHC
4. Histopatologia
Soro da vaca Pesquisa de anticorpos
Vulvovaginite BoHV - 1.2 Secrees vaginais, lquido
de vesculas
1. Isolamento
2. PCR
Soro pareado Pesquisa de anticorpos
Balanopostite BoHV - 1.2 Smen, secrees
prepuciais
1. Isolamento
2. PCR
1.Pesquisa de anticorpos (ELISA, SN)
Mamilite BoHV - 2 Lquido folicular, crostas 1. Isolamento
2. Microscopia eletrnica
3. IFA
Soro pareado
Pesquisa de anticorpos
Doena vesicular ou
crostosa generalizada
(PLSD)
Doena
neurolgica
BoHV - 5 Secrees nasais,
crebro
1. Isolamento
2. IFA
3. IHC
4. PCR
5. Histopatologia
Tabela 17.2. Manifestaes clnicas, material a ser coletado e tcnicas utilizadas para o diagnstico das principais
herpesviroses debovinos
Herpesviridae 453
feco. Nesses casos, o simples teste (e descarte)
de qualquer animal a ser anexado ao rebanho,
aliado com testes sorolgicos peridicos e descar-
te de eventuais positivos, geralmente so mto-
dos efetivos. Recomenda-se testar reprodutores a
serem anexados aos rebanhos e, no caso de serem
positivos, deve-se evitar a sua introduo.
Rebanhos com sorologia alta, mas sem his-
trico clnico de doena respiratria ou genital, e
sem problemas reprodutivos (retorno ao cio, in-
fertilidade) podem ser mantidos sem vacinao,
porm com monitoramento contnuo dos par-
metros produtivos e clnicos.
Alm do uso de vacinas, outras medidas de
controle incluem o teste de smen e reproduto-
res, o uso de smen e embries livres de BoHV-1,
bem como o monitoramento sorolgico peridico
dos rebanhos.
Centrais de coleta de smen deveriam de
maneira ideal manter somente animais sorolo-
gicamente negativos para o BHV-1. No entanto, a
freqente identicao de animais geneticamente
superiores como soropositivos exige estratgias
alternativas para que se possa utilizar o potencial
gentico sem o risco de disseminao da infeco.
Nesses casos, o manejo separado desses animais
e o teste de todos os ejaculados para assegurar-se
da ausncia do vrus so as medidas indicadas.
Vacinas convencionais atenuadas ou inati-
vadas tm sido utilizadas para controlar a disse-
minao do vrus e reduzir a severidade da do-
ena clnica e as conseqentes perdas associadas
ao BoHV-1. Vacinas com vrus vivo modicado
tm sido produzidas por passagens mltiplas em
cultivo celular ou por mutagnese induzida para
produzir mutantes temperatura-sensveis (TS).
Vacinas tradicionais, com vrus vivo modica-
do de administrao parenteral, oferecem risco
de infeco fetal e abortamentos. Nesse sentido,
a maior vantagem das vacinas intranasais TS a
induo de imunidade local e mais rpida, apa-
rentemente sem o risco de infeco fetal.
Vacinas inativadas tm sido utilizadas prin-
cipalmente em fmeas prenhes pelo fato de as
vacinas vivas representarem um risco potencial
ao feto. Uma das maiores desvantagens dessas
vacinas a necessidade de se associar adjuvan-
tes para a obteno de uma resposta adequada.
Alm disso, a magnitude e durao da imunida-
de conferida por essas vacinas so inferiores s
vacinas vivas modicadas, o que exige revacina-
es freqentes que aumentam o custo nal.
As vacinas, se adequadamente administra-
das, podem conferir proteo adequada contra a
enfermidade respiratria; sendo questionveis,
entretanto, na proteo contra a doena genital
e abortos. Vacinas com vrus vivo modicado
representam riscos potenciais para fmeas ges-
tantes. Nos casos em que a vacinao recomen-
dada, indica-se a manuteno de um alto nvel
imunitrio atravs de vacinaes peridicas e
sistemticas. As vacinas atuais tambm so in-
capazes de proteger contra o estabelecimento de
latncia com vrus de campo, ou seja, os animais
vacinados podem se tornar latentemente infecta-
dos se forem posteriormente infectados.
Embora utilizadas com relativo sucesso na
preveno da enfermidade clnica e na reduo
da circulao de vrus na populao, as vacinas
tradicionais contra o BoHV-1 tm se mostrado
incompatveis com programas de erradicao.
Com isso, surgiu a necessidade de se elaborar va-
cinas que permitissem a diferenciao de animais
infectados (portadores da infeco latente) dos
animais vacinados. Para suprir essa necessidade,
surgiram as vacinas com marcadores antignicos
as vacinas diferenciais. Essas vacinas baseiam-
se na utilizao de um vrus vivo atenuado, con-
tendo uma ou mais delees em genes que codi-
cam protenas no-essenciais. O uso desse vrus
como vacina, associado a um teste sorolgico
que detecta anticorpos contra a protena deleta-
da, permite a distino sorolgica entre animais
infectados e vacinados (Figura 17.8). Essa estra-
tgia tem se constitudo na base de programas
de controle e erradicao do BoHV-1 em vrios
pases europeus. Vacinas com essas caractersti-
cas esto em fase de desenvolvimento no Brasil e
devem estar disponveis comercialmente em um
futuro prximo.
454 Captulo 17
O herpesvrus bovino tipo 2 (BoHV-2) o
agente da mamilite herptica, doena que possui
repercusso sanitria em gado leiteiro, princi-
palmente em regies de clima temperado. A ma-
milite herptica (BHM) a forma localizada da
enfermidade, caracterizada por leses nos tetos e
no bere. Em alguns casos, a doena se manifesta
de forma generalizada, porm menos freqente,
chamada de pseudo lumpy skin disease (PLSD).
A forma generalizada a PLSD afeta a pele de
todo o corpo, principalmente da cabea, dorso e
perneo.
O BoHV-2 um tpico alfaherpesvrus. Os
vrions possuem envelope e contm uma mol-
cula de DNA de ta dupla como genoma. O ge-
noma apresenta um alto grau de homologia com
o vrus do herpes simplex humano (HHV-1 ou
HSV). O BoHV-2 classicado na subfamlia
Alphaherpesvirus, gnero Simplexvirus, do qual o
HSV-1 o prottipo. Os isolados de campo do
BoHV-2 apresentam uma grande similaridade
gentica e antignica entre si. Alguns aspectos
da organizao e seqncia do genoma tm sido
muito estudados em razo deste vrus comparti-
lhar vrios determinantes antignicos com uma
srie de protenas codicadas pelo HSV-1 e HSV-
2. Pela sua semelhana com esses vrus, especu-
la-se que a provvel origem do BoHV-2 seja de
primatas e no de animais biungulados.
A infeco e doena associadas ao BoHV-2 j
foram descritas em vrios pases e possuem algu-
ma importncia econmica, principalmente em
gado leiteiro. A ocorrncia de mamilite mesmo
de carter transitrio pode resultar em perdas
importantes devido reduo da produo de
leite e ocorrncia de mastites. A enfermidade foi
descrita no Brasil nas dcadas de 1970 e 1980. Um
estudo sorolgico, realizado, em 2007, em duas
importantes bacias leiteiras dos estados do Rio
Grande do Sul e Paran, revelou uma soropre-
valncia prxima a 30% em vacas em produo.
Esses dados conrmam a presena e dissemina-
o do vrus no rebanho brasileiro e corroboram
observaes de campo que revelam a ocorrncia
relativamente freqente de doena clinicamente
compatvel com a causada pelo BoHV-2. A gran-
de maioria dos casos que ocorrem a campo, no
entanto, no diagnosticada em nvel laborato-
rial. A doena tambm j foi descrita em diversos
pases, incluindo o Knia, EUA, Austrlia, Reino
Unido, Itlia e Japo.
As formas generalizada ou localizada da
doena tm sido relatadas em diferentes reas
geogrcas. As infeces generalizadas de pele
Herpesviridae 455
tendem a ocorrer em reas tropicais e subtropi-
cais, onde, possivelmente, espcies de ruminan-
tes selvagens podem ser reservatrios do agente.
Anticorpos neutralizantes contra o BoHV-2 j fo-
ram detectados em elefantes, bfalos e ruminan-
tes selvagens. A BHM mais comum em gado
leiteiro e em gado de corte submetido explora-
o intensiva e sob condio de estresse. Vacas
de primeira cria geralmente desenvolvem leses
mais severas e abundantes, que so registradas
mais comumente durante o outono, quando a
temperatura ambiental diminui. De fato, os rela-
tos da enfermidade tm sido mais freqentes em
regies que apresentam temperaturas baixas. O
trauma fsico pode ser um fator importante na
patogenia das leses pelo BoHV-2 e postula-se
que as freqentes rachaduras da pele das tetas
que ocorrem durante o outono poderiam, ao me-
nos parcialmente, explicar essa ocorrncia esta-
cional das leses. Aliado a esse fator, o edema
siolgico do bere e tetas pode contribuir para
o desenvolvimento das leses.
A doena pode disseminar-se rapidamente
entre os animais durante o outono e inverno. A
forma de transmisso do vrus ainda no foi bem
esclarecida, mas, provavelmente, ocorra por con-
tato direto ou indireto, atravs de uidos vesicu-
lares e crostas contaminadas. A transmisso por
meio de equipamentos de ordenha tem sido in-
vestigada, mas no h resultados conclusivos. A
participao do ordenhador ou de insetos como
vetores para a transmisso mecnica tem sido
considerada, embora no tenha sido conrmada
experimentalmente. Na fase aguda, o vrus pode
ser transmitido aos bezerros durante a mamada,
e estes animais podem desenvolver leses vesi-
culares no focinho ou nas comissuras labiais.
O BoHV-2, provavelmente, estabelea infec-
o latente aps a infeco aguda. Essa hiptese
reforada pelo desenvolvimento freqente de
leses nas tetas imediatamente aps o parto, sem
fontes externas de infeco. As alteraes sio-
lgicas, que ocorrem prximo e durante o parto,
promoveriam o estmulo para reativao natural.
No entanto, a biologia da infeco latente por
esse vrus necessita ser mais bem investigada.
e patologia
A presena de leses na pele (abrases e es-
caricaes) provavelmente facilite a instalao
da infeco. Aps a penetrao, o vrus replica
nas camadas mais profundas da epiderme e na
derme, onde a replicao viral produz clulas gi-
gantes multinucleadas. O perodo de incubao,
aps inoculao experimental, varia entre quatro
e nove dias. Os sinais iniciais se caracterizam por
regies hipermicas circulares ou irregulares, ge-
ralmente com bordas bem denidas, na pele das
tetas e do bere. A hiperemia seguida de edema-
ciao, e essas reas se apresentam salientes sobre
a superfcie da pele. As vesculas nem sempre so
observadas, pois se rompem rapidamente e do
lugar a ulceraes superciais bem denidas de
pele, com rpida formao de crostas. As bordas
das feridas so bem denidas e necrticas.
Em casos naturais, a leso tpica associada
com a mamilite herptica caracteriza-se por uma
depresso central na superfcie dos ndulos, ne-
crose supercial da epiderme e um perodo curto
de evoluo. As leses so encontradas principal-
mente nas tetas, mas podem disseminar-se pelo
bere e regio perineal. Os tetos infectados apre-
sentam-se inicialmente edematosos e doloridos.
A doena autolimitante, e as leses no
complicadas regridem rapidamente. A mastite
a seqela mais comum, particularmente se a ex-
tremidade dos tetos est envolvida. Quando as
leses so difundidas ou complicadas por masti-
te ou, ainda, por infeces secundrias graves, a
cicatrizao retardada.
Em rebanhos afetados em surtos naturais, a
taxa de morbidade pode variar entre 18 e 90% e,
embora a mortalidade seja baixa, as perdas de-
vido doena podem ser graves. As perdas se
devem incidncia maior de mastite, reduo na
produo de leite em at 20%, descarte de algu-
mas vacas por mamite grave, lceras intratveis e
interferncia com os procedimentos de ordenha.
A mamilite clnica pode ser reproduzida
pela inoculao intradrmica ou cutnea do vrus
nas tetas aps escaricao da pele. A doena cli-
456 Captulo 17
nicamente indistinguvel da infeco natural foi
reproduzida pela inoculao do vrus em ovelhas
lactantes. O vrus foi inoculado pela via cutnea
aps a produo de abrases na pele.
A forma cutnea da infeco (PLSD) apre-
senta ocorrncia mais rara e caracterizada por
aparecimento sbito, com a formao de ndulos
rmes, circulares e elevados distribudos na pele.
Os ndulos desenvolvem um aspecto caracters-
tico: superfcie plana com centro ligeiramente
deprimido. Essas leses podem ocorrer em qual-
quer parte do corpo, mas usualmente so mais
prevalentes na cabea, pescoo, dorso e perneo.
Depois de duas semanas, as leses secam e, em
duas a quatro semanas, desprendem-se do corpo
do animal, levando consigo a superfcie da pele e
plos, os quais se reconstituem em poucos dias.
6.1.2.3 Diagnstico
A ocorrncia de mamilite vesicular ou cros-
tosa em vacas leiteiras deve ter a sua etiologia in-
vestigada, pois outros agentes virais podem tam-
bm estar envolvidos. Outras enfermidades de
pele podem se manifestar de forma semelhante
mamilite herptica bovina. Dentre essas, podem
ser citadas: urticria, picadas de inseto, infeces
pelos vrus do Pseudocowpox e Vaccinia. Estas l-
timas so comuns no Brasil, principalmente na
regio Sudeste. Por isso, o diagnstico clnico-
epidemiolgico deve ser, sempre que possvel,
acompanhado de comprovao virolgica e/ou
sorolgica (ver Tabela 17.2).
Para o diagnstico laboratorial da infeco
pelo BoHV-2, so indicadas amostras de ui-
do vesicular, crostas e soro sangneo coletados
durante a fase aguda da doena. As chances de
isolamento so maiores quando o lquido vesicu-
lar coletado antes da ruptura das vesculas. Em
amostras coletadas das vesculas rompidas h al-
gumas horas ou de leses crostosas, dicilmente
se consegue isolar o agente. Por isso, recomenda-
se a coleta de uido de vesculas ntegras, com o
auxlio de seringas com agulhas nas. Alternati-
vamente, o material pode ser coletado com sua-
bes. Para o sucesso do isolamento, a temperatura
de conservao do material (4C) tambm crti-
ca. reas de leses podem ser incisadas e xadas
em formol 10% e enviadas para diagnstico his-
tolgico ou microscopia eletrnica. As margens
das leses podem ser dissecadas, colocadas em
meio essencial mnimo e enviadas para serem
submetidas a exames virolgicos.
O contedo de partculas do vrus pode ser
muito alto no uido de vesculas frescas, o que
caracterstico de viroses vesiculares. O vrus pre-
sente pode ser propagado facilmente em cultivos
celulares primrios, assim como em linhas celula-
res j estabelecidas. Clulas primrias de bovinos
e clulas de linhagem de rim bovino (MDBK) so
indicadas para o isolamento e cultivo do vrus.
Deve-se ressaltar que, quando a suspeita etiol-
gica for BoHV-2, os cultivos devem ser incubados
a 32C, pois o vrus no replica bem a 37C. Nas
clulas de cultivo, o vrus produz ECP, caracteri-
zado pela formao de massas celulares multinu-
cleadas (sinccios) que aumentam em nmero e
dimetro medida que se prolonga a incubao.
Aps poucos dias, os sinccios tornam-se con-
uentes, estendendo-se por todo o tapete celular,
que acaba por se desprender da superfcie dos
frascos. Em estgios avanados, o vrus produz
sinccios grandes, multinucleados, com incluses
eosinoflicas intranucleares. A identicao do
BoHV-2 isolado em cultivos celulares embora
o ECP seja caracterstico e inconfundvel com ou-
tros vrus pode ser feito por SN com soro hipe-
rimune ou por IFA.
O BoHV-2 pode tambm ser identicado por
ME aps colorao negativa. A ME pode ser reali-
zada em uido vesicular obtido de leses frescas
ou em fragmentos de pele obtidos por bipsia.
Alm disso, um diagnstico rpido pode ser re-
alizado pela colorao de Giemsa em microscopia
tica, com material obtido por bipsia da periferia
das leses vesiculares recentes. Esse mtodo per-
mite a visualizao de incluses intranucleares.
O diagnstico sorolgico de infeces por
BoHV-2 pode ser realizado por SN ou ELISA em
soros pareados. A sorologia tem aplicao quan-
do se deseja detectar os portadores em uma po-
pulao de bovinos, uma vez que a condio de
soropositivo indica a infeco latente.
Herpesviridae 457
Experimentos utilizando vacinas inativadas
e atenuadas do BoHV-2 falharam em demons-
trar proteo contra a doena clnica. No entanto,
inoculaes parenterais, com isolados de campo,
produzem leses locais sem excreo do vrus e
conferem uma imunidade slida e duradoura.
Existem protocolos descrevendo esses proces-
sos de imunizao, utilizando material vesicular
recente ou mesmo de vrus propagado no labo-
ratrio. No entanto, h risco da perpetuao do
vrus pelo estabelecimento de infeces latentes
em rebanhos nos quais esse mtodo utilizado.
Atualmente, no existem vacinas comerciais dis-
ponveis contra o BoHV-2.
Os mtodos de prolaxia devem incluir
medidas higinicas da sala de ordenha e equi-
pamentos, alm do combate a insetos, possveis
vetores transmissores do agente. Outra medida
proltica importante evitar a entrada de ani-
mais estranhos e realizao de quarentena para
animais introduzidos no rebanho.
Uma vez instalada a infeco no animal,
pode-se utilizar antibioticoterapia tpica, redu-
zindo, assim, as infeces bacterianas secund-
rias nas leses. Para a desinfeco de ambientes e
equipamentos, os desinfetantes base de iodfo-
ros parecem ser mais ecientes do que solues
base de hipoclorito de sdio.
A utilizao de agentes antivirais para trata-
mento de infeces por herpesvrus humanos esti-
mulou pesquisas para investigar a ecincia des-
tes sobre a replicao do BoHV-2. Alguns desses
produtos podem ser promissores no tratamento
dessas infeces, principalmente a vidarabina, que
se mostrou mais eciente do que o aciclovir.
O herpesvrus bovino tipo 4 (BoHV-4) clas-
sicado na subfamlia Gammaherpesvirinae, junta-
mente com o vrus do Epstein-Barr (EBV) de hu-
manos e o herpesvrus saimiri (SHV), com o qual
apresenta grande similaridade. Alm da morfo-
logia tpica dos herpesvrus, o BoHV-4 possui um
genoma de 144-150 kb, que contm uma regio
nica de 108 kb e aproximadamente 15 repeties
de 1,5 a 3 kb nas extremidades. Com base em an-
lise de restrio genmica, os isolados de campo
podem ser divididos em dois grupos: o grupo
da cepa DN-599, que abrange os isolados norte-
americanos; e o grupo Movar 33/63, que abriga
os isolados europeus. Alguns isolados europeus
e asiticos no se enquadram em nenhum desses
grupos. Os padres de clivagem enzimtica do
genoma do BoHV-4 diferem marcadamente dos
outros herpesvrus de bovinos.
Os isolados de campo caracterizados at o
presente no apresentam grande diversidade an-
tignica e, aparentemente, pertencem ao mesmo
sorotipo. Apenas diferenas discretas podem ser
detectadas com o uso de alguns anticorpos mo-
noclonais (AcMs). O BoHV-4 no apresenta re-
lao antignica com os outros herpesvrus de
bovinos.
A replicao do BoHV-4 em cutivos celula-
res lenta e pouco eciente, parecendo depender
de clulas em diviso. Alm de clulas bovinas, o
vrus replica em determinadas clulas de origem
humana.
A infeco pelo BoHV-4 parece estar ampla-
mente distribuda na populao bovina, embora
o nmero de estudos sorolgicos seja restrito.
At o presente, a infeco j foi diagnosticada na
Amrica do Norte, Europa e em alguns pases
africanos e asiticos. Em alguns locais da frica,
a soroprevalncia atinge 70% dos bovinos amos-
trados, enquanto na Blgica foram observados n-
dices de 15 a 30% e na Alemanha, de 18 a 38%.
Alm de bovinos e ovinos, o vrus j foi
isolado de gatos domsticos, o que constitui um
achado incomum para os herpesvrus de rumi-
nantes.
6.1.3.2. Patogenia, sinais clnicos
e patologia
A patogenia da infeco pelo BoHV-4 mui-
to pouco conhecida, sobretudo pela escassez de
relatos de doena natural e pela diculdade de se
reproduzir sinais clnicos pela inoculao experi-
mental. A principal via natural de infeco pare-
458 Captulo 17
ce ser a oronasal, pela inspirao de aerossis ou
por contato indireto com material contaminado.
Foi tambm demonstrado que bezerros podem se
infectar pela ingesto de leite contaminado. Aps
a infeco, o vrus replica na mucosa respiratria
superior e no epitlio intestinal, podendo infectar
leuccitos e se disseminar sistemicamente para
vrios rgos e tecidos. Dentre os tecidos infec-
tados durante a infeco aguda, incluem-se prin-
cipalmente a mucosa do trato respiratrio (nasal,
traqueal e pulmonar) e o bao, com nveis infe-
riores de replicao nos linfonodos, rins, tonsilas
e timo.
Aps a infeco aguda, o BoHV-4 estabelece
infeco latente em vrios stios, incluindo clulas
mononucleares do bao e do sangue perifrico,
alm do sistema nervoso. A persistncia do vrus
em clulas da linhagem monoctica-macrofgica
sugere que a infeco pode induzir efeitos imu-
nossupressivos. A reativao da infeco pode
ocorrer em situaes de estresse ou pode ser in-
duzida pela administrao de dexametasona.
Apesar de j ter sido isolado de bovinos com
uma variedade de manifestaes clnicas, ainda
hoje no existe um associao clara do BoHV-4
com determinada doena ou sndrome clnica. A
reproduo experimental de doena em animais
jovens ou adultos tambm no tem obtido suces-
so.
O vrus foi inicialmente isolado na Hungria,
em 1963, de bezerros com doena respiratria e
ceratoconjuntivite e, posteriormente, nos Estados
Unidos, de uma novilha com sinais respiratrios.
Posteriormente o agente foi isolado de animais
com conjuntivite, infeco do trato respiratrio
superior e pneumonia. Tambm foi identicado
em animais com leses cutneas, dermatite ma-
mria, enterite, metrite ps-parto e metrite crni-
ca. A ocorrncia de abortos com a demonstrao
do vrus no feto e em membranas fetais tambm
j foi relatada. Existem relatos de associao do
BoHV-4 com o BVDV em episdios de aborto.
A inoculao experimental do BoHV-4 em
vacas em diferentes fases da gestao resultou
em morte de alguns fetos e abortamentos entre o
terceiro e quarto meses de gestao. Mumicao
e autlise fetal foram observadas em dois fetos. O
vrus foi isolado de quatro dos 12 fetos abortados
ou mumicados/autolisados. Fetos inoculados
aps o quarto ms nasceram vivos e saudveis.
A associao do BoHV-4 com orquite, azoos-
permia e conjuntivite passageiras em touros tam-
bm tem sido sugerida. Nesses casos, o vrus
pode ser excretado pelo smen.
A associao do BoHV-4 com qualquer das
manifestaes mencionadas acima ainda ques-
tionvel, pois muitas tentativas de reproduo
experimental da doena em bovinos e ovinos
adultos falharam ou resultaram em sinais leves
e inespeccos. Coelhos tm sido utilizados com
relativo sucesso como modelo experimental para
o BoHV-4, sobretudo para o estudo da patogenia
da infeco reprodutiva.
6.1.3.3 Diagnstico e controle
O mtodo de eleio para o diagnstico o
isolamento viral, embora o BoHV-4 seja de difcil
replicao em cultivos celulares de rotina (p. ex.:
MDBK). Infelizmente, poucos reagentes espec-
cos so disponveis para a deteco de antgenos
em tecidos e clulas. Para a deteco do BoHV-4
em tecidos e rgos, deve-se recorrer a tcnicas
moleculares, como o Southern blot e PCR, pois se-
qncias genmicas esto disponveis em bancos
de dados e permitem a elaborao de sondas e
primers.
Anticorpos contra o vrus podem ser detec-
tados por imunodifuso em gar (IDGA), xao
de complemento, imunouorescncia indireta
(IFI) e ELISA. A infeco natural geralmente no
induz nveis altos de anticorpos neutralizantes,
razo pela qual a tcnica de SN no recomen-
dada. No existem reagentes e kits diagnsticos
comercialmente disponveis, o que indica a ne-
cessidade do desenvolvimento de reagentes para
o diagnstico sorolgico dessa virose.
No existe consenso sobre possveis medi-
das de controle a serem adotadas, em razo de
que muito pouco conhecido sobre essa infec-
o. Tentativas de diagnstico de condies cl-
nico-patolgicas compatveis com a infeco pelo
BoHV-4 podem contribuir para um maior conhe-
cimento sobre a infeco e possveis conseqn-
cias clnico-patolgicas.
Herpesviridae 459
O herpesvrus bovino tipo 5 (BoHV-5)
agente etiolgico da meningoencefalite ou encefa-
lite herptica bovina, doena geralmente fatal que
afeta principalmente animais jovens. O BoHV-5
muito semelhante ao BoHV-1 em diversos aspec-
tos biolgicos, genticos e moleculares, de modo
que a diferenciao desses dois vrus somente se
tornou possvel h, aproximadamente, 20 anos,
com o desenvolvimento de tcnicas moleculares.
At ento, amostras de vrus atualmente reco-
nhecidas como BoHV-5 eram consideradas sub-
tipos do BoHV-1. Isso se dava em razo da gran-
de similaridade entre os dois vrus, incluindo o
efeito citoptico produzido em cultivos celulares
e a reatividade cruzada em testes de IFA, para
antgenos virais, e de SN e ELISA, para anticor-
pos. No entanto, as diferenas clnico-epidemio-
lgicas e moleculares existentes entre esses dois
vrus justicaram a sua classicao como duas
espcies virais distintas. Da mesma forma, alguns
AcMs so capazes de distinguir entre BoHV-1 e
BoHV-5, o que revela a existncia de diferenas
antignicas entre esses vrus. Alm disso, embora
a estrutura e organizao genmica sejam virtu-
almente idnticas e a homologia de nucleotdeos
seja de aproximadamente 90%, a anlise enzim-
tica de restrio genmica e alguns protocolos de
PCR podem diferenciar entre esses vrus. Ou seja,
o BoHV-1 e BoHV-5 so muito semelhantes entre
si em vrios aspectos, porm apresentam diferen-
as bem denidas que podem ser detectadas por
mtodos especcos.
Ainda hoje, a maioria dos testes sorolgicos e
virolgicos so incapazes de distinguir esses dois
agentes. Por isso, a histria natural do BoHV-5
ainda pouco conhecida. Pode-se especular que
alguns estudos epidemiolgicos sobre o BoHV-1,
realizados no passado, tenham confundido infec-
es causadas por esse vrus com aquelas causa-
das pelo BoHV-5. Assim, estudos adicionais so
necessrios para poder se avaliar com preciso a
verdadeira amplitude das infeces pelo BoHV-1
e BoHV-5 na populao bovina.
O genoma do BoHV-5 (uma cepa brasileira,
SV-507) foi recentemente seqenciado e possui
138.4 kb, enquanto o genoma do BoHV-1 possui
aproximadamente 137 kb. O genoma desses vrus
codica mais de 70 produtos, entre os quais 10 a
12 glicoprotenas do envelope. Essas glicoprote-
nas desempenham importantes funes nas inte-
raes entre os vrions e as clulas hospedeiras e
se constituem em importantes alvos para anticor-
pos neutralizantes.
Estudos clnico-patolgicos e virolgicos
tm demonstrado que o BoHV-5 um impor-
tante agente de encefalite bovina no Brasil. Em
um estudo que investigou as causas de encefa-
lite nesta espcie (cerca de 10% do total de casos
registrados), os herpesvrus foram superados em
incidncia somente pela raiva. Como os herpes-
vrus isolados da maioria desses casos no foram
tipicados, supe-se que o BoHV-5 seja o princi-
pal implicado, embora ocasionalmente o BoHV-1
tambm possa estar envolvido em infeces neu-
rolgicas.

Em virtude da sua grande similaridade com
o BoHV-1, a prevalncia e distribuio da infeco
pelo BoHV-5, mundialmente, desconhecida. As
infeces aparentes pelo BoHV-5 apresentam ca-
ractersticas epidemiolgicas peculiares, afetando
animais jovens, com baixa morbidade e elevada
mortalidade. Como nas infeces por outros her-
pesvrus, em funo da latncia e da ocorrncia
de infeces subclnicas, a proporo de animais
que desenvolve enfermidade clnica no um in-
dicador apropriado do nmero de animais efe-
tivamente infectados. Curiosamente, a infeco
parece ser causa de morbidade e mortalidade im-
portante somente em pases do Hemisfrio Sul,
embora tenha sido descrita no Hemisfrio Norte
h muito tempo. At 1993, somente duas amos-
tras de BoHV-5 haviam sido isoladas nos EUA.
A baixa ocorrncia de encefalites por herpesvrus
em pases do Hemisfrio Norte, segundo alguns
autores, poderia estar associada aos extensivos
programas de vacinao contra o BoHV-1, cuja
imunidade conferiria proteo tambm contra o
BoHV-5.
Na atualidade, no possvel precisar a
real prevalncia e distribuio das infeces pelo
BoHV-5, uma vez que no existem testes sorol-
460 Captulo 17
gicos capazes de diferenciar entre infeces por
BoHV-5 ou BoHV-1. muito provvel que uma
proporo ainda desconhecida dos animais iden-
ticados como positivos para o BoHV-1 tenham
sido de fato infectados pelo BoHV-5. Tal preva-
lncia somente poder ser determinada a partir
da disponibilidade de testes sorolgicos capazes
de diferenciar infeces por BoHV-5 e BoHV-1.
No obstante a diculdade de se determinar
a prevalncia por testes sorolgicos, relatos clni-
co-patolgicos com ou sem conrmao virol-
gica tm conrmado a ampla e crescente disse-
minao do BoHV-5 em rebanhos brasileiros. No
Rio Grande do Sul, o BoHV-5 tem sido freqen-
temente associado com surtos de meningoencefa-
lite. Com base em evidncias clnicas (posterior-
mente conrmadas pelo isolamento do agente),
a prevalncia da infeco nos estados do Mato
Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Para-
n, Rio de Janeiro, Rio Grande do Sul e So Paulo
parece elevada. No entanto, impossvel precisar
esses dados, uma vez que a infeco pode ocor-
rer sem manifestaes clnicas, sendo aparente
somente aquela pequena proporo de casos em
que os sinais so evidentes. Por essa razo, sus-
peita-se que a incidncia do BoHV-5 seja signi-
cativamente maior do que os casos reportados.
Alm da possvel da confuso com o BoHV-1,
pela reatividade sorolgica cruzada, os sinais de
comprometimento neurolgico semelhantes aos
da raiva podem tambm conduzir a um diagns-
tico equivocado.
Com ressalvas prevalncia e distribuio
geogrca, a epidemiologia das infeces pelo
BoHV-5 parece ser muito semelhante do BoHV-
1. Alm de bovinos, infeces naturais j foram
demonstradas em ovinos e caprinos, embora o
seu signicado epidemiolgico seja desconheci-
do. Experimentalmente, a infeco aguda e laten-
te pelo BoHV-5 pode ser reproduzida em ovinos,
caprinos e coelhos.
Em infeces naturais e experimentais, o
vrus excretado nas secrees nasais em altos
ttulos e durante vrios dias (at 15-18 dias). Em
surtos naturais, a disseminao do vrus entre aos
animais parecer ser rpida, principalmente quan-
do a densidade de animais elevada. Os surtos
ocorrem geralmente associados com situaes de
estresse, ligadas ao desmame, transporte e mu-
dana de alimentao. Esses surtos apresentam
morbilidade varivel (1-10%) e letalidade eleva-
da (prxima de 100%), ou seja, quase a totalidade
dos animais que apresentam sinais neurolgicos
evolui para o bito.
A transmisso do BoHV-5 provavelmen-
te ocorra de modo semelhante do BoHV-1, ou
seja, por contato direto ou indireto entre animais.
As secrees nasais representam o principal ve-
culo para a transmisso do agente. A exemplo de
outros herpesvrus, o BoHV-5 estabelece infeco
latente em seus hospedeiros aps a infeco agu-
da, o que contribui para a sua persistncia na po-
pulao bovina. Essa infeco pode ser reativada
pela administrao de corticides, simulando o
que provavelmente ocorra em condies natu-
rais. As reativaes naturais da infeco podem
ser seguidas da recrudescncia clnica e inclusive
levar morte, como sugerido pela ocorrncia de
casos isolados de encefalite pelo BoHV-5 em ani-
mais adultos
e patologia
A transmisso do vrus ocorre por contato
direto ou indireto com animais ou secrees con-
taminadas. O vrus penetra pelo trato respiratrio
superior e replica inicialmente na mucosa nasal,
onde a replicao persiste por at mais de 15 dias.
A replicao na mucosa nasal freqentemente
associada com sinais respiratrios semelhantes
aos observados nas infeces pelo BoHV-1, po-
rm mais brandos. A seguir, o vrus invade os
neurnios sensoriais regionais e transportado
atravs do uxo axonal retrgrado para o gn-
glio responsvel pela inervao da regio (no
caso das vias respiratrias, o gnglio trigmeo),
onde atinge os corpos neuronais. Neste gnglio, o
vrus pode estabelecer dois tipos de relao com
o hospedeiro. No primeiro caso, o vrus estabe-
lece uma infeco latente, durante a qual no h
replicao viral ou expresso de antgenos virais.
Nesse caso, o animal permanece portador da in-
feco, porm sem apresentar sinais clnicos evi-
dentes. Esse , provavelmente, o resultado mais
freqente das infeces pelo BoHV-5.
Herpesviridae 461
A segunda possibilidade que a replica-
o viral no gnglio trigmeo seja seguida do
transporte do vrus para o encfalo, atingindo
os neurnios de segunda ordem nos ncleos da
ponte e bulbo. A partir desses stios, o vrus pode
disseminar-se ao cerebelo e tlamo, alcanando
subseqentemente o crtex cerebral. Experi-
mentalmente, foi observado que o vrus pode se
distribuir de forma heterognea pelas reas do
encfalo. De sete bovinos inoculados com uma
amostra de BoHV-5, quatro apresentaram o vrus
disseminado em vrias regies do encfalo; dois
deles apresentaram o vrus em determinadas re-
gies (bulbo, ponte, mesencfalo e crtex olfat-
rio e frontal); enquanto outros dois continham
o vrus somente no crtex olfatrio e frontal.
Dois animais inoculados foram aparentemente
capazes de erradicar a infeco, o vrus no foi
detectado em tecidos aos 21 dias aps a infeco,
apesar de ambos apresentarem leses de menin-
goencefalite no-supurativa.
Estudos realizados em bovinos e coelhos
infectados experimentalmente indicam que a via
olfatria, pela qual o vrus atinge o crtex ante-
rior atravs do sistema olfatrio, constitui-se na
via principal de acesso ao sistema nervoso central
(SNC) a partir da replicao primria na muco-
sa nasal. Em coelhos, a via olfatria fornece um
transporte muito mais rpido e eciente do que
a via trigeminal. De qualquer forma, a via trige-
minal de transporte tambm importante, pois
permite ao vrus atingir o local de estabelecimen-
to de latncia.
Existem evidncias de que as amostras de
BoHV-5 apresentam diferentes nveis de neuro-
virulncia. Estudos em bovinos e coelhos revela-
ram variaes na neuroinvasividade (a capacida-
de do vrus de invadir, multiplicar e distribuir-se
no SNC), assim como na neurovirulncia (capaci-
dade do vrus de provocar leses no SNC).
A doena neurolgica pelo BoHV-5 pode
ocorrer em forma de surtos ou acometer em ani-
mais isolados. A enfermidade mais freqente
em bezerros, sobretudo aqueles submetidos ao
estresse da desmama e connamento. Os sinais
observados em casos naturais so: depresso, an-
dar cambaleante, bruxismo, protuso da lngua,
salivao, exionamento do pescoo, opisttono,
cegueira, pressionamento da cabea contra ante-
paros, ataxia, decbito, convulses. Freqente-
mente esses sinais manifestam-se em crises, cujos
espaamentos e intensidade intensicam-se gra-
dativamente. Esses sinais nem sempre esto pre-
sentes em todos os casos e diferentes combina-
es de sinais, com intensidades diferentes, tm
sido relatados. Em alguns casos, uma depresso
profunda o nico sinal evidente. Na grande
maioria dos animais que apresenta sinais neu-
rolgicos, a enfermidade progride para o bito,
embora casos de recuperao aps sinais mode-
rados tenham sido descritos. O curso clnico dura
de poucas horas (8-12) a vrios dias e culmina
com decbito, convulses e morte. Sinais respira-
trios (hiperemia, corrimento nasal, diculdade
respiratria) tm sido relatados tanto em infec-
es naturais como experimentais. Abortos tam-
bm tm sido relatados em rebanhos acometidos
de surtos de infeco neurolgica. Embora atual-
mente se acredite que a grande maioria dos casos
de doena neurolgica historicamente atribudos
ao BoHV-1 pela confuso em sua identicao
tenham sido de fato causados pelo BoHV-5, al-
guns casos de doena neurolgica comprovada-
mente causados pelo BoHV-1 tambm j foram
relatados.
possvel tambm que o BoHV-5 possa pro-
duzir infeces genitais, pois o vrus j foi isola-
do de smen de touros e de episdios de aborto.
J foi demonstrado que o vrus, associado a uma
pequena percentagem de moncitos e linfcitos
perifricos, pode produzir uma viremia transit-
ria. Esta seria uma das possveis explicaes para
a origem das infeces fetais e abortos. No entan-
to, estudos para denir a patogenia desse tipo de
quadro ainda no foram realizados.
consensual que a reativao da infeco
latente pelos herpesvrus animais raramente cur-
sa com sinais clnicos. No entanto, o desenvolvi-
mento de sinais clnicos discretos, a exemplo do
que ocorre com outros herpesvrus, parece no
ser to raro, e a sua deteco depende de um
exame mais acurado. No caso do BoHV-5, foi de-
monstrado que tanto a reativao natural quanto
a induzida por dexametasona parecem ser fre-
qentemente acompanhadas de sinais neurol-
gicos, que podem ser moderados e passageiros
462 Captulo 17
ou progressivos e fatais. A reativao da infeco
latente acompanhada de recrudescncia clnica
podem explicar os casos de meningoencefalite
pelo BoHV-5 em que um nico animal do reba-
nho, geralmente adulto, afetado.
6.1.4.3 Diagnstico
Doena neurolgica de curso fatal, principal-
mente em bezerros, sugestiva de infeco pelo
BoHV-5. Nesses casos, o diagnstico diferencial
de raiva, listeriose, babesiose e encefalopatia es-
pongiforme deve ser realizado. O diagnstico cl-
nico-epidemiolgico deve ser, sempre que pos-
svel, acompanhado de comprovao virolgica
e/ou sorolgica (ver Tabela 17.2). Em casos de
doena neurolgica em bovinos, o material en-
viado para o laboratrio de virologia (crebro)
inicialmente testado para a raiva e, se negativo,
deve ser testado para o BoHV-5. Utilizando-se o
crebro suspeito, pode-se realizar vrios testes
para comprovar a etiologia: a) IFA ou IPX em im-
presses frescas de tecido nervoso; b) isolamento
viral; c) PCR; d) nos casos em que secrees na-
sais acompanham a amostra, a realizao de IFA
no sedimento das clulas descamativas pode for-
necer um diagnstico rpido e convel.
Para isso, amostras de crebro e bulbo olfa-
trio devem ser remetidas resfriadas para tenta-
tivas de isolamento viral e/ou IFA. Fragmentos
de crebro, acondicionados em formol a 10%, so
teis para exames histolgicos. Encefalite no-
supurativa, inltrao linfocitria perivascular,
gliose focal ou difusa e corpsculos de incluso
nos neurnios so achados comuns em casos de
encefalite pelo BoHV-5. Secrees nasais e/ou
brnquicas e pulmonares tambm so teis para
o diagnstico. Amostras de soro pareadas, cole-
tadas dos animais que, eventualmente, recupe-
rem-se da doena neurolgica podem auxiliar na
elaborao do diagnstico.
A tcnica padro de diagnstico do BoHV-5
o isolamento viral em cultivo celular no qual o
vrus produz ECP tpico de herpesvrus segui-
do de conrmao por IFA ou IPX. Em amostras
clnicas conservadas de forma imprpria, no en-
tanto, o isolamento do vrus pode ser problem-
tico. Nesses casos, deve-se recorrer a tcnicas de
deteco de antgenos ou PCR, pois as chances
de se obter um resultado conrmatrio so maio-
res.
A conrmao da identidade do agente e a
sua diferenciao do BoHV-1 pode ser realizada
por reatividade com determinados AcMs, anlise
de restrio genmica e PCR diferencial, seguida
ou no de seqenciamento do produto.
O exame histolgico de sees do SNC tam-
bm utilizado no diagnstico e, geralmente,
revela quadros de encefalite no-supurativa, in-
ltrao linfocitria focal ou difusa e manguitos
perivasculares. Em alguns casos, o exame histo-
lgico do crebro revela alteraes bem indica-
tivas de infeco herptica, como a presena de
corpsculos de incluso e necrose neuronal. No
entanto, essas alteraes nem sempre esto pre-
sentes, indicando a necessidade de exames viro-
lgicos para conrmar a identidade do agente.
Casos de infeco neurolgica pelo BoHV-5 sem
quaisquer alteraes histolgicas tambm j fo-
ram descritos.
Amostras pareadas de soro, coletadas duran-
te a doena aguda e 14-21 dias aps, podem ser
submetidas a testes sorolgicos. Um aumento de
quatro vezes nos ttulos de anticorpos indicati-
vo da infeco aguda. Os testes sorolgicos mais
comumente utilizados so SN e ELISA. A SN for-
nece quanticao dos anticorpos neutralizantes,
enquanto o ELISA apenas qualitativo: positivo
ou negativo. Cabe enfatizar que esses testes so
incapazes de diferenciar anticorpos anti-BoHV-5
de anticorpos anti-BoHV-1.
Devido s semelhanas biolgicas e epide-
miolgicas, as medidas de controle e prolaxia
para o BoHV-5 so essencialmente as mesmas
preconizadas para o BoHV-1. No existem, at
o presente, vacinas especcas contra o BoHV-5
disponveis no mercado. Entretanto, com base na
reatividade cruzada entre o BoHV-1 e BoHV-5,
vacinas contra BoHV-1 vem sendo utilizadas no
controle da meningoencefalite por BoHV-5. No
entanto, o nvel de proteo heterloga conferido
por essas vacinas permanece indeterminado.
Herpesviridae 463
6.1.5 Herpesvrus associados com a
febre catarral maligna
Os agentes etiolgicos da febre catarral
maligna (MCF) so o herpesvrus ovino tipo
2 (OvHV-2) e o herpesvrus alcelano tipo 1
(AlHV-1), membros do gnero Rhadinovirus,
subfamlia Gammaherpesvirinae. O AlHV-1 est
associado com a forma africana da enfermida-
de, que acomete bovinos, cervdeos e outros ru-
minantes no continente africano. O OvHV-2 o
agente da forma da MCF associada a ovinos, do-
ena que acomete bovinos e outros ruminantes e
possui distribuio mundial.
Forma africana
Os hospedeiros naturais do agente da forma
africana da MCF e transmissores para outras es-
pcies so os gnus (Conochaetes taurinus e Cono-
chaetes gnu, em ingls, denominados wildebeest).
No organismo desses animais, o vrus encon-
tra-se fortemente associado com clulas, sendo
raramente transmissvel entre animais adultos.
Entretanto, a administrao de corticosterides,
assim como a ocorrncia de estresse (por exem-
plo, transporte para zoolgicos) pode induzir a
excreo de vrus. No perodo perinatal, o vrus
pode ser detectado em secrees nasais, oculares
e nas fezes de neonatos. Durante as temporadas
de pario dos gnus, os povos africanos que con-
vivem com esses animais acreditam que o vrus
seja transmitido para bovinos pelo contato com
a placenta, secrees placentrias ou pelas secre-
es dos recm-nascidos.
Forma no-africana
A forma no-africana da MCF uma doena
infecciosa sistmica que ocorre em bovinos e ou-
tros ruminantes domsticos e silvestres, podendo
ocorrer tambm em sunos. O OvHV-2 agen-
te etiolgico dessa forma apresenta a espcie
ovina como hospedeira natural. Nestes animais,
a infeco ocorre predominantemente de forma
subclnica. Essa forma, tambm denominada
MCF associada a ovinos (MCF-OA), possui ocor-
rncia espordica e tem sido descrita em vrios
pases da Europa, Amrica do Sul, Amrica do
Norte e em outras regies. Em regies endmi-
cas, a MCF-OA pode ocorrer de forma espordi-
ca ou em surtos, com a ocorrncia de um nmero
varivel de casos. No Brasil, a enfermidade tem
sido documentada em bovinos desde 1924, nas
regies Nordeste, Sudeste e Sul.
O OvHV-2 produz uma infeco subclnica
nos ovinos, seus hospedeiros naturais. Os ovinos
disseminam o vrus durante a pario, e o agen-
te penetra nos bovinos provavelmente pela via
respiratria. Alm de ovinos, cabras e animais
silvestres, como cervdeos, podem ser portado-
res do vrus e transmiti-lo para bovinos. Com o
advento de tcnicas moleculares de diagnstico,
como a PCR, foi possvel estabelecer que bovinos
que eventualmente se recuperam da MCF-OA
tornam-se portadores crnicos.
e patologia
A patogenia da infeco ainda pouco co-
nhecida. Os animais infectados apresentam uma
viremia associada com clulas e a presena de
vrus nas leses, que so provavelmente imuno-
mediadas. O perodo de incubao varia entre
3 e 10 semanas, e a durao da doena clnica
de 3 a 7 dias. Os eventos centrais da patogenia
da MCF parecem envolver a infeco e perda da
regulao funcional de determinadas populaes
de linfcitos. A perda da atividade dos linfci-
tos supressores facilitaria a proliferao linfide
observada na doena, enquanto a atividade des-
controlada das clulas NK seria responsvel pela
destruio tecidual. Embora a infeco aguda
seja provavelmente seguida do estabelecimento
de latncia, no existem evidncias de reativao
e recrudescncia clnica.
Os sinais clnicos da MCF incluem apatia,
anorexia, febre, opacidade da crnea, corrimento
464 Captulo 17
Tabela 17.3. Principais achados clnico-patolgicos emsurtos de febre catarral maligna diagnosticados noRioGrande
doSul.
Fonte: adaptada de Rech et al. (2005).
Herpesviridae 465
nasal mucopurulento, salivao, diarria, lceras
orais e nasais, ceratoconjuntivite, linfadenopatia,
diarria, distrbios nervosos com movimentos
de pedalagem, convulses e exantema cutneo.
Os sinais clnicos apresentados pelos bovi-
nos afetados em 15 propriedades, onde ocorreram
casos isolados ou surtos de MCF no Rio Grande
do Sul, esto apresentados na Tabela 17.3. Nesses
episdios a doena apresentou um curso agudo
ou subagudo e foi, na maioria das vezes, fatal.
As leses macroscpicas envolvem princi-
palmente os tratos digestivo, respiratrio supe-
rior e urinrio, alm de linfonodos, fgado, olhos
e encfalo, e incluem leses erosivo-ulcerativas
em vrias mucosas. As leses observadas no apa-
relho digestivo e respiratrio esto associadas
com estomatite, faringite e laringite. Ocorre um
aumento generalizado de volume dos linfono-
dos, que podem apresentar aspecto hemorrgico.
Leses oculares, como opacidade da crnea, po-
dem ser freqentes. Histologicamente, as leses
consistem de vasculite com necrose brinide,
inltrados mononucleares em vrios rgos, hi-
perplasia linfide e necrose dos epitlios de re-
vestimento. Essas leses so consideradas patog-
nomnicas ou muito caractersticas da doena.
Pode ocorrer edema de meninges e formao de
manguitos perivasculares em diferentes regies
do crebro. Focos necrticos podem ser observa-
dos nos rins e fgado. H vasculite generalizada.
A maioria dos animais infectados que desenvol-
vem a forma mais grave da doena morre em,
aproximadamente, 10 dias.
O diagnstico presuntivo da MCF basea-
do nos sinais clnicos e nas leses encontradas
necropsia, e a presena de ovinos na propriedade
um dado que auxilia o diagnstico. O diagns-
tico denitivo da doena pode ser realizado pelo
uso de testes sorolgicos, deteco de antgenos
virais por IFA ou IHC, isolamento viral (para o
AlHV) e por PCR. As amostras a serem utiliza-
das para deteco do vrus e/ou DNA viral so:
leuccitos frescos, tecido da tireide e glndula
adrenal. A deteco de anticorpos realizada em
amostras de soro de animais enfermos. A repli-
cao eciente do OvHV-2 em cultivos celulares
ainda no foi obtida, por isso o isolamento viral
no utilizado no diagnstico.
A trade de alteraes histolgicas da MCF
consiste de vasculite, acmulos de clulas ina-
matrias mononucleares em vrios tecidos e ne-
crose dos epitlios de revestimento. Na vasculite,
ocorre necrose brinide da parede de artrias e
veias e inltrao de linfoblastos, linfcitos e ma-
crfagos na mdia, adventcia e espao perivas-
cular. Essas leses estavam presentes em todos
os casos de MCF em bovinos deste estudo e so
altamente sugestivas da doena.
O diagnstico diferencial da MCF em bovi-
nos inclui outras doenas a vrus, como a febre af-
tosa, estomatite vesicular, diarria viral bovina/
doena das mucosas, lngua azul e peste bovina.
Considerando-se a forma de transmisso
do OvHV-2 para bovinos, a principal medida de
controle evitar a criao conjunta de ovinos e
bovinos. Uma alternativa separar os ovinos du-
rante a pario, de modo a evitar a transmisso
a bovinos atravs de placentas e uidos fetais.
Alm disso, devem-se isolar bovinos afetados de
bovinos sadios. No h vacinas disponveis con-
tra a MCF.
6.2 Herpesvrus de caprinos
6.2.1 Herpesvrus caprino tipo 1
O herpesvrus caprino tipo 1 (CpHV-1) um
alfaherpesvrus estreitamente relacionado com o
BoHV-1. Esse vrus est associado com quadros
de enterite e infeco generalizada fatal em ca-
britos recm-nascidos (at duas semanas de ida-
de). A maioria das infeces em animais adultos
subclnica, mas a infeco pode, ocasionalmen-
te, resultar em sinais respiratrios, conjuntivite,
vulvovaginite, balanopostite e abortos. Outro
vrus caprino (CpHV-2), que pertence subfa-
mlia Gammaherpesvirinae, tem sido recentemente
associado com manifestaes compatveis com a
febre catarral maligna (MCF) em algumas esp-
cies de cervdeos. Esse vrus aparentemente no
causa doena em caprinos, que, provavelmente,
se constituem em seus hospedeiros naturais.
466 Captulo 17
A susceptibilidade dos caprinos ao herpes-
vrus bovino tipo 1 (BoHV-1) e a ocorrncia da
infeco nessa espcie, alm do quadro clnico
semelhante induzido por ambos os vrus nas res-
pectivas espcies, tornou bastante difcil a classi-
cao do CpHV-1 como um vrus distinto. As
caracterizaes iniciais demonstraram que o v-
rus de caprinos (CpHV-1) distingue-se do BoHV-
1 por apresentar um ciclo replicativo mais curto,
evidenciado por uma destruio mais rpida do
cultivo celular in vitro; por sorologia cruzada uni-
direcional e por anlise de restrio enzimtica
do genoma. Embora no existam diferenas sig-
nicativas nas propriedades fsico-qumicas de
seus DNAs, a anlise de restrio demonstra cla-
ramente que o CpHV-1 e o BoHV-1 so espcies
virais diferentes. No entanto, apesar de serem
diferentes em seus mapas de restrio, ambos os
vrus parecem ter mantido ou desenvolvido uma
relao antignica durante a sua evoluo.
O CpHV-1 foi inicialmente isolado na Cali-
frnia, em 1975, de quadros de enterite severa em
cabritos com poucos dias de vida. Posteriormen-
te, o vrus foi detectado em rebanhos caprinos na
Sua. Embora a distribuio do agente no tenha
sido investigada, estudos sorolgicos e virolgi-
cos demonstram que a infeco est presente em
vrios pases europeus, Austrlia, Nova Zeln-
dia, Canad e Estados Unidos, em nveis de pre-
valncia variveis. Em pases que possuem a ca-
prinocultura comercial bem desenvolvida, como
a Grcia e a Itlia, os nveis de prevalncia podem
atingir entre 30 e 50% dos animais.
Embora a infeco pelo CpHV-1 tenha sido
descrita somente nos hospedeiros naturais, o
CpHV-1 possui a capacidade de infectar espcies
heterlogas. Anticorpos contra o CpHV-1 j fo-
ram detectados em algumas espcies silvestres,
especialmente cervdeos. Cordeiros e bezerros
inoculados experimentalmente no desenvolvem
sinais clnicos, porm replicam o vrus e apresen-
tam soroconverso. A exemplo do BoHV-1, que
replica e estabelece infeco latente passvel de
reativao em cabras, o CpHV-1 capaz de re-
plicar e estabelecer infeco latente em bovinos
aps infeco experimental. O possvel papel
dessas outras espcies na epidemiologia da infec-
o permanece desconhecido.
e patologia
A patogenia da infeco pelo CpHV-1 no
est totalmente esclarecida. Em condies na-
turais, o CpHV-1 produz infeco primria que
evolui para a infeco latente passvel de reativa-
o. O CpHV-1 pode iniciar a infeco pelas vias
nasal e genital. Quando a infeco ocorre pela via
nasal, o vrus replica localmente e dissemina-se
por viremia para o trato genital, onde pode cau-
sar aborto. Quando a penetrao ocorre na mu-
cosa genital, o vrus apresenta replicao local
e, aparentemente, no se dissemina para outros
rgos e tecidos.
Aps a infeco primria, o CpHV-1 estabe-
lece infeco latente nos 3 e 4 gnglios sacrais
e no gnglio trigeminal, dependendo da via de
penetrao. A reativao do vrus dos stios de la-
tncia tem sido muito difcil de ser demonstrada,
tanto em infeces naturais como experimentais.
Em condies naturais, a reativao e excreo do
vrus pela via genital tm sido observadas em ca-
bras com ttulos baixos de anticorpos neutralizan-
tes ( 4) durante as estaes de monta, provavel-
mente como resultado de um estresse decorrente
das alteraes hormonais associadas com o estro.
Experimentalmente, a reativao e excreo viral
foram obtidas somente aps a administrao de
altas dosagens de dexametasona. Aps reativa-
o da infeco latente, o CpHV-1 apresenta um
comportamento similar ao da infeco primria:
animais infectados pela via intranasal excretam o
vrus pelas vias nasal e genital, enquanto os ani-
mais infectados pela via genital geralmente eli-
minam o vrus somente por esta via.
Os sinais clnicos decorrentes da infeco
pelo CpHV-1 so compatveis com infeco no tra-
to gastrintestinal, genital e respiratrio. Embora a
infeco seja subclnica na maioria dos animais
adultos, sinais inespeccos, como hipertermia e
leucopenia, tm sido descritos. Tambm tm sido
descritos quadros de vulvovaginite, caracteriza-
Herpesviridae 467
dos por edema vulvar, eritema, eroses, lceras e
descarga mucopurulenta. Diarria, conjuntivite,
descarga nasal, tosse e dispnia tambm tm sido
ocasionalmente observadas. Em caprinos jovens
(entre uma e duas semanas de idade), o CpHV-1
responsvel por infeco sistmica, caracteri-
zada por leses ulcerativas no trato grastrintes-
tinal, geralmente associadas com alta morbidade
e mortalidade.
O tropismo seletivo do CpHV-1 pelo trato
genital, a latncia nos gnglios sacrais e reativa-
o da infeco latente, coincidente com o estro,
sugerem que a disseminao do vrus dentro do
rebanho provavelmente promovida pela monta
natural.
6.2.1.3 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo CpHV-1, em
casos clnicos suspeitos, pode ser realizado pelo
isolamento do agente em clulas primrias ou
contnuas de origem caprina ou ovina. O vrus
produz ECP semelhante aos outros alfaherpes-
vrus. Conjugados policlonais contra o BoHV-1
produzem reao cruzada em testes de IFA e po-
dem ser utilizados diretamente em tecidos ou em
clulas de cultivo inoculadas. Uma vez isolado,
o CpHV-1 pode ser diferenciado do BoHV-1 por
anlise de restrio enzimtica.
Episdios de aborto tm sido investigados
pelo uso de PCR com primers especcos em te-
cidos de fetos abortados. Anticorpos contra o
CpHV-1 podem ser investigados por SN ou ELI-
SA, e a realizao de sorologia pareada pode in-
dicar infeco aguda recente. Esses testes tambm
tm sido utilizados em inquritos sorolgicos em
rebanhos caprinos e em animais silvestres.
Em virtude da ampla distribuio do CpHV-
1 e das perdas econmicas decorrentes de abor-
tos, natimortos e problemas reprodutivos, algu-
mas medidas para preveno ou erradicao tm
sido preconizadas. Apesar de ainda no existirem
vacinas comerciais disponveis, tentativas de se
produzir uma vacina que reduza a severidade da
doena e a disseminao da infeco dentro do
rebanho tm sido realizadas. Os resultados mais
promissores foram obtidos com o uso de uma va-
cina inativada, porm o nvel de proteo parece
depender da via do desao. Ou seja, a proteo
foi mais slida nos animais desaados pela via
nasal, quando comparada com os desaados pela
via genital, que a rota mais provvel de infeco
natural. Uma vacina contra o BoHV-1 foi testada
em cabras e conferiu proteo parcial aps o de-
sao com o CpHV-1.
Considerando-se que os caprinos infectados
tornam-se portadores latentes aps a infeco
aguda, medidas como triagem e identicao
de positivos seguida de descarte ou isolamento,
para evitar a transmisso a outros animais, assim
como o teste de novos animais introduzidos nos
rebanhos, podem auxiliar a reduzir a circulao
do vrus e a incidncia da infeco nos rebanhos.
A susceptibilidade de cabras e bovinos ao
CpHV-1 e BoHV-1, os ttulos nos quais os vrus
so excretados pelos hospedeiros heterlogos e o
contato estreito entre bovinos e cabras em cria-
es consorciadas sugerem que a infeco cruza-
da natural pode ocorrer. Alm disso, o estabele-
cimento de latncia no hospedeiro heterlogo e a
possibilidade de reativao do BoHV-1 em cabras
devem despertar preocupao em programas de
erradicao.
6.3 Herpesvrus de sunos
6.3.1 Herpesvrus suno tipo 1
(vrus da doena de Aujeszky)
A doena de Aujeszky ou pseudoraiva
causada pelo herpesvrus suno tipo 1 (SuHV-1),
tambm denominado vrus da doena de Au-
jeszky ou vrus da pseudoraiva (PRV). Embora a
nomenclatura atual recomende o uso da primei-
ra denominao, o vrus mais conhecido como
PRV. O SuHV-1 pertence ao gnero Varicellovirus,
da subfamlia Alphaherpesvirinae, e possui um ge-
noma DNA de ta dupla, com, aproximadamen-
te, 150 kb, que codica mais de 70 protenas.
Em regies endmicas, a doena de Au-
jeszky considerada uma importante causa de
perdas econmicas na suinocultura, relacionadas
468 Captulo 17
com as altas taxas de morbidade e mortalidade
de leites, reduo da performance dos reprodu-
tores e reduo do desenvolvimento dos animais
em crescimento e terminao. Atualmente, gran-
de parte da repercusso econmica da doena se
deve a restries ao comrcio interestadual de re-
produtores e internacional de reprodutores e pro-
dutos sunos. Em virtude dessas restries, vrios
pases j erradicaram a doena dos rebanhos co-
merciais e vrios outros esto com programas de
controle e erradicao em andamento.
At a dcada de 1980, a infeco pelo SuHV-
1 estava presente de forma endmica em prati-
camente todos os pases que possuam expresso
na suinocultura. A crescente repercusso econ-
mica da doena, sobretudo devido s restries
ao comrcio de animais e produtos, motivou v-
rios pases a empreender programas de controle
e erradicao. Atualmente, a infeco conside-
rada erradicada em sudeos domsticos na Fran-
a, Alemanha, ustria, Sua, Dinamarca, Reino
Unido e nos Estados Unidos. Todavia, o SuHV-1
continua circulando nas populaes de sudeos
silvestres nos Estados Unidos, Alemanha, Pol-
nia, Frana, Itlia, dentre outros. Dessa forma,
programas de vigilncia epidemiolgica devem
continuar nas regies de risco, pois as popula-
es de sudeos silvestres podem atuar como re-
servatrios do vrus, o que diculta a erradicao
completa da doena.
No Brasil, a doena foi inicialmente diagnos-
ticada em 1912, e, posteriormente, foi identica-
da em todos os estados das regies Sul, Sudeste e
Centro-Oeste, alm da Bahia e Cear. Nos ltimos
anos, a infeco tem sido mais freqentemente
relatada em Santa Catarina (SC), o que fez com
que fosse implementado um programa estadual
de erradicao. O programa, nanciado por um
esforo de parcerias rmadas entre a indstria,
associao de produtores e governo, tem obtido
sucesso em, gradualmente, erradicar o PRV de
rebanhos sunos do estado. Desde julho de 2004,
a doena de Aujeszky no identicada em SC.
Em 2003, pela primeira vez, foram diagnostica-
dos surtos da doena em sunos no Rio Grande
do Sul. Os focos foram prontamente identicados
e a infeco foi erradicada.
Os sunos so os hospedeiros naturais do
SuHV-1, mas o vrus pode ser transmitido e cau-
sar doena grave em hospedeiros secundrios
(ruminantes, felinos, caninos e roedores). Alm
dessas espcies, os coelhos so particularmente
sensveis infeco experimental. Os hospedei-
ros secundrios so geralmente terminais, e a ex-
creo do vrus por estes animais insignicante.
Eqinos e aves so muito pouco susceptveis
infeco, e o homem refratrio. A infeco de
carnvoros pode ocorrer pela ingesto de carnes
contaminadas ou atravs de leses na pele ou
mucosas.
Os sunos que sobrevivem infeco se tor-
nam portadores subclnicos do vrus na sua for-
ma latente. Estes animais se constituem nos reser-
vatrios do vrus e podem transmitir a infeco
a outros animais sempre que ocorrer reativao
da infeco. A exemplo dos outros herpesvrus,
a infeco latente se constitui no ponto-chave da
epidemiologia do SuHV-1 e representa um obst-
culo importante para o controle e erradicao da
infeco de populaes sunas.
Os ndices de morbidade e mortalidade, as-
sociados com a infeco, dependem da idade dos
animais infectados e so mais altos em animais jo-
vens. Em leites com 6 a 10 dias de idade, a mor-
bidade pode atingir 95% e a mortalidade, 90%,
enquanto entre animais com 21 a 35 dias, esses
ndices podem ser de 45 e 30%, respectivamente.
Em animais adultos, a mortalidade insigni-
cante, e as perdas esto associadas principalmen-
te com problemas reprodutivos. A freqncia de
infeces respiratrias varivel e depende da
cepa viral e de determinados fatores ambientais
que inuenciam a disseminao do vrus.
O vrus transmitido por contato direto ou
indireto de animais susceptveis com secrees
contaminadas ou animais infectados. Os animais
excretam o vrus em secrees nasais e saliva por
vrios dias aps serem infectados. O smen de
machos contaminados e as secrees genitais e
restos fetais de porcas que abortam tambm con-
tm o vrus e podem transmiti-lo. Urina, fezes e
leite tambm possuem alguma importncia como
vias de excresso e eliminao. A infeco por
Herpesviridae 469
contato indireto pode ocorrer atravs da gua,
rao, restos de matadouro, caminhes de trans-
porte, roupas ou contato com materiais contami-
nados.
Os animais latentemente infectados so con-
siderados portadores, podem excretar o vrus pe-
riodicamente e so importantes na manuteno
da doena na forma endmica.
e patologia
As conseqncias clnico-patolgicas da
infeco pelo SuHV-1 variam amplamente e de-
pendem de fatores como idade e estado siolgi-
co dos animais, via de infeco, dose e virulncia
da cepa viral.
A via mais comum de infeco a nasofa-
rngea, e os sunos adquirem a infeco por con-
tato direto ou indireto com animais doentes ou
portadores, em particular com a saliva e secres-
ses nasais contaminadas. O contato direto fo-
cinho-focinho tambm parece desempenhar um
papel relevante na transmisso. A transmisso
por aerossis a curtas distncias tambm ocorre
e pode se constituir em importante forma de dis-
seminao do vrus em regies de alta densidade
populacional. Eventualmente o vrus pode infec-
tar animais pela via digestiva, pelo coito ou pela
inseminao articial. Em granjas que apresen-
tam surtos ou a infeco endmica, gatos e ces
podem contrair a doena pela ingesto de restos
fetais.
Os stios de replicao primria so os epi-
tlios do trato respiratrio superior (nasal, et-
moidal e farngeo), tonsilas e pulmes. Aps essa
replicao inicial, o vrus pode atingir tecidos lin-
fides regionais e se disseminar sistemicamente.
A viremia, no entanto, parece no desempenhar
um papel importante na patogenia. A invaso do
encfalo parece ocorrer principalmente pela via
nervosa olfatria, atravs da qual o vrus atinge
os bulbos olfatrios e, posteriormente, dissemina-
se pelo crebro. Outra via de acesso ao SNC o
transporte ao longo das bras que constituem os
nervos glossofarngeo e trigmeo. A infeco do
gnglio trigmeo pode ser seguida de transporte
subseqente at a ponte e restante do crebro ou
do estabelecimento de latncia.
A replicao viral no SNC resulta em leses
progressivamente severas que levam a disfun-
es motoras e, eventualmente, morte. Essas
alteraes so mais comuns em leites com idade
entre uma e duas semanas. Os sinais neurolgi-
cos so gradativamente menos freqentes e me-
nos severos em animais com mais idade e raros
em animais adultos, apesar da ocorrncia da in-
feco neurolgica. Nestes animais, a replicao
viral no encfalo parece apresentar um padro
localizado. Sinais neurolgicos e morte so raros
em animais de engorda. Animais de engorda e
adultos freqentemente apresentam letargia e
depresso durante episdios de infeco, o que
pode ser atribudo ao envolvimento do SNC.
A infeco, com determinadas cepas e em
altas doses, freqentemente resulta em infeco
e doena pulmonar. Nos pulmes, o vrus replica
focalmente em uma variedade de tipos celula-
res, incluindo os macrfagos alveolares, clulas
epiteliais alveolares, clulas da musculatura lisa,
endoteliais e leuccitos. Como mencionado, a
infeco tipicamente focal e no-disseminada.
Assim, o SuHV-1 no considerado um agente
respiratrio clssico, cuja infeco se dissemine
pelos pulmes. A infeco dos macrfagos alve-
olares possui um signicado especial, pois afeta
a primeira linha de defesa dos pulmes contra
agentes invasores. Por isso, a infeco viral fre-
qentemente acompanhada de infeco bacteria-
na secundria, que leva pneumonia, absceda-
o e pleurite. A viremia que pode ocorrer nesses
casos ou aps infeco do trato respiratrio su-
perior passageira e, provavelmente, de pouca
importncia na patogenia da infeco.
Aps a infeco aguda, tanto subclnica,
quanto com sinais inespeccos, neurolgicos ou
respiratrios, os animais permanecem portadores
da infeco latente. Durante a latncia, o genoma
viral permanece no gnglio nervoso responsvel
pela inervao da rea onde ocorreu a infeco
primria (usualmente no gnglio trigmeo). Es-
ses animais podem, periodicamente, excretar o
vrus para o meio ambiente durante a reativao
da infeco.
A infeco nos animais adultos , freqen-
temente, subclnica. As maiores perdas causadas
pela infeco se devem a um elevado ndice de
mortalidade e morbidade entre leites (at 100%
470 Captulo 17
em animais com menos de um ms), queda de
produtividade das matrizes e reduo no desen-
volvimento dos animais em crescimento e termi-
nao.
Em eventos de introduo do agente em re-
banhos livres, a doena caracterizada por alta
mortalidade na maternidade, abortos e por uma
porcentagem varivel de animais apresentando
sinais neurolgicos e respiratrios na creche, re-
cria, terminao e gestao. Essa fase inicial dura
de uma a trs semanas, com a reduo progressi-
va da intensidade dos sinais clnicos. Aps essa
fase, os surtos se repetem com menor gravidade,
a intervalos de tempo aproximadamente regula-
res. Nesses eventos, so afetados principalmente
os leites entre quatro dias e quatro semanas de
idade, com o arrefecimento dos sinais dentro de
uma a duas semanas.
Embora o vrus seja geneticamente pouco va-
rivel, podem ocorrer diferentes formas clnicas,
relacionadas com o tropismo de diferentes amos-
tras virais, que podem afetar primariamente os
sistemas respiratrio ou nervoso. Em leites, os
sinais clnicos mais observados so: hipertermia,
inapetncia, depresso, incoordenao, tremores
musculares, decbito lateral, convulses e morte.
Em animais mais velhos, observam-se hiperter-
mia, anorexia e sinais respiratrios. Porcas em
gestao manifestam retornos ao cio e a infeco
pode resultar em mumicao, abortos, natimor-
tos, malformaes, nascimento de leites fracos
e infertilidade. Nesta categoria animal, os sinais
clnicos neurolgicos so raros, mas podem ocor-
rer.
Em bovinos, ovinos, ces e gatos, a infeco
pelo SuHV-1 fatal, mas no contagiosa. Nesses
animais, ocorre um intenso prurido no local da
infeco, se esta ocorrer atravs da pele, o que
seguido de sinais neurolgicos progressivamente
severos e morte.
Os achados de necropsia em sunos afeta-
dos, se presentes, so: congesto das meninges e
aumento de volume do lquido cfalo-raquidia-
no, hemorragias, congesto ou focos necrticos
nas amgdalas e laringe, rinite brinosa, edema
pulmonar e consolidao dos lbulos pulmona-
res anteriores (no caso das amostras pneumotr-
picas do vrus). As leses microscpicas observa-
das no pulmo so de pneumonia intersticial e
necrose do epitlio bronquial. Observam-se, ain-
da, focos de necrose de 1 a 2 mm de dimetro no
fgado, nas adrenais, bao e miocrdio. Em casos
neurolgicos, ocorre meningoencefalite no su-
purativa, com ganglioneurite e mielite. Alm dis-
so, observam-se intensa inltrao perivascular,
necrose neural, gliose e neuronofagia.
6.3.1.3 Diagnstico
Em reas endmicas ou de risco, a ocorrn-
cia de doena neurolgica em leites jovens (uma
a duas semanas), sinais respiratrios em vrias
faixas etrias e abortos devem suscitar uma in-
vestigao etiolgica, na qual o SuHV-1 deve
ser considerado como um potencial suspeito. Se
a infeco causada por uma amostra virulenta
e cursa com sinais tpicos, uma anlise do curso
clnico-patolgico do evento, associada com os
achados de necropsia, podem levar a um diag-
nstico presuntivo relativamente seguro. No en-
tanto, a conrmao etiolgica imprescindvel
tambm pelo carter regulatrio do qual se reves-
te a enfermidade.
O diagnstico laboratorial realizado pela
identicao do vrus em tecidos e/ou em secre-
es de sunos doentes. O diagnstico rpido
feito usualmente por testes de IFA direta em ton-
silas, pulmo, traquia, bao, rins, fgado e cre-
bro. O isolamento do vrus pode ser realizado
a partir dessas amostras. O SuHV-1 replica em
uma variedade de clulas de origem suna, sejam
cultivos primrios ou linhagens contnuas, nas
quais produz um efeito citoptico tpico. O v-
rus pode tambm ser multiplicado em clulas de
origem bovina, como clulas de cornetos nasais.
Os isolados de campo podem ser adaptados a re-
plicar em clulas de linhagem bovina, como as
MDBK. Aps o aparecimento do ECP que um
indicativo forte da identidade do agente o vrus
pode ser identicado por IFA ou IPX nos cultivos
inoculados. A neutralizao viral com anti-soro
especco uma alternativa para a identicao
do vrus. Em alguns laboratrios, so utilizados
testes de PCR para a deteco do genoma viral
em amostras suspeitas. Esta tcnica possui apli-
cao especial para detectar infeces latentes.
Herpesviridae 471
Alternativamente, o diagnstico de um
episdio de doena aguda pode ser estabeleci-
do por anlise sorolgica de soro pareado. Para
isso, amostras de soro devem ser coletadas dos
animais doentes durante o curso da doena e trs
a quatro semanas aps. Um aumento de ttulo
de anticorpos igual ou superior a quatro vezes
entre as coletas indicativo de infeco recente.
Com base nisso, testes sorolgicos que permitam
quanticar os anticorpos no soro (p. ex.: testes de
SN ou ELISA) podem ser utilizados para a con-
rmao do agente responsvel pelo episdio.
Vrios testes sorolgicos podem ser utilizados,
mas o teste de ELISA mais sensvel, rpido e
econmico do que o teste de SN. Variaes desse
teste, quando usados em conjunto com vacinas
diferenciais, permitem distinguir animais vaci-
nados daqueles infectados naturalmente.
As estratgias de combate ao SuHV-1 va-
riam de acordo com a situao epidemiolgica
da infeco nas reas-alvo. Em todas as situa-
es, o papel dos portadores latentes se reveste
de importncia fundamental e deve permear a
planicao e adoo das medidas adequadas.
Em geral, as estratgias de combate so baseadas
em uma combinao de vacinao, identicao
e descarte de soropositivos, alm de medidas ge-
rais de preveno.
Em reas livres que apresentam risco de
introduo do agente, as medidas devem ter ca-
rter essencialmente preventivo, para reduzir as
chances de introduo do vrus. Controle de trn-
sito de animais, barreiras sanitrias, quarentena
e certicao de origem e condio sorolgica de
animais e produtos introduzidos na rea, alm de
vigilncia epidemiolgica sistemtica, so geral-
mente efetivos na manuteno da condio sani-
tria de regies com essas caractersticas.
Em regies que apresentem focos espordi-
cos, o controle pode ser realizado por uma com-
binao entre identicao e descarte de animais
positivos (e de rebanhos infectados) e vacinao,
associado com medidas preventivas gerais. As
granjas infectadas devem ter os animais abatidos,
seguido de desinfeco rigorosa e vazio sanitrio.
Rebanhos vizinhos e potencialmente expostos
ao agente podem ser obrigados a adotar medi-
das semelhantes. Regies com essas caractersti-
cas apresentam condies favorveis para adoo
posterior de mtodos de erradicao.
Em regies endmicas, o melhor mtodo
de controle da doena a erradicao do vrus
das criaes. Todavia, a preveno da doena cl-
nica e da mortalidade pode ser feita atravs do
uso de vacinas. Vrias vacinas so utilizadas no
controle das infeces pelo SuHV-1, incluindo
vacinas tradicionais e vacinas diferenciais. Uma
grande limitao das vacinas tradicionais contra
o SuHV-1 a induo de uma resposta humoral
indistinguvel da resposta induzida em resposta
infeco natural. Como virtualmente todos os
animais infectados com alfaherpesvrus tornam-
se latentemente infectados, os animais soroposi-
tivos so considerados portadores do vrus. As
vacinas diferenciais so as mais utilizadas no
mundo inteiro, por possibilitar, atravs de teste
sorolgico especco, a diferenciao de animais
com anticorpos vacinais daqueles infectados com
o vrus de campo. As vacinas diferenciais dispo-
nveis incluem vacinas com vrus vivo atenuado,
vrus inativado e subunidades virais.
A possibilidade de manipulao gentica
do vrus para a produo de vacinas diferenciais
tem permitido um avano notvel na erradicao
do PRV em vrios pases. Sendo assim, a maioria
dos programas de erradicao de pseudoraiva no
mundo utilizam vacinas com marcadores antig-
nicos que no contm a glicoprotena gE combi-
nada com testes diferenciais para a identicao
dos animais infectados.
A vacina contra a pseudoraiva aprovada atu-
almente pelo Ministrio da Agricultura Pecuria
e Abastecimento para uso no Brasil uma vacina
inativada deletada na glicoprotena E (tambm
chamada GI). Dessa maneira, pode-se identicar
e diferenciar animais infectados com amostras de
campo dos animais vacinados, se submetidos ao
teste de ELISA diferencial para a gE (ausente na
vacina). Todavia, no Estado de Santa Catarina,
onde existe um programa ocial de erradicao
da doena de Aujeszky desde 2001, permitido o
472 Captulo 17
uso de uma vacina com vrus atenuado com de-
leo no gene da gE. Este uso permitido apenas
para sunos destinados ao abate.
Existem vrias estratgias de erradicao da
pseudoraiva, como a eliminao total do rebanho,
teste e remoo com ou sem vacinao, ou vaci-
nao por um determinado perodo de tempo an-
tes da remoo. Os fatores que inuenciam qual
opo escolher basicamente so os seguintes: a
prevalncia de animais infectados no rebanho e
na regio, a necessidade nanceira e estratgica
de eliminar o problema o mais rpido possvel
(barreiras para exportao de carnes e reprodu-
tores) e o custo do programa.
Devido capacidade do SuHV-1 de esta-
belecer infeco latente sem a manifestao de
sinais clnicos, os sunos infectados, mas aparen-
temente sadios, so considerados potenciais dis-
seminadores do vrus. Assim, torna-se cada vez
mais importante que os suinocultores exijam a
certicao sanitria ocial, emitida pelo Minis-
trio da Agricultura, dos rebanhos que fornecem
reprodutores para a sua criao.
6.4 Herpesvrus de eqinos
O EHV-1 membro da subfamlia Alphaher-
pesvirinae, gnero Varicellovirus e se constitui em
um importante agente de aborto em guas. Pelo
fato de ser gentica e antigenicamente relacio-
nado com o herpesvrus eqino tipo 4 (EHV-4,
agente da rinopneumonite eqina), estes dois
vrus eram antigamente considerados subtipos 1
e 2 do EHV-1, respectivamente. Entretanto, dife-
renas genmicas importantes entre os dois sub-
tipos virais, demonstradas pela anlise por restri-
o enzimtica, justicaram a sua reclassicao.
Assim, em 1988, os subtipos 1 e 2 do EHV-1 fo-
ram considerados duas espcies de vrus: EHV-1
e EHV-4.
O EHV-1 possui um genoma de, aproxima-
damente, 145 a 150 kb e, de acordo com a orga-
nizao genmica, enquadra-se no grupo D dos
alfaherpesvrus. O genoma do EHV-1 contm 76
genes descritos at o presente.
A infeco pelo EHV-1 enzotica na maio-
ria das populaes eqinas e uma parcela signi-
cativa dos animais de reas endmicas apresenta
anticorpos contra o agente. Entretanto, a maioria
dos testes sorolgicos no capaz de diferenciar
anticorpos contra EHV-1 e EHV-4, devido ex-
tensa reatividade cruzada entre os dois vrus. As-
sim, a prevalncia da infeco pelo EHV-1, com
base em testes sorolgicos, somente poder ser
determinada com o uso de testes que diferenciem
a resposta imunolgica dirigida a esses dois v-
rus.
O EHV-1 transmitido de forma horizontal,
por contato direto e indireto entre animais suscep-
tveis e animais que esto excretando o vrus. O
vrus excretado durante a infeco aguda e du-
rante episdios de reativao da infeco latente.
Geralmente, a durao e magnitude de excreo
viral so signicativamente superiores durante a
infeco aguda. No entanto, a excreo aps a re-
ativao suciente para permitir a transmisso
do vrus. Por isso, animais latentemente infecta-
dos so importantes fontes de infeco e manu-
teno da infeco nos rebanhos. Os eqinos so
os nicos hospedeiros naturais conhecidos deste
agente e animais de todas as idades podem ser
afetados.
6.4.1.2 Patogenia, sinais clnicos e
patologia
Em guas que abortam, o vrus excretado
junto com os fetos abortados, uidos e restos pla-
centrios, os quais podem conter altos ttulos de
vrus. Os animais susceptveis geralmente adqui-
rem a infeco pelo contato da mucosa respirat-
ria com esses materiais. Com isso, o vrus penetra
e se multiplica inicialmente no epitlio da cavi-
dade nasal, faringe, traquia, brnquios e bron-
quolos, infectando a seguir leuccitos e clulas
endoteliais de vasos sangneos e linfticos. A
infeco, ento, dissemina-se para os linfonodos
locais, a partir dos quais clulas mononucleares
infectadas entram na circulao sangnea, resul-
tando em uma viremia associada a clulas. Em f-
meas prenhes, o vrus alcana o tero e atravessa
Herpesviridae 473
a barreira transplacentria, sendo transferido dos
leuccitos infectados para o endotlio vascular.
Como conseqncia, ocorre infeco de vasos e
tecido uterino em algumas situaes, e de tecidos
fetais em outras. Assim, os abortos podem ser
causados tanto pela infeco e patologias graves
nos tecidos do feto, causando a sua morte e ex-
pulso; como pela produo de vasculite, trom-
bose, infartos dos cotildones e dano isqumico
do endomtrio, o que ocorre pela replicao do
vrus em clulas do endotlio de vasos uterinos.
A infeco respiratria de guas prenhes
freqentemente assintomtica ou acompanhada
de sinais inespeccos. Quando causa infeces
sintomticas, o que pouco freqente, o EHV-1
est associado com sinais respiratrios leves. As
infeces respiratrias vm acompanhadas de au-
mento do volume de linfonodos locais e descarga
nasal serosa, que pode se tornar mucopurulenta
como conseqncia de infeces secundrias bac-
terianas.
Os abortos podem ocorrer a partir do quar-
to ms de gestao, mas acontecem com maior
freqncia a partir do stimo ms. s vezes, os
abortos ocorrem na forma de surtos, tambm
chamados de tempestades de abortos, quando
mais de 50% dos potros podem ser perdidos. Os
fetos geralmente so abortados espontaneamen-
te, junto com a placenta, e esto sempre mortos,
sendo que aqueles abortados antes dos seis me-
ses de gestao esto geralmente autolisados. As
fmeas infectadas na gestao tardia podem parir
potros vivos, mas que so freqentemente anor-
mais, apresentam fraqueza e diculdade respira-
tria e, em geral, morrem dentro de poucos dias
aps o nascimento.
importante observar que nem todas as
amostras de EHV-1 apresentam o mesmo poten-
cial abortignico, e que fatores do hospedeiro,
como o estgio da gestao, tambm inuenciam
no resultado da infeco. Assim, foi demonstrado
que leses no tero de guas infectadas no nal
da gestao podem ser mais graves do que nas
guas infectadas no incio da gestao.
A infeco perinatal nos neonatos resulta
em uma doena fatal generalizada que cursa com
diculdade respiratria e esporadicamente ence-
falite.
Eventualmente o EHV-1 invade o crebro
dos animais infectados, provavelmente da mes-
ma forma que atinge o tero. Ao chegar ao c-
rebro, o vrus replica no endotlio de vasos, em
neurnios e astrcitos, podendo induzir encefa-
lomielite. A doena neurolgica devida ao EHV-1
pouco freqente e pode ou no estar associada
com sinais respiratrios e/ou abortos. Animais
de todas as idades so susceptveis, mas guas
prenhes e potros em amamentao so particu-
larmente afetados. O perodo de incubao nesses
casos de seis a 10 dias. Os sinais clnicos variam
desde uma leve ataxia at o decbito completo,
com paralisia dos membros anteriores e posterio-
res. Animais que apresentam um curso leve ge-
ralmente se recuperam completamente.
Aps a infeco primria, o EHV-1 estabe-
lece infeco latente em tecidos linfides, leuc-
citos perifricos e nos gnglios trigmeos. Situa-
es estressantes, como o desmame, castrao e
transporte, bem como o uso de corticosterides
podem induzir a reativao do vrus. Dessa for-
ma, o vrus pode ser disseminado para o meio
ambiente e contaminar animais susceptveis ou
pode causar infeces recorrentes, resultando em
abortos ou casos de encefalomielite.
Recentemente foi descrita uma nova forma
espordica de infeco pelo EHV-1 em eqinos
jovens, na qual o principal alvo da infeco o
endotlio vascular dos pulmes. Nessa forma da
infeco, a manifestao clnica predominante
diculdade respiratria ou morte sbita.
Os achados patolgicos da infeco pelo
EHV-1 variam de acordo com os tecidos-alvo
da replicao viral. Na infeco respiratria, os
animais podem apresentar leses herpticas nas
membranas mucosas de todos os segmentos do
trato respiratrio superior. No epitlio respira-
trio e centros germinativos dos linfonodos, ob-
serva-se necrose e presena de corpsculos de
incluso.
Nas infeces de guas gestantes, o EHV-
1 se multiplica no endotlio dos vasos uterinos
e causa leses isqumicas, vasculite, trombose,
infartos dos cotildones, levando ao aborto. Os
abortos precoces so caracterizados pela autli-
se extensa do feto. Em abortos mais tardios, uma
srie de leses macroscpicas pode ser observa-
474 Captulo 17
da, como edema subcutneo, edema pulmonar,
esplenomegalia e necrose heptica. As leses his-
topatolgicas so caracterizadas por uma bron-
quiolite necrosante e hepatite. Na mortalidade
perinatal, as principais leses aparecem no apa-
relho respiratrio, com pneumonia intersticial,
atelectasia e edema pulmonar. So observadas
tambm necrose tmica e depleo de linfcitos
tmicos e esplnicos.
Na doena neurolgica, observam-se peque-
nas hemorragias focais distribudas nas menin-
ges, parnquima cerebral e medula. As alteraes
histolgicas no sistema nervoso central incluem
vasculite, congesto, trombose e degenerao is-
qumica.
A imunidade contra o EHV-1, aps a infec-
o respiratria, curta, durando aproximada-
mente trs a quatro meses. A imunidade induzi-
da aps o aborto mais duradoura, e a ocorrncia
repetida de abortos pela mesma fmea rara.
Os potros que mamam o colostro de guas
soropositivas podem apresentar diferentes nveis
de anticorpos protetores. Entretanto, a presena
de anticorpos circulantes pode no ser suciente
para induzir proteo contra a infeco, e a imu-
nidade celular parece desempenhar um papel
importante.
6.4.1.3 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo EHV-1 pode
ser realizado pelo isolamento e identicao viral
a partir de amostras clnicas. As amostras a serem
coletadas e enviadas ao laboratrio incluem o
pulmo, bao, fgado e timo fetais. Suabes nasais,
lquido cfalo-raquidiano, medula e sangue total
tambm podem ser utilizados para o isolamento
viral em caso de encefalomielite (Tabela 17.4). O
EHV-1 capaz de se multiplicar em cultivos ce-
lulares de outras espcies, alm da eqina, o que
auxilia a diferenci-lo do EHV-4, que s se multi-
plica em clulas de origem eqina. Clulas RK-13
(rim de coelhos) e Vero (de primatas) so rotinei-
ramente utilizadas para o isolamento e multipli-
cao do EHV-1 em laboratrios de virologia.
Em cultivos celulares, o EHV-1 produz ECP
tpico de herpesvrus: arredondamento celular,
formao de aglomerados semelhantes a cachos
de uva, produo de focos de destruio celular
e destruio total do tapete. A identicao do
vrus pode ser feita pelo uso de anticorpos mo-
noclonais em testes de IFA ou IPX. Essas tcnicas
tm sido tambm utilizadas para demonstrar a
presena de antgenos virais em cortes de tecidos
congelados. Como alternativa ao isolamento vi-
ral, tcnicas moleculares, como a PCR, podem ser
utilizadas em amostras clnicas.
A deteco de anticorpos no soro de animais
com suspeita de infeco pelo EHV-1 pode ser
realizada atravs das tcnicas de SN, xao de
complemento e ELISA.
A presena de leses teciduais caractersti-
cas, como vasculite, pode ser sugestiva da infec-
o pelo EHV-1.
Em propriedades livres, o controle deve ba-
sear-se em medidas preventivas para impedir a
introduo do vrus no rebanho. Alm de mo-
nitoramento sorolgico peridico dos animais,
quaisquer animais anexados ao plantel devem ser
testados previamente para evitar a introduo de
portadores. Em propriedades que possuem ani-
mais soropositivos, alm dessas medidas, deve-
se tentar manter os animais soropositivos sepa-
rados dos demais, evitar a introduo de animais
sem o uso de quarentena (trs semanas), separar
as guas em gestao e guas com potros dos de-
mais animais, e isolar do restante do rebanho as
guas que abortaram. Alm disso, deve-se mi-
nimizar a presena de fatores estressantes, tais
como desnutrio, superpopulao e transporte
de fmeas em estado avanado de gestao.
Vacinas inativadas e vivas atenuadas tm
sido utilizadas na preveno da infeco pelo
EHV-1. Experimentos tm demonstrado que as
vacinas inativadas induzem melhor proteo
contra abortos do que as vacinas vivas atenuadas.
As vacinas inativadas devem ser aplicadas aos 5,
7 e 9 meses de gestao. Revacinaes anuais so
recomendadas.
Herpesviridae 475
O exantema coital eqino causado pelo
herpesvrus eqino tipo 3 (EHV-3). Esse vrus
tambm est classicado na subfamlia Alphaher-
pesvirinae, gnero Varicellovirus e apresenta algu-
ma similaridade antignica com o EHV-1. Apesar
dessas semelhanas antignicas, no h evidn-
cias de reatividade sorolgica cruzada deste v-
rus com o EHV-1 ou com o EHV-4 em testes de
SN. O exantema coital uma enfermidade aguda,
geralmente leve, caracterizada pela formao de
leses vesiculares, pustulares e exsudativas na
mucosa genital e perineal especialmente de fme-
as. Eventualmente os lbios e a mucosa nasal so
tambm afetados.
O exantema coital eqino apresenta ampla
distribuio em populaes de eqinos, ocorren-
do de forma endmica na maioria dos pases que
possuem rebanhos numerosos. A transmisso do
vrus ocorre principalmente por contato direto,
durante o coito, e, possivelmente, o agente pode
ser transmitido tambm por vetores mecnicos,
como moscas contaminadas com secrees vagi-
nais.
e patologia
O perodo de incubao da doena varia de
dois a cinco dias, perodo em que o vrus replica
no epitlio da mucosa genital. A replicao leva
formao de vesculas, ppulas, pstulas e l-
ceras na mucosa genital externa. Na ausncia de
complicaes, a cura total ocorre em at duas se-
manas, mas os animais permanecem portadores
latentes do vrus.
A replicao viral na mucosa genital resulta
na formao de vesculas, as quais evoluem para
pstulas e lceras que se localizam na vulva, vagi-
na, pnis e prepcio. As lceras normalmente ci-
catrizam em 14 a 21 dias. Eventualmente, quando
as leses se formam sobre o epitlio pigmentado,
manchas esbranquiadas podem ser observadas
nos locais em que as lceras se desenvolveram.
As leses genitais primrias causadas pelo vrus
podem ser contaminadas por bactrias, originan-
do infeces secundrias que, se no complica-
das, so resolvidas em at duas semanas. Embora
leses extensas possam ser observadas, a infeco
se apresenta freqentemente de forma subclnica
ou leve e, muito raramente, ocorrem sinais clni-
cos sistmicos como febre ou anorexia.
Vrus Doena (condio)
Herpesvrus eqino tipo 1
(EHV-1)
Material para diagnstico
Abortos, infeco urogenital,
doena respiratria.
Tecidos fetais, suabes genitais ou nasais,
soro pareado.
(EHV-2) Conjuntivit , e faringite Suabes conjuntivais e farngeos.
(EHV-3)
Doena venrea em guas
e garanhes.
Suabes das leses, soro pareado.
(EHV-4)
Doena respiratria aguda
em animais jovens, abortos.
Suabes farngeos, tecidos fetais,
soro pareado.
Tabela17.4. Manifestaes clnicas e material para diagnsticonas herpesviroses deeqinos
Fonte: adaptada de Evermann (1992).
476 Captulo 17
Apesar de ter sido demonstrado que ino-
culaes experimentais intra-uterinas levam ao
aborto, o EHV-3 geralmente no est associado
com falhas reprodutivas em infeces naturais.
Entretanto, as leses na mucosa genital so dolo-
ridas, o que pode diminuir a libido e levar recu-
sa a monta pelos reprodutores.
A exemplo dos outros herpesvrus, todos os
animais infectados com o EHV-3 se tornam porta-
dores da infeco latente, carreando o vrus pelo
restante da vida. A reativao viral pode ocorrer
ocasionalmente, levando excreo do vrus e
possvel infeco de outros animais.
6.4.2.3 Diagnstico
O diagnstico laboratorial da infeco pelo
EHV-3 pode ser realizado pelo uso de testes soro-
lgicos (SN) pareados ou pelo isolamento e iden-
ticao do vrus a partir de secrees e raspados
da mucosa afetada (ver Tabela 17.4). Suabes cole-
tados de leses genitais ou orais so submetidos
ao isolamento viral em clulas de origem eqina.
Deve-se ressaltar que vrios isolados do vrus so
temperatura-sensveis, dessa forma, os cultivos
celulares inoculados com o material suspeito de-
vem ser mantidos a 33-34C. A identicao do
vrus por IFA ou IPX deve ser realizada com cau-
tela, pois o vrus compartilha alguns determinan-
tes antignicos com o EHV-1. Assim, a identica-
o denitiva pode ser obtida pela neutralizao
com soro hiperimune especco.
Em propriedades livres, medidas preven-
tivas devem ser adotadas para impedir a intro-
duo do agente. Dentre essas, recomenda-se o
teste de reprodutores a serem introduzidos no
rebanho. Como forma de manter a condio sani-
tria do rebanho, apenas animais soronegativos
devem ser incorporados ao plantel. Na ocorrn-
cia de casos clnicos compatveis com o EHV-3,
o diagnstico deve diferenci-lo do EHV-1. Uma
vez conrmada a etiologia, recomenda-se o isola-
mento e descanso sexual dos animais afetados.
No existem vacinas disponveis contra o
EHV-3. Os animais afetados devem ser isolados,
e os reprodutores devem ser removidos do servi-
o at que as leses tenham desaparecido. Trata-
mento tpico para prevenir a ocorrncia de infec-
es secundrias pode ser utilizado.
A rinopneumonite eqina causada pelo
herpesvrus eqino tipo 4 (EHV-4), que tambm
pertence subfamlia Alphaherpesvirinae, gnero
Varicellovirus. Como mencionado anteriormente,
esse vrus apresenta uma estreita relao genti-
ca e antignica com o herpesvrus eqino tipo 1
(EHV-1, agente do aborto viral eqino). O EHV-
4 um dos principais agentes virais associados
com infeces respiratrias de eqinos.
A infeco pelo EHV-4 apresenta-se dissemi-
nada nas populaes de eqinos, e uma grande
parcela dos animais apresenta anticorpos contra
o vrus. Cabe ressaltar, no entanto, que os anti-
corpos contra o EHV-4 no podem ser distingui-
dos daqueles direcionados contra o EHV-1 por
testes sorolgicos de rotina. Assim, no se pode
saber, com certeza, qual a parcela dos animais
soropositivos nestes testes foi exposta a cada um
dos agentes. Ou seja, no total de animais soropo-
sitivos contra o herpesvrus eqino, deve-se con-
siderar que uma parcela pode ter sido infectada
com cada um destes vrus, alm de possveis in-
feces mistas.
Durante a infeco respiratria aguda, o
vrus excretado em secrees nasais e expecto-
raes e pode ser transmitido por contato direto
ou indireto. A transmisso por aerossis pode
tambm ocorrer, mas depende da quantidade de
vrus excretada, das condies climticas (tempe-
ratura, umidade, ventos) e da distncia entre os
animais. A faixa etria mais freqentemente afe-
tada pela infeco de potros de dois meses a um
ano de idade.
Herpesviridae 477
e patologia
Aps a penetrao pela via respiratria,
o vrus se multiplica no epitlio nasal, faringe,
traquia e brnquios e, logo aps, dissemina-se
para os linfonodos regionais. Durante a infeco
primria, os animais jovens podem desenvolver
leses erosivas caractersticas na mucosa respi-
ratria. Em infeces agudas, corpsculos de
incluso e necrose do epitlio respiratrio e dos
centros germinativos dos linfonodos regionais
podem ser observados.
A infeco aguda seguida do estabeleci-
mento de infeco latente nos gnglios trig meos,
e o vrus pode ser reativado periodicamente, ge-
ralmente em situaes ligadas ao estresse. Assim,
animais soropositivos so considerados carrea-
dores e potenciais disseminadores do vrus.
Embora seja uma das infeces virais res-
piratrias mais comuns de eqinos, a infeco
geralmente acompanhada de sinais leves a mo-
derados. Os sinais clnicos mais freqentes so:
febre, anorexia, aumento de volume dos linfono-
dos regionais, rinite e descarga nasal. A descarga
nasal abundante e, inicialmente, apresenta-se
serosa, passando a mucopurulenta com a ocor-
rncia de infeces bacterianas secundrias. Os
sinais so observados aps um perodo de in-
cubao de, aproximadamente, dois a dez dias.
Em infeces no complicadas, os sinais clnicos
persistem por dois a sete dias. Eventualmente
pode ocorrer broncopneumonia grave em ani-
mais mais jovens, o que pode resultar em alguma
mortalidade. Esses casos esto associados com
condies de superlotao, higiene inadequada e
presena de infeces secundrias graves. Em ca-
sos raros, a infeco de fmeas em gestao pelo
EHV-4 pode resultar em abortos.
6.4.3.3 Diagnstico
O diagnstico de infeces respiratrias em
eqinos deve necessariamente considerar o EHV-
4 como um dos agentes suspeitos (ver Tabela
17.4). No entanto, a sintomatologia e o histrico
so apenas presuntivos, pois outros agentes po-
dem estar envolvidos no quadro clnico. Assim,
deve-se proceder a investigao etiolgica com o
auxlio de testes laboratoriais. Em geral, pode-se
recorrer ao isolamento e identicao do vrus
em amostras clnicas ou sorologia pareada, com
amostras coletadas durante a fase aguda e aps a
recuperao clnica. Para o isolamento, so reco-
mendadas amostras de secrees nasais (coleta-
das com suabes) ou sangue total, dando-se pre-
ferncia para as secrees. O isolamento deve ser
realizado em clulas primrias ou de linhagem
de origem eqina. A diferenciao entre EHV-1 e
EHV-4 pode ser obtida pela inoculao do mate-
rial suspeito em clulas eqinas (ED, derme eqi-
na) e RK-13 (rim de coelhos). O EHV-1 capaz de
replicar e produzir ECP em ambas as linhagens,
enquanto o EHV-4 somente se multiplica nas c-
lulas da espcie homloga.
Os testes sorolgicos de eleio so a SN e o
ELISA. A SN pode ser realizada para vericar o
aumento do ttulo de anticorpos entre a fase agu-
da e a convalescena e, assim, conrmar a etio-
logia do evento clnico. Recentemente, um teste
de ELISA foi desenvolvido para diferenciar entre
anticorpos contra o EHV-1 e EHV-4.
As medidas de controle so basicamente as
mesmas indicadas para os outros herpesvrus de
eqinos e envolvem uma mescla de medidas pre-
ventivas (para evitar a introduo do agente ou
de animais infectados no rebanho) com medidas
para reduzir as chances de transmisso entre ani-
mais do rebanho. Animais adquiridos e aqueles
que participaram de exposies e/ou competi-
es devem ser submetidos quarentena no seu
retorno para prevenir a introduo do agente.
Existem vacinas inativadas e atenuadas con-
tra o EHV-4, algumas delas bivalentes (contendo
tambm o EHV-1). As vacinas devem ser admi-
nistradas inicialmente aos trs ou quatro meses
de idade, seguidas de reforos peridicos, espe-
cialmente durante a idade jovem, quando os ani-
mais so mais susceptveis.
478 Captulo 17
6.5 Herpesvrus de ces
6.5.1 Herpesvrus canino tipo 1
O herpesvrus canino tipo 1 (CaHV-1) tam-
bm classicado na subfamlia Alphaherpesvi-
rinae, gnero Varicellovirus. Apenas um sorotipo
viral foi identicado at o presente, e a variao
antignica entre isolados de campo pequena. O
vrus replica in vitro somente em clulas prim-
rias ou de linhagens de origem canina. Quando
cultivado nessas clulas, o vrus produz ECP bem
evidente e alguns isolados induzem a formao
de sinccios.
A infeco pelo CaHV-1 est distribuda
mundialmente em caninos domsticos e tambm
em candeos de vida selvagem. A doena causa-
da pelo vrus ocorre principalmente em lhotes
de at duas semanas de idade. Estudos de soro-
prevalncia so limitados, mas demonstram que
entre 30 a 100% dos ces domsticos apresentam
anticorpos contra o CaHV-1, indicando a ampla
distribuio do vrus entre os ces.
A transmisso do CaHV-1 ocorre pelo con-
tato direto ou indireto dos neonatos com secre-
es oro-nasais e vaginais durante ou logo aps
o parto. A transmisso pelo coito, assim como in-
feces intra-uterinas, tambm podem ocorrer.
Aps a resoluo da infeco primria, ocor-
re o estabelecimento de infeces latentes, que
persistem por toda a vida do animal. Os animais
latentemente infectados podem periodicamente
excretar vrus no ambiente durante os episdios
de reativao. Nessas ocasies, o vrus pode ser
transmitido para animais susceptveis.
e patologia
O vrus excretado pelas fmeas durante ou
logo aps o parto contamina os neonatos, nos
quais o vrus replica na mucosa nasal, tonsilas
e faringe. Nestes animais, pode ocorrer viremia
associada a clulas (moncitos), seguida de repli-
cao viral em rgos como o fgado, rins, tecidos
linfticos, pulmes e sistema nervoso central. A
infeco fatal quando o vrus infecta neonatos
que no receberam imunidade passiva das mes.
Nesses casos, a morte ocorre com maior freqn-
cia em animais com idade de uma e quatro se-
manas. Geralmente a fmea infecta a sua ninhada
somente uma vez, quando, provavelmente, no
transfere imunidade humoral suciente para os
seus lhotes.
A infeco de animais de mais de duas sema-
nas de idade raramente fatal e resulta no desen-
volvimento de infeces leves ou inaparentes.
O perodo de incubao da doena de 6
a 10 dias, e a durao do perodo clnico pode
ser bastante curta (um a trs dias em neonatos
sem imunidade). Os sinais clnicos observados
so: anorexia, dispnia, dor palpao abdomi-
nal, incoordenao motora e diarria. Pode ha-
ver descarga nasal hemorrgica e petquias nas
mucosas. Em geral, no se observa elevao de
temperatura. A mortalidade da ninhada pode ser
de 100%, dependendo da idade em que ocorreu a
infeco e da presena anticorpos maternos.
O vrus pode ainda atravessar a barrei-
ra transplacentria e infectar os fetos durante a
gestao, causando abortos ou o nascimento de
lhotes fracos e com diculdade no desenvolvi-
mento.
O CaHV-1 pode tambm causar distrbios
respiratrios em animais adultos, principalmente
quando associado com outros agentes infeccio-
sos, como a Bordetella bronchiseptica, vrus da ci-
nomose (CDV), e vrus da parainuenza canina
(cPI-2v).
Em animais adultos, a infeco pode ainda
causar infertilidade. As leses observadas em
fmeas maduras esto caracterizadas principal-
mente por leses vesiculares e hemorragias vagi-
nais, que so observadas principalmente durante
o proestro. Os mesmos tipos de leses podem ser
observados na mucosa genital masculina.
Nos neonatos doentes, as leses observadas
na necropsia afetam principalmente os rins, os
quais se apresentam hemorrgicos e necrticos.
Corpsculos de incluso intranucleares podem
ser observados em reas necrticas. Alm dos
rins, este tipo de leso pode ocorrer nos pulmes,
fgado, bao e intestino. Pode ocorrer aumento
de volume de linfonodos, e necrose de placenta
freqentemente observada em fmeas prenhes
infectadas.
Herpesviridae 479
Os ces infectados permanecem latentemen-
te infectados. A infeco latente se localiza nos
gnglios trigmeos ou lombo-sacrais. A reativa-
o viral nas infeces latentes pode ser induzi-
da por situaes estressantes, como treinamento,
transporte, introduo de novos ces na proprie-
dade ou pelo uso experimental de medicamentos
imunodepressores como os glicocorticides.
6.5.1.3 Diagnstico
A presena de leses caractersticas, como
petquias, na superfcie dos rins e edema pulmo-
nar, juntamente com a observao de corpsculos
de incluso intracitoplasmticos, so indicativos
da infeco pelo CaHV-1.
O diagnstico denitivo da infeco feito
pela demonstrao de antgenos virais em cortes
de tecido atravs da tcnica de IFA ou pelo iso-
lamento viral. O isolamento pode ser realizado
em clulas de origem canina, a partir de amostras
de tecidos como pulmes e rins de animais afe-
tados.
Medidas para reduzir o estresse e minimizar
o contato de fmeas prenhes com outros animais
so indicadas para a preveno da ocorrncia da
doena. Os lhotes recm-nascidos devem ser
mantidos em locais abrigados e sob temperatura
adequada, evitando-se a exposio a baixas tem-
peraturas.
Uma vacina de subunidades est disponvel
na Europa desde 2003. A vacina especialmente
indicada para fmeas durante a gestao e con-
siste de glicoprotenas virais puricadas associa-
das com adjuvante oleoso. Essa vacina demons-
trou conferir boa proteo aos neonatos quando
as mes so vacinadas duas vezes durante a ges-
tao. As cadelas devem ser vacinadas durante o
cio ou em fases iniciais da gestao e revacinadas
uma a duas semanas antes do parto.
Uma vacina atenuada, cold adapted (vrus
que replica sob temperaturas abaixo da tempe-
ratura corporal), foi recentemente desenvolvida,
mas ainda no est disponvel no comrcio. Ou-
tras abordagens vacinais, como a utilizao de
poxvrus avirios como vetores, tm sido testa-
das, porm sem resultados promissores.
6.6 Herpesvrus de felinos
6.6.1 Herpesvrus felino tipo 1
O herpesvrus felino (FeHV-1) um alfaher-
pesvrus que infecta o trato respiratrio superior
de gatos domsticos, produzindo uma doena co-
nhecida como rinotraquete viral felina (FVR). As
doenas do trato respiratrio dos felinos so fre-
qentes em abrigos e gatis, e seguem ocorrendo
mesmo com o uso disseminado de vacinas contra
os principais agentes envolvidos: o FeHV-1, o
calicivrus felino (FCV) e bactrias como a Chla-
mydophila felis e a Bordetella bronchiseptica. Alguns
estudos demonstram que 80 a 90% dos casos de
doena do trato respiratrio superior dos felinos
so causados pelo FeHV-1 e/ou pelo FCV.
A infeco pelo FHV-1 distribuda mun-
dialmente. Anticorpos contra o agente podem ser
detectados em mais de 70% dos gatos de criaes
ou abrigos. Nos gatos domsticos criados com
pouco contato com outros animais, a prevalncia
de aproximadamente 50%. No Brasil, a ocor-
rncia da infeco e doena tem sido relatada em
vrias regies. Sorologia positiva tambm j foi
demonstrada entre felinos selvagens criados em
cativeiro, que tambm so susceptveis ao vrus.
A transmisso do agente ocorre principal-
mente pelo contato direto ou indireto com descar-
gas nasais. O vrus pode ser transmitido tambm
por aerossis e, com menor freqncia, por fmi-
tes contaminados. A mortalidade maior entre
lhotes com menos de seis meses de idade. Gatos
que sobrevivem infeco aguda desenvolvem a
infeco latente e a reativao da infeco, permi-
tindo a transmisso do vrus a outros animais. Os
gatos portadores da infeco latente so os reser-
vatrios do FeHV-1 e constituem a principal fon-
te de disseminao do agente nos gatis e abrigos
de animais.
480 Captulo 17
e patologia
Aps a penetrao pela via nasal, o vrus
replica nas clulas epiteliais do trato respiratrio
superior e atinge a conjuntiva ocular. Aparente-
mente no ocorre viremia e a infeco parece ser
restrita ao trato respiratrio superior. O perodo
de incubao de 24 a 48 horas, e os sinais clnicos
podem ser mais facilmente observados aps trs
a cinco dias da infeco, permanecendo por duas
a trs semanas. Inicialmente observa-se descarga
nasal serosa, que pode progredir para mucopu-
rulenta pela colonizao bacteriana da mucosa.
Outros sinais clnicos incluem descarga ocular,
conjuntivite, ceratite, ulcerao da crnea, hiper-
salivao, lceras orais, desidratao, tosse, disp-
nia e anorexia. Infeces bacterianas secundrias
podem produzir broncopneumonia e septicemia,
principalmente em lhotes, podendo resultar na
morte. Fmeas prenhes podem, ocasionalmente,
abortar devido toxemia e hipertermia.
As leses macroscpicas incluem necrose
dos epitlios nasal, farngeo, da epiglote, laringe,
traquia e tonsilas. Broncopneumonia, pneumo-
nite intersticial, necrose focal, acmulo de clulas
inamatrias e exsudato brinoso nos alvolos
tambm podem ser observados. Microscopica-
mente, podem ser observadas incluses intranu-
cleares nas clulas epiteliais.
6.6.1.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo pode ser estabe-
lecido pelo histrico e pelos sinais clnicos. No
entanto, deve-se buscar conrmao laboratorial,
pois outros agentes causam doena respiratria
em felinos.
O isolamento do vrus pode ser realizado
pela inoculao de secrees nasais, conjuntivais
e farngeas ou, ainda, de macerados de mucosa
farngea, ocular ou nasal, em clulas de linhagem
ou primrias de origem felina. O FeHV-1 produz
efeito citoptico caracterstico dos herpesvrus,
com arredondamento e desprendimento celular
do tapete, formao de aglomerados de clulas
semelhantes a cachos de uva, focos de destrui-
o e, nalmente, destruio do tapete celular.
O calicivrus felino (FCV) tambm produz efeito
citoptico em cultivos celulares e, por estar fre-
qentemente associado com doena respiratria,
deve ser distinguido do FeHV. Para isso, podem-
se utilizar anticorpos especcos para um dos
agentes nas tcnicas de IFA ou IPX, ou realizar-se
neutralizao viral com anti-soro especco.
A deteco de antgenos virais em tecidos
por IFA e a deteco de anticorpos por sorologia
pareada tambm podem ser teis no diagnstico
laboratorial.
A FVR um problema sanitrio importan-
te em abrigos, gatis e casas com criao mltipla
de gatos, onde o controle nem sempre obtido
somente com a utilizao de vacinas. Algumas
medidas recomendadas incluem o tratamento in-
dividual de animais infectados, a implementao
de um protocolo de vacinao macia e o isola-
mento de ninhadas de lhotes susceptveis. Dro-
gas antivirais utilizadas contra o vrus do herpes
simplex humano (HSV), como o Aciclovir, no
so efetivas contra o FeHV-1. Portanto, o trata-
mento da FVR somente de suporte.
Vacinas inativadas e uma vacina atenuada
bivalente contra o FeHV-1 e o FCV esto dispo-
nveis comercialmente. Essas vacinas induzem
uma resposta imunolgica que no impede a
infeco, porm reduz a severidade da doena.
Recomenda-se a primovacinao de lhotes com
nove semanas de idade e uma segunda aplicao
trs a quatro semanas aps. Reforos a cada trs
anos so recomendados. As vacinas podem ser
aplicadas pela via parenteral ou intranasal. A via
intranasal apresenta vantagens como a estimula-
o rpida de proteo, ausncia de interferncia
da imunidade passiva e estmulo de imunidade
local (IgA) no principal stio de infeco.
Uma vacina experimental, contendo um
mutante deletado do FeHV-1, no qual se inseriu
o gene da protena de capsdeo do FCV, est em
fase de desenvolvimento e testes.
Herpesviridae 481
6.7 Herpesvrus de aves
6.7.1 Vrus da doena de Marek
A doena de Marek (MD) uma doena
linfoproliferativa altamente infecciosa que afeta
galinhas. As primeiras observaes relacionadas
com esta enfermidade foram feitas pelo mdico
veterinrio Jzsef Marek, em 1907, e relataram
o desenvolvimento de polineurite e paralisia,
resultantes de inltrao linfide em nervos pe-
rifricos. Posteriormente observou-se que a po-
lineurite e os linfomas viscerais, ocasionalmente
observados nas aves, tambm estavam associados
com a mesma doena. O agente etiolgico dessa
enfermidade foi identicado nos anos 1960.
O agente da MD (Mareks disease vrus, MDV),
um membro da subfamlia Alphaherpesvirinae e
pertence ao gnero Mardivirus. O vrus foi inicial-
mente classicado como um Gammaherpesvirus
pela sua habilidade de produzir tumores linfi-
des em galinhas. Posteriormente foi reclassica-
do como um Alphaherpesvirus com base em sua
estrutura, genoma e rpida replicao em cultivo
celular. Trs sorotipos do MDV so conhecidos
com base em anlise de precipitao em gel de
gar, SN e PCR. Os vrus do sorotipo 1 (MDV-1)
incluem os MDVs oncognicos e seus variantes
atenuados em cultivo celular, entre estes algu-
mas cepas vacinais. Dentro do sorotipo 2 (MDV-
2), encontram-se os vrus no-oncognicos, que
ocorrem naturalmente em galinhas; e, no soroti-
po 3, so agrupados os vrus no-oncognicos de
perus (turkey herpesviruses, HVT).
As amostras de campo do MDV-1 so agru-
padas em quatro pattipos com base na sua ca-
pacidade de causar tumores em aves. As amos-
tras do MDV-1 podem ser consideradas como:
a) cepas baixa patogenicidade (mild, mMDV), b)
cepas de baixa virulncia (virulent, vMDV), c) ce-
pas de alta virulncia (very virulent, vvMDV) e d)
cepas de altssima virulncia (very virulent plus,
vv+MDV).
A produo de aves atualmente desenvol-
vida de forma bastante intensiva, o que favorece
a rpida disseminao de agentes infecciosos em
uma criao. A MD altamente contagiosa, e a
infeco ocorre por inalao de poeira contami-
nada com o vrus presente nos criatrios. O MDV
pode persistir por longos perodos no meio am-
biente e to ubquo que, virtualmente, todas as
aves domsticas do mundo acabam entrando em
contato com o agente em alguma fase de suas vi-
das. A infeco nem sempre induz manifestaes
clnicas, o que diculta a determinao da pre-
valncia e incidncia da infeco. A enfermida-
de ocorre comumente em galinhas, mas tambm
tm sido descrita em perus, codornas e faises.
A partir dos anos 1960, a despeito do uso
de vacinas, surtos de MD, causados por amos-
tras cada vez mais virulentas, vm ocorrendo no
mundo todo. No Brasil, os frangos criados indus-
trialmente recebem uma vacina contra MD com
a cepa HVT no primeiro dia de vida. As aves de
ciclo longo, como poedeiras, matrizes e avs, re-
cebem uma combinao de vacinas dos sorotipos
1 (CVI 988/Rispens) e 3 (HVT). A vacinao re-
duz, mas no impede a infeco nem a excreo
viral, o que favorece a seleo de cepas mutantes
e, conseqentemente, problemas para o controle
desta enfermidade. O MDV continua sendo um
importante patgeno na produo avcola e tem
sido intensivamente estudado por pesquisadores
no mundo, porm pouco estudado no Brasil.
e patologia
A patogenia da MD complexa e ainda
no totalmente compreendida. A primeira fase
da infeco inicia com a inalao do vrus pelo
hospedeiro. Inicialmente, o vrus replica nas c-
lulas epiteliais do trato respiratrio e, subseqen-
temente, infecta macrfagos locais e/ou clu-
las dendrticas. A partir dos pulmes, o vrus
transportado sistemicamente para o bao, timo,
482 Captulo 17
e bursa de Fabricius (BF), onde pode ser detecta-
do j 24 horas ps-infeco (pi). A partir desses
rgos, o vrus infecta os linfcitos B e T e atinge
um pico de replicao entre os dias 3 e 7 pi. Essas
infeces so citolticas e causam atroa da BF e
timo, resultando em grave imunossupresso.
Aps a fase citoltica inicial, a infeco pas-
sa fase latente em linfcitos T a partir dos dias
6 e 8 pi. Durante esse perodo, o vrus pode ser
transportado por linfcitos at a pele, onde uma
infeco produtiva ocorre nos folculos das pe-
nas. O MDV um vrus estritamente associado
com clulas, e partculas virais livres somente so
produzidas pela replicao nos folculos das pe-
nas. A partir dessa replicao, o agente excreta-
do para o ambiente, geralmente entre os dias 10
e 14 pi.
A terceira fase da infeco consiste em uma
infeco citoltica secundria que envolve tam-
bm o sistema nervoso. Nessa fase, leses ina-
matrias importantes podem ser detectadas no
crebro e nos nervos de galinhas adultas, por
volta dos dias 9 a 15 pi. Uma quarta fase da in-
feco caracterizada pelo desenvolvimento de
linfomas malignos de linfcitos T que se formam
a partir do dia 12. Essa diviso da patogenia em
quatro fases pode no ser to clara quando h
infeco pelas amostras vv+ e quando a latncia
no estabelecida.
Linfcitos T, transformados pelo vrus e li-
nhagens celulares derivadas de linfomas prim-
rios, mantm os genomas virais integrados ao
DNA celular, um aspecto nico entre os herpes-
vrus. Nas infeces latentes com os demais her-
pesvrus, o genoma latente permanece em uma
forma epissomal no ncleo das clulas hospedei-
ras. O genoma do MDV contm vrios oncoge-
nes, destacando-se o que codica a protena Meq,
membro da famlia de oncogenes Jun/Fos. A com-
posio gentica do hospedeiro inui decisiva-
mente no resultado e gravidade da infeco pelo
MDV. Protenas do complexo maior de histocom-
patibilidade (MHC) so fortemente associadas
resistncia ou susceptibilidade gentica ao vrus.
A polineurite crnica, paralisia transitria
e os linfomas viscerais, observados inicialmente
como sinais e leses caractersticos da MD, esto
aos poucos ocorrendo com menor freqncia. As-
sim, os sinais clnicos muito graves causados pela
forma aguda, relacionada com amostras vv+ tm
sido cada vez mais comuns. Nos ltimos 20 anos,
os sinais neurolgicos so dominantes e apare-
cem na forma de paralisia transitria na maioria
das linhagens de galinhas. As amostras virais vv+
podem causar uma morbidade de mais de 90%
e mortalidade devido a danos cerebrais graves.
Nesses casos, a polineurite perifrica e os linfo-
mas podem estar ausentes.
As leses observadas na doena resultam,
em grande parte, da inltrao e proliferao dos
linfcitos T em tecidos, podendo estar associadas
com leucemia, e tambm so conseqncias da
resposta inamatria e lise de clulas no-linfi-
des pela replicao viral.
As leses encontradas em vsceras e gna-
das correspondem a reas de leses linfomato-
sas, em geral pequenas e difusas, e ocorrem es-
pecialmente em aves que desenvolvem a forma
aguda da infeco. Esses rgos se apresentam
com volume aumentado e colorao acinzentada
difusa. As leses linfomatosas no so facilmen-
te distinguveis das leses induzidas pelo vrus
da leucose aviria. Leses oculares relacionadas
com inltrao linfocitria tambm podem ocor-
rer, de forma que h opacidade de crnea. Pele,
msculo e pr-ventrculo podem ser tambm afe-
tados pelos linfomas. A Tabela 17.5 apresenta as
semelhanas e diferenas epidemiolgicas e clni-
co-patolgicas entre a MD e a leucose aviria.
6.7.1.3 Diagnstico
A disponibilidade de AcMs que reagem so-
mente contra o MDV (e no contra o HVT) um
pr-requisito para a identicao de tecidos ou
clulas infectadas com este vrus. Esses AcMs po-
dem ser utilizados em tcnicas de IFA ou IPX. Em
tecidos infectados com o MDV, independente da
linhagem da ave ou virulncia da amostra, quan-
tidades detectveis de antgenos virais podem ser
identicadas na BF, timo ou bao, a partir do dia
3 pi. Os mesmos testes podem ser utilizados para
identicar antgenos do MDV em cultivos celula-
res inoculados com material suspeito, quando o
ECP visvel.
Herpesviridae 483
Caracterstica
Doena de Marek
Idade afetada
Leucose aviria
2 - 7 meses 4 - 10 meses (+ de 16 semanas)
Paralisias Comuns Au s e n t e s
Leses macroscpicas
Fgado
Nervos
Pele
Bursa (tumores)
Bursa (atrofia)
Intestinos
Corao
Comum
Comum
Comum
Raro
Comum
Raro
Comum
Comum
Ausente
Raro
Comum
Raro
Comum
Raro
Leses microscpicas
Clulas pleomrficas
Cls. blsticas
uniformes
Infiltrado na ris
Tumor na bursa
Sim
No
Sim
Interfolicular
No
Sim
No
Intrafolicular
Tabela 17.5. Principais diferenas clnicas e patolgicas entre a doena de Marek e a leucose aviria.
Como o MDV estritamente associado a
clulas, e partculas virais livres so produzidas
somente nos folculos das penas a partir do dia
12 pi, o isolamento viral nas fases mais iniciais da
infeco envolve a passagem cuidadosa de clu-
las intactas em clulas de rim de galinha (CKC)
ou de broblastos de embrio de galinhas (CEF).
O vrus tambm pode ser isolado da capa ogs-
tica ou de macerados de bao pela inoculao em
co-cultivos celulares ou de ovos embrionados.
A inoculao pode ser feita na membrana crio-
alantide ou no saco da gema, e os embries de-
vem ter aproximadamente quatro dias. A presen-
a do vrus pode ser demonstrada pela deteco
de antgenos por IFA.
Um ensaio imunoenzimtico (ELISA) para a
deteco de anticorpos antivirais, desenvolvido
nos anos de 1980, foi mais sensvel do que tes-
tes de IFI utilizados anteriormente. Este tipo de
ELISA pode ainda ser til tambm para avaliar a
resposta humoral de animais vacinados. A infec-
o com as amostras mais virulentas induz uma
resposta de anticorpos pobre e temporria, o que,
provavelmente, ocorre em conseqncia da lise
de linfcitos B que se desenvolve durante a in-
feco.
O diagnstico da MD tambm pode ser re-
alizado pela tcnica de PCR, utilizando DNA ex-
trado de linfcitos. Amostras clnicas podem ser
positivas a partir do primeiro dia ps-infeco.
Em estgios mais avanados da enfermidade,
quando os folculos das penas esto produzindo
partculas virais, as pontas das penas se consti-
tuem em uma fonte adequada para extrao de
DNA viral.
A amplicao de seqncias do MDV por
PCR um mtodo direto de deteco e to sen-
svel quanto o isolamento em co-cultivo de capa
ogstica em CEFs. Entretanto, PCR extrema-
mente simples de executar, e os resultados po-
dem ser obtidos em poucas horas. Ao contrrio
do isolamento, que depende da presena de vrus
viveis, as amostras para a anlise do PCR no
precisam ser congeladas ou protegidas de inati-
vao. Finalmente, a tcnica de PCR representa o
nico teste rpido e sensvel para detectar a pre-
sena de MDV atenuado e patognico nas mes-
mas amostras.

Aps a identicao do MDV como o agente
etiolgico da MD, os vrus MDV-2 e HVT (que
no causam doena em galinhas) comearam a
ser utilizados em vacinas vivas heterlogas con-
tra a MD. A partir de ento, a incidncia da MD
reduziu-se em 99% e este foi o primeiro exemplo
de uma vacina ecaz contra um vrus que induz
484 Captulo 17
tumores. Entretanto, com o surgimento de amos-
tras mais virulentas do MDV, tornou-se comum
o uso combinado de vacinas mistas contendo o
MDV-2 e HVT. Quando algumas amostras ain-
da mais virulentas surgiram, a primeira amostra
apatognica de MDV (CVI 988-Rispens) comeou
a ser utilizada em uma vacina viva modicada.
Atualmente esta amostra vem sendo amplamente
utilizada na confeco de vacinas contra a MD.
Uma das principais restries das vacinas
disponveis contra a MD a sua incapacidade
de induzir imunidade esterilizante. Conseqen-
temente galinhas previamente vacinadas podem
ser infectadas e disseminar o vrus de campo a
outros animais. Esta provavelmente a fonte de
amostras de MDV virulento que circula entre
populaes de galinhas e pode contribuir para o
surgimento de amostras cada vez mais virulen-
tas.
Partculas virais do MDV podem se man-
ter viveis por longos perodos na poeira dos
galpes, mas so sensveis ao tratamento com
detergentes, etanol e isopropanol a 70%. O uso
de prticas de higiene do ambiente e das pesso-
as que tm acesso s aves pode tambm limitar
a introduo e disseminao do agente nos cria-
trios. Alm disso, o uso de quarentena e teste
de aves de reposio podem tambm diminuir
a presso de infeco e prevenir a ocorrncia de
novos surtos.
6.7.2 Vrus da laringotraquete infecciosa
A laringotraquete infecciosa das aves (LT)
uma doena respiratria aguda que afeta ga-
linhas, faises e perus. O agente etiolgico da
LT o herpesvrus de galdeos tipo 1 (GaHV-1,
chamado tambm de ILTV), pertencente subfa-
mlia Alphaherpesvirinae. A infeco pelo ILTV foi
descrita, pela primeira vez, em 1926, nos Estados
Unidos. A partir de ento, a doena foi identica-
da em vrios pases onde existem criaes comer-
ciais importantes de aves. A LT uma infeco de
importncia econmica que pode causar grandes
prejuzos econmicos, principalmente em cria-
es de galinhas.
Os principais hospedeiros naturais do ILTV
so as galinhas, embora a doena j tenha sido
observada tambm em faises e perus. Aves de
todas as idades podem ser infectadas, mas os si-
nais clnicos mais caractersticos so observados
em aves adultas.
O ILTV apresenta uma distribuio mun-
dial, tendo sido identicado em todos os pases
que tm avicultura comercial desenvolvida. No
Rio Grande do Sul, o primeiro surto de LT em ga-
linhas foi descrito em 1974. O primeiro surto da
doena em perus, no Brasil, foi relatado em 2004.
O vrus transmitido de forma horizontal,
e a transmisso ocorre quando as aves infectadas
excretam o vrus pelas vias ocular e respiratria.
Aerossis e secrees contaminadas entram em
contato direto ou indireto com aves susceptveis,
possibilitando a infeco de novos hospedeiros e
a disseminao do vrus no lote.
e patologia
O perodo de incubao de seis a doze
dias, e o resultado da infeco primria depen-
de do grau de patogenicidade da amostra viral,
da idade e do estado imunolgico das aves. Du-
rante a fase aguda da infeco, as aves infectadas
excretam o vrus principalmente pelas secrees
respiratrias. Aps penetrar pelas vias areas, o
vrus replica inicialmente no epitlio respiratrio.
A partir da, penetra em terminaes nervosas e
transportado por via nervosa aos gnglios trig-
meos, onde estabelece infeco latente. Aparente-
mente a infeco latente pode se estabelecer tam-
bm no epitlio respiratrio e, at o momento,
no foi descrita a ocorrncia de viremia durante
a infeco pelo ILTV. Reativaes espordicas do
vrus latente causam infeces inaparentes, mas
produtivas, resultando em disseminao do v-
rus a aves susceptveis.
Os efeitos da infeco nos lotes de aves va-
riam de acordo com a amostra envolvida no sur-
to. Amostras de alta virulncia provocam uma
Herpesviridae 485
forma bastante grave da infeco, com altas ta-
xas de morbidade e mortalidade. Por outro lado,
amostras de baixa virulncia podem causar uma
forma subclnica da infeco. Nos surtos mais
agudos, a morbidade pode atingir de 90 a 100%,
e a mortalidade pode chegar a 70%. Nestes casos,
as aves podem morrer em at dois a trs dias ps-
infeco. Mais freqentemente, a mortalidade
muito baixa (at 2%).
A infeco afeta principalmente a traquia e
laringe e caracterizada por tosse e dispnia. Em
casos hiperagudos (raros), a tosse pode no ser
observada, ocorrendo somente dispnia, cianose
e morte sbita. Os sinais clnicos mais observa-
dos na fase aguda so: descarga nasal e traqueal
e tosse. Pode ser observado ainda: conjuntivite,
edema periorbital e ceratite; e as aves podem eli-
minar uma secreo traqueal mucosa e hemorr-
gica. As aves tendem a se recuperar em 7 a 10
dias ps-infeco.
As leses associadas com infeco pelo ILTV
se localizam predominantemente nas vias areas
superiores. Freqentemente observa-se conges-
to acentuada da mucosa da laringe e traquia,
que, em fases mais avanadas, podem se apre-
sentar hemorrgicas e com exsudato caseoso.
Corpsculos de incluso intranucleares podem
ser observados nas clulas epiteliais da traquia.
A infeco com amostras menos virulentas pode
resultar em leses bem mais leves, em que ape-
nas um edema facial, sinusite e conjuntivite so
observados.
A infeco pelo ILTV induz a produo de
anticorpos neutralizantes, mas os ttulos de an-
ticorpos no apresentam correlao direta com
proteo. Dessa forma, mesmo animais soroposi-
tivos ao ILTV so susceptveis doena e podem
desenvolver sinais clnicos quando infectados
com o vrus de campo. Alm disso, foi demons-
trado que aves bursectomizadas no produzem
anticorpos anti-ILTV, mas podem car protegi-
das contra uma reinfeco, indicando a impor-
tncia da imunidade celular.
6.7.2.3 Diagnstico
O ILTV pode ser isolado a partir de amos-
tras clnicas (traquia e pulmes) inoculadas na
membrana corioalantide de ovos com embries
de 9 a 11 dias de idade. Por volta do quarto dia
ps-inoculao, observa-se o espessamento da
membrana corioalantide e a formao de placas
necrticas. O vrus tambm pode ser isolado pela
inoculao dessas amostras em clulas primrias
de rim ou de fgado de pintos. O ECP observado
inclui a formao de sinccios, corpsculos de in-
cluso intranucleares e lise das clulas infectadas.
A identicao do vrus a partir de amostras cl-
nicas ou do agente recentemente isolado pode ser
realizada pelas tcnicas de IFA, PCR ou ME.
A deteco de anticorpos pode ser realizada
pelas tcnicas de IFI, SN, ELISA ou IDGA. Ani-
mais sorologicamente positivos, que no foram
vacinados, so considerados portadores latentes
e podem disseminar o vrus para animais suscep-
tveis.
O controle da infeco pelo ILTV realizado
pelo emprego de vrias medidas que visam evi-
tar o contato das aves com o agente. Assim, ga-
linhas de diferentes idades e origens no devem
ser misturadas no mesmo lote; deve-se fazer uso
de medidas de higiene e desinfeco adequadas
dos galpes; controle de animais que entram em
contato com as aves como roedores alm do
uso sistemtico de vacinao.
Vacinas vivas modicadas tm sido utiliza-
das na preveno da infeco durante dcadas
em vrios pases. As amostras vacinais so ate-
nuadas pela passagem em ovos embrionados ou
cultivos celulares e podem ser aplicadas na gua
de bebida ou por aerossis. Muitas dessas vaci-
nas so ecazes, mas podem apresentar viruln-
cia residual, que pode aumentar medida que o
vrus vacinal circula na populao vacinada. Sen-
do assim, vrios surtos de LT tm sido atribudos
a amostras vacinais que recuperaram a virulncia
e comearam a causar infeces graves em aves
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POXVIRIDAE
Cludio Wageck Canal
18
1 Introduo
2 Classicao
3.1 O genoma
4 Replicao
5 Poxvrus de interesse veterinrio
5.1 Gnero Orthopoxvirus
5.1.1 Vrus da vaccinia
5.1.2 Vrus da varola dos bubalinos
5.1.3 Vrus da varola bovina
5.1.4 Vrus da varola dos camelos
5.1.5 Vrus da varola dos macacos
5.1.6 Vrus da ectromelia
5.1.7 Vrus Uasin Gishu
5.2 Gnero Capripoxvirus
5.2.1 Vrus da varola ovina e caprina
5.2.2 Vrus da doena da pele nodulosa
5.3 Gnero Suipoxvirus
5.3.1 Vrus da varola suna
5.4 Gnero Molluscipoxvirus
5.4.1 Vrus do Molluscum contagiosum
5.5 Gnero Yatapoxvirus
5.5.1 Vrus yabapox e tanapox
5.6 Gnero Avipoxvirus
5.6.1 Vrus da bouba aviria
491
491
493
493
495
497
497
497
498
498
498
499
499
499
500
500
501
502
502
503
503
503
503
504
504
5.7 Gnero Leporipoxvirus
5.7.1 Vrus do mixoma dos coelhos
5.8 Gnero Parapoxvirus
5.8.1 Vrus do ectima contagioso
5.8.2 Vrus da pseudovarola bovina
5.8.3 Vrus da estomatite papular bovina
6 Os poxvrus como vetores de expresso
505
505
506
506
508
509
509
511
1 Introduo
Os membros da famlia Poxviridae infectam
diversas espcies de invertebrados e vertebra-
dos, incluindo o homem. Os poxvrus foram os
primeiros vrus estudados intensivamente em
laboratrio, pois podem ser visualizados sob mi-
croscopia tica. Tambm foram os primeiros v-
rus a serem multiplicados e titulados em cultivo
celular, puricados sicamente e caracterizados
quimicamente.
A histria da imunologia e a vacinologia
est fortemente ligada a esses vrus, pois as ob-
servaes iniciais de proteo, associada com
exposio deliberada a agentes infecciosos se de-
vem a Edward Jenner, nos clssicos estudos com
os vrus da varola bovina e humana. Alm disso,
o agente da varola tambm foi o primeiro vrus
erradicado da populao humana, em 1979, aps
dcadas de programas macios de vacinao em
todo o mundo.
Apesar da erradicao da varola, conside-
rada uma das principais molstias infecciosas
humanas em todos os tempos, o interesse nos
poxvrus tem se renovado nos ltimos anos. Par-
te desse interesse se deve possibilidade de se
utilizar o genoma dos poxvrus para clonar e ex-
pressar genes heterlogos para uso em vacinas,
como foi feito na vacina utilizada para o controle
da raiva silvestre em candeos na Europa. Outra
fonte recente de interesse nesses vrus advm da
temeridade do seu uso potencial em bioterroris-
mo. Os poxvrus tambm so muito estudados
como exemplos de interaes complexas entre os
vrus e seus hospedeiros, pois o seu genoma co-
dica uma srie de protenas que interagem com
os mecanismos imunolgicos desencadeados em
resposta infeco.
As principais propriedades dos poxvrus
so: a) possuem vrions grandes e complexos; b)
os vrions contm diversas enzimas para a sntese
e modicao de RNAs mensageiros (mRNA); c)
o genoma consiste de uma molcula de DNA de
ta dupla com 130 a 300 kb; d) realizam a sua
replicao inteiramente no citoplasma.
A gama de hospedeiros das diferentes esp-
cies de poxvrus varia de extremamente restrita a
excessivamente ampla. A severidade da infeco
tambm varia muito de uma espcie para outra,
podendo resultar desde infeco autolimitante
local at doena sistmica devastadora, como no
caso da varola. No obstante, a doena tpica dos
poxvrus acomete a pele, embora sinais clnicos
generalizados possam estar presentes. A doen-
a nas aves predominantemente proliferativa,
enquanto nos mamferos predominam as leses
vesiculares e pustulares.
2 Classicao
Os membros da Poxviridae so subdividi-
dos em duas subfamlias: Entomopoxvirinae, que
contm vrus que infectam insetos; e Chordopoxvi-
rinae, cujos membros infectam os vertebrados e
sero os objetos deste captulo. A subfamlia Chor-
dopoxvirinae formada por oito gneros, denomi-
nados Orthopoxvirus, Capripoxvirus, Suipoxvirus,
Leporipoxvirus, Avipoxvirus, Molluscipoxvirus, Ya-
tapoxvirus e Parapoxvirus. O prottipo da famlia
o vrus da vaccinia (VV), cujos hospedeiros na-
turais e origem permanecem controversos. Esse
vrus foi isolado inicialmente de bfalos, mas pa-
rece ter sido transmitido para esses animais por
humanos. A Tabela 18.1 apresenta a classicao
das principais espcies de poxvrus que infectam
os animais domsticos e a sua distribuio geo-
grca. Os membros de um gnero so relaciona-
dos gentica e antigenicamente entre si, alm de
possurem a morfologia das partculas e a gama
de hospedeiros similares. No entanto, tambm
existe alguma reatividade sorolgica cruzada en-
tre vrus de diferentes gneros, apesar da identi-
dade gentica ser menor do que 75%. A Figura
18.1 apresenta uma rvore logentica para ilus-
trar a relao gentica entre os gneros e espcies
dessa famlia.
492 Captulo 18
Tabela 18.1. Principais poxvrus que infectam os animais domsticos e o homem, seus hospedeiros e
distribuiogeogrfica.
Poxviridae 493
Os vrions dos membros da famlia Poxviridae
so grandes e complexos e contm as enzimas ne-
cessrias para a sntese de mRNA. A arquitetura
do nucleocapsdeo complexa, j que no possui
a simetria isomrica icosadrica ou helicoidal en-
contrados na maioria dos outros vrus. Os vrions
possuem a forma de um tijolo arredondado, com
dimenses que variam de 170 a 260 nm de largu-
ra/espessura por 300 a 450 nm de extenso. Os
vrions do VV apresentam a forma de retngulos
arredondados, com dimenses de 270 x 360 nm. O
envelope lipoprotico de 30 nm de espessura en-
volve duas estruturas laterais (corpos laterais) e
um ncleo (Figura 18.2). Uma forma extracelular
do vrion possui um envelope adicional externo
em relao a sua forma intracelular. O envelope
adicional adquirido pelo brotamento atravs da
membrana plasmtica; os vrions desprovidos do
envelope adicional so liberados por lise celular
e so menos infecciosos. Os vrions intracelulares
desprovidos do envelope adicional so denomi-
nados IMV (intracellular mature virions), e os ex-
tracelulares com o duplo envelope so chamados
de EEV (extracellular enveloped virions). A Figura
18.2 apresenta fotograas de microscopia eletr-
nica de dois poxvrus diferentes e uma ilustrao
esquemtica dos respectivos vrions.
3.1 O genoma
O genoma dos poxvrus consiste de uma
molcula de DNA linear de ta dupla com 130
kb (parapoxvrus) a 300 kb (avipoxvrus). O ge-
noma contm seqncias repetidas invertidas
do tipo hairpin (ITRs) de 0,1 a 12,4 kb nas extre-
midades e uma regio nica longa que ocupa a
regio central (Figura 18.3). As duas cadeias de
DNA que compem o duplex so unidas entre si
nas extremidades por curvas (loops). As regies
que formam as curvas so ricas em A-T e no so
complementares, no permitindo o pareamento
entre elas.
Aproximadamente 50 seqncias genmicas
completas de diferentes poxvrus j foram obti-
das, permitindo uma descrio detalhada da es-
trutura, organizao genmica e dos genes indi-
viduais. Nos Chordopoxvirus, o nmero de genes
de aproximadamente 150, embora mais de 300
genes j tenham sido deduzidos no genoma do
poxvrus do canrio. Aproximadamente 90 dos
150 genes so conservados no genoma de todos
os Chordopoxvirus e codicam produtos que par-
Vrus da varola dos camelos
Vrus da varola humana
Vrus da vaccinia
Vrus yabapox
Vrus da varola ovina
Vrus do mixoma
Vrus da varola suna
Vrus da estomatite papular bovina
Vrus do ectima contagioso
Vrus da varola dos canrios
Vrus da varola aviria
Vrus do Molluscum contagiosum
100
100
53
100
99
100
75
0,1
Orthopoxvirus
Yatapoxvirus
Capripoxvirus
Leporipoxvirus
Suipoxvirus
Parapoxvirus
Avipoxvirus
Molluscipoxvirus
96
100
Figura 18.1. rvore filogentica construda a partir da anlise do gene que codifica a DNApolimerase de espcies dos
diferentes gneros da famlia Aanlise foi realizada pelomtodode Neighbor-Joining(10.000 repeties)
e utilizada a matriz de substituio Dayhoff Matrix Model (PAM). Ocomprimento dos ramos dado pelo nmero de
substituies por stio.
Poxviridae.
Fonte: Andr Felipe Streck
494 Captulo 18
Repetio invertida Repetio invertida Seqncias nicas
160 kbp 10 kbp 10 kbp
0,9 kbp 1,3 kbp 1,3 kbp 0,9 kbp
Seqncias repetidas Seqncias repetidas
Figura 18.3. Ilustrao esquemtica da estrutura do genoma dos poxvrus. Ogenoma constitudo por uma molcula
de DNA de cadeia dupla cuja regio mais longa nica e apresenta as cadeias complementares e pareadas. Prximas
s extremidades do genoma existem regies repetidas na orientao inversa, ricas em A-T, que no so exatamente
complementares e, por isso, no esto pareadas. As extremidades do genoma so unidas entre si, formando uma
inflexo(loop) e conferindocontinuidade molcula deDNA.
Figura 18.2. Vrions de membros da famlia (esquerda: fotos de microscopia eletrnica; direita: ilustrao
esquemtica dos vrions). A, B) Vrions do gnero C, D) Vrions do gnero Barra = 100
nm.
Poxviridae
Orthopoxvirus; Parapoxvirus.
D
Tbulos de
superfcie
Envelope
Corpos
laterais
Membrana
do ncleo
Membrana
externa
Parapoxvirus
B
Tbulos de
superfcie
Envelope
Corpo
lateral
Membrana
do ncleo
Membrana
externa Orthopoxvirus
A
C
Fonte: ME: Dr Stewart McNulty; qub.ac.uk. Ilustraes: adaptadas de Murphy et al.(1999).
Poxviridae 495
ticipam da replicao do DNA, da transcrio,
da morfognese e da estrutura das partculas vi-
rais. Os genes mais conservados se localizam na
regio central do genoma, e os genes localizados
entre a regio central e as extremidades do geno-
ma tendem a ser espcie-especcos e codicam
protenas cujas funes antagonizam a resposta
imune do hospedeiro. Esses genes so chamados
coletivamente de genes de virulncia. Ao contr-
rio dos genes centrais conservados, vrios genes
de virulncia so dispensveis para a replicao
viral em cultivo celular.
Uma das dezenas de protenas codicadas
pelo genoma viral (peso molecular de 58 kDa)
forma os tbulos da superfcie do vrion, que in-
duzem a produo de anticorpos neutralizantes
e inibidores da fuso celular. Oito protenas, in-
cluindo uma hemaglutinina, foram identicadas
no envelope externo dos vrions extracelulares e
pelo menos quatro protenas esto conjugadas
com o DNA genmico. Os poxvrus codicam
vrias protenas envolvidas na evaso e modu-
lao da resposta imunolgica do hospedeiro.
Alguns genes provavelmente foram adquiridos
recentemente dos hospedeiros por recombina-
o, pela sua semelhana com genes encontrados
nas espcies animais infectadas. Esses genes co-
dicam produtos envolvidos na resposta imune
do hospedeiro (MHC classe I, interleucinas 10,
18 e 24, receptores do interferon gama e do fator
de necrose tumoral II), alm de outros envolvi-
dos na resistncia das clulas ao estresse oxidati-
vo (glutaredoxina e glutationa peroxidase). Essa
captura de genes do hospedeiro tem sido uma
caracterstica decorrente na evoluo dos poxv-
rus e parece desempenhar um papel na adapta-
o desses vrus para resistir aos mecanismos de
defesa do hospedeiro, pelo bloqueio da atividade
de vrias citocinas, quimiocinas, serion-protea-
ses e complemento, entre outras. Essa diversida-
de de estratgias utilizadas pelos poxvrus para
assegurar a sua sobrevivncia tem propiciado o
conhecimento de vrios aspectos da imunologia,
virologia e inamao. Devido a natureza an-
tiinamatria de vrias protenas dos poxvrus,
algumas tm demonstrado potencial para o uso
teraputico em inamaes agudas e crnicas.
4 Replicao
A maioria dos poxvrus replica com ecin-
cia em cultivos celulares, com exceo dos para-
poxvrus, poxvrus de sunos e vrus do Mollus-
cum contagiosum. Esses vrus tambm podem ser
multiplicados em ovos embrionados de galinhas,
onde produzem placas (focos) esbranquiadas
(pocks) na membrana corioalantide.
Os poxvrus codicam todas as enzimas ne-
cessrias para a transcrio e replicao do geno-
ma viral. Tambm trazem, nos vrions, as enzi-
mas para a produo e modicao dos mRNA
para a sntese de suas protenas, o que os tornou
independentes do ncleo celular. Aps a fuso
do vrion com a membrana plasmtica ou aps a
endocitose, o ncleo viral liberado no citoplas-
ma, onde ocorrem todas as etapas do ciclo repli-
cativo.
O processo de expresso gnica caracteri-
zado pela transcrio temporal de trs classes de
genes (genes iniciais, intermedirios e tardios).
A transcrio de cada grupo de genes requer a
presena de fatores de transcrio especcos que
so produzidos pelos genes do grupo preceden-
te. A transcrio iniciada pela RNA polimera-
se viral e outros fatores presentes no ncleo do
vrion, e resulta na produo de mRNAs alguns
minutos aps a penetrao, ainda no genoma no
totalmente desnudo. Os mRNAs do VV so de-
tectados 20 minutos aps a penetrao e atingem
picos em aproximadamente 1 a 2 horas aps. As
protenas produzidas pela traduo desses mR-
NAs completam o desnudamento do genoma e
a transcrio de aproximadamente 100 genes ini-
ciais. Essas etapas ocorrem previamente ao incio
da replicao do DNA.
Em clulas infectadas pelo VV, a replica-
o do DNA se inicia aproximadamente 1 a 2
horas aps a infeco e resulta na produo de
at 10.000 cpias do genoma por clula, metade
das quais ser empacotada na prognie viral.
Em outros poxvrus, o incio da replicao pode
ser mais tardio, como nos parapoxvrus (4-6 h)
e poxvrus avirios (12-16 h). O incio da repli-
cao parece ocorrer em ambas as extremidades
do genoma e envolve a clivagem das cadeias de
DNA no stio de iniciao, seguida de replicao
496 Captulo 18
por deslocamento da cadeia complementar. A re-
plicao do genoma envolve a sntese de longos
intermedirios concatamerizados (unidos pelas
extremidades), que so subseqentemente cliva-
dos em unidades genmicas nicas.
Aps o incio da replicao, ocorre uma mu-
dana dramtica na expresso gnica, quando os
produtos dos genes iniciais se ligam aos promo-
tores de genes intermedirios e tardios, ativando
a sua transcrio e conseqente expresso. Al-
guns fatores de transcrio de genes iniciais so
sintetizados tardiamente na infeco e empacota-
dos nos vrions para serem utilizados no incio do
prximo ciclo de infeco.
Pelo fato de os vrions serem constitudos
por um grande nmero de protenas, razovel
que a produo da prognie dos poxvrus tam-
bm seja um processo complexo e que necessite
vrias horas para ser completada. A replicao e
a produo de vrions ocorrem em determinados
locais do citoplasma, denominados viroplasmas
ou fbricas de vrus. Os vrions envelopados so
liberados atravs de brotamento, e os vrions
no-envelopados podem ser liberados por bro-
tamento ou lise da clula. Ambas as formas dos
vrions so infecciosas, embora as formas envelo-
padas infectem novas clulas mais rapidamente
e parecem ser mais importantes na disseminao
do vrus no organismo do hospedeiro. O ciclo re-
plicativo dos poxvrus est ilustrado esquemati-
camente na Figura 18.4.
Ncleo
Citoplasma
1
2
3
4
5 6
7
8
9
10
11
12
13
14
Figura 18.4. Ciclo replicativo dos poxvrus. Os vrions se ligam a receptores de superfcie e penetram por fuso do
envelope com a membrana plasmtica, liberando o ncleo (core) no citoplasma (1). As enzimas trazidas nos vrions
sintetizam os mRNAs dos genes iniciais (2) que so traduzidos em protenas iniciais (3). As protenas iniciais
participamdo desnudamento completo do genoma (4), na sua replicao (5) e na transcrio dos genes intermedirios
(6), cujos mRNAs so traduzidos em protenas (7). As protenas intermedirias esto envolvidas principalmente na
transcrio dos genes tardios (8), e participam das fases finais de replicao (resoluo e separao das molculas-
filhas de DNA) (11,12). As protenas tardias(9) fazem parte da estrutura vrica e participam da morfognese dos
ncleos virais (10), queadquiremoenvelope pelobrotamentonoaparelhodeGolgi (13) e soliberados daclula(14).
Poxviridae 497
5 Poxvrus de interesse veterinrio
Somente dois poxvrus so especcos do
homem: o vrus da varola e o vrus do Mollus-
cum contagiosum. Seis outras espcies de poxv-
rus podem, esporadicamente, causar infeces
zoonticas. A Tabela 18.1 apresenta os principais
poxvrus de interesse veterinrio, os quais sero
detalhados a seguir.
5.1 Gnero Orthopoxvirus
Os ortopoxvrus so morfologicamente in-
distinguveis entre si e a sua replicao produz
corpsculos de incluso citoplasmticos. Os mem-
bros desse gnero so antigenicamente relaciona-
dos e, por isso, um vrus pode ser utilizado em
vacina para induzir imunidade protetora contra
os demais. Essa imunidade parece ser de longa
durao.
Apesar de sua semelhana, esses vrus po-
dem ser distinguidos por sorologia, aspectos
morfolgicos, temperatura em que produzem le-
ses na membrana corialantide de embries de
galinha, por eletroforese de protenas, tcnicas de
caracterizao gentica e efeito citoptico em cul-
tivos celulares. As leses podem estar connadas
a regies especcas da pele ou serem sistmicas.
As leses de pele geralmente iniciam como ppu-
las, que evoluem para pstulas e crostas.
Os hospedeiros naturais de vrias espcies
de ortopoxvrus ainda no esto bem denidos
e, possivelmente, incluam vrias espcies de ro-
edores silvestres. Na maioria das infeces, o
diagnstico pode ser realizado por microscopia
eletrnica (ME) de material coletado das bordas
das leses ou por isolamento viral. O isolamento
pode ser realizado pela inoculao do material
suspeito na membrana corioalantide de ovos
embrionados de galinha, em cultivos celulares e
em animais de laboratrio, pela inoculao aps
escaricao da pele.

5.1.1 Vrus da vaccinia
O vrus da vaccinia (VV) o prottipo do
gnero Orthopoxvirus e foi amplamente utilizado
na formulao de vacinas para o controle e erra-
dicao da varola humana. O VV possui uma
distribuio muito ampla e capaz de infectar
uma grande variedade de espcies animais, em
algumas das quais produz doena clinicamente
semelhante causada pelos poxvrus especcos
de cada hospedeiro. A sua ocorrncia em reba-
nhos leiteiros, em pocas anteriores a interrupo
da vacinao contra a varola humana, era fre-
qentemente associada com manifestaes clni-
cas semelhantes e, por isso, atribudas ao vrus da
varola bovina. Aps a interrupo da vacinao
contra a varola humana, acredita-se que pratica-
mente a totalidade dos casos de varola bovina
seja, de fato, associada com o vrus bovino.
No entanto, desde 1999, vrios surtos de do-
ena exantematosa e vesicular tm sido relatados
em bovinos leiteiros na regio Sudeste do Brasil.
Os surtos geralmente ocorrem em propriedades
que realizam ordenha manual, sem os cuidados
adequados de higiene. Em parte desses eventos,
as leses foram observadas concomitantemente
em pessoas e vacas. Nas vacas, as leses so se-
melhantes s descritas nos casos de infeco pelo
VV. As leses iniciais nas tetas e bere se caracte-
rizam por eritema rseo e edema localizado, que
leva formao de vesculas. As vesculas rapida-
mente evoluem para ppulas e pstulas que, pos-
teriormente, se rompem e supuram. O prximo
estgio caracterizado pela formao de crostas
escuras, algumas vezes recobrindo grandes reas
que podem, subseqentemente, ulcerar. O curso
da doena pode durar entre trs e quatro sema-
nas. A ocorrncia de contaminao bacteriana se-
cundria pode resultar em mastite. Bezerros que
se amamentam nas vacas afetadas desenvolvem
leses no focinho e na mucosa oral. As pessoas
afetadas so geralmente aquelas que realizam
a ordenha, apresentando leses nas mos, indi-
cando que foram infectadas pelo contato com os
animais. Algumas pessoas relatam a ocorrncia
de cefalia, dores musculares, hipertermia e lin-
fadenopatia.
Um dos primeiros vrus caracterizados a
partir desses eventos foi denominado Cantagalo,
por ter sido isolado de um surto de doena ve-
sicular bovina e humana no municpio com este
nome no estado do Rio de Janeiro, em 1999. A
anlise biolgica e molecular revelou que esse v-
498 Captulo 18
rus mais semelhante ao VV do que ao poxvrus
da varola bovina. Alm disso, o vrus Cantagalo
muito semelhante geneticamente ao VV anti-
gamente utilizado em vacinas humanas contra
a varola. Esses achados sugerem que este vrus
pode ter se originado do VV vacinal, que prova-
velmente persistiu durante anos em alguma es-
pcie de hospedeiro silvestre e, eventualmente,
reemergiu, infectando bovinos e pessoas.
Aps esse evento, vrios surtos de doen-
a semelhante, com carter zoontico, tm sido
descritos em vrias regies do pas, principal-
mente na regio Sudeste. Alm disso, todos os
orto poxvrus isolados desde 1963, no pas, foram
identicados como derivados do VV. A caracte-
rizao de alguns desses vrus isolados nos sur-
tos recentes refora a hiptese da persistncia do
VV em hospedeiros silvestres no Brasil e a sua
reemergncia como importante patgeno de bo-
vinos.

5.1.2 Vrus da varola dos bubalinos
O poxvrus dos bfalos (buffalopox) causa-
do por um vrus to semelhante ao VV que no
claro se representa uma espcie viral distinta ou
no. Surtos dessa doena tm ocorrido nos bfa-
los-da-gua (Bubalis bubalis) na ndia, Indonsia e
Egito. Como foi mencionado acima, vrios surtos
causados pelo VV ou vrus geneticamente mui-
to semelhantes ocorreram no Brasil desde 1999,
o que resultou em perdas econmicas e afetou
a sade dos fazendeiros que, provavelmente, se
infectaram por contato direto com seus bovinos
durante a ordenha.
As leses pustulares nas tetas e bere de b-
falas e vacas produtoras de leite assemelham-se
quelas causadas pelo vrus da varola bovina.
Em eqinos, a infeco resulta em uma apresen-
tao clnica semelhante varola eqina ou der-
matite papular eqina. O diagnstico pode ser
conrmado por histopatologia, ME ou por isola-
mento do vrus.

5.1.3 Vrus da varola bovina
A varola bovina (cowpox) ocorre princi-
palmente na Europa e nas regies adjacentes da
Rssia. Os hospedeiros naturais do vrus so v-
rias espcies de roedores silvestres. Estes animais
atuam como reservatrios do vrus, a partir dos
quais pode ser transmitido para vrias espcies
domsticas e silvestres. As caractersticas clnicas
e as doenas associadas so muito semelhantes s
causadas pelo VV, embora os vrus sejam antige-
nicamente distintos. Em vacas leiteiras, as leses
esto geralmente connadas aos tetos. Nos gatos,
a doena mais facilmente reconhecida e afeta
principalmente os animais que vivem em reas
rurais e so bons caadores. Outro fato que indica
que os roedores se constituem nos hospedeiros
naturais do vrus que a doena tem maior inci-
dncia no outono, quando a populao de roedo-
res maior. Nos gatos, os sinais clnicos iniciam
com pequenas ppulas na cabea e membros an-
teriores, podendo ulcerar, seguido pela formao
de crostas. Uma apresentao mais rara envolve
coriza, conjuntivite e pneumonia, provavelmente
advinda de contaminao bacteriana secundria
ou imunodepresso causada pelo vrus da leuce-
mia felina (FeLV) e vrus da imunodecincia fe-
lina (FIV). Eventualmente os gatos podem trans-
mitir a doena para o homem, que geralmente
desenvolve uma nica erupo maculopapular
na mo ou na face. A seguir, podem advir sinais
sistmicos, como nusea, febre e adenopatia. O
curso da doena mais severo em crianas e, em-
bora raro, pode resultar em morte. Vrios surtos
da doena em zoolgicos so descritos na litera-
tura, especialmente afetando os grandes felinos
(chita, ocelote, lince, jaguar, puma, leo e pante-
ra), alm de rinocerontes, elefantes e ocapis, com
as chitas apresentando uma alta taxa de mortali-
dade.
O diagnstico pode ser conrmado por his-
topatologia, ME ou isolamento do vrus. Doenas
causadas pelo VV, vrus da mamilite herptica
(herpesvrus bovino tipo 2 BoHV-2), devem ser
consideradas no diagnstico diferencial da doen-
a em bovinos. As medidas prolticas tm pou-
co impacto no controle e preveno da doena.

5.1.4 Vrus da varola dos camelos
O vrus da varola dos camelos (camelpox)
causa uma doena generalizada severa que cursa
Poxviridae 499
com o desenvolvimento de um grande nmero de
leses na pele. A forma mais severa ocorre prin-
cipalmente nos animais jovens, podendo causar
uma mortalidade de at 25%. Este vrus distin-
guvel dos outros ortopoxvrus atravs do perl
gerado por restrio enzimtica do genoma. A
doena tem importncia nas regies em que os
camelos so criados para transporte e produo
de leite, como na frica, Oriente Mdio e sudoes-
te da sia.
Este vrus aparentemente no infecta huma-
nos, apesar da freqente exposio de pessoas
aos animais infectados. Assim, a doena apa-
rentemente restrita aos camelos. Um parapoxv-
rus (vrus de Ausdyk) tambm infecta camelos e
causa um quadro clnico semelhante.

5.1.5 Vrus da varola dos macacos
Apesar de seu nome, os hospedeiros naturais
desse vrus parecem ser os esquilos. Esse vrus
zoontico e geralmente afeta pessoas que caam
macacos e esquilos, para a sua alimentao, na
frica Central e Ocidental. Nos ltimos anos, v-
rios casos e surtos localizados dessa doena tm
sido relatados em pessoas na frica. A transmis-
so do vrus entre pessoas incomum e, assim,
parece ser improvvel que a doena se estabelea
e se perpetue na populao. mais provvel que
a doena continue a ocorrer esporadicamente em
pessoas que se expem ao agente pelo contato
com os hospedeiros naturais. Os sinais clnicos
so semelhantes aos da varola humana, e a en-
fermidade pode ser prevenida utilizando-se imu-
nizao com o VV.

5.1.6 Vrus da ectromelia
O vrus da varola dos camundongos (mou-
sepox), ou vrus da ectromelia, disseminou-se no
mundo todo atravs do transporte de camundon-
gos de laboratrio e seus produtos. Existem duas
formas de apresentao clnica: uma fatal aguda,
em que ocorre uma extensiva necrose do bao e
fgado, com a morte ocorrendo poucas horas aps
o incio dos sinais; e a outra crnica, caracterizada
por leses ulcerativas nos ps, cauda e focinho. A
transmisso ocorre por pequenas abrases na pele
e por via respiratria. Uma forma importante de
introduo do vrus em colnias de camundon-
gos atravs de soro de camundongo, lquido as-
ctico, tumores e tecidos. Algumas linhagens so
mais resistentes, e a apresentao clnica pode ser
leve ou inaparente (C56BL/6, AKR), j outras so
muito sensveis (BALB/c, C3H, DBA).
A infeco pelo vrus da ectromelia tem sido
extensivamente utilizada como modelo para o es-
tudo da patogenia de infeces vricas sistmicas.
Aps a penetrao e replicao prxima ao local
de entrada (geralmente a pele), onde a replica-
o produz uma pequena leso papular, o vrus
replica nos linfonodos regionais e produz uma
viremia primria. Esta viremia permite ao vrus
atingir vrios rgos, entre eles o fgado e o bao,
onde replica e produz necrose. Essa replicao
seguida de uma viremia secundria, pela qual o
vrus atinge outros rgos, inclusive a pele, pro-
duzindo as leses mculo-papulares e vesiculares
caractersticas. Estas leses so seguidas de pru-
rido intenso e ulcerao e se constituem na via
de excreo do agente. Dentre os modelos de pa-
togenia, o do vrus da ectromelia um dos mais
clssicos, e muitas informaes sobre a patogenia
das infeces vricas foram obtidas a partir desse
modelo.
A introduo desse vrus em uma colnia
tem conseqncias devastadoras, desta forma, o
diagnstico deve ser feito rapidamente. A varo-
la dos camundongos pode ser diagnosticada por
histopatologia, sendo observados corpsculos de
incluso citoplasmticos eosinoflicos nas bordas
das leses de pele. Atravs de ME, podem ser ob-
servados vrions em qualquer tecido infectado. O
vrus tambm pode ser isolado em cultivos de c-
lulas de embrio de camundongo e identicado
por tcnicas imunolgicas.
A preveno e o controle so baseados na
quarentena e regras de importao de vrus, de
camundongos e seus produtos que podem carre-
ar o vrus. O monitoramento sorolgico regular
das colnias tambm deve ser feito, principal-
mente para diagnosticar as infeces subclnicas.
5.1.7 Vrus Uasin Gishu
O vrus Uasin Gishu, vrus da varola dos
cavalos, tem sido isolado somente no Leste da
frica. Podem ser encontradas duas formas da
500 Captulo 18
doena: uma em que as leses vesiculares se de-
senvolvem e outra que apresenta leses mlti-
plas na mucosa oral.
5.2 Gnero Capripoxvirus
5.2.1 Vrus da varola ovina e caprina
Dentre as doenas causadas pelos poxvrus,
a varola dos ovinos (sheeppox) e a varola dos
caprinos (goatpox) esto entre as mais importan-
tes em medicina veterinria. Essas doenas so
de noticao obrigatria na maioria dos pases
onde ocorrem, e o seu diagnstico essencial
para o comrcio e trnsito internacional de pe-
quenos ruminantes.
As varolas ovina e caprina ocorrem no su-
doeste da sia, ndia e na maior parte da frica,
embora a distribuio geogrca dos dois vrus
seja diferente. Essa distribuio geogrca distin-
ta sugere que essas doenas sejam causadas por
vrus diferentes. Contudo, estes vrus no podem
ser diferenciados atravs de sorologia e a anlise
de restrio do genoma indica que so genetica-
mente muito semelhantes. As cepas de vrus da
varola dos ovinos parecem ser mais relacionadas
com o vrus da pele nodulosa (lumpy skin) do que
com o vrus da varola dos caprinos.
Nos animais infectados, o vrus excreta-
do nas exsudaes e descamaes de leses de
pele, alm de secrees nasais e oculares durante
a fase aguda da doena. A infeco ocorre pela
inalao de aerossis ou por feridas e abrases na
pele, alm da picada de insetos. A estabulao e
o connamento dos animais facilitam esta forma
de transmisso.
Aps a recuperao clnica da doena, os
animais cam imunes a reinfeces pelo mesmo
vrus. Por isso, em reas endmicas, a doena
generalizada e a mortalidade so raras. J em re-
banhos livres da doena, a sua introduo pode
resultar em surtos graves. Animais de todas as
idades so susceptveis, embora os mais jovens
sejam acometidos com maior severidade.
5.2.1.2 Patogenia e sinais clnicos
Os sinais clnicos variam entre as raas e
apresentam variaes de acordo com as regies
geogrcas de ocorrncia da doena. Aps apro-
ximadamente uma semana de incubao, duran-
te a qual ocorre uma viremia, o vrus dissemina-
se para a pele, linfonodos, bao, rins e pulmes.
A replicao viral nesses tecidos resulta em sin-
tomatologia clnica, como febre, rinite, dispnia,
edema de plpebras e conjuntivite. Os animais
arqueiam o dorso e param de se alimentar. As le-
ses de pele iniciam por pequenas vesculas que
evoluem para ppulas, pstulas, necrose e for-
mao de crostas. Essas leses so mais abundan-
tes nos lbios, lngua, gengiva, narinas externas
e pele, principalmente nos locais com cobertura
escassa de l. Leses tambm podem ocorrer no
trato digestivo, respiratrio, fgado, rins e outros.
No caso da varola caprina, a mortalidade pode
chegar a 50%, quando acomete raas nativas, e
at 100% em raas europias. Em rebanhos sus-
ceptveis de ovinos, a doena pode afetar mais
de 75% dos animais e causar uma mortalidade
de at 50%. Em cordeiros jovens, a mortalidade
pode atingir 100%.
Na maioria dos casos, o diagnstico pode ser
realizado com bases nos achados clnicos. Di-
culdades podem ser encontradas quando houver
a presena simultnea do vrus do ectima conta-
gioso (orf), ou em rebanhos parcialmente imunes,
nos quais a doena pode ser branda. Fragmentos
de pele ou tecidos podem ser obtidos por bipsia
para a conrmao do diagnstico atravs de exa-
mes histolgicos, ME ou por isolamento viral em
clulas de ovinos ou caprinos. Em alguns pases,
existe um teste comercial de captura de antgeno
para a deteco do vrus da varola caprina. Para
a sorologia, podem ser utilizadas a soroneutrali-
zao (SN) e imunouorescncia indireta (IFI).
Vrus atenuados e inativados tm sido utili-
zados na formulao de vacinas para uso nas re-
gies onde essas doenas so endmicas. A vaci-
nao deve ser repetida anualmente, e a resposta
Poxviridae 501
induzida pelas vacinas com vrus atenuados tem
sido melhor, provavelmente porque a imunidade
mediada por clulas a mais importante para a
proteo. Esses vrus tambm tm sido testados
como vetores para a confeco de vacinas contra
outras viroses de pequenos ruminantes.
5.2.2 Vrus da doena da pele nodulosa

A doena da pele nodulosa (lumpy skin dise-
ase, LSD) uma enfermidade aguda ou subaguda
ou mesmo cursa como infeco subclnica de
bovinos que se caracteriza por febre e formao
de mltiplos ndulos rmes na pele, placas ne-
crticas nas mucosas e infartamento de linfono-
dos perifricos. A doena clinicamente seme-
lhante manifestao cutnea disseminada que
ocorre na infeco pelo BoHV-2, denominada
pseudo lumpy skin disease.
O agente etiolgico (lumpy skin disease virus,
LSDV) um poxvrus, originrio provavelmente
de caprinos, cujo prottipo e primeiro isolado foi
denominado vrus Neethling. Este agente gen-
tica e antigenicamente relacionado aos poxvrus
de ovinos e caprinos. Essa semelhana tem per-
mitido o uso do poxvrus de ovinos em vacinas
para o controle da LSD em bovinos em alguns
pases.
O LSDV replica em altos ttulos em uma
variedade de clulas de cultivo, mas os isolados
de campo demoram a produzir efeito citoptico
aps o seu isolamento. O vrus tambm pode ser
multiplicado em embries de pinto e na membra-
na crio-alantide de ovos embrionados de gali-
nha. O vrus muito estvel sob condies am-
bientais, podendo manter a sua viabilidade em
crostas por at 30 dias.

A LSD disseminou-se progressivamente
durante o ltimo sculo por toda a frica, onde
segue causando surtos com grande freqncia. O
agente foi responsabilizado por somente um surto
fora desse continente, em Israel, em 1989. A prin-
cipal forma de disseminao da doena atravs
de picadas de insetos hematfagos. Por isso os
surtos geralmente ocorrem em pocas de grande
abundncia desses vetores (estaes chuvosas).
De um foco inicial, a doena pode disseminar-se
por longas distncias. Os mais provveis meios
de manuteno do vrus entre as epidemias so
os bovinos com infeco subclnica ou animais
silvestres, possivelmente alguns bubalinos. As
raas bovinas europias so mais susceptveis do
que as zebunas. A doena no apresenta morta-
lidade considervel, mas pode trazer prejuzos
econmicos importantes devido ao longo tem-
po em que causa condio debilitante, durante
a qual os animais se alimentam pouco e perdem
peso. A ocorrncia peridica de surtos em vrios
pases africanos refora a necessidade de se ado-
tar medidas de combate enfermidade.

No incio da doena, os animais perdem o
apetite e apresentam lacrimejamento e descarga
nasal. Na maioria dos animais afetados, ocorre
um infartamento generalizado dos linfonodos
superciais. A doena caracterizada por febre
bifsica, que seguida pelo aparecimento de n-
dulos na pele que, subseqentemente, se tornam
necrticos. Essas leses envolvem a derme e a
epiderme. Ndulos tambm so observados na
mucosa da boca e narinas.
Algumas leses cutneas ou nas mucosas
podem ser maiores e apresentarem uma regio
central de tecido necrtico que, posteriormente,
perde a pele e resulta em lceras profundas. Es-
sas lceras podem levar vrios meses para cica-
trizar. Vrios ndulos podem coalescer e formar
grandes placas. As leses cutneas se resolvem
rapidamente ou persistem como grandes lceras
por at meses. Miases ou infeces bacterianas
secundrias podem complicar a enfermidade.
Os animais com infeces sistmicas podem -
car muito debilitados e podem ocorrer abortos.
A taxa de mortalidade normalmente inferior a
5%, mas o desempenho produtivo prejudicado
dos animais infectados pode ocasionar grandes
perdas econmicas para os rebanhos atingidos.
A imunidade adquirida aps a recuperao
da doena geralmente dura pelo resto da vida do
animal. Bezerros lhos de mes imunes adqui-
rem imunidade colostral, que confere boa prote-
o por, aproximadamente, seis meses.
502 Captulo 18
A apresentao clnica da doena em ani-
mais de zonas endmicas altamente sugestiva
da doena. Para a conrmao laboratorial, pode-
se coletar material de leses recentes e identicar
incluses intracitoplasmticas pelo exame histo-
lgico. O material das crostas pode ser examina-
do na ME ou inoculado em cultivos de clulas de
testculo de cordeiro. A conrmao da identida-
de do agente isolado deve ser realizada por IFA.
Anticorpos especcos podem ser pesquisados
por SN.
O diagnstico diferencial deve conside-
rar principalmente a infeco generalizada pelo
BoHV-2 (pseudo lumpy skin disease) que, geral-
mente, mais leve, causa leses mais superciais
e apresenta um curso mais curto. A infeco pelo
BoHV-2 tambm se caracteriza pela presena de
incluses intranucleares, em contraste com as in-
cluses citoplasmticas observadas na LSD. Ou-
tras doenas que cursam com leses em mucosas,
como a peste bovina, infeco pelo BVDV e febre
catarral maligna tambm devem ser considera-
das.
Como o vrus disseminado principalmente
por insetos, medidas como quarentena e controle
do trnsito de animais so geralmente pouco efe-
tivas. Portanto, o controle baseia-se fundamen-
talmente na vacinao. Assim, vrus atenuados
tanto o LSDV como o vrus da varola ovina ou
caprina tm sido utilizados na vacinao pro-
ltica dos rebanhos. A imunizao com o vrus
Neethling atenuado confere uma longa proteo
aps uma nica aplicao, mas a reao ina-
matria no local da vacinao pode ser severa e
levar reduo temporria na produo de leite
por vacas em lactao. Bezerros, lhos de vacas
natural ou articialmente imunizadas, no ne-
cessitam ser vacinados, mas aqueles nascidos de
mes susceptveis devem ser vacinados quando
da ocorrncia de surtos.
A vigilncia sanitria com erradicao tem
sido utilizada em pases vizinhos s reas end-
micas, e os bovinos que so introduzidos nessas
reas devem ser previamente imunizados.
5.3 Gnero Suipoxvirus
5.3.1 Vrus da varola suna
A varola suna (swinepox) uma doena
aguda, porm leve, que afeta principalmente
sunos jovens e se caracteriza pela formao de
ppulas, pstulas e crostas cutneas. No passa-
do, manifestaes clnicas semelhantes foram
observadas tambm durante a infeco de sunos
com o vrus vaccinia, utilizado para imunizar
pessoas contra a varola. Aps a erradicao da
varola do mundo e a interrupo da vacinao
humana, essa doena tem sido atribuda somente
ao poxvrus suno.
O agente da varola suna o poxvrus su-
no (swinepoxvirus), nica espcie que compe o
gnero Suipoxvirus. Esse vrus possui morfologia
semelhante aos ortopoxvrus, como o vrus da
vaccinia, com o qual compartilha alguns deter-
minantes antignicos. Os vrions so altamente
resistentes sob condies ambientais e podem
resistir em escaras ou crostas por at um ano a
temperatura ambiente. Os vrus de campo no
replicam bem em cultivos celulares e a sua pro-
pagao exige adaptao prvia aos cultivos. O
vrus no replica na membrana crio-alantide
de ovos embrionados. Assim como outros poxv-
rus de animais domsticos, esse vrus tem sido
utilizado como vetor no desenvolvimento de va-
cinas para essa espcie.

O poxvrus suno especco dessa espcie,
e a infeco distribuda mundialmente. Durante
a infeco aguda, o vrus excretado pela saliva e
em secrees conjuntivais dos animais infectados
e tambm est presente nos uidos das leses.
Crostas e escaras podem abrigar o vrus vivel no
ambiente durante meses. A transmisso do vrus
pode ocorrer por contato direto ou indireto en-
tre animais e tambm mecanicamente atravs de
piolhos (Hematopinus suis). Os piolhos infectados
podem abrigar o vrus infeccioso por at dois me-
ses. Outros insetos hematfagos tambm podem
Poxviridae 503
potencialmente transmitir o vrus mecanicamen-
te. A transmisso transplacentria tambm pode
ocorrer e resulta na produo de leses na pele,
lngua e mucosa bucal de leites recm-nascidos.

O vrus possui um tropismo marcante por
clulas da epiderme e, em casos graves, pode
tambm infectar clulas epiteliais do trato res-
piratrio superior e digestivo. O perodo de in-
cubao da doena de quatro a 14 dias, e se-
guido de doena branda com leses geralmente
restritas pele. A doena afeta sunos de todas as
idades, embora os animais jovens estejam mais
predispostos. Febre baixa e breve pode preceder
o desenvolvimento de ppulas, que, em um ou
dois dias, tornam-se pstulas umbilicadas, que
evoluem para crostas. As crostas normalmente
caem por volta de uma semana, e a cicatrizao
se completa em trs semanas. O estgio vesicu-
lar geralmente no observado. As leses podem
ocorrer em qualquer local da superfcie do corpo,
embora sejam mais abundantes no abdome, na
face interna das coxas e nas orelhas. A mortali-
dade usualmente baixa, mas a morbidade em
certos rebanhos pode ser muito alta e causar um
srio retardo no crescimento da leitegada. Conta-
minao secundria das leses por bactrias pode
levar formao de abscessos e, eventualmente,
ocasionar certa mortalidade. Leses extensas po-
dem resultar do hbito dos animais se coarem
em objetos ou anteparos.
Os sunos recuperados podem desenvolver
imunidade slida, mesmo na ausncia de anticor-
pos neutralizantes detectveis, o que sugere que
a imunidade celular ou humoral local sejam mais
importantes para a proteo.

As leses na pele, associadas infestao de
piolhos, so sugestivas da enfermidade, mas a
conrmao laboratorial importante para des-
cartar outras doenas vesiculares. O diagnstico
denitivo pode ser obtido por IFA, ME de raspa-
dos das leses ou pelo isolamento do agente em
cultivo de clulas de sunos.
No existem vacinas disponveis para a en-
fermidade, embora tentativas de imunizao com
vrus adaptado em cultivo celular tenham surti-
do resultados promissores. O controle da doena
geralmente obtido pela eliminao dos piolhos,
associado com medidas de higiene e desinfeco
de ambientes e instalaes.
5.4 Gnero Molluscipoxvirus
5.4.1 Vrus do Molluscum contagiosum

A doena causada pelo vrus do Molluscum
contagiosum especca dos humanos, mas ser
abordada nesta seo por ser confundida com in-
feces zoonticas causadas por outros poxvrus.
A doena ocorre em crianas em todos os con-
tinentes, mas mais comum em alguns pases,
como o Congo e Nova Guin. Fontes de cont-
gio bastante comuns so as piscinas coletivas e
ginsios de esporte, e as crianas se infectam pelo
contato direto com pequenas leses nas mos; a
infeco de adultos ocorre freqentemente pela
via sexual.
A enfermidade caracterizada por ndulos
bem delimitados, com 2 a 5 mm de dimetro, li-
mitados epiderme e que ocorrem em qualquer
regio do corpo, com exceo da palma das mos
e sola dos ps. Os ndulos no causam dor e po-
dem levar vrios meses at a recuperao com-
pleta.
5.5 Gnero Yatapoxvirus
5.5.1 Vrus yabapox e tanapox
Os vrus yabapox e tanapox infectam natu-
ralmente humanos e macacos no Oeste da frica.
O vrus yabapox causa tumores grandes e benig-
nos em reas desprovidas de plos da face, nas
palmas da mo e ps e nos espaos interdigitais,
alm das mucosas dos lbios, palato, narinas e si-
nus de macacos, embora possa infectar humanos
em contato com os macacos doentes.
O vrus tanapox causa uma doena em hu-
manos, provavelmente contrada pela picada de
artrpodos, que adquirem o vrus de algum ani-
mal reservatrio. As leses iniciam como ppulas,
504 Captulo 18
que progridem para vesculas, geralmente sem o
aparecimento de pstulas. Tambm podem ocor-
rer febre, dor de cabea e prostrao.
5.6 Gnero Avipoxvirus
5.6.1 Vrus da bouba aviria
O vrus da varola aviria tambm muito
conhecido como vrus da bouba aviria. As es-
pcies virais classicadas dentro do gnero so
especcas de aves e so antigenicamente rela-
cionadas, embora possam ser diferenciadas pelo
espectro de hospedeiros, por sorologia e pela
formao diferencial de leses em cultivos de c-
lulas e na membrana corioalantide de ovos em-
brionados. Os vrios vrus deste gnero tambm
apresentam patogenicidade diferente de acordo
com as espcies de aves. Esses vrus tm sido iso-
lados de todas as espcies de aves domsticas e
silvestres e tm recebido denominao relaciona-
da com os seus hospedeiros.
Os avipoxvrus so distribudos mundial-
mente e as suas infeces tm sido descritas h
sculos. Criaes de galinhas, perus e pombos
podem sofrer perdas considerveis em algumas
pocas do ano, geralmente relacionadas com a
presena de um maior nmero de vetores trans-
missores do agente. O avipoxvrus de galinhas
altamente infeccioso para galinhas e perus, rara-
mente para pombos e nada para os patos e can-
rios. J o poxvrus de perus virulento para os
patos.
A transmisso do vrus pode ocorrer por
contato direto ou indireto, mas a transmisso
mecnica por insetos geralmente a mais impor-
tante. A transmisso mecnica por artrpodos
o provvel mecanismo de transmisso e dissemi-
nao dos diferentes avipoxvrus para as diver-
sas espcies de aves.
O perodo de incubao da enfermidade va-
ria entre 4 e 10 dias para galinhas, perus e pom-
bos. A doena pode ocorrer numa forma diftri-
ca, cutnea ou ambas. A forma cutnea a mais
comum nos surtos. As aves afetadas geralmente
apresentam poucos sinais sistmicos, como de-
presso, reduo leve ou moderada do ganho
de peso e produo de ovos. As leses evoluem
de ppulas para vesculas, pstulas e crostas,
dependendo do momento da observao. As re-
gies desprovidas de penas so mais atingidas,
principalmente a cabea, pescoo, patas, pernas e
ao redor da cloaca. Uma apresentao incomum
das leses em reas emplumadas do corpo (dorso
e coxas) teve grande repercusso econmica na
regio Sul do Brasil nos anos 1990.
A forma diftrica se caracteriza por leses
na parte superior do trato respiratrio e digesti-
vo, que podem resultar em dispnia, inapetncia,
descarga nasal e ocular. As leses nas mucosas
caracterizam-se por placas salientes de colorao
amarelada, principalmente na boca. Essas leses
geralmente acompanham as leses cutneas, mas
podem ocorrer isoladamente em alguns indiv-
duos.
Resposta imunolgica humoral e celular
pode ser detectada aps a recuperao da infec-
o, mas os anticorpos maternos no so capazes
de proteger a prognie.
As leses cutneas e diftricas podem ser
examinadas histologicamente e apresentam in-
cluses citoplasmticas. O material coletado
pode tambm ser submetido ao isolamento viral.
O isolamento pode ser realizado pela inoculao
do material em aves susceptveis, por escarica-
o da crista ou puno da membrana da asa ou
atravs de inoculao na membrana corio-alan-
tide de ovos embrionados de 9 a 12 dias. Em cul-
tivos de clulas de aves, o vrus pode no produ-
zir efeito citoptico evidente em uma inoculao
inicial.
O diagnstico laboratorial importante
para diferenci-la da laringotraquete infecciosa,
micotoxicose T-2 e decincia de biotina e cido
pantotnico.
Em regies e pocas do ano mais propensas
ocorrncia da doena, os pintos devem ser vaci-
nados j no primeiro dia de vida, por via subcut-
nea, no incubatrio, ou in ovo no 18 dia de incu-
Poxviridae 505
bao. Para a imunizao, podem ser utilizadas
cepas virulentas de galinhas que so inoculadas
no folculo da pena ou por escaricao da asa ou
da perna. Os poxvrus de canrios e de pombos
so naturalmente atenuados para galinhas e tam-
bm tm sido utilizados como vacina.
O controle da populao de insetos nas
pocas problemticas tambm pode ser muito
eciente para diminuir a disseminao da doen-
a durante um surto. O tratamento dos animais
afetados com antibiticos tambm pode reduzir
as infeces secundrias durante os surtos da do-
ena.
5.7 Gnero Leporipoxvirus
5.7.1 Vrus do mixoma dos coelhos
O vrus do mixoma o agente da mixoma-
tose, que uma doena generalizada e altamente
fatal em coelhos europeus. A denominao da
doena se deve ao edema subcutneo gelatinoso
que se desenvolve nos animais infectados. Em
coelhos selvagens das Amricas, o vrus causa
bromas benignos. O vrus do mixoma foi o pri-
meiro vrus introduzido no meio ambiente com o
objetivo de controlar uma populao de animais,
estratgia utilizada na Austrlia para controlar a
populao de coelhos silvestres.
Os hospedeiros naturais do vrus so as es-
pcies de coelhos das Amricas, Sylvilagus brasi-
liensis, na Amrica do Sul, e S. bachmani na Am-
rica do Norte. Nesses hospedeiros, o vrus causa
um broma cutneo benigno. Contudo, nos co-
elhos da Europa (Oryctolagus cuniculus), o vrus
causa uma doena generalizada que geralmente
fatal. Na dcada de 1950, o vrus foi introduzido
na populao de O. cuniculus da Europa, Chile
e Austrlia para o controle biolgico dessas po-
pulaes. Num primeiro momento, mais de 99%
da populao de coelhos infectados morria, e a
doena tornou-se endmica nessas regies. Aps
um determinado perodo, foram detectadas ce-
pas de vrus atenuadas, assim como populaes
de coelhos resistentes. Nos locais onde a doena
ainda se manifesta, as epidemias ocorrem sazo-
nalmente todos os anos devido ao aumento da
populao de artrpodes vetores e presena de
muitos coelhos jovens susceptveis.
A transmisso do agente pode ocorrer por
secrees respiratrias, mas mais comum atra-
vs de artrpodos, como mosquitos, moscas, car-
rapatos, pulgas e piolhos. Esses artrpodos atuam
como vetores mecnicos. O vrus replica nos teci-
dos prximos picada do inseto e nos linfonodos
regionais. A viremia que se segue est associada
s clulas, principalmente aos linfcitos. O ede-
ma gelatinoso, que mais evidente na cabea e ao
redor da rea anogenital, e a blefaroconjuntivite,
com secreo ocular opalescente, do aos animais
uma aparncia leonina. Os coelhos infectados -
cam febris e muito apticos, alguns podendo mor-
rer em menos de 48 horas. A maioria dos animais
infectados, no entanto, morre em at 12 dias. A
progresso e morte rpida pela doena so mais
comuns com isolados da Califrnia. Nos coelhos
que sobrevivem por mais tempo, o edema sub-
cutneo ocorre em todo o corpo dentro de 2 a 3
dias. A presena do vrus pode ativar a infeco
por Pasteurella multocida, resultando em secreo
nasal. Temperaturas baixas tambm podem au-
mentar a severidade da doena. A mortalidade
que varia entre 25 e 90% inuenciada tanto pela
virulncia da cepa de campo quanto pela resis-
tncia gentica da populao de coelhos.
O diagnstico de mixomatose em coelhos
europeus pode ser feito pelas manifestaes cl-
nicas. O isolamento do vrus ou a deteco de um
poxvrus indistinguvel do VV no exsudato ou le-
ses conrma o diagnstico. O isolamento pode
ser feito por inoculao de coelhos, inoculao na
membrana corioalantide de ovos embrionados
de galinha ou em cultivos de clulas de coelhos
ou galinhas.
A proteo dos coelhos de laboratrio ou de
criaes comerciais pode ser obtida utilizando-se
uma vacina viva com uma cepa do vrus do mi-
xoma atenuado ou com o vrus do broma dos
506 Captulo 18
coelhos, um vrus relacionado aos Leporipoxvirus.
A reduo das populaes de artrpodes vetores
ou o impedimento de sua entrada nos criatrios
tambm auxilia no controle da doena em reas
endmicas.
5.8 Gnero Parapoxvirus
Os trs parapoxvrus mais importantes em
veterinria so: o vrus do ectima contagioso dos
ovinos (orf); o vrus da pseudovarola bovina e
o vrus da estomatite papular bovina. Esses v-
rus tambm infectam vrias espcies de animais
terrestres e aquticos. As leses causadas pelos
parapoxvrus tendem a ser localizadas e prolife-
rativas. As leses causadas pelas trs espcies vi-
rais so indistinguveis e se iniciam com ppulas,
que aumentam e se tornam granulosas e crosto-
sas, podendo persistir por vrias semanas antes
de regredir. Essas trs espcies virais so poten-
cialmente zoonticas e podem afetar pessoas que
possuem contato com os animais, como criado-
res, ordenhadores e veterinrios. As leses nas
pessoas se desenvolvem com maior freqncia
nas mos e so geralmente localizadas e autoli-
mitantes.
Os parapoxvrus possuem vrions com mor-
fologia que difere dos outros gneros de poxv-
rus, apresentando protenas tubulares organiza-
das de forma cruzada na superfcie do vrion (ver
Figura 18.2). Essa caracterstica possui utilidade
para o seu diagnstico, pois permite diferencia-
o de outros poxvrus atravs da ME.

5.8.1 Vrus do ectima contagioso
O vrus do ectima contagioso, ou vrus da
orf (OrfV) o agente etiolgico do ectima conta-
gioso dos ovinos e caprinos, tambm chamado
de boca sarnenta, dermatite pustular contagio-
sa de ovinos, estomatite pustular contagiosa,
dermatite labial infecciosa e orf. A palavra orf
derivada de uma expresso inglesa antiga para
rugoso (rough). Em algumas regies do Brasil, a
doena em ovinos denominada boqueira. O ecti-
ma contagioso uma enfermidade exantematosa
vesicular e pustular localizada que afeta ovinos,
caprinos e outros pequenos ruminantes. A enfer-
midade tem distribuio mundial.
O OrfV se multiplica em cultivos primrios
ou linhagens celulares de ovinos, bovinos e hu-
manos, mas no replica na membrana crio-alan-
tide de ovos embrionados. Isolados de campo
apresentam considervel variabilidade gentica,
que pode ser evidenciada por anlise de restri-
o enzimtica do genoma. No entanto, essa va-
riabilidade gentica no se reete em diferenas
antignicas detectveis por testes de SN, ou seja,
os diferentes isolados so antigenicamente rela-
cionados e apresentam reatividade sorolgica
cruzada.

O vrus ocorre em todas as regies do mun-
do onde existem criaes de ovinos e caprinos e
mantido nas populaes por infeces persis-
tentes e tambm pela sua longa sobrevivncia em
crostas secas no ambiente. O vrus pode perma-
necer vivel em crostas secas nas pastagens du-
rante vrios meses e at anos. A disseminao da
doena pode ocorrer por contato direto ou indi-
reto por fmites e, principalmente, por pastagens
contaminadas. Alm das pastagens, as instala-
es, estbulos e utenslios podem abrigar o vrus
vivel por longo tempo e servir de veculo para
a sua transmisso. Forragens abrasivas contami-
nadas com o vrus facilitam a instalao da infec-
o e podem resultar em infeco disseminada.
Cordeiros tambm podem adquirir a infeco ao
mamarem nas ovelhas com leses nas tetas. Em
criaes intensivas, a infeco se dissemina rapi-
damente, principalmente em connamentos de
cordeiros para engorda.
A enfermidade afeta animais de todas as
idades, mas mais grave em cordeiros lactentes
que perdem peso e podem at morrer de inanio
por no se alimentarem devido s leses nas co-
missuras orais. Condies decientes de higiene,
decincia de vitamina A, estresse e outras con-
dies que causem imunodepresso predispem
ocorrncia de surtos severos. Infeces subclni-
cas provavelmente tambm ocorram.
As taxas de morbidade aps a introduo do
agente em rebanhos livres podem atingir 100%,
mas a mortalidade geralmente baixa e deve-se
principalmente a complicaes secundrias e
inanio em cordeiros jovens.
Poxviridae 507
O vrus tambm pode infectar espcies sil-
vestres que compartilham pastagens com capri-
nos e ovinos afetados e, ocasionalmente, ces e
humanos envolvidos na criao dessas espcies
podem tambm ser infectados.

O vrus geralmente penetra pela pele ou jun-
o mucocutnea dos lbios e focinho, pelo con-
tato direto entre animais ou pelo contato e leses
causadas por pastagens abrasivas. O perodo de
incubao varia entre dois e seis dias. A doena
caracterizada por leses nos lbios e focinho,
mas pode afetar a boca e lngua, principalmen-
te em cordeiros jovens, alm das reas interdi-
gitais, genitlia e bere. As ppulas e vesculas
progridem rapidamente para pstulas e poste-
rior formao de crostas. As leses crostosas so
salientes na pele e, freqentemente, apresentam
rachaduras e sangramento, podendo predispor
a contaminaes secundrias e miases. Traumas
leves tambm podem fazer as crostas carem e as
leses sangrarem. As leses nos lbios levam
reduo da ingesto de pasto ou amamentao, o
que leva perda progressiva de peso. As perdas
tambm podem decorrer do desenvolvimento de
infeces bacterianas e parasitrias (miases) nas
leses. Nos casos no complicados, o curso da
doena dura alguns dias e seguido da resolu-
o das leses. A durao da doena no rebanho,
no entanto, pode se estender por semanas e at
meses, pela infeco gradativa e seqencial de
outros animais susceptveis.
Na forma genital, as leses podem ocorrer
no escroto, prepcio e pnis ou na mucosa vulvar
e no perneo. Leses tambm ocorrem com freq-
ncia no bere e nas tetas, o que faz com que as
ovelhas evitem a mamada dos cordeiros.
A forma generalizada, que no muito co-
mum, geralmente fatal e caracteriza-se pelo
desenvolvimento de leses tpicas generalizadas
na pele e nas mucosas da boca, faringe e esfa-
go. Uma pleuropneumonia supurativa, devido a
contaminaes bacterianas secundrias, termina
agravando o quadro e uma das principais res-
ponsveis pela mortalidade.

5.8.1.3 Diagnstico
O diagnstico presuntivo baseia-se nos da-
dos clnicos e epidemiolgicos. As leses crosto-
sas so tpicas, inicialmente afetam poucos ani-
mais e rapidamente se disseminam para todos os
animais jovens que nunca foram infectados ou
vacinados. Em rebanhos virgens, a enfermidade
se alastra e infecta animais de todas as idades. Ao
exame microscpico, podem ser observadas clu-
las em forma de balo e corpsculos de incluso
do tipo B nas leses epiteliais.
O diagnstico clnico, aliado ao histrico e
informaes epidemiolgicas, , geralmente, su-
ciente para denir a etiologia da doena. No en-
tanto, o vrus pode ser identicado por ME a partir
de crostas coletadas dos animais doentes. O vrus
pode tambm ser isolado em clulas cutneas ou
de testculo de embrio ovino. Na prtica clnica,
o diagnstico geralmente clnico, podendo ser
acompanhado de conrmao por ME.

Em reas endmicas, o controle baseia-se na
vacinao macia dos rebanhos, utilizando-se o
vrus virulento coletado de leses ou multiplica-
do em cultivos celulares. No Brasil, a vacina dis-
ponvel foi produzida pela escaricao cutnea
e inoculao do vrus nas leses. A vacinao
realizada pela deposio de gotas da vacina em
escaricaes da pele, produzidas com objetos
pontiagudos (agulhas hipodrmicas) em reas do
corpo que no resultem em leses importantes e
que no permitam a lambedura, como as axilas e
as faces internas das coxas. A vacinao das ove-
lhas antes do perodo de nascimento dos cordei-
ros diminui o risco de uma epidemia.
A ocorrncia de infeces crnicas, a possi-
bilidade de ovinos previamente expostos se rein-
fectarem e a longa permanncia do vrus vivel
no ambiente tornam difcil a erradicao da do-
ena uma vez estabelecida no rebanho.
Em casos de surtos, os animais afetados de-
vem ser separados dos demais e mantidos sob
observao para evitar complicaes bacterianas
508 Captulo 18
ou parasitrias. Tratamento tpico das leses e
administrao de vitamina A, alm de antibio-
ticoterapia, para evitar contaminaes secund-
rias, tambm so indicados. Quando possvel,
os animais no afetados devem ser mudados de
potreiro, evitando o pastoreio em pastagens alta-
mente contaminadas. O fornecimento de alimen-
to macio e palatvel pode favorecer a continuida-
de da alimentao e a recuperao dos animais
afetados.
Rebanhos livres devem investir na preven-
o da introduo do agente, atravs de quaren-
tena de animais eventualmente introduzidos na
propriedade.
5.8.2 Vrus da pseudovarola bovina
A pseudovarola bovina (pseudocowpox)
ocorre em todo o mundo, mas possui pouca im-
portncia sanitria e econmica na maioria dos
pases onde ocorre. uma doena branda e co-
mum de bovinos, que afeta principalmente vacas
em lactao. Na Inglaterra, a prevalncia de reba-
nhos que j apresentaram casos alta; na frica
do Sul, a doena tem sido implicada em perdas
importantes para rebanhos leiteiros, principal-
mente pela reduo na produo de leite. Nes-
te pas, a doena tem sido associada a condies
precrias de higiene e manejo de gado leiteiro.
O vrus da pseudovarola (um parapoxvrus)
muito semelhante e possivelmente trata-se da
mesma espcie de vrus ao agente da estomatite
papular bovina e apresenta alguma relao tam-
bm com o vrus do ectima contagioso dos ovi-
nos. O vrus replica em clulas de cultivo deriva-
das de bovinos e ovinos, mas no na membrana
crio-alantide de ovos embrionados.
O agente geralmente introduzido nos reba-
nhos pela introduo de animais infectados. Uma
vez introduzida, a infeco se dissemina lenta-
mente entre os animais do rebanho leiteiro, por
contato direto ou indireto. A transmisso ocorre
freqentemente pelos bezerros, quando esto se
amamentando, ou por moscas, alm dos equipa-
mentos de ordenha e mos do ordenhador. Como
foi mencionado, a transmisso do agente e a sua
disseminao no rebanho esto diretamente liga-
das a condies inadequadas de higiene e manejo
da ordenha.
O perodo de incubao situa-se ao redor de
seis dias, aps o qual aparecem leses eritema-
tosas nas tetas. As leses evoluem para ppulas
com um centro umbilicado e, posteriormente,
para crostas abundantes, seguidas de descama-
o. Vesculas e pstulas recobertas com crostas
tambm so comuns, resultando em crostas com
aspecto tpico, com a forma de anel ou ferradura.
As crostas geralmente so descamadas em pou-
cos dias, mas podem tambm durar por semanas.
Contaminaes bacterianas secundrias podem
agravar o quadro da infeco aguda e retardar a
resoluo, o que pode acarretar em queda impor-
tante na produo de leite do rebanho. Leses se-
melhantes podem ocorrer no focinho de bezerros
que esto mamando nas vacas afetadas. A imu-
nidade gerada pela infeco tem curta durao, e
infeces recidivantes (mais comuns) ou crnicas
(ocasionais) podem ocorrer.
O vrus pode ser transmitido e infectar hu-
manos por contato direto, resultando no chama-
do ndulo do ordenhador (milkers nodule). Alm
das leses locais (mos), a fase aguda da doena
em humanos pode incluir febre e infartamento
dos linfonodos regionais. A enfermidade huma-
na geralmente leve, benigna e se resolve em
poucos dias.
O diagnstico indicado a microscopia ele-
trnica sob colorao negativa de material cole-
tado a partir das leses (vesculas ou crostas), em
que partculas vricas tpicas podem ser visuali-
zadas. O isolamento viral pode ser tentado, mas
geralmente requer vrios dias. Testes sorolgicos
no so indicados para o diagnstico e no tm
sido mais utilizados. O diagnstico diferencial
deve incluir a varola bovina (cowpox), doena de
lumpy skin e mamilite herptica (BoHV-2).
O controle deve ser realizado mediante
medidas de higiene adequadas de ordenha, que
devem incluir o mergulho dos tetos em desin-
fetantes apropriados. O isolamento dos animais
afetados e o manejo separado da ordenha podem
reduzir a circulao do vrus entre os animais.
No existem vacinas disponveis contra essa en-
fermidade.

Poxviridae 509
5.8.3 Vrus da estomatite papular bovina

A estomatite papular bovina uma doena
de importncia limitada em condies normais
de manejo de gado leiteiro. A enfermidade ocorre
em todo o mundo e parece estar limitada esp-
cie bovina, embora os humanos possam ser even-
tualmente infectados. A incidncia maior ocorre
em bovinos com idade inferior a dois anos, po-
rm pode acometer animais de todas as idades.
Tem sido sugerido que o vrus possa estabelecer
infeces latentes e, assim, permanecer nos seus
hospedeiros por longo tempo. A doena se carac-
teriza pela produo de exantemas papulares no
focinho, lbios e gengivas, e , geralmente, locali-
zada e benigna.
O parapoxvrus causador da enfermidade
pode ser propagado em cultivos celulares de ori-
gem humana, bovina e ovina, porm no replica
em ovos embrionados de galinha ou em animais
de laboratrio.
O vrus excretado pelas secrees nasais e
orais, e a transmisso provavelmente ocorra por
contato direto ou indireto. O perodo de incuba-
o geralmente de trs a cinco dias. A doena
caracterizada pelo desenvolvimento de leses
similares pseudovarola bovina nos lbios, pa-
pilas bucais, coxim dental, palato mole e duro,
lngua, focinho e narinas. Ppulas hipermicas,
com necrose na rea central e anis coloridos
concntricos, so leses caractersticas. A doen-
a geralmente localizada e no h evidncias
de envolvimento sistmico. A maioria dos casos
clnicos observada na primavera e incio do ve-
ro. A taxa de morbidade, aps a introduo do
agente em um rebanho susceptvel, pode atingir
100%. O estresse ou outras situaes de imuno-
depresso parecem precipitar a enfermidade em
animais susceptveis. Por isso a doena pertence
ao complexo de doenas associadas ao estresse
e aglomerao de animais (crowding syndrome
complex).
Embora o vrus possa ser isolado em culti-
vo celular, o diagnstico laboratorial de eleio
a ME em material obtido das crostas ou em ras-
pados das leses. Testes sorolgicos no so uti-
lizados.
Doenas que cursem com estomatite em bo-
vinos, como a infeco pelos vrus da febre aftosa
(FMDV), da diarria viral bovina (BVDV) e peste
bovina (RPV) devem ser consideradas no diag-
nstico diferencial.
O controle da doena feito por medidas
de higiene adequadas para evitar a propagao
do agente. No existem vacinas comerciais dis-
ponveis. Recentemente, uma vacina heterloga,
baseada no agente do ectima contagioso dos ovi-
nos, foi desenvolvida, mas no h consenso com
relao a sua eccia.
6 Os poxvrus como vetores
de expresso
A primeira descrio do uso do VV, como
vetor, ocorreu em 1982, e, desde ento, os poxv-
rus tm se tornado vetores de expresso muito
utilizados. A sua utilizao pode ser feita com o
m de estudar a biologia molecular dos poxvrus,
produzir e caracterizar a funo de protenas e,
principalmente, na produo de vacinas replica-
tivas. Vrias caractersticas tornam os poxvrus
recombinantes excelentes candidatos para esta
ltima nalidade: a) a estabilidade da vacina lio-
lizada; b) o seu baixo custo, facilidade de pro-
duo e administrao; c) a sua capacidade de
induzir resposta imune humoral e celular contra
os antgenos cujos genes foram inseridos no ge-
noma; d) a sua utilizao permite a discrimina-
o da resposta vacinal da induzida pela infeco
natural, j que somente alguns antgenos do pa-
tgeno de interesse so expressos; e) a possibili-
dade de deletar grandes pores de seu genoma
e inserir vrios genes exgenos, o que permite a
produo de vacinas multivalentes.
Resumidamente, a estratgia de uso de pox-
vrus como vetores de expresso consiste na in-
troduo de genes heterlogos no genoma desses
vrus. A infeco dos poxvrus recombinantes in
vitro (cultivos celulares) ou in vivo (em animais)
resulta na expresso das protenas de interesse
cujos genes foram introduzidos no genoma. O
uso dessa estratgia em vacinas muito interes-
sante, pois genes de protenas de outros vrus de
interesse podem ser incorporados ao genoma dos
510 Captulo 18
poxvrus e, assim, obtm-se uma vacina viral que
expressa antgenos de diferentes vrus.
Como fator indesejvel, deve-se conside-
rar que, dentro de um determinado gnero da
famlia Poxviridae, existe uma relao antignica
estreita que pode resultar em proteo cruzada
entre diferentes espcies de vrus. Dessa forma, a
existncia de imunidade contra o vrus selvagem
que deu origem ao vetor pode reduzir o sucesso
da vacinao com o vrus recombinante. Algu-
mas estratgias que utilizam diferentes combina-
es de vetores e rotas de imunizao tm sido
utilizadas para evitar esse problema.
Para ser utilizados como vetores, as cepas
virais candidatas devem ser atenuadas de forma
a no causar doena no hospedeiro. Essa atenua-
o tem sido obtida pela passagem sucessiva do
vrus em hospedeiros heterlogos, pela deleo
de genes envolvidos na patogenicidade e pela in-
sero de genes que aumentem a resposta imune
ao vetor.
Vrios poxvrus, como o VV, podem infectar
um grande nmero de espcies animais. Se isso
representa uma vantagem, pois permite o seu uso
como vacina em vrias espcies, pode tambm se
constituir em uma restrio. Dessa forma, deve
ser determinado o risco da infeco e os seus pos-
sveis efeitos em outras espcies que podem ser,
acidentalmente, infectadas aps a liberao de
um poxvrus recombinante no meio ambiente ou
pela disseminao do vrus recombinante a partir
de um animal vacinado.
Vrios vetores derivados dos poxvrus de
suno, ovino, caprino e parapoxvrus foram des-
critos e experimentalmente testados. A primeira
vacina de poxvrus recombinante utilizada foi o
VV, contendo o gene da glicoprotena G do vrus
da raiva (RabV). Este vetor foi construdo a partir
da insero do cDNA da gG do RabV no local do
gene da timidina quinase da cepa Copenhagen
do VV. Essa vacina foi utilizada para a imuniza-
o oral de raposas e outros carnvoros de vida
livre contra a raiva, a partir de 1987, na Blgica,
e propiciou o controle e at mesmo a erradicao
desta doena de vrios pases europeus.
Um avano importante na utilizao dos pox-
vrus como vetores vacinais foi obtido quando se
demonstrou que os avipoxvrus poderiam ser-
vir de vetores ecazes e seguros de vacinas para
mamferos. A sua multiplicao natural restrita
s aves, contudo, a sua inoculao em clulas de
mamferos resultou na expresso de genes inseri-
dos no seu genoma e a inoculao em mamferos
induziu uma imunidade protetora. Essa imuniza-
o na ausncia de replicao produtiva eliminou
a possibilidade de disseminao do vetor a par-
tir do animal vacinado para os contatos ou meio
ambiente. Alm disso, a utilizao deste vetor em
espcies que no so reservatrios dos avipoxv-
rus torna improvvel a ocorrncia de recombina-
o que altere a patogenicidade do vetor. A outra
grande vantagem da utilizao dos avipoxvrus
como vetores a possibilidade de aplicao em
animais com imunidade prvia contra o VV.
Na ltima dcada, houve um grande nmero
de relatos da utilizao de uma cepa de poxvrus
de canrio (canaripox) atenuada recombinante em
animais e humanos, cando bem determinada a
sua segurana e eccia na induo de proteo.
Uma vacina experimental contra o vrus da AIDS
(HIV) foi produzida pela insero do gene da
gp160 no genoma desse poxvrus. Vrias vacinas
de uso veterinrio, baseadas no poxvrus do ca-
nrio, esto disponveis comercialmente no Bra-
sil e em outros pases. Dentre estas se incluem: a)
vacina contra o vrus da cinomose canina (CDV),
na qual o poxvrus vetor contm os genes das gli-
coprotenas H e F; b) vacina contra o vrus da leu-
cemia felina (FeLV), em que o vrus vetor contm
o gene da glicoprotena de superfcie do FeLV; c)
vacina contra o vrus do Nilo Ocidental (WNV)
para uso em eqinos, no qual o gene da principal
glicoprotena de superfcie do WNV foi inserido
no genoma do vrus vetor. Essa estratgia to
promissora e o desenvolvimento das vacinas
to gil, que se pode antecipar que o nmero de
vacinas animais, utilizando o poxvrus do can-
rio como vetor, ampliar-se- signicativamente
nos prximos anos. Pode-se especular tambm
que a utilizao criteriosa de poxvrus recombi-
nantes, como vetores vacinais, propiciar a pre-
veno, erradicao e cura de algumas doenas
que causam impacto na sade animal.
Poxviridae 511
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ASFARVIRIDAE
Gustavo Delhon
1

1
Traduo: Fernanda Silveira Flores Vogel
19
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524
1 Introduo
2 Classicao
3 Propriedades dos vrions, estrutura e organizao genmica
4 Replicao
4.1 Adsoro
4.2 Penetrao
4.3 Expresso gnica
4.3.1 Transcrio
4.3.2 Sntese e modicao das protenas
4.5 Morfognese
5 Vrus da peste suna africana
5.1 Epidemiologia
5.2 Patogenia, sinais clnicos e patologia
5.2.1 A infeco nos carrapatos
5.3 Imunidade
5.4 Diagnstico
5.5 Controle e prolaxia
1 Introduo
A famlia Asfarviridae constituda por ape-
nas uma espcie viral, o vrus da peste suna
africana (ASFV), origem da sua denominao.
O ASFV um vrus DNA envelopado, grande
e complexo, que compartilha vrios aspectos da
estrutura do genoma e estratgia de replicao
com os poxvrus. A replicao do ASFV ocorre
no citoplasma das clulas hospedeiras, em stios
perinucleares bem denidos, denominados fbri-
cas de vrus. Esse vrus exibe uma regulao tem-
poral da expresso gnica e apresenta a estrutu-
ra do genoma similar aos poxvrus, incluindo as
seqncias repetidas invertidas terminais, uma
regio central conservada e regies variveis nos
segmentos terminais do genoma.
O ASFV o agente etiolgico da peste su-
na africana (ASF), uma enfermidade severa e
muito importante de sunos, principalmente no
continente africano. A ASF tem sido observada
desde os primrdios do sculo 20 no sul e no leste
da frica e inicialmente era caracterizada pelos
aspectos clnico-patolgicos semelhantes aos da
peste suna clssica (CSF). No entanto, foi obser-
vado, posteriormente, que essas duas enfermi-
dades so muito diferentes. Na segunda metade
do sculo 20, a ASF foi detectada no sul e oeste
da Europa e posteriormente em Cuba, Repbli-
ca Dominicana, Haiti e Brasil. Atualmente, a ASF
est erradicada da maioria dos pases, mas per-
manece enzotica na frica subsaariana.
Na frica, o ASFV se mantm em ciclos sel-
vticos com infeco de sudeos selvagens e de
carrapatos do gnero Ornithodoros. A capacidade
de infectar carrapatos faz do ASFV o nico arbo-
vrus entre os vrus DNA. Os sudeos selvagens
infectados com o ASFV geralmente so assinto-
mticos e apresentam baixos nveis de viremia.
Por outro lado, a infeco de sunos domsticos
resulta em conseqncias diversas manifestaes
clnicas, que vo desde infeces subclnicas at
doena altamente fatal.
2 Classicao
O ASFV o nico membro no gnero Asvi-
rus e tambm da famlia Asfarviridae, uma fam-
lia recentemente estabelecida: Asfarviridae (Asfar,
african swine virus e vrus relacionados). Como
anteriormente citado, os vrus desta famlia apre-
sentam caractersticas semelhantes s de outros
vrus DNA grandes que replicam no citoplasma,
incluindo os membros das famlias Poxviridae, Iri-
doviridae e Phycodnaviridae. A replicao desses v-
rus relativamente independente da maquinaria
de transcrio da clula hospedeira.
A anlise genmica por restrio enzim-
tica permitiu a classicao do ASFV em cinco
tipos principais. Os vrus isolados nas Amricas
e Europa pertencem ao mesmo grupo gentico,
enquanto os isolados africanos apresentam uma
variao maior, provavelmente pelo maior tempo
de evoluo e divergncia gentica. Os isolados
de campo do ASFV apresentam diferentes nveis
de virulncia em sunos.
3 Propriedades dos vrions, estrutura
e organizao genmica
Os vrions do ASFV so envelopados e pos-
suem entre 175 e 215 nm de dimetro. As part-
culas vricas so constitudas por mais de 50 poli-
peptdeos e apresentam uma estrutura complexa,
mas regular, quando observados sob microsco-
pia eletrnica (Figura 19.1). Os vrions possuem
simetria icosadrica e apresentam vrias cama-
das concntricas, resultando em um dimetro
de aproximadamente 200 nm. O core (ou ncleo)
possui 80 nm e composto por uma estrutura nu-
cleoprotica eletrodensa envolta por uma cama-
da protica espessa, chamada de capa do ncleo
ou matriz. Estima-se que um tero da massa pro-
tica dos vrions esteja presente na matriz. Envol-
vendo esta estrutura central (core + matriz), exis-
te uma membrana lipdica dupla, originalmente
denominada membrana interna. Essa membrana
provavelmente derivada de cisternas do retcu-
lo endoplasmtico (RE). Externamente mem-
brana interna, est localizado o capsdeo, que
composto por mltiplas cpias da protena estru-
tural p72 (tambm referida como p73). Essa es-
trutura contm um tero da massa protica dos
vrions e determina a estrutura icosadrica do
vrion. Os capsmeros do ASFV so arranjados
de forma hexagonal, possuem 13 nm de dimetro
516 Captulo 19
e apresentam uma cavidade central. O nmero
de triangulao do ASFV tem sido estimado em
T=189 a T=127, sugerindo que entre 1.892 e 2.172
capsmeros formam o capsdeo. Revestindo ex-
ternamente o capsdeo existe uma membrana
lipdica adquirida pelo brotamento do vrus na
membrana plasmtica, mas que no necessria
para a infectividade viral.
O genoma do ASFV constitudo por uma
molcula de DNA de ta dupla de aproximada-
mente 190 kb, com regies terminais repetidas
e invertidas que contm estruturas secundrias
(hairpin-loops) prximas s extremidades. Pr-
ximo aos hairpins terminais so encontradas se-
qncias semelhantes quelas envolvidas na re-
soluo dos concatmeros durante a replicao
do genoma dos poxvrus. A regio central de
125 kbp do genoma contm genes conservados
entre os diferentes isolados, enquanto as regies
terminais so variveis, possuindo genes com di-
ferentes composies e nmeros de cpias entre
isolados. Nessas regies esto presentes os genes
pertencentes a famlias multignicas, que so
importantes para a determinao do espectro de
hospedeiros e da virulncia.
O genoma do ASFV codica cerca de 150
protenas, indicando a complexidade estrutural e
biolgica deste vrus. A maioria dessas protenas
codicada pela regio mais conservada do ge-
noma. Entre essas, esto as protenas de membra-
na e outras protenas estruturais, alm de prote-
nas recentemente envolvidas nas diversas etapas
de morfognese das partculas vricas.
Outras protenas do ASFV apresentam se-
qncias similares a protenas ou enzimas celu-
lares, incluindo aquelas que participam do meta-
bolismo de nucleotdeos, da replicao e reparo
do DNA, da transcrio e da modicao de pro-
tenas, e tambm as protenas requeridas para
atividades enzimticas que esto presentes nos
vrions ou so induzidas em clulas infectadas.
O ASFV tambm codica protenas que me-
deiam as interaes vrus-clula hospedeira, de-
terminam a virulncia e interferem em mecanis-
mos que favorecem a replicao viral na clula
hospedeira, incluindo homlogos dos inibidores
de apoptose celulares (IAP), Bcl-2, IkB, protenas
semelhantes lecitina e protenas CD2. Notavel-
mente, vrias protenas que inuenciam na viru-
lncia e no espectro de hospedeiros esto entre as
mais variveis entre os isolados do ASFV.
Os vrions do ASFV so estveis sob condi-
es ambientais, resistindo a amplas variaes de
temperatura e pH. O vrus preserva a viabilidade
aps seis meses em embutidos, ou aps anos em
carnes congeladas, indicando que os subprodu-
Figura 19.1. Vrions da famlia A) Fotografia de microscopia eletrnica de um vrion do ASFV; B)
Ilustraoesquemticadeumvrione seus componentes.
Asfarviridae.
Envelope externo
Capsdeo
Membrana interna 1
Membrana interna 2
Ncleo ou core
Matriz ou capa do
ncleo
A
B
200 nm
Fonte: A) Dra Sharon Brookes, IAH, Pirbright, UK ( ICTVdB).
Asfarviridae 517
tos de sunos podem ser importantes meios de
disseminao de vrus. Os vrions intactos so
muito sensveis a solventes lipdicos, detergen-
tes e agentes oxidantes, como o hipoclorito. Em
condies de laboratrio, o armazenamento de
tecidos infectados a -20C no recomendado,
enquanto a -70C a infectividade mantida por
tempo indeterminado.
4 Replicao
O vrus capaz de replicar em uma varieda-
de de clulas de origem suna e pode tambm ser
adaptado para multiplicar em linhagens celula-
res de outras espcies. Grande parte dos conheci-
mentos sobre a biologia do ASFV foi adquirida a
partir de estudos sobre a sua replicao em culti-
vos celulares.
4.1 Adsoro
Vrias protenas virais se ligam a compo-
nentes da superfcie da clula hospedeira, in-
cluindo a protena conservada p12 (p061R), a
protena estrutural p54, e a protena de membra-
na p30 (tambm chamada de p32 e de pCP204L).
Evidncias sugerem a participao da p72 e p54
na ligao do vrus com a membrana celular, e da
p30 na internalizao do vrion. No entanto, anti-
corpos neutralizantes contra essas protenas no
so sucientes para conferir proteo em camun-
dongos. Embora a identidade dos receptores que
medeiam a adsoro e penetrao do ASFV no
seja conhecida, molculas potencialmente envol-
vidas no papel de receptor tm sido detectadas
na superfcie de macrfagos sunos.
4.2 Penetrao
A internalizao do ASFV nas clulas in-
dependente de temperatura e de energia, mas
um processo dependente de reduo do pH, o
que sugere o mecanismo de endocitose mediada
por receptor. Neste caso, a fuso do envelope do
ASFV com a membrana celular ocorreria nos en-
dossomos. Tem sido sugerido que os ncleos dos
vrions seriam transportados no sentido retr-
grado ao longo dos microtbulos at os stios de
morfognese viral, que se localizam prximo ao
centro de organizao dos microtbulos. De fato,
a ruptura dos microtbulos induzida por drogas
inibe a sntese de DNA viral, o acmulo e pro-
tenas e a replicao do genoma, indicando que
o transporte ao longo dos microtbulos impor-
tante nas etapas iniciais da replicao do ASFV.
4.3 Expresso gnica
4.3.1 Transcrio
Os vrions do ASFV contm a RNA polime-
rase dependente de DNA, sugerindo que a trans-
crio e sntese de RNAs mensageiros (mRNA) se
inicia imediatamente aps a penetrao, indepen-
dente de enzimas e fatores celulares. A expresso
gnica do ASFV, semelhante a dos poxvrus, con-
siste de uma transcrio inicial de genes virais
especcos e de uma fase tardia de transcrio.
Essa fase tardia dependente de sntese protica
prvia e do incio da replicao do DNA.
A expresso dos genes iniciais pode ser de-
tectada j duas horas aps a infeco (pi), com
o pico da sntese ocorrendo entre 4 e 8 horas pi.
Os transcritos iniciais possuem uma pequena
seqn cia lder no-traduzida na regio 5 e pos-
suem extremidades 3 distintas. A expresso dos
genes tardios totalmente dependente da repli-
cao do DNA viral e atinge o pico entre 12 a 16
horas pi. H evidncias de que os transcritos tar-
dios tambm contm seqncias no-traduzidas
na extremidade 5 e terminam com seqncias de
poli-timidina (poliT).
Uma classe intermediria de mRNAs com
cintica de transcrio distinta tem sido caracte-
rizada. Embora sejam dependentes da replicao
do DNA viral como os genes tardios, os trans-
critos intermedirios utilizam stios de iniciao
diferentes e apresentam uma cintica diferente
de produo. Esses transcritos podem ser detec-
tados entre 4 e 6 horas aps a infeco e atingem
expresso mxima ao redor de 6 a 8 horas pi, de-
crescendo durante o mximo da expresso dos
genes tardios. Similarmente, os genes intermedi-
rios do vrus vaccinia so transcritos a partir do
DNA viral recm-replicado e codicam fatores
de transcrio necessrios expresso dos genes
518 Captulo 19
tardios. Fatores de ativao dos genes do ASFV
ainda no foram identicados, mas alguns pro-
dutos possuem homologia com fatores de trans-
crio do vrus vaccinia.

4.3.2. Sntese e modicao das
protenas
A produo das protenas do ASFV inicia em
fases bem precoces do ciclo e segue a mesma ci-
ntica da transcrio, resultando inicialmente na
sntese de protenas no-estruturais e, mais tar-
diamente, na produo das protenas estruturais.
As protenas produzidas sofrem diferentes modi-
caes aps a traduo. Aproximadamente 100
protenas virais de 10 a 220 kDa podem ser detec-
tadas em clulas infectadas, e as protenas tardias
correspondem a aproximadamente o dobro das
protenas iniciais. Embora as protenas estejam
preferencialmente localizadas nas fbricas virais,
outros padres de localizao so observados,
incluindo o nuclear, citoplasmtico difuso e em
membranas celulares.
O ASFV codica duas poliprotenas, a pp220
(pCP2475L) e a pp62 (pCP530R) que sofrem cli-
vagem pela protease viral aps a traduo e du-
rante a morfognese dos vrions, originando as
protenas estruturais maduras. A pp220 foi a
primeira precursora de protenas estruturais des-
crita para os vrus DNA e apresenta 2475 amino-
cidos miristilados. Essa proliprotena sofre um
processamento temporalmente regulado origi-
nando intermedirios de 90 e 55 kDa, e as prote-
nas estruturais maduras p150, p37, p34 e p14. As
duas poliprotenas so expressas tardiamente na
infeco e seu processamento ocorre entre uma e
trs horas aps a sua sntese. As protenas resul-
tantes se constituem nos principais componentes
da camada de revestimento externo do ncleo
dos vrions.
A protena pS273R apresenta similaridade
com proteases encontradas no vrus vaccinia e
nos adenovrus, alm de ser semelhante a protea-
ses celulares. Esta enzima uma protease de cis-
tena, responsvel pela clivagem da p220, sendo
encapsidada nos vrions. O ASFV produz efeitos
adicionais em nvel de traduo ou aps esta tra-
duo, afetando o direcionamento, estabilidade e
maturao das protenas. O ASFV codica uma
protena homloga a enzima celular que conjuga
protenas com a ubiquitina celular (pI215L), dire-
cionando-as para a degradao.
A sntese de DNA viral em moncitos de
sunos infectados in vitro inicia-se trs a quatro
horas aps a infeco e atinge nveis mximos
ao redor de 5 horas pi. O ASFV codica vrias
enzimas que esto envolvidas na replicao do
genoma, incluindo uma topoisomerase de DNA,
helicase, polimerase, ligase e protenas de asso-
ciao com o DNA.
A replicao do genoma parece ocorrer em
duas fases. Uma fase inicial, que ocorre no ncleo
e uma tardia e mais proeminente, que ocorre no
interior das fbricas virais. Em concordncia com
o papel do ncleo celular na replicao do DNA,
a replicao viral marcadamente inibida em c-
lulas Vero enucleadas. No entanto, extratos cito-
plasmticos coletados 8 horas pi foram capazes
de suportar a sntese de DNA, indicando que o
ncleo requerido somente nas fases iniciais. Foi
demonstrada a atividade de transporte citoplas-
ma-ncleo de duas protenas virais estruturais: a
p37 e a protena de reparo do DNA.
O mecanismo de replicao do genoma do
ASFV no est bem esclarecido. A presena de d-
meros formados pela ligao entre as seqncias
terminais do genoma sugere um mecanismo de
replicao via formao de concatmeros, cujas
unidades genmicas esto ligadas entre si. Aps
a replicao, as molculas de DNA resultantes,
presentes nas fbricas virais, se condensam em
uma estrutura pr-nucleide que inserida em
partculas icosadricas durante a maturao dos
vrions.
Algumas protenas codicadas pelo genoma
viral provavelmente medeiam funes que indi-
retamente aumentam ou asseguram a delidade
da replicao do genoma, incluindo aquelas en-
volvidas no metabolismo de nucleotdeos e no re-
paro no DNA. O aumento de atividade enzim-
tica celular induzida pela replicao viral e/ou a
presena de protenas virais homlogas indicam
que a timidina quinase, timidilato sintetase, ribo-
Asfarviridae 519
nucleotdeo sintetase e dUTPase virais propor-
cionam um aumento signicativo na quantidade
de desoxiribonucleotdeos disponveis para a sn-
tese de DNA. A dUTPase seria responsvel por
minimizar a incorporao errada de deoxiuridina
genotxica ao genoma viral. Alm disso, o vrus
codica diferentes protenas envolvidas no repa-
ro do DNA, que realizam a remoo de nucleot-
deos errados incorporados cadeia nascente de
DNA.
4.5 Morfognese
A replicao viral ocorre primariamente em
fbricas virais que so inicialmente observadas s
6-8 horas aps a infeco. Entre 12 e 24 horas pi
As fbricas virais contm um acmulo denso de
um material membranoso amorfo, e uma quanti-
dade crescente de capsdeos vazios imaturos e de
partculas virais maturas.
Durante os estgios iniciais da morfognese,
a principal protena estrutural, p72, recrutada
do citoplasma e se associa com membranas do RE.
Estruturas membranosas laminares adotam uma
forma polidrica que progride para a formao
do capsdeo na face convexa, e da capa do core na
superfcie cncava da membrana. A observao
de que as membranas precursoras dos vrions
apresentam duas camadas bilipdicas contguas
com a membrana do RE, alm da presena de
protenas virais associadas a essa organela; e de
protenas virais no lmen do RE (pXP124L), nas
fbricas virais e em vrions puricados, sugerem
que um colapso nas cisternas do RE permitiria
que as suas membranas formassem as membra-
nas internas do vrion.
A p54, uma protena de ligao com a clula
hospedeira e que se liga dinena, tambm cr-
tica para os eventos precoces envolvendo o recru-
tamento dos precursores das membranas ao RE.
Essa protena essencial para a replicao viral e
sua supresso inibe a morfognese anteriormente
formao dos precursores do envelope. Conco-
mitantemente formao do capsdeo, a camada
protica do core se forma na face interna da mem-
brana e compreeende principalmente produtos
da protelise das poliprotenas p220 e p62. O pro-
cessamento das poliprotenas ocorre juntamente
com a montagem da partcula viral e essencial
morfognese do ncleo ou core.
A formao das fbricas virais envolve al-
teraes drsticas no citoplasma da clula hos-
pedeira, incluindo o rearranjo de organelas, das
membranas e do citoesqueleto. A infeco pelo
ASFV induz a perda da cadeia do compartimen-
to de secreo tardio do trans Golgi. As mitocn-
drias migram e se acumulam prximas s fbricas
virais em um evento dependente dos microtbu-
los, assumindo uma morfologia consistente com
um aumento da respirao e em sincronia com a
induo do estresse mitocondrial pelas protenas
virais, como a Hsp60. A cadeia de microtbulos
se desorganiza aps o incio da replicao viral
e formao das fbricas virais, resultado da re-
distribuio das protenas e perda funcional do
centrossomo. As fbricas virais lembram agresso-
mos, que so incluses perinucleares que contm
acmulos de protenas celulares. Entre as seme-
lhanas dessas estruturas esto o recrutamento
dos chaperones e de mitocndrias, formao de
microtbulos, rearranjo dos lamentos interme-
dirios e o colapso da vimentina.
Embora os vrions maduros intracelulares
sejam infecciosos, eles so transportados para
a membrana plasmtica onde so liberados por
brotamento, formando os vrions extracelulares
envelopados. A habilidade da protena viral tar-
dia p14.5 em se ligar ao DNA e interagir com a
p72 sugere um papel no encapsidamento do ge-
noma. No entanto, a supresso da p14.5 indica
uma funo adicional dessa protena, envolven-
do a movimentao de vrions intracelulares para
a membrana plasmtica. De modo semelhante ao
transporte dos vrions nos microtbulos para as
fbricas virais no incio da infeco, tardiamen-
te os vrions recm-formados se alinham nos
microtbulos e, por transporte antergrado, so
transportados das fbricas virais para a membra-
na plasmtica. Este transporte dependente de
quinesina, uma protena motora convencional
que recrutada para as fbricas virais e para os
vrions citoplasmticos. Os vrions do ASFV na
superfcie celular tambm podem induzir a nu-
cleao da actina, similarmente ao vrus vaccinia,
que utiliza caudas de actina para facilitar a disse-
minao direta entre clulas.
520 Captulo 19
5 Vrus da peste suna africana
O ASFV o agente etiolgico da peste suna
africana (ASF), uma doena severa de sunos do-
msticos e que afeta tambm sudeos silvestres,
nos quais produz infeco subclnica ou de seve-
ridade moderada. Historicamente, a enfermida-
de tem sido restrita frica subsaariana, onde
endmica, mas j foi esporadicamente encontra-
da em pases europeus e americanos. A doena
clssica em sunos domsticos caracterizada
por hemorragias generalizadas, principalmente
em tecidos linfides, e por altas taxas de mortali-
dade. O agente mantido na natureza atravs de
ciclos alternados de infeco em carrapatos e em
sudeos selvagens.
5.1 Epidemiologia
Na frica subsaariana, o ASFV mantido
em um ciclo selvtico entre os sudeos selvagens
e os carrapatos do gnero Ornithodoros (Figu-
ra 19.2). Os warthogs (Potamochoerus aethiopicus)
so os principais hospedeiros naturais, mas o
vrus tambm foi demonstrado em populaes
de bushpigs (sunos selvagens, P. porcus) e javalis
(Sus scrofa ferus). Tentativas de reproduzir a in-
feco em outras espcies animais no obtiveram
sucesso.
Na natureza, o vrus encontrado em popu-
laes de carrapatos Ornithodoros sp., onde pode
persistir durante anos. Nos carrapatos, o vrus
pode ser transmitido pela via sexual e tambm
de forma vertical para a prognie, contribuindo
para a sua perpetuao na natureza. Os carra-
patos infectados se constituem no elo entre as
populaes de warthogs e os sunos domsticos,
podendo introduzir a infeco principalmente
em criaes de sunos ao ar livre. Uma vez intro-
duzido em criaes domsticas, o vrus pode ser
disseminar entre os animais por contato direto e
indireto, sem a participao dos carrapatos. Em
sunos com a infeco aguda, o vrus detecta-
do em todas as secrees e excrees, incluindo
a secreo ocular, nasal, farngea, genital, urina e
fezes. A transmisso natural entre sunos prova-
velmente ocorre pela via oronasal.
Diferentemente dos sunos domsticos, a
infeco de warthogs geralmente subclnica e
cursa com nveis baixos de viremia. A maioria
dos warthogs adultos em reas enzoticas so so-
ropositivos e, provavelmente, muitos deles so
persistentemente infectados. Outras espcies de
sudeos silvestres (bushpigs, javalis) raramente
apresentam sinais clnicos da infeco e so mais
resistentes transmisso por contato direto e in-
direto do que os sunos domsticos. No entanto,
a durao da viremia nessas espcies pode se
estender. Embora a replicao do ASFV in vitro
em leuccitos de sunos domsticos e de warthogs
Transmisso
transovariana
Infeco de
carrapatos
Possvel transmisso
sem a participao
de carrapatos
Transmisso por
carrapatos
Ciclo em criaes
domsticas
Transmisso por
carrapatos
Adulto
persistentemente
infectado
Infeco de
sunos
domsticos
Inoculao
do vrus
Warthogs jovens
Ciclo
silvestre
Figura 19.2. Ciclo silvestre e domstico do vrus da peste
sunaafricana (ASFV) nafrica.
Fonte: adaptada de Plowright et al. (1994).
Asfarviridae 521
seja similar, a replicao, disseminao e induo
de apoptose em linfcitos in vivo so reduzidas
nos sudeos silvestres quando comparada com os
sunos domsticos.
As taxas de morbidade e mortalidade da
ASF em sunos domsticos podem atingir 100%.
No entanto, vrios fatores podem inuenciar es-
ses ndices, incluindo a virulncia da cepa viral.
Aps surtos de ASF, no raro encontrar animais
que sobreviveram infeco. Esses animais geral-
mente apresentam uma infeco crnica ou suba-
guda e sobrevivem. Os animais que sobrevivem
infeco primria apresentam uma resposta imu-
ne capaz de proteger contra a reinfeco frente ao
vrus homlogo, mas podem permanecer suscep-
tveis a cepas heterlogas. Animais portadores
so importantes na manuteno e disseminao
do agente. Estudos sorolgicos em reas endmi-
cas tm demonstrado ndices de soropositividade
de at 8% em sunos enviados ao abate.
Na natureza, o ASFV infecta carrapatos do
gnero Ornithodoros sp. e pode ser isolado desses
insetos at vrios anos aps a infeco. A infeco
natural dos carrapatos pode ocorrer em todos os
estdios de desenvolvimento, com ecincia de
infeco variando entre 0,3 a 1,7%. Os carrapatos
podem se infectar ao sugar sangue de sudeos vi-
rmicos ou por transmisso sexual, transovaria-
na e transestadial. Os ttulos virais em carrapatos
infectados coletados de warthogs variam entre 10
4

and 10
6
HAD
50
. A infeco em carrapatos carac-
terizada pelo estabelecimento de infeco persis-
tente, na qual a replicao viral ocorre em nveis
altos em certos tecidos e rgos. Os carrapatos
infectados excretam o vrus tanto na saliva como
nos uidos coxais. Diferenas na taxa de infeco,
na dose infecciosa e em infeces persistentes tm
sido observadas de acordo com a cepa viral.
A infeco pelo ASFV endmica na maioria
dos pases da frica subsaariana e foi ocasional-
mente detectada em pases europeus, do Caribe
e da Amrica. O vrus foi introduzido na Euro-
pa mais de uma vez, provavelmente pelo movi-
mento de animais ou de subprodutos. A partir da
Pennsula Ibrica, o vrus atingiu a Frana, Ilhas
da Madeira, Sardenha e Malta, Blgica e Holan-
da. Em todos os casos, a infeco parece ter sido
prontamente erradicada. A infeco foi tambm
detectada em uma ocasio em Cuba (1971), onde
a erradicao exigiu o sacrifcio de 400.000 ani-
mais. No nal da dcada de 1970, o ressurgimento
da doena na Pennsula Ibrica foi acompanhado
de surtos na Repblica Dominicana, Haiti, Cuba
e Brasil. Esses surtos tambm foram prontamente
combatidos. Atualmente a doena se mantm en-
dmica apenas na metade sul da frica.
5.2 Patogenia, sinais clnicos
e patologia
Quando os sunos so expostos pela via oro-
nasal, o vrus replica inicialmente na mucosa fa-
rngea, nas tonsilas e os linfonodos regionais, de
onde se dissemina sistemicamente pelo sangue.
O vrus infecta primariamente as clulas do sis-
tema fagoctico mononuclear, incluindo macr-
fagos teciduais e linhagens especcas de clulas
reticulares. Os tecidos infectados apresentam le-
ses extensas, principalmente quando infectados
por cepas de alta virulncia. Cepas de virulncia
moderada tambm infectam esses tipos celula-
res, mas os graus de envolvimento tecidual e a
severidade das leses so menores. A habilidade
do ASFV em replicar e induzir citopatologia nos
macrfagos in vivo parece ser crtico para a viru-
lncia do vrus.
Na patogenia da infeco pelo ASFV, a
apoptose ou morte celular programada parece
desempenhar um papel importante. A infeco
de sunos resulta em apoptose de macrfagos, de
megacaricitos e principalmente de linfcitos. A
apoptose dos linfcitos signicativa nos linfo-
nodos, no bao e no timo, e a causa primria
da depleo de linfcitos e imunodecincia que
caracterstico da doena. Diferentemente dos
macrfagos, os linfcitos no so susceptveis
infeco pelo ASFV. Isto sugere que um mecanis-
mo indireto, possivelmente envolvendo citoqui-
nas secretadas pelos macrfagos infectados, seja
responsvel pela apoptose dos linfcitos.
As hemorragias, edemas e infuses de l-
quidos nas cavidades corporais parecem estar
associadas com trombocitopenia, coagulopatia,
brinlise e disfribinogenemia, e tambm com
a perda da integridade do endotlio vascular. A
formao de complexos imunes e liberao de
522 Captulo 19
prostaglandina E por macrfagos infectados po-
dem ser responsveis pela agregao plaquetria
e trombocitopenia. A brinlise e desbrinoge-
nemia parecem estar associadas com a liberao
de ativadores do plasminognio por macrfagos
ativados em resposta infeco. As leses ob-
servadas em casos crnicos tm sido atribudas
a componentes auto-imunes, incluindo a deposi-
o de complexos imunes e induo de inama-
o nos rins, pulmes e pele.
Diferentes genes do ASFV e diferentes regi-
es gnicas esto associados com a patogenia e
a virulncia da infeco em sunos domsticos,
mas no afetam a replicao do vrus em macr-
fagos in vitro. Dois desses genes, o UK (DP96R) e
o 23-NL (DP71L ou 114L), esto localizados pr-
ximos regio altamente varivel do genoma e se
constituem em provveis fatores de virulncia e,
portanto, alvos para a manipulao gentica para
a produo de mutantes vacinais.
A infeco de sunos domsticos pode resul-
tar em diferentes formas clnicas, variando desde
infeco subclnica at doena fatal, dependendo
de fatores virais e do hospedeiro. Na forma agu-
da da doena, o perodo de incubao varia entre
cinco e 15 dias. Os animais infectados apresen-
tam febre (41-42C), anorexia, congesto, cianose
da pele, aumento da freqncia cardaca e respi-
ratria, descarga nasal, incoordenao, vmito e
nalmente coma e morte. Os animais infectados
com o ASFV geralmente morrem entre dois e nove
dias aps a infeco. Os achados patolgicos na
infeco aguda incluem leucopenia, linfopenia de
linfcitos T e B, trombocitopenia, apoptose de c-
lulas mononucleares e de linfcitos, hemorragias
nos linfonodos, no fgado, nos rins, e nos tratos
respiratrio e gastrintestinal, congesto da pele e
de membranas serosas e grave edema pulmonar
interlobular.
A infeco subaguda dura aproximadamen-
te trs a quatro semanas, e os animais apresen-
tam febre remitente, perda de peso, pneumonia,
dispnia, insucincia cardaca e edema nas arti-
culaes. Hemorragias nos linfonodos e em ou-
tros tecidos podem ser observados na necropsia,
mas no so to freqentes como nas infeces
agudas.
A infeco persistente pelo ASFV tem sido
descrita em warthogs e em sunos domsticos que
sobrevivem infeco. Em condies experimen-
tais, a persistncia viral a seqela observada em
sunos domsticos que sobrevivem infeco.
Nesses animais, o DNA viral pode ser detectado
por PCR nos moncitos at 500 dias aps a infec-
o; no entanto, partculas vricas infectivas no
so consistentemente isoladas dessas amostras.
A exemplo dos outros vrus DNA grandes,
o AFV afeta e modula a resposta imunolgica do
hospedeiro. Os macrfagos infectados medeiam
alteraes na resposta celular e, provavelmente,
desempenham um papel importante na apoptose
severa observada em tecidos linfides. O ASFV
inibe a expresso de citoquinas pr-inamatrias
como o TNF, IFN, e IL-8, enquanto induz a pro-
duo de TGF pelos macrfagos infectados. No
entanto, um aumento da expresso do TNF tem
sido descrita na infeco pelo ASFV in vitro e in
vivo. Esse aumento pode possuir um papel central
na patogenia da infeco, incluindo alteraes na
permeabilidade vascular, na coagulao e na in-
duo de apoptose em linfcitos no infectados.
Os achados hematolgicos nos animais do-
entes incluem leucopenia, acompanhada de lin-
fopenia absoluta, monocitopenia e neutropenia.
A leucopenia parece ser devida destruio de
linfcitos, moncitos e neutrlos pela replicao
viral. No entanto, a infeco de linfcitos ainda
no foi inequivocamente demonstrada. A trom-
bocitopenia se desenvolve em estgios avana-
dos, e os nveis de plaquetas podem car drasti-
camente reduzidos.
Os achados macroscpicos nos casos agudos
e subagudos incluem cianose (azul-purprea) na
pele, principalmente no focinho, extremidades
das orelhas, cauda e extremidades dos mem-
bros. Nveis variados de congesto, juntamente
com petquias e equimoses esto freqentemente
presentes na face lateral e inferior do pescoo, no
peito, abdome e membros.
Aumento de volume e hemorragias em lin-
fonodos superciais e viscerais se constituem nos
achados mais marcantes da forma aguda da do-
ena. As cavidades corporais geralmente contm
uma quantidade varivel de lquido amarelado
ou sanguinolento, material brinoso e cogulos
sangneos. As serosas apresentam congesto,
petquias ou equimoses. Hemorragias no peri-
Asfarviridae 523
crdio e endocrdio tambm so freqentemente
observadas em casos agudos. Hemorragias difu-
sas ou petquias/equimoses tambm so encon-
tradas em uma variedade de rgos e tecidos,
como a mucosa traqueal e farngea, espao pleu-
ral, estmago, rins, entre outros.
As leses na forma crnica diferem marca-
damente, sobretudo, em relao s hemorragias e
necrose do tecido linforreticular, que so achados
pouco freqentes e menos proeminentes do que
nas formas aguda e subaguda.
5.2.1 A infeco nos carrapatos
Aps a infeco experimental do Ornithodo-
ros porcinus porcinus, uma replicao inicial ocor-
re nas clulas fagocticas presentes no epitlio
do intestino. Aos 15 dias pi a replicao viral
detectada em clulas no diferenciadas do trato
digestivo. A disseminao da infeco do intes-
tino para outros tecidos, incluindo as glndulas
salivares e glndulas coxais, ocorre em duas a
trs semanas aps a infeco. Stios secundrios
de replicao viral incluem os hemcitos (tipo I
e III), tecido conjuntivo, glndulas coxais, gln-
dulas salivares e tecido reprodutivo. Para que a
infeco pelo ASFV no artrpode seja generali-
zada, a replicao nas clulas do intestino parece
ser de grande importncia. Essa importncia foi
demonstrada atravs da infeco dos carrapatos
com a cepa patognica Malawi Lil20/1, que no
capaz de replicar nas clulas intestinais ao infec-
tar os carrapatos.
5.3 Imunidade
A resposta humoral e celular so compo-
nentes importantes da imunidade contra o ASFV.
Anticorpos anti-ASFV so capazes de proteger
os sunos de uma infeco grave e fatal. Embora
anticorpos neutralizantes direcionados s prote-
nas virais p30, p54 e p72 sejam encontrados em
animais convalescentes, estes no so sucientes
para conferir proteo. Linfcitos T CD8+, que se
desenvolvem em seis a sete dias aps a infeco,
parecem desempenhar um importante papel na
resposta imune protetora contra o ASFV.
Em sunos que sobrevivem infeco obser-
va-se imunidade slida contra a cepa homloga.
Animais que sobrevivem infeco por cepas de
virulncia moderada ou por variantes atenuadas
desenvolvem uma resistncia de longa durao
ao desao frente a vrus homlogos, mas rara-
mente frente a vrus heterlogos.
5.4 Diagnstico
O reconhecimento de surtos de ASF aguda
no difcil quando os achados clnico-patolgi-
cos e epidemiolgicos so analisados. No entanto,
a diculdade ocorre no diagnstico de infeco
subaguda, crnica e subclnica, principalmente
em pases onde a enfermidade endmica em
sunos criados ao ar livre.
Sempre que possvel, o diagnstico da ASF
deve ser conrmado por testes laboratoriais, e
para isto uma gama de tcnicas est disponvel.
Nestes testes incluem-se mtodos para deteco
de vrus, antgenos e cidos nuclicos virais, alm
de anticorpos especcos. O teste de hemadsoro
(HAD) um teste sensvel e rotineiramente utili-
zado para detectar o ASFV aps inoculao em
cultivo celular. No entanto, nem todas as cepas
do ASFV apresentam atividade de hemadsoro.
Essas cepas podem, ento, ser identicadas pelo
efeito citoptico (ECP) seguido da deteco de
antgenos virais por imunouorescncia. Isola-
dos de campo do ASFV replicam bem em culti-
vos de moncitos e macrfagos sunos, e podem
ser adaptados a replicar em clulas de linhagem,
com as PK-15 e Vero.
Vrios testes de ELISA tm sido desenvol-
vidos para a deteco de anticorpos especcos
contra o ASFV e so particularmente teis para
o diagnstico rpido e em grande escala. Recen-
temente, mtodos baseados na reao da polime-
rase em cadeia (PCR) e PCR em tempo real tm
sido desenvolvidos, constituindo-se em mtodos
sensveis e especcos de deteco do agente,
mesmo em estgios pr-clnicos da infeco.
O diagnstico diferencial deve considerar a
peste suna clssica, babesiose, tripanossomase,
erisipela, pasteurelose, salmonelose e antrax.
524 Captulo 19
5.5 Controle e prolaxia
Atualmente no existem vacinas disponveis
contra o ASFV e o controle da infeco baseia-se
em procedimentos de quarentena e abate dos ani-
mais infectados. Tentativas de imunizar animais
com extratos de clulas infectadas, com o sobre-
nadante de leuccitos de sunos infectados e com
vrions inativados falharam na induo de uma
resposta imune protetora. A imunizao de su-
nos com uma vacina atenuada por deleo de ge-
nes de virulncia conferiu proteo contra o vrus
homlogo, mas no contra cepas heterlogas.
O controle da ASF em reas de alto risco na
frica essencial e deve se concentrar em medi-
das que evitem o contato entre os sunos doms-
ticos e os reservatrios silvestres do vrus, junta-
mente com procedimentos como vazio sanitrio e
desinfeco de instalaes e ambientes. Na frica
do Sul e Qunia, essa poltica tem sido aplicada
com sucesso considervel. Outras medidas de
controle incluem a erradicao dos carrapatos e
o controle da movimentao de animais, e da im-
portao e exportao de sunos e seus subpro-
dutos. Pases livres devem concentrar esforos
para impedir a introduo do agente, atravs de
barreiras sanitrias que impeam a entrada de
animais e subprodutos de reas potencialmente
de risco.
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John Neill
1

1
Traduo: Luiz Carlos Kreutz
20
527
527
528
529
531
531
531
531
532
532
533
533
533
534
534
535
1 Introduo
2 Histrico e classicao
3 Estrutura e propriedades dos vrions
3.1 Estrutura do genoma, expresso gnica e replicao
4 Calicivrus de importncia em medicina veterinria
4.1. Calicivrus felino
4.1.1. Epidemiologia
4.1.2. Patogenia e sinais clnicos
4.2 Vrus do exantema vesicular dos sunos
5 Outros calicivrus
5.1 Vrus dos lees marinhos de San Miguel
5.2 Lagovrus (vrus da doena hemorrgica dos coelhos)
5.3 Norovrus e sapovrus
6 Diagnstico e controle
1 Introduo
A famlia Caliciviridae possui importantes
patgenos de animais, incluindo o calicivrus
felino (FCV), o vrus do exantema vesicular dos
sunos (VESV), o vrus dos lees marinhos de San
Miguel (SMSV) e o vrus da doena hemorrgi-
ca dos coelhos (RHDV). Alm disso, calicivrus
tambm j foram isolados de ces, macacos, bovi-
nos, martas, galinhas, rpteis, anfbios e insetos.
Geralmente, os calicivrus esto associados do-
enas do trato respiratrio, doenas gastrintesti-
nais ou doenas sistmicas. Em humanos, os cali-
civrus so importantes causas de gastrenterites,
principalmente em crianas e idosos.
Os calicivrus possuem um amplo espectro
de hospedeiros e devido a similaridades de mor-
fologia, dimenses e propriedades fsicas, foram
originalmente classicados na famlia Picornavi-
ridae. Possuem vrions pequenos, sem envelope,
e apresentam como genoma uma molcula de
RNA linear de ta simples e polaridade positiva.
Com o desenvolvimento das tcnicas de biologia
molecular, foi possvel realizar uma anlise mais
precisa desses vrus, principalmente da seqn-
cia de nucleotdeos do genoma e das protenas
codicadas. Com essas informaes, percebeu-se
que os calicivrus no eram relacionados aos pi-
cornavrus, e assim foram classicados em uma
nova famlia, denominada Caliciviridae.
A famlia Caliciviridae composta por qua-
tro gneros: Vesivirus, Lagovirus, Norovirus e Sa-
povirus. Os vesivrus e lagovrus infectam prin-
cipalmente animais. Os norovrus e sapovrus
infectam primariamente humanos, mas j foram
tambm encontrados em bovinos e sunos. Atual-
mente, discute-se a possibilidade de que animais
domsticos possam ser os reservatrios dos cali-
civrus que infectam humanos.
2 Histrico e classicao
Os calicivrus foram originalmente descri-
tos nos Estados Unidos, em meados da dcada
de 1930, associados com uma doena vesicular
contagiosa grave, posteriormente denominada
exantema vesicular dos sunos (VES). Esse vrus,
at ento desconhecido, foi denominado vrus do
exantema vesicular dos sunos (VESV). Devido a
similaridades fsicas, o agente foi originalmente
classicado como vrus da febre aftosa (FMDV).
No entanto, o VESV foi posteriormente reconhe-
cido como um novo agente viral, principalmente
porque os hospedeiros eram diferentes daqueles
do FMDV. Em 1972, um calicivrus foi isolado
de lees marinhos na ilha de San Miguel, Cali-
frnia, e denominado de San Miguel sea lion virus
(SMSV). O isolamento do SMSV foi realizado a
partir de fetos de lees marinhos abortados. O
VESV e o SMSV so morfolgica e imunologica-
mente similares e compartilham caractersticas
genticas. Esses vrus causam doenas vesicula-
res e compem um genogrupo nico.
O calicivrus felino (FCV) foi isolado na d-
cada de 1950 de um surto de doena em felinos.
Inicialmente acreditava-se que a doena era cau-
sada pelo vrus da panleucopenia felina (FPLV),
um membro da famlia Parvoviridae. Observou-
se, no entanto, que o vrus isolado produzia efei-
to citoptico com extrema rapidez em cultivos
celulares de origem felina, o que no poderia ser
atribudo ao FPLV. O FCV est freqentemente
associado com doena respiratria em felinos e
atualmente considerado um dos principais pa-
tgenos dessa espcie. Os trs calicivrus (VESV,
SMSV e FCV) so classicados no gnero Vesivi-
rus.
Em 1984, na China, observou-se uma doena
hemorrgica em coelhos, da qual foi isolado um
agente viral denominado vrus da doena hemor-
rgica dos coelhos (RHDV). Desde ento, a doen-
a tem sido detectada em outros pases asiticos e
tambm na Europa. Em 1986, na Europa, isolou-
se um vrus de lebres com doena hemorrgica,
o qual foi denominado vrus da sndrome das
lebres marrons europias (EBHSV). Estudos re-
trospectivos em amostras de fgado preservadas
datam a existncia do vrus pelo menos desde
1976. Ambos os vrus causam doenas similares,
porm diferem antigenicamente e tambm no es-
pectro de hospedeiros que infectam. O RHDV e o
EBHSV compem o gnero Lagovirus.
528 Captulo 20
Os calicivrus entricos humanos foram des-
critos pela primeira vez aps anlises por meio
de imunoeletromicroscopia em amostras de fe-
zes obtidas de surtos de diarria em crianas de
escolas de Norwalk, Ohio, em 1968. Esse vrus,
denominado de agente Norwalk, tem sido, desde
ento, membro de um grande grupo de caliciv-
rus causadores de gastrenterite em humanos. Es-
ses vrus gastrentricos, denominados vrus pe-
quenos de morfologia arredondada (small round
structured virus = SRSV), no possuem as depres-
ses peculiares na forma de clice observadas por
microscopia eletrnica nos calicivrus e, por isso,
no foram classicados na famlia Caliciviridae.
Um segundo grupo de vrus, os calicivrus hu-
manos clssicos (HuCVs), que possuem as tpicas
depresses em forma de clice na superfcie, cau-
sam doenas entricas idnticas aquelas causadas
pelo SRSV. Os vrus originalmente classicados
como SRSV compem agora o gnero Norovirus e
o HuCVs so classicados no gnero Sapovirus.
3 Estrutura e propriedades
dos vrions
Os calicivrus so vrions pequenos (27-40
nm), icosadricos, sem envelope, formados por
180 cpias idnticas de uma nica protena, ar-
ranjadas em 90 dmeros, com a forma de arcos. A
associao dessas unidades forma 32 depresses
em forma de clice na superfcie dos vrions. A
forma dessas depresses suscitou o termo cali-
civrus. Os vrions so relativamente resistentes
ao calor e desinfetantes, ter e clorofrmio, mas
no resistem muito a condies de pH baixo (3
a 5). A densidade das partculas vricas varia en-
tre 1.33 e 1.41 g/cc. Outras caractersticas fsicas
e moleculares importantes dos calicivrus encon-
tram-se discriminadas na Tabela 20.1. A Figura
20.1 apresenta uma micrograa eletrnica de co-
lorao negativa de um calicivrus e um modelo
de reconstruo tridimensional de uma partcula
do vrus Norwalk.
Vesivirus
Espectro de
hospedeiros
Lagovirus Norovirus Sapovirus
Amplo
Hepatite, doena
Hemorrgica
Leses vesiculares,
abortos, infeco do
Trato respiratrio
superior
Sinais clnicos
Coelhos, lebres
Hepatite, doena
hemorrgica
Humanos, sunos,
camundongos
Hepatite, doena
hemorrgica
Humanos, bovinos,
sunos
Replicao em
cultivo celular
Sim No
Apenas o norovrus
murino
Apenas o calicivrus
entrico suno
1
Morfologia tpica de
calicivrus (ME) Sim Sim No Sim
Extenso do genoma 7.7 - 8.3 kb
2
7.35 7.65 7.4
Nmero de ORFs 3 2 3 2
Extenso da ORF1
(aminocidos)
1763-1878
2
2345 1790 2281
Massa da protena
do capsdeo (kDa)
73-78 ; 59-61
2 4
60 58-60 58-60
1 2 3 4
Apenas a cepa adaptada em cultivo; FCV-SMSV/VESV; Protena precursora do capsdeo; Protena do capsdeo madura
Tabela20.1. Propriedades biolgicas, estruturais e moleculares dos vrus pertencentes a famliaCaliciviridae.
Caliciviridae 529
3.1 Estrutura do genoma, expresso
gnica e replicao
O genoma dos calicivrus constitudo por
uma molcula de RNA de ta simples, linear, de
polaridade positiva, cuja extenso varia entre 7.3
e 8.3 kb, de acordo com o gnero (Tabela 20.1).
O genoma possui uma pequena protena cova-
lentemente ligada na extremidade 5 (5 VPg) e
poliadenilado em sua extremidade 3 (Figura
20.2). No citoplasma das clulas infectadas, o
genoma serve como RNA mensageiro (mRNA).
O RNA genmico possui trs ORFs (seqncias
abertas de leitura). A ORF-1, localizada na poro
5, ocupa aproximadamente 65% da extenso do
genoma. Esta ORF codica as protenas no-es-
truturais (alm da VPg), que so produzidas pela
traduo direta do RNA genmico. As protenas
no-estruturais incluem a replicase viral (polime-
rase de RNA dependente de RNA), protease de
cistena e helicase de RNA. Algumas delas ainda
no tiveram a sua funo identicada. Estas pro-
tenas apresentam seqncias especcas de ami-
nocidos tambm presentes nas protenas com
funes equivalentes dos picornavrus. A ORF-1
traduzida em uma poliprotena precursora, que
posteriormente clivada pela protease nas prote-
nas individuais.
Aps a sua produo pela clivagem da po-
liprotena, a replicase viral sintetiza uma cpia
de RNA de sentido antigenmico (polaridade
negativa). Esta molcula servir de molde para
a sntese de um RNA mensageiro subgenmi-
co (mRNAsg) que ser traduzido na protena
AAA(n)
Vpg
P76 (Pro - pol) P39 (NTPase) P13 (VpG) P30 p32
P5.6
ORF1
ORF2
ORF3
capsdeo
Figura 20.2. Estrutura e organizaodogenoma docalicivrus felino(FCV). Aposioe massa molecular das protenas
codificadas pelas ORFs estoindicadas.
Figura 20.1. Vrions da famlia A) Fotografia de microscopia eletrnica de colorao negativa de um
calicivrus tpico; B) Modelotridimensional deuma partculadovrus Norwalk.
Caliciviridae.
A
B
B
Fonte: A) Dra C. Bchen-Osmond, ICTVdB; B) Dr B. V. Venkataran, Baylor College of Medicine.
530 Captulo 20
do capsdeo. Em etapas tardias do ciclo, o DNA
complementar serve de molde para a sntese do
RNA genmico. A replicase viral responsvel
por todas essas etapas.
No tero 3 do genoma, encontra-se a ORF-
2, que codica a protena do capsdeo. Esta ORF
no traduzida diretamente a partir do RNA ge-
nmico. Ao contrrio, a protena do capsdeo
produzida pela traduo de um mRNAsg, que,
por sua vez, produzido pela transcrio da c-
pia de RNA de sentido antigenmico. A transcri-
o do mRNAsg inicia imediatamente antes do
cdon de iniciao da ORF, que codica a pro-
tena do capsdeo, e termina na extremidade 3
do RNA antigenmico. Esse mRNAsg tambm
poliadenilado e contm a VPg ligada poro
5. Nos lagovrus e sapovrus, a ORF-2, que codi-
ca as protenas no-estruturais, encontra-se na
mesma seqncia de leitura da ORF-2 que, codi-
ca a protena do capsdeo (Figura 20.3). Nesses
vrus, acredita-se que a protena do capsdeo seja
clivada a partir da poliprotena no-estrutural,
pela ao da protease de cistena. Porm, esta
protena tambm pode ser produzida a partir do
mRNAsg.
Figura 20.3. Organizao genmica dos vrus dos gneros . A linha
contnua representa oRNAgenmicocoma protena de ligaodogenoma (VPg) na extremidade 5' e a cauda poliAna
extremidade 3'. Os RNAs mensageiros subgenmicos (tanto os j caracterizados como os provveis) esto
demonstrados abaixo da regio da qual eles so transcritos. Os retngulos abaixo do RNA genmico representam as
ORFs com a provvel posio das respectivas protenas. Nos lagovrus e sapovrus, a protena do capsdeo pode ser
produzida tanto pela traduo direta do genoma e clivagema partir da protena no-estrutural como pela traduo de
ummRNAsg.
Vesivirus, Lagovirus, Norovirus e Sapovirus
Vesivirus
VPg
Genoma RNA 7.7 to 8.3 kb
polyA
VPg
RNA subgenmico 2.4 to 2.7 kb
polyA
Protena do capsdeo
ORF3
ORF2
ORF1
ORF1
ORF1
ORF1
Lagovirus
VPg
Genoma RNA 7.35 kb
polyA
VPg
RNA subgenmico 2.1 kb
polyA
Protena do capsdeo
ORF2
ORF2
Protena do capsdeo
Norovirus
VPg
Genoma RNA 7.65 kb
polyA
VPg
RNA subgenmico ?
polyA
Protena do capsdeo
ORF3
Sapovirus
VPg
Genoma RNA 7.4 kb
polyA
VPg
RNA subgenmico ?
polyA
Protena do capsdeo
ORF2
Protena do capsdeo
Caliciviridae 531
Uma pequena ORF adicional (ORF-3) est
presente na poro extrema da regio 3 do RNA
genmico e traduzida a partir do mRNAsg (ver
Figuras 20.2 e 20.3). Essa ORF codica uma peque-
na protena bsica, que includa em quantidade
pequena nos capsdeos dos vrions maduros. A
funo dessa protena parece estar relacionada
ao empacotamento do RNA genmico e estabili-
zao da partcula viral. A ORF-3 parece ser tra-
duzida aps a traduo da ORF-2, utilizando um
mecanismo de terminao/reiniciao.
Os calicivrus penetram por endocitose e
replicam no citoplasma das clulas hospedeiras,
mediadas por receptores, e a penetrao depen-
de da acidicao dos endossomos. O VESV e
FCV apresentam uma replicao rpida e lti-
ca em clulas de cultivo derivadas das espcies
homlogas. O FCV produz arredondamento e
desprendimento das clulas do tapete em clulas
de linhagem de rim felino (CRFK). O VESV tam-
bm replica em clulas de linhagem Vero. Dentre
os provveis calicivrus recentemente isolados,
aqueles derivados de gastrenterite de sunos e
de doena vesicular genital de ces replicam bem
em clulas de cultivo; os outros no so facilmen-
te cultivveis.
4 Calicivrus de importncia
em medicina veterinria
4.1 Calicivrus felino
O calcivrus felino (FCV) um agente cos-
mopolita, e considerado um patgeno impor-
tante de feldeos. comum em gatos domestica-
dos, e j foi isolado de guepardos na Austrlia,
e de diversas outras espcies de felinos em zoo-
lgicos. O agente tambm j foi isolado de casos
de glossite em ces. At o presente, apenas um
nico sorotipo foi identicado, isso provavel-
mente porque o anti-soro produzido contra uma
cepa do FCV reage com todos os isolados. Essas
reaes sorolgicas cruzadas devem-se principal-
mente presena de seqncias conservadas de
aminocidos na protena do capsdeo, e que so
importantes para a ligao do vrus aos recep-
tores celulares. Algumas diferenas na proteo
cruzada tm sido observadas entre cepas, porm
outras seqncias de aminocidos so respons-
veis pela reatividade cruzada.

4.1.1 Epidemiologia
A infeco pelo FCV parece estar ampla-
mente difundida nas populaes de felinos do-
msticos e tambm tem sido detectada em alguns
feldeos silvestres. A transmisso natural ocorre
por contato direto ou indireto por fmites conta-
minados ou por aerossis. O vrus pode ser car-
reado mecanicamente entre animais pelo prprio
homem. O FCV prontamente transmitido por
animais durante a infeco aguda. No entan-
to, a maior fonte de vrus parece ser os animais
cronicamente infectados, que so portadores
subclnicos da infeco. O estado de portador
se desenvolve aps a fase aguda da doena, e
importante na manuteno do FCV na populao
felina. Os gatos infectados cronicamente apresen-
tam o FCV nas tonsilas e faringe, onde o vrus
replica em nveis baixos durante meses ou at
anos. Essa replicao em baixos nveis nas ton-
silas e a constante disseminao ocorre mesmo
na presena de anticorpos protetores. O estresse
pode participar na recrudescncia da infeco e
aumento da excreo viral. O vrus excretado
em secrees oro-nasais.
Recentemente, alguns estudos demonstra-
ram que calicivrus antigenicamente distintos do
vrus original pode ser recuperado de gatos com
infeco crnica. Isso demonstra que as mutaes
produzidas durante a replicao, uma caracters-
tica comum dos vrus RNA, importante no es-
tabelecimento e manuteno da infeco crnica.

4.1.2 Patogenia e sinais clnicos
O vrus penetra principalmente pela via
oronasal e replica inicialmente na orofaringe. O
perodo de incubao da enfermidade varia entre
dois e seis dias, e os animais infectados podem
apresentar uma variedade de sinais clnicos. A
infeco pode ser subclnica ou aguda, e, na maio-
ria das vezes, apresenta baixa morbidade e baixa
mortalidade. No entanto, em abrigos ou colnias,
a morbidade pode ser alta aps a introduo do
532 Captulo 20
agente. As infeces mais severas so caracteriza-
das por rinite, traquete e pneumonia, e produo
de vesculas na cavidade oral, as quais evoluem
para ulceraes do epitlio. As leses vesiculares
so geralmente restritas s cavidades nasal e oral.
O quadro clnico tambm apresenta febre, anore-
xia e descarga ocular e nasal. Uma sndrome de
claudicao transitria pode tambm ser obser-
vada em gatinhos e se caracteriza por dor mus-
cular, edema das articulaes (poliartrite) e lami-
nite. A infeco de fmeas prenhes pode resultar
em abortos. Nas infeces com cepas de FCV
mais virulentas, a mortalidade pode atingir 30%
em gatos com idade inferior a 12 semanas, e est
geralmente associada com extensiva pneumonia
e consolidao pulmonar. Alm disso, cepas al-
tamente virulentas tm sido descritas recente-
mente, associadas com surtos caracterizados por
ictercia, edema e alta mortalidade. O estado de
portador crnico pode se estabelecer em animais
que se recuperam da infeco.
Existem atuamlente diversas vacinas para o
FCV, tanto monovalentes como associadas com
o herpesvrus felino. Existem vacinas atenuadas
para aplicao intranasal, intraconjuntival e in-
tramuscular. No entanto, sabe-se que a vacinao
no previne a infeco. O nmero limitado de
cepas de FCV includas nas vacinas pode no in-
duzir proteo cruzada contra todas as cepas que
circulam na populao felina. Alm disso, algu-
mas cepas, como a F9, tm sido usadas por mui-
tos anos e podem no ser antigenicamente rele-
vantes para a proteo contra isolados circulantes
no momento, e que se encontram disseminadas
na populao felina. Gatos vacinados podem se
infectar com cepas heterlogas; e, em alguns ca-
sos, podem disseminar o vrus infectante por um
determinado tempo aps uma infeco subclni-
ca. A utilizao de vacinas vivas modicadas
geralmente segura. Porm, possvel a produo
de sinais clnicos leves, particularmente em ga-
tinhos, logo aps a primovacinao. Os animais
devem ser vacinados a partir dos trs meses de
idade, quando os nveis de anticorpos maternos
j se reduziram signicativamente.
4.2 Vrus do exantema vesicular dos
sunos
A importncia maior do VESV deve-se ao
fato de o agente produzir manifestaes clnicas
confundveis com a febre aftosa. Por isso, possui
importncia estratgica e se constitui em doena
de noticao obrigatria, devendo ser diferen-
ciada de outras doenas vesiculares de sunos.
J foram identicados 13 diferentes sorotipos,
classicados de A a M. Alguns desses sorotipos
so indistinguveis do vrus isolado de lees ma-
rinhos (SMSV). Infeces naturais pelo VESV j
foram identicadas em sunos, eqinos, caninos
e animais silvestres. Os mamferos marinhos se
constituem nos seus provveis reservatrios. O
VESV considerado extinto das populaes do-
msticas de sunos, mas ainda parece existir em
mamferos marinhos. Isto pode representar um
risco potencial de reintroduo do agente em
criaes de sunos.
O VESV se dissemina pelo contato direto
com animais infectados e tambm por via oral,
pela alimentao com restos de alimentos conten-
do tecidos crus de animais infectados. O VESV
foi identicado, pela primeira vez, no incio da
dcada de 1930, em surtos amplamente disse-
minados e aparentemente sem relao entre si.
O nico fator epidemiolgico comum aos surtos
era o fato de ocorrerem em granjas que alimenta-
vam sunos com restos de alimentos no-cozidos,
oriundos de restaurantes que serviam frutos do
mar. Surtos posteriores foram tambm associa-
dos com a alimentao de restos crus ou mal co-
zidos de carne de sunos infectados. Esses surtos
estavam limitados Califrnia at o ano de 1951,
quando um trem, carregado com carcaas frescas
de sunos da Califrnia, deixou resduos no es-
tado de Wyoming, as quais foram subseqente-
mente fornecidas a sunos. Esse fato deu incio a
uma epizootia que atingiu 42 estados e somente
terminou no nal de 1956. As medidas tomadas
para a erradicao da enfermidade incluram
a identicao e sacrifcio dos animais doentes,
quarentena e proibio da alimentao de sunos
com restos crus de alimentos. Essa doena foi
declarada ocialmente erradicada dos EUA em
1959, aps trs anos consecutivos sem novos ca-
Caliciviridae 533
sos. Alm dos EUA, a enfermidade j foi relatada
na Islndia e no Hava.
A infeco de sunos pelo VESV resulta em
febre (40,5-41C), seguida da formao de ves-
culas nas regies mais frias do corpo, como as
narinas, lbios, lngua e mucosa oral. As ves-
culas geralmente se rompem aps 48-72 horas,
deixando lceras circulares. O rompimento das
vesculas resulta no extravasamento do uido
para os tecidos vizinhos, principalmente a muco-
sa oral e tambm o espao interdigital, sola e a
banda coronria dos cascos. O aparecimento de
vesculas secundrias nos ps causa imensa dor,
e os sunos podem relutar e mesmo se recusar a
caminhar at a recuperao. A morbidade nos
rebanhos afetados era geralmente alta e a mor-
talidade geralmente baixa. No entanto, algumas
cepas estavam associadas com maiores ndices
maiores de mortalidade. Clinicamente, a enfer-
midade muito semelhante febre aftosa, porm
apresenta um curso mais brando e geralmente se
resolve em menos de duas semanas.
5 Outros calicivrus
5.1 Vrus dos lees marinhos de San
Miguel
O vrus dos lees marinhos de San Miguel
(SMSV) j foi isolado de muitas espcies de cet-
ceos e pinpedes (focas, lees marinhos, elefantes
marinhos, lobos marinhos e morsas), e tambm
de peixes marinhos. Anticorpos contra diversos
sorotipos do SMSV e do VESV tm sido detecta-
dos nessas espcies. Dessa forma, props-se que
as populaes de mamferos marinhos possam
servir de reservatrios, a partir das quais o SMVS
e o VESV poderiam ser reintroduzidos nas esp-
cies domsticas. De fato, o SMSV pode infectar
animais, como os sunos e bovinos, e pode ser
propagado em cultivos celulares de primatas.
Outros vrus que pertencem ao gnero Vesivirus
infectam primatas (Pan-1), bovinos (Bos-1), cet-
ceos (Tor-1) e rpteis (Cro-1), e ilustram a diver-
sidade de espcies que podem ser infectadas. Re-
centemente, o SMSV causou uma infeco em um
laboratorista, adicionando assim os humanos em
seu espectro de hospedeiros.
As caractersticas clnicas da infeco pelo
SMSV so similares quelas associadas com o
VESV. Mamferos marinhos infectados com o
SMSV apresentam formaes vesiculares nas
partes mais frias do corpo, como as nadadeiras.
A infeco pelo SMSV tambm tem sido associa-
da com falhas reprodutivas e mortalidade neo-
natal. A infeco de sunos com o SMSV causa
uma doena clinicamente indistinguvel daquela
causada pelo VESV.
5.2 Lagovrus (vrus da doena hemorrgica
dos coelhos)
O lagovrus RHDV foi inicialmente isolado
na China, em 1984, em um surto de doena de
coelhos importados da Alemanha. Outros surtos
foram subseqentemente relatados em outros
pases, e a sua etiologia foi inicialmente associa-
da com carne de coelho importada da China. No
entanto, o RHDV foi identicado na Europa em
coelhos domsticos ao mesmo tempo em que foi
detectado na populao de coelhos silvestres, in-
dicando que esse vrus j se encontrava presen-
te no continente. No nal da dcada de 1980, o
RHDV foi identicado no Mxico, mas foi rapi-
damente erradicado pela eliminao dos animais
infectados. Por outro lado, um vrus isolado de
lebres marrons (EBHSV), que causa sinais seme-
lhantes ao RHDV, havia sido descrito anterior-
mente na Europa e poderia estar presente naque-
le continente desde 1976.
Esses vrus se disseminam pela via oral, na-
sal e transmisso parenteral. O vrus encontra-se
presente nas secrees dos animais infectados.
Embora existam evidncias consistentes, at o
presente, no se sabe, com certeza, se o EBHSV
pode ser transmitido por insetos. Em um relato,
os insetos foram incriminados como vetores de
escape do vrus das ilhas Wardang, na costa da
Austrlia, onde esse vrus foi testado como um
agente biolgico para o controle de coelhos euro-
peus. A partir da ilha de Wardang, insetos con-
tendo o vrus podem ter sido transportados com
o vento at o continente, onde o vrus ocasionou
a infeco de coelhos em toda a Austrlia. A dis-
seminao do vrus causou a morte de 65 a 90%
dos coelhos em algumas regies.
534 Captulo 20
A doena aguda causada pela infeco com
o RHDV em coelhos europeus caracterizada
por anorexia e taquipnia, convulses e, ocasio-
nalmente, secreo nasal sanguinolenta. A febre
comum no incio da infeco, porm, nos est-
gios avanados, observa-se hipotermia. A infec-
o experimental geralmente causa a morte em
48-72 horas. A maioria dos principais rgos in-
ternos afetada: os pulmes, traquia e rins apre-
sentam hemorragias, enquanto o bao e o fgado
apresentam-se aumentados de volume e com co-
lorao vermelho-escura. A morte dos animais
sobrevm a uma hepatite necrosante. Observa-se
tambm coagulao intravascular disseminada.
Coelhos com menos de quatro semanas de ida-
de no apresentam sinais clnicos da infeco e
geralmente sobrevivem. Lebres infectadas com o
EBHSV apresentam sinais clnicos semelhantes
queles da infeco pelo RHDV. A patogenia da
infeco com o EBHSV, as manifestaes clnicas
e taxas de mortalidade so similares s observa-
das na infeco pelo RHDV.
5.3 Norovrus e sapovrus
Os calicivrus humanos so reconhecidos
como importantes causas de gastrenterites, e a
principal forma de transmisso a via fecal-oral.
Os norovrus e sapovrus produzem sinais clni-
cos indistinguveis; no entanto, h diferenas na
epidemiologia e imunologia. Os norovrus es-
to primariamente associados com doenas em
crianas na idade escolar, alm de adultos. J os
sapovrus infectam preferencialmente crianas
mais novas e bebs. Os sapovrus induzem imu-
nidade que pode prevenir reinfeces posterio-
res, enquanto os norovrus induzem imunidade
de curta durao, e os indivduos podem ser rein-
fectados.
Nos animais domsticos, os norovrus e os
sapovrus podem eventualmente causar gastren-
terite severa, mas podem, tambm ser isolados
de animais clinicamente sadios. A gastrenterite
caracterizada por um perodo relativamente cur-
to de diarria (2 a 3 dias), letargia e anorexia.
possvel que os animais domsticos de
produo sejam os reservatrios dos calicivrus
entricos de humanos, existindo, portanto, a pos-
sibilidade de transmisso entre espcies. A carac-
terizao molecular de calicivrus isolados de hu-
manos e animais tem demonstrado uma grande
similaridade. Recombinaes genticas j foram
observadas nesses vrus e deram origem a novas
variantes.
6 Diagnstico e controle
O diagnstico da infeco causada pelo cali-
civrus tem sido realizada pelo isolamento viral e
por testes de soroneutralizao (SN). O isolamen-
to permite a multiplicao do vrus em cultivos
de clulas susceptveis, a partir de amostras clni-
cas. No entanto, o isolamento restrito aos calici-
vrus que replicam em cultivos celulares, como o
FCV, SMSV e VESV. Por outro lado, as infeces
por todos os calicivrus podem ser diagnostica-
das utilizando a SN para pesquisar anticorpos no
soro de animais convalescentes. Testes de ELI-
SA tambm tm sido utilizados para diagnosti-
car sorologicamente as infeces por calicivrus
humanos e podem tambm ser adaptados para
detectar antgenos virais em amostras clnicas. O
uso do teste evita a necessidade de se realizar o
isolamento e/ou SN, que so mais demorados e
laboriosos.
A utilizao da microscopia eletrnica de
transmisso tambm tem sido utilizada extensi-
vamente no diagnstico das infeces por calici-
vrus. No entanto, essa tcnica no muito sen-
svel e somente detecta amostras que possuam
mais de um milho de partculas virais por mi-
lilitro. Alm disso, necessrio que as amostras
sejam coletadas no pico da replicao viral, o que
pode reduzir o tempo ideal de coleta para poucas
horas.
Com a caracterizao molecular de diversas
cepas de calicivrus, testes de diagnstico mais
rpidos, sensveis e baratos foram desenvolvidos.
Os testes mais notveis so aqueles baseados na
reao em cadeia da polimerase (PCR). Primers
para a PCR de todos os gneros de calicivrus,
tm sido descritos e podem ser utilizados para o
diagnstico.
Com exceo do calicivrus felino, no exis-
tem vacinas disponveis para o VESV ou para os
outros calicivrus animais.
Caliciviridae 535
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PICORNAVIRIDAE
Elizabeth Rieder & Mrio Celso S. Brum
21
1 Introduo
2 Classicao
4 Replicao
5 Picornavrus de interesse veterinrio
5.1 Vrus da febre aftosa
5.1.1 Situao da febre aftosa na Amrica do Sul e Brasil
5.1.2 O agente
5.1.3 Epidemiologia
5.1.5 Imunidade
5.1.6 Diagnstico
5.1.8 Vacinas
5.1.9 Perspectivas

5.2 Vrus da doena vesicular dos sunos
5.3 Enterovrus suno tipo 1
5.4 Enterovrus sunos tipos 2-11
5.5 Enterovrus bovino
5.6 Rinovrus eqino e bovino
5.7 Vrus da encefalomiocardite
5.8 Vrus da encefalomielite das aves
539
540
541
543
546
546
547
548
549
551
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552
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555
556
557
558
558
559
559
559
560
560
1 Introduo
A famlia Picornaviridae uma das mais an-
tigas e variadas famlias virais, abrangendo mais
de 200 vrus classicados em nove gneros. Esses
vrus tm sido muito utilizados como modelos
em pesquisas de diversos aspectos da Virologia.
Os membros desta famlia os picornavrus so
vrus pequenos, icosadricos, sem envelope e
possuem uma molcula de RNA linear de polari-
dade positiva como genoma. O nome da famlia
derivado de pico (pequeno) e RNA, em referncia
ao genoma de cido ribonuclico. A famlia abri-
ga importantes patgenos humanos e animais,
como o poliovrus humano (agente da poliomie-
lite ou paralisia infantil) e o vrus da febre aftosa
(foot and mouth disease virus, FMDV).
Em 1897, Loefer e Frosch apresentaram
a descoberta inovadora de um agente ltrvel
como causa da febre aftosa (foot and mouth dise-
ase, FMD) e, em seguida, a primeira evidncia
de que uma doena animal poderia ser causada
por um vrus. Em 1909, o poliovrus foi descrito
como o agente etiolgico da poliomielite humana
por Landteiner e Popper. Enders e colaborado-
res, em 1949, foram os primeiros a multiplicar o
poliovrus em clulas de mamferos cultivadas in
vitro, iniciando a era moderna dos cultivos celu-
lares. Esta tecnologia levou ao desenvolvimento
de duas vacinas altamente ecazes para a pre-
veno da poliomielite: a vacina inativada desen-
volvida por Jonas Salk (1960) e a vacina atenuada
desenvolvida por Albert Sabin (1973). Em 1981, o
poliovrus tornou-se o primeiro vrus RNA a ter
o seu genoma clonado e completamente seqen-
ciado. Em 1985, a estrutura tridimensional dos
vrions de dois membros da famlia dos picorna-
vrus: o poliovrus tipo 1 e o rinovrus tipo 14, foi
resolvida por cristalograa, abrindo perspectivas
para novas abordagens s terapias antivirais e
vacinologia. Em 2002, vrions infecciosos foram
produzidos a partir de cDNA sintetizado in vitro,
utilizando deoxioligonucleotdeos complementa-
res ao RNA do poliovrus.
Os picornavrus tm sido isolados de vrias
espcies de vertebrados, incluindo humanos, pri-
matas no-humanos, cavalos, sunos, roedores e
pssaros (Tabela 21.1). Os vrus pertencentes a
esta famlia so responsveis por enfermidades
importantes em humanos, incluindo o resfriado
(mais de 100 sorotipos de rinovrus), doenas
do trato digestivo e do sistema nervoso central,
Coxsackie
resfriado, diarria infantil,
conjuntivite aguda
humanos
Hepatite A hepatite tipo A humanos e macacos
Echovrus doena respiratria, encefalite humanos
Rinovrus resfriado humanos, macacos
Febre aftosa (FMDV) febre aftosa bovinos, ovinos, caprinos, sunos
Rinovrus eqino (EqRV) doena respiratria aguda
associado com doena
entrica e respiratria
eqinos
Hepatite dos patos
Enterovrus bovino (BEV)
hepatite dos patos pato domstico
Encefalomiocardite (EMCV) miocardite, encefalite sunos, roedores
Doena vesicular dos sunos
(SVDV)
doena vesicular dos sunos sunos
bovinos
Poliovrus (PV)
poliomielite (meningite)
humanos
Doena Espcie Vrus
Tabela21.1. Doenas causadas pelos principais picornavrus.
540 Captulo 21
como meningites, encefalites e paralisia (vrus
Coxsackie, echovrus e poliovrus), doena he-
ptica (vrus da hepatite A) e infeco cardaca
(vrus Coxsackie).
Entre os picornavrus de interesse vete-
rinrio esto o vrus da febre aftosa (FMDV), o
vrus da encefalomiocardite dos camundongos
(EMCV), o enterovrus bovino (BEV) e o agente
da doena vesicular dos sunos (SVDV). O pro-
ttipo da famlia o poliovrus, agente etiolgico
da poliomielite em humanos. Esse vrus o mais
estudado em termos do ciclo replicativo, estru-
tura do vrion, interao com receptores virais,
estrutura e funo das protenas virais e com
relao aos mecanismos de expresso gnica. O
FMDV um dos principais vrus de animais, pela
grande repercusso sanitria e econmica da in-
feco, sobretudo, devido s barreiras impostas
ao comrcio internacional de animais e subpro-
dutos oriundos de reas endmicas ou de risco.
2 Classicao
Os picornavrus so atualmente subdividi-
dos em nove gneros: Enterovirus (vrus de su-
nos e smios), Cardiovirus (encefalomiocardite,
EMCV e vrus de Theiler), Rhinovirus (rinovrus
humano), Hepatovirus (vrus da hepatite A), Erbo-
virus, Teschvirus (vrus da polioencephalomielite
dos sunos), Aphtovirus (FMDV e vrus da rinite
eqina) e Parechovirus (antigo echovrus 22 e 23).
Curiosamente, os picornavrus de diferentes g-
neros possuem homologia de nucleotdeos infe-
rior a 45% entre si (menos de 34% de similaridade
em nvel de aminocidos). Por exemplo, os ente-
rovrus humanos que apresentam 111 sorotipos
so divididos em quatro grupos genticos (A, B,
C e D).
At recentemente, cada sorotipo de picor-
navrus era designado como uma espcie viral
separada. A nova denio adota a seguinte re-
gra: uma espcie de picornavrus uma clas-
se ou grupo taxonmico (polythetic) de sorotipos
relacionados logeneticamente ou isolados que
compartilham: a) uma limitada abrangncia de
hospedeiros e receptores celulares; b) um grau
signicante de compatibilidade nos processos
proteolticos, replicao, montagem e recombina-
o gentica; c) mapas genmicos essencialmente
idnticos. Logo, a classicao atual baseada
em diversos parmetros, incluindo morfologia,
organizao genmica, estratgias de replicao,
padres de clivagem de protenas e identidade
gentica.
Com base nesses critrios, alguns enterov-
rus foram reclassicados do gnero Enterovirus
para formar os gneros Hepatovirus e Parechovi-
rus. Os enterovrus e hepatovrus, que infectam
os hospedeiros via trato digestivo, so altamente
resistentes ao pH baixo do estmago e a enzimas
proteolticas do trato digestivo. Por outro lado,
os rinovrus e outros vrus que replicam no trato
respiratrio so lbeis em ambientes cidos (Ta-
bela 21.2). A caracterstica de instabilidade a pH
inferior a 7,0 do FMDV resulta em diferenas no
desnudamento durante a infeco de clulas de
cultivo, comparado com outros picornavrus, e,
provavelmente, tambm interfere em termos de
especicidade tecidual e rgos alvos nos hospe-
deiros.
Gnero Estabilidade ao pH
Densidade
Buoyant
Coeficiente de
sedimentao
Lbil, < 7 1,43 - 1,45 142 - 146S Aphthovirus
Estvel, 3 - 9 1,34 160S Cardiovirus
Estvel, 3 - 9 1,34 160S Enterovirus
Estvel 1,34 160S Hepatovirus
Lbil, < 6 1,40 160S Rhinovirus
Tabela 21.2. Propriedades fsico-qumicas dos picornavrus.
Picornaviridae 541
As partculas vricas dos picornavrus so
icosadricas (25-30 nm de dimetro), sem envelo-
pe e contm uma molcula de RNA de ta simples
e polaridade positiva como genoma. O capsdeo
possui uma superfcie externa regular, perfei-
tamente simtrico, e composto por 60 unidades
estruturais. Cada uma dessas unidades, denomi-
nadas protmero, formada por uma cpia das
quatro protenas estruturais: VP1, VP2, VP3 e VP4
(Figura 21.1). Essas protenas so produzidas pela
clivagem enzimtica de uma poliprotena precur-
sora (P1). As protenas so estveis e protegem
o genoma de ambientes hostis, proporcionando
um meio de transmitir o genoma entre clulas e
entre hospedeiros. Os vrions dessa famlia so
resistentes ao ter, clorofrmio e lcool, porm a
radiao inica, o fenol e formaldedos inativam
o vrus rapidamente. A estabilidade dos picorna-
vrus sob condies ambientais desempenha um
papel importante na epidemiologia e nas formas
de controle das doenas a eles associadas.
A seqncia de aminocidos que constituem
as protenas estruturais, bem como a conformao
e as relaes entre elas formam estruturas onde
se localizam os receptores canyons nos poliovrus
e rinovrus e loops nos aftovrus. Essas seqncias
so determinantes do tipo celular que pode ser
infectado, portanto, possuem inuncia direta
no tropismo e patogenia viral. Alm da determi-
nao do host range in vitro e in vivo, esses stios,
juntamente com outras regies do capsdeo, so
altamente antignicos e so alvos de anticorpos
do hospedeiro. A variabilidade dessas regies e
conseqentemente a sua reatividade sorolgica
determina a diferenciao dos vrus em soroti-
pos e subtipos.
O genoma dos picornavrus uma molcu-
la de RNA de ta simples, polaridade positiva e
possui entre 7 e 8,5 kb (dependendo da espcie
viral). O RNA genmico possui uma protena
denominada VPg (3B) covalentemente ligada na
sua extremidade 5, e uma cauda poliA na ex-
tremidade 3 (Figura 21.2). Pelo fato de possuir
polaridade positiva e poder ser traduzido direta-
mente pelos ribossomos, o RNA genmico in-
feccioso quando introduzido articialmente em
clulas permissivas.
O RNA genmico e os RNA mensageiros
(mRNAs) dos picornavrus no possuem cap
na extremidade 5. Por isso, a sua traduo de-
pende do reconhecimento pelos ribossomos por
meio de um mecanismo diferente dos mRNAs
celulares. Os RNAs virais so reconhecidos pelos
ribossomos atravs de uma estrutura secundria
localizada na regio no-traduzida (untransla-
ted region 5UTR) denominada stio interno de
Figura 21.1. Partculas vricas da famlia . A) Fotos de microscopia eletrnica de vrions do FMDV em colorao
negativa. B) Representaoesquemticadovrione seus componentes.
Picornaviridae
A
B
VP1
VP1
RNA
VP2
VP2
VP3
VP3
V
P
4
Fonte: A) Dr Thomas Burrage, USDA, PIADC. B) Adaptada de Flint et al. (2000).
542 Captulo 21
entrada dos ribossomos (internal ribossomal entry
site IRES). Prximo extremidade 5, existe uma
longa regio no-traduzida (5UTR), que varia
entre 740-1.300 nt, precedendo o cdon de inicia-
o da nica e longa seqncia aberta de leitura
(open reading frame, ORF). A regio 5UTR possui
funo na traduo, inui na virulncia e, possi-
velmente, desempenhe alguma funo na morfo-
gnese das partculas vricas. Prximo extremi-
dade 3, existe outra regio no-traduzida (50-100
bases, 3UTR) que contm stios importantes para
a replicao do genoma e infeces produtivas
(Figura 21.2).
A 5UTR do FMDV apresenta mais de 1.300
nt de extenso e muito maior do que aquelas
presentes no genoma dos enterovrus e poliov-
rus (740 bases) ou dos cardiovrus e EMCV (850
bases). A 5UTR dos aftovrus contm um seg-
mento curto, conhecido como fragmento S (apro-
ximadamente 350 bases), seguido por mais de
100 bases, contendo aproximadamente 90% de
citosina, com um nmero pequeno de uracilas
(U) e adeninas (A) (poliC). O fragmento S e poliC
so seguidos por um segmento de RNA de mais
de 700 nt, que pode formar estruturas secund-
rias altamente conservadas. Essas estruturas in-
cluem pseudoknots (PKs) repetidos em linha, um
elemento cis-acting envolvido na replicao do
RNA (cre) e uma estrutura relacionada com a ini-
ciao da traduo (IRES). O elemento IRES nos
aftovrus possui aproximadamente 450 nucleot-
deos e contm duas regies ricas em pirimidinas
imediatamente anteriores a cada cdon de inicia-
o alternativo. O fragmento S, a seqncia poliC
e as estruturas PK ocupam as primeiras 600 bases
do genoma do FMDV, enquanto uma pequena
estrutura na forma de trevo, com cerca de 100 nu-
cleotdeos (ou menos), encontrada no genoma
5' UTR 3' UTR
L VP4 VP2 VP3 VP1 2A 2B 2C 3A 3B 3C 3D VPg poly (A)
Poliprotena
ORF
L
L P1 P2 P3
VP3 VP1 2A VP2 2B 2C 3A 3B 3C 3D
(VPg)
VP4
Traduo
Clivagem
Replicao do genoma
Alterao da transcrio, traduo
e processamento protico celular
Encapsidao do genoma
Protease
Protenas estruturais Protenas no-estruturais
Figura 21.2. Organizao do genoma do vrus da febre aftosa (FMDV), mostrando os componentes do RNA(linha), os
genes e os produtos primrios da traduo (retngulos em branco) e os produtos finais da clivagem (retngulos em
cinza). Afunodas protenas estresumida abaixodafigura.
Picornaviridae 543
dos enterovrus. Como esta estrutura em forma
de trevo tem sido descrita relacionada replica-
o do RNA de vrios picornavrus, inclusive o
poliovrus, provavelmente o fragmento S, poliC
e PKs dos aftovrus podem tambm apresentar
funo na replicao do genoma do FMDV.
Os elementos IRES do genoma dos picor-
navrus so divididos em trs grupos, de acordo
com diferenas nas estruturas secundria e terci-
ria altamente conservadas. O IRES do grupo 1
encontrado no genoma dos enterovrus e rinov-
rus; do grupo 2 presente nos aftovrus e cardio-
vrus, e os hepatovrus possuem o IRES do grupo
3. Dentro de cada grupo h um grau maior de
conservao das estruturas secundrias do que
da seqncia de nucleotdeos propriamente dita.
Todos os elementos IRES dos picornavrus apre-
sentam uma regio rica em pirimidinas prxima
ao cdon de iniciao (Figura 21.3).
As protenas no-estruturais esto envolvidas na
replicao do genoma e no processamento da po-
liprotena.
A clivagem inicial da poliprotena execu-
tada pela proteinase 2A
pro
no stio P1/P2. Nos
aftovrus e cardiovrus, esta clivagem ocorre na
juno P1 2A/2B pela a 2A
pro
e, no stio P1/P2,
pela L
pro
. A maioria das outras clivagens media-
da pela atividade da protease 3C
pro
e seu precur-
sor 3CD
pro
.
4 Replicao
A primeira etapa no ciclo replicativo dos
picornavrus a interao dos vrions com os
receptores celulares. Os receptores so determi-
nantes do tropismo tecidual, tendo uma inun-
cia fundamental na patogenia da doena. Cada
grupo de vrus ou at mesmo cada vrus apresen-
ta um mecanismo de penetrao nico. Alguns
picornavrus (FMDV e rinovrus) so internali-
zados por endocitose, e a penetrao do genoma
ocorre a partir da vescula endoctica acidicada.
No poliovrus e, provavelmente, em alguns ou-
tros, a penetrao ocorre na membrana plasm-
tica, sem a necessidade de internalizao. Tem
sido proposto que a VP1 do poliovrus penetraria
na membrana, formando poros atravs dos quais
o genoma seria ejetado para o interior da clula.
Essa atividade da VP1 dependente de sua liga-
o ao receptor, que provoca alteraes na sua
estrutura. Nos vrus que so internalizados por
endocitose, o processo de internalizao acom-
panhado de uma srie de alteraes conformacio-
nais no capsdeo viral, levando ao desnudamento
e liberao do genoma no citoplasma celular.
Durante as ltimas duas dcadas, vrias
molculas de superfcie celular foram identi-
cadas como receptores para os picornavrus. A
maioria desses receptores pertence superfam-
lia das imunoglobulinas (Ig), incluindo o VCAM-
1, ICAM-1, CAR e CD155 (receptor de poliov-
rus), e superfamlia das integrinas, como 21,
v1, v3, v6, v8 (parechovrus humano 1
[hPEV1], echovrus 1, aftovrus e alguns entero-
vrus como o Coxsackie A9 [CAV9]). Outros re-
ceptores, como os similares ao SCR (decay-accele-
ranting factor [DAF]) e molculas LDL (VLDL-R),
so tambm utilizados.
Figura 21.3. Estruturas secundrias do RNA genmico
dos picornavrus que formamos IRES (stios internos de
entrada para os ribossomos). Um IRES do tipo I
representadonafigura.
Regio varivel
AUG
Regio
codificante
Regio rica
em pirimidinas
VI
V
IV
III
II
I
IRES tipo I
Seqncia
GNRA
Rica em A-C
Fonte: adaptada de Rueckert (1996).
O RNA genmico possui uma nica e longa
ORF, cuja traduo resulta em uma poliprotena
de, aproximadamente, 2.400 aminocidos. Essa
poliprotena clivada medida que vai sendo
produzida, originando os precursores das prote-
nas estruturais e no-estruturais (ver Figura 21.2).
A poliprotena contm uma regio que origina as
protenas do capsdeo (P1) e por duas regies que
originam as protenas no-estruturais (P2 e P3).
544 Captulo 21
A replicao do RNA ocorre aps alguns ci-
clos de traduo e maturao das protenas. A re-
plicao ocorre em duas etapas, e realizada pela
polimerase RNA dependente de RNA (3D
pol
), com
o auxlio de protenas virais e celulares. O RNA
genmico inicialmente transcrito em molculas
complementares (sentido negativo), que so usa-
das como molde para a sntese de mltiplas c-
pias de RNA genmico. Dentre estes, alguns so
traduzidos em protena, enquanto outros sero
includos nas partculas virais (Figura 21.4).
Embora as etapas bsicas da replicao se-
jam razoavelmente conhecidas, pouco se conhece
sobre os detalhes desses processos e sobre as fun-
es das seqncias e estruturas cis-acting con-
tidas no RNA dos picornavrus. Duas questes
ainda no esclarecidas se referem sntese da
cadeia negativa e ao modo como a polimerase vi-
ral reconhece o RNA viral entre os outros mRNA
poliadenilados celulares.
Devido ausncia de atividade de correo
da polimerase 3D
pol
, erros so freqentemen-
te produzidos durante a replicao, resultando
na incorporao de nucleotdeos incorretos. Em
razo disso, cada novo genoma contm aproxi-
madamente uma mutao. Logo, a populao de
RNA viral consiste de quasispecies, uma coleo
de membros geneticamente diferentes, que po-
dem se adaptar rapidamente a novos ambientes
por seleo.
As etapas nais do ciclo replicativo envol-
vem a montagem dos capsdeos e a maturao
dos vrions por clivagem da VP0 em VP2 e VP4.
Os mecanismos de montagem e maturao ain-
da necessitam maior entendimento. Em termos
gerais, os produtos da clivagem da regio P1
pela 3C
pro
so organizados em uma estrutura
protmera, contendo uma cpia das protenas
VP0 (VP2 e VP4), VP1 e VP3. Cinco protmeros
podem formar pentmeros, e doze pentmeros
formam o capsdeo. Partculas intermedirias
tm sido identicadas em clulas infectadas por
picornavrus, incluindo protmeros, pentmeros,
partculas contendo RNA e com uma VP0 no cli-
vada e, ainda, partculas com a VP0 no-clivada
e sem o RNA (capsdeo vazio). O ciclo replicativo
dos picornavrus est ilustrado na Figura 21.4.
Nos vrions dos poliovrus e rinovrus, os
stios de ligao aos receptores so os canyons.
Mutaes nesses locais reduzem ou abolem a sua
capacidade de se ligar superfcie celular. No
entanto, os capsdeos do FMDV e vrus Coxsa-
ckie A9 no possuem depresses ou canyons pro-
eminentes. Esses vrus se ligam aos receptores
atravs de loops especcos, localizados na VP1.
No FMDV, foi demonstrado que uma seqncia
R-G-D (arginina glicina asparagina) respon-
svel pela ligao s molculas de integrinas que
servem de receptores. Mutaes nesta seqncia
reduzem drasticamente ou previnem a ligao
dos vrions aos receptores. O vrus Coxsackie A9
tambm utiliza uma seqncia idntica na VP1
para interagir com os receptores. Porm, muta-
es nessa trinca de aminocidos no impedem
que o vrus se ligue superfcie celular, sugerin-
do a existncia de outros receptores.
O ciclo de replicao dos picornavrus ocor-
re integralmente no citoplasma das clulas hos-
pedeiras (Figura 21.4). O RNA genmico serve
como molde para a traduo e para a replicao,
resultando em uma interao complexa entre fa-
tores de traduo do hospedeiro e de replicao
do RNA. Para isso, a traduo e sntese de RNA
ta negativa (intermedirio replicativo) dos po-
liovrus so coordenadas pela interao de um
complexo de fatores virais e celulares. Isso ocor-
re em pequenas vesculas, originadas a partir de
membranas celulares, nas quais as protenas no-
estruturais do vrus cam associadas.
Aps o desnudamento e liberao no cito-
plasma, o RNA viral traduzido diretamente pe-
los polirribossomos. O IRES forma uma estrutura
secundria complexa que serve de stio de ligao
para os ribossomos, ou seja, o reconhecimento do
RNA independente de cap, ao contrrio do que
ocorre com os mRNAs celulares. A seguir, os ri-
bossomos so direcionados ao cdon de iniciao
da traduo, sem a necessidade de escanear as
seqncias anteriores, como ocorre nos mRNAs
que possuem cap. A traduo da ORF resulta em
uma poliprotena, que rapidamente clivada nos
precursores P1, P2 e P3 e, em seguida, origina as
protenas individuais. As protenas no-estrutu-
rais possuem papel importante na replicao do
genoma e em funes relacionadas.
Picornaviridae 545
A competio dos RNA virais (sem cap) com
os mRNA celulares (com cap), no momento da tra-
duo, resultaria em desvantagem para o vrus.
No entanto, os picornavrus possuem um meca-
nismo pelo qual podem assegurar a traduo dos
seus mRNA em detrimento da traduo dos mR-
NAs celulares. Uma protease viral cliva fatores
celulares necessrios para a traduo dependente
de cap, que o mecanismo utilizado pela clula
para traduzir os seus mRNAs. Nos poliovrus e
rinovrus, a clivagem do fator de iniciao da tra-
duo eIF4G pela protease 2A
pro
impede a forma-
o do complexo de traduo na extremidade 5
com cap. No FMDV, a clivagem realizada pela
protease L (lder). Assim, na impossibilidade de
realizar a traduo convencional, a maquinaria
celular passa a traduzir mRNAs que possuem
outras estruturas para o reconhecimento pelos
ribossomos. Como foi visto, os RNAs dos picor-
navrus possuem a estrutura IRES, que permite
que os ribossomos se liguem ao RNA e iniciem
a traduo. A traduo direcionada pelo IRES
altamente eciente e rpida, fazendo com que o
ciclo de replicao seja completado em poucas
horas (~3-5 horas) e com que uma clula infecta-
da possa produzir at 10
6
partculas vricas. Esse
mecanismo faz com que a infeco pelos picorna-
vrus resulte em inibio da sntese protica celu-
lar. J com duas horas de infeco, a traduo de
mRNA celulares est praticamente parada, sendo
substituda pela traduo de mRNAs virais.
Uma caracterstica marcante dos picornav-
rus a sua alta capacidade citoltica em clulas
de cultivo. As alteraes morfolgicas das clulas
iniciam com arredondamento celular, aumento
da refratilidade, retrao, picnose nuclear, dege-
RI
5'
Ncleo
Vpg
Vpg
Precursores
do capsdeo
Procapsideo
Polimerase
Complexo
replicativo
Prognie
viral
AAAAAA
AAAAAA
AAAAAA
Fatores auxiliares
(helicase, protease)
5'
Replicao
do genoma
1
2
3
5
4
4
6
7
Figura 21.4. Ciclo replicativo dos picornavrus. 1) Ligao aos receptores; 2) Penetrao; 3) Traduo do RNA
genmico; 4) Clivagem dos precursores proticos; 5) Replicao do genoma, via produo de um RNA intermedirio
(complementar); 6) Morfognese; 7) Egressopor lisecelular.
546 Captulo 21
nerao e desprendimento das clulas da mono-
camada. Um pequeno nmero de partculas su-
ciente para formar um foco infeccioso no tapete
celular, que geralmente comea entre um e sete
dias aps a infeco. Quando presente em gran-
des concentraes, os picornavrus podem cau-
sar a lise completa da monocamada em poucas
horas. Alguns vrus necessitam um perodo de
adaptao para produzirem os efeitos citopticos
caractersticos. Nenhum cultivo celular capaz
de suportar a replicao de todos os picornav-
rus. Geralmente, utilizam-se clulas de origem
humana ou de primatas no-humanos para os
vrus que infectam humanos; e clulas da espcie
hospedeira para a propagao dos vrus de inte-
resse veterinrio.
Alguns animais de laboratrio so suscept-
veis infeco pelos picornavrus e a sua infeco
experimental consegue reproduzir alguns aspec-
tos da infeco. Alguns dos vrus dessa famlia
(poliovrus, Coxsackie e alguns enterovrus) po-
dem ser inoculados experimentalmente em pri-
matas no-humanos e camundongos. Os vrus de
interesse veterinrio, como o FMDV, podem ser
inoculados em espcies susceptveis, como sunos
ou bovinos, e tambm em animais de laboratrio,
como as cobaias e os camundongos lactentes.
5 Picornavrus de interesse
veterinrio
A seguir sero descritas as principais enfer-
midades causadas pelos membros da famlia Pi-
cornaviridae que possuem interesse veterinrio. A
enfermidade de maior destaque a febre aftosa,
seguida da doena vesicular dos sunos. A febre
aftosa (FMD) a enfermidade animal que possui
maior repercusso em nvel mundial, devido a
sua alta infecciosidade e contagiosidade, perdas
na produtividade e prejuzos econmicos por
causa dos embargos comerciais. A doena vesi-
cular dos sunos, por ser confundvel com a febre
aftosa, tambm possui certa importncia. Porm,
a sua ocorrncia restrita a determinadas regies
faz com tenha uma importncia reduzida no ce-
nrio mundial. Os outros vrus possuem menor
importncia clnica e, assim, sero abordados
com brevidade. Para informaes mais comple-
tas, recomenda-se a literatura especca.
5.1 Vrus da febre aftosa
O primeiro registro descrevendo a febre af-
tosa (FMD) foi realizado por Fracastorius, na re-
gio de Verona, Itlia, em 1546. A demonstrao
do agente causal deve-se a Loefer e Frosch, em
1897, que, pela primeira vez, demonstraram que
uma doena animal poderia ser causada por um
agente ltrvel, ou seja, por um vrus. No princ-
pio do sculo 19, a FMD encontrava-se dissemi-
nada nos rebanhos bovinos da Europa, e isso es-
timulou o incio das investigaes sobre o vrus.
Juntamente com o poliovrus humano, o FMDV
um dos picornavrus mais estudados. Os traba-
lhos iniciais objetivaram a caracterizao de dife-
rentes isolados, identicao de sorotipos, repro-
duo da enfermidade em animais de laboratrio
e desenvolvimento de vacinas.
O FMDV notvel por sua transmissibilidade
extremamente alta entre animais, como bovinos,
ovinos, caprinos, sunos e outros biungulados
selvagens; assim como por sua ampla distribuio
geogrca. A doena caracterizada por alta
morbidade, podendo causar mortalidade em
animais jovens e perdas produtivas severas em
adultos. As perdas diretas referem-se queda na
produo, principalmente em bovinos leiteiros e
sunos. As perdas indiretas relacionam-se com a
restrio ao comrcio internacional de animais
vivos e subprodutos, e com o impacto social,
causado pelas aes de controle da infeco. A
situao epidemiolgica do FMDV no mundo
reete o nvel de desenvolvimento econmico
de cada regio. O vrus encontra-se erradicado
da Europa, Amrica do Norte, Austrlia e
Nova Zelndia. Os pases da Amrica do Sul
apresentam surtos espordicos, com maior
ou menor freqncia, dependendo do pas. A
infeco endmica na maioria dos pases da
frica e sia (Tabela 21.3).
A implementao de programas de vacina-
o em massa contra o FMDV, aps a Segunda
Guerra Mundial, resultou em sucesso na erradi-
cao da doena da Europa Ocidental e regio
Picornaviridae 547
Sul da Amrica do Sul. Alguns pases ou regies
nunca registraram a presena do agente (Aus-
trlia e Nova Zelndia), e outros conseguiram
erradicar e se manter livres da enfermidade por
longos perodos de tempo. A FMD foi descrita,
pela ltima vez, em 1929, nos EUA; em 1952,
no Canad e, em 1954, no Mxico. A vacinao
massiva dos rebanhos bovinos na Europa e re-
gio Sul da Amrica do Sul, durante muitos anos,
resultou no controle da enfermidade e, por m,
na virtual erradicao do vrus. Essa situao ge-
rou uma idia de controle da enfermidade, e a
vacinao foi descontinuada. Aps alguns anos
da interrupo dos programas de imunizao,
criou-se uma situao epidemiolgica perigosa.
Populaes bovinas completamente suscept-
veis ao agente, deteriorao dos servios veteri-
nrios de emergncia e falta de conscientizao
dos produtores e pblico em geral, aliados com
o intenso movimento de pessoas e abertura
de fronteiras comerciais entre pases e regies,
proporcionou a disseminao do vrus entre re-
banhos e regies, alterando consideravelmente o
mapa da distribuio da doena no mundo nos
ltimos dez anos. Como exemplos, podem ser
citados os surtos de FMDV em Taiwan (1997),
Brasil (2000-2001), Argentina (2001), Uruguai
(2001), Reino Unido (2001) e Holanda (2001). Um
surto de FMD pode custar milhes de dlares em
perdas de produo e de animais, movimentao
de animais e subprodutos, restrio a mercados
consumidores e de exportao, afetando a estabi-
lidade e a economia da regio. A importncia de
outras doenas vesiculares em bovinos deve-se,
sobretudo, sua semelhana clnica com a FMD e
necessidade de diagnstico diferencial.
No incio do ms de agosto de 2007, foi diag-
nosticado um surto de FMD na regio de Surrey,
Inglaterra. A identicao da amostra viral recu-
perada dos bovinos afetados indicou a presena
do FMDV tipo O1 BFS. Essa amostra foi origi-
nalmente isolada na epidemia de 1967 no Reino
Unido e, desde ento, no havia sido mais identi-
cada circulando em qualquer regio do mundo,
estando restrita ao uso laboratorial. As evidncias
sugerem que esse surto originou-se de um esca-
pe acidental ou intencional do Instituto de Sade
Animal (Institute of Animal Health, WHO/FAO)
em Pirbright, ou de uma companhia de produtos
veterinrios que utiliza parte das instalaes para
a produo de vacinas. Durante o ms de julho
de 2007, essa amostra foi utilizada no laboratrio
de Pirbright em testes de diagnstico e na produ-
o de vacinas. Aps a conrmao do surto, as
autoridades adotaram medidas severas de con-
trole e movimentao animal, com o objetivo de
conter o surto e evitar a disseminao para outras
reas do pas.
5.1.1 Situao da febre aftosa
na Amrica do Sul e Brasil
O primeiro registro da presena do FMDV
no continente americano foi realizado, em 1870,
nos Estados Unidos, e, posteriormente, na pro-
vncia de Buenos Aires, Argentina (1865, 1867 e
1870), Uruguai (1870), Chile (1871) e, no Brasil,
nos estados do Rio Grande Sul e Minas Gerais
(1895). No incio do sculo 20, a enfermidade dis-
seminou-se para outros estados brasileiros e para
outros pases na Amrica do Sul. Na dcada de
1950, foi criada uma organizao denominada
PANAFTOSA, ligada Organizao Pan-Ameri-
cana de Sade, com o objetivo de coordenar as
aes de controle, diagnstico e preveno da
FMD na Amrica do Sul.
Desde a dcada de 1950, quando os progra-
mas de controle do FMDV iniciaram, muitos pro-
gressos foram obtidos. O primeiro pas da Am-
rica do Sul a obter a condio de rea livre do
FMDV sem vacinao, reconhecido pela OIE, foi
o Chile, em 1988, e, desde ento, no tem regis-
trado a presena do agente. A deciso da Unio
Regio Sorotipo presente
rea livre
rea livre
rea livre
A, O e C
SAT1, 2, 3, A, O, C
Oceania
Amrica do Norte
Amrica Central e
Caribe
Amrica do Sul
frica
sia
A, O, C, sia1
Tabela 21.3. Distribuio mundial do vrus da febre
aftosa.
548 Captulo 21
dade de desenvolver aes de preveno e con-
trole da enfermidade.
Nos anos que se seguiram obteno da
condio de zona livre de FMDV, a regio sul
da Amrica do Sul presenciou a reemergncia
do agente em diversos pases ou estados (Tabela
21.4). Alguns pases da Amrica do Sul (Equa-
dor, Bolvia, Venezuela, Norte do Brasil, algumas
regies da Colmbia), onde a explorao bovina
com ns de exportao inexpressiva, o comba-
te enfermidade no prioritrio, perpetuando
reas endmicas ou de situao desconhecida.
Esforos governamentais tm sido feitos com o
objetivo de conscientizar a regio da gravidade
do problema e para que medidas de combate se-
jam adotadas por todos os pases.
5.1.2 O agente
O FMDV pertence ao gnero Aphthovirus,
apresentando sete sorotipos (A, O, C, SAT-1,
SAT-2, SAT-3 e sia 1). Cada tipo possui um am-
plo nmero de subtipos antigenicamente relacio-
nados, porm diferenciveis sorologicamente. Os
tipos e sorotipos produzem doena clinicamente
indistinguvel, porm apresentam diferentes dis-
tribuies geogrcas e situaes epidemiolgi-
cas. Por exemplo, os sorotipos SAT-1, SAT-2 e
SAT-3 nunca se difundiram alm do continente
africano. Outro exemplo o FMDV tipo C, que
permaneceu oculto durante muitos anos, sendo
quase considerado extinto, at que ressurgiu em
um surto da regio Amaznica do Brasil em 2004.
Algumas variaes de virulncia entre sorotipos
e subtipos podem ser observadas. Aps a infec-
o com um determinado sorotipo, o animal es-
tar protegido contra a infeco pelo mesmo so-
rotipo, mas permanece susceptvel infeco por
um sorotipo diferente. Ou seja, no h proteo
cruzada entre os diferentes sorotipos, em razo
das diferenas antignicas entre eles. A diferena
antignica entre subtipos dentro de um tipo pode
ser acentuada em alguns casos, e os nveis de neu-
tralizao cruzada podem ser insucientes para
conferir proteo. Essa situao pode resultar em
comprometimento da eccia das vacinas.

Europia (EU) em interromper a vacinao no
princpio dos anos 1990 estimulou pases como
Argentina, Uruguai e regio Sul do Brasil a in-
tensicarem o combate enfermidade para terem
acesso ao mercado consumidor europeu. Como
resultado de intensos programas de preveno e
controle, o Uruguai (em 1994), a Argentina e Pa-
raguai (em 1997) e os estados brasileiros do Rio
Grande do Sul e Santa Catarina (em 1998) obtive-
ram da OIE a condio de reas livres do FMDV
com vacinao. Essa situao progrediu para v-
rios outros estados brasileiros nos anos seguin-
tes, resultando em uma populao de aproxima-
damente 190 milhes de bovinos livres do vrus
na regio Sul da Amrica do Sul.
O maior objetivo da regio era a obteno a
condio de rea livre de FMDV sem vacinao,
situao que favoreceria a abertura de mercados
livres da enfermidade. O Uruguai interrompeu a
vacinao, em 1994, e obteve junto a OIE a condi-
o de pas livre sem vacinao em 1996. Seguin-
do esse procedimento, a Argentina e o Paraguai
interromperam a vacinao em 1999, e os estados
do Rio Grande do Sul e Santa Catarina em 2000.
A euforia com a possvel erradicao do
agente da regio Sul da Amrica do Sul foi se-
guida de acontecimentos que possibilitaram a
formao de uma imensa populao bovina total-
mente susceptvel. Alguns dos fatores que contri-
buram para essa situao foram: a) progressiva
perda da proteo de uma grande populao em
um curto perodo de tempo; b) movimentao de
um grande nmero de animais entre as regies;
c) presena de reas endmicas em algumas re-
gies do continente; d) decincia na preveno
sanitria; e) substancial reduo da infra-estrutu-
ra veterinria para aes de controle, preveno,
diagnstico e educao; f) subavaliao dos ris-
cos de reintroduo do vrus; g) prevalncia dos
interesses polticos e comerciais sobre os requeri-
mentos sanitrios; h) omisso nos cumprimentos
dos procedimentos e normas do Cdigo Interna-
cional de Sade Animal da OIE, bem como falta
de transparncia e veracidade na informao da
situao sanitria de alguns pases. Ou seja, em
um curto perodo de tempo, toda a infra-estrutu-
ra sanitria foi enfraquecida, perdendo a capaci-
Picornaviridae 549
5.1.3 Epidemiologia
A transmisso do FMDV entre os animais
pode ocorrer de vrias formas. As principais so
a transmisso direta pelo contato de animais sus-
ceptveis com animais infectados e por contato
indireto, pelo contato dos animais com fmites
ou subprodutos contaminados. A disseminao
ocorre pelo contato com secrees e excrees
oriundas de animais infectados, transporte de
animais, em exposies, feiras, remates, entre
outras. A disseminao indireta pode ocorrer
por meio de pessoas (trabalhadores, produtores
e veterinrios), veculos, vesturio, equipamen-
tos, sobras de alimentos usados para alimentao
de animais, principalmente sunos. A persistn-
cia do vrus no meio ambiente est relacionada
com as condies ambientais. Embora o FMDV
seja sensvel a inuncias ambientais, como pH
abaixo de 6.5, radiao solar e dessecao, o vrus
pode sobreviver por longos perodos sob baixas
temperaturas e em locais com relativa umidade.
Durante a infeco, o vrus excretado nos
tecidos e uidos das leses, na saliva, ar expira-
do, secrees nasais, sangue, leite, smen e urina.
A excreo viral nas secrees e excrees inicia
Paraguai
Argentina
Brasil
Colmbia
Uruguai
Pas Estado/Provncia Sorotipo
2
0
0
0
Espcie
Formosa
Rio Grande do Sul
Antiquia
Artigas
Bovinos
Sunos e b
Bovinos
Bovinos
Bovinos
ovinos
FMDV A
FMDV O
FMDV O
FMDV O
FMDV O
Argentina
Brasil
Uruguai
Buenos Aires
Soriano
Rio Grande do Sul
Bovinos
Bovinos
Bovinos
FMDV A
FMDV A
FMDV A
2
0
0
1
Paraguai
Venezuela
Canind Bovinos
Bovinos
FMDV O
FMDV O
2
0
0
2
2
0
0
3
Bolvia
Paraguai
Bolvia
Argentina
Chuquisaca
Boqueron
La Paz
Salta
Bovinos
Sunos e b
Bovinos
Bovinos
ovinos
FMDV O
FMDV A e O
FMDV O
FMDV O
2
0
0
4
Peru
Brasil
Colmbia
Brasil
Lima
Par
Santander
Amazonas
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Bovinos
FMDV O
FMDV O
FMDV A
FMDV C
Colmbia
Equador
Brasil
Bogot
Manibi
Mato Grosso do Sul
Bovinos
Bovinos
Bovinos
FMDV A
FMDV O
FMDV O
2
0
0
5
2
0
0
6
Argentina
Brasil
Equador
Brasil
Equador
Corrientes
M.Grosso do Sul e
Paran
Esmeralda
M. Grosso do Sul
Pichincha
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Bovinos
Bovinos e bfalos
FMDV A
FMDV O
???
FMDV O
FMDV O
Tabela 21.4. Surtos de febre aftosa diagnosticados na Amrica do Sul e notificados OIE durante os anos de 2000 a
2006.
550 Captulo 21
geralmente 24 horas antes do aparecimento dos
sinais clnicos, diminuindo consideravelmen-
te at cinco a sete dias aps o desenvolvimento
das leses. Quando os sinais clnicos se tornam
bem evidentes, a excreo viral j est reduzida.
A reduo nos ttulos de vrus excretados coin-
cide com o surgimento e aumento dos nveis de
anticorpos neutralizantes. O pico da excreo em
bovinos, sunos e ovinos pode ocorrer antes do
aparecimento dos sinais clnicos. Os sunos so os
grandes disseminadores do vrus atravs de ae-
rossis; os bovinos so bastante sensveis a infec-
o pelo trato respiratrio, e os ovinos podem ser
considerados os eliminadores silenciosos, pois as
leses so muito discretas.
Em bovinos, 10-30 gramas de material oriun-
dos de uma vescula da lngua freqentemente
contm mais de 1 bilho de unidades infectantes
do vrus. Um bovino adulto pode facilmente ex-
cretar mais de 10
14
partculas virais por dia. Essa
grande quantidade de vrus produzida e excre-
tada ir se disseminar no ambiente e aderir aos
equipamentos, materiais orgnicos e inorgnicos,
ambiente, animais e pessoas, que servem de ve-
culos para a transmisso do agente.
Aps a manipulao de animais doentes ou
no contato com secrees, excrees, manipula-
o de equipamentos, utenslios e restos mortais
de animais, o vrus pode permanecer nas roupas
e sapatos das pessoas e, dessa forma, ser disse-
minado para animais susceptveis. Casos em que
o homem (trabalhadores, produtores e veteri-
nrios) carreou mecanicamente o vrus j foram
bem descritos e caracterizados. A presena viral
nas secrees oronasais de pessoas que mani-
pularam animais infectados pode ser observada
por at 48 horas ps-exposio. A quantidade de
vrus reduz consideravelmente com o tempo, e
nunca foi possvel comprovar a transmisso do
vrus presente nessas secrees para animais. O
sucesso na transmisso do vrus presente nessas
secrees estaria diretamente relacionado com a
distncia e com o tempo de exposio do animal.
Na literatura, existem algumas descries da in-
feco de humanos com o FMDV. Geralmente
esses casos esto relacionados com pessoas que
manipularam grandes concentraes do vrus e
desenvolveram algum tipo de leso clnica, po-
rm nunca foi comprovado o envolvimento do
FMDV como agente causal.
O FMDV excretado em grande quantidade
no ar expirado pelos animais, principalmente os
sunos. A transmisso por aerossis pode ocorrer
e est diretamente relacionada com a quantidade
e concentrao de aerossis produzidos e com a
distncia entre os animais. Condies ambientais
como umidade, temperatura, ventos, pH do am-
biente e tamanho das partculas so determinan-
tes neste tipo de transmisso. No surto do Reino
Unido de 1967-1968, a associao dos dados epi-
demiolgicos com as condies meteorolgicas
indicou uma possvel disseminao pelo vento.
No continente africano e em regies tropicais,
onde as condies meteorolgicas so de calor
intenso e baixa umidade do ar, essa forma de dis-
seminao improvvel.
O real papel dos animais portadores ou car-
riers na epidemiologia da infeco no est total-
mente denido. Vrios registros de surtos que ini-
ciaram aps a introduo de bovinos que haviam
se recuperado da infeco apontam para um pos-
svel envolvimento desses animais, porm ainda
falta a conrmao. Em circunstncias normais,
os animais portadores no excretam o vrus e este
no pode ser detectado no meio onde o animal
vive. O risco de um animal portador iniciar um
surto muito baixo e deve ser diferenciado da
introduo de animais com infeces subclnicas
ou com leses no-detectadas. Nesse ltimo caso,
os pequenos ruminantes podem possuir um pa-
pel importante, pois as leses nessas espcies so
discretas e de difcil observao.
O animal portador denido como sendo
um animal sem sinais clnicos, em que o vrus in-
feccioso pode ser recuperado das secrees orofa-
rngeas aps um perodo de 28 dias ps-infeco.
Esses animais podem ter sofrido infeces clni-
cas ou subclnicas. A imunidade conferida pela
vacinao no impede o estabelecimento de uma
infeco subclnica e a conseqente produo do
estado de portador. O estabelecimento da infec-
o persistente depende do sorotipo envolvido,
e a durao depende da espcie envolvida e de
fatores individuais. Em bovinos, o perodo de
permanncia pode variar de meses at um ano e
facilmente atingir mais de 50% dos animais. Esse
Picornaviridae 551
perodo poder ser maior nos bfalos africanos
(Syncerus caffer), chegando at cinco anos, porm
a mdia de um a trs anos. Os bfalos asiticos
domsticos (Buballus arnee) permanecem porta-
dores por vrios meses. Nos pequenos ruminan-
tes, como ovelhas e cabras, a persistncia menos
estudada, porm atinge uma parcela menor da
populao e por um perodo no superior a seis
meses. Por razes desconhecidas, os sunos no
permanecem portadores.
A infeco natural pelo FMDV atinge vrias
espcies de animais da ordem Artiodactyla (biun-
gulados), incluindo vrios cervdeos, antlopes,
impalas, lhamas, gazelas, sunos selvagens e
capivaras. Os sinais clnicos nessas espcies so
mais discretos ou moderados, e o estado porta-
dor pode se detectado, porm de maneira incon-
sistente. Nos zoolgicos, comum a presena
de animais susceptveis ao FMDV e, por causa
da intensa movimentao de animais entre par-
ques zoolgicos, a possibilidade da introduo
deve ser considerada. O grande risco dos ani-
mais selvagens a manuteno da infeco e a
transmisso do vrus para as criaes domsticas
de ruminantes e sunos. Essa uma preocupao
constante na frica, onde animais da grande po-
pulao de vida livre freqentemente entram em
contato com criaes comerciais. As normas da
OIE, que estabelecem o comrcio internacional
de animais e produtos, no fazem distino entre
animais domsticos e selvagens para considerar a
situao epidemiolgica do pas ou regio.
A variabilidade gentica do vrus (por volta
de oito substituies de nucleotdeos por ciclo de
replicao) tem sido utilizada na caracterizao
de isolados do FMDV, ao se determinar o padro
de distribuio geogrca durante um surto.
Uma regio de 200 nucleotdeos no gene da VP1
tem sido utilizada para comparaes genmicas
entre os isolados de FMDV. Diferenas inferio-
res a 4% entre dois isolados indicam um origem
comum recente, enquanto diferenas de 15% ou
mais apontam para origens geogrcas distintas
ou surtos separados por muitos anos. Os isolados
com identidade superior a 85% so agrupados
como topotipos e tendem ser restritos quanto
distribuio geogrca.

e patologia

A maioria das infeces pelo FMDV inicia
pela penetrao do vrus pelas vias respirat-
rias superiores, seguida de uma multiplicao
inicial na mucosa da orofaringe. A seguir, o v-
rus pode se disseminar localmente e replicar nas
vias a reas inferiores, inclusive nos pulmes. O
vrus tambm pode penetrar atravs de solues
de continuidade na pele do focinho, das patas e
tetas. Aps a replicao inicial, o vrus atinge a
corrente sangnea e distribui-se por todo o orga-
nismo do animal. O vrus pode replicar em vrios
tecidos e, geralmente, as leses so observadas
nesses stios de replicao, como cavidade orona-
sal, patas, corao, tetas e glndula mamria. O
pico de infectividade ocorre nas horas anteriores
ao surgimento das leses e se reduz considera-
velmente nos trs a quatro dias subseqentes. As
leses so geralmente severas e resultam em que-
da na performance do animal, podendo produzir
seqelas que inuenciam na produtividade futu-
ra. O vrus tambm excretado em altos nveis
em gotculas e aerossis pela respirao e pelas
fezes, urina, leite e smen.
Os bovinos so infectados principalmente
por inalao, freqentemente a partir de sunos,
que secretam grande quantidade de vrus por
aerossis respiratrios. Os sunos so infectados
principalmente por ingesto de alimentos conta-
minados. Em sunos, ovinos e caprinos, os sinais
clnicos so similares, porm mais suaves. Nessas
espcies, a claudicao o sinal predominante.
Em ovinos, a infeco pode se disseminar pelo
rebanho com sinais discretos ou mesmo assinto-
mtica. A febre aftosa no considerada um pro-
blema de sade pblica, embora alguns casos de
infeco humana j tenham sido documentados.
A FMD uma doena vesicular altamen-
te contagiosa e os sinais clnicos so atribudos
replicao viral nos epitlios, o que resulta na
formao de vesculas. Os sinais clnicos so pre-
cedidos de viremia e um perodo de depresso,
apatia, febre, laminite e anorexia. As leses vesi-
culares podem ser observadas na cavidade oral,
na lngua, narinas, espao interdigital, banda co-
552 Captulo 21
ronria e nas tetas. Acompanhando o desenvol-
vimento das vesculas, salivao excessiva e des-
carga nasal podem ser observadas. As vesculas
podem variar de 0,5 a 1 cm de dimetro e encon-
tram-se preenchidas com um uido que possui
altas concentraes de vrus. As leses progridem
rapidamente, rompendo-se e formando reas ul-
ceradas e erodidas que rapidamente cicatrizam.
Antes da resoluo completa das leses pode
ocorrer a infeco secundria, agravando ainda
mais o quadro. Como conseqncia das leses,
ocorre um comprometimento da funcionalidade
do rgo, o que explica a anorexia, diculdade de
movimentao e amamentao. Seqelas podem
incluir deformidades e inclusive a perda comple-
ta do casco.
O perodo de incubao de dois a 21 dias
(mdia de 3 a 8), mas o vrus geralmente elimina-
do do organismo antes dos sinais clnicos desapa-
recerem. A morbidade pode atingir os 100%, mas
a mortalidade muito baixa em animais adultos.
Em animais jovens, os ndices de mortalidade so
freqentemente altos, podendo ser atribudo
capacidade do vrus de infectar o msculo card-
aco. A leso resultante no miocrdio conhecida
como corao tigrado. Alm das leses observa-
das nos epitlios citados anteriormente, o vrus
pode replicar e produzir leses nos pilares do r-
men. Em bovinos leiteiros, freqentemente ocor-
re uma queda na produo leiteira por causa das
leses na pele do bere e a replicao do vrus na
glndula mamria. Abortos podem ocorrer devi-
do s conseqncias sistmicas da infeco e no
como resultado da infeco fetal.
5.1.5 Imunidade
A proteo imunolgica conferida pela in-
feco natural ou pela vacinao mediada por
anticorpos neutralizantes. Existe uma forte cor-
relao entre nveis desses anticorpos e proteo.
No h evidncias de que a imunidade celular
desempenhe um papel relevante na proteo da
infeco com o FMDV. A imunidade especca
para o sorotipo e subtipo com o qual o animal
foi infectado ou vacinado, ou seja, a imunidade
conferida contra um sorotipo no ir proteger o
animal da infeco clnica com outro sorotipo.
A evoluo gentica do FMDV bastante r-
pida devido s altas taxas de mutao. Isto resul-
ta em diversidade antignica, o que pode ocasio-
nar falhas na proteo pelos anticorpos. Esse fato
possui implicao direta na seleo de amostras
usadas para produo de antgenos vacinais, em
que se deve utilizar variantes virais imunodomi-
nantes que so capazes de induzir proteo para
um amplo nmero de variantes do mesmo soro-
tipo.
Os animais recm-nascidos que possuem
imunidade passiva adquirida da me esto pro-
tegidos da infeco. Essa imunidade proporcio-
nal condio imunolgica da me e quanti-
dade de colostro ingerido pelo recm-nascido. A
vida mdia da imunidade passiva para bovinos e
sunos em torno de 21 dias, podendo ser detec-
tada at os quatro ou cinco meses de idade. Esse
tipo de imunidade possui inuncia direta na
resposta do animal vacinao.
5.1.6 Diagnstico
A caracterstica da alta infecciosidade do
FMDV e as srias implicaes sanitrias da infec-
o exigem um diagnstico urgente e preciso. A
possibilidade de FMD deve ser considerada sem-
pre que houver doena vesicular em ruminantes
ou sunos, devido ao fato de outros vrus produzi-
rem leses similares. A apresentao clnica pode
auxiliar, porm no suciente para o diagnsti-
co denitivo. Podem ocorrer infeces mistas, de
variantes com virulncia alterada ou, ainda, com
manifestaes clnicas mascaradas pela imunida-
de parcial do rebanho. Por essas razes, a suspei-
ta clnico-epidemiolgica deve necessariamente
ser conrmada por testes laboratoriais.
O diagnstico da FMD realizado pela de-
monstrao do vrus ou de antgenos virais em
tecidos e uidos de animais infectados. A inves-
tigao sorolgica pode ser empregada, porm
em razo da diculdade de diferenciao entre
resposta sorolgica vacinal daquela induzida
pela infeco natural, no recomendvel para
regies endmicas ou onde a vacinao prati-
cada. Em casos suspeitos de FMD, a noticao
do servio ocial veterinrio obrigatria e pre-
mente. A coleta, transporte e processamento da
Picornaviridae 553
amostra devem ser realizados por pessoal tc-
nico capacitado e em laboratrios de segurana
credenciados.
Os materiais de eleio para o diagnstico
da enfermidade incluem fragmentos do epitlio
e uido coletado de vesculas no rompidas ou
recentemente rompidas. O material deve ser mis-
turado em partes iguais de meio de transporte
contendo glicerol e meio fosfatado (0,04 M). No
caso de falta de meio de transporte, meio essen-
cial mnimo ou PBS podem ser utilizados. Por
causa da fragilidade do vrus a variaes de pH,
recomenda-se manter um pH entre 7,2 e 7,6 na
amostra. Em casos suspeitos de infeco subcl-
nica ou com leses discretas, pode-se coletar san-
gue com anticoagulante e/ou soro. Na presena
da mortalidade de animais jovens, tecidos, como
o msculo cardaco, tireide e linfonodos, podem
ser coletados. Quando as leses so discretas ou
suspeita-se de infeces subclnicas e convales-
centes, pode-se coletar sangue com anticoagu-
lantes e uido esofgico-faringeano (OP), com
auxlio de coletores do tipo probang. O OP deve
possuir restos celulares e ser livre de sangue ou
lquido ruminal. Aps a coleta, o lquido deve
ser misturado com meio de transporte (0,08M so-
luo de fosfato, 0.01% albumina srica bovina,
antibiticos, 0,002% vermelho de fenol e com pH
7,2). O material coletado deve ser acondicionado
em um recipiente limpo e vedado para evitar o
vazamento da amostra ou a penetrao de con-
tedo que possa alterar o pH, inativando o vrus.
O transporte deve ser realizado imediatamente
aps a coleta e sob refrigerao (4C ). Em situa-
es nas quais o intervalo entre a coleta e a che-
gada ao laboratrio forem superiores a 24 horas,
as amostras devem ser congeladas em nitrognio
lquido ou gelo seco.
Os testes de rotina utilizados para o diagns-
tico da FMD so: isolamento viral, xao de com-
plemento e ELISA de captura. Para o isolamento
viral, uma frao do tecido deve ser macerada e
o sobrenadante inoculado em cultivo celular. Se
o material coletado for o lquido vesicular, pode
ser inoculado diretamente. Os cultivos primrios
de tireide bovina so as clulas de eleio para o
isolamento do FMDV, mas cultivos primrios de
rim de bovino, suno e cordeiros tambm podem
ser utilizados. As linhagens celulares BHK-21 e
IBRS-2 tambm so utilizadas para o isolamento,
porm possuem menor sensibilidade. A conr-
mao da presena viral e identicao do soroti-
po presente em amostras que produziram efeito
citoptico so realizadas por testes de xao do
complemento ou ELISA.
Outra forma de isolamento viral a ino-
culao em camundongos lactentes (2-7 dias de
idade). Alguns isolados de campo necessitam de
mais de uma passagem antes para se tornarem
adaptados a camundongos. O indicativo da pre-
sena viral a mortalidade dos animais inocula-
dos aps 48 horas; e a identicao do sorotipo
realizada pelos mesmos testes, utilizando-se uma
suspenso do msculo esqueltico dos animais
mortos. Em casos onde no observado efeito ci-
toptico nos cultivos ou mortalidade nos camun-
dongos em 48 horas, a amostra deve ser conge-
lada, descongelada e inoculada novamente antes
de ser considerada negativa.
As provas de xao de complemento e ELI-
SA de captura so utilizadas para a deteco de
antgenos virais. O teste de ELISA o recomen-
dado pela OIE/FAO para a demonstrao da
presena de antgenos virais e identicao do
sorotipo presente na amostra. O teste de ELISA
possui maior sensibilidade e especicidade, sen-
do indicado na ausncia do primeiro.
O uso de testes para a deteco de anticor-
pos contra as protenas no-estruturais deve ser
realizado com cautela e fundamenta-se no fato de
que somente animais infectados e no aqueles
vacinados desenvolvem anticorpos contra essas
protenas. De fato, os animais vacinados com va-
cinas inativadas desenvolvem anticorpos apenas
contra as protenas estruturais, pois no ocorre
replicao viral e as protenas no-estruturais
no so sintetizadas. No entanto, protenas no-
estruturais podem acidentalmente contaminar as
vacinas durante a sua produo, resultando na
induo de anticorpos nos animais vacinados.
Esse problema mais comum em animais que
receberam mltiplas doses de vacinas. Por esta
mesma razo, as vacinas devem ser puricadas
para a remoo de todos os traos de protenas
no-estruturais.
554 Captulo 21
Os testes para a deteco de anticorpos so
a soro-neutralizao (SN), ELISA e VIAA (virus
infection-associated antigen). Os testes de SN e ELI-
SA so utilizados e reconhecidos para certica-
o para comrcio internacional. O teste de SN
especco para o vrus utilizado e requer de dois
a trs dias para a obteno do resultado. Alm
disso, existe a necessidade de um laboratrio
equipado e seguro, pois este teste requer a mani-
pulao de vrus vivo. O teste de ELISA espe-
cco, sensvel e rpido (4-5 horas) e no envolve
manipulao de vrus. Testes de ELISA que de-
tectam anticorpos contra as protenas 3D e 3ABC
foram desenvolvidos e apresentam sensibilidade
e especicidade aceitveis. O VIAA detecta anti-
corpos contra protena polimerase 3D, envolvida
na replicao viral. Dessa forma, o VIAA no
sorotipo especco e pode resultar em falsos-po-
sitivos em animais que foram vacinados vrias
vezes. Por isso, tem sido recomendada a sua
substituio pelo ELISA. O EITB (enzyme-linked
immuno-electrotransfer blot), desenvolvido pelo
PANAFTOSA, possui sensibilidade superior ao
VIAA e amplamente utilizado no programa de
controle da FMD no Brasil.
A deteco de animais portadores realiza-
da atravs do isolamento viral do vrus presente
no uido esfago-farngeo. Esse material sub-
metido ao tratamento com TTE (triuortricloro-
etano) para dissociar os vrions dos anticorpos
neutralizantes e de outras substncias inibidoras.
A conrmao da presena e do tipo viral rea-
lizada atravs da inoculao em cultivo celular e
ELISA de captura.
Diversos testes de RT-PCR e PCR em tem-
po real foram desenvolvidos para a realizao do
diagnstico rpido da infeco. O PCR em tem-
po real de execuo rpida, pode ser adaptado
para utilizao a campo, sendo capaz de detectar
e diferenciar os sete sorotipos possveis. O foco
dos esforos no diagnstico do FMDV envolve o
desenvolvimento de testes rpidos e que sejam
capazes de diferenciar a infeco ativa da respos-
ta vacinao e tambm detectar os animais por-
tadores.
O estabelecimento de uma estratgia univer-
sal e denitiva para o controle da FMD contro-
verso e complexo. As medidas a serem adotadas
por uma regio ou pas devem ser baseadas na
situao epidemiolgica de cada caso. Alm dis-
so, vrios fatores devem ser considerados para a
escolha das melhores alternativas, destacando-se
o impacto domstico e externo nas exportaes,
a perda de produtividade animal, as conseqn-
cias econmicas para a regio, bem-estar animal,
entre outras. Durante a ocorrncia de um sur-
to, extremamente prudente avaliar as medidas
que esto sendo adotadas, para que o estudo do
risco de disseminao do vrus contemple as ne-
cessidades dos segmentos envolvidos. As expe-
rincias de vrios pases e regies indicam essa
necessidade.
Em reas livres naturais ou que erradicaram
o agente, devem-se aplicar medidas preventivas
para evitar a introduo do vrus. Essas medidas
incluem barreiras sanitrias, restrio ao trnsito
de animais oriundos de reas de risco, desinfec-
o, quarentena e vacinao (quando indicado).
Essas medidas devem ser aplicadas contnua e
sistematicamente, sobretudo se existirem re-
as de risco nas proximidades. A vigilncia deve
tambm incluir a conscientizao dos produto-
res, manuteno da estrutura de diagnstico, vi-
gilncia e combate.
Em casos de surtos em reas livres ou pa-
raendmicas, a primeira opo para erradicar o
surto a adoo do rie sanitrio, abatendo-se e
incinerando os animais infectados, os contatos e
susceptveis. Essa alternativa a mais econmica
e ecaz quando um pequeno nmero de animais
est envolvido e se for realizada de forma rpi-
da. Outra vantagem do uso desse mtodo a ob-
teno do certicado de zona livre em um curto
perodo de tempo. No entanto, em regies onde
a densidade populacional elevada e ocorre um
intenso movimento entre pessoas e animais, essa
alternativa pode ser problemtica, sobretudo se
o vrus j tiver sido disseminado. Outro aspecto
que deve ser considerado a infra-estrutura para
o sacrifcio dos animais e destruio das carcaas,
pois durante essas operaes grandes quantida-
des de material infeccioso so geradas e podem
servir de fonte para disseminao. Uma desvan-
tagem desse mtodo de combate refere-se eli-
minao de um nmero excessivo de animais,
provavelmente muitos sem necessidade, o que
repercute negativamente na sociedade.
Picornaviridae 555
Existem vrias combinaes possveis de
medidas de combate a surtos. As vantagens e
desvantagens variam de acordo com a apresen-
tao. No existe um modelo de medidas que de-
vam ser adotadas para todos os casos. A escolha
de um modelo deve ser montada de acordo com
a realidade da regio envolvida. Porm, em todas
as situaes, a organizao e rapidez das aes
iro contribuir para a reduo da disseminao
do vrus.
Logo aps a conrmao do diagnstico,
a propriedade (ou a regio) deve ser interdita-
da, evitando-se a sada de quaisquer animais ou
produtos que possam servir de veculos para a
transmisso viral. Os animais afetados e os po-
tencialmente em contato devem ser abatidos, e
as carcaas incineradas ou enterradas com cober-
tura de cal. Outros ruminantes da propriedade
tambm devem ter o mesmo tratamento. Deve-se
ressaltar que o FMDV extremamente infeccioso
e as medidas devem ser drsticas e rgidas para
evitar a sua disseminao a partir do foco. A es-
tratgia pode exigir a vacinao perifocal, ou seja,
das propriedades vizinhas num raio de 3 km. Essa
imunizao produz um cinturo de imunidade
ao redor do foco e diculta a sada do vrus. Aps
o abate e a destruio das carcaas, procede-se a
desinfeco das instalaes e equipamentos. A
restrio ao movimento de animais pode seguir
at que se tenha segurana que no h mais risco
de disseminao. Esses procedimentos devem ser
seguidos de um vazio sanitrio, que pode chegar
a trs meses. Nesse perodo, a propriedade deve
permanecer completamente vazia de quaisquer
animais susceptveis ao vrus. O vazio sanitrio
seguido da introduo de animais sentinela,
geralmente bovinos jovens soronegativos. Esses
animais so introduzidos para monitorar a pre-
sena residual do agente e so monitorados cl-
nica e sorologicamente para a presena do vrus.
Nos casos positivos, deve-se novamente realizar
a depopulao, desinfeco e vazio sanitrio.
Quando os sentinelas no apresentam sinais de
infeco, doena ou soroconverso aps um de-
terminado perodo (60-90 dias), pode-se proceder
a repopulao da propriedade.
A vacinao uma importante alternativa
para o controle da infeco e erradicao da en-
fermidade de reas endmicas e paraendmicas.
Essa alternativa pode ser usada em regies end-
micas, para reduzir gradativamente a circulao
do vrus e a incidncia da enfermidade, ou em
ocasies de surtos, para impedir a propagao do
vrus. A eccia da vacinao em regies endmi-
cas est diretamente relacionada com a cobertura
vacinal. Resultados promissores so obtidos com
cobertura vacinal acima de 80% da populao bo-
vina. No entanto, esses nveis de cobertura so
insucientes para o objetivo de erradicao. O ob-
jetivo da vacinao durante um surto impedir a
disseminao do vrus para outras propriedades.
A imunidade conferida pela vacinao consegue
reduzir signicativamente a quantidade de v-
rus excretada por um animal aps quatro a cinco
dias da aplicao. A ocorrncia de novos surtos
ir diminuir gradativamente aps a aplicao da
vacina, podendo resultar em preveno de novos
focos em 15 a 20 dias.
As medidas de controle e erradicao de-
vem ser constantemente revistas e atualizadas,
de acordo com o surgimento de novas situaes.
O monitoramento constante da situao epide-
miolgica mundial deve ser uma rotina e servir
de alerta. A manuteno de uma rede eciente de
vigilncia, diagnstico, controle e divulgao das
aes deve ser prioridade em qualquer situao.
5.1.8 Vacinas
As vacinas contra a FMD so produzidas
a partir de preparaes de vrus cultivados em
cultivos celulares e inativados quimicamente. Es-
sas preparaes so combinadas com adjuvantes
para potencializar a resposta imune. O processo
de produo altamente tecnicado e desenvol-
vido em laboratrios de segurana para evitar
escape de vrus. Diferentes testes para assegurar
a qualidade e determinar a massa antignica, po-
tncia e inocuidade so realizados antes da libe-
rao de um lote de vacinas. Vacinas formuladas
com adjuvantes base de hidrxido de alumnio,
com ou sem saponina, so indicados somente
para ruminantes. As vacinas com adjuvante ole-
oso (dupla emulso) podem ser utilizadas para
sunos e ruminantes. A capacidade imunognica
entre os sorotipos varivel, ou seja, para o soro-
556 Captulo 21
tipo O, necessria uma massa antignica maior
do que para os sorotipos A, C e sia 1. As razes
para essa diferena no so conhecidas. Em ter-
mos gerais, a massa antignica varia entre 1-10g
de partculas 146S para cada amostra presente na
vacina.
Os componentes das vacinas devem reetir
a situao epidemiolgica de cada regio e po-
dem variar de constituio conforme o caso e a
espcie envolvida. As vacinas podem ser mono-
valentes, isto , formuladas com somente um so-
rotipo; ou multivalentes, sendo formuladas com
mais de um sorotipo (p. ex.: A, O e sia 1). Podem
tambm ser formuladas com vrias amostras de
um mesmo sorotipo (p. ex.: A). A maioria das va-
cinas comercializadas no Brasil e na Amrica do
Sul so trivalentes, contendo amostras virais dos
sorotipos A24 Cruzeiro, O1 Campos e C3 Indaial.
Essas cepas so representativas dos vrus circu-
lantes na regio e imunodominantes, ou seja, so
capazes de conferir proteo contra possveis va-
riantes. Existe uma constante necessidade de vi-
gilncia sorolgica dos isolados em surtos para
certicar-se que as vacinas disponveis so pr-
prias para os respectivos locais e para identicar
o eventual aparecimento de novas variantes. Os
sorotipos A e O so os que apresentam um maior
nmero de variantes.
A eccia da vacinao dependente de v-
rios aspectos, dentre eles do armazenamento em
temperatura adequada. Vacinas conservadas en-
tre 3-8C so estveis por at dois anos. A aplica-
o deve ser realizada com os animais contidos,
especialmente fmeas gestantes. Vacinas com
adjuvante aquoso devem ser aplicadas pela via
subcutnea, preferencialmente na regio do pes-
coo ou poro cranial da escpula. O volume re-
comendado varia entre 2-3 ml para bovinos e 1-2
ml para pequenos ruminantes. Os animais jovens
devem receber a mesma dose dos adultos. As
vacinas oleosas so administradas em bovinos e
sunos pela via intramuscular. Em bovinos, reco-
menda-se a regio superior do pescoo, e, em su-
nos, a regio posterior da orelha. Os constituintes
das vacinas so puricados, as reaes no stio de
vacinao so discretas, e as reaes analticas
so incomuns. Reaes podem ocorrer devido a
problemas na aplicao e, geralmente, esto re-
lacionadas com problemas de contaminao da
seringa ou no momento da vacinao. Reaes
inamatrias granulomatosas que persistem por
algumas semanas tm sido freqentemente rela-
tadas aps o uso de vacinas com adjuvante ole-
oso.
A imunidade induzida pela vacinao ca-
paz de proteger os animais da doena clnica e o
pico de produo de anticorpos atingido aps
quatro ou cinco semanas da aplicao. A segunda
dose deve ser aplicada 30 dias aps a primeira
vacinao. Vacinaes anuais so recomendadas
para manter os nveis de imunidade do rebanho.
A resposta imune produzida pela vacinao no
esterilizante, ou seja, os animais vacinados e de-
saados com o vrus so infectados. No caso dos
ruminantes, esses animais podem tornar-se por-
tadores. No entanto, nunca houve comprovao
da transmisso do vrus entre animais portadores
e susceptveis. Animais jovens respondem satis-
fatoriamente vacinao, porm, em razo da
imunidade materna interferir na resposta va-
cinao, recomenda-se vacinar somente animais
com idade superior a dois meses.
5.1.9 Perspectivas
A febre aftosa responsvel pelas maiores
restries ao comrcio internacional de animais
e seus subprodutos. Quando um surto ocorre em
um determinado pas, seus parceiros comerciais
interrompem a importao de animais, produ-
tos animais e freqentemente de outros produ-
tos agrcolas. Tais circunstncias resultam em
perdas permanentes de mercado para os pases
afetados. Muito tem sido realizado para melho-
rar as vacinas e mtodos de diagnsticos, assim
como para o desenvolvimento de terapias para
conter a propagao viral. No entanto, nenhuma
alternativa ainda est disponvel comercialmen-
te, abrindo uma rea interessante para pesquisa
e desenvolvimento. A febre aftosa clinicamente
semelhante e assim pode ser confundida com
a rinotraquete infecciosa bovina (IBR), lngua
azul, mamilite herptica e peste bovina. Tambm
semelhante estomatite vesicular, doena vesi-
cular suna e exantema vesicular dos sunos. Por
isso, testes rpidos e capazes de diferenciar entre
essas enfermidades so necessrios.
Picornaviridae 557
Alguns conceitos em relao ao FMDV e
as medidas de controle so baseados em supo-
sies ou em situaes de pocas anteriores. O
papel dos animais portadores na epidemiologia
da enfermidade nunca foi totalmente comprova-
do. Mesmo assim, formas de diferenciao entre
animais vacinados e portadores deve ser um dos
focos de estudos futuros. O conceito de que as va-
cinas no possuem eccia deve ser combatido.
As medidas de erradicao e eliminao dos ani-
mais infectados e contatos devem ser adotadas de
acordo com a realidade da regio e as conseqn-
cias resultantes. Pelo menos, muito discutvel
descartar um grande nmero de animais e deses-
tabilizar uma regio ou pas inteiro somente para
a manuteno da condio sanitria e comercial.
As diferentes formas como os surtos de 2001, no
Reino Unido e Uruguai, foram combatidos servi-
ram como um bom exemplo do potencial social e
psicolgico do impacto que se segue a uma epi-
demia de FMD. O intenso comrcio de animais
e seus subprodutos no mundo, muitas vezes ile-
gal, a mobilidade cada vez maior das pessoas,
reduo na vacinao de rebanhos, a constante
expanso de amostras do FMDV e a maior inte-
rao das pessoas com a vida silvestre devem ser
considerados para a formulao de programas
de preveno. No momento do surgimento de
um foco da enfermidade, vrios aspectos devem
ser considerados, e as aes devem ser tomadas
o mais breve possvel. Com a evoluo do surto,
as medidas devem ser avaliadas constantemente,
levando em considerao todos os segmentos da
sociedade envolvida ou possivelmente afetada e,
se necessrio, novas medidas devem ser conside-
radas e implementadas.
Na dcada passada, a Amrica do Sul atin-
giu uma situao privilegiada em relao ao
controle. Porm, devido a diversos fatores, a er-
radicao no foi possvel, e a regio deparou-se
com a reemergncia da FMD. Para avanar no
controle e obter a erradicao da enfermidade da
regio, existe a necessidade de conscientizao
de todos os pases, principalmente dos pases em
que a produo bovina no desenvolvida, para
esforos direcionados ao combate aos focos. O
papel dos pases produtores ser de extrema im-
portncia, pois esses devem liderar, e at mesmo
nanciar, os programas de combate doena na
regio, pois certamente sero os mais favorecidos
com a abertura do comrcio internacional.
5.2 Vrus da doena vesicular dos sunos
A doena vesicular dos sunos (SVD) uma
enfermidade moderamente contagiosa e aguda,
caracterizada por febre e produo de vesculas
no focinho, boca, ps e tetas. A doena pode ser
introduzida em uma granja por animais infecta-
dos, restos de alimentos ou dejetos contaminados.
Os sunos so os nicos hospedeiros naturais, e a
doena pode variar em gravidade, mas raramen-
te fatal. Altos ttulos virais esto presentes no
animal, nos seus uidos corporais e excrees. Os
sinais clnicos da SVD incluem ainda febre, perda
de apetite, diculdade de locomoo (por causa
das vesculas nas patas). O desenvolvimento das
vesculas ocorre entre 2 e 11 dias aps a infeco.
O pico da viremia ocorre 2 a 4 dias aps a infec-
o e persiste por, aproximadamente, sete dias.
A recuperao ocorre normalmente em 1 a 3 se-
manas, mas partculas virais infecciosas podem
ser encontradas nas fezes por at trs meses em
animais portadores. O SVDV pode permanecer
vivel por mais de 30 dias sob refrigerao, com
o pH entre 3,9-9,1.
As leses vesiculares em sunos so clinica-
mente indistinguveis das causadas pelo FMDV,
pelo vrus da estomatite vesicular e vrus do
exantema vesicular; e suas caractersticas histo-
patolgicas tambm so muito similares. As le-
ses vesiculares se desenvolvem na lngua, lbios
e focinho, bandas coronrias e regio posterior
das patas, e iniciam como uma regio hipermica
e que aumenta com o progresso da formao das
vesculas. O epitlio da regio plantar pode tor-
nar-se frouxo, podendo ocorrer a perda do casco.
As leses na boca, nos lbios e focinho so menos
freqentes. As leses freqentemente sofrem in-
feces bacterianas secundrias.
O primeiro relato de SVD foi descrito na It-
lia, em 1966, e o agente etiolgico foi identicado
em 1968. Desde ento, a doena tem sido espo-
radicamente descrita na Europa, Japo, Hong
Kong e Taiwan. No h relatos da presena da
SVD nas Amricas. O vrus pertence ao gnero
Enterovirus e altamente relacionado com o vrus
Coxsackie B5 de humanos (CV-B5). Baseados na
558 Captulo 21
similaridade de nucleotdeos, tem sido proposto
que o SVDV foi introduzido na populao suna
pela transmisso do CV-B5 a partir de humanos.
Os vrions so muito estveis sob pH cido, no
ambiente e resistem aos desinfetantes comuns. A
viabilidade pode ser mantida aps dessecao,
congelamento, fermentao e processo de defu-
mao usado para preservar produtos sunos,
podendo persistir no material contaminado por
longo perodo de tempo.
Somente um sorotipo do SVDV foi descrito
at o presente, e o vrus no apresenta reativida-
de sorolgica cruzada com outros picornavrus,
incluindo os enterovrus sunos. O diagnstico
da SVD baseia-se em testes laboratoriais, que so
absolutamente necessrios para diferenci-la da
FMD. As amostras a serem enviadas ao labora-
trio incluem sangue com anticoagulante para
isolamento viral, soro, tecidos de leses e lqui-
dos vesiculares. O diagnstico realizado atra-
vs do isolamento viral em clulas de cultivo,
por xao do complemento e ELISA de captura
para a deteco de antgenos; ou atravs de SN,
para a deteco de anticorpos. Os resultados dos
testes de ELISA e SN so disponveis em um a
trs dias. A caracterizao da amostra, para usos
epidemiolgicos, pode ser realizada por seqen-
ciamento de determinadas seqncias da VP1.
A microscopia eletrnica tambm pode ser utili-
zada para a visualizao de partculas vricas no
material clnico.
A preveno deve ser direcionada, a m de
evitar a introduo do vrus em reas e rebanhos
livres, pelo estrito controle de animais importa-
dos de reas infectadas e pela regulamentao do
movimento de animais ou produtos de origem
animal. O controle deve tambm incluir inspe-
o veterinria, testes sorolgicos e certicao
de propriedades. O controle tambm deve contar
com sistemas de deteco e diagnstico rpidos,
vigilncia sorolgica e sistema de informao so-
bre a doena. Atualmente, no existem vacinas
disponveis contra o SVDV.
5.3 Enterovrus suno tipo 1
O enterovrus suno-1 o agente etiolgico
da polioencefalomielite suna ou doena de Tes-
chen. O perodo de incubao da enfermidade
varia entre 4 e 28 dias, e os sinais clnicos caracte-
rizam-se por febre, anorexia, depresso, evoluo
para sinais neurolgicos como tremores e incor-
denao, convulses, coma e morte. A patogeni-
cidade inuenciada pela amostra viral, idade e
condio imunolgica dos animais. Em casos se-
veros, a mortalidade pode atingir at 75%, prin-
cipalmente em animais jovens. A transmisso
ocorre por contato com animais infectados ou por
objetos contaminados com o vrus. Aps a pene-
trao, o vrus replica no trato alimentar e linfo-
nodos associados, disseminando-se por viremia,
onde atinge e infecta o sistema nervoso central.
As leses neurolgicas incluem gliose, manguitos
perivascular e degenerao neuronal. O diagns-
tico realizado atravs do isolamento viral em
cultivo celular (primrio ou linhagem) de origem
suna e demonstrao do agente por imunouo-
rescncia. O diagnstico diferencial deve ser feito
de outras enfermidades que infectam o sistema
nervoso central, como peste suna africana, peste
suna clssica, raiva entre outras. O controle pode
ser realizado pelo do uso de vacina inativadas ou
atenuadas, alm de medidas de isolamento, qua-
rentena e desinfeco.
5.4 Enterovrus sunos tipos 2-11
Os enterovrus sunos constituem um grupo
de vrus (2-11) presentes em virtualmente todas as
criaes sunas. A sua identicao foi realizada
na dcada de 1960, na Europa Oriental. A grande
maioria das infeces possui apresentao subcl-
nica. Os enterovrus sunos so classicados no
gnero Enterovirus da famlia Picornaviridae, e as
propriedades estruturais so semelhantes s des-
critas para o restante da famlia. A alta resistncia
a variaes de pH (2-9) e tambm a temperaturas
abaixo de 15C favorece a sua permanncia por
longo tempo no meio ambiente. A transmisso
ocorre por contato direto ou indireto, entre ani-
mais ou de animais com dejetos contaminados.
Embora se acredite que a maioria das infeces
seja subclnica, em determinadas circunstncias
so observadas infeces clnicas. Nesses casos,
observam-se: doena entrica, respiratria, abor-
tos e outras falhas reprodutivas, alm de doena
neurolgica. Os enterovrus so facilmente isola-
dos e cultivados em clulas de cultivo primrias
Picornaviridae 559
ou de linhagem de origem suna, como as IBRS-2
e PK-15. O diagnstico somente deve ser buscado
quando existe a suspeita clnica. A conrmao
da presena do agente realizada pelo isolamen-
to em cultivo, seguido da deteco de antgenos
por imunouorescncia ou imunoperoxidase. A
sorologia e xao do complemento so mtodos
auxiliares na classicao em sorotipos e tambm
para demonstrar a ocorrncia da infeco. Medi-
das de preveno e controle devem ser tomadas
somente nos casos conrmados do envolvimento
do enterovrus na etiologia da enfermidade.
5.5 Enterovrus bovino
Um grande nmero de enterovrus tem sido
isolado do trato digestivo, respiratrio e repro-
dutivo de bovinos. Alguns isolados so associa-
dos com manifestaes clnicas, como diarria,
doena respiratria e abortos. No entanto, ten-
tativas de reproduzir essas manifestaes pela
inoculao experimental de animais tm, geral-
mente, resultado infrutferas. Isso diculta o es-
tabelecimento da patogenia e da real importncia
desses vrus. Sabe-se, porm, que so vrus am-
plamente difundidos na populao bovina, pois
um percentual altssimo de animais e rebanhos
possui sorologia positiva. Em alguns casos de do-
ena respiratria, as leses presentes podem ser
confundidas com a FMD. As propriedades bio-
lgicas dos enterovrus bovinos so as mesmas
descritas para outros membros no mesmo gne-
ro. Em razo da facilidade de replicao desses
vrus em clulas de cultivo, a grande maioria dos
isolados so achados acidentais ou isolados de
infeces subclnicas. A conrmao da identida-
de do agente pode ser realizada por ME ou por
tcnicas de deteco de antgenos. Neutralizao
com anti-soro especco tambm um mtodo de
identicao desse vrus, aps o seu isolamento
em cultivo celular.
5.6 Rinovrus eqino e bovino
Os rinovrus constituem um grupo de vrus
que infectam vrias espcies de mamferos, in-
cluindo humanos, eqinos e bovinos. Em bovinos
e eqinos, os rinovrus so considerados como pa-
tgenos menores, sem muita importncia clnica.
Existem dois rinovrus eqinos (EqRV), 1 e 2, que
foram inicialmente classicados de acordo com
a sua estabilidade ao pH. O rinovrus eqino 1
sensvel ao pH cido, caracterstica semelhante
ao FMDV, o que fez com que fosse classicado no
gnero Aphtovirus. Curiosamente, os sinais clni-
cos em eqinos lembram os sinais observados em
bovinos com FMD. Alm disso, alguns animais
podem apresentar comprometimento sistmico.
O rinovrus eqino tipo 2 resistente ao pH ci-
do, caracterstica semelhante aos enterovrus. No
entanto, o seqenciamento do genoma revelou
semelhana com os cardiovrus. At o presente,
o rinovrus eqino 2 no foi associado com mani-
festaes clnicas.
A infeco pelo rinovrus bovino (BoRV)
geralmente cursa de forma subclnica ou sinais
respiratrios leves. Esses vrus esto classicados
no gnero Rhinovirus e apresentam caractersticas
estruturais e biolgicas semelhantes aos outros
membros do gnero, incluindo a labilidade ao
pH baixo. Em infeces clnicas, os sinais clni-
cos apresentados so: febre, depresso, anorexia,
lacrimejamento, conjuntivite, descarga nasal e
diculdade respiratria, nos casos graves. Pelo
fato de os sinais clnicos serem discretos ou ines-
peccos, o diagnstico deve ser realizado pelo
isolamento do vrus em cultivo celular e deteco
dos antgenos por imunouorescncia.
5.7 Vrus da encefalomiocardite
O vrus da encefalomiocardite (EMCV) foi
identicado, em 1960, no Panam e, desde en-
to, tem sido descrito em vrios locais, como os
Estados Unidos, Europa, frica e alguns pases
da Amrica Central. A sua presena foi descrita
no Brasil em 1985. O EMCV pertence ao gnero
Cardiovirus, resistente a solventes orgnicos e
s variaes de pH, e possui atividade hemaglu-
tinante em eritrcitos de ratos, ovinos, cobaias e
eqinos. O ECMV considerado um vrus origi-
nalmente de roedores, porm capaz de infectar
uma variedade de outros mamferos, como chim-
panzs, macacos, elefantes, lees, esquilos, su-
nos, entre outros. Os roedores so considerados
os principais reservatrios do vrus, dos quais o
560 Captulo 21
vrus pode ser isolado, com freqncia, de fezes
e urina. Assim, os principais veculos de trans-
misso para sunos so o alimento e gua conta-
minados com fezes ou urina de roedores. Em su-
nos jovens, os sinais clnicos caracterizam-se por
anorexia, paralisia, dispnia e morte sbita devi-
do miocardite. Em animais recm-desmama-
dos, a mortalidade pode se aproximar de 100%.
Em animais jovens e adultos, as infeces so
geralmente subclnicas. Fmeas prenhes podem
apresentar problemas reprodutivos como aborto,
reabsoro, natimortalidade, mumicao fetal
e nascimento de animais prematuros. As leses
macro e microscpicas so auxiliares no diag-
nstico. O diagnstico do EMCV de animais que
morreram de miocardite ou em fmeas com pro-
blemas reprodutivos realizado pelo isolamento
viral em cultivo celulares ou em ovos embriona-
dos. A conrmao do agente realizada pela de-
teco de antgenos virais nas clulas de cultivo
por imunouorescncia. A presena de roedores
mortos na propriedade, sem causa aparente, se-
guida do isolamento viral a partir desses animais
pode conrmar o diagnstico. As medidas de
preveno e controle da enfermidade devem ser
direcionadas para o combate de roedores.
5.8 Vrus da encefalomielite das aves
O vrus da encefalomielite das aves (AEV)
produz a enfermidade conhecida como encefa-
lomielite das aves (AE), que acomete principal-
mente pintinhos com 1 a 4 semanas de idade. J
em aves com idade superior a 28 dias, as infec-
es so geralmente subclnicas. Perus, faises
e codornas so tambm susceptveis infeco,
que geralmente subclnica ou com manifesta-
es clnicas leves. Existe somente um sorotipo
do vrus, porm observada uma variao de vi-
rulncia entre os isolados de campo. A principal
forma de transmisso transovariana, e as mani-
festaes clnicas so observadas em pintos com
at quatro semanas de vida. A apresentao clni-
ca da AE caracteriza-se por ataxia, incordenao,
tremores da cabea e pescoo e morte. Em aves
adultas, os sinais so discretos, porm observa-se
queda na postura que pode chegar a 15%. Uma
alta morbidade e mortalidade so observadas
logo aps a introduo do vrus no avirio, e es-
ses ndices se reduzem com o estabelecimento
da infeco na criao. O diagnstico realizado
atravs do isolamento viral a partir de macera-
dos do crebro de pintos doentes. O isolamento
pode ser feito pela inoculao via intracerebral
em pintos de um dia, o que reproduz a enfermi-
dade neurolgica em at 28 dias. Outra forma de
isolamento viral a inoculao no saco da gema
de ovos embrionados de 5-7 dias de incubao.
Aps 12 dias, os embries so necropsiados e a
presena de atroa muscular da perna e morte
embrionria indicativa da presena do agente.
Pelo fato do AEV no produzir efeito citoptico
em clulas de cultivo, a tcnica de isolamento no
recomendada para o diagnstico. A deteco de
anticorpos atravs de SN ou ELISA podem au-
xiliar no diagnstico. O controle da enfermidade
realizado pela depopulao da granja ou pelo
uso de vacinas atenuadas ou inativadas.
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1 Introduo
2 Caractersticas comuns aos membros da famlia Flaviviridae
2.1 O vrion e o genoma
3 Caractersticas que diferenciam os membros da famlia Flaviviridae
4 Classicao
4.1 Gnero Flavivirus
4.1.1 Vrus da Louping ill
4.1.2 Vrus Wesselbron
4.1.3 Vrus da encefalite japonesa
4.1.4 Vrus do Nilo Ocidental
4.2 Gnero Pestivirus
4.2.1 Vrus da peste suna clssica
4.2.2 Vrus da diarria viral bovina
4.2.3 Vrus da doena da fronteira
4.3 Gnero Hepacivirus
565
565
565
566
567
568
568
570
571
571
572
576
579
582
589
589
590
22
1 Introduo
A famlia Flaviviridae abriga vrios vrus
de importncia em sade humana e animal. Os
membros dessa famlia possuem vrions peque-
nos, envelopados, que contm uma molcula de
RNA linear de polaridade positiva como genoma.
A famlia dividida em trs gneros: Flavivirus
(do latim avus amarelo), Pestivirus (do latim
pestis peste) e Hepacivirus (do grego heptos f-
gado). A famlia Flaviviridae foi estabelecida h
poucos anos e abriga vrios vrus anteriormen-
te classicados na famlia Togaviridae (avivrus
e pestivrus), alm dos hepacivrus, que foram
identicados posteriormente.
Os avivrus (denominao dos membros
do gnero Flavivirus) so transmitidos prima-
riamente por insetos. O prottipo desse gnero
(e da famlia) o vrus da febre amarela (YFV),
responsvel por doena severa em humanos em
regies tropicais/equatoriais. O YFV mantido
na natureza por meio de infeces alternadas em
mamferos silvestres e insetos e, ocasionalmente,
transmitido a humanos. Os vrus do Nilo Oci-
dental (WNV) e das encefalites japonesa (JEV) e
Saint Louis (SLEV) so tambm vrus zoonticos
de importncia em sanidade animal. O vrus da
dengue possui grande importncia como patge-
no humano. O gnero Pestivirus inclui o vrus da
peste suna clssica (CSFV), o vrus da diarria vi-
ral bovina (BVDV) e o vrus da doena da frontei-
ra (BDV), que infectam exclusivamente animais.
O vrus da hepatite C (HCV) um patgeno ex-
clusivamente de humanos, no transmitido por
insetos e se constitui no nico membro do gnero
Hepacivirus.
2 Caractersticas comuns aos
membros da famlia Flaviviridae
Os membros da famlia Flaviviridae apresen-
tam vrias caractersticas em comum, que servi-
ram de base para a sua classicao nessa famlia.
Essas caractersticas incluem a estrutura e morfo-
logia dos vrions, o tipo, estrutura e organizao
do genoma e os aspectos bsicos da expresso
gnica e replicao viral. Essas propriedades co-
muns, quando analisadas em conjunto, indicam
que esses vrus provavelmente derivam de um
ancestral comum.

2.1 O vrion e o genoma
Todos os membros da famlia possuem v-
rions esfricos (40-60 nm de dimetro) que con-
tm um nucleocapsdeo icosadrico revestido
externamente por um envelope derivado das
membranas da clula hospedeira (Figura 22.1).
Em algumas espcies, os vrions possuem um
formato esfrico, tendendo a hexagonal, pois o
envelope est intimamente associado ao nucle-
ocapsdeo. A presena do envelope torna esses
Figura 22.1. Morfologia e estrutura das partculas vricas da famlia . A) Foto de microscopia eletrnica de
vrions do vrus do Nilo Ocidental (WNV); B) Ilustrao esquemtica de uma partcula vrica com os seus
componentes.
Flaviviridae
B
Glicoprotena M
Glicoprotena E
Protenas do capsdeo
Membrana lipdica
Genoma RNA
A
Fonte: A) PHIL Library, CDC.
566 Captulo 22
vrus susceptveis inativao por solventes or-
gnicos e detergentes. O envelope contm duas
(avivrus e hepacivrus) ou trs (pestivrus) gli-
coprotenas virais inseridas.
O genoma consiste de uma ta simples de
RNA de polaridade positiva, com 9 a 12.3 kb. Esta
molcula de RNA apresenta duas regies no-
traduzidas (UTRs) prximas s extremidades
5 e 3 e possui uma nica fase aberta de leitura
(ORF) (Figura 22.2). Durante o ciclo replicativo,
no ocorre a produo de RNA mensageiros sub-
genmicos. As protenas estruturais so codica-
das no tero prximo extremidade 5; enquanto
os genes das protenas no-estruturais localizam-
se nos dois teros prximos extremidade 3. A
ORF traduzida em uma longa poliprotena, que
clivada em protenas individuais medida que
produzida. A estrutura e organizao genmica
comparada dos vrus pertencentes aos trs gne-
ros da famlia esto apresentados na Figura 22.2.
O esquema geral de replicao dos vrus
da famlia Flaviviridae est representado na Fi-
gura 22.3. A replicao do genoma e a produo
da prognie viral ocorrem inteiramente no cito-
plasma da clula hospedeira. A penetrao dos
vrions nas clulas ocorre por endocitose, aps
a interao entre protena(s) do envelope viral e
receptores da membrana plasmtica. Aps a aci-
dicao dos endossomos, ocorre a fuso do en-
velope com a membrana endossomal, o capsdeo
dissocia-se, e o genoma liberado no citoplasma.
O RNA genmico de polaridade positiva tradu-
zido em toda a sua extenso, originando uma po-
liprotena que clivada em protenas individuais
medida que sintetizada. A clivagem da po-
liprotena por proteases celulares e virais origi-
na as protenas estruturais e no-estruturais. As
protenas no-estruturais auxiliam no processo
C Pre-M E NS1 NS2A NS2B N 3 S N 4A S NS5 NS4B
5' UTR 3' UTR
Gnero Flavivirus
11 Kb, 5' UTR cap
Gnero Pestivirus
12,3 Kb, 5' UTR IRES
pro
N C
rns
E E1 E2
p7
NS2-3 NS4-A NS4-B NS5A NS5B
C E1 E2 NS2 N 3 S
NS4A NS4B NS5A NS5B
Gnero Hepacivirus
9,4 Kb, 5' UTR IRES
5' UTR 3' UTR
3' UTR 5' UTR
Protena estrutural imunodominante
Figura 22.2. Estruturae organizaogenmica comparada devrus dos trs gneros dafamlia . Flaviviridae
Flaviviridae 567
de clivagem desta poliprotena e atuam na repli-
cao do genoma. A replicao do genoma envol-
ve a sntese de uma molcula de RNA de sentido
antigenmico (polaridade negativa). Esse RNA
serve de molde para a sntese do RNAs de pola-
ridade positiva que serviro para mais etapas de
traduo e, posteriormente, sero encapsidados
como genoma da prognie viral. As protenas es-
truturais so utilizadas na montagem e constru-
o da prognie viral. A morfognese das novas
partculas virais ocorre na regio perinuclear do
citoplasma, em associao com as membranas do
complexo de Golgi e do retculo endoplasmtico
liso. As partculas recm-formadas aparecem em
vacolos no citoplasma e a sua liberao ocor-
re pela fuso dessas vesculas com a membrana
plasmtica. A ruptura da clula no parece ser
um pr-requisito para a liberao dos vrions. As
conseqncias da replicao viral para a siologia
e integridade das clulas variam de acordo com
o vrus e com a clula hospedeira, e vo desde in-
feces absolutamente inaparentes (avivrus em
clulas de mosquitos; BVDV no-citoptico em
clulas de mamferos) at lise e destruio celular
(avivrus em clulas de vertebrados; BVDV cito-
ptico em linhagens celulares de bovinos).
3 Caractersticas que diferenciam os
membros da famlia Flaviviridae
Os gneros da Flaviviridae diferem entre si
na extenso do genoma, em alguns detalhes da
estrutura e organizao genmica, no nmero e
funo de produtos gnicos e em alguns aspectos
biolgicos. Vrias dessas caractersticas so uti-
lizadas para a sua classicao em gneros e es-
pcies. As principais diferenas entre os gneros
esto apresentadas na Tabela 22.1. Os pestivrus
codicam duas protenas que no so encontra-
das nos outros gneros: a protena no-estrutu-
ral N
pro
, que codicada pelo primeiro gene da
ORF, e a glicoprotena E
rns
. A N
pro
uma protei-
nase cuja nica funo conhecida se autoclivar
da poliprotena logo aps a sua sntese; a E
rns
(ou
E0) uma glicoprotena associada ao envelope
viral e pode tambm ser secretada das clulas
infectadas. Alm disso, a E
rns
possui atividade ri-
bonuclease. Enquanto a maioria dos avivrus e
hepacivrus so inativados sob pH baixo, os pes-
tivrus podem ser diferenciados por resistirem
inativao por pH baixo e por apresentarem certa
estabilidade em uma ampla faixa de pH.
Protenas
no-estruturais
O vrion penetra na clula
e desnudo
Genoma RNA
cadeia positiva
Poliprotena
Protenas
estruturais
Prognie
viral
Prognie RNA
cadeia positiva
RNA
cadeia negativa
Clivagem
ps-traduo
Replicao
RNA
Traduo
Figura 22.3. Representaoesquemticadocicloreplicativodos vrus dafamlia . Flaviviridae
568 Captulo 22
4 Classicao
De acordo com propriedades biolgicas,
ecolgicas e moleculares, os membros da Flavi-
viridae so divididos em trs gneros: Flavivirus,
Pestivirus e Hepacivirus. A seguir, so descritas as
principais caractersticas dos vrus de cada gne-
ro.
4.1 Gnero Flavivirus
So utilizados sete critrios para a classica-
o das espcies neste gnero, que sero descritas
a seguir.
Homologia de seqncias de
nucleotdeos ou de aminocidos
As diferentes espcies de vrus classicados
no gnero Flavivirus so mais divergentes entre si
quando comparadas com a divergncia existente
entre os membros dos gneros Pestivirus e Hepa-
civirus. No entanto, as estruturas secundrias nas
regies UTRs 5 e 3 do RNA genmico so con-
servadas entre as espcies desse gnero. De acor-
do com essas caractersticas, os vrus do gnero
Flavivirus podem ser divididos em trs grupos
genmicos. Alguns desses vrus no apresentam
vetores artrpodes conhecidos:
Flavivrus transmitidos por carrapatos:
vrus Gadget Gully, Kyasanur Forest, Langat,
Louping Ill, febre hemorrgica Omsk, Powassan,
Royal Farm, Tick-borne encephalitis (TBEV), Sea-
bird tick-borne, Kadam, Meaban, Saumarez Reef
e vrus Tyuleniy;
Flavivrus transmitidos por mosquitos:
vrus Aroa, dengue, Kedougou, Cacipacore,
encefalite japonesa (JEV), Koutango, encefalite
Murray Valley (MVEV), Nilo Ocidental (WNV),
Yaounde, Kokobera, Ntaya, Bagaza, Ilhus, Isra-
el turkey, Tembuso, Zika, Banzi, Bouboui, Edhe
Hill, Jugra, Saboya, Sepid, Uganda, Wesselbron e
vrus da febre amarela (YFV);
Flavivrus sem vetor artrpode conheci-
do: vrus Entebbe dos morcegos, Yokose, Modoc,
Apoi, Cowbone Ridga, Sal Vieja, San Perlita, Rio
Bravo, Bukalasa dos morcegos, Carey Island,
Dakar Bat, Montana Myotis, Phnom Pehn Bat.
Caractersticas antignicas
Todos os vrus do gnero Flavivirus so an-
tigenicamente relacionados entre si. No entanto,
testes de neutralizao viral tm sido utilizados
para identicar sorogrupos entre os vrus alta-
mente relacionados. Com base na similaridade
antignica detectada nesses testes, a maioria dos
vrus do gnero tem sido classicada em um dos
oito sorogrupos: dois sem vetor conhecido (Mo-
doc e Rio Bravo); dois transmitidos por carrapa-
tos (TBEV e Tyuleniy) e quatro transmitidos por
mosquitos (Uganda S, dengue, Ntaya e JEV). No
entanto, alguns vrus, incluindo o prottipo da
famlia, o YFV, no se enquadram em nenhum
desses sorogrupos.
Origem geogrca
Enquanto os avivrus, como gnero, apre-
sentam uma ampla distribuio geogrca, as es-
Gnero
Vetores
artrpodes
Flavivirus
Genoma
Multiplicao
eficiente em
cultivo
Hospedeiros
Extenso 5' Humanos
Animais
domsticos
Animais
silvestres
Hepacivirus
11kb
9,6kb
5' cap
IRES
X
-
X
X
X
-
X
-
X
-
Tabela22.1. Caractersticas gerais dos trs gneros dafamliaFlaviviridae.
Pestivirus
12.5kb IRES X X
X
-
-
Flaviviridae 569
pcies virais so restritas a certas regies. O YFV
encontrado apenas em regies tropicais e sub-
tropicais da frica e da Amrica do Sul. O vrus
da dengue encontrado somente em reas tropi-
cais da sia, Oceania, frica, Austrlia, Amrica
do Sul e Amrica do Norte. O JEV restrito ao
sudoeste da sia, enquanto o TBEV encontrado
na Europa e Norte da sia. A distribuio geo-
grca de uma determinada espcie de vrus est
geralmente relacionada com a presena da esp-
cie de vetor envolvida na transmisso. A origem
geogrca pode ser utilizada como um dos crit-
rios para a classicao.
Vetores
A maioria dos avivrus (78%) mantida,
amplicada e disseminada mediante ciclos de
transmisso natural que requerem artrpodes
hamatfagos que transmitem o vrus para os
hospedeiros vertebrados (Figura 22.4). A necessi-
dade do vetor artrpode se d, basicamente, em
razo da inecincia de transmisso direta entre
os hospedeiros vertebrados. No h evidncia do
desenvolvimento de doena nos hospedeiros in-
vertebrados aps a infeco, sugerindo que a in-
terao do vrus com o inseto bem equilibrada.
Os vetores mais comumente utilizados pelos v-
rus do gnero Flavivirus so os mosquitos (50%),
seguidos pelos carrapatos (28%).
Hospedeiros
O espectro de hospedeiros dos avivrus in-
clui uma variedade de espcies de vertebrados e
de artrpodes. Os artrpodes adquirem a infeco
ao ingerir o sangue de um vertebrado infectado e
so responsveis pela manuteno desses vrus
na natureza (Figura 22.4). Os ciclos de transmis-
so natural sero discutidos posteriormente, nas
caractersticas ecolgicas.
Apresentao clnica
Os avivrus variam amplamente no seu po-
tencial patognico. Mais de 50% produzem doen-
a clnica em humanos e muitos so patognicos
para diferentes espcies animais, como aves, su-
nos, eqinos, caninos, grouse (espcie de ave do
Hemisfrio Norte) e musaranhos. Os avivrus
patognicos podem ser divididos em trs catego-
rias maiores: aqueles que produzem infeco no
sistema nervoso central (SNC), acompanhada de
meningoencefalite (WNV e SLEV); os associados
com febre, artralgia e eritemas (dengue), e aque-
les associados com febre hemorrgica (YFV).
Caractersticas ecolgicas
A maioria dos avivrus mantida na natu-
reza por meio da replicao alternada em hospe-
Vertebrado silvestre
Mosquito ou carrapato
Pode no ocorrer ou
insignificante para a disseminao
Vertebrado humano
ou animal domstico
Figura 22.4. Ciclo de transmisso natural dos flavivrus. O vrus mantido em ciclos alternados em aves, mamferos
silvestres e mosquitos e apenas ocasionalmente transmitidopara ohomemoupara animais domsticos.
570 Captulo 22
deiros invertebrados (artrpodes hematfagos) e
em vertebrados (Figura 22.4). Como descrito an-
teriormente, os vetores invertebrados se infectam
ao ingerir o sangue de um vertebrado infectado.
O vrus replica nos tecidos do vetor e, aps al-
guns dias, pode ser transmitido a outro hospedei-
ro vertebrado pela picada do inseto que inocula
o agente juntamente com a saliva. Os principais
hospedeiros vertebrados, para a maioria dos a-
vivrus, so diferentes espcies de pssaros ou de
mamferos silvestres. A infeco de humanos ou
de animais domsticos tipicamente incidental e
no necessria para a manuteno do vrus na
natureza. No entanto, esporadicamente, pode-se
observar transmisso do agente entre humanos e
entre animais domsticos. A exceo o vrus da
dengue, que mantido em populaes humanas
pela transmisso por mosquitos.
Nos demais avivrus, os nveis de viremia,
durante a infeco aguda em mamferos domsti-
cos, so geralmente baixos. No entanto, estes po-
dem representar uma fonte potencial de infeco
para os humanos. Por exemplo, vacas, cabras e
ovelhas podem excretar o vrus pelo leite e este
ser um veculo para a infeco de humanos.
A epidemiologia dos avivrus diferen-
te entre os diferentes gneros e mesmo entre os
membros de um mesmo gnero, e bastante
complexa em alguns vrus. Ou seja, vrios fatores
precisam estar presentes para que ocorra a infec-
o em um indivduo ou em um rebanho. Alguns
avivrus dependem de diferentes espcies de
hospedeiros vertebrados e invertebrados. Para
outros, o ciclo de transmisso permanece no es-
clarecido. Enquanto muitos requerem artrpodes
como vetores, 12% das espcies de avivrus co-
nhecidas so agentes com potencial zoontico e
so transmitidas entre roedores e morcegos e no
se tem conhecimento de nenhum vetor artrpo-
de.
Os avivrus replicam in vitro em uma va-
riedade de clulas de mamferos, de aves e de
insetos. A replicao em clulas de vertebrados
, geralmente, acompanhada de citopatologia se-
vera e lise celular, embora alguns tipos celulares
possam apresentar uma infeco persistente. Ao
contrrio, a infeco de clulas de mosquitos
geralmente no-citoptica e infeces persisten-
tes so facilmente estabelecidas. A induo de
citopatologia em algumas dessas clulas uma
exceo. A infeco dos vetores artrpodes ge-
ralmente crnica e os insetos permanecem infec-
tados por toda a vida.
Flavivrus de importncia veterinria
Historicamente, os vrus Louping ill, Wes-
selbron (WBV) e da encefalite japonesa (JEV)
so considerados os mais importantes dentro do
gnero Flavivirus do ponto de vista da medicina
veterinria. Mais recentemente, o WNV tem ex-
pandido a sua distribuio geogrca e tem sido
associado com um nmero expressivo de casos
em vertebrados. A Tabela 22.2 apresenta as prin-
cipais caractersticas dos avivrus de importn-
cia veterinria.
4.1.1 Vrus da Louping ill
O vrus da Louping ill causa uma encefalo-
mielite que foi observada inicialmente em ovi-
nos. Ocorre mais freqentemente no vero e no
inverno e a sua denominao se d pelo andar
saltitante dos animais infectados. Embora origi-
nalmente isolado na Esccia e na Inglaterra, o v-
rus encontra-se amplamente distribudo no con-
tinente europeu. O ciclo de transmisso envolve
o carrapato Ixodes ricinus como vetor. Este vrus
pode infectar vrias espcies de mamferos, in-
cluindo humanos, e os ovinos so os hospedeiros
principais.
Os animais infectados se tornam virmi-
cos e desenvolvem uma resposta febril bifsica.
O segundo pico febril ocorre juntamente com o
aparecimento dos sinais clnicos que incluem ata-
xia, hiperexcitabilidade, tremores e paralisia. As
ovelhas que desenvolvem sinais nervosos dicil-
mente sobrevivem. Nas demais espcies, o de-
senvolvimento dos sinais clnicos est geralmen-
te associado com a idade, com o status nutricional
e com a ocorrncia de infeces secundrias.
A conrmao do diagnstico pode ser feita
pelo isolamento viral a partir do SNC, por sorolo-
gia e pela histopatologia do encfalo. O isolamen-
to do vrus pode ser realizado em cultivo celular
ou pela inoculao intracerebral em camundon-
Flaviviridae 571
gos. O controle da enfermidade baseado na
imunizao dos cordeiros, tratamento de ovelhas
para evitar a infestao pelos carrapatos vetores
e controle ambiental para reduzir a populao de
carrapatos.
4.1.2 Vrus Wesselbron
O vrus Wesselbron (WBV) encontrado no
continente africano, transmitido pelos mosqui-
tos Aedes cavallus e Aedes ciculuteolus e apresenta
um amplo espectro de hospedeiros (Tabela 22.2).
A doena reprodutiva associada ao WBV pratica-
mente s ocorre em ovinos e caracterizada por
abortos e por morte neonatal. A infeco nas ove-
lhas geralmente subclnica. Fetos abortados po-
dem apresentar artrogripose, hidroencefalia, po-
rencefalia e hipoplasia cerebelar. Malformaes
congnitas raramente so observadas. Infeco
aguda fatal em cordeiros pode cursar com ano-
rexia, letargia, fraqueza, depresso nos ancos e
aumento da freqncia respiratria. A resposta
febril geralmente bifsica, com o segundo pico
febril de maior durao (3-6 dias). Os bovinos po-
dem ocasionalmente ser infectados e vacas pre-
nhes podem apresentar aborto ou parir bezerros
fracos e/ou inviveis.
O diagnstico pode ser realizado pelo isola-
mento viral e por testes de soroneutralizao (SN).
O isolamento viral realizado pela inoculao
intracerebral em camundongos lactentes. Como
medida de controle, uma vacina viva modicada
tem sido utilizada. No entanto, esta vacina no
recomendada para uso em animais prenhes e sua
eccia questionada. Por essas razes, as medi-
das de controle so basicamente direcionadas ao
controle dos mosquitos vetores.
4.1.3 Vrus da encefalite japonesa

O vrus da encefalite japonesa (JEV) utiliza
mosquitos como vetores para a sua transmisso
e encontra-se amplamente distribudo na sia,
com recente expanso para o norte da Austrlia.
O JEV antigenicamente relacionado com o SLEV
e com o WNV. A encefalite japonesa uma doen-
a de importncia primria em humanos, embora
o vrus possa acometer tambm eqinos e causar
Vrus Ocorrncia
Encefalite
japonesa (JEV)
Eqinos, suinos
Vetores Espcie afetada Apresentao clnica
Mosquitos
Encefalite, nascimento de
leites fracos e inviveis
sia
Louping ill
Principalmente ovinos,
mas tambm humanos,
bovinos, sunos,
eqinos, cervdeos e
cativos red grouse
Carrapatos Encefalite Esccia, Irlanda do Norte
Wesselsbron
(WBV)
Principalmente ovinos,
mas tambm humanos,
bovinos, caprinos,
sunos, eqinos, mulas,
camelos, cobaias,
coelhos, ces e aves
silvestres
Mosquitos
Abortos, hepatite,
hemorragias, malformaes
congnitas
frica
Nilo Ocidental
(WNV)
Principalmente pssaros,
mas tambm causa
doena importante em
humanos e eqinos.
Infecta + de 30 espcies
de invertebrados e + de
150 espcies de aves.
Mosquitos Encefalite, doena febril
frica, Europa, Estados
Unidos, Mxico, norte da
Amrica Central
Israel turkey
meningoencephalitis
Perus Mosquitos Encefalite Israel
Kunjin Eqinos Mosquitos Encefalite Austrlia
Murray Valley (MVEV) Eqinos Mosquitos Encefalite Austrlia
Tabela22.2. Vrus dognero associados comenfermidades deimportncia veterinria. Flavivirus
572 Captulo 22
aborto em sunos. O ciclo biolgico desse vrus
envolve mosquitos do gnero Culex, pssaros e
mamferos. Na epidemiologia, a espcie suna
pode funcionar como a principal espcie ampli-
cadora do vrus.
A infeco em eqinos produz enfermidade
com sinais clnicos moderados a fatais, depois de
8 a 10 dias aps a infeco. Os sinais neurolgicos
so similares aos descritos nas demais encefalites
e podem incluir: cegueira, ataxia, diculdade de
deglutio, andar irregular, incoordenao, an-
dar em crculos, estupor e coma. A infeco em
sunos adultos geralmente subclnica e o seu im-
pacto nessa espcie deve-se transmisso trans-
placentria, cuja patogenia muito semelhante
da infeco pelos parvovrus. As conseqncias
da infeco transplacentria incluem aborto, mu-
micao fetal, nascimento de leites com sinais
neurolgicos e nascimento de animais aparente-
mente saudveis.
4.1.4 Vrus do Nilo Ocidental
O vrus do Nilo Ocidental (West Nile vi-
rus, WNV) foi, inicialmente, identicado em
uma mulher com quadro febril em uma pro-
vncia da Uganda, frica, em 1937. A provncia
era denominada West Nile (Nilo Ocidental), da
a denominao da doena e do agente. Nas d-
cadas seguintes, o WNV foi reconhecido como
um dos arbovrus mais difundidos em pssaros,
mosquitos e humanos, com distribuio em algu-
mas regies da frica, no Oriente Mdio, Europa
Mediterrnea, ndia, em algumas regies da sia
e Austrlia. A grande maioria das infeces hu-
manas nessas regies, no entanto, era subclnica
ou acompanhada de sinais clnicos leves. Surtos
importantes em humanos ocorreram em Israel
(1951-1954, 1957) e na frica do Sul (1974).
Evidncias sorolgicas da infeco em eqi-
nos datam de 1956 (Egito) e 1960 (Israel), e os pri-
meiros relatos clnicos da doena nessa espcie
foram realizados no Egito, em 1963. Desde ento,
surtos de doena febril e neurolgica em eqinos
tm sido ocasionalmente descritos no Oriente
Mdio, norte da frica e em pases europeus me-
diterrneos. A partir da dcada de 1990, os relatos
de doena humana muitas vezes severa au-
mentaram, a infeco e a doena foram relatadas
em vrias espcies animais e em reas at ento
aparentemente livres do agente. Nas ltimas d-
cadas, epizootias da doena causada pelo WNV
em eqinos tm sido descritas em Marrocos (1996
e 2003), Itlia (1998), Israel (2000), Sul da Frana
(2000, 2003, 2004), alm de evidncia sorolgica
da circulao de vrus relacionados em vrios ou-
tros pases europeus, asiticos e da Oceania.
O marco histrico da doena do Nilo Oci-
dental foi a sua introduo em Nova Iorque, em
1999, quando causou mortalidade em pssaros
de vida livre e de zoolgicos e provocou doena
em 67 pessoas, provocando a morte de 21. A par-
tir da, o vrus se disseminou rapidamente por
praticamente todos os estados norte-americanos,
provocando infeco e doena em uma variedade
de pssaros silvestres, mamferos silvestres e do-
msticos (especialmente eqinos) e tambm em
humanos. At maio de 2007, a infeco foi relatada
em 24 mil pessoas (752 mortes) e causou doena
em mais de 25.000 eqinos (mortalidade aproxi-
mada de 35-40%). Esses nmeros provavelmente
ultrapassam em magnitude os nmeros at ento
relatados para a enfermidade, durante dcadas,
nas regies de origem. Concomitantemente com a
sua difuso na direo oeste nos EUA, a infeco
avanou na direo norte (Canad) e est avan-
ando na direo sul (Mxico, Amrica Central
e Caribe). Nos ltimos anos, evidncias sorolgi-
cas indicam a presena da infeco em eqinos e
muares na Colmbia (2004-2005), e o vrus j foi
identicado em casos de doena neurolgica em
eqinos na Argentina (2006).
A rpida e explosiva disseminao do WNV,
nos EUA, permitiu o conhecimento (ou o sur-
gimento) de padres epidemiolgicos at ento
ignorados, como a notvel amplitude de vetores
e hospedeiros vertebrados susceptveis ao vrus,
alm do reconhecimento de novas formas de
transmisso. At o presente, a infeco natural ou
experimental pelo WNV j foi demonstrada em
mais de 150 espcies de aves passeriformes ou
no e em vrias espcies de mamferos domsti-
cos e de vida livre, anfbios e rpteis, alm de hu-
manos. Dentre as espcies de interesse veterin-
rio, os eqinos apresentam importncia peculiar,
pois so muito susceptveis infeco natural e,
Flaviviridae 573
freqentemente, desenvolvem um quadro severo
de encefalite. No entanto, a infeco tambm tem
sido demonstrada em outros mamferos e aves de
criao.
4.1.4.1 O agente
O WNV pertence ao complexo antignico
do JEV e SLEV e apresenta reatividade sorol-
gica cruzada com vrios vrus desse complexo,
o que diculta o seu diagnstico por mtodos
imunolgicos. Os isolados do WNV podem ser
divididos em duas linhagens genticas: os vrus
da linhagem 1 circulam na Amrica do Norte
(desde 1999), Europa, sia e Austrlia; os vrus
da linhagem 2 tm sido isolados da frica subsa-
ariana e Madagascar. Os vrus da linhagem 1 po-
dem ser divididos em quatro cls, que possuem
distribuio geogrca e virulncia distintas; os
isolados norte-americanos pertencem ao cl B e
so altamente virulentos para camundongos, ao
contrrio da maioria dos outros vrus das duas
linhagens.
O WNV, introduzido nos Estados Unidos
em 1999, possui uma alta homologia de nucle-
otdeos (99,7%) com um vrus isolado de surtos
em Israel poucos anos antes, o que indica a sua
provvel origem. Esse vrus apresenta virulncia
para corvos americanos (Corvus brachyrynchos) e
para outras espcies de pssaros (pardais, pssa-
ros cantores), o que o distingue de outros WNV
que circulam na frica e Austrlia. Isolados ate-
nuados do WNV, provavelmente descendentes
do vrus original introduzido nos EUA, tm sido
identicados em aves em alguns estados norte-
americanos e na Amrica Central. provvel que
esta variao genotpica e fenotpica se constitua
em um reexo da adaptao gradativa do WNV
aos novos hospedeiros. Assim, diferenas geno-
tpicas e fenotpicas (virulncia, preferncia por
vetores, adaptao a novos hospedeiros) pos-
sivelmente sero identicadas em isolados do
WNV das Amricas nos prximos anos.

Um resumo da distribuio geogrca do
WNV, com base em relatos clnicos, virolgicos e
sorolgicos foi apresentada no incio desta seo.
A rpida expanso da infeco nas Amricas, so-
bretudo na direo oeste e sul, sugere que novos
casos clnicos ou evidncias sorolgicas prova-
velmente sero relatados nos prximos anos nas
Amricas Central e do Sul. As condies ecolgi-
cas nessas regies (clima, ora e fauna) so pro-
pcias para a introduo e manuteno do agente
em ambientes silvestres, com exposio ocasio-
nal de animais domsticos e humanos, como tem
ocorrido nos EUA.
A exemplo de outros avivrus, o WNV
transmitido primariamente por insetos hemat-
fagos sobretudo mosquitos , que adquirem o
vrus ao realizarem o repasto sangneo em aves
virmicas, consideradas os reservatrios naturais
do agente. Os insetos so capazes de transmitir
o agente aps um perodo de incubao intrn-
seco, no qual o vrus replica em seus tecidos. Os
principais vetores de transmisso do WNV so as
vrias espcies de mosquitos do gnero Culex sp.,
embora outros mosquitos possam tambm ter al-
guma participao na transmisso. Dentre as de-
zenas de espcies de Culex, existem diferenas na
ecincia de transmisso do agente. Nos Estados
Unidos, j foram identicadas aproximadamen-
te 60 espcies de Culex capazes de transmitir o
WNV, porm menos de 10 so consideradas im-
portantes na transmisso do vrus. Espcies de
Culex exclusivamente ornitoflicas transmitem o
vrus apenas entre aves. No entanto, algumas es-
pcies realizam repasto tanto em aves como em
mamferos, podendo transmitir o vrus de aves
virmicas para mamferos e humanos. J foi de-
monstrada a transmisso transovariana do vrus
nos insetos, assim como a sua presena em fme-
as hibernando. Isto pode explicar a permanncia
do agente aps o inverno em regies temperadas
ou frias.
Os hospedeiros naturais do WNV na natu-
reza so aves silvestres de diferentes espcies. A
infeco natural j foi demonstrada em mais de
150 espcies de aves silvestres e domsticas em
todo o mundo. As aves apresentam uma grande
variabilidade de susceptibilidade infeco e do-
ena pelo WNV e tambm apresentam potencial
distinto de transmisso. Assim, os corvdeos, pas-
seriformes (pssaros cantores, rabos-de-palha,
574 Captulo 22
pardais), chadriiformes (aves de banhados), co-
rujas e falconiformes desenvolvem nveis de vire-
mia sucientes para infectar uma grande parcela
dos mosquitos que realizam o repasto sangneo.
Pombos, pica-paus, gansos, marrecos e patos no
desenvolvem altos ttulos de vrus no sangue e,
assim, no infectam uma parcela signicativa
dos mosquitos. Corvdeos, gralhas e pardais so
altamente infecciosos para mosquitos e tambm
apresentam mortalidade de aproximadamente
40% quando infectados. Os chadriiformes (aves
pernaltas de regies alagadias) e anseriformes
(ganso domstico) so altamente susceptveis
infeco e enfermidade. Os psitacdeos e gali-
nceos so menos susceptveis. O papel de aves
migratrias na disseminao do WNV ainda
desconhecido, mas a rpida difuso do vrus nas
Amricas aponta para uma provvel participa-
o dessas aves.
Os nveis de viremia desenvolvidos por
eqinos e humanos alm de outros mamferos
no so sucientes para infectar ecientemente
os mosquitos e proporcionar a transmisso. As-
sim, estas espcies no participam da transmis-
so do agente atravs de vetores. Outras formas
de transmisso, pouco freqentes e de importn-
cia epidemiolgica questionvel, j foram descri-
tas. Algumas espcies de rs e rpteis (crocodilos
jovens), alm de hamsters, podem desenvolver
nveis de viremia compatveis com a transmisso
atravs de mosquitos, mas o seu papel na trans-
misso natural do vrus desconhecido.
O carter epidmico e o grande nmero de
pessoas infectadas nos EUA permitiram o reco-
nhecimento de novas formas de transmisso at
ento ignoradas. Assim, foi demonstrado que o
WNV pode ser transmitido de mes virmicas
para os fetos atravs da placenta e tambm para
os recm-nascidos, pelo colostro e leite. O vrus
pode ser transmitido por transfuso sangnea
e tambm por transplantes de rgos. Essas for-
mas provavelmente no possuem importncia
epidemiolgica em reas endmicas, mas devem
ser consideradas em situaes de epidemias. H
tambm relatos de infeco de tcnicos de labora-
trio que, acidentalmente, se inocularam o agen-
te durante a manipulao laboratorial.
Em animais, a transmisso do WNV sem
o envolvimento de mosquitos foi demonstra-
da em aves que ingeriram carcaas de pssaros
infectados; em crocodilos inadvertidamente ali-
mentados com carcaas de eqinos infectados; e
entre perus criados em condies intensivas, pro-
vavelmente atravs de aerossis. A transmisso
por contato direto ou indireto com secrees e
excrees de aves virmicas foi demonstrada ex-
perimentalmente (entre aves e entre crocodilos) e
pode ocorrer sob determinadas condies na na-
tureza. Apesar dessas outras formas j terem sido
demonstradas, a transmisso por mosquitos a
mais importante e a principal responsvel pela
circulao do vrus na natureza.
e patologia
Vrias espcies de aves e mamferos so
susceptveis infeco natural pelo WNV, e a
susceptibilidade de outras diversas espcies foi
demonstrada experimentalmente. Dentre as es-
pcies infectadas naturalmente que desenvolve-
ram a doena, podem ser citados crocodilos, al-
pacas, ces, ovinos cervdeos e lobos. Sorologia
positiva em nveis variveis tem sido detectada
em ursos, candeos silvestres, coelhos silvestres,
lmures, camelos e primatas no-humanos cati-
vos, entre outros. De particular interesse foi um
surto ocorrido em uma criao comercial de,
aproximadamente, 10.000 crocodilos, dos quais
1.250 morreram aps um curso clnico com sinais
neurolgicos. A infeco foi provavelmente in-
troduzida na criao em carcaas de eqinos uti-
lizadas para alimentar os crocodilos. Em ovinos,
alpacas, ces e lobos, a enfermidade neurolgica
tambm foi esporadicamente relatada. Vrias ou-
tras espcies foram infectadas experimentalmen-
te com sucesso, o que estende consideravelmente
o espectro de possveis hospedeiros do WNV.
Esta seo se concentrar na descrio da
enfermidade em eqinos, aves e humanos, nos
quais a infeco possui maior repercusso sanit-
ria e epidemiolgica.
a) Eqinos: os eqinos so particularmen-
te susceptveis infeco pelo WNV e freqen-
temente desenvolvem uma enfermidade aguda
com comprometimento neurolgico. Apesar de
Flaviviridae 575
sua alta susceptibilidade, os eqinos no produ-
zem nveis de viremia sucientes para infectar in-
setos e, assim, servir de amplicadores do vrus.
Ou seja, os eqinos infectados no disseminam o
vrus atravs de insetos hematfagos. Evidncias
sorolgicas indicam que a maioria das infeces
em eqinos assintomtica ou leve, passando
despercebida por criadores e tratadores. Acre-
dita-se que apenas 15-20% das infeces resulte
em manifestaes clnicas, aps um perodo de
incubao de 3 a 14 dias. Aps a replicao inicial
nas proximidades do stio de inoculao, o vrus
alcana os linfonodos regionais e, subseqente-
mente, o sangue, atravs do qual invade o SNC
aps atravessar a barreira hematoenceflica. No
SNC, o vrus infecta e destri neurnios e tam-
bm outras clulas, o que contribui para a sinto-
matologia neurolgica. A maioria das infeces
no-fatais seguida da erradicao do vrus do
organismo pelo sistema imunolgico.
Os sinais clnicos variam entre os surtos e
entre os animais afetados. Os sinais mais comu-
mente relatados so: anorexia, fraqueza, depres-
so, incoordenao, ataxia e decbito. Hiperter-
mia nem sempre est presente. Bruxismo, andar
em crculos, hiperexcitabilidade, pressionamento
da cabea contra anteparos e convulses tambm
tm sido relatados. As taxas de letalidade em
eqinos variam entre 25 e 45%. No surto ocorrido
nos EUA, em torno de 1/3 dos animais morreu
ou foi sacricado devido sua extrema condio.
Animais que sobrevivem 2-3 semanas aps o apa-
recimento dos sinais geralmente se recuperam;
b) Aves: a infeco pelo WNV j foi de-
tectada em mais de 150 espcies de aves doms-
ticas e silvestres. A susceptibilidade das aves
infeco varia amplamente de acordo com a es-
pcie. Dentre as espcies domsticas, os gansos
so os mais susceptveis e, freqentemente, de-
senvolvem doena neurolgica quando infecta-
dos. Taxas de mortalidade de 25 a 40% tm sido
relatadas em infeces naturais, e de at 75% em
infeces experimentais. Por outro lado, galin-
ceos e psitacdeos esto entre as espcies menos
susceptveis infeco. Dentre as espcies silves-
tres, os passeriformes (pssaros de vrias esp-
cies, entre os quais os pardais, rabos-de-palha,
pssaros cantores), corvdeos e charadriiformes
(aves pernaltas de banhados) so as mais suscep-
tveis. Essas espcies desenvolvem altos nveis
de viremia e excretam grandes quantidades de
vrus. Nas aves que desenvolvem a doena, os
sinais caractersticos incluem depresso, letar-
gia, penas arrepiadas, alm de sinais neurolgi-
cos como: ataxia, paralisia, movimentos de pe-
dalagem, torcicolo, opisttono e incoordenao.
A morte geralmente sobrevm em menos de 24
horas. As taxas de mortalidade so geralmente
elevadas. Em pardais e corvdeos, mais de 50%
dos animais que manifestam sinais clnicos vo a
bito. Alm da espcie, fatores como a idade das
aves e a cepa viral inuenciam nas conseqncias
clnico-patolgicas da infeco. Acredita-se que a
infeco seja subclnica ou leve em grande parte
das espcies de aves infectadas naturalmente;
c) Humanos: a exemplo dos eqinos, apro-
ximadamente 80% das infeces humanas pelo
WNV so subclnicas. Dentre os pacientes que
desenvolvem a doena, a grande maioria apre-
senta uma doena aguda autolimitante, carac-
terizada por hipertermia, cefalia, fadiga, dores
musculares e fraqueza. Algumas pessoas apre-
sentam sinais gastrintestinais, pequenas manchas
avermelhadas na pele e eritemas. Rigidez e dor
no pescoo, diculdade de concentrao tambm
tm sido relatados e podem perdurar por sema-
nas e at meses. A doena neuroinvasiva (me-
ningite, encefalite) ocorre em menos de 1% das
pessoas infectadas, e mais comum em idosos e
em pessoas imunocomprometidas. A severidade
da doena neurolgica varia desde desorienta-
o leve at coma e morte. No surto ocorrido nos
EUA, 9% das pessoas que apresentaram doena
neuroinvasiva foram a bito. Aproximadamente
10% dos pacientes que apresentam doena neuro-
lgica desenvolvem paralisia cida, semelhante
da poliomielite.

4.1.4.4 Diagnstico
Para o diagnstico, amostras do encfalo de-
vem ser utilizadas na tentativa de isolamento vi-
ral. Em aves, podem-se utilizar amostras de rim,
corao, crebro e intestino. O isolamento viral
pode ser realizado em clulas Vero ou em clu-
las de rim de coelho (RK-13). Aps a produo
576 Captulo 22
de efeito citoptico (ECP), a identidade do agente
pode ser conrmada por IFA ou IPX, ou, ainda,
por neutralizao com anti-soro especco. Para
a deteco de cidos nuclicos virais em tecidos,
pode-se utilizar a tcnica de RT-PCR; e o teste de
imunoistoqumica para deteco de antgenos.
Anticorpos podem ser detectados no soro de
eqinos atravs do teste ELISA, de HI e testes de
reduo de placa (PRA). Os mtodos de HI e PRA
so os mais utilizados para deteco de anticor-
pos no soro de aves. Em alguns testes sorolgi-
cos, pode ocorrer reao cruzada com avivrus
relacionados, como SLEV e JEV.
Em eqinos, o diagnstico diferencial deve
considerar outras enfermidades que cursam com
depresso e sinais neurolgicos, como as encefa-
lites do leste, oeste e venezuelana, raiva e tripa-
nosomase.

A vacinao sistemtica o meio mais efeti-
vo de proteger eqinos da infeco e doena em
reas endmicas. Nos EUA, j existem algumas
vacinas licenciadas para uso em eqinos, po-
rm ainda no existem vacinas comerciais para
humanos ou aves. O aumento da importncia
da enfermidade, a partir de sua introduo e
disseminao na Amrica do Norte, resultou na
intensicao na pesquisa e desenvolvimento de
vacinas para proteger animais domsticos es-
pecialmente eqinos e gansos e tambm huma-
nos. Alm de proteger espcies economicamente
importantes da doena, a vacinao deve reduzir
os nveis de viremia e, assim, reduzir tambm as
oportunidades de transmisso por vetores.
At 2007, vacinas convencionais inativadas,
atenuadas e recombinantes haviam sido desen-
volvidas e testadas em eqinos. Dessas, quatro j
foram disponibilizadas comercialmente nos EUA.
Em geral, as vacinas testadas conferem boa pro-
teo contra doena clnica e tambm reduzem
os nveis de viremia. A vacina mais promissora,
no entanto, j disponvel no comrcio dos EUA e
em outros pases, uma vacina recombinante, na
qual os genes que codicam as protenas de enve-
lope do WNV foram introduzidas no genoma do
poxvrus do canrio, que , ento, utilizado para
imunizar os animais. Em estudos experimentais,
essa vacina foi capaz de proteger de viremia 100%
dos eqinos desaados 30 dias aps a vacinao
e 90% daqueles desaados um ano aps a imu-
nizao, sendo que nenhum animal desenvolveu
sinais clnicos. Vacinas de DNA e tambm vaci-
nas vivas recombinantes, utilizando a cepa vaci-
nal 17D do vrus da febre amarela (YFV) como
vetor, tm sido desenvolvidas e testadas em ani-
mais de laboratrio. Vacinas para uso humano e
em aves domsticas de importncia econmica
tambm esto em desenvolvimento e podem ser
licenciadas nos prximos anos.
Alm da vacinao, medidas de combate
aos vetores e que visem minimizar a exposio
de pessoas e animais aos insetos tm sido reco-
mendadas em reas endmicas. Alm dessas me-
didas, o uso de inseticidas, larvicidas, repelentes
(para uso em eqinos) e dispositivos para reduzir
o acesso dos vetores, e de telas de proteo para
evitar o acesso de aves a instalaes animais tem
sido preconizado. Locais propcios para a repro-
duo de mosquitos (depsitos de gua) devem
ser investigados e combatidos. Lmpadas que
no atraem insetos devem ser preferencialmen-
te utilizadas em estbulos, alm do uso de telas
nas aberturas. Deve-se tambm evitar o contato
de quaisquer tipos de aves sejam domsticas
ou silvestres com os eqinos. Essas medidas re-
duzem a probabilidade de contato dos animais
domsticos com os vetores, mas no eliminam
totalmente o risco de transmisso.
Em reas livres que apresentem o risco de
introduo do agente, o monitoramento sorolgi-
co de aves silvestres e tambm de eqinos pode
ser til para detectar, de forma precoce, a even-
tual introduo da infeco e, assim, desencadear
a tomada de medidas pertinentes. Para isso, um
sistema gil de coleta de amostras e de testes la-
boratoriais se faz necessrio.

4.2 Gnero Pestivirus
As espcies reconhecidas e em fase de reco-
nhecimento que pertencem ao gnero Pestivirus
esto descritas no Tabela 22.3. O vrus da peste
suna clssica (CSFV) e o vrus da diarria viral
bovina (BVDV) so importantes patgenos de su-
Flaviviridae 577
nos e bovinos, respectivamente, e esto presen-
tes em todos os continentes. O vrus da doena
da fronteira de ovinos (BDV) possui importncia
limitada. Outros pestivrus recentemente identi-
cados aguardam classicao denitiva (Tabela
22.3).
dos. Este critrio de classicao complicado,
pois alguns pestivrus no so restritos a um ni-
co hospedeiro. O BVDV, por exemplo, capaz de
infectar bovinos, ovinos e tambm sunos;
b) caractersticas antignicas e reatividade
sorolgica cruzada: todos os pestivrus so anti-
genicamente relacionados. No entanto, os ttulos
de anticorpos neutralizantes no soro de animais
previamente expostos so geralmente mdios
a altos frente espcie homloga e baixos (ou
mesmo no reativos) frente s demais espcies;
ou seja, a reatividade sorolgica cruzada entre as
espcies de pestivrus baixa e pode ser bastan-
te varivel tambm entre diferentes isolados de
uma mesma espcie viral. Anticorpos monoclo-
nais (AcMs) podem ser utilizados para diferen-
ciar as espcies de pestivrus;
c) homologia entre as seqncias de nucle-
otdeos: a comparao entre as seqncias de
nucleotdeos o critrio mais seguro para dife-
renciar as espcies de pestivrus. A regio 5UTR
a mais comumente utilizada para a deteco e
caracterizao de variaes no genoma, uma vez
que apresenta segmentos altamente conservados,
o que facilita a amplicao por PCR. No entanto,
como a regio da N
pro
nica dos pestivrus, ela
se constitui na regio de eleio para a compara-
o e caracterizao inicial de isolados. A anlise
logentica das seqncias que codicam a N
pro
revelou sete grupos genticos principais dentro
do gnero Pestivirus (Figura 22.5). Quatro desses
ramos correspondem s quatro espcies conhe-
cidas: BVDV-1, BVDV-2, BDV e CSFV. Os trs
ramos restantes correspondem a um pestivrus
isolado de girafa, de um isolado de antlope e um
ramo composto por trs vrus, sendo um isolado
brasileiro de soro fetal bovino, um isolado conta-
minante de cultivo celular e outro isolado brasi-
leiro de bfalo.
Alm do gentipo, as cepas de pestivrus
podem ser agregadas em subgentipos. Dois sub-
gentipos dentro do BVDV-1 (BVDV-1a e BVDV-
1b) e do BVDV-2 (BVDV-2a e BVDV-2b) tm sido
descritos nas Amricas do Norte e do Sul. Uma
diversidade maior observada entre as cepas eu-
ropias nos sete diferentes subgentipos reporta-
dos. A importncia prtica da existncia desses
subgentipos ainda precisa ser esclarecida.
Apenas trs dos critrios utilizados para di-
ferenciar espcies do gnero Flavivirus so utili-
zados para diferenciar os pestivrus: hospedeiro
de origem, reatividade sorolgica e homologia de
nucleotdeos do genoma. Os critrios ecolgicos,
espcie e distribuio geogrca dos vetores no
so utilizados, pois esses vrus no so transmiti-
dos por insetos. O critrio da apresentao clnica
no utilizado, pois variaes das cepas dentro
das espcies podem afetar a apresentao clnica
(p. ex.: existem cepas de alta e baixa virulncia do
CSFV). Alm disso, a infeco por diferentes es-
pcies de pestivrus pode determinar quadros cl-
nicos semelhantes (p. ex.: malformaes congni-
tas em ovinos podem ocorrer tanto pela infeco
transplacentria pelo BDV como pelo BVDV).
Assim, a classicao das espcies dos pesti-
vrus utiliza trs critrios:
a) hospedeiro de origem: o critrio mais
problemtico a ser estabelecido e pode no se
constituir em um indicador denitivo para a di-
ferenciao. Os pestivrus foram originalmente
classicados como BVDV, CSFV e BDV, basea-
dos na espcie hospedeira da qual foram isola-
Espcie Hospedeiro
Vrus da peste
suna clssica
Abreviatura
CSFV Sunos, ovinos?
Vrus da diarria
viral bovina tipo 1
BVDV- 1
Ruminantes domsticos
e silvestres, sunos
bovina tipo 2
BVDV- 2
Ruminantes domsticos
e silvestres, sunos
Espcies virais provisrias
Vrus Giraffe Girafas
Vrus HoBi Bovinos?
Vrus Pronghorn Antlope Pronghorn
Vrus da doena da
fronteira dos ovinos
BDV
Ovinos, caprinos,
cervdeos, sunos?
Tabela 22.3. Espcies de vrus classificadas no gnero
. Pestivirus
578 Captulo 22
A infeco pelos pestivrus, em geral, pode
resultar tanto em infeces agudas como em in-
feces persistentes. A infeco persistente re-
sultante da habilidade desses vrus em atravessar
a placenta e estabelecer infeco e imunotolern-
cia no feto. A infeco transplacentria, segui-
da do nascimento de animais persistentemente
infectados (PI), pode ocorrer nas infeces por
qualquer dos pestivrus. No entanto, os animais
PI do BVDV parecem desempenhar um papel
mais importante na epidemiologia da infeco e
so considerados os mantenedores desse vrus na
natureza.
Biotipos dos pestivrus
Embora no sejam utilizados para diferen-
ciar as espcies, dois biotipos existem entre os
pestivrus: os vrus citopticos (cp) e os no-ci-
topticos (ncp). Os vrus ncp constituem-se na
maioria dos isolados de campo e so capazes de
produzir infeces persistentes em fetos. Os vrus
cp se originam dos ncp por mutaes e rearran-
jamentos genticos. Embora as diferenas nos bi-
tipos tenham sido inicialmente observadas em
laboratrio, posteriormente tambm foi demons-
trada a sua importncia prtica. Cepas de BVDV
ncp podem estabelecer infeces persistentes em
fetos infectados entre os dias 40 e 120 de gestao.
Esses animais nascem PI e, se forem superinfec-
tados com uma amostra de BVDV cp antigenica-
mente semelhante, podem desenvolver a doena
das mucosas (DM), que uma forma altamente
fatal da infeco.
Isolado de
ovino
Cepas de
CSFV
tpicas
Girafa
Cepas tpicas
de BDV
Ovelha Chamois
Reindeer
HoBi
Ramo do BVDV-2
Ramo do BVDV-1
Antlope
Pronghorn
Ramo do CSFV
Ramo do BDV
Figura 22.5. Agrupamento filogentico de isolados de pestivrus com base na homologia de nucleotdeos do gene da
protena N .
pro
Flaviviridae 579
4.2.1 Vrus da peste suna clssica
O vrus da peste suna clssica (CSFV) um
patgeno importante de sudeos e causa doena
severa tanto em sunos domsticos como silves-
tres. Com exceo de alguns pases de onde foi
erradicada, a enfermidade possui ampla distri-
buio e, aproximadamente, 70 pases repor-
taram a ocorrncia de surtos entre 1994 e 2005.
A CSF uma doena altamente contagiosa e de
difcil combate em reas de alta concentrao de
criaes comerciais ou com populao numero-
sa de sudeos silvestres. Por isso considerada
uma doena estratgica do ponto de vista sanit-
rio pela Organizao Internacional de Epizootias
(OIE).
Os pestivrus so antigenicamente relacio-
nados e um soro policlonal reage contra todos
os membros do gnero, mas no com membros
de outros gneros da Flaviviridae. No entanto, o
uso de MAbs especcos para a E2 e E
rns
permitiu
a identicao de at 21 subtipos antignicos do
CSFV at o presente.
Isolados antigenicamente distintos so en-
contrados em regies diferentes em pocas diver-
sas. Por outro lado, o vrus apresenta uma taxa
de mutao relativamente baixa e os isolados
obtidos de surtos subseqentes em uma mesma
regio so muito semelhantes entre si. Por isso,
a anlise logentica de isolados de campo tem
sido muito utilizada como suporte em estudos
epidemiolgicos e na identicao da origem de
isolados envolvidos em novos surtos. A anlise
logentica de CSFV isolados de diferentes con-
tinentes permitiu a identicao de trs grupos
genticos e de vrios subgrupos dentro de cada
grupo. Os isolados do grupo 3 ocorrem apenas na
sia; todos os vrus isolados na dcada de 1990
em pases europeus pertencem ao grupo 2 e so
diferentes das cepas de referncia. Os isolados do
grupo 1 parecem circular predominantemente na
Rssia, embora j tenham sido identicados tam-
bm em Cuba.

Afora os pases que j erradicaram o CSFV e
aqueles que esto em vias de erradicao, o vrus
possui distribuio mundial. A CSF endmica
em grande parte da sia. Na frica, os dados so
escassos, mas a doena j foi relatada em Mada-
gascar. O vrus foi erradicado dos EUA, Canad,
Nova Zelndia e Austrlia. Os pases escandina-
vos j o erradicaram de suas criaes comerciais,
mas a existncia de uma numerosa populao de
sudeos silvestres tem dicultado a erradicao
denitiva daquele continente. Nesses pases, a
vacinao foi banida a partir da dcada de 1990,
mas o vrus tem sido esporadicamente reintrodu-
zido a partir de outros pases ou da populao
de sudeos silvestres. Pases da Europa Central
e Oriental tm seguido a orientao de controle
sem vacinao, mas a infeco tem sido ocasio-
nalmente detectada, principalmente nos pases
menos desenvolvidos.
A infeco pelo CSFV tem permanecido
endmica em vrios pases da Amrica Central
e do Sul, embora a vacinao sistemtica tenha
reduzido drasticamente a sua ocorrncia nas l-
timas dcadas. Surtos tm ocorrido nos ltimos
anos em pases do Caribe (Cuba e Repblica Do-
minicana). O Mxico segue com relativo suces-
so com um programa de erradicao, apesar de
alguns tropeos peridicos. No Brasil, a infeco
era endmica em vrias regies at a dcada de
1980. Programas ociais de controle/erradica-
o que envolveram o uso macio da vacina viva
modicada (cepa chinesa), obtiveram sucesso e
reduziram drasticamente a ocorrncia da doen-
a. Atualmente, a infeco est em vias de erradi-
cao, e o pas pode ser dividido em duas reas
epidemiologicamente distintas: a) uma rea livre
da doena e que concentra mais de 80% do reba-
nho nacional e as principais granjas e indstrias
suincolas (regies Sul, Sudeste, Centro-Oeste e
parte da regio Nordeste); e b) uma regio onde
ainda ocorrem focos isolados da doena, porm
com baixa densidade suna e sem expresso co-
mercial/industrial (parte da regio Nordeste e
regio Norte). Entre 2002 e 2005, foram registra-
dos aproximadamente seis focos nessas reas.
Em fevereiro de 2006, foi noticado um foco da
enfermidade em uma criao no-comercial da
Paraba. Focos recentes de peste suna clssica fo-
ram relatados na frica do Sul (2005), Alemanha
(2006), Brasil (2006), Bolvia (2006), Guatemala
580 Captulo 22
(2006), Crocia (2006), Equador (2007), Nicar-
gua (2007) e Rssia (2007). Em todos esses casos,
a infeco cou restrita a uma ou poucas proprie-
dades e foi aparentemente controlada por aes
imediatas de combate.
O conhecimento da real situao da enfer-
midade em muitos pases dicultado pela falta
de programas ociais efetivos de vigilncia, pela
existncia de presses poltico-econmicas, que
evitam a divulgao de dados, e pelo possvel
efeito da vacinao em mascarar a circulao do
agente e a ocorrncia da doena. Por essas razes,
acredita-se que a incidncia real da doena supe-
re, em muito, os relatos ociais.
A infeco pelo CSFV ocorre principalmen-
te por via oronasal, embora os animais possam
tambm se infectar atravs de outras superfcies
mucosas, da conjuntiva ou de abrases da pele.
Embora a aerossolizao seja mnima a partir das
excrees e secrees dos animais infectados, o
vrus pode sobreviver em fmites e em ambien-
tes contaminados por at duas semanas. Alm
da transmisso direta e indireta entre animais,
produtos sunos frescos, congelados ou curtidos
podem manter o vrus vivel e servir de veculos
para a infeco pela via oral. Nesse sentido, a im-
portao de produtos sunos contaminados tem
sido responsabilizada pela introduo do agente
em reas livres. A transmisso indireta atravs de
pessoas, de animais silvestres e de fmites pode
ocorrer, embora o modo exato como o vrus se
dissemina entre criaes ainda no seja conheci-
do.

A severidade e caractersticas da doena
dependem da cepa e dose do vrus, da idade do
animal e do status reprodutivo. O perodo de in-
cubao varivel, mas geralmente varia entre 2
e 14 dias. As tonsilas se constituem nos rgos de
predileo aps a exposio pela via oronasal. A
partir das tonsilas, o vrus drenado para os lin-
fonodos regionais e da para outros tecidos linfi-
des, como a medula ssea e acmulos linfides
do trato digestivo (placas de Peyer). A replicao
do CSFV nos tecidos linfides permite que o v-
rus atinja a circulao sangnea e altos ttulos vi-
rais podem ser detectados no sangue perifrico.
Apenas tardiamente aps a infeco que o vrus
invade o fgado, o pncreas e os rins. O intervalo
de tempo entre a infeco das tonsilas e o apa-
recimento do vrus em rgos parenquimatosos
depende da virulncia da cepa viral. Cepas al-
tamente virulentas podem ser detectadas nesses
rgos j aos seis dias aps a infeco. Tanto em
infeces subclnicas como em infeces clnicas,
hemorragias mltiplas podem ser observadas.
Essas hemorragias so mais freqentemente de-
tectadas nos linfonodos e nos rins, mas tambm
podem ser observadas na bexiga, na pele, no cora-
o, na laringe e na mucosa intestinal. A freqn-
cia e a extenso das hemorragias esto associadas
com a virulncia da cepa viral e com a destruio
de clulas endoteliais dos capilares sangneos,
com a trombocitopenia e com sntese anormal de
brinognio.
Em rebanhos de cria infectados com cepas
de baixa virulncia, ndices reprodutivos baixos
podem ser o nico sinal. Inversamente, a infec-
o com cepas altamente virulentas pode deter-
minar taxas de mortalidade prximas a 100%. Os
sinais clnicos iniciais resultantes da infeco por
cepas de alta virulncia incluem febre alta, fra-
queza, anorexia e constipao seguida por diar-
ria. Um dos primeiros sinais da infeco clnica
conjuntivite com descarga ocular difusa. Vrios
dias depois, aparecem manchas avermelhadas no
abdome e as orelhas podem apresentar colorao
prpura.
A recuperao dos animais infectados com
cepas de alta virulncia difcil, e estes geralmen-
te morrem uma a duas semanas aps a infeco.
Convulses podem ser observadas na fase nal
da doena. Embora os sinais clnicos geralmente
apaream dentro de 2 a 14 dias, em alguns casos,
os animais s apresentam sintomatologia aps
um perodo prolongado (superior a 30 dias).
Cepas de baixa virulncia podem determinar
infeces subclnicas ou leves. Os sinais clnicos,
quando presentes, podem incluir perda de apeti-
te, sonolncia, fraqueza, diarria e febre. Leuco-
penia observada na grande maioria dos casos.
A resposta imune desenvolvida em resposta in-
feco nem sempre efetiva para erradicar o vrus
do organismo. Como conseqncia, os animais
Flaviviridae 581
podem car cronicamente infectados. Os sinais
clnicos da infeco crnica incluem retardo do
crescimento, perda de plos, febre, diarria e per-
da de peso. Os sinais so intermitentes e podem
persistir, com aumentos e redues peridicos
da severidade, por semanas ou meses. Animais
cronicamente infectados so imunodeprimidos
e, conseqentemente, so mais susceptveis a in-
feces por outros patgenos. Esses animais ge-
ralmente morrem em resultado da infeco pelo
CSFV ou por causa de infeces secundrias. Em-
bora a infeco crnica seja relativamente rara,
muito importante na disseminao da infeco,
pois os animais infectados excretam o vrus de
forma contnua.
A infeco de fmeas prenhes freqente-
mente resulta em infeco fetal e pode levar a
perdas reprodutivas. As conseqncias e a seve-
ridade da infeco fetal dependem da virulncia
da cepa viral e da fase de gestao em que ocorre.
A infeco fetal pode resultar em abortos, nati-
mortos, nascimento de leites fracos e inviveis,
tremor ou malformaes congnitas. Fetos infec-
tados intra-uterinamente tambm podem nascer
saudveis, livres do vrus ou persistentemente
infectados (PI). Os animais PI apresentam vire-
mia persistente e geralmente morrem em alguns
meses.

4.2.1.3 Diagnstico
A maioria das amostras do CSFV circulantes
possui baixa virulncia, o que diculta o diagns-
tico clnico, principalmente em animais adultos.
Da mesma forma, a infeco pode apresentar um
perodo de incubao de vrias semanas no
caso de rebanhos o que requer vrios ciclos de
amplicao at se tornar clinicamente aparente.
Isso geralmente retarda o diagnstico e a adoo
de medidas de combate, e pode comprometer o
sucesso dessas medidas. Por isso, um diagnstico
pr-clnico seria de enorme benefcio para o com-
bate a essa enfermidade.
Pelo fato da CSF no apresentar sinais patog-
nomnicos, o diagnstico da enfermidade deve
ser conrmado pelo isolamento viral ou pela de-
teco de antgenos virais no sangue ou nos teci-
dos. Os testes de eleio para esta nalidade so a
imunouorescncia (IFA) e ELISA. O isolamento
viral geralmente realizado em clulas prim-
rias ou de linhagem suna, incluindo as clulas
PK-15. Como a maioria dos isolados no induz
citopatologia, a identicao deve ser realizada
pela deteco de antgenos (IFA ou imunopero-
xidase, IPX), com o uso de anticorpos policlonais
ou monoclonais. A diferenciao do BVDV-1, do
BVDV-2 e do BVD pode ser realizada atravs de
testes sorolgicos, pela utilizao de anticorpos
monoclonais ou por RT-PCR diferencial.
Nos ltimos anos, as tcnicas de ELISA e
RT-PCR tm conquistado espao no diagnstico
do CSFV. O ELISA um teste rpido e simples,
pode ser utilizado para triagem de animais febris
ou doentes e aplicvel para se testar um nme-
ro grande de amostras. A tcnica de RT-PCR
mais complexa, mas pode ser til por sua sensi-
bilidade e rapidez, podendo ser empregada para
o diagnstico pr-clnico em estgios iniciais de
surtos. Recentemente, o PCR em tempo real reve-
lou a sua utilidade potencial no diagnstico ini-
cial de surtos pelo CSFV.

4.2.1.4 Prolaxia e controle
A enfermidade altamente transmissvel e
de difcil controle em regies de alta concentra-
o de criaes sunas e tambm em reas que
possuem populaes de sudeos silvestres. A ali-
mentao de sunos com restos de alimentos per-
manece sendo um importante fator para a intro-
duo da infeco em reas livres, pois o agente
pode permanecer vivel por vrios dias em uma
variedade de subprodutos sunos. Portanto, a
proibio do uso de subprodutos sunos para
alimentao animal imperativa no combate
enfermidade nessas regies. A restrio movi-
mentao de animais em reas de risco, medidas
gerais de biossegurana nos rebanhos e reduo
da concentrao de rebanhos em reas crticas
so altamente recomendveis e tm surtido bons
resultados.
A vacinao contra o CSFV possui uma
longa histria e remonta aos anos 1960, quando
vacinas atenuadas altamente efetivas foram de-
senvolvidas e utilizadas. O uso sistemtico, con-
tnuo e macio dessas vacinas em nvel regional
582 Captulo 22
e/ou nacional demonstrou ecincia em reduzir
drasticamente a ocorrncia da doena e a circu-
lao do vrus ao longo dos anos. Vrios pases
realizaram tais procedimentos e conseguiram re-
duzir signicativamente a ocorrncia e o impacto
econmico-sanitrio da infeco nas ltimas d-
cadas. A vacinao proltica macia ainda uti-
lizada em vrios pases e pode representar uma
etapa de transio rumo ao controle sem vacina-
o (acompanhado de identicao e remoo de
infectados), como adotado por diversos pases,
incluindo o Brasil. O controle sem vacinao, no
entanto, s deve ser adotado quando a incidncia
atingir nveis baixos e a infeco se tornar espo-
rdica.
Em pases que erradicaram o CSFV, a vaci-
nao macia foi banida. Nesses pases, somente
permite-se a vacinao de emergncia no caso de
surtos, embora vrios pases europeus que expe-
rimentaram tais eventos no tenham recorrido a
essa medida. Vacinas com marcadores antigni-
cos seriam de valor inestimvel nesses casos.
Em casos de surtos, os casos conrmados
e os animais em contato devem ser sacricados
ou colocados em quarentena. A interdio da
propriedade e de reas vizinhas ao trnsito de
animais, subprodutos e possveis veculos de
transmisso tm sido adotados nessas situaes.
A vacinao perifocal ou regional de emergncia
pode ser considerada, desde que permitida pela
legislao sanitria do pas.
Vrias vacinas tm sido utilizadas ao longo
dos anos no combate ao CSFV em reas endmi-
cas e espordicas. Em pases subdesenvolvidos
e em desenvolvimento, a vacina atenuada (cepa
chinesa) possuiu papel fundamental no controle
e eventual erradicao da infeco. Nos ltimos
anos, novas tecnologias tm sido desenvolvidas
para a produo de vacinas mais efetivas e ade-
quadas aos programas de controle e erradicao.
Essas vacinas incluem vetores virais, expressando
protenas do envelope do CSFV (poxvrus, her-
pesvrus, adenovrus), protenas recombinantes,
vacinas de subunidade (E2, E
rns
), peptdeos sin-
tticos, vacinas de DNA, entre outras. A diferen-
ciao entre animais vacinados e infectados com
o vrus de campo, assim como a possibilidade de
vacinao oral de sudeos silvestres, constituem-
se em metas importantes no combate infeco.
4.2.2 Vrus da diarria viral bovina
A doena associada com o BVDV foi inicial-
mente descrita por pesquisadores da Universida-
de de Cornell, em 1946, e se caracterizava como
uma enfermidade aguda transmissvel marcada
por leucopenia severa, febre alta, depresso, diar-
ria, eroses no trato gastrintestinal e hemorra-
gias. Cinco rebanhos foram afetados e apresen-
taram taxas de morbidade entre 33 e 88% e de
mortalidade entre 4 e 8%. Posteriormente, outra
forma da doena causada pelo BVDV foi iden-
ticada e denominada de doena das mucosas
(DM). Esta forma apresentava algumas caracte-
rsticas clnico-patolgicas da doena anterior-
mente descrita, mas se diferenciava por no ser
transmitida experimentalmente e por apresentar
baixa morbidade e alta mortalidade. A etiologia
da DM permaneceu obscura at o reconhecimen-
to de que apenas animais persistentemente infec-
tados (PI) desenvolviam essa forma da doena.
Ao longo de seis dcadas, uma grande va-
riedade de manifestaes clnicas foi associada
com a infeco por este agente. Essas manifes-
taes podem ser agrupadas em quatro formas
principais: doena aguda leve (gastrentrica, res-
piratria), doena aguda severa (gastrentrica,
respiratria, hemorrgica), doena das mucosas
(DM), BVD crnica (recentemente reconhecida
como uma forma da DM). No obstante essa
variedade de apresentaes clnicas, as maiores
conseqncias da infeco pelo BVDV parecem
estar relacionadas com as perdas reprodutivas
que determina.
Os isolados de campo do BVDV apresentam
uma grande variabilidade antignica, devido
presena de regies hipervariveis na glicopro-
tena E2. De acordo com as caractersticas gen-
ticas e antignicas, os isolados podem ser dividi-
dos em dois grupos: BVDV-1 e BVDV-2. Os vrus
pertencentes ao gentipo 1 abrangem a maioria
das cepas de referncia e os vrus utilizados em
vacinas, alm de muitos isolados com virulncia
baixa a moderada. Os vrus pertencentes ao ge-
ntipo 2 foram inicialmente isolados de surtos
de BVDV aguda e doena hemorrgica no Cana-
d em 1993-1994, mas incluem tambm isolados
de virulncia baixa e moderada. Os isolados do
BVDV-1 e BVDV-2 j foram divididos em sub-
Flaviviridae 583
grupos genticos (BVDV-1a e 1b; BVDV-2a e 2b),
porm a relevncia clnica e epidemiolgica dessa
subdiviso ainda no est esclarecida. A reativi-
dade sorolgica cruzada entre BVDV-1 e BVDV-2
geralmente baixa, e isto apresenta implicaes
importantes para o diagnstico e eccia de va-
cinas.
O BVDV infecta naturalmente uma varieda-
de de ruminantes domsticos e silvestres, alm
de sunos; os bovinos so considerados os seus
hospedeiros naturais. In vitro, o BVDV capaz de
replicar em uma variedade de clulas de cultivo
de vrias espcies, inclusive de origem humana.
Com base no efeito da replicao em cultivo
celular, os isolados de BVDV podem ser dividi-
dos em citopticos (cp) e no-citopticos (ncp).
Os isolados ncp se constituem nos BVDV verda-
deiros e so responsveis pela maioria das infec-
es naturais e pelas infeces fetais persistentes.
Os isolados cp se constituem em uma minoria;
no so capazes de produzir infeces persisten-
tes e so isolados quase que exclusivamente de
animais com a DM. Os BVDV cp so gerados nos
animais PI a partir do vrus ncp original, atravs
de mutaes, recombinaes, delees ou rear-
ranjos genticos que levam expresso na pro-
tena NS3 como um polipeptdeo individual. Em
contraste, os vrus ncp expressam apenas a pro-
tena precursora NS23. Embora o papel da NS3
na citopatologia ainda no esteja esclarecido, essa
protena considerada o marcador molecular dos
BVDV cp.

O BVDV apresenta distribuio mundial e
praticamente todos os pases que possuem bovi-
nocultura signicativa j relataram a sua presen-
a. A infeco pelo BVDV j foi descrita em vrias
espcies silvestres, porm a relevncia epidemio-
lgica desses achados permanece incerta. Recen-
temente, os pases escandinavos implementaram
programas de erradicao. Com base no sucesso
inicial desses programas, pases como Alema-
nha, Frana, Estados Unidos e Rssia tambm
iniciaram programas de erradicao do BVDV.
No entanto, a erradicao do vrus desses pases
mais difcil devido intensicao do processo
produtivo e grande populao bovina e intensa
movimentao de animais.
A infeco pelo BVDV tem sido descrita no
Brasil desde o nal dos anos 1960. Vrios rela-
tos clnico-patolgicos, virolgicos e sorolgicos
demonstram a ampla distribuio da infeco no
rebanho bovino brasileiro. Os ndices de soro-
positividade nos diversos estudos variam entre
18 e 84%. Vrus dos dois gentipos (BVDV-1 e
BVDV-2) j foram identicados no pas, e, apro-
ximadamente, dois teros pertencem ao gentipo
1. O BVDV j foi isolado de diversas origens, in-
cluindo soro fetal comercial, fetos abortados, ani-
mais PI, animais com DM, com doena respirat-
ria, com doena gastrentrica, de rebanhos com
problemas reprodutivos. Sorologia positiva em
caprinos, bubalinos, javalis cativos e cervdeos
silvestres tambm j foi relatada no pas.
Os bezerros PI se constituem nos principais
reservatrios e fontes de disseminao do vrus.
Esses animais excretam o vrus continuamen-
te em altos ttulos em secrees (nasais, saliva,
smen, leite) e excrees (urina, fezes contm
pouco vrus). Durante a infeco aguda, os ani-
mais infectados tambm excretam o vrus, porm
em ttulos inferiores e por menos tempo (3 a 10
dias). O vrus transmitido entre animais prin-
cipalmente por contato direto (focinho-focinho,
coito, mucosa-mucosa) e indireto (focinho-secre-
es/excrees, focinho-feto abortado/placenta,
contato com secrees/excrees). Transmisso
iatrognica (agulhas ou material cirrgico con-
taminado, luvas de palpao, tatuadores, apli-
cadores de brinco) e por smen contaminado,
alm de outros veculos tambm pode ocorrer.
A transmisso vertical aos embries/fetos uma
conseqncia freqente da infeco de vacas pre-
nhes. O smen coletado de touros PI ou durante
a infeco aguda tambm pode transmitir o vrus
a fmeas pela inseminao articial.
A introduo do vrus nos rebanhos pode
ocorrer por: a) introduo de animais PI; b) intro-
duo de fmeas gestando fetos PI; c) introduo
de animais durante a infeco aguda; d) contato
entre animais de rebanhos vizinhos (essa ltima
forma parece possuir importncia limitada).

584 Captulo 22
4.2.2.2 Patogenia e manifestaes
clnicas

O epitlio do trato respiratrio superior,
orofaringe e o tecido linfide regional parecem
ser os stios primrios de replicao aps a infec-
o pela via oro-nasal. As conseqncias e a seve-
ridade da infeco aguda pelo BVDV dependem
de uma srie de fatores que incluem a cepa viral
(e o bitipo), o status imunolgico do animal, o
status reprodutivo e a ocorrncia de infeces
secundrias. Embora o primeiro relato de BVD
tenha sido de uma forma aguda severa, os casos
posteriormente relatados demonstraram que a
maioria das infeces agudas de animais imuno-
competentes cursava sem manifestaes clnicas
aparentes ou com sinais discretos. De acordo com
as conseqncias clnico-patolgicas e epidemio-
lgicas, pode-se dividir a infeco pelo BVDV
em duas categorias principais: infeco aguda de
animais no-prenhes e infeco aguda de fmeas
prenhes.
Infeco aguda de animais
no-prenhes
A maioria das infeces de animais imuno-
competentes assintomtica, mas pode cursar
com quadros febris leves, muitas vezes imper-
ceptveis. Alguns isolados de maior virulncia
podem provocar um perodo febril curto, acom-
panhado por sialorria, hiperemia e descarga na-
sal, tosse e diarria . O perodo de incubao varia
entre 3 e 7 dias e seguido de hipertermia tran-
sitria e leucopenia. O vrus pode ser detectado
no sangue entre 4 e 6 dias aps a infeco e pode
persistir por at 15 dias. Sinais de infeco respi-
ratria tambm podem ser observados. Leses ul-
cerativas na mucosa oral podem estar presentes.
Nos casos de infeco aguda com comprometi-
mento respiratrio e/ou digestivo, antgenos vi-
rais podem ser detectados por imunoistoqumica
(IHC) nas tonsilas, linfonodos regionais, pulmes
e epitlio intestinal. O tecido linfide (tonsilas,
linfonodos, tecido linfide associado a mucosas,
placas de Peyer) se constitui em importante stio
de replicao viral. A enfermidade geralmente
autolimitante, cursando com morbidade alta
e mortalidade muito baixa ou nula. No entanto,
mortalidade considervel pode, ocasionalmente,
ocorrer em animais jovens, principalmente asso-
ciada com o BVDV-2. A enfermidade pode aco-
meter todas as categorias de animais, principal-
mente bezerros maiores de seis meses.
O BVDV tambm imunossupressor, po-
dendo predispor os animais infectados a infec-
es com outros agentes patognicos. Assim, ca-
sos de enfermidade entrica ou respiratria por
outros patgenos virais (herpesvrus bovino tipo
1 [BoHV-1]; vrus respiratrio sincicial bovino
[BRSV] e vrus da parainuenza tipo 3 [bPI3v]) e
bacterianos podem ser potencializados durante a
infeco aguda pelo BVDV. Enfermidade respira-
tria crnica, associada com diferentes bactrias,
e quadros persistentes de dermatite tambm tm
sido associados com a infeco pelo BVDV em
bezerros connados.
At o nal dos anos 1980, a importncia
maior do BVDV era atribuda s conseqncias
da infeco transplacentria: perdas reproduti-
vas, produo de animais PI e DM. No entanto,
no nal dos anos 1980, casos severos de BVDV
aguda se tornaram mais freqentes. Casos des-
critos entre os anos de 1977 e 1987 revelaram
que 10% dos casos de infeco clnica aguda pelo
BVD em animais adultos apresentavam trom-
bocitopenia. Um surto, em um rebanho leiteiro
no estado de Nova Iorque, resultou em 50% de
morbidade e 20% de mortalidade. Esses animais
apresentavam febre, diarria sanguinolenta, he-
morragias e tempo de coagulao retardado. Esta
forma de apresentao da infeco pelo BVDV
foi posteriormente caracterizada como uma for-
ma distinta de BVD, denominada de BVD aguda
hemorrgica (sndrome hemorrgica).
Surtos importantes dessa enfermidade fo-
ram descritos no Canad entre 1993 e 1994, re-
sultando na morte de aproximadamente 32 mil
animais (taxa de mortalidade de 22,4% entre be-
zerros). Em torno de 150 rebanhos de leite, 660 de
corte e 100 de vitelos foram afetados; e animais
de diferentes faixas etrias foram afetados e mor-
reram. As leses encontradas eram similares s
observadas na DM. No entanto, dois importantes
pontos diferenciam a infeco aguda hemorrgica
pelo BVDV da DM: a presena de vrus citoptico
Flaviviridae 585
e as taxas de morbidade e mortalidade. Enquanto
a patogenia da DM exige necessariamente a pre-
sena de vrus dos dois bitipos (cp e ncp), a for-
ma severa de BVD aguda apresenta apenas um
bitipo do vrus, geralmente ncp. Alm disso, as
taxas de mortalidade na DM so de 100%, e a taxa
de morbidade baixa (correspondente ao nme-
ro de animais PI em um rebanho). Na forma se-
vera de BVD aguda, as taxas de mortalidade so
baixas, porm a taxa de morbidade alta. Geral-
mente, entre 50 a 90% dos animais clinicamente
infectados se recuperam.
Os surtos de infeco aguda pelo BVDV es-
to diretamente relacionados com a virulncia da
cepa envolvida. A disseminao de cepas de bai-
xa virulncia na populao ocorre como resulta-
do do contato direto com animais PI, o que limita
a disseminao desses vrus. J a disseminao
de vrus de alta virulncia ocorre de forma seme-
lhante ao CSFV, ou seja, a partir de animais com
a infeco aguda.
Infeco aguda de fmeas
prenhes
A infeco de fmeas prenhes soronegativas
freqentemente seguida de transmisso trans-
placentria do vrus ao embrio ou feto. As con-
seqncias da infeco do concepto dependem
do estgio de gestao em que ocorre a infeco,
do biotipo (cp/ncp) e da cepa do vrus. Podem
ocorrer reabsoro embrionria (com retorno ao
cio em intervalos regulares ou irregulares) , abor-
tos , mumicao fetal , natimortos, nascimento
de bezerros fracos e inviveis, que morrem em
seguida ou apresentam crescimento retardado;
ou o nascimento de animais PI. Em geral, abortos
em qualquer fase de gestao podem ser atribu-
dos ao BVDV. Fetos infectados no tero nal da
gestao freqentemente nascem normais, livres
do vrus e soropositivos. As possveis conse-
quncias da infeco pelo BVDV esto ilustradas
na Figura 22.6.
Natimortos
Malformaes
Bezerros PI
Infertilidade
Abortos
BVDV
ncp ou cp
ncp
Soropositivo, livre do vrus
Bezerro PI
ncp ou cp
0 280 120 40 80 160 200 240
D I A S D E G E S TA O
Efeitos na
fertilizao,
implantao
Embrio muito
susceptvel
Imunotolerncia (PI)
Leses no SNC
Atrofia da retina
cegueira
Abortos
Bezerros saudveis
soropositivos
Figura 22.6. Conseqncias da infeco de fmeas bovinas prenhes pelo BVDV, de acordo com o bitipo do vrus e
comoestgiodegestao.
586 Captulo 22
A ocorrncia de malformaes fetais um
achado muito comum em rebanhos infectados
e geralmente acontece quando a infeco ocorre
entre os 100 e 150 dias de gestao. As malforma-
es principais podem ser encontradas no siste-
ma nervoso central (hipoplasia cerebelar , micro-
cefalia , hidrocefalia , mielinizao deciente na
medula espinhal) e nos olhos (atroa ou displasia
da retina, catarata , microftalmia ), podendo ob-
servar-se, ainda, aplasia tmica , braquignatismo ,
retardo de crescimento e artrogripose . Em muitos
rebanhos, as malformaes so os primeiros e, al-
gumas vezes, os nicos achados que indicam a
presena do vrus.
Infeco persistente
O estabelecimento da infeco persistente
ocorre quando o feto infectado entre os 40 e 120
dias de gestao (Figura 22.6). Os fetos infectados
nesse perodo desenvolvem imunotolerncia ao
vrus infectante e o seu organismo jamais conse-
gue erradicar o vrus. Esses animais tornam-se
portadores permanentes e excretam o vrus con-
tinuamente em secrees e excrees. Os bezer-
ros que nascem PI so geralmente soronegativos.
Os fetos que so infectados aps o 125 dia de
gestao so considerados imunocompetentes e
podem desenvolver uma resposta imunolgica
que, freqentemente, resulta na erradicao do
agente. Os fetos congenitamente infectados po-
dem apresentar alguns defeitos em decorrncia
da infeco transplacentria ou podem nascer
aparentemente normais. Os animais PI podem
apresentar crescimento retardado, malformaes
congnitas ou ser aparentemente saudveis. Al-
guns apresentam crescimento retardado e so
mais susceptveis a infeces secundrias. Como
descrito anteriormente, apenas cepas de BVDV
no-citopticas podem estabelecer infeces per-
sistentes. Animais persistentemente infectados
com o BVDV representam o maior reservatrio
do vrus na natureza e, por isso, so considera-
dos mantenedores do vrus na natureza. A maio-
ria dos animais PI morre nos primeiros meses
de vida, no entanto, alguns deles podem viver
at os dois anos ou mais. Existem vrios relatos
de animais PI que sobrevivem at a idade adul-
ta, podendo se tornar reprodutores e transmitir
o vrus para a prognie (fmeas) ou pelo smen
(machos). Fmeas PI que atingem a idade adulta
e cam prenhes geralmente produzem bezerros
PI.
Etiopatogenia da doena das mucosas
A doena das mucosas (DM) uma enfer-
midade gastrentrica fatal, desencadeada quan-
do um animal PI (portador de um BVDVncp)
superinfectado com um BVDV citoptico (BVD-
Vcp) antigenicamente semelhante. O BVDVcp
que determina o desenvolvimento da DM geral-
mente se origina do BVDVncp do prprio ani-
mal PI por mutaes. Vrios tipos de mutaes,
delees e rearranjamentos genticos tm sido
identicados na gerao de BVDVcp, todos esses
mecanismos resultam na expresso da protena
viral NS3. Outras fontes de vrus citopticos que
podem determinar a DM incluem vrus de vaci-
nas vivas modicadas ou transmisso de vrus cp
a partir de outros animais PI. Nos animais que
desenvolvem a DM, os dois vrus (ncp e cp) esto
presentes (Figura 22.7).
A DM invariavelmente fatal, ocorre prin-
cipalmente em animais com seis meses a dois
anos de idade e se caracteriza por febre, leuco-
penia, diarria, inapetncia, desidratao, leses
erosivas nas narinas e na boca e morte dentro de
poucos dias. Na necropsia, eroses e ulceraes
podem ser encontradas no trato gastrintestinal,
particularmente nas placas de Peyer. No esfa-
go, essas leses apresentam-se no sentido lon-
gitudinal, com aspecto de arranho de gato.
As placas de Peyer apresentam-se edematosas,
hemorrgicas e necrticas. O contedo intestinal
escuro e aquoso e observa-se enterite catarral
ou hemorrgica. A histopatologia revela uma ne-
crose extensiva dos tecidos linfides, incluindo
as placas de Peyer, nos centros germinativos do
bao e linfonodos. Devido proporo de animais
PI em um rebanho ser geralmente muito baixa, a
morbidade da DM tambm baixa. A letalidade
prxima de 100%.
Flaviviridae 587
Na DM crnica, menos comum, os sinais
clnicos so inespeccos. Observa-se inapetn-
cia, perda de peso e apatia progressiva. A diar-
ria pode ser contnua ou intermitente. Algumas
vezes, ocorrem descarga nasal e descarga ocular
persistente. reas alopcicas e de hiperqueratini-
zao podem aparecer, geralmente no pescoo.
Leses erosivas crnicas podem ser observadas
na mucosa oral e na pele. Laminite, necrose in-
terdigital e deformao do casco podem tambm
ocorrer. Esses animais podem sobreviver por
muitos meses e, geralmente, morrem aps debili-
tao progressiva.

4.2.2.3 Diagnstico
Deve-se suspeitar de infeco pelo BVDV
sempre que houver uma ocorrncia de perdas
embrionrias, abortos, malformaes fetais, nas-
cimento de animais fracos ou morte perinatal.
Alm disso, casos de doena entrica e/ou respi-
ratria com componentes hemorrgicos (melena,
petquias em mucosas, serosas etc.), eroses e ul-
ceraes no trato digestivo tambm so sugesti-
vos dessa infeco. Essas manifestaes ocorrem
principalmente, mas no exclusivamente, em
animais jovens. Bezerros fracos, com crescimento
retardado e predisposio a outras enfermidades
devem ser considerados potencialmente suspei-
tos de serem PI.
O teste padro de diagnstico o isolamen-
to do agente em cultivos celulares seguido por
identicao por IFA ou IPX, pois a maioria das
amostras no-citoptica. Clulas de origem bo-
vina, particularmente as primrias, so muito
susceptveis ao vrus. O sangue (especialmente
os leuccitos) de animais infectados de forma
aguda ou persistente muito rico em vrus. Em
geral, os ttulos de vrus no sangue de animais
PI so muito maiores do que em animais com a
infeco aguda.
Alm do isolamento, antgenos virais podem
ser demonstrados em tecidos (fetos abortados,
placentomas, fragmentos de tecidos coletados na
necropsia) por IF e IPX. Um teste de ELISA de
captura de antgeno, destinado a detectar prote-
nas virais no soro de animais PI, apresenta boa
especicidade e sensibilidade e pode ser realiza-
do para testar um grande nmero de amostras.
Bipsias de pele (fragmentos de orelha) para a de-
teco de antgenos virais por IPX ou ELISA tm
sido popularizadas na Amrica do Norte para a
ncp
cp
Bezerro PI
BVDV ncp
Doena das mucosas
ncp + cp
Citoptico (cp)
pro
N C
rns
E E1 E2
p7
NS2-3 NS4-A NS4-B NS5A NS5B
5' UTR 3' UTR
NS2-3 NS2-3
NS3
No-citoptico (ncp)
Figura 22.7. Etiopatogenia da doena das mucosas (DM). Em bezerros nascidos imunotolerantes e persistentemente
infectados comumBVDVncp, mutantes cppodemser gerados a partir de mutaes do vrus original. Areplicao do
par de vrus (ncp/cp) leva ao desenvolvimento da enfermidade, que apresenta curso fatal. A principal diferena
molecular entre os vrus ncp e cp a expresso da protena NS3 pelo vrus cp, enquanto o ncp expressa apenas o
precursor NS23.
588 Captulo 22
triagem e deteco de animais PI. Isolamento do
vrus ou deteco de RNA viral por PCR no leite
tem sido utilizado para identicar rebanhos lei-
teiros infectados.
O diagnstico sorolgico geralmente reali-
zado pela tcnica de SN ou ELISA. A identicao
de soropositividade de um animal indica apenas
exposio prvia ao agente. Animais infectados
de forma aguda, soroconvertem 10-14 dias aps
a infeco inicial. Nestes animais, a sorologia pa-
reada pode indicar a infeco. Animais PI geral-
mente no apresentam anticorpos no soro, j que
no so capazes de responder imunologicamente
ao vrus. Exames sorolgicos de rebanhos, devi-
do prtica de vacinao, tm valor epidemiol-
gico limitado e servem unicamente para vericar
o status sorolgico e a possvel circulao do v-
rus no rebanho.
Em termos de controle ou erradicao, o
diagnstico de BVDV deve ser focado na deteco
dos animais PI. O isolamento viral e/ou deteco
de antgenos no plasma e/ou em bipsias de ore-
lha por ELISA/IPX so os mtodos de eleio.

O controle da infeco pelo BVD pode ser efe-
tuado com ou sem o uso de vacinas, dependendo
do histrico do rebanho, do risco de introduo
do agente e de outros fatores epidemiolgicos. O
controle com vacinao indicado para rebanhos
com alta rotatividade de animais, rebanhos com
sorologia positiva, com histrico de doena clni-
ca ou reprodutiva, e com conrmao virolgica
de BVDV. Tambm indicado para propriedades
de terminao de novilhos, nas quais animais de
vrias procedncias so agrupados e mantidos
em alta densidade por rea. Rebanhos leiteiros,
com introduo freqente de animais e troca de
reprodutores, tambm podem ser aconselhados
a realizar a vacinao. Rebanhos que comerciali-
zam reprodutores, mesmo que sejam negativos,
podem vacinar os animais destinados venda, o
que protege de eventual infeco nos rebanhos
de destino.
Nos Estados Unidos, existem dezenas de
vacinas contra o BVDV, mono e polivalentes, ate-
nuadas e inativadas. No Brasil, todas as vacinas
para o BVDV disponveis atualmente so inativa-
das, contendo adjuvante oleoso ou hidrxido de
alumnio. Essas vacinas possuem tambm antge-
nos de outros agentes infecciosos como o BoHV-
1, bPI3v e BRSV e algumas contm pasteurelas. A
vacinao deve seguir o esquema indicado pelos
fabricantes. Geralmente, os bezerros so vacina-
dos aos 4 a 6 meses de idade e revacinados de
30 a 40 dias aps. Alguns animais podem, ainda,
possuir anticorpos maternos nessa idade. Assim,
recomendada uma revacinao aos 8 ou 12 me-
ses. Revacinaes a cada 6 a 12 meses devem ser
realizadas para manuteno da imunidade. No
caso das fmeas, recomenda-se revacinao pre-
viamente temporada de monta (2 a 3 semanas
antes da cobertura). Vacinas com vrus atenua-
do so disponveis nos EUA e em outros pases
e apresentam maior eccia, porm oferecem o
risco de infeco fetal. As vacinas contra o BVDV,
se corretamente utilizadas, podem conferir prote-
o razovel contra a doena clnica, porm so
geralmente pouco ecientes para induzir prote-
o fetal.
Vacinas produzidas com cepas de BVDV-1
em geral induzem proteo parcial ou incompleta
contra cepas de BVDV-2. No Brasil, a maioria das
vacinas contm apenas vrus do gentipo 1, po-
rm algumas vacinas recentemente importadas
e outras em vias de produo incluem tambm
vrus do gentipo 2. A tendncia que as vacinas
futuras contra o BVDV contenham os dois gen-
tipos, alm de representantes dos subgentipos.
O controle sem vacinao indicado para re-
banhos fechados, sem o ingresso freqente de
animais e, conseqentemente, de baixo risco. Re-
banhos extensivos de gado de corte geralmente
se enquadram nessa categoria. Esse tipo de con-
trole tambm indicado para rebanhos cujos pa-
rmetros reprodutivos e clnicos no registrem
eventos sugestivos da infeco pelo BVDV. Re-
banhos com sorologia negativa e cujo ingresso
de animais seja raro ou eventual tambm no
apresentam grande risco de introduo do agen-
te. Nesses casos, pode-se utilizar o controle sem
vacinao, que objetiva manter o status negativo
do rebanho. Para evitar a introduo da infeco,
Flaviviridae 589
deve-se recorrer a medidas bsicas de biossegu-
rana e testar, para vrus, todos os animais antes
de ingressarem na propriedade. Com essa medi-
da, possvel manter rebanhos livres da infeco,
pois a principal forma de introduo da infeco
por meio de animais infectados (na fase agu-
da ou persistente). Bezerros (potencialmente PI)
e vacas prenhes soropositivas (potencialmente
carreando fetos PI) devem ser especialmente con-
siderados, pois representam potenciais formas de
introduo do vrus nos rebanhos. Em rebanhos
suspeitos de possuir animais PI ou com histrico
de casos clnicos suspeitos de BVDV, o controle
deve enfatizar a identicao e remoo desses
animais.
Nos pases escandinavos, o programa de er-
radicao tem por principal objetivo a identica-
o e a remoo dos animais PI. Nesses pases, a
vacinao no foi utilizada como parte do pro-
grama de erradicao devido ao fato de que, com
a vacinao, se perde o indicador sorolgico da
presena da infeco no rebanho. A incidncia do
BVDV era relativamente baixa, o que encorajou a
implementao do programa de erradicao sem
a utilizao da vacinao. Alm disso, a importa-
o de animais, o transporte e a densidade eram
relativamente baixos quando comparadas com
outros pases. Em pases em que a prevalncia
do BVDV prxima ou acima de 50%, associada
com grande movimentao e importao de ani-
mais, programas de controle e erradicao prova-
velmente devem utilizar a vacinao do rebanho
alm da identicao e eliminao dos animais
PI.

4.2.3 Vrus da doena da fronteira
A doena da fronteira (border disease, BD)
uma doena reprodutiva de ovinos causada por
um pestivrus denominado BDV. Alm dos ovi-
nos, o BDV pode infectar naturalmente caprinos,
bovinos e sunos. A infeco de ovelhas no pre-
nhes geralmente subclnica, mas pode cursar
com febre leve e leucopenia transitria. Em ove-
lhas prenhes, o vrus capaz de atravessar a bar-
reira transplacentria e infectar o feto, resultando
em abortamentos, nascimento de cordeiros fracos
e inviveis, alm de malformaes congnitas.
Em animais que nascem a termo, as conse-
qncias da infeco dependem da fase de ges-
tao em que ocorreu a infeco. Quando a in-
feco ocorrer aps os 80 dias de gestao, pode
ocorrer o nascimento de cordeiros com cobertura
escassa e anormal de l, geralmente pequenos,
fracos e com graus variveis de tremor. Outros
cordeiros infectados pelo BDV podem apresentar
anormalidades esquelticas, como uma despro-
porcionalidade dos membros anteriores, cabeas
pequenas e ossos nos.
Similarmente ao BVDV em bovinos, os cor-
deiros podem nascer persistentemente infectados
com o BDV e excretar o vrus continuamente. No
entanto, sabe-se que cordeiros que nascem PI
do BDV apresentam uma viabilidade reduzida
quando comparados aos bezerros PI do BVDV.
A sua importncia da epidemiologia da infeco
incerta, mas provavelmente menor do que no
BVDV, devido sua baixa viabilidade e pouco
tempo de vida.
O diagnstico da infeco pelo BDV pode
ser realizado por isolamento viral ou por imu-
noistoqumica nos tecidos. Existem poucas vaci-
nas e kits de diagnstico para o BDV disponveis
no mercado mundial.
4.3 Gnero Hepacivirus
At o momento s existe uma espcie reco-
nhecida dentro deste gnero (Tabela 22.4). No
entanto, existem seis grupos genticos chama-
dos de cls. As diferenas genticas entre os cls
so signicativas (25 a 35% em nvel de nucleo-
tdeos). Esses cls no so considerados espcies
diferentes at o presente, pois caractersticas de
diferenciao taxonmica, como sorotipos ou di-
ferenas nos hospedeiros, que justicassem essa
classicao ainda no foram identicadas.
590 Captulo 22
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Espcies reconhecidas
Vrus da hepatite C (HCV)
hepatitis C virus
Grupos genticos dentro
das espcies
HCV clade 1
HCV clade 2
HCV clade 3
HCV clade 4
HCV clade 6
HCV clade 5
Espcies provisrias
GB virus B
Tabela22.4. Espcies virais dognero . Hepacivirus
Flaviviridae 591
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TOGAVIRIDAE
23
1 Introduo
2 Classicao
4 Replicao
5 Epidemiologia
6 As encefalites eqinas (ou encefalomielites eqinas)
6.1 Encefalite eqina venezuelana
6.1.1 O agente
6.1.2 Epidemiologia
6.1.4 Imunidade
6.1.5 Diagnstico
6.2 Encefalite eqina do leste
6.2.1 Epidemiologia
6.2.3 Diagnstico
6.3 Encefalite eqina do oeste
6.3.1 Epidemiologia
6.3.3 Diagnstico
595
595
597
598
598
601
602
602
603
603
606
607
608
608
609
609
610
610
610
610
611
611
611
611
611
1 Introduo
A famlia Togaviridae abrange um grupo de
vrus envelopados que possuem uma molcula
de RNA de cadeia simples e polaridade positiva
como genoma. A denominao Toga deriva da
aparncia frouxa do envelope viral lembrando
a vestimenta romana , observada nas primeiras
imagens dos vrions obtidas por microscopia ele-
trnica. No entanto, estudos posteriores demons-
traram que o envelope desses vrus encontra-se
intimamente associado ao nucleocapsdeo. Esta
famlia composta por dois gneros: Alfavirus e
Rubivirus. O gnero Alfavirus abriga vrios pat-
genos humanos e animais, cuja principal carac-
terstica em comum a transmisso por vetores
artrpodes. O gnero Rubivirus abriga apenas o
vrus da rubola, um patgeno exclusivo de hu-
manos e que no transmitido por insetos. Clas-
sicamente, a Togaviridae era uma famlia maior e
inclua os avivrus, pestivrus e outros vrus at
ento pouco caracterizados. Diferenas molecu-
lares levaram os avivrus (e os pestivrus) a se-
rem reclassicados na famlia Flaviviridae.
Os alfavrus so considerados arbovrus
(arthropod borne virus) clssicos, juntamente com
os avivrus e os buniavrus. Dentre os alfavrus
de interesse veterinrio, destacam-se os vrus
das encefalites eqinas do leste (EEEV), oeste
(WEEV) e venezuelana (VEEV), alm de outros
arbovrus de encefalites de importncia regional
em vrios pases. O prottipo da famlia o vrus
Sindbis (SIN), isolado inicialmente de mosquitos
no Egito e, ocasionalmente, associado com infec-
es em humanos. Apesar da sua importncia
clnica limitada, contribuies inestimveis sobre
a arquitetura da partcula viral, estrutura e fun-
o das glicoprotenas do envelope e regulao
da expresso gnica foram obtidas com estudos
do SIN de outro alfavrus, o vrus Semliki Forest
(SFV). Nos ltimos anos, o SIN tambm tem sido
testado como vetor para terapia gnica e vaci-
nas.
Os alfavrus podem infectar naturalmen-
te vrias espcies de aves, pequenos mamferos
e insetos, sendo mantidos na natureza graas a
ciclos alternados nessas espcies. A distribuio
geogrca de cada espcie de alfavrus geral-
mente limitada, e determinada pela existncia
de condies ecolgico-ambientais para a sobre-
vivncia e atividade dos vetores. Para a maioria
dos alfavrus, as infeces de animais domsticos
e humanos constituem-se em eventos acidentais
e possuem, portanto, importncia epidemiolgi-
ca limitada. Para poucos alfavrus, os ciclos de re-
plicao em espcies domsticas (eqinos e aves)
podem contribuir para a sua amplicao e de-
sencadeamento de epizootias/epidemias.
Alm da estrutura e epidemiologia similar,
os alfavrus so antigenicamente relacionados
entre si e apresentam vrias propriedades genti-
cas, moleculares e biolgicas semelhantes.
Este captulo aborda inicialmente as caracte-
rsticas gerais da famlia Togaviridae e a, seguir, as
viroses associadas com os alfavrus de importn-
cia veterinria.
2 Classicao
A famlia Togaviridae composta por dois
gneros: Alfavirus e Rubivirus. O gnero Alfavi-
rus abrange aproximadamente 30 espcies de
vrus, alguns dos quais tm sido associados com
doena em animais domsticos (eqinos e aves),
silvestres (aves e mamferos) e ocasionalmente
humanos. Esses vrus possuem caractersticas es-
truturais e morfolgicas em comum, so transmi-
tidos por insetos e apresentam uma considervel
relao antignica. Grande parte da reatividade
antignica cruzada deve-se similaridade da
protena do capsdeo. De acordo com o grau de
similaridade antignica, os alfavrus podem ser
distribudos nos seguintes grupos: o WEEV apre-
senta vrios sorotipos, e o seu grupo inclui ainda
o vrus Highlands J e o SIN; o VEEV possui sete
sorotipos (I a VII), e alguns variantes dentro do
sorotipo I (AB, C, D, E e F); o EEEV possui dois
variantes antignicos (sul e norte-americano); o
grupo antignico do SFV inclui ainda os vrus
Mayaro, Getah, Ross River, ONyong-Nyong e
Chikungunya. A reatividade sorolgica cruzada
observada apenas entre vrus do mesmo gru-
po e no entre os gneros. Apesar de sua relao
antignica, os membros do gnero Alfavirus apre-
sentam diferenas antignicas e moleculares, que
podem ser detectadas por testes sorolgicos e por
anlise de seqncias genmicas.
596 Captulo 23
Pouco se sabe sobre possveis diferenas e
semelhanas no ciclo replicativo da maioria dos
alfavrus, embora seja evidente que cada mem-
bro do gnero apresenta um potencial patognico
distinto. Grande parte dos conhecimentos sobre
a estrutura e replicao desses vrus foi obtida a
partir de estudos com os vrus prottipos SIN e
SFV.
O gnero Rubivirus possui apenas o vrus
da rubola, que no apresenta relao antignica
com os alfavrus. No entanto, algumas proprie-
dades estruturais e biolgicas indicam que esses
dois gneros evoluram de um mesmo ancestral.
Os humanos so os nicos hospedeiros conheci-
dos dos rubivrus, e a sua transmisso no envol-
ve a participao de insetos.
Na Tabela 23.1, esto relacionados os prin-
cipais alfavrus associados com enfermidades em
animais e humanos.
O potencial zoontico dos alfavrus tem sido
relatado principalmente para o EEEV, WEEV e
VEEV. Tambm tem sido relatada doena febril,
acompanhada de eritema e artrite em humanos,
associada com os alfavrus Ross River (Austrlia,
Oceano Pacco), SFV (frica), Mayaro (Trinidad
e Tobago, Amrica do Sul) e vrus do grupo do
Sindbis (frica, sia e Austrlia).
Vrus
Hospedeiros
naturais
Espcies
afetadas
Enfermidade Vetores Distribuio
Encefalite
eqina do leste
(EEEV)
Aves silvestres
de reas
pantanosas
Eqinos, aves
domsticas
(faises,
galinha, emas,
patos)
Doena febril,
encefalite
Mosquitos
(
)
Culiseta
melanura, Aedes
sollicitans,
A.vexans
EUA (costa leste e
do Golfo do Mxico),
Amrica Central e
Caribe, costa norte
da Amrica do Sul
Encefalite
eqina do oeste
(WEEV)
Aves silvestres,
pequenos mamferos
Eqinos
Encefalite,
doena febril
Mosquitos (
)
Culex
tarsalis
Plancies centrais e
ocidentais dos EUA e
Canad
Encefalite eqina
venezuelana
(VEEV)
Roedores silvestres,
eqinos (vrus
epizoticos)
Eqdeos (eqinos,
asininos, burros)
Encefalite,
doena febril
Mosquitos (
)
Culex
sp
Amrica Central,
norte/noroeste da
Amrica do Sul
Getah
Pssaros,
mamferos
Eqinos Doena febril Mosquitos Sudeste Asitico
Higlands J
Pssaros,
mamferos (?)
Eqinos
Doena febril,
encefalite
Mosquitos Amricas
Chikungunya
(CHIK) Primatas
Primatas,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
frica, ndia,
Sudeste
Asitico
Mayaro (May) Primatas
Primatas,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Amrica do Sul,
Trinidad e Tobago
Onyong-nyong
(ONN)
Primatas Humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Ross River (RR)
Mamferos
silvestres
Mamferos,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Austrlia,
Ilhas do Pacfico
Sindbis (SIN) Pssaros
Pssaros,
humanos
Doena febril,
exantema,
artralgias
Mosquitos
Norte da Europa,
frica, sia e
Austrlia
Semliki Forest
(SFV)
Pssaros
Pssaros,
humanos,
eqinos
Doena febril,
rara encefalite
Mosquitos
frica
Africa
Tabela23.1. Principais alfavrus deinteressemdicoe veterinrio.
Togaviridae 597
Os vrions da famlia Togaviridae esto entre
os vrus envelopados mais simples. Os vrions
so esfricos ou levemente pleomrcos, com di-
metro aproximado de 70 nm (Figura 23.1), com
um nucleocapsdeo isomtrico, com aproxima-
damente 40 nm de dimetro, formado por 240
cpias da protena do capsdeo (C), arranjadas
em simetria icosadrica. O nucleocapsdeo re-
vestido externamente por um envelope lipdico,
intimamente associado, derivado da membra-
na plasmtica da clula hospedeira. O envelope
apresenta 80 projees externas (peplmeros),
cada uma formada pela associao de trs hete-
rodmeros das glicoprotenas E1 e E2. Uma das
extremidades da E2 projeta-se internamente e
interage com o nucleocapsdeo. As trs prote-
nas estruturais principais apresentam massas
de 30-33 kDa (C), 50 kDa (E1) e 45 kDa (E2).
Uma terceira glicoprotena de envelope (E3, 10
kDa) e uma protena transmembrana pequena (6
kDa) tambm foram identicadas nos alfavrus.
Alm da funo estrutural, as glicoprotenas do
envelope desempenham funes importantes no
incio da replicao (ligao nos receptores, pene-
trao) e constituem-se em fatores de virulncia
em modelos animais. As glicoprotenas tambm
possuem atividade hemaglutinante e so alvos
de anticorpos neutralizantes.
Os vrions possuem massa molecular 52x10
6
;
densidade Buoyant 1.18-1.19 g/cm3-3 em sacarose
e coeciente de sedimentao 280S. So sensveis
a solventes orgnicos, detergentes, irradiao e
so relativamente instveis sob condies am-
bientais. Aproximadamente 30% da massa total
dos vrions composta por lipdios.
O genoma dos alfavrus uma molcula de
RNA de cadeia simples, linear, de polaridade po-
sitiva, com extenso de 9.7 (rubivrus) a 11.8 kb
(alfavrus) (Figura 23.2). A extremidade 5 pos-
sui uma estrutura cap e a extremidade 3 polia-
denilada. Pequenas seqncias no-traduzidas
so encontradas prximo s duas extremidades
e, provavelmente, possuem importncia para a
transcrio e replicao do genoma. As seqn-
cias traduzveis (open reading frames, ORFs) esto
agrupadas em dois mdulos: os genes das pro-
tenas no-estruturais (nsPs) esto localizados
nos dois teros prximos extremidade 5 e so
expressos pela traduo direta do genoma. As
protenas nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4 so produzi-
das pela clivagem da poliprotena precursora. Os
genes que codicam as protenas estruturais (C,
E1, E2, E3) fazem parte de uma ORF localizada
na regio prxima a extremidade 3 do genoma.
Esses genes so expressos pela traduo de um
RNA mensageiro (mRNA) subgenmico (26S),
que produzido a partir da cpia de RNA de
sentido antigenmico. A traduo deste mRNA
tambm resulta na produo de uma poliprote-
na, cuja clivagem seqencial resulta nas prote-
nas estruturais.
598 Captulo 23
4 Replicao
Os alfavrus replicam em uma variedade
de linhagens celulares, incluindo clulas BHK-
21 (baby hamster kidney cells), Vero (African green
monkey kidney), alm de cultivos primrios de
embries de galinha (CEF) e de pato. A replicao
viral nessas clulas produz altos ttulos de vrus
e acompanhada de citopatologia severa e mor-
te celular. A replicao em clulas de mosquitos,
por outro lado, geralmente no acompanhada
de citopatologia ou alteraes aparentes na sio-
logia celular, a exemplo do que ocorre in vivo. A
infeco natural em mosquitos persistente, sem
alteraes evidentes na siologia do vetor. Clu-
las C6/36, derivadas de Aedes albopictus, tambm
so rotineiramente utilizadas para amplicar os
alfavrus em laboratrio.

Os alfavrus so capazes de infectar vrias
espcies in vivo e diferentes tipos de clulas in vi-
tro. Para isso, provavelmente so capazes de uti-
lizar diferentes receptores para iniciar a infeco.
Alternativamente, podem utilizar um nico re-
ceptor, mas que esteja presente em todas as esp-
cies e clulas que infectam. O SIN parece utilizar
receptores distintos em diferentes linhagens: o
receptor de alta anidade da laminina em clulas
BHK-21 e em outras clulas de mamferos; uma
protena de 63 kDa em clulas de CEF e protenas
com 10 e 74 kDa em clulas de neuroblastoma de
camundongos. Molculas do complexo maior de
histocompatibilidade (MHC) tm sido identi-
cadas como receptores para o SFV em clulas de
mamferos.
A penetrao do vrus envolve a interao
inicial da protena E2 e/ou E1 com os receptores
na superfcie celular, seguida de internalizao
dos vrions por endocitose. Anticorpos contra a
E2 possuem atividade neutralizante, indicando a
importncia desta glicoprotena no processo de
ligao e/ou penetrao. A penetrao dos nu-
cleocapsdeos no citoplasma ocorre aps a fuso
do envelope viral com a membrana dos endosso-
mos, o que ocorre sob pH baixo (pH 5 a 6). Clas-
sicamente, foi demonstrado que a penetrao
dos nucleocapsdeos no citoplasma ocorre aps
a fuso do envelope viral com a membrana dos
endossomos sob pH baixo (pH 5 a 6), o que classi-
caria esses agentes como vrus ph-dependentes.
Recentemente foi demonstrado um mecanismo
alternativo (ou adicional) de penetrao do vrus
SIN em clulas de mamferos. Esse mecanismo
envolveria a formao de estruturas semelhantes
a poros, pela protena E1, na membrana plasm-
tica. Esses poros permitiriam a ejeo do genoma
diretamente no citoplasma, sem a penetrao do
nucleocapsdeo como um todo, a exemplo do que
ocorre em alguns vrus sem envelope (poliovrus).
As alteraes conformacionais na E1 necessrias
para a ocorrncia desse processo necessitariam
pH baixo, mas a penetrao do genoma ocorreria
NsP1 NsP2 NsP3 NsP4 C E3 E2
3' 5'
E1
Aproximadamente 12 kb
RNA 26S
Sntese de
RNA (-)
Capping
Helicase
Protease
Sntese de
RNA (+)
Polimerase/
replicase
Capsdeo
Glicoprotenas do
envelope
A(n) Cap
m
Figura 23.2. Estrutura e organizao do genoma dos alfavrus. As provveis funes dos produtos esto apresentadas
abaixodecadagene.
Fonte: adaptada de Schlesinger e Schlesinger (1996).
Togaviridae 599
a pH prximo do neutro. A fuso/penetrao em
clulas de insetos parece no depender da acidi-
cao dos endossomos. O desnudamento pro-
vavelmente ocorra pela interao das protenas
do nucleocapsdeo com os ribossomos da clula
hospedeira. No caso do mecanismo recentemente
descrito (formao de poros), o genoma j des-
provido da maioria das protenas do nucleocap-
sdeo seria ejetado no citosol.
A primeira etapa aps o desnudamento a
traduo direta de parte do RNA genmico pelos
ribossomos. A traduo da ORF dos genes das
protenas no-estruturais (localizada nos dois
teros do genoma prximos extremidade 5) re-
sulta na produo de uma poliprotena que cli-
vada medida que vai sendo produzida, dando
origem s protenas no-estruturais nsP1, nsP2,
nsP3 e nsP4 (Figura 23.3). Tem sido demonstra-
do que a clivagem do precursor nsP1-nsP2-nsP3
ocorre mais tardiamente, ao contrrio da cliva-
gem da nsP4, que parece ocorrer imediatamente
aps a sua produo. No vrus SIN, a atividade
polimerase foi mapeada na nsP4, que possui uma
seqncia GDD presente em vrias RNA poli-
merases virais. Um complexo formado pela nsP4
e por outras nsPs responsvel pela replicao
do genoma (complexo replicase), que ocorre via
sntese de uma molcula de RNA de sentido an-
tigenmico (polaridade negativa). Esta molcula
serve inicialmente de molde para a transcrio
dos mRNAs subgenmicos (26S). A nsP2 parece
atuar na regulao da sntese da cadeia negativa
de RNA e na iniciao da sntese do mRNA sub-
genmico, alm de possuir atividade de protease.
A nsP1 possui atividade de metil-transferase.
Os mRNAs subgenmicos (26S) so tradu-
zidos, originando uma poliprotena que , ento,
clivada, dando origem s protenas estruturais
Genes protenas no-estruturais Genes protenas estruturais
5 3
Cap A (n)
Poliprotena
Traduo
NSP1 NSP2 NSP3 NSP4
Clivagem
Replicao
5 3
RNA antigenmico (negativo)
Transcrio
Cap A (n)
RNA subgenmico
Traduo
Poliprotena
C Precursor
Clivagem
Clivagem
Clivagem
E3 E2
E1
Processamento
co- e ps-traduo
Precursor
Genoma
m
Figura 23.3. Estratgia deexpressognicae replicaodogenoma dos alfavrus.
600 Captulo 23
do capsdeo (pC) e s glicoprotenas do envelope
E1 e E2 (e E3 em alguns vrus) (Figura 23.3). As
glicoprotenas so sintetizadas pelos ribossomos,
associados membrana do retculo endoplas-
mtico rugoso (RER). Aps a sua sntese como
uma poliprotena precursora (E3-E2-E1), essas
glicoprotenas sofrem extensivas modicaes
ps-traducionais (glicosilao, acilao) no RER e
no aparelho de Golgi. Parte dessas alteraes e o
processamento proteoltico nal, que resulta nas
glicoprotenas individuais, ocorre no interior de
vesculas durante o transporte para a membrana
plasmtica, onde essas protenas sero inseridas.
O RNA antigenmico tambm serve de mol-
de para a sntese de cpias com a sua extenso
total, que correspondem ao RNA genmico. Es-
sas cpias podem servir de molde para outros
ciclos de traduo e transcrio, e sero, eventu-
almente, encapsidadas. O complexo replicase
responsvel pela sntese do RNA antigenmico,
dos mRNAs subgenmicos e das cpias genmi-
cas do RNA.
A montagem dos nucleocapsdeos ocorre as-
sociada com membranas no citoplasma, pela con-
jugao do RNA genmico recm-formado com
mltiplas cpias da protena C. Os nucleocaps-
deos so transportados at a membrana plasm-
tica, onde interagem com as caudas das glicopro-
tenas recm-inseridas e completam a maturao
por brotamento. O ciclo replicativo ocorre intei-
ramente no citoplasma (Figura 23.4).
Ncleo
Citoplasma
1
2
3
4
7b
7a
9
10
11
5
6
8
10
H+ H+
Figura 23.4. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo dos alfavrus. 1) Ligao nos receptores celulares; 2)
Internalizao por endocitose mediada por clatrina; 3) Penetrao e desnudamento; 4) Traduo parcial do genoma e
produo das protenas no-estruturais (nsPs); 5) Sntese do RNA antigenmico; 6) Transcrio da regio das
protenas estruturais e produo do mRNA subgenmico (26S); 7) Traduo do mRNA 26S produzindo as protenas
do capsdeo (7a) e do envelope (7b). 8) Sntese do RNA genmico; 9) Morfognese dos nucleocapsdeos; 10)
Togaviridae 601
Em clulas de vertebrados, a replicao dos
alfavrus acompanhada por uma supresso na
sntese de macromolculas celulares. Isso produz
distrbios severos e irreversveis na siologia,
que resultam inevitavelmente na morte celular.
Em clulas de inseto, o brotamento e maturao
ocorrem em membranas internas, e no na mem-
brana plasmtica. Os vrions recm-formados so
transportados no interior de vesculas e liberados
no meio extracelular por exocitose, sem causar
lise celular.
A estratgia de expresso gnica e replica-
o dos alfavrus e ciclo replicativo esto ilustra-
dos nas Figuras 23.3 e 23.4, respectivamente.
A exemplo de outros vrus RNA, os alfavrus
apresentam uma alta taxa de mutaes e tambm
esto propensos a recombinaes no genoma. Es-
sas mutaes e recombinaes possuem impor-
tncia na evoluo desses vrus e algumas delas
tm sido associadas com alteraes de patogeni-
cidade. Os VEEV epizoticos, capazes de produ-
zir altos nveis de viremia e infeco neurolgica
em eqinos e humanos, surgem esporadicamente
a partir de mutaes no genoma dos vrus enzo-
ticos. Evidncias genticas indicam que o WEEV
surgiu por recombinao entre o EEEV e um v-
rus semelhante ao SIN.
5 Epidemiologia
Os alfavrus so mantidos na natureza por
meio de ciclos alternados em hospedeiros verte-
brados e mosquitos. Os mosquitos se infectam
durante o repasto sangneo em hospedeiros vi-
rmicos. Aps um perodo de replicao nos te-
cidos do inseto, o agente transmitido a outro
hospedeiro pela inoculao de saliva contamina-
da. O vrus, ento, replica no hospedeiro, produ-
zindo viremia e, s vezes, enfermidade.
Os alfavrus apresentam um amplo espectro
de hospedeiros in vivo e in vitro. Uma grande va-
riedade de vertebrados (mamferos e aves) e inse-
tos susceptvel infeco natural e experimental
por esses vrus. Os hospedeiros naturais dos alfa-
vrus so as aves (vrias espcies), pequenos ma-
mferos (principalmente roedores e marsupiais)
e primatas. Infeces naturais j foram relatadas
em morcegos e em outros mamferos pequenos.
Os eqdeos tambm so freqentemente infecta-
dos por vrias espcies de alfavrus, embora o seu
papel na epidemiologia da maioria deles perma-
nea controverso. As conseqncias da infeco
natural nas espcies hospedeiras variam desde
infeces subclnicas agudas ou crnicas (aves,
insetos) at enfermidades fatais. A capacidade
de hospedeiros vertebrados servirem de fonte de
infeco e participarem do ciclo de transmisso
do agente depende dos nveis de viremia e da
preferncia especca dos insetos hematfagos.
O ciclo natural dessas infeces geralmente no
envolve humanos ou animais domsticos, que
so hospedeiros acidentais e no participam da
transmisso e manuteno do agente na natureza
(Figura 23.5).
Ciclo natural
Hospedeiros
acidentais
Hospedeiros
acidentais
Figura 23.5. Histria natural dos alfavrus. Vrias espcies de aves silvestres so os hospedeiros naturais do vrus,
enquantoaves e mamferos domsticos, almdohomem, sohospedeiros acidentais.
602 Captulo 23
As interaes especcas entre os vrus, ve-
tores e hospedeiros vertebrados tendem a con-
nar cada espcie de vrus a determinadas reas
geogrcas ou nichos ecolgicos. Essa delimita-
o geogrca, no entanto, no absoluta e, oca-
sionalmente, esses vrus podem ser encontrados
fora de seus nichos ecolgicos naturais. Isso tem
ocorrido nas epizootias causadas pelo VEEV, que
atingiram o Mxico e Sul dos Estados Unidos; e
tambm com o EEEV e WEEV, que tm sido fre-
qentemente identicados em regies remotas
da Amrica Central e do Sul. Sobreposio de
reas de ocorrncia de mais de uma espcie de
vrus tambm tem sido demonstrada para os v-
rus da VEE.
6 As encefalites eqinas
(ou encefalomielites eqinas)
Vrios alfavrus so associados com infeco
e enfermidade do sistema nervoso central (SNC)
de eqinos (ver Tabela 23.1). Na maioria dos ca-
sos, esses animais so hospedeiros acidentais (ou
terminais) e no participam do ciclo de transmis-
so desses vrus. Embora alguns alfavrus do Ve-
lho Mundo possam causar encefalite, os alfavrus
das Amricas que esto mais freqentemente
envolvidos em epizootias em eqinos e so de-
nominados genericamente de vrus das encefalites
eqinas. Esse complexo de vrus abrange os vrus
das encefalites do Leste (EEEV), Oeste (WEEV) e
venezuelana (VEEV). As infeces por esses vrus
possuem certa delimitao geogrca, sobretudo
por condies ecolgico-ambientais que propor-
cionam interaes do agente com seus hospedei-
ros naturais e insetos vetores. No obstante, esses
vrus so freqentemente detectados fora de suas
regies originais, o que demonstra que os limi-
tes geogrcos de sua distribuio so tnues e
relativos.
A abrangncia geogrca dos vrus do com-
plexo VEEV maior e compreende desde o Norte
da Argentina at os EUA, com atividade viral no-
tadamente maior no Norte e Noroeste da Am-
rica do Sul, Amrica Central e Mxico. Nas l-
timas dcadas, epizootias/epidemias associadas
ao VEEV tm vitimado centenas de milhares de
eqinos e milhares de pessoas nas Amricas. Em
contraste, a EEE e a WEE possuem importncia
predominantemente regional nos EUA (embora
essas viroses j tenham sido detectadas em ou-
tros pases, inclusive no Brasil) e o nmero de ca-
sos (eqinos e humanos) tem sido muito menor.
A ecologia dessas viroses tem vrios aspectos em
comum, porm difere em relao aos hospedei-
ros naturais, vetores e participao dos eqinos
no ciclo de transmisso do vrus.
As infeces pelos alfavrus das encefali-
tes eqinas tm sido detectadas no Brasil desde
o incio do sculo XX. O EEEV j foi isolado de
eqinos nos estados de So Paulo, Pernambuco,
Bahia, Minas Gerais e Rio de Janeiro; e o WEEV j
foi isolado de cavalos no estado do Rio de Janeiro.
A presena desses dois vrus na regio Amazni-
ca foi demonstrada por sorologia e/ou por isola-
mento do agente de eqinos, mosquitos, aves e
mamferos silvestres. A infeco pelo EEEV tem
sido demonstrada por exames sorolgicos em
pessoas no Vale do Ribeira (SP), em aves e eqi-
nos do Pantanal (MS) e na Mata Atlntica (SP). O
VEEV tambm foi isolado de primatas na regio
Amaznica e de mosquitos e morcegos na regio
Sudeste do Pas. No nal da dcada de 1990, o
VEEV foi associado a um surto de encefalite em
cavalos no Paran. Outros estudos sorolgicos
tm demonstrado a circulao desses e de ou-
tros arbovrus em vrias regies do Brasil, prin-
cipalmente nas regies Sudeste (Mata Atlntica),
Centro-Oeste (Pantanal Mato-grossense) e Norte
(Amaznia).
Pela sua importncia e impacto em sade
animal e pela sua abrangncia, que atinge boa
parte do territrio brasileiro, este captulo abor-
dar, com mais detalhes, a encefalite eqina ve-
nezuelana (VEE). As encefalites oeste (WEE) e
leste (EEE) sero abordadas resumidamente no
nal.
6.1 Encefalite eqina venezuelana
Os agentes da encefalite eqina venezuela-
na (VEE) so os alfavrus mais importantes de
eqinos e humanos das Amricas. Surtos de do-
ena febril e encefalite tm sido freqentemente
Togaviridae 603
descritos na Amrica Latina nas ltimas dcadas,
envolvendo milhares de eqinos e humanos. Os
primeiros casos da enfermidade foram descritos,
em 1930, no Norte da Amrica do Sul, e afetaram
eqinos, asininos e muares. Entre 1938 e 1973,
vrios surtos de propores considerveis ocor-
reram a intervalos de aproximadamente 10 anos
no Norte e Noroeste do Continente Sul-America-
no. Um surto de propores maiores ocorreu na
Amrica Central e Mxico entre 1969 e 1972, afe-
tando e matando milhares de eqdeos e centenas
de pessoas. Um esforo internacional integrado
conseguiu controlar o surto em 1972. A ausncia
de relatos da doena na regio, entre 1973 e 1992,
levantou a suspeita de uma possvel extino dos
agentes. No entanto, vrios casos foram descritos
na ltima dcada, reacendendo as discusses so-
bre a enfermidade e colocando-a entre as princi-
pais doenas emergentes de animais e humanos
das Amricas.
Surtos de menores propores, atingindo
eqinos e humanos, foram descritos na Venezue-
la em 1992. No Mxico, os eventos mais recentes
afetaram apenas eqinos. Em 1993, foram relata-
dos 125 casos, resultando em 63 mortes; em 1996,
32 eqinos foram afetados e 12 morreram. Desde
ento, casos espordicos em cavalos tm sido des-
critos no Mxico e em pases da Amrica Central,
conrmando o carter enzotico da infeco.
O surto de maior proporo ocorreu em
1995 e atingiu entre 75.000 e 100.000 pessoas
(mais de 300 mortes) e milhares de eqinos e
muares na Venezuela e Colmbia. As medidas
de emergncia incluram a vacinao de mais de
100.000 eqinos na Colmbia, combate aos veto-
res e restrio movimentao de animais. Esse
esforo impediu a disseminao da infeco na
direo sul. Nos anos de 1999, 2000 e 2003, pe-
quenos focos localizados de VEE foram relatados
em algumas regies da Venezuela. Embora com
menor freqncia e propores, casos espordi-
cos e inclusive surtos de VEE, tm sido descritos
em outros pases da Amrica do Sul. A histria
natural da enfermidade, incluindo a persistncia
do agente em reservatrios silvestres e a existn-
cia de condies ecolgico-epidemiolgicas apro-
priadas indicam que tais eventos continuaro a
ocorrer.
6.1.1 O agente
O VEEV pertence a um grupo de alfavrus
antigenicamente relacionados que compe o com-
plexo VEE. O complexo VEE abrange seis diferen-
tes subtipos e vrias espcies e variantes (Tabela
23.2). Esses vrus so agrupados de acordo com
a sua relao antignica, e cada grupo apresenta
virulncia e potencial epizotico distintos. Den-
tre esses, apenas os subtipos IAB e IC tm sido
associados com epizootias/epidemias e utilizam
eqinos para a sua amplicao e disseminao
e, por isso, so denominados VEEV epizoticos.
Os outros sorotipos (ID e IE) e os demais vrus
do complexo VEE possuem ocorrncia enzotica
e so geralmente avirulentos para a espcie eqi-
na. Os vrus enzoticos so mantidos por meio de
ciclos de infeco em pequenos mamferos e in-
setos em orestas ou regies pantanosas, so avi-
rulentos para eqinos e parecem no utilizar essa
espcie para amplicao e manuteno.
As caractersticas morfolgico-estruturais e
o esquema geral de replicao do VEEV parecem
no diferir muito do que foi estabelecido para os
vrus prottipos SIN e SFV. O VEEV utiliza a pro-
tena ligante da laminina como receptor celular,
mas passagens mltiplas em cultivo podem sele-
cionar mutantes da glicoprotena E2 capazes de
se ligar ao sulfato de heparina. O VEEV apresen-
ta um estreito espectro de vetores susceptveis,
cada espcie de vrus sendo capaz de replicar em
uma ou poucas espcies de mosquitos.
6.1.2 Epidemiologia
A distribuio dos subtipos do complexo
VEEV nas Amricas, de acordo com os surtos
ocorridos no ltimo sculo, est apresentada na
Figura 23.6. Os vrus enzoticos so mantidos
perenemente em ciclos silvestres silenciosos (sem
causar doena em espcies domsticas) nas o-
restas e regies pantanosas da Amrica Central
e Norte-Noroeste da Amrica do Sul. Os VEEV
epizoticos tm sido associados com epizootias
peridicas em eqinos, algumas vezes associadas
com epidemias em humanos, principalmente no
Norte e Noroeste da Amrica do Sul. As reas
604 Captulo 23
de ocorrncia de cada sorotipo so exclusivas e
auto-excludentes e estendem-se desde o Norte da
Argentina at as Montanhas Rochosas nos EUA.
Uma exceo a ocorrncia concomitante de trs
subtipos (IC, IIIC e IIID) na Floresta Amaznica
peruana. A especicidade das interaes entre as
diferentes espcies de vrus, seus vetores e hos-
pedeiros naturais, aliada existncia de barreiras
naturais pode explicar a delimitao geogrca
dessas viroses. No entanto, alguns subtipos ou
variantes tm sido ocasionalmente identicados
fora de seus nichos ecolgicos originais.
Pelo menos dez espcies de mosquitos po-
dem participar da epidemiologia e transmisso
dos vrus da VEE, incluindo os gneros Culex sp.
e Aedes sp., e a ecincia de transmisso varia en-
tre as diferentes espcies de vetor e de vrus. Os
hospedeiros naturais dos vrus do complexo VEE
so pequenos mamferos (principalmente roedo-
res). Os vrus enzoticos so mantidos na natu-
reza por ciclos alternados nessas espcies e em
mosquitos. Os roedores parecem desempenhar
um papel preponderante como hospedeiros des-
ses vrus nas diversas regies de ocorrncia. Pe-
quenos marsupiais e morcegos tambm tm sido
sugeridos como possveis hospedeiros. Embora
as aves no possuam papel importante como re-
servatrios, pssaros costeiros podem participar
da disseminao desses agentes. Os vrus enzo-
ticos geralmente no causam doena em eqinos;
no entanto, casos espordicos de doena febril
e, ocasionalmente, encefalites tm sido descritos
em humanos.
A origem dos VEEV epizoticos, associados
com surtos peridicos de encefalite em eqinos
e humanos, constituiu-se em um tema de inten-
sas investigaes durante dcadas. As epizootias
ocorriam aproximadamente a cada dez anos, sem
atividade viral detectvel nos intervalos entre os
surtos. Uma caracterstica comum dessas epizoo-
tias era a participao de eqinos na amplicao
do vrus. Embora humanos, ovinos, ces, roedo-
Espcie
(vrus)
Variante
Patgeno
eqino
Distribuio Vetor Subtipo
Padro de
transmisso
VEEV AB Epizotica Sim
Amricas (Sul,
Mosquitos mamiferoflicos
VEEV C Epizotica Sim Amrica do Sul Mosquitos mamiferoflicos
VEEV D Enzotica No Amrica do Sul e Central
C.aikenii; C.vomerifer,
C.pedroi,C. adamesi
VEEV E Enzotica Varivel Amrica Central e Mxico C.taeniopus
Mosso das
Pedras
F Enzotica ? Brasil
Desconhecido
Everglades Enzotica No Sul da Flrida (EUA) C.cedecei
Mucambo A Enzotica No Amrica do Sul C.portesi
Tonate Enzotica ? Amrica do Sul e do Norte Oecieus vicarius B (Bijou
Mucambo
C
(71D1252)
Enzotica ? Oeste do Peru Desconhecido
Mucambo
D
(V407660)
Enzotica ? Oeste do Peru Desconhecido
Pixuna Enzotica ? Brasil Desconhecido
Cabassou Enzotica ? Brasil Desconhecido
I
II
III
Rio Negro Enzotica ? Norte da Argentina C. delpontei
IV
V
VI
Fonte: adaptado de Weaver et al. (2004)
Tabela23.2. Alfavrus docomplexoVEEV, padres detransmisso, espcies afetadas, vetores e distribuio
Togaviridae 605
res, morcegos e algumas espcies de aves sejam
susceptveis aos VEEV epizoticos. Em todas
as epidemias reportadas havia o envolvimento
preponderante de eqinos. Evidncias recentes
indicam que os VEEV epizoticos surgem espo-
radicamente a partir de mutaes de VEEV en-
zoticos (principalmente do tipo ID), ou seja, os
VEEV enzoticos, avirulentos e pouco capazes
de serem amplicados em eqinos seriam man-
tidos na natureza atravs de ciclos alternados em
pequenos mamferos e insetos. Mutaes espor-
dicas nesses vrus resultariam em variantes com
espectro de hospedeiro e virulncia alterados
(VEEV epizoticos), capazes de serem ampli-
cados e causarem doena grave em eqinos (Fi-
gura 23.7). O surgimento de VEEV epizoticos a
partir de vacinas mal inativadas tambm parece
ter contribudo para algumas epizootias. Recen-
temente foi demonstrado que os VEEV epizoti-
cos podem se manter na natureza por vrios anos
aps o trmino das epizootias, embora o meca-
nismo de persistncia ainda no tenha sido de-
terminado. Infeces agudas ou persistentes em
outras espcies animais (bovinos, roedores) e a
utilizao de outros artrpodes como vetores tm
sido sugeridos para explicar essa persistncia. A
1971 subtipo IAB
1925-38, 1941-3, 1949, 1959, 1968-9, 1973 subtipo IAB
1962-4, 1992-3, 1995 subtipo IC
1993, 1996
subtipo IE
1969-1972
subtipo IAB
1952, 1967-68 subtipo IAB
1925-1946, 1950, 1958, 1969,
1973 subtipo IAB
1942-1946
subtipo IAB
Figura 23.6. Ocorrncia e distribuio de surtos associados com os diferentes subtipos do complexo VEEV nas
Amricas.
Fonte: adaptada de Weaver et al. (2004).
606 Captulo 23
transmisso vertical do vrus prognie, atravs
da infeco dos ovos, pode contribuir para a ma-
nuteno do vrus na populao de mosquitos.
Uma vez gerados por mutaes dos vrus
enzoticos, os VEEV epizoticos podem utilizar
uma variedade de espcies de mosquitos para a
sua disseminao. Devido ampla e rpida dis-
seminao que ocorre entre eqinos e proximi-
dade desses animais com humanos, as epizootias
esto freqentemente associadas com epidemias
em pessoas. Esses episdios tm apresentado
dimenses variveis desde casos isolados at
dezenas de milhares de casos. Embora possvel,
a participao de humanos na amplicao e
disseminao dos VEEV nas grandes epidemias
parece ser limitada, devido exposio restrita
dos humanos aos mosquitos vetores. No entan-
to, o potencial de disseminao dos VEEV epi-
zoticos por mosquitos urbanos, como o Aedes
aegypti, no deve ser negligenciada. Uma grande
epidemia que ocorreu nos arredores de Maracai-
bo (Venezuela) sugere que outros vetores e/ou
transmisso entre humanos possam ter partici-
pado da disseminao do agente. Outros inse-
tos (moscas, carrapatos e outros caros) podem,
ocasionalmente, participar da transmisso me-
cnica dos VEEV. Uma caracterstica nica que
diferencia os VEEV dos outros alfavrus a sua
alta infectividade em aerossis. Com isso, o vrus
poderia infectar hospedeiros por inalao. A im-
portncia dessa via de transmisso na epidemio-
logia da infeco desconhecida, porm parece
ser limitada.
e patologia
Aps a inoculao pela picada do mosqui-
to vetor, o vrus replica em tecidos prximos ao
local de inoculao e nos linfonodos regionais,
produzindo uma viremia primria. A replica-
o secundria ocorre em rgos linfides e em
tecidos musculares, resultando em uma viremia
secundria e eventual invaso do crebro. O v-
rus tambm pode replicar no trato respiratrio
superior, pncreas e fgado. A partir do sangue, o
vrus pode invadir o crebro por transporte pas-
sivo atravs do endotlio vascular, replicao nas
clulas endoteliais, infeco do plexo coride e
epndima e/ou por transporte no interior de mo-
Ciclo
Enzotico
Ciclo
Epizotico
Mutao/
seleo
Figura 23.7. Histria natural e epidemiologia dos VEEVenzoticos e epizoticos.
(-)
Togaviridae 607
ncitos e linfcitos. Em animais de laboratrio, o
VEEV parece utilizar vias nervosas para invadir
o encfalo a partir da cavidade nasal ou de stios
perifricos.
Diferentemente de outros alfavrus, os stios
preferenciais de replicao do VEEV fora do SNC
so os rgos linfides. A replicao do VEEV
est associada com depleo linfide na medula
ssea e destruio de linfcitos nos linfonodos e
bao. Os quadros de encefalite so acompanha-
dos por vrias alteraes histopatolgicas que
incluem inltrao neutroflica, degenerao
neuronal, vasculite necrosante e destruio de
clulas de Purkinge.
A patologia da infeco pelo VEEV tem sido
estudada mais detalhadamente em animais de la-
boratrio como hamsters, cobaias e camundongos.
Aps um perodo de viremia, o vrus eliminado
do sangue e tecidos perifricos aps 4 a 5 dias.
A depleo linfide geralmente passageira, e
os rgos linfides afetados retornam sua apa-
rncia e constituio quase normais aps poucos
dias. O vrus pode ser detectado no crebro entre
o 2 e 3 dia aps a inoculao intranasal e parece
atingir o encfalo atravs dos nervos olfatrios.
A invaso do encfalo aps inoculao perifrica
tambm parece ter a participao de vias nervo-
sas. No encfalo, os principais alvos do vrus so
os neurnios, e quadros de encefalite clssica,
com manguitos perivasculares e inltrao linfo-
citria, so freqentes.
A infeco pelos vrus do complexo VEE
tanto em eqinos como em humanos pode es-
tar associada a uma variedade de manifestaes,
indo desde infeces subclnicas at encefalite de
curso fatal. Os sorotipos enzoticos (I-E, II, III e
IV) so avirulentos para eqinos e, geralmente,
produzem nveis baixos de viremia, sem produ-
zir sinais clnicos. Alguns VEEV enzoticos po-
dem ser virulentos para humanos. Os sorotipos
epizoticos (IAB e IC), geralmente, produzem al-
tos ttulos de viremia em eqinos e so virulentos
para essa espcie e para humanos.
A infeco em humanos, geralmente, resul-
ta em doena febril com sinais clnicos sistmi-
cos (hipertermia, calafrios, letargia, cefalia). O
envolvimento do sistema nervoso central (ence-
falite) ocorre apenas esporadicamente (menos de
0,5% dos adultos e at 4% das crianas) e mais
leve do que os quadros associados com o EEEV e
WEEV. Os sinais iniciais de letargia, sonolncia e
confuso mental leve podem progredir para ver-
tigens, ataxia, rigidez na nuca, paralisia e coma,
em casos severos. Em epidemias com sorotipos
epizoticos altamente neurovirulentos, quadros
de encefalite podem ser observados em 4 a 14%
das pessoas infectadas.
A infeco de eqinos com os VEEV epizo-
ticos seguida do aparecimento de sinais clni-
cos sistmicos (hipertermia, depresso, taquicar-
dia, anorexia) entre o 2 e 5 dia ps-infeco. O
percentual de animais que evolui para a infeco
neurolgica e morte varivel e parece estar di-
retamente relacionado com o nvel de viremia
produzido. Os VEEV epizoticos, geralmente,
produzem altos ttulos de viremia, o que parece
ser raro entre os vrus enzoticos. Isso sugere que
a neurovirulncia est associada com a capacida-
de do vrus de replicar em tecidos extraneurais e,
a partir da, invadir o crebro.
A progresso da enfermidade sistmica para
a morte, sem a ocorrncia de manifestaes neu-
rolgicas, relativamente freqente. Nos animais
que evoluem para a infeco neurolgica, os si-
nais especcos geralmente so observados de 5
a 10 dias aps a infeco. Esses animais podem
apresentar incoordenao motora, andar em cr-
culos, cegueira parcial, fotofobia, diculdade de
deglutio, bruxismo e hiperexcitabilidade. Em
fases avanadas, podem ocorrer ataxia, parali-
sia, decbito e convulses. Em infeces experi-
mentais, a morte ocorre aproximadamente sete
dias aps o incio dos sinais clnicos. Em surtos
naturais causados por VEEV epizoticos, a taxa
de letalidade pode atingir 50 a 70% dos animais
acometidos. Os animais que se recuperam podem
permanecer com seqelas neurolgicas. Outros
animais domsticos, como ces, caprinos, ovinos
e coelhos, tambm so freqentemente afetados
durante as epizootias e podem desenvolver do-
ena febril e encefalite fatal.
6.1.4 Imunidade
A infeco natural pelo VEEV induz imuni-
dade de longa durao, provavelmente por toda
a vida do animal. A proteo contra vrus heter-
logos pode ocorrer e depende do grau de simila-
ridade antignica entre os vrus.
608 Captulo 23
Durante a infeco aguda, o aparecimento
de anticorpos neutralizantes coincide com o de-
saparecimento do vrus do sangue, indicando a
importncia desses anticorpos na resoluo da
viremia e na recuperao da doena clnica. Em
exposies subseqentes, os anticorpos neutra-
lizantes parecem desempenhar um papel im-
portante na preveno e limitao da replicao
viral. Acredita-se que os linfcitos T citotxicos
tambm desempenhem um papel importante, so-
bretudo, na resoluo da infeco primria.
6.1.5 Diagnstico
O diagnstico da enfermidade em eqinos
deve considerar os aspectos clnicos (doena sis-
tmica progressivamente grave, podendo estar
associada com sinais neurolgicos), epidemiol-
gicos (histrico da doena na regio, presena e
exposio a mosquitos vetores, outros eqinos
afetados). Sinais tpicos de encefalite em regies
endmicas devem ser considerados potencial-
mente suspeitos de infeco pelo VEEV e investi-
gados. No entanto, quadros de encefalite bem ca-
racterizados nem sempre esto presentes, o que
pode confundir a suspeita inicial. Alm disso,
animais infectados pelo VEEV tambm podem
morrer subitamente, sem manifestar sinais clni-
cos evidentes.
A enfermidade causada pelo VEEV pode ser
confundida com outras doenas que produzem
manifestaes neurolgicas, como as encefalites
do oeste (WEE) e do leste (EEE), pelo vrus do
Nilo Ocidental (WNV), peste eqina, ttano, rai-
va, meningite bacteriana e algumas intoxicaes.
Essas doenas devem ser consideradas para o
diagnstico diferencial.
O diagnstico denitivo requer a realizao
de testes sorolgicos e/ou isolamento e identi-
cao do vrus e/ou de antgenos virais. O diag-
nstico laboratorial mais empregado em eventos
epidmicos a sorologia. Testes imunoenzimti-
cos de captura (ELISA), para detectar imunoglo-
bulinas da classe IgM especcas para o VEEV,
so utilizados no diagnstico da infeco aguda.
A conrmao pode ser realizada por testes de
soro-neutralizao (SN) ou inibio da hemaglu-
tinao (HI) com amostras pareadas de soro.
O isolamento do vrus de animais doentes
difcil, pois a viremia geralmente transitria.
Em animais que morrem ou so sacricados, ten-
tativas de isolamento do vrus do crebro podem
produzir bons resultados. Inoculao intracere-
bral em camundongos lactentes ou em clulas
de cultivo (Vero, BHK-21) so os mtodos mais
utilizados em tentativas de isolamento do agen-
te. Tcnicas moleculares de deteco de cidos
nuclicos virais (RT-PCR) ou protenas (imunois-
toqumica) tm sido implementadas na rotina la-
boratorial e permitem a deteco do agente em
uidos corporais, em tecidos frescos ou xados.
Em casos de isolamento positivo (efeito cito-
ptico nos cultivos, doena neurolgica e morte
nos camundongos), o agente deve ser identica-
do por tcnicas imunolgicas, utilizando-se anti-
corpos monoclonais ou policlonais especcos. A
diferenciao entre sorotipos particularmente
importante para diferenciar-se entre os VEEV
enzoticos e epizoticos. Nesses casos, a diferen-
ciao pode ser realizada por testes de HI e SN
ou por seqenciamento de regies especcas do
genoma.
A medida mais eciente para prevenir a
ocorrncia de casos de VEE em regies endmi-
cas a vacinao sistmica de eqinos. Progra-
mas ociais de vacinao com distribuio gra-
tuita de vacinas tm sido implementados durante
e aps os surtos na Venezuela, Colmbia e M-
xico. Esses programas tm sido ecientes para
limitar a circulao de vrus e a ocorrncia da
doena. Infelizmente, esses programas no so
mantidos por longo tempo aps os surtos. Como
conse qncia, a imunidade da populao se re-
duz gradativamente e atinge nveis baixos em 5 a
10 anos e tambm pela substituio gradativa dos
animais imunizados.
A vacina viva modicada TC-83 tem sido
amplamente utilizada em vrios pases da Am-
rica Latina e produz imunidade rpida e dura-
doura. Essa vacina foi obtida por 83 passagens do
VEEV em clulas de corao suno e produzida
no Mxico, Venezuela e Colmbia. utilizada
para vacinar eqinos durante surtos e tambm
Togaviridae 609
em perodos sem atividade viral detectvel e tam-
bm para vacinar tcnicos de laboratrio que tra-
balham com o agente. Uma verso multivalente
inativada da TC-83, contendo tambm antgenos
do EEEV e WEEV, tem sido utilizada nos EUA e
em alguns pases da Amrica do Sul. A imunida-
de induzida por essa vacina deixa a desejar e, por
isso, no recomendada para regies endmicas.
Recentemente, uma vacina geneticamente mani-
pulada (cepa 3526) foi desenvolvida e, provavel-
mente, ir substituir a TC-83, tanto para eqinos
como para humanos.
A limitao do movimento de eqinos du-
rante os surtos no tem sido efetiva no controle
desses eventos, pois os animais so assintom-
ticos durante um a trs dias aps a infeco. O
controle de mosquitos por inseticidas aplicados
por via area foi utilizado em alguns surtos que
apresentam envolvimento humano. A preveno
da infeco humana pode ser obtida evitando-se
a exposio aos mosquitos vetores e pelo uso de
repelentes. Essas medidas so particularmente
importantes para pessoas que vivem ou traba-
lham nas proximidades de eqinos em regies
endmicas com grande atividade dos vetores
(vrzeas, orestas) e durante os surtos.
6.2 Encefalite eqina do leste
O vrus da EEE um dos membros do com-
plexo das encefalites eqinas, antigenicamente
relacionado, mas distinto do VEEV e WEEV. O
agente tem sido identicado no Norte da Amri-
ca do Sul, Brasil, Amrica Central e Caribe, mas
a infeco ocorre, principalmente, em vrzeas e
regies pantanosas prximas ao litoral do ocea-
no Atlntico e Golfo do Mxico no Sudeste dos
Estados Unidos. O EEEV j foi esporadicamen-
te detectado em reas continentais mais internas
dos Estados Unidos. O envolvimento humano
espordico, com apenas 163 casos tendo sido re-
portados nos EUA desde 1964. Por outro lado, os
eqinos e tambm criaes de aves domsticas
(faises e emas) tm sido freqentemente afeta-
dos. Outras espcies domsticas, como ces, tm
sido esporadicamente afetadas. Os vrus da EEE
so tradicionalmente classicados em variantes
antignicos norte e sul-americanas com base em
testes de HI.
6.2.1 Epidemiologia
O vrus mantido em reas alagadias de
gua salgada ou doce, prximas regio costeira,
em ciclos que envolvem vrias espcies de ps-
saros silvestres e uma espcie principal de mos-
quito, o Culiseta melanura. Esse mosquito se ali-
menta apenas em aves e no transmite o agente
a outros hospedeiros. As aves infectadas normal-
mente no desenvolvem enfermidade. O EEEV,
geralmente, aparece nas populaes de pssaros
no nal da primavera, amplicado pela trans-
misso entre pssaros durante o vero e atinge
nveis muito altos no nal do vero e no incio do
outono. Em algumas regies, como o sul do esta-
do de New Jersey, esse ciclo ocorre durante todo
o ano. Em alguns anos, a infeco permanece res-
trita aos pssaros sem o envolvimento de eqi-
nos e humanos. No entanto, sob certas condies
climticas, as populaes de vetores e vrus po-
dem ser amplicadas de tal maneira que propor-
cionem condies para que o vrus escape de seu
nicho ecolgico. Nessas situaes, mosquitos que
se alimentam em aves e em mamferos podem
adquirir o vrus ao se alimentar em aves duran-
te a fase virmica e transmiti-lo a outras espcies
(principalmente eqinos e humanos).
Os mosquitos de vrzeas de gua doce, Co-
quilletidia perturbans, e de gua salgada, Ochlero-
tatus sollicitans, so os principais transmissores
do agente aos eqinos, e parecem se constituir
no elo de ligao entre o ciclo silvestre e os ani-
mais domsticos. Os eventos de escape do vrus
de seu habitat e a transmisso a outras espcies
podem ocorrer em nveis baixos ao longo do ano,
mas so mais freqentes e epidemiologicamente
importantes da segunda metade do vero at o
incio do outono. Nessa poca, casos de enfermi-
dade em pessoas, eqinos e em outras espcies
de animais domsticos ocorrem com maior fre-
qncia. A transmisso aos eqinos ocorre exclu-
sivamente pela picada de mosquitos que haviam
previamente realizado repasto sangneo em
aves virmicas.
610 Captulo 23
Alm do envolvimento de eqinos, surtos
do EEEV tm sido descritos em criaes de fai-
ses, emas, frangos de corte, marrecos-de-pe-
quim e de algumas aves silvestres ameaadas de
extino. A infeco introduzida e transmitida
nessas criaes por mosquitos vetores. ndices
considerveis de morbidade, mortalidade e pre-
juzos econmicos tm sido relatados. Por isso,
vacinas de uso eqino tm sido utilizadas para
minimizar o impacto econmico e ecolgico des-
ses eventos.

A infeco em eqinos pode cursar com
uma variedade de manifestaes clnicas, que
vo desde infeco inaparente, doena sistmica
sem sinais neurolgicos, at doena neurolgica
e morte. O perodo de incubao de, aproxi-
madamente, cinco dias, aps o qual os animais
comeam a apresentar hipertermia, depresso,
anorexia, sonolncia e fraqueza. A doena neu-
rolgica mais pronunciada e severa do que nas
infeces pelo WEEV e VEEV e cursa com dis-
trbios visuais (cegueira parcial ou total), fotofo-
bia, bruxismo, disfagia, incoordenao motora,
pressionamento da cabea contra anteparos, an-
dar em crculos, ataxia, paralisia, coma e morte.
Irritabilidade e agressividade tambm podem
ocorrer. A taxa de letalidade pode atingir 90%.
Os animais que se recuperam aps um curso leve
podem apresentar seqelas neurolgicas. A pa-
tologia similar s outras encefalites, porm sem
o envolvimento do sistema linforreticular, como
observado na infeco pelo VEEV.
Em humanos, a infeco pode causar uma
variedade de manifestaes. A maioria dos indi-
vduos infectados no apresenta sinais clnicos;
uma parcela apresenta sinais inespeccos (hi-
pertermia, cefalia, calafrios, faringite); e poucos
demonstram envolvimento neurolgico, com
febre abrupta, cefalias severas, vertigens, rigi-
dez na nuca, coma e morte. Aproximadamente
a metade destes pacientes vai a bito. comum
(aproximadamente 35%) a ocorrncia de seqelas
neurolgicas permanentes nos indivduos que
sobrevivem doena neurolgica.
6.2.3 Diagnstico
O diagnstico clnico-epidemiolgico deve
ser conrmado por testes laboratoriais. A detec-
o de IgM na fase aguda por testes imunoenzi-
mticos o mtodo de eleio. Sorologia pareada
por SN ou HI tambm podem ser realizadas. O
isolamento do vrus do sangue dicultado pela
transitoriedade da viremia. Deteco de cidos
nuclicos virais no sangue ou em tecidos (por
PCR) e de protenas em cortes de tecidos conge-
lados ou paranizados (por imunoistoqumica)
tambm tm sido utilizados.
A vacinao de eqinos nas reas endmi-
cas o mtodo mais eciente de controle. Vacinas
monovalentes, bivalentes (+WEEV) e trivalentes
(WEEV+VEEV) inativadas tm sido utilizadas
nessas reas. No h vacinas para uso humano.
A preveno da infeco humana deve basear-se
na preveno exposio aos vetores e no uso de
repelentes nas reas endmicas.
6.3 Encefalite eqina do oeste
A WEE causada por um alfavrus (WEEV)
antigenicamente relacionado com o EEEV (84%
de homologia de aminocidos) e pertencente ao
mesmo grupo antignico do SIN. O WEEV pare-
ce ter se originado de recombinao entre o VEEV
e um vrus do grupo do Sindbis. Tanto o WEEV
como o EEEV apresentam uma alta freqncia
de mutaes e recombinaes. A caracterizao
gentica do WEEV tem sugerido que esses vrus
se originam de isolados enzoticos por mutaes
e seleo. Os vrus enzoticos so aparentemen-
te avirulentos para eqinos. A enfermidade foi,
inicialmente, descrita nos Estados Unidos em
1930. Em 1941, uma epizootia/epidemia atingiu
300.000 eqinos e mais de 3.000 pessoas. Desde
ento, eventos epidmicos de pequenas propor-
es ou casos isolados tm sido ocasionalmente
relatados. De 1964 at 2005, foram descritos 639
casos em pessoas. A maioria dos casos envolveu
pessoas que vivem ou adquiriram a infeco no
meio rural, habitat dos reservatrios naturais do
Togaviridae 611
agente. Embora j tenha sido detectada em ou-
tros pases das Amricas, a infeco pelo WEEV
ocorre principalmente nas plancies e vales do
Centro e Oeste dos EUA e Sul do Canad.

6.3.1 Epidemiologia
A expanso da agricultura irrigada nas pla-
ncies e vales da regio Central e Oeste dos EUA
e no Canad criou condies que favoreceram a
perpetuao do agente. O WEEV mantido em
ciclos alternados em pssaros e outras aves sil-
vestres (e tambm domsticas) e insetos. Os mos-
quitos do gnero Culex sp. parecem ser os princi-
pais vetores, embora os A. melanimon e A. dorsalis
tambm sejam vetores ecientes. A agricultura
irrigada e as condies climticas apropriadas
favorecem a ocorrncia de superpopulaes de
Culex tarsalis e a conseqente manuteno da in-
feco. Pssaros silvestres que se alimentam de
gros nessas lavouras constituem-se nos reser-
vatrios naturais e amplicadores do vrus. O
ciclo natural do agente envolve principalmente
pssaros, mas pode envolver tambm pequenos
mamferos silvestres. Os eqinos e humanos so
hospedeiros acidentais e parecem no participar
do ciclo de transmisso do agente. A capacidade
do WEEV em replicar em mosquitos a tempera-
turas relativamente baixas permite a ocorrncia
da infeco desde o incio do vero at incio do
outono, e tambm em algumas regies do Cana-
d.
A infeco de eqinos pelo WEEV pode
variar desde subclnica at encefalite de curso
fatal. O quadro de encefalite geralmente mais
freqente e mais caracterstico do que nas infec-
es pelo VEEV, mas geralmente menos severo
do que na infeco pelo EEEV. As manifestaes
clnicas so semelhantes. A patogenia e patolo-
gia so similares ao VEEV e EEEV, porm sem o
envolvimento linforreticular e sistmico (fgado,
bao e sistema respiratrio) observado nas infec-
es pelo VEEV. Os ndices de fatalidade podem
atingir entre 20 e 40% dos animais afetados.
A infeco humana acidental e geralmente
cursa de forma subclnica ou com sinais clnicos
leves (hipertermia, cefalia e sonolncia); rara-
mente ocorrem sinais neurolgicos severos, ence-
falite e coma. A doena geralmente mais branda
do que a associada com o EEEV, mas geralmen-
te mais grave em crianas, podendo atingir ndi-
ces de fatalidade de at 10%.
6.3.3 Diagnstico
O diagnstico clnico-epidemiolgico deve
ser conrmado por testes laboratoriais. Os mes-
mos procedimentos utilizados para o VEEV so
recomendados para a conrmao laboratorial
da infeco pelo WEEV.
A vacinao de eqinos com uma vacina
multivalente inativada (VEEV, EEEV e WEEV)
constitui-se na base dos programas de controle
em reas endmicas. A vacinao , geralmente,
realizada antes do vero, em duas doses, com in-
tervalo de 14 a 21 dias, seguidas de revacinaes
anuais. Em reas de atividade de vetores durante
o ano inteiro, os potros devem ser vacinados aos
3-6 meses de idade e revacinados anualmente.
No h vacinas disponveis de uso humano. Me-
didas de controle/preveno em reas endmi-
cas incluem a preveno exposio aos vetores
e/ou uso de repelentes. A maior atividade dos
vetores ocorre no crepsculo e durante a noite.
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CORONAVIRIDAE
Luciane Teresinha Lovato & Renata Dezengrini
24
1 Introduo
2 Classicao
4 Replicao
5 Coronavrus de interesse veterinrio
5.1 Vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos
5.1.1 Epidemiologia
5.1.2 Patogenia, patologia e sinais clnicos
5.1.3 Imunidade
5.1.4 Diagnstico
5.2 Coronavrus respiratrio dos sunos
5.3 Vrus da diarria epidmica dos sunos
5.4 Vrus da encefalomielite hemaglutinante dos sunos
5.5 Coronavrus felino e vrus da peritonite infecciosa dos felinos
5.5.1 Epidemiologia
5.5.3 Imunidade
5.5.4 Diagnstico
5.6 Coronavrus canino
5.6.1 Epidemiologia
5.6.3 Imunidade
5.6.4 Diagnstico
5.7 Coronavrus canino respiratrio
615
615
615
618
620
620
621
621
622
622
623
623
623
623
624
624
625
625
626
626
626
627
627
628
628
628
629
5.8 Coronavrus bovino
5.8.1 Epidemiologia
5.8.3 Imunidade
5.8.4 Diagnstico
5.9 Vrus da bronquite infecciosa das galinhas
5.9.1 Epidemiologia
5.9.3 Imunidade
5.9.4 Diagnstico
5.10 Coronavrus dos perus
6 Torovrus de interesse veterinrio
6.1 Vrus Berne eqino
6.2 Vrus Breda bovino
7 Coronavrus humanos
629
630
630
631
631
631
632
632
632
633
634
634
634
635
635
635
636
636
1 Introduo
A famlia Coronaviridae possui dois gneros:
o Coronavirus e o Torovirus. Os Coronavirus so
vrus RNA envelopados, possuem o maior geno-
ma conhecido entre os vrus RNA e esto envol-
vidos principalmente em doenas respiratrias e
digestivas de animais e humanos. Em algumas
enfermidades especcas, outras manifestaes,
como a poliserosite, miocardite, hepatite, encefa-
lomielite, nefrite e imunopatologias, podem estar
associadas com patgenos desse gnero. O enve-
lope desses vrus apresenta longas espculas que
do partcula viral um aspecto tpico de coroa,
derivando da o nome da famlia. Outro aspecto
importante desses vrus o complexo mecanis-
mo de replicao viral, que inclui a produo de
RNAs mensageiros (mRNA) subgenmicos. Essa
forma complexa de replicao resulta em uma
alta freqncia de recombinaes. Por essa razo,
muitos desses vrus apresentam uma grande va-
riao antignica, com a existncia de vrios so-
rotipos circulantes.
Importantes doenas vricas de animais do-
msticos, como a bronquite infecciosa das gali-
nhas, a gastrenterite transmissvel dos sunos e a
peritonite infecciosa dos felinos tm como agen-
te etiolgico algum dos coronavrus. O interesse
por essa famlia aumentou recentemente devido
classicao de um novo coronavrus humano,
o vrus da pneumonia asitica (SARS-COV). Os
coronavrus humanos conhecidos antes do apa-
recimento do vrus da SARS eram pouco patog-
nicos e, principalmente, envolvidos em resfriados
comuns. No gnero Torovirus, esto classicados
apenas dois vrus que causam doena em ani-
mais. Os patgenos animais desse gnero causam
diarria, sendo que o vrus Berne (BEV) infecta
eqinos e o vrus Breda (BRV) infecta bovinos.
Neste captulo, sero discutidos alguns aspectos
gerais da famlia Coronaviridae e das doenas de
interesse veterinrio com nfase para os vrus do
gnero Coronavirus. Alguns tpicos especcos
abordados para os vrus do gnero Torovirus se-
ro mencionados no texto.
2 Classicao
Os vrus da famlia Coronaviridae esto clas-
sicados na ordem Nidovirales, juntamente com
as famlias Arteriviridae e Roniviridae. Esses vrus
apresentam diferenas morfolgicas, mas so
agrupados nessa ordem por possurem uma es-
tratgia nica e comum de replicao. A expres-
so gnica desses vrus ocorre pela transcrio
de vrios mRNAs subgenmicos, sintetizados a
partir de um RNA intermedirio de polaridade
negativa.
Os coronavrus so subdivididos em trs
grupos (grupos I, II e III), de acordo com a sua
reatividade sorolgica. Dentro desses grupos, os
vrus so classicados de acordo com o seu hos-
pedeiro natural, com a seqncia de nucleotdeos
e relaes sorolgicas. Na Tabela 24.1, so apre-
sentados os vrus que compem os gneros Coro-
navirus e Torovirus.
Os coronavrus possuem vrions envelopa-
dos e pleomrcos cujo dimetro pode variar de
80 a 120 nm, apresentando um dimetro mdio
de 100 nm. A aparncia desses vrus, quando
observados na microscopia eletrnica (ME), deu
origem ao nome da famlia. Os vrions possuem
geralmente uma forma esfrica, com o envelope
circundado por peplmeros ou projees exter-
nas de aproximadamente 20 nm de extenso, que
conferem partcula uma aparncia similar a
uma coroa. Essas projees externas so forma-
das pelas glicoprotenas S da superfcie do enve-
lope viral. Na Figura 24.1, apresenta-se uma foto
de ME e um esquema da estrutura dos vrions da
famlia Coronaviridae.
A glicoprotena S apresenta uma massa mo-
lecular entre 150 e 180 kd e possui trs domnios;
um domnio externo maior, que, em algumas es-
pcies, dividido em dois domnios (S1 e S2); um
domnio transmembrana e um pequeno domnio
interno. Essa glicoprotena responsvel pela li-
gao dos vrions aos receptores celulares, induz
616 Captulo 24
I
Grupo antignico Vrus Hospedeiro Doena
TGEV Suno Gastrenterite
PRCoV Suno Respiratria, subclnica
PEDV Suno Gastrenterite
FIPV Gatos Peritonite
FCoV Gatos Enterite, assintomtica
CCoV Ces Enterite
HCoV-229E Humanos Resfriado comum
HEV Suno Encefalite, definhamento
BCoV Bovino Gastrenterite
TCoV Perus Enterite
MHV Camundongos Hepatite
HCoV-OC43 Humanos Resfriado comum
IBV Galinhas Traqueobronquite, nefrite
II
III
BToV Bovinos Subclnica
BRV Bovinos Gastrenterite
EToV Eqinos Subclnica
BEV Eqinos Gastrenterite
HToV Humanos Gastrenterite
PToV Sunos Subclnica
T
o
r
o
v
i
r
u
s
C
o
r
o
n
a
v
i
r
u
s
Tabela 24.1. Classificao dos coronavrus em grupos de acordo com a reatividade sorolgica.
Figura 24.1. Vrions da famlia A) Microscopia eletrnica de vrions do SARS-Co B) Ilustrao
esquemtica de umvrion comos seus componentes. M: protena de membrana; E, S: glicoprotenas do envelope; N:
nucleoprotena.; RNA: genoma.
Coronaviridae.
S
M
E
RNA
N
A
B
Fonte: A) PHIL Library, CDC.
Coronaviridae 617
a fuso do envelope com a membrana plasmtica
e apresenta importantes stios antignicos que in-
duzem a produo de anticorpos neutralizantes e
induzem a resposta imune celular.
No envelope, tambm esto presentes v-
rias cpias da protena M, que uma protena de
membrana que possui um pequeno domnio ex-
terno, um domnio com trs passagens atravs da
membrana e um grande domnio interno. A pro-
tena M interage com o nucleocapsdeo, atua na
morfognese e brotamento dos vrions e forma o
revestimento do ncleo (core) do vrion. Recente-
mente foi identicada outra pequena protena do
envelope, que tambm parece estar envolvida na
morfognese dos vrions no nal da replicao,
denominada protena E, sobre a qual pouca infor-
mao est disponvel.
Alguns coronavrus apresentam ainda a pro-
tena hemaglutinina-esterase (HE). A HE possui
atividade de acetilesterase e responsvel pela
clivagem do cido silico. Essa protena parece
no ser essencial para a replicao dos vrus, mes-
mo naqueles que a possuem na sua superfcie. Por
outro lado, a presena da HE pode inuenciar a
patogenicidade dos vrus em animais. A HE in-
duz hemaglutinao e hemadsoro e, provavel-
mente, contribui nos processos de penetrao e
liberao do vrus das clulas infectadas.
O genoma dos coronavrus uma molcula
de RNA de cadeia simples e polaridade positiva.
O RNA genmico pode ter de 27 a 32 kb, sendo
o maior genoma entre os vrus RNA. A extremi-
dade 5 do genoma possui uma estrutura cap e a
extremidade 3 poliadenilada, como ocorre nos
mRNA celulares. Nas proximidades da regio 5
do genoma se localiza uma seqncia de 65 a 98
nucleotdeos denominada lder, seguida de uma
seqncia de 200 a 400 nt, que no traduzida.
Prxima extremidade 3 e imediatamente an-
terior regio poliadenilada est presente uma
regio no-traduzida (UTR) de 200 a 500 nt. A
estrutura e organizao do genoma dos corona-
vrus est ilustrada esquematicamente na Figura
24.2.
As protenas virais no-estruturais so codi-
cadas na regio mais prxima da extremidade
5 do genoma, enquanto as protenas estruturais
so codicadas prximas extremidade 3. Os
dois teros iniciais do genoma correspondem ao
gene L e codicam a polimerase viral (polimerase
de RNA dependente de RNA replicase). Essa
regio possui duas seqncias abertas de leitura
(ORFs) sobrepostas, que so traduzidas em uma
poliprotena no incio do ciclo replicativo. Em to-
dos os coronavrus, a seqncia de genes no ge-
noma 5 Pol S E M N 3. Entre esses genes
Figura 24.2. Ilustrao esquemtica do genoma dos coronavrus. L) lder; Pol) gene da replicase; S) gene da
glicoprotena; E) gene da glicoprotena; M) gene da protena de membrana; N) gene da protena donucleocapsdeo. O
RNA de sentido antigenmico e os mRNAs subgenmicos produzidos durante o ciclo replicativo esto ilustrados
abaixo. Aprotena traduzidaa partir decadaumdesses mRNAs estindicada.
3' 5'
S
E
M
N
5' L
0kb
30kb
Pol
S E M N
3'UTR
AAAAn
AAAAn
AAAAn
AAAAn
AAAAn
RNA genmico
RNA antigenmico
RNAs mensageiros
subgenmicos
(Fonte: adaptada de Knipe et al. (2001)
618 Captulo 24
podem ser encontradas outras ORFs que codi-
cam algumas protenas no-estruturais e tambm
a protena HE. A presena dessas ORFs, a sua ex-
tenso, a forma de expresso e a distribuio po-
dem variar entre os coronavrus.
O genoma dos coronavrus est associado
com mltiplas cpias de uma fosfoprotena viral
(N), formando um nucleocapsdeo helicoidal. A
protena N possui um domnio de associao ao
RNA que facilita sua ligao ao genoma viral.
Essa protena associa-se tambm protena M
no processo de morfognese das partculas vi-
rais. Em alguns vrus, foi demonstrado que o nu-
cleocapsdeo helicoidal est envolvido por uma
estrutura interna de, aproximadamente, 65 nm de
dimetro, que possui uma forma aparentemente
esfrica, possivelmente icosadrica (Figura 24.1).
Os coronavrus, a exemplo de outros vrus
RNA, sofrem mutaes freqentes no seu geno-
ma em funo dos erros cometidos pela RNA
polimerase. Vrios mutantes ts (sensveis tem-
peratura) do vrus da hepatite dos camundongos
(MHV) j foram identicados. Alm disso, alguns
coronavrus que causam doenas em animais fo-
ram originados a partir de delees no genoma
de vrus preexistentes. Este o caso do coronav-
rus respiratrio dos sunos (PRCoV), que se ori-
ginou a partir do TGEV por uma deleo no gene
que codica a protena S. O surgimento de cepas
mais virulentas do coronavrus felino entrico
(FCoV), responsveis pela peritonite infecciosa
felina (FIP), tambm parece estar relacionado
com delees do genoma.
A alta freqncia de recombinao outro
aspecto importante na gentica dos coronavrus
que pode ter reexos importantes na patogenia e
na epidemiologia desses vrus. Embora os coro-
navrus no possuam um genoma segmentado, a
alta freqncia de recombinao provavelmente
possa ser explicada pela complexidade da repli-
cao, envolvendo etapas de transcrio descon-
tnua. O mecanismo de recombinao entre cepas
de campo j deu origem a diferentes subtipos do
vrus da bronquite infecciosa das galinhas (IBV)
e alguns isolados de FCoV parecem ter se origi-
nado da recombinao entre o vrus felino e o
CCoV. Uma freqncia de recombinao de 25%
para todo o genoma foi observada no MHV, um
dos coronavrus mais estudados.
Os vrions dos coronavrus so facilmente
inativados por solventes lipdicos, agentes oxi-
dantes, formaldedo, detergentes e desinfetantes
comuns. Os vrions das diferentes espcies de co-
ronavrus apresentam tambm uma grande sen-
sibilidade ao calor e estabilidade ao pH cido, e
alguns so estveis a pH 3.0. Os vrions possuem
uma massa molecular de aproximadamente
400x10
6
, densidade Buoyant de 1.15 1.19 g/cm
3

em sucrose e 1.23 1.24 g/cm
3
em CsCl.
4 Replicao
A primeira etapa da replicao dos corona-
vrus a ligao dos vrions, pela glicoprotena S,
aos receptores na membrana celular. Esses recep-
tores j foram identicados para alguns corona-
vrus, mas ainda so desconhecidos para outros.
Os vrus da gastrenterite transmissvel dos su-
nos (TGEV), da peritonite infecciosa felina (FIPV)
e, provavelmente, o coronavrus canino (CCoV)
utilizam a aminopeptidase N como receptor. A
aminopeptidase N uma metaloprotease associa-
da membrana plasmtica. Alguns vrus, como o
coronavrus bovino (BCoV), que possuem a pro-
tena HE no envelope, podem, ainda, utilizar o
cido silico como receptor.
A penetrao dos vrions na clula hospe-
deira pode ocorrer por duas vias possveis. Pode
ocorrer aps endocitose, pela fuso do envelope
viral com a membrana da vescula endoctica na
presena de um pH cido para alguns coronav-
rus (Figura 24.3). Outros coronavrus no neces-
sitam do pH baixo para a fuso e, nesses casos,
a penetrao ocorre pela fuso do envelope com
a membrana plasmtica na superfcie da clula.
O desnudamento do genoma ocorre logo aps a
penetrao e envolve mecanismos ainda no to-
talmente esclarecidos. Provavelmente necessita
da participao de fatores celulares.
Assim que o genoma liberado no citoplas-
ma, o gene 1 (pol) traduzido em uma polipro-
tena, para a produo da replicase viral e outras
enzimas envolvidas com a replicao do RNA.
Apesar dos coronavrus possurem um genoma
de sentido positivo que serve como mRNA, os
demais genes no so sintetizados pela traduo
direta do RNA genmico. A polimerase viral re-
Coronaviridae 619
cm-sintetizada utiliza o RNA genmico como
modelo para fazer uma cpia de RNA interme-
dirio de sentido negativo. A partir deste RNA
negativo sero produzidas cpias de RNA de ex-
tenso genmica que sero, posteriormente, in-
cludas nas partculas virais e cpias de mRNA
subgenmicos, que sero traduzidos nas demais
protenas estruturais e no-estruturais necess-
rias para a produo da prognie viral.
O nmero de mRNA subgenmicos pode
variar de cinco a sete, dependendo do vrus. A ex-
tenso desses mRNA tambm varivel. Apenas
a ORF mais prxima da extremidade 5 tradu-
zida, embora alguns mRNA possuam duas ou
trs ORFs. Na extremidade 5 de todos os mRNA
subgenmicos, encontra-se a seqncia lder, que
idntica seqncia que encontrada na extre-
midade 5 do RNA genmico. A seqncia lder
apresenta, na sua extremidade 3, uma seqncia
de 7 a 18 nt, homloga a uma seqncia encontra-
da entre os genes do RNA genmico, denomina-
da seqncia intergnica ou seqncia associada
transcrio (TAS). A TAS do vrus da hepatite
murina (MHV) possui a seqncia UCUAAAC
e a extremidade 3 da seqncia lder desse v-
rus consiste em vrias repeties da seqncia
UCUAA.
1
2
3
4
5
Ncleo
12
11
A A A A A
A A A A A
A A A A A
A A A A A
A A A A A
A A A A A
A A A A A
6
7a
7b
9
10
8
RER
Golgi
Figura 24.3. Ilustrao simplificada do ciclo replicativo dos coronavrus. 1) Ligao aos receptores celulares;
2) Internalizao por endocitose (nem todos); 3) Penetrao por fuso do envelope com a membrana
endoctica; 4) Traduo da regio 5 do genoma e produo da polimerase; 5) Sntese da cpia antigenmica;
6) Sntese dos mRNAs subgenmicos; 7a e 7b) Traduo dos mRNAs subgenmicos nas protenas
estruturais; 8) Sntese do RNA genmico; 9) Conjugao do RNA genmico com protenas do nucleocapsdeo;
10) Brotamento do nucleocapsdeo no RER ou Golgi; 11) Transporte da prognie viral em vesculas at a
membrana plasmtica; 12) Egressopor exocitose.
620 Captulo 24
O mecanismo da sntese dos mRNA subge-
nmicos ainda no foi esclarecido, mas h trs hi-
pteses para explic-lo. A primeira hiptese de-
nomina-se transcrio iniciada pela seqncia
lder. Nesse caso, ocorreria inicialmente a trans-
crio da seqncia lder a partir da cpia nega-
tiva do RNA. Este transcrito se ligaria a qualquer
seqncia intergnica e serviria como primer ou
iniciador para a transcrio do mRNA a partir
dessa seqncia intergnica.
Outra hiptese seria a transcrio descont-
nua durante a sntese do RNA de cadeia negati-
va. Nesse modelo, a polimerase que est sinteti-
zando a cpia de RNA negativa a partir do RNA
genmico faria uma parada em uma seqncia
intergnica e, em seguida, saltaria para a extre-
midade 3 da seqncia lder do RNA genmico
copiando esta regio. Esse processo resultaria na
produo de um mRNA subgenmico negativo
que serviria de modelo para cpias de RNA po-
sitivo.
Evidncias experimentais suportam essas
duas hipteses. Uma terceira hiptese tambm
tem sido descrita, embora seja menos provvel,
na qual mRNA subgenmicos seriam incorpora-
dos ao vrion juntamente com o RNA genmico.
Assim, os mRNA trazidos nos vrions serviriam
de modelo para a sntese de cpias negativas, que
seriam, ento, copiadas em novos mRNAs.
A traduo dos mRNA subgenmicos ocor-
re em ribossomos associados membrana dos
retculos endoplasmticos (RE) ou livres no cito-
plasma. Aps a traduo, as protenas so pro-
cessadas de acordo com sua nalidade, podendo
ser fosforiladas, glicosiladas e/ou clivadas. A tra-
duo das protenas estruturais S, M e HE reali-
zada por ribossomos na membrana do RE. Essas
protenas so, posteriormente, glicosiladas e a
protena S clivada em S1 e S2 em alguns corona-
vrus. A protena N traduzida por ribossomos
livres no citoplasma e fosforilada em seguida.
A protena E passa por um processo de acilao
e localiza-se na regio perinuclear de clulas in-
fectadas.
A replicao do RNA ocorre em complexos
de replicao associados com membranas intraci-
toplasmticas. Aparentemente, esses complexos
so formados pelas protenas virais e, possivel-
mente, por protenas celulares associadas. Ini-
cialmente acreditava-se que a replicao do RNA
genmico deveria ocorrer de forma contnua,
utilizando um RNA de cadeia negativa comple-
to como modelo, em oposio aos mRNA sub-
genmicos produzidos na transcrio. Contudo,
evidncias recentes demonstram que a sntese do
RNA genmico tambm parece ocorrer de forma
descontnua, envolvendo uma seqncia lder.
A morfognese dos vrions inicia-se com
a associao de mltiplas cpias da protena N
com o genoma viral e a formao do nucleocap-
sdeo helicoidal. Em seguida, o nucleocapsdeo
interage com a protena M nas membranas do
RE ou no complexo de Golgi, levando formao
do envoltrio interno do nucleocapsdeo e ao seu
empacotamento nas partculas que brotaro para
o interior desses compartimentos. Para a forma-
o da partcula viral, a protena E atua em con-
junto com a protena M. Os vrions brotam a par-
tir de uma estrutura especializada de membrana,
localizada entre o RE e o complexo de Golgi. Os
coronavrus se acumulam em vesculas, que so
transportadas at a membrana plasmtica, e so
liberados por exocitose. Todas as etapas do ciclo
replicativo ocorrem no citoplasma. O ciclo repli-
cativo dos coronavrus est representado esque-
maticamente na Figura 24.3.
5 Coronavrus de interesse
veterinrio
A seguir, sero abordadas as principais co-
ronaviroses de animais, de acordo com a espcie
afetada.
5.1 Vrus da gastrenterite transmissvel
dos sunos
O TGEV produz uma doena entrica alta-
mente contagiosa em leites, descrita pela pri-
meira vez, nos Estados Unidos, em 1946. Esse v-
rus pertence ao grupo I dos coronavrus e apenas
um sorotipo do vrus foi identicado at o pre-
sente. O vrus apresenta relao antignica com
o coronavrus canino (CCoV), vrus da peritonite
infecciosa felina (FIPV), coronavrus entrico fe-
lino (FCoV), coronavrus humano (HCoV), vrus
Coronaviridae 621
da diarria epidmica dos sunos (PEDV) e com o
coronavrus respiratrio dos sunos (PRCOV).
Essas relaes antignicas resultam em rea-
es sorolgicas cruzadas entre os vrus. No en-
tanto, apesar da semelhana antignica, foram
observadas vrias diferenas na biologia dos v-
rus, tanto in vitro como in vivo. O CCoV e o TGEV
replicam em clulas de origem canina e felina,
entretanto o CCoV e o FIPV no replicam em c-
lulas sunas, nas quais o TGEV replica. A infeco
experimental de leites com o FIPV resultou em
diarria e leses intestinais tpicas de TGE, mas
a infeco de leites com o CCoV no provocou
manifestaes na maioria dos casos, tendo sido
observado apenas uma atroa leve das vilosida-
des de alguns animais.
A partcula viral do TGEV difere um pouco
dos demais coronavrus porque apresenta uma
estrutura de ncleo (core) interno de aproxima-
damente 65 nm, envolvendo o nucleocapsdeo
helicoidal. A forma dessa estrutura no bem
denida, mas, aparentemente, icosadrica. No
genoma do TGEV, alm dos genes descritos ante-
riormente, esto presentes outros trs genes que
codicam protenas no-estruturais. Dois desses
genes so denominados 3a e 3b e esto localiza-
dos entre os genes das protenas S e M. O outro
gene recebeu o nmero sete e localiza-se entre o
gene da protena N e a regio 3UTR.
5.1.1 Epidemiologia
A TGE uma doena prevalente no Hemis-
frio Norte, principalmente em reas de produ-
o suna intensiva dos Estados Unidos e em al-
guns pases da Europa. Nessas regies, a doena
ocorre de forma sazonal durante o inverno, o que
atribudo alta estabilidade do vrus em bai-
xas temperaturas e incidncia solar reduzida.
No Brasil, j houve o registro de ocorrncia da
doena, mas esta no comumente encontrada
na populao suna brasileira.
Nos ltimos anos, foi observada uma redu-
o na incidncia da TGE em pases europeus, e
os pesquisadores esto atribuindo essa reduo
circulao endmica do PRCOV na populao
suna. Os animais que entram em contato com o
PCRV desenvolveriam imunidade cruzada con-
tra o TGEV. De fato, experimentos realizados
com a inoculao do PRCOV e posterior desao
com o TGEV demonstraram que pode haver pro-
teo cruzada entre esses vrus.
O TGEV transmitido principalmente pela
via fecal-oral, pelo contato direto entre animais
ou pela contaminao da rao, utenslios, ve-
culos ou pessoas. A transmisso por aerossis
ou por meio de pssaros contaminados tambm
deve ser considerada. Ainda no est claro como
o vrus mantido durante as estaes quentes,
mas a ocorrncia de infeces subclnicas em
algumas propriedades (na forma endmica da
doena), a existncia de outros hospedeiros e a
existncia do estado de portador na espcie suna
tm sido consideradas.
5.1.2 Patogenia, patologia e sinais
clnicos
A patogenia da TGE tpica dos coronav-
rus entricos, cuja replicao restringe-se ao trato
digestivo. O TGEV penetra pela via oral e con-
duzido at o intestino delgado (ID), resistindo ao
pH baixo e s enzimas proteolticas do trato di-
gestivo. O vrus replica nas clulas epiteliais das
vilosidades do ID, provocando distrbios funcio-
nais e destruio dessas clulas. Esses distrbios
resultam na reduo da atividade enzimtica no
ID, na interrupo dos processos digestivos nor-
mais e no transporte de nutrientes e eletrlitos.
Esses aspectos caracterizam a sndrome da m-
absoro que ocorre na doena. Ocorre tambm
uma alterao no transporte de sdio no jejuno,
tendo como conseqncia o acmulo de lquido
e eletrlitos no lmen intestinal, o que contribui
para a produo da diarria. Outra disfuno
observada o extravasamento de protenas plas-
mticas. A desidratao e acidose metablica so
as mais provveis causas da morte. A principal
leso observada no intestino o achatamento ou
atroa das vilosidades, que evidente particular-
mente no jejuno, mas pode estar presente tambm
no leo e, com menor freqncia, no duodeno.
A TGE pode se manifestar nas formas epi-
dmica e endmica. A forma epidmica mais
622 Captulo 24
freqentemente observada e caracteriza-se pela
propagao muito rpida da doena na proprie-
dade, com alta mortalidade de leites de at duas
semanas de idade. Isso contrasta com os sinais
leves e sem mortalidade observados em animais
adultos. Os animais apresentam anorexia, letar-
gia, diarria, perda de peso e vmito. A infeco
em neonatos resulta em rpida desidratao e a
taxa de mortalidade de aproximadamente 100%.
Essa taxa reduzida com o aumento da idade dos
leites, at as duas semanas. As fmeas em lacta-
o podem apresentar febre, anorexia, agalaxia,
diarria e vmito, que pode estar associada com
o contato com a prole infectada ou tambm com
aspectos endcrinos especcos da fase de lacta-
o. Essa forma da doena geralmente se resolve
em duas a trs semanas na propriedade.
A forma endmica da doena menos fre-
qente e se manifesta com sinais clnicos seme-
lhantes, porm mais brandos do que os observa-
dos na forma epidmica. Essa forma ocorre em
propriedades em que a infeco mantida pela
introduo contnua de animais susceptveis. A
taxa de mortalidade baixa, atingindo 10 a 20%
dos animais. Nesse caso, os leites geralmente
apresentam a doena entre os seis dias de idade
at duas semanas aps o desmame. As fmeas
lactantes no apresentam sinais clnicos e trans-
ferem imunidade aos leites.
5.1.3 Imunidade
Anticorpos contra o TGEV podem ser de-
tectados no soro aos 14 dias aps a infeco, per-
sistindo por seis meses e, possivelmente, at por
anos. Anticorpos das classes IgM, IgG e IgA esto
presentes. Os animais que se recuperam so con-
siderados protegidos contra o vrus, entretanto,
em alguns casos, essa proteo pode ser incom-
pleta.
A proteo parece estar relacionada com a
presena de IgA no lmen intestinal, o que foi
comprovado pela observao de que leites nas-
cidos algumas semanas aps um surto de TGE
no eram afetados pelo vrus. Essa proteo se-
ria conferida pelo contnuo suprimento de IgA
no colostro e no leite de fmeas que sofreram a
infeco recentemente. Estudos posteriores com-
provaram que a neutralizao do vrus ocorre no
lmen do intestino pelos anticorpos adquiridos
pela ingesto de colostro ou leite, evitando assim
a infeco das clulas epiteliais. Essa forma de
imunidade foi denominada imunidade lactog-
nica. A presena de IgG sistmica parece no ter
papel importante na proteo contra a doena.
A resposta imune celular provavelmente
desempenhe um papel importante na imuni-
dade ativa contra o TGEV. Apesar dos diversos
estudos, o papel dos linfcitos T-auxiliares (Th)
e citotxicos (Tc) foi pouco esclarecido. O envol-
vimento de linfcitos Th na induo da prolife-
rao de linfcitos B e sntese de anticorpos foi
sugerido pela identicao de trs epitopos para
essas clulas na protena viral N. Por outro lado,
observou-se um aumento no nmero de clulas
NK e Tc em leites infectados com o TGEV, su-
gerindo a sua participao na resposta imune
contra esse vrus. Evidncias da participao da
imunidade celular atravs de linfcitos Th, Tc e
clulas NK foram tambm observadas em testes
de uma vacina que possui um vetor baculovrus
que expressa as protenas S, N e M do TGEV.
5.1.4 Diagnstico
O diagnstico presuntivo deve basear-se nas
manifestaes clnicas e nos aspectos epidemiol-
gicos da doena. O diagnstico denitivo necessi-
ta a realizao de testes laboratoriais de deteco
de vrus ou de antgenos virais. A imunouores-
cncia (IFA), realizada em cortes de criostato ou
em esfregaos de mucosa intestinal, a tcnica
mais usual de diagnstico. A imunoperoxidase
(IPX) tambm tem sido utilizada em alguns ca-
sos. O isolamento do vrus geralmente um pro-
cesso demorado e, muitas vezes, infrutfero, mas
pode ser realizado em clulas de tireide ou de
testculos sunos, nas quais a replicao viral re-
sulta na produo de efeito citoptico. A deteco
de antgenos virais nas fezes tambm pode ser
realizada pelo uso de um ensaio imunoenzimti-
co (ELISA). A microscopia eletrnica (ME) no
recomendada para a deteco do TGEV, porque
no h como diferenci-lo do PEDV. A sorologia
pareada (coleta de duas amostras de soro, uma
no incio da infeco e outra 14 dias aps) tam-
Coronaviridae 623
bm pode ser um auxlio ao diagnstico. A detec-
o de anticorpos pode ser feita pelas tcnicas de
soroneutralizao (SN) e ELISA.
O controle da doena deve enfatizar princi-
palmente a preveno da introduo do agente
na propriedade. Isso pode ser obtido pela adoo
de medidas como: adquirir animais somente de
fontes sabidamente negativas e evitar a introdu-
o de material, equipamento ou pessoal prove-
niente de propriedades com a doena. Existem
algumas vacinas contendo o vrus atenuado ou
inativado disponveis no comrcio de outros pa-
ses. O esquema mais utilizado nas regies que
apresentam a infeco a vacinao das porcas
prenhes com a vacina atenuada algumas semanas
antes do parto. No entanto, as vacinas utilizadas
at o presente tm sido pouco efetivas na preven-
o da doena. Vacinas de subunidades e vacinas
recombinantes em vetores virais esto em fase de
pesquisa e desenvolvimento.
Uma medida considerada efetiva para o
controle a exposio de porcas prenhes algu-
mas semanas antes do parto ao vrus encontrado
nas fezes de animais infectados. Esse procedi-
mento conhecido como infeco controlada e
consiste na introduo oral de fezes ou pores
intestinais de animais infectados nas porcas. Essa
prtica, quando aplicada, deve possuir o acom-
panhamento de um mdico veterinrio.
5.2 Coronavrus respiratrio dos sunos
O coronavrus respiratrio dos sunos
(PRCoV) foi inicialmente identicado em granjas
que no apresentavam histrico clnico de TGE,
mas os sunos testados apresentaram sorologia
positiva para o TGEV. O PRCoV apresenta apro-
ximadamente 96% de homologia com o TGEV
e tambm pertence ao grupo I dos coronavrus.
Essas caractersticas explicam a reao sorol-
gica cruzada entre esses vrus. Aparentemente,
o PRCoV evoluiu a partir do TGEV, por dele-
es na regio que codica a glicoprotena S. O
PRCoV apresenta tropismo por clulas do siste-
ma respiratrio, replicando nesses tecidos com
grande ecincia. Atualmente o vrus endmi-
co na Europa e em algumas regies dos Estados
Unidos. Na grande maioria dos casos, os animais
so infectados e ocorre soroconverso logo aps
o desmame. Em condies experimentais, a ino-
culao do vrus em leites que no receberam o
colostro reproduziu a doena respiratria; no en-
tanto, a infeco a campo parece ser geralmente
subclnica. O vrus se propaga atravs de aeros-
sis e pode percorrer longas distncias quando
transportado pelo vento. O controle da infeco
muito difcil pela sua facilidade de propagao
e contgio, e no existem vacinas disponveis.
Como a infeco por esse vrus no representa
um grande problema sanitrio e econmico, no
existem maiores preocupaes com o desenvolvi-
mento de vacinas ou com o seu controle.
5.3 Vrus da diarria epidmica dos
sunos
A diarria epidmica dos sunos uma do-
ena clinicamente semelhante TGE, e os ani-
mais infectados apresentam uma diarria aquosa
como a principal manifestao clnica. Esta do-
ena tem sido descrita apenas na Europa e em
alguns pases da sia. Existe s um sorotipo do
PEDV, includo no grupo I dos coronavrus, que
no apresenta relao antignica com os demais
coronavrus sunos ou de outras espcies. A ni-
ca relao antignica detectada at o presente
foi com a protena do nucleocapsdeo do FIPV.
Animais de todas as idades podem desenvolver
a doena, e a taxa de mortalidade pode atingir
at 50% em neonatos e em leites com idade infe-
rior a trs semanas. No entanto, em alguns casos,
pode chegar a 80%. A taxa de mortalidade mais
baixa e a lenta propagao da doena no rebanho
(semanas) so consideradas as principais diferen-
as epidemiolgicas entre essa doena e a TGE.
No existem vacinas ou estratgias de controle
especcas descritas para a doena.
5.4 Vrus da encefalomielite
hemaglutinante dos sunos
O vrus da encefalomielite hemaglutinante
dos sunos (HEV) j foi descrito no Canad, nos
Estados Unidos e em alguns pases europeus e
624 Captulo 24
asiticos. Mesmo nos locais onde a presena da
infeco foi demonstrada, a ocorrncia da doen-
a parece ser baixa. O vrus apresenta apenas um
sorotipo, que responsvel pela produo de di-
ferentes sndromes clnicas e pertence ao grupo
II dos coronavrus. A infeco pode resultar em
encefalite aguda ou em uma sndrome de vmi-
to e denhamento (vomiting and wasting disease,
VWD). No primeiro caso, alm de anorexia e le-
targia, so observados sinais neurolgicos, tais
como: tremores musculares, paresia posterior
progressiva, hiperestesia, cegueira, coma e mor-
te. A sndrome do vmito e denhamento ocorre
de forma crnica e caracteriza-se por anorexia, le-
targia, vmito, perda progressiva de peso e cons-
tipao. Ambas as manifestaes so observadas
apenas em leites nascidos de mes sorologica-
mente negativas, quando so infectadas nas pri-
meiras semanas de vida. A infeco ocorre pela
via nasal, por aerossis ou por contato direto. Na
encefalomielite, o vrus replica na mucosa nasal e
da se propaga para os nervos perifricos e para o
encfalo. Na sndrome do vmito e denhamen-
to, o vrus replica inicialmente na mucosa nasal e
propaga-se para as tonsilas, trato respiratrio su-
perior, encfalo e estmago. Nas regies em que
o agente est presente, a infeco ocorre de forma
endmica e no existem vacinas disponveis para
o seu controle.
5.5 Coronavrus felino e vrus
da peritonite infecciosa dos felinos

O coronavrus felino (FCoV) pertence ao
grupo I dos coronavrus e apresenta dois biti-
pos, classicados pelas diferenas de patogenici-
dade. O bitipo mais freqente o coronavrus
felino entrico (FCoV), que causa diarria leve em
gatos. O outro bitipo o agente etiolgico da pe-
ritonite infecciosa felina (FIPV), uma doena de
curso fatal. Dois sorotipos de coronavrus felinos
foram identicados, denominados coronavrus
felino tipos I e II, de acordo com as caractersti-
cas antignicas dos isolados de FCoV e FIPV. Os
dois sorotipos possuem isolados de casos de FIP,
e a grande maioria dos coronavrus felinos tem
sido classicada como sorotipo I, porm alguns
isolados de FIPV so encontrados no sorotipo II,
que composto, em sua maioria, por isolados en-
tricos.
5.5.1 Epidemiologia
Os coronavrus felinos infectam membros da
famlia Felidae, causando desde infeces subcl-
nicas at a forma mais severa da doena, que a
peritonite infecciosa (FIP). A infeco pelo FCoV
muito comum em gatos domsticos, o que foi
demonstrado pela alta soropositividade na po-
pulao felina de diversos pases. Anticorpos
contra o vrus foram detectados em 80 a 90% das
amostras coletadas em gatis, e em 10 a 50% das
amostras coletadas em residncias que possuam
um nico gato, nos Estados Unidos e Europa. No
Brasil, so escassos os dados sobre a prevalncia
e distribuio do agente na populao felina. Em
So Paulo, somente uma dentre 22 amostras de
soro e efuso pleural ou peritoneal de 10 gatos
e um leo foi positiva por PCR. Em um estudo
realizado nos arquivos do Departamento de Pa-
tologia da Universidade Federal de Santa Maria,
foram diagnosticados 13 casos de PIF entre 638
gatos necropsiados no perodo de 1970 a 2001.
Os animais infectados excretam o vrus em
altos ttulos nas fezes, sendo a rota fecal-oral a
forma mais freqente de transmisso. O RNA do
vrus j foi detectado em fezes de gatos saud-
veis, infectados natural ou experimentalmente
por perodos prolongados. Em alguns gatos, a
infeco transitria e o vrus ser erradicado do
organismo dentro de alguns meses aps a infec-
o. Aproximadamente 13% dos gatos permane-
cem infectados cronicamente, como portadores
saudveis, excretando o vrus por perodos pro-
longados, possivelmente por toda vida. Apenas 5
a 10% dos gatos soropositivos para o FCoV iro
desenvolver a forma severa da doena.
A presena do vrus j foi demonstrada em
populaes de felinos selvagens de vida livre ou
cativos. Em estudos realizados na frica, 25%
dos feldeos selvagens foram positivos para anti-
corpos no soro ou cido nuclico viral nas fezes.
O guepardo, que uma espcie em risco de extin-
o, muito susceptvel ao vrus, e animais des-
sa espcie apresentam a forma clnica da doena
com maior freqncia do que gatos domsticos.
Entre os gatos domsticos, foi observada
uma incidncia mais alta da FIP em animais de
raa pura quando comparados com as raas mis-
tas. A doena ocorre com maior freqncia em
Coronaviridae 625
animais entre os seis meses e cinco anos de idade,
sendo mais comum em animais com menos de
um ano.
clnicos
O coronavrus felino entrico infecta as c-
lulas epiteliais das vilosidades intestinais, provo-
cando a sua destruio, apresentando manifes-
taes clnicas de diarria e m-absoro. Aps
a infeco inicial, com a apresentao ou no de
manifestaes clnicas, o vrus permanece repli-
cando no intestino e sendo excretado nas fezes. A
habilidade do FIPV de replicar em macrfagos e
invadir os tecidos intestinais e o sangue foi consi-
derada a responsvel pela diferena na patogenia
dos dois bitipos do vrus. Essa diferena foi ob-
servada em cultivos de macrfagos peritoneais,
nos quais os isolados virulentos infectaram um
nmero maior de macrfagos e produziram t-
tulos mais altos quando comparados com os iso-
lados avirulentos. Entretanto, tem sido demons-
trada a presena do vrus no sangue de animais
que no desenvolveram a forma severa da doen-
a, por longos perodos aps a infeco inicial. A
presena do vrus no sangue e nos tecidos levaria
replicao contnua, propiciando o surgimento
de cepas mutantes com virulncia aumentada.
A mutao do FIPV muito bem documentada
e consiste em uma deleo de aproximadamente
300 bp na extremidade 3 do genoma. Essa mu-
tao foi detectada em vrios isolados de tecidos
de felinos que morreram da forma clnica da FIP
e de gatos em que a doena foi induzida experi-
mentalmente. A hiptese mais aceita a de que o
FIPV origina-se a partir de mutaes do FCoV no
animal infectado.
A infeco pelo coronavrus pode produzir
enterite leve, mas a maioria dos casos de infeco
experimental ou natural cursa sem manifesta-
es clnicas. Alguns animais infectados podem
desenvolver a forma severa da doena: a FIP, ca-
racterizada pela debilitao progressiva, que cul-
mina com a morte do animal. Os sinais iniciais
no permitem a diferenciao de outras doenas
sistmicas dos felinos e incluem perda de peso,
anorexia, febre crnica, letargia e debilidade. A
FIP pode ocorrer sob trs formas distintas: a for-
ma clssica, tambm chamada de efusiva ou mi-
da; a forma seca ou no-efusiva ou a combinao
de ambas. Na forma efusiva, ocorre um aumen-
to progressivo do volume do abdome devido ao
acmulo de lquido viscoso e amarelado na cavi-
dade abdominal (ascite). A quantidade de lqui-
do varivel, podendo atingir at um litro.
A cavidade torcica tambm pode apresen-
tar efuso pleural, que pode resultar em sinais de
insucincia respiratria. Ictercia pode estar pre-
sente se houver envolvimento do fgado. A forma
seca da doena caracteriza-se pela presena de le-
ses piogranulomatosas em um ou mais rgos.
Os animais com essa forma da doena podem
apresentar sinais de insucincia heptica ou re-
nal e doena pancretica. Distrbios neurolgicos
e leses oculares tambm tm sido descritos.
5.5.3 Imunidade
Observaes clnicas e experimentais de-
monstraram que animais que apresentam anti-
corpos contra o coronavrus felino desenvolvem
uma forma mais aguda e severa da doena quan-
do reinfectados. Essa forma conhecida como
sndrome da morte sbita. Nesses animais, as ma-
nifestaes clnicas e leses surgem rapidamente
e eles apresentam tambm um perodo menor de
sobrevivncia.
O papel dos anticorpos preexistentes na
patogenia da doena ainda no est totalmente
esclarecido, mas acredita-se que esses anticorpos
facilitariam a replicao do vrus e levariam a
uma severidade maior da doena. A replicao
mais eciente do vrus estaria associada com
uma maior capacidade de infectar macrfagos,
por causa do fenmeno da ADE (antibody depen-
dent-enhancement), que consiste na facilitao da
penetrao viral em macrfagos em funo da
presena dos anticorpos. Nesse caso, os comple-
xos vrus-anticorpo seriam ligados por receptores
Fc de membrana do macrfago, o que facilitaria
a sua penetrao nas clulas. Em outras palavras,
ao invs de proteger, os anticorpos aumentariam
a ecincia da penetrao e replicao viral.
A manifestao ou no dos sinais clnicos
da FIP estariam ligados resposta imune celular.
Animais que apresentam uma resposta imune
celular eciente no desenvolvem a doena. Por
626 Captulo 24
outro lado, animais que desenvolvem uma res-
posta imune celular parcial apresentam a forma
no efusiva da doena. Os animais que no apre-
sentam resposta imune desenvolvem a forma
efusiva da doena.
5.5.4 Diagnstico
O diagnstico da FIP no animal vivo apre-
senta diculdades e deve basear-se mais na inves-
tigao clnica do que em testes laboratoriais. A
deteco de anticorpos por IFA e ELISA tem sido
amplamente aplicada mundialmente em labora-
trios de diagnstico. So considerados positivos
para o vrus os animais com ttulos moderados
a altos. Entretanto, felinos que apresentam sinais
clnicos podem ser soronegativos; assim como
animais que nunca apresentaram manifestaes
clnicas podem ter ttulos altos de anticorpos.
Ento, mesmo que o diagnstico sorolgico seja
amplamente utilizado, no deve ser considerado
denitivo. A apresentao de ttulos altos de anti-
corpos e de sinais clnicos compatveis com a FIP
pelo animal deve ser considerada importante. Se
o felino apresenta ttulos baixos ou soronegati-
vo, a FIP deve car no nal da lista das suspeitas.
At h pouco tempo, o diagnstico denitivo s
era possvel aps a morte do animal, pela patolo-
gia e histopatologia. Atualmente possvel reali-
zar o diagnstico atravs de tcnicas de biologia
molecular, e vrios protocolos de RT-PCR j fo-
ram descritos.
O controle e preveno da infeco pelo
FCoV so complicados pelo fato de o vrus estar
amplamente disseminado na populao felina.
Algumas recomendaes foram elaboradas no
II Simpsio de Coronavrus Felino e Peritonite
Infecciosa Felina, realizado na Esccia, em 2002.
Uma das medidas recomendadas o isolamento
de gatas prenhes duas a trs semanas antes do
parto, com a subseqente quarentena da gata e
dos lhotes, e desmame dos lhotes com a idade
de quatro a seis semanas. O objetivo desse pro-
cedimento seria, principalmente, o de retardar a
ocorrncia da infeco, pois muito difcil evit-
la por toda a vida, em razo da ampla dissemina-
o do vrus.
O controle da doena pelo uso de vacinao
um ponto polmico. At o momento j foram
produzidas vrias vacinas que falharam em con-
ferir proteo. Vacinas produzidas com vrus se-
melhantes ao FCoV, como o coronavrus huma-
no, canino e suno, foram testadas sem sucesso. O
maior problema para a produo de vacinas o
possvel papel dos anticorpos na exacerbao dos
sinais clnicos (ADE). Este efeito foi observado em
testes vacinais realizados com o FCoV atenuado
e tambm com um vrus vaccinia recombinante,
expressando a protena S.
A induo de uma forte resposta imune ce-
lular parece ser o ponto crtico para a preveno
da doena. Vacinas com plasmdeos DNA ou ve-
tores virais carreando genes que expressam pro-
tenas internas do vrus como a M (membrana)
e a N (nucleocapsdeo) tm sido sugeridas para
induzir preferencialmente resposta celular e, as-
sim, minimizar o risco de ADE.
Atualmente existe uma vacina comercial
disponvel. Esta vacina foi produzida com um v-
rus mutante ts e protegeu gatos contra a FIP; en-
tretanto, a sua eccia e segurana seguem sendo
temas de debate.
5.6 Coronavrus canino
O coronavrus canino (CCoV) est associado
com surtos espordicos de enterite em ces. O v-
rus foi isolado, pela primeira vez, na Alemanha,
em 1971, a partir das fezes de ces com enterite.
Desde ento, esse agente tem sido amplamente
detectado em ces clinicamente saudveis ou em
ces que apresentam vmitos e diarria severa.
As caractersticas gerais de estrutura e do
ciclo de replicao do CCoV so semelhantes aos
descritos para a famlia Coronaviridae. O CCoV
pertence ao grupo I dos coronavrus e tambm
propenso a recombinaes no genoma. Os genes
das protenas M e S, que possuem importantes
propriedades biolgicas e imunolgicas, so os
principais locais de recombinao. Diferenas na
seqncia de nucleotdeos desses genes indicam
a existncia de uma diversidade gentica entre
cepas de referncia e isolados de campo. Alguns
Coronaviridae 627
autores sugerem a existncia de dois gentipos:
o CCoV tipo I e o CCoV tipo II. Alguns isolados
altamente virulentos j foram identicados, as-
sociados com altos ndices de mortalidade. Esses
relatos demonstram a necessidade de se investi-
gar as possveis implicaes dessas variaes an-
tignicas na eccia das vacinas contra o CCoV.
5.6.1 Epidemiologia
Ces de todas as idades e raas so suscept-
veis infeco pelo CCoV. No entanto, os lhotes
so mais sensveis e freqentemente desenvol-
vem sinais clnicos de enterite, alm de apresen-
tarem ndices maiores de mortalidade. A doena
ocorre com maior freqncia em canis, abrigos e
locais onde h convvio entre os ces. O vrus
altamente contagioso e dissemina-se rapidamen-
te na populao canina.
A principal fonte do vrus so as fezes de
ces infectados, alm de fmites contaminados,
e a infeco ocorre principalmente pela via oral.
O vrus pode ser excretado nas fezes por at duas
semanas aps a infeco, porm alguns estudos
demonstraram a eliminao por longos perodos
(entre 37 e 180 dias). Ces sem manifestaes cl-
nicas tambm podem excretar o vrus nas fezes
por perodos prolongados.
H evidncias sorolgicas de que o CCoV
apresenta distribuio mundial. Dados de preva-
lncia so variveis e alguns fatores que podem
interferir nos resultados desses estudos so lis-
tados a seguir: a) pequeno nmero de amostras
testadas; b) uso de diferentes tcnicas de deteco
de anticorpos; c) presena de amostras de soro de
ces vacinados; e d) maior importncia da imuni-
dade local aps a infeco natural.
Estudos de prevalncia, realizados na Aus-
trlia, demonstraram que 15,8% dos ces que
convivem com at outros dois ces no mesmo do-
miclio apresentavam anticorpos contra o CCoV;
enquanto 40,8% dos animais mantidos em canis
eram soropositivos. Inquritos sorolgicos, re-
alizados na Itlia, detectaram 90,8% de animais
positivos; na Inglaterra, 76%; na Turquia, 74,3%;
e, no Japo, 44,1%. No Sul do Brasil, um estudo
com ces no-vacinados de Santa Maria detectou
50,4% (412/817) amostras positivas.
A infeco pelo CCoV tambm foi demons-
trada em outros animais, como os coiotes (Canis
latrans Say), as hienas (Crocuta crocuta) e os lobos
(Canis lupus). Alm dos ces e outros candeos,
gatos domsticos tambm podem ser infectados,
demonstrando soro-converso, porm sem o de-
senvolvimento de sinais clnicos.
clnicos
A infeco dos ces ocorre pela via fecal-
oral. Aps a ingesto, o CCoV atinge o intestino
delgado e replica nas clulas epiteliais das vilo-
sidades, e a sua excreo nas fezes se inicia entre
um e dois dias aps a infeco. O vrus passa pelo
estmago, resistindo ao pH cido, e, aps a re-
plicao no epitlio do duodeno, dissemina-se na
superfcie intestinal at o leo. No foi demons-
trada a replicao do vrus no clon. O vrus
pode se disseminar aos linfonodos mesentricos
e, ocasionalmente, alcana o bao e o fgado. Os
sinais clnicos se iniciam entre um e quatro dias
aps a infeco.
Como a mortalidade geralmente baixa, as
necropsias no so freqentes. Macroscopica-
mente, o intestino delgado encontra-se dilatado,
o contedo lquido e de colorao amarelada
ou esverdeada. A mucosa intestinal encontra-se
hipermica e, em alguns casos, hemorrgica. Os
linfonodos mesentricos podem estar edemacia-
dos.
Microscopicamente, a replicao viral resul-
ta em atroa e fuso das vilosidades intestinais,
depresso das criptas, achatamento das clulas
epiteliais, aumento na celularidade da lmina
prpria e aumento de clulas globosas.
Os ces infectados podem apresentar sinais
leves a moderados de enterite. As manifestaes
mais freqentemente observadas so: diarria,
vmito, desidratao, perda de apetite, letargia,
o que, ocasionalmente, levam os ces jovens
morte. A infeco conjunta com outros vrus
(parvovrus, adenovrus ou vrus da cinomose),
bactrias ou parasitas geralmente produz uma
forma mais severa e at mesmo fatal da doena.
O estresse outro fator que pode agravar as ma-
nifestaes clnicas. Quando no ocorre agrava-
mento dos sinais, a recuperao clnica acontece
aps uma semana de infeco. Embora o CCoV
no seja freqentemente associado com doena
628 Captulo 24
respiratria em caninos, um estudo recente relata
a presena de um coronavrus em ces com sinais
respiratrios. O agente identicado nesses casos,
no entanto, provavelmente seja um novo corona-
vrus canino.
5.6.3 Imunidade
A infeco pelo CCoV restrita ao intestino
e geralmente no ocorre viremia. Portanto, os t-
tulos de anticorpos produzidos em resposta in-
feco so geralmente baixos. Em inoculaes ex-
perimentais, a presena de IgM foi inicialmente
detectada no plasma trs dias aps a inoculao.
J a IgG foi detectada entre o 4 e o 7 dia ps-ino-
culao. Anticorpos neutralizantes contra o vrus
podem ser detectados a partir de dez dias aps a
infeco, e pequenas quantidades de IgG, IgM e
IgA podem ser detectadas no duodeno.
A infeco natural e a vacinao com vacina
viva atenuada pela via oronasal induzem altos
nveis de IgA no intestino. Estas imunoglobulinas
esto diretamente relacionadas com a proteo
contra a infeco pelo CCoV. Vacinas atenuadas,
aplicadas pela via oral, conferem maior proteo,
pois a resposta imune mediada por IgA, associa-
da mucosa, previne a adsoro do CCoV s c-
lulas epiteliais das vilosidades intestinais.
A imunidade materna capaz de proteger
os neonatos por um perodo varivel, que depen-
de do ttulo de anticorpos que a me transfere aos
lhotes. H descries de durao da imunidade
passiva por quatro a cinco semanas; no entan-
to, os estudos a respeito da durao da resposta
imune ao CCoV so escassos.
5.6.4 Diagnstico
A deteco do vrus nas fezes ou no intestino
constitui-se na forma mais objetiva de diagnsti-
co, diferenciando-a da enterite por outros agentes,
como o parvovrus, o rotavrus e os picornavrus.
O diagnstico laboratorial freqentemente re-
alizado por ME a partir das fezes. O isolamento
do vrus no muito utilizado, entretanto dife-
rentes laboratrios obtiveram sucesso utilizando
clulas primrias de rim, timo e membrana sino-
vial canina. As clulas de linhagem de rim canino
A-72 so particularmente susceptveis ao CCoV,
alm de clulas de embrio e de linhagem de rim
felino (CRFK). O vrus produz efeito citoptico
caracterizado pela formao de sinccios; a con-
rmao da identidade do agente realizada por
IFA. Esta tcnica tambm pode ser realizada em
crioseces de intestino. Existem kits baseados
em cromatograa para a deteco de antgenos
do CCoV em fezes de ces.
As tcnicas de RT-PCR e RT-PCR em tem-
po real realizadas diretamente das fezes tambm
tm sido utilizadas, principalmente em pesqui-
sas. Testes de vacinas experimentais demonstra-
ram que essas tcnicas detectam quantidades me-
nores de vrus excretadas nas fezes, por perodos
maiores, quando comparadas com o isolamento
viral.
A sorologia de pouca utilidade, em termos
de diagnstico, por dois fatores: a) o coronavrus
est muito distribudo na populao canina e a
infeco, muitas vezes, subclnica; b) a deteco
de anticorpos no soro no indica exposio recen-
te ao vrus. A sorologia pareada poderia ser til,
demonstrando soroconverso. Para a deteco de
anticorpos no soro, so utilizadas as tcnicas de
SN, IPX e ELISA. Um kit de ELISA que detecta
IgM est disponvel comercialmente, para uso
em clnicas e consultrios; a presena desta imu-
noglobulina no soro indica infeco recente pelo
CCoV.
Para a preveno da infeco e doena pelo
CCoV, deve-se evitar o contato de ces soronega-
tivos com ces infectados. Condies de estresse,
causadas pela falta de sanidade, aglomerao,
desmame e infeces concomitantes por parasi-
tas e outros vrus favorecem o desenvolvimento
de enterite nos ces infectados. No meio ambien-
te, o vrus facilmente inativado pelo calor e por
solventes lipdicos. No entanto, em temperaturas
baixas, pode manter-se infeccioso por longos pe-
rodos. O CCoV estvel sob pH cido, sobrevi-
vendo a um extremo de pH 3.0.
Coronaviridae 629
O tratamento da enterite pelo CCoV de
suporte e baseia-se na restituio do equilbrio
hdrico-eletroltico, alm do controle de infeces
bacterianas e parasitrias concomitantes.
Existem vrias vacinas multivalentes que
possuem antgenos do CCoV inativados. No en-
tanto, a eccia dessas vacinas questionvel
pela importncia da imunidade local na mucosa
intestinal, uma vez que vacinas inativadas no
induzem a produo de IgA local. Anticorpos
no soro no so capazes de prevenir a infeco,
apenas reduzem a gravidade da doena, e isto s
ocorre a partir de trs semanas aps a aplicao
das vacinas. A existncia de diversidade anti-
gnica entre cepas e isolados do CCoV tambm
compromete a eccia das vacinas inativadas
contra o CCoV.
Vacinas vivas atenuadas j foram testadas,
e resultados promissores foram demonstrados
atravs da aplicao oral em uma nica dose.
Ces vacinados pela via oral apresentaram ttu-
los mais altos de IgA do que ces vacinados pela
via intramuscular. Aps o desao, os ces que re-
ceberam a vacina pela via oral no excretaram o
vrus nas fezes, enquanto os ces vacinados pela
via intramuscular excretaram o vrus por um pe-
rodo mdio de 10 dias. Em outro estudo seme-
lhante, testando uma vacina inativada, aplicada
pela via intramuscular, os animais excretaram o
vrus nas fezes por um tempo mdio de 11 dias.
Uma vacina atenuada foi licenciada, em 1983, nos
Estados Unidos, mas a comercializao foi proi-
bida logo em seguida devido ao grande nmero
de reaes adversas. Essas reaes foram obser-
vadas principalmente quando a vacina foi apli-
cada em conjunto com vacinas atenuadas para o
parvovrus, vrus da cinomose e adenovrus.
5.7 Coronavrus canino respiratrio
Desde a dcada de 1970, descreve-se a exis-
tncia do coronavrus canino (CCoV), associado
com doena entrica. Ao contrrio de vrios co-
ronavrus de outras espcies, que so associados
com sinais respiratrios. No entanto, relatos re-
centes sugerem um coronavrus como agente
etiolgico de doena respiratria em ces.
Este coronavrus foi isolado de uma popu-
lao canina abrigada em um centro de recolhi-
mento de ces de rua na Inglaterra. Os animais
apresentavam sinais clnicos semelhantes tra-
queobronquite infecciosa canina, tambm conhe-
cida como tosse dos canis. No entanto, a do-
ena respiratria no foi controlada com vacinas
comerciais contra essa sndrome, aplicadas pre-
viamente ao diagnstico laboratorial do surto.
A anlise logentica indicou que este v-
rus, denominado coronavrus canino respiratrio
(CRCV), apresenta uma grande homologia com
os coronavrus respiratrios de bovinos (BCoV,
98,8%) e humanos (HCoV-OC43, 98,4%), perten-
centes ao grupo II do gnero coronavrus, e peque-
na homologia com o CCoV (cepa 1-71, 68,53%),
que classicado no grupo I. Alm disso, consta-
tou-se a presena do gene da hemaglutinina este-
rase (HE) na cepa respiratria; uma caracterstica
dos coronavrus pertencentes ao grupo II. Caso
esses dados sejam conrmados, este vrus dever
ser classicado dentro da famlia Coronaviridae,
como um coronavrus canino distinto do CCoV.
Embora estudos de prevalncia sejam es-
cassos, um trabalho recentemente publicado de-
monstrou soropositividade de 17,8% (160/898)
para o CRCV em ces no Japo. Um estudo re-
trospectivo demonstrou que amostras de soro
coletadas de ces, j em 1998, apresentavam anti-
corpos contra o vrus, sugerindo a existncia pr-
via do CRCV em ces daquele pas.
5.8 Coronavrus bovino
O coronavrus bovino (BCoV) um agente
envolvido principalmente com diarria em be-
zerros, mas tambm pode estar envolvido em
doena respiratria em bezerros e com diarria
em bovinos adultos. Esse vrus est amplamente
disseminado na populao bovina e foi identi-
cado, pela primeira vez, em casos de diarria em
bezerros nos Estados Unidos, em 1973.
O BCoV possui uma morfologia tpica dos
coronavrus, com dimetro aproximado de 120
nm, e apresenta a protena hemaglutinina-estera-
se (HE) no envelope, alm das protenas S, M e
630 Captulo 24
E, sendo classicado como um coronavrus tipo
II. O genoma possui aproximadamente 32 kb e
a glicoprotena S do envelope clivada em duas
subunidades: S1 e S2.
5.8.1 Epidemiologia
A infeco pelo BCoV resulta em alta mor-
bidade e baixa mortalidade entre os animais in-
fectados. As fezes so consideradas a maior fonte
de vrus infeccioso, mas os animais infectados
podem excretar o vrus tambm nas secrees
nasais.
O BCoV endmico na populao bovina,
e anticorpos contra o vrus podem ser detecta-
dos em grande parte da populao. Evidncias
indicam que o vrus mantido nos rebanhos em
bezerros e vacas que apresentam infeco clnica
ou crnica. O estado de portador e infeco per-
sistente tambm tm sido sugeridos, mas ainda
no foram comprovados. Infeces recorrentes
no mesmo animal tambm podem ocorrer.
Estudos epidemiolgicos demonstraram a
presena desse vrus em vrios pases. O BCoV
foi detectado nas fezes de 28,1% dos animais tes-
tados em um inqurito na Turquia. Na Coria, o
BCoV foi detectado em 32 propriedades com ani-
mais que apresentavam sinais clnicos da disen-
teria de inverno. Nos Estados Unidos e no Cana-
d, a presena do BCoV tem sido freqentemente
descrita nas secrees nasais e fezes de bovinos
connados que apresentam sinais de doena res-
piratria. Anticorpos contra esse vrus foram de-
tectados em 89% das amostras de leite de 2.236
propriedades testadas na Sucia.
No Brasil, foram realizados poucos estu-
dos de prevalncia, mas a presena do vrus j
foi demonstrada no estado de So Paulo. Setenta
e duas amostras fecais de bezerros com diarria
foram coletadas em vrias propriedades, e 39%
delas foram positivas para o vrus. O BCoV tam-
bm foi detectado em amostras fecais de bovinos
adultos com diarria durante o inverno, sugerin-
do a ocorrncia da forma de disenteria de inver-
no no rebanho brasileiro. Embora o nmero de
estudos seja reduzido, provvel que a infeco
esteja amplamente difundida no rebanho bovino
brasileiro, a exemplo do que ocorre em outros pa-
ses.
clnicos
A manifestao clnica mais comum da in-
feco pelo BCoV a diarria em bezerros de trs
a 21 dias de idade, embora o vrus possa infec-
tar e causar doena animais com at trs meses.
A doena caracterizada pela presena de fezes
lquidas no intestino, leite coagulado nas fezes,
febre, debilidade, depresso e desidratao seve-
ra. O choque e a morte podem ocorrer caso no
sejam adotadas medidas de controle e tratamento
de suporte.
Outra doena atribuda infeco pelo BCoV
a disenteria de inverno, que ocorre em regies
frias, nas quais os animais so estabulados duran-
te o perodo de frio ou criados em connamentos.
Essa doena caracteriza-se por diarria aguda, f-
tida e, muitas vezes, sanguinolenta em animais
jovens e adultos. Tambm se observa a reduo
na produo de leite, depresso e anorexia.
O BCoV tem sido isolado tambm de bezer-
ros connados que apresentam sinais de doena
respiratria. No entanto, a participao do agente
na produo de doena respiratria ainda no
totalmente comprovada. A inoculao intranasal
com as cepas virais de origem respiratria indu-
ziu diarria, mas no induziu sinais respiratrios.
Por outro lado, a vacinao de bezerros contra o
BCoV reduziu a prevalncia de doena respira-
tria, sugerindo um papel do vrus na enfermi-
dade.
O vrus penetra pela via oral e atinge o intes-
tino pela via digestiva, onde replica em enterci-
tos das vilosidades da poro distal do intestino
delgado e tambm em uma pequena extenso do
clon. A diarria ocorre como conseqncia da
m-absoro e distrbios da atividade intestinal,
provocados pela atroa das vilosidades induzida
pela replicao viral. Ocorre uma rpida perda
de gua e eletrlitos, o metabolismo da glicose
e da lactose podem ser alterados, ocorrendo hi-
poglicemia e acidose ltica, podendo resultar em
choque e morte.
At o presente momento no foi possvel
identicar diferenas sorolgicas ou moleculares
denitivas entre as cepas que causam as manifes-
taes entricas daquelas associadas com sinais
respiratrios.
Coronaviridae 631
Inoculaes experimentais em vacas e be-
zerros demonstraram que as mesmas cepas de
BCoV podem causar diarria em terneiros e di-
senteria de inverno em animais adultos. Estudos
comparativos indicaram que os vrus isolados do
trato respiratrio ou do intestino foram capazes
de replicar em ambos os tecidos de bezerros ino-
culados. A inoculao experimental com a cepa
respiratria resultou em doena entrica em be-
zerros privados de colostro.
Na necropsia, pode-se observar os intestinos
distendidos com fezes lquidas e moldadas por
muco no clon. Na histopatologia, observa-se
atroa severa das vilosidades do intestino del-
gado, com descamao do epitlio e substituio
das clulas epiteliais de absoro por clulas ima-
turas com morfologia cubide.
5.8.3 Imunidade
A resposta imune humoral de bovinos in-
feco pelo BCoV foi estudada em animais com a
forma respiratria da doena e tambm pela ino-
culao experimental em bezerros privados de
colostro. Alguns dias aps a infeco, so detec-
tados anticorpos contra as protenas estruturais
S, HE, N e M. Anticorpos com atividade neutra-
lizante so direcionados contra as glicoprotenas
de superfcie S e HE. Aps a inoculao da cepa
respiratria, o nal da excreo viral nas secre-
es nasais coincidiu com o aparecimento de
anticorpos neutralizantes, sugerindo um impor-
tante papel desses anticorpos na erradicao da
infeco. O papel da imunidade celular na prote-
o contra o BCoV desconhecido.
A neutralizao do vrus no lmen intesti-
nal por IgA, parece ser a forma mais efetiva de
proteo contra a diarria neonatal. Nesse caso,
a imunidade passiva de grande importncia na
proteo dos bezerros nos primeiros dias de vida.
Imunoglobulinas das classes IgG1, IgG2 e IgA so
detectadas no colostro de vacas com altos ttulos
de anticorpos contra o BCoV. A queda na quanti-
dade de anticorpos na transio de colostro para
leite tem sido apontada como uma possvel causa
da alta incidncia da doena em bezerros a partir
do quinto dia de vida.
5.8.4 Diagnstico
A diarria neonatal em bezerros uma sn-
drome de etiologia complexa com o possvel en-
volvimento de coronavrus, rotavrus, bactrias
entricas (E. coli e Salmonella spp.), protozorios
e parasitas. Esses agentes podem produzir a do-
ena isoladamente ou em conjunto. Na maioria
dos casos, as manifestaes clnicas so muito
semelhantes, o que diculta a realizao do diag-
nstico diferencial com a determinao da causa
especca. Por essa razo, o diagnstico etiolgi-
co denitivo requer a realizao de provas labo-
ratoriais.
A ME realizada nas fezes a opo mais in-
dicada para a realizao do diagnstico. A IFA
tambm pode ser aplicada para a pesquisa de
antgenos do vrus no intestino. O isolamento do
vrus pode ser realizado em clulas primrias de
rim bovino ou em clulas da linhagem Vero. O
isolamento requer o tratamento prvio do incu-
lo com tripsina, para facilitar a penetrao e repli-
cao viral. Os isolados de campo so difceis de
isolar e, geralmente, requerem vrias passagens
para adaptao ao cultivo celular antes de pro-
duzirem efeito citoptico. A tcnica de RT-PCR
tambm tem sido utilizada para o diagnstico do
BCoV.
A preveno completa da infeco pelo
BCoV no possvel, mas boas condies de ma-
nejo e higiene podem reduzir as conseqncias
da infeco. Ateno especial deve ser dispensa-
da para a sanidade durante o parto. Vacinas vi-
vas modicadas esto disponveis no mercado e
a sua aplicao recomendada, quando o BCoV
est presente na propriedade, em vacas prenhes
e em recm-nascidos. A vacinao das vacas ob-
jetiva induzir altos ttulos de anticorpos e, assim,
aumentar o nvel de imunidade passiva transmi-
tida pelo colostro.
632 Captulo 24
5.9 Vrus da bronquite infecciosa das
galinhas
A infeco pelo vrus da bronquite infecciosa
das galinhas (IBV) foi descrita pela primeira vez
no estado da Dakota do Norte, nos Estados Uni-
dos, em 1931. Essa infeco pode manifestar-se
por distrbios respiratrios, reprodutivos e/ou
renais. O IBV o vrus prottipo da famlia Co-
ronaviridae, pertence ao grupo III dos coronavrus
e, como outros membros dessa famlia, apresenta
uma grande variao nos antgenos de superfcie,
o que implica na existncia de vrios sorotipos e
subtipos. Essa caracterstica biolgica resulta em
vrias conseqncias, principalmente em relao
a patogenia e epidemiologia desse vrus.
5.9.1 Epidemiologia
O IBV est presente em todos os pases que
possuem avicultura comercial ou domstica. Sur-
tos da doena podem ocorrer mesmo em popula-
es vacinadas. As cepas Massachussets (Mass)
e Connecticut (Conn) so consideradas padro
para o vrus, sendo, assim, utilizadas em vrias
vacinas. Em alguns pases, vrios sorotipos do v-
rus esto circulando na populao avcola, o que
diculta o diagnstico e controle.
A galinha considerada a principal e ni-
ca espcie naturalmente susceptvel ao vrus e
que desenvolve a doena. Entretanto, isolados
de coronavrus muito semelhantes ao IBV tm
sido associados com doena respiratria e renal
em criaes comerciais de faises. Os coronav-
rus isolados de perus no produzem doena em
galinhas e vice-versa.
O IBV transmitido principalmente por
aerossis, mas as aves se infectam tambm pela
ingesto de gua e alimentos contaminados com
material fecal. O vrus muito contagioso e en-
contrado em altos ttulos na traquia de aves do-
entes e nas fezes de aves em recuperao. O vrus
pode sobreviver por dias ou at semanas no meio
ambiente, principalmente sob baixas temperatu-
ras. Os sinais clnicos se desenvolvem dentro de
18 a 36 horas aps o contato com as aves infecta-
das. A infeco geralmente resolvida em apro-
ximadamente 14 dias.
As aves infectadas so as maiores fonte de
infeco e contaminao no meio ambiente. Aps
a recuperao da doena clnica, algumas aves
permanecem persistentemente infectadas, excre-
tando o vrus por um longo perodo nas fezes e
em aerossis. O local de persistncia ainda no
foi denido, mas o tecido renal um possvel
candidato.
clnicos
O vrus replica inicialmente no trato respi-
ratrio, de onde se dissemina pelo sangue para
vrios rgos. Alm do trato respiratrio, o vrus
tem sido isolado tambm dos ovidutos, rins e tra-
to intestinal. O vrus pode ser encontrado tam-
bm na bursa de Fabricius, o que poderia explicar
os efeitos imunossupressivos do IBV.
Os achados macroscpicos mais freqen-
temente observados so a presena de exsudato
seroso, catarral ou caseoso na traquia, fossas na-
sais, brnquios e, eventualmente, nos sacos are-
os. Em aves de postura, o material uido da gema
pode ser encontrado na cavidade abdominal, em
funo do rompimento do ovo em formao e
das leses permanentes no oviduto. Quando a
cepa possui nefrotropismo, os rins podem apre-
sentar-se plidos e edemaciados, com deposio
de uratos nos tbulos e ureteres.
Microscopicamente podem ser observadas:
inltrao linfide, hiperplasia, edema, descama-
o e perda de clios no epitlio respiratrio. A in-
tensidade das leses pode variar de acordo com a
virulncia da cepa. No tecido renal, pode ser ob-
servada nefrite intersticial aguda ou subaguda.
A forma respiratria da doena a mais co-
mum e caracteriza-se por respirao ofegante,
associada com acmulo de material caseoso na
siringe; tosse, estertores, espirro e descarga nasal
em aves jovens. O consumo de gua e alimento
reduzido e, como conseqncia, o ganho de peso
tambm ca reduzido. Em aves com idade su-
perior a seis semanas, os sinais so semelhantes,
porm a descarga nasal observada com menor
freqncia. Nessas aves, a infeco pode passar
despercebida. Em aves de postura, so obser-
vadas a queda na produo e da qualidade dos
Coronaviridae 633
ovos, alm de sinais respiratrios. comum a
postura de ovos com casca mole, deformada ou
mesmo sem casca, devido s leses produzidas
nos ovidutos. Essas leses podem ser produzi-
das de forma permanente em aves jovens e, neste
caso, o problema somente ser detectado na po-
ca de postura.
Algumas cepas do IBV apresentam um tro-
pismo maior pelo tecido renal, produzindo leses
proeminentes nos rins. As aves infectadas por es-
sas cepas apresentam depresso, penas arrepia-
das e aumento no consumo de gua. A urolitase
pode ser uma das conseqncias da infeco.
A taxa de mortalidade da doena respirat-
ria geralmente baixa e se deve, principalmente,
a complicaes por infeces bacterianas secun-
drias, principalmente por Escherichia coli. Em
alguns casos, foram observados edema facial, ae-
rosaculite e uma taxa de mortalidade um pouco
mais elevada. A infeco com cepas de patoge-
nicidade mista, que causam leses na traquia e
rins, pode induzir mortalidade de at 25%.
Alm das perdas por ganho de peso reduzi-
do e mortalidade, a infeco pelo IBV em frangos
de corte leva ao aumento na condenao de car-
caas durante o abate.
5.9.3 Imunidade
Os mecanismos imunes, associados com a
eliminao e proteo contra o IBV, ainda no es-
to esclarecidos, mas os diferentes ramos da res-
posta imune parecem estar envolvidos em maior
ou menor grau. A resposta imune inata atravs
do interferon (IFN) e a resposta imune adaptativa
atravs de anticorpos e linfcitos T parecem de-
sempenhar um papel importante.
O grande nmero de sorogrupos e sorotipos
um fator complicador na induo da proteo
contra esse vrus. As aves naturalmente infecta-
das ou vacinadas com o IBV estaro protegidas
contra o vrus homlogo, mas a proteo cruzada
contra cepas heterlogas varivel.
Evidncias indicam que a resposta imune
protetora induzida principalmente por ant-
genos da superfcie do vrus. Estudos realiza-
dos com as protenas S1, N e M demonstraram
que apenas os eptopos de S1 foram capazes de
induzir proteo contra o vrus. Os principais
determinantes antignicos do IBV encontram-se
em regies das glicoprotenas S1 e S2. Peptdeos
recombinantes construdos com seqncias da S1
e S2 induziram resposta imune humoral, celular
e proteo frente ao desao; enquanto peptdeos
da protena N no induziram proteo, apesar da
induo de anticorpos e linfcitos T.
O papel dos anticorpos na proteo contro-
verso, uma vez que alguns pesquisadores encon-
traram boa correlao entre ttulos de anticorpos
e proteo; enquanto outros no encontraram
correlao alguma. Anticorpos das classes IgG
e IgA foram detectados na lgrima, em lavados
traqueais e no oviduto, e tambm nos contedos
cecais e duodenais de aves inoculadas com o v-
rus. Estes anticorpos foram detectados j aos sete
dias aps a inoculao.
A proteo conferida pela imunizao com
a protena recombinante S1 no foi correlaciona-
da com ttulos de anticorpos. Da mesma forma,
altos nveis de anticorpos na secreo lacrimal
no determinaram proteo contra o desao vi-
ral. Por outro lado, a importncia dos anticorpos
na resoluo da infeco cou demonstrada em
experimentos que detectaram um aumento na se-
veridade da doena produzida pelo IBV em aves
bursectomizadas, quando comparadas com aves
normais. Reforando esta hiptese, ttulos altos
de anticorpos neutralizantes na secreo nasal
desempenharam importante papel na proteo
contra a reinfeco.
Evidncias para a participao da resposta
celular vieram da deteco de linfcitos Tc espe-
ccos para o IBV em secrees respiratrias de
aves infectadas. A importncia dessas clulas na
proteo contra o IBV cou demonstrada pela
transferncia passiva de linfcitos Tc de aves in-
fectadas para pintos, que foram posteriormente
desaados. Os pintos que receberam essas c-
lulas caram parcialmente protegidos, apresen-
tando uma forma mais branda da doena. Esses
resultados indicam que, embora os Tc paream
possuir um papel importante, este no o nico
mecanismo atuante na proteo contra o vrus.
A imunidade passiva transferida da galinha
para o pinto confere alguma proteo contra vrus
homlogo. Pintos com ttulos altos de anticorpos
foram ecientemente protegidos no primeiro dia
de vida, mas no apresentaram a mesma prote-
634 Captulo 24
o aos sete dias de idade. Neste caso, a proteo
apresentou uma correlao signicativa com a
presena de nveis altos de anticorpos no sistema
respiratrio, mas no no soro.
5.9.4 Diagnstico
O diagnstico laboratorial do IBV pode ser
realizado pelo isolamento e identicao do v-
rus. O material mais adequado para o isolamento
viral a traquia, cujo material pode ser coletado
com o auxlio de suabes ou fragmentos de teci-
do durante o exame post-mortem. Fragmentos dos
rins e dos ovidutos tambm so indicados para
o isolamento, pois o vrus pode replicar nesses
tecidos. Suabes cloacais e tonsilas cecais tambm
podem ser coletados.
O mtodo mais utilizado para o isolamento
do vrus a inoculao na cavidade alantide de
embries de galinha com nove a onze dias. As al-
teraes produzidas pelo vrus so o nanismo e
congesto dos vasos sangneos, visveis ao exa-
me em ovoscpio. Em muitos casos, so necess-
rias trs a quatro passagens para se observar as
leses. Algumas cepas do vrus podem matar os
embries em 48 a 72 horas. O isolamento atravs
de uma ou no mximo duas passagens de 24 ho-
ras em ovos embrionados, com posterior detec-
o por RT-PCR, uma estratgia que tem sido
bastante utilizada por vrios laboratrios.
Outra forma de isolar o vrus a inoculao
em explantes de anel traqueal de pintos de um
dia. Nesse caso, a presena do vrus ser detec-
tada pela ciliostase (parada do movimento ciliar)
que ocorre dois a trs dias aps a inoculao. A
utilizao de cultivos celulares no recomenda-
da para o isolamento, porque necessria uma
adaptao prvia dos vrus aos cultivos. A pro-
pagao do IBV em cultivos celulares utilizada
somente para a realizao de tcnicas sorolgicas
e pesquisas com cepas adaptadas.
A identicao do vrus pode ser realizada
por IFA, IPX, ME ou imunodifuso em gel de
gar (IDGA). ELISA utilizando anticorpos mo-
noclonais pode ser aplicada para detectar o vrus
e tambm para determinar os sorotipos no ui-
do alantide ou cultivos de traquia. As tcnicas
moleculares, como RT-PCR e nested-PCR, tm
sido cada vez mais utilizadas. Essas tcnicas per-
mitem a obteno de resultados mais acurados
quando se objetiva identicar diferentes cepas
do vrus.
Para a deteco de anticorpos contra o IBV,
podem ser empregados os testes de inibio da
hemaglutinao (HI), SN, IDGA e ELISA. A so-
rologia complicada pela grande quantidade de
sorotipos existentes que apresentam antgenos
especcos de grupo e especcos do sorotipo. A
tcnica de ELISA rotineiramente utilizada para
monitoramentos e pesquisa e detecta antgenos
de grupo. A SN e HI so consideradas sorotipo-
especcas.
O controle da bronquite infecciosa realiza-
do pela vacinao, com vacinas atenuadas admi-
nistradas na gua, em aerossis ou diretamente
na conjuntiva. Vacinas inativadas de aplicao
individual tambm so utilizadas. Grande parte
das vacinas contm a cepa Massachussets, por
ter sido este vrus inicialmente isolado de vrios
pases. Em alguns pases, so includas cepas lo-
cais, por causa da grande variao antignica do
vrus.
As aves de corte so geralmente vacinadas
com um ou sete dias de idade e no recebem re-
foro. Para aves de postura, so recomendados
diferentes protocolos de vacinao, com uma va-
cinao inicial no pinto (um ou sete dias) e um
ou mais reforos durante o perodo de postura.
No recomendada a aplicao da primeira dose
de vacina no pinto de um dia pela possibilidade
de interferncia da imunidade passiva. No obs-
tante, este um procedimento freqentemente
utilizado.
5.10 Coronavrus dos perus
O coronavrus dos perus (turkey coronavirus
TCoV) o agente etiolgico da doena conheci-
da como Bluecomb Disease (doena da crista azul),
sendo classicado como um coronavrus grupo
II. O TCoV foi inicialmente isolado em criatrios
do estado americano de Minessota, na dcada de
1950. Posteriormente, o agente foi identicado
Coronaviridae 635
em vrias regies daquele pas, no Canad e na
Austrlia. A doena caracteriza-se por uma en-
terite que cursa com diarria, anorexia, depres-
so e perda de peso. Perus de todas as idades so
susceptveis, mas a doena mais freqente em
peruzinhos com poucas semanas de vida. A mor-
talidade varivel e depende de outros fatores,
como a presena de infeces secundrias, condi-
es climticas e prticas de manejo. A transmis-
so do TCoV ocorre pela via fecal-oral, de forma
direta ou por utenslios, alimentos, gua e outros
veculos contaminados. A transmisso mecni-
ca por cascudinhos dos avirios, aves silvestres,
ces, roedores e moscas tambm tem sido espora-
dicamente descrita. Perus recuperados da infec-
o so resistentes reinfeco pelo TCoV, e esta
resistncia parece estar associada com a presena
de IgA na mucosa intestinal. O diagnstico do
TCoV pode ser realizado pela deteco do vrus
nas fezes ou no intestino, pela microscopia ele-
trnica ou por imunoistoqumica. No h vacinas
disponveis no mercado contra este vrus.
Uma doena entrica nova de perus, que
cursa com altos ndices de morbidade e morta-
lidade, vem sendo observada em criaes in-
dustriais de perus em vrios pases, inclusive no
Brasil. Esta doena foi denominada de sndrome
da mortalidade por enterite em peruzinhos (poult
enteritis-mortality syndrome PEMS). Os sinais cl-
nicos so: diarria, depresso severa, desidrata-
o, anorexia, imunossupresso e perda de peso.
A etiologia dessa doena no est totalmente
esclarecida; no entanto, acredita-se que o TCOV
possua um papel importante na sua etiologia. A
deteco de maior prevalncia do vrus em reas
em que a doena ocorre, quando comparada com
reas indenes, sugerem essa associao. Alm
disso, a co-infeco de perus de poucos dias de
vida com o TCOV e a Escherichia coli reproduziu
as manifestaes clnicas observadas nos surtos
naturais. Por outro lado, a infeco apenas com o
TCOV no induziu a doena e, em alguns casos
de doena natural, o vrus no pode ser isolado.
Portanto, o papel do TCOV na PEMS ainda uma
questo controversa, embora as evidncias indi-
quem alguma participao do agente na etiologia
dessa doena.
6 Torovrus de interesse veterinrio
Os torovrus tm sido detectados em huma-
nos com gastrenterite (HToV) e em sunos (PToV),
alm de bovinos e eqinos. So conhecidos dois
torovrus que infectam bovinos: o torovrus bo-
vino (BToV) e o vrus breda bovino (BRV); e dois
que infectam eqinos: o torovrus eqino (EToV)
e o vrus berne eqino (BEV). Somente o BRV e
o BEV produzem doena clnica em seus hospe-
deiros. Anticorpos contra o BRV e o BEV j foram
detectados em vrios outros mamferos.
Estudos genticos demonstraram a seme-
lhana dos torovrus com os outros membros da
famlia Coronaviridae na estrutura, na organiza-
o genmica e na estratgia de replicao, com
a produo de mRNA subgenmicos. Os vrions
apresentam uma morfologia pleomrca, com
um nucleocapsdeo tubular, e, quando exami-
nados sob microscopia eletrnica, exibem uma
forma de rim ou de bacilo. Esses vrus possuem
um genoma RNA de sentido positivo com 25 a
30 kb.
6.1 Vrus Berne eqino
O vrus Berne eqino (BEV) foi isolado e
identicado em Berna, na Sua, em 1983, de ma-
terial proveniente de um eqino com diarria.
Anticorpos contra o vrus foram posteriormente
detectados em eqinos de outros pases da Eu-
ropa, mas ainda no houve descrio de outros
casos da doena. O vrus foi extensivamente estu-
dado e, pelas suas caractersticas, foi classicado
nesse gnero. Aparentemente, esse vrus possui
pouca importncia como patgeno para a esp-
cie eqina. O torovrus eqino (EToV) pertence
ao gnero torovrus, no entanto no associado a
doena nessa espcie.
6.2 Vrus Breda bovino
O vrus Breda bovino (BRV) causa diarria
e desidratao em bovinos naturalmente infecta-
dos ou aps a inoculao experimental. O vrus
infecta clulas epiteliais dos intestinos delgado
e grosso de bezerros de at cinco a seis meses
636 Captulo 24
de idade. A diarria ocorre 24 a 72 horas aps a
inoculao, juntamente com anorexia e depres-
so, que podem durar de trs a cinco dias. O
vrus produz leses nas clulas das vilosidades
e criptas intestinais, causando necrose e exfolia-
o dos entercitos. O BRV no replica bem em
cultivo celular e foi associado com enterite, pela
primeira vez, em 1982. O vrus j foi detectado
na Holanda, Alemanha, Sua, Inglaterra, Frana,
Itlia, frica do Sul, Costa Rica, Estados Unidos
e Canad. Nos EUA, aproximadamente 90% do
gado de leite soropositivo. Na Holanda, 6,4%
dos animais com diarria eram positivos para o
BRV, enquanto apenas 1,7% de assintomticos
foram positivos. Existem dois sorotipos do vrus,
o BRV-1 e o BRV-2. Vacas assintomticas prova-
velmente servem de reservatrios do vrus. O
torovrus bovino (BToV) uma espcie de vrus
distinta do BRV e tem sido detectado em secre-
es nasais, embora no cause doena.

7 Coronavrus humanos
Os coronavrus humanos (HCoV) so res-
ponsveis por 15-20% dos resfriados comuns
que afetam a populao. As cepas HCoV-229E
e HCoV-OC43 so freqentemente envolvidas,
embora exista uma variabilidade antignica
muito grande entre os isolados desses vrus. Os
surtos ocorrem principalmente no inverno, com
um perodo de incubao que varia entre dois e
quatro dias. Alguns dos sinais clnicos observa-
dos so: febre, dor de cabea, dor de garganta,
descarga nasal e tosse. Os indivduos infectados
so suscetveis a reinfeces com o mesmo vrus
ou com outro antigenicamente diferente. Esta se-
gunda infeco pode resultar em sintomatologia
semelhante primeira ou em uma forma mais
branda.
Um novo coronavrus humano denomina-
do SARS-CoV altamente patognico foi isolado
recentemente de pacientes com uma sndrome
denominada pneumonia asitica (SARS, severe
acute respiratory disease). A enfermidade foi ini-
cialmente detectada na China, em novembro de
2002. O vrus disseminou-se, posteriormente, pela
sia, por alguns pases europeus e pelo Canad,
infectando mais de 8.000 pessoas e matando 774.
O ltimo caso foi descrito em abril de 2004. As
pessoas afetadas apresentavam febre, cefalia,
dispnia e evidncia radiolgica de pneumonia.
O vrus associado com essa doena era diferente
de todas as espcies de coronavrus conhecidas
at ento. Estudos epidemiolgicos e moleculares
demonstraram que o vrus teve origem em um
animal silvestre e adaptou-se espcie humana.
O hospedeiro natural do vrus ainda no foi de-
terminado, mas os candidatos mais provveis so
o masked palm civet cat e o racoon dog, ambas esp-
cies tpicas da China. Foi tambm sugerido que
o gato civet teria servido somente de hospedeiro
intermedirio, no qual o vrus foi amplicado, e
no como o reservatrio original do vrus. Recen-
temente um coronavrus foi identicado em mor-
cegos, com grande homologia com o da SARS,
sugerindo que essa possa ser a origem do vrus
da SARS. A pneumonia asitica foi rapidamen-
te controlada graas ao trabalho desenvolvido
por uma rede de prossionais em todos os locais
onde houve a ocorrncia da infeco, interconec-
tados atravs da Organizao Mundial de Sade
(OMS WHO).
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ARTERIVIRIDAE
Marcelo de Lima & Fernando Abel Osorio
25
1 Introduo
2 Classicao
3 Propriedades dos vrions, estrutura e organizao genmica
4 Ciclo replicativo
4.1 Adsoro e penetrao
4.3 Produo de RNAs mensageiros subgenmicos
4.4 Traduo e processamento das protenas
5 Arterivrus de importncia veterinria
5.1 Vrus da arterite eqina
5.1.1 Epidemiologia
5.1.3 Patologia
5.1.4 Imunidade
5.1.5 Diagnstico
5.2 Vrus da sndrome respiratria e reprodutiva dos sunos
5.2.1 Epidemiologia
5.2.3 Imunidade
5.2.4 Diagnstico
6 Perspectivas
641
641
641
643
643
644
644
645
645
646
646
646
647
648
648
648
649
649
650
651
652
652
653
654
654
1 Introduo
Durante a dcada de 1990, semelhanas na
estrutura e morfologia dos vrions, na seqncia
de nucleotdeos e organizao genmica, alm
de propriedades biolgicas em comum, levaram
o vrus da arterite eqina (EAV), o vrus eleva-
dor da lactato-desidrogenase (LDEV), o vrus da
sndrome respiratria e reprodutiva dos sunos
(PRRSV) e o vrus da febre hemorrgica dos s-
mios (SHFV) a serem agrupados em uma nova
famlia viral, a Arteriviridae. O nome da famlia
foi derivado da doena causada pelo EAV em
eqinos. Acredita-se que exista uma ligao evo-
lutiva entre os arterivrus e os membros da fam-
lia Coronaviridae, apesar de diferenas marcantes
estruturais, genmicas e biolgicas. Essa relao
decorrente de semelhanas existentes nos genes
que codicam as enzimas do complexo replicase
e tambm devido utilizao de estratgias simi-
lares de expresso gnica.
Os arterivrus compartilham diversas pro-
priedades biolgicas e moleculares, so restritos
aos seus hospedeiros naturais e possuem a ca-
pacidade de causar infeces persistentes assin-
tomticas em hospedeiros susceptveis (Tabela
25.1). Alm disso, a produo de um grupo de
RNAs mensageiros subgenmicos (mRNAsg)
que, posteriormente, so traduzidos em prote-
nas estruturais, constitui-se em uma propriedade
nica dos arterivrus e coronavrus e serviu como
base para a criao da ordem Nidovirales (do la-
tim; nido = ninho).
2 Classicao
Ordem: Nidovirales
Famlia: Arteriviridae
Gnero: Arterivirus
Espcies: vrus da arterite eqina (EAV), v-
rus da sndrome respiratria e reprodutiva dos
sunos (PRRSV), vrus elevador da lactato desi-
drogenase (LDEV), vrus da febre hemorrgica
dos smios (SHFV).
3 Propriedades dos vrions, estrutura
e organizao genmica

Os membros da famlia Arteriviridae pos-
suem vrions relativamente pequenos (45-60 nm
de dimetro), esfricos e com superfcie aproxi-
madamente regular. Possuem um nucleocaps-
deo possivelmente icosadrico, com dimetro
entre 25 e 35 nm, envolto por um envelope lipo-
protico com pequenas projees (Figura 25.1).
Os vrions perdem a infectividade rapidamente
quando expostos a temperaturas 4C e so ins-
tveis em solues com baixas concentraes de
detergentes no-inicos ou com pH abaixo de 6
ou acima de 7.5.
O genoma consiste de uma molcula linear
de RNA, ta simples, de sentido positivo, com
aproximadamente 13-15 kb. A organizao gen-
mica muito similar entre os membros da fam-
lia Arteriviridae. O RNA viral infeccioso quando
EAV
Vrus Hospedeiro Conseqncias da infeco
Eqinos
Infeces persistentes em garanhes,
artrite, abortamentos, pneumonia em potros
PRRSV
SHF Macacos Doena sistmica, hemorragias e morte
Sunos
Infeces subclnicas, enfermidade
respiratria e distrbios reprodutivos
LDEV Camundongos
Infeces subclnicas em
colnias de camundongos
Tabela 25.1. Doenas animais associadas com infeces por arterivrus.
642 Captulo 25
introduzido articialmente em clulas permissi-
vas, possui uma estrutura cap na extremidade 5
e uma cauda de poli-A na extremidade 3.
Uma representao esquemtica da estrutu-
ra e organizao do genoma dos arterivrus est
apresentada na Figura 25.2. As protenas no-es-
truturais so traduzidas pela traduo das ORFs
(open reading frames) 1a e 1b que abrangem cerca
de 80% do genoma policistrnico dos arterivrus.
A ORF1a extremamente varivel, enquanto a
ORF1b possui um alto nvel de conservao entre
todos os arterivrus. As outras ORFs, localizadas
na extremidade 3 do genoma, codicam pro-
tenas estruturais que permanecem associadas
como componentes dos vrions. Essas protenas
so produzidas pela traduo de um grupo de
um grupo de RNA mensageiros subgenmicos
(mRNAsg), que, por sua vez, so produzidos
pela transcrio da cpia de RNA de sentido an-
tigenmico.
Arteriviridae 643
4 Ciclo replicativo
Os arterivrus replicam ecientemente em
cultivos primrios de macrfagos de seus hos-
pedeiros naturais. O SHFV e o PRRSV replicam
tambm em clulas da linhagem MA-104 e suas
derivadas (MARC-145). Alm disso, diversas
outras linhagens celulares so permissivas re-
plicao do EAV. O ciclo de replicao relati-
vamente curto e ttulos superiores a 10
8
DICC
50

(dose infectiva para 50% dos cultivos celulares)
so facilmente observados no sobrenadante de
clulas infectadas com o EAV e com o SHFV. O
efeito citoptico durante a infeco de clulas de
cultivo caracteriza-se por arredondamento celu-
lar e desprendimento das clulas infectadas da
superfcie dos frascos de cultivo. As principais
etapas do ciclo replicativo esto representadas na
Figura 25.3.

A replicao dos arterivrus ocorre na regio
perinuclear do citoplasma das clulas hospedei-
ras. In vivo, os principais alvos de replicao so
clulas da linhagem macrofgica. In vitro, repli-
1a
1b
2 4
3 5
6
7
3 5
mRNA1
mudana de fase
de leitura
traduo do genoma
G
S
G
L
M
G
N
poliprotena replicase 1a
poliprotena replicase 1ab
protenas no-estruturais
replicao do
genoma
transcrio dos
mRNAs subgenmicos
processamento da replicase
RNA genmico protenas estruturais
traduo dos
mRNA subgenmicos
2
mRNA 2
mRNA 3
3
4
mRNA 4
5
mRNA 5
6
mRNA 6
mRNA 7
7
morfognese
e egresso
Figura 25.3. Etapas da expresso gnica e replicao do genoma dos arterivrus (EAV). Aps a penetrao e
desnudamento, a primeira etapa a traduo direta das ORFs 1a e 1b, resultando na produo de duas poliprotenas
(replicase 1a e replicase 1ab), que sero clivadas originando as enzimas do complexo replicase (protenas NS). Essas
enzimas realizam a transcrio integral do genoma, originando uma cpia de sentido antigenmico (polaridade
negativa). Utilizando esta molcula como molde, o complexo replicase transcreve regies prximas extremidade 3',
resultando na produo de vrios mRNAsg que codificam as protenas estruturais. A transcrio integral da cpia
antigenmica resulta na produo de RNAs coma extenso genmica, que, juntamente comas protenas estruturais,
iro participar da morfognese da prognie viral. Note que para o EAV, os produtos das ORFs 2a e 2b denominam-se
protenas Ee GS, respectivamente, enquantoa ORF5codifica a GLougp5.
Adaptado de Snijder & Meulenberg (2001).
644 Captulo 25
cao produtiva em linhagens celulares no-sus-
ceptveis infeco natural pode ser produzida
por transfeco do RNA genmico. A adsoro
dos vrions superfcie das clulas hospedeiras
ocorre provavelmente pela interao da glico-
protena 5 (gp5) ou do dmero gp5/M com uma
protena de 210 kDa, localizada na membrana
plasmtica de macrfagos alveolares. Em clulas
MARC-145, uma molcula de superfcie, com ca-
ractersticas similares heparina, poderia servir
de receptor para o PRRSV. A penetrao do vrus
na clula hospedeira ocorre por endocitose me-
diada por receptor, e a fuso do envelope com a
membrana plasmtica dependente da reduo
de pH que ocorre nos endossomos.
A replicao do genoma dos arterivrus
ocorre integralmente no citoplasma e envolve a
sntese de uma molcula de RNA de sentido an-
tigenmico (polaridade negativa). Essa molcula
serve de molde para a sntese de mRNAsg para a
produo das protenas estruturais e para a sn-
tese de cpias de extenso e sentido genmico.
O complexo replicase responsvel pela produ-
o das molculas de sentido antigenmico, pela
produo dos mRNAsg e pela sntese das cpias
de sentido genmico. As enzimas do complexo
replicase so produzidas em etapas iniciais do ci-
clo, pela traduo direta das ORFs 1a e 1b.
Com exceo de pequenas seqncias no-
traduzidas, localizadas prximas s extremida-
des 5 (156 a 221 nucleotdeos) e 3 (59 a 117 nt),
que provavelmente contm sinais importantes
para a replicao e traduo do genoma viral, as
demais regies genmicas so codicantes.
4.3 Produo de RNAs mensageiros
subgenmicos
A expresso dos genes presentes no tero
3 do genoma ocorre pela traduo de um grupo
de RNA mensageiros subgenmicos (mRNAsg).
Este mecanismo se constitui em uma caracters-
tica nica do ciclo replicativo dos membros da
ordem Nidovirales. Os mRNAsg so sintetizados
por um mecanismo de transcrio muito similar
ao que foi proposto para os coronavrus. Os mo-
delos propostos para a sntese de mRNAsg esto
apresentados na Figura 25.4. Todos os mRNAsg
possuem uma seqncia leader na extremidade 5
genoma
(+) 5
(+) 5
(-) 3
(+) 5
mRNA subgenmico
A
( - ) 3
(+) 5
genoma
( - ) 3
(+) 5
mRNA subgenmico
B
Figura 25.4. Modelos propostos para a sntese de RNAs mensageiros subgenmicos (mRNAsg). A) Transcrio a
partir da molcula de RNA antigenmico (sentido negativo); B) Transcrio a partir do RNA genmico (sentido
positivo), originandoRNAsgsubgenmicos queserviriamdemolde para a sntesedos mRNAsgcorrespondentes.
(-) 3
(+) 5
(-) 3
(+) 5
(+) 5
Adaptado de Snijder & Meulenberg (2001).
Arteriviridae 645
derivada da extremidade equivalente do geno-
ma viral fusionada ao RNA mensageiro atravs
de um mecanismo de transcrio descontnua,
alm de pequenas seqncias conservadas envol-
vidas na regulao da transcrio (TRS) na extre-
midade 3. Atualmente, evidncias indicam que
o modelo de transcrio mais consistente seria a
gerao de mRNAsg, atravs de um mecanismo
de sntese descontnua a partir do RNA genmi-
co. De acordo com este modelo, poderia ocorrer
tanto a gerao de mRNAsg de sentido negativo
(sntese descontnua), como de RNA antigenmi-
co (sntese contnua). Em uma etapa subseqente,
os RNAsg de sentido negativo seriam transcritos
em molculas de sentido positivo (mRNAsg), que
seriam, posteriormente, traduzidas em protenas
estruturais, enquanto o RNA antigenmico (sen-
tido negativo) serviria de molde para a sntese de
RNA genmico.
4.4 Traduo e processamento
das protenas
As protenas que formam o complexo repli-
case so produzidas pela traduo direta do RNA
genmico a partir das ORFs 1a e 1b (Figura 25.3).
A traduo da ORF1b envolve um mecanismo
denominado -1 ribosomal frameshift, ou seja, em
um determinado ponto, ao nal da traduo da
ORF1a, os ribossomos mudam de fase de leitura
(voltam 1 nucleotdeo) e passam a traduzir a OR-
F1b em uma diferente fase. A ORF1a traduzida
em uma poliprotena que , posteriormente, cliva-
da, originando oito polipeptdeos no-estruturais
(Nsp1 a Nsp8). No EAV, a Nsp1, Nsp2 e Nsp4
possuem atividade proteoltica, sendo respons-
veis pelo processamento de outras Nsps. Tambm
foi demonstrada a presena de, pelo menos, uma
protease adicional para o LDEV e PRRSV e, pos-
sivelmente, duas para o SHFV. A clivagem prote-
oltica da poliprotena resultante da traduo da
ORF1b resulta nos polipeptdeos Nsp10 a Nsp12.
Um pequeno segmento N-terminal da Nsp9
codicado por cdons nais da ORF1a, enquan-
to grande parte desta protena codicada pela
proximal da ORF1b. As regies com atividade de
RNA polimerase e NTPase/RNA helicase que
formam o complexo replicase esto associadas
com a Nsp9 e Nsp10, respectivamente.
De um modo geral, os arterivrus possuem
seis ou sete protenas componentes do envelo-
pe viral. O genoma do SHFV pode conter uma
duplicao ou insero na extremidade proxi-
mal 3, resultando em ORFs adicionais que co-
dicam outras glicoprotenas. As trs principais
protenas estruturais, produtos das ORFs 5, 6 e
7 (PRRSV, EAV e LDV), so codicadas a partir
de mRNAsg transcritos a partir da regio 3 do
genoma. A protena M (produto da ORF6) uma
protena integral de membrana, no glicosilada,
sendo a protena estrutural mais conservada dos
arterivrus. Aps a sua sntese, a protena M acu-
mula-se no retculo endoplasmtico das clulas
infectadas, onde interage com a principal glico-
protena do envelope viral (gp5), formando hete-
rodmeros. Estes heterodmeros iro se localizar
no envelope e so essenciais para a infectividade
viral. A protena N pequena (12-15 kDa), intera-
ge com o RNA genmico durante a formao do
nucleocapsdeo e constitui aproximadamente 20
a 40% da massa protica dos vrions.
O produto das ORFs 2, 3 e 4 so protenas
integrais de membrana clssicas do tipo I e pos-
suem uma importncia relativamente menor em
comparao com as outras protenas estruturais.
Alm disso, no existe um consenso sobre a pre-
sena da gp3 como componente dos vrions em
cepas norte-americanas do PRRSV. Embora as
funes especcas de cada uma das protenas
estruturais dos arterivrus no tenham sido com-
pletamente elucidadas, evidncias indicam que,
aparentemente, todas as protenas exercem fun-
es essenciais para a replicao e produo de
prognie viral vivel.
A primeira etapa da morfognese envolve
a associao do genoma RNA com mltiplas c-
pias da protena N, formando o nucleocapsdeo.
A etapa seguinte envolve a interao dos nu-
cleocapsdeos com as caudas das glicoprotenas
do envelope e a conseqente aquisio do enve-
lope. Os arterivrus adquirem o envelope pelo
brotamento de nucleocapsdeos pr-formados
para o interior do retculo endoplasmtico liso
ou do complexo de Golgi. Aps a sua sntese, as
protenas estruturais que participam da forma-
646 Captulo 25
o do envelope viral encontram-se retidas em
membranas intracelulares. As partculas vricas,
formadas pelo brotamento dos nucleocapsdeos
em membranas do retculo endoplasmtico ou
do Golgi, acumulam-se em vesculas intracelula-
res, no interior das quais so transportados at a
membrana plasmtica. A liberao da prognie
viral para o espao extracelular ocorre por exoci-
tose, pela fuso dessas vesculas com a membra-
na plasmtica.
5 Arterivrus de importncia
veterinria
5.1 Vrus da arterite eqina
A arterite viral eqina (EVA) uma doena
infecto-contagiosa de eqinos, causada por um
membro da famlia Arteriviridae, denominado v-
rus da arterite eqina (equine arteritis virus, EAV).
A denominao da doena se deve caractersti-
ca inamatria das leses produzidas pelo vrus
no endotlio dos vasos sangneos, especialmen-
te nas arterolas. A infeco pelo EAV freqente-
mente se manifesta de forma subclnica ou com
sinais leves, mas tambm pode resultar em sinais
respiratrios em eqinos adultos, abortamento
em guas e em pneumonia intersticial em neona-
tos. Apesar da existncia de diferenas antigni-
cas entre isolados de campo, apenas um sorotipo
do EAV reconhecido.
A infeco pelo EAV pode ocasionar gran-
des prejuzos econmicos para a eqideocultura,
tanto pelas perdas reprodutivas como pela redu-
o na performance de animais de esporte e com-
petio. Os prejuzos geralmente se devem a: a)
surtos de aborto e/ou morte de potros neonatos;
b) reduo no valor comercial de garanhes infec-
tados e na demanda reprodutiva desses animais;
c) recusa do mercado internacional a garanhes
e smen de garanhes portadores, e no caso de
alguns pases, de qualquer animal soropositivo;
e d) alteraes nos programas de treinamento e
reduo ou cancelamento de corridas em casos
de surtos de EVA em hipdromos.
5.1.1 Epidemiologia
O primeiro isolamento do EAV foi realizado,
em 1953, nos Estados Unidos, a partir do pulmo
de um feto abortado no estado de Ohio. A partir
de ento, a infeco tem sido detectada em popu-
laes eqinas de todo o mundo, demonstrando
a ampla disseminao do agente. Nos ltimos 10
a 15 anos, tem sido observado um aumento no
nmero de surtos de EVA nos Estados Unidos
e na Europa. O isolamento recente do vrus na
Argentina e a deteco de sorologia positiva nos
estados de So Paulo (18,2%) e Rio Grande do Sul
(2,2%) conrmam a circulao do vrus na Am-
rica do Sul. O aumento do comrcio internacional
de animais e smen eqino podem ter contribu-
do para a disseminao do EAV na populao
eqina desses pases.
A transmisso do EAV pode ocorrer por
secrees e excrees de animais infectados ou
ainda por aerossis, fmites, gua e alimentos
contaminados. A excreo do vrus nas secrees
e excrees de animais na fase aguda da infeco
ocorre por um perodo curto, que geralmente no
excede 16 dias. A transmisso por aerossis cons-
titui-se na principal forma de disseminao do
EAV, tanto nas propriedades destinadas repro-
duo como em locais com grande aglomerao e
contato entre os animais. Outra via importante de
transmisso do vrus a venrea. Trata-se de uma
forma muito efetiva de transmisso, pois cerca de
85 a 100% das guas cobertas por garanhes por-
tadores ou inseminadas com smen contamina-
do se infectam. A transmisso congnita tambm
pode ocorrer, resultando em abortamento ou no
nascimento de potros infectados. Nesses casos, os
tecidos fetais e a placenta so considerados im-
portantes fontes da infeco, pois contm grande
quantidade de vrus.
A transmisso pelo smen possui grande
importncia epidemiolgica. Estima-se que en-
tre 30 e 60% dos garanhes infectados tornam-se
persistentemente infectados e excretam o vrus
por longos perodos. O vrus pode persistir no
garanho por semanas, meses ou anos e, em al-
guns casos, at por toda a vida. Entretanto, uma
Arteriviridae 647
porcentagem varivel de garanhes portadores
erradica o vrus espontaneamente do seu trato
reprodutivo. O estabelecimento e a manuteno
da persistncia viral parecem ser dependentes
de testosterona. Assim, machos castrados conse-
guem erradicar completamente o agente dos teci-
dos cerca de 2 a 3 semanas aps a infeco.
A patogenia da infeco pelo EAV foi estu-
dada com base na deteco de antgenos virais e
na distribuio das leses produzidas pelo agen-
te. A penetrao do vrus geralmente ocorre pela
via respiratria ou oral. Inicialmente o vrus re-
plica no epitlio respiratrio e em macrfagos al-
veolares. Aps a replicao inicial, o vrus atinge
os linfonodos regionais, especialmente os bron-
quiais. Por volta do terceiro dia aps a infeco,
o vrus replica nos linfonodos bronco-pulmo-
nares, no endotlio dos vasos pulmonares e em
moncitos circulantes, tendo acesso circulao
sangnea, atravs da qual se dissemina pelo or-
ganismo. Subseqentemente, ocorre a replicao
no endotlio de um grande nmero de vasos san-
gneos. Passados aproximadamente 10 dias de
infeco, a deteco de antgenos virais bastan-
te reduzida na maioria dos tecidos previamente
afetados, com exceo da tnica mdia das arte-
rolas musculares. Aparentemente, o ltimo stio
de invaso viral o epitlio tubular renal, onde
o vrus pode persistir por um perodo adicional
de duas semanas. As manifestaes clnicas da
enfermidade so decorrentes das leses produzi-
das nos endotlios vasculares e do aumento da
permeabilidade vascular, por causa da liberao
de citoquinas vasoativas e mediadores inamat-
rios. Alm das alteraes inamatrias, os danos
ao endotlio podem induzir anxia ou trombose.
A patogenia da forma abortiva da enfermi-
dade ainda no est completamente elucidada.
Especula-se que o aborto ocorra devido a uma
miometrite provocada pela replicao viral. A
compresso dos vasos sangneos pelo edema
endometrial e/ou alteraes no tnus vascular
pela liberao de mediadores inamatrios pro-
movem uma reduo no uxo sangneo para o
feto. Alm disso, h uma reduo dos nveis de
progesterona entre 6 e 48 horas que antecedem
o aborto. Esta reduo, combinada com a libera-
o local de prostaglandinas, pode levar ao des-
colamento da membrana corinica e expulso do
feto.
A maioria das infeces naturais pelo EAV
so subclnicas e passam, portanto, despercebi-
das. No entanto, alguns animais desenvolvem
sinais clnicos, tais como: descarga nasal muco-
purulenta, lacrimejamento, conjuntivite, edema
palpebral, escrotal e da glndula mamria, e, em
quadros mais graves, edema pulmonar. Alm
disso, em alguns casos, podem ser evidenciados
sinais inespeccos, como: tosse, apatia, anorexia,
diarria e clicas. Em geral, a severidade da EVA
maior em animais jovens ou muito velhos; em
animais debilitados e naqueles sob estresse fsico
muito grande. importante salientar que, com
poucas excees, a maioria dos animais afetados
se recupera espontaneamente da enfermidade.
Portanto, a mortalidade muito baixa e, na maio-
ria das vezes, ocorre somente em neonatos infec-
tados intra-uterinamente. Esses neonatos geral-
mente vo a bito devido a quadros fulminantes
de pneumonia intersticial, que se manifestam en-
tre 48 e 96 horas aps o nascimento.
Apesar da ocorrncia de doena respirat-
ria, os maiores prejuzos causados pela infeco
devem-se principalmente s perdas reproduti-
vas. Os abortamentos ocorrem geralmente por
causa de uma miometrite necrotizante grave, sem
infeco fetal concomitante, mas com a presena
de grande quantidade de vrus. Os abortamentos
podem ocorrer com ou sem sinais respiratrios
e/ou vasculares prvios. Geralmente os abortos
ocorrem entre 7 a 14 dias aps o incio dos sinais
clnicos, diferindo de abortamentos em fases tar-
dias, como aqueles que ocorrem na rinopneumo-
nite eqina. As guas que abortam parecem no
sofrer nenhum efeito adverso com relao fer-
tilidade.
Em contraste, garanhes afetados pela EVA
podem passar por um perodo curto de reduo
de fertilidade. Acredita-se que este quadro transi-
trio deva-se ao aumento da temperatura testicu-
lar, que associado com a resposta inamatria
local. Alm disso, os garanhes afetados freqen-
temente apresentam diminuio da libido, da
648 Captulo 25
concentrao e da motilidade espermtica, alm
de apresentarem patologia espermtica elevada.
Essas alteraes podem persistir por perodos de
at 17 semanas. A persistncia do vrus no trato
reprodutivo de animais cronicamente infectados
no parece provocar essas alteraes e estes ani-
mais so portadores assintomticos do agente.
5.1.3 Patologia
Os isolados do EAV diferem na virulncia,
na capacidade de induzir leses e na severidade
das leses. As leses macroscpicas so o resulta-
do das alteraes vasculares provocadas pela re-
plicao viral. Edema, congesto e hemorragias
do tecido subcutneo nos linfonodos e vsceras
so os achados mais freqentes. As cavidades
corporais podem conter quantidade moderada
ou abundante de exsudato amarelado; e os pul-
mes, especialmente dos neonatos, encontram-
se edemaciados e contm grande quantidade de
lquido. Em alguns casos, reas multifocais ou
difusas de colorao avermelhada podem ser ob-
servadas nos pulmes, por causa de congesto e
hemorragia. O endomtrio de guas que aborta-
ram pode se apresentar edemaciado, congesto e,
algumas vezes, com hemorragias.
As alteraes histolgicas so observadas
em vrios sistemas, porm a parede dos vasos so
os locais mais afetados. As leses mais brandas
incluem edema vascular e perivascular, com hi-
pertroa das clulas endoteliais. Nos casos mais
severos, observa-se vasculite e necrose brinide
da tnica mdia, inltrado linfoctico abundan-
te, freqente perda do endotlio e formao de
trombos. Os pulmes podem apresentar pneu-
monia intersticial de grau leve a severo, carac-
terizada por inltrao alveolar de macrfagos,
em menor nmero de neutrlos e formao de
membrana hialina. Alm disso, ocorre hipertroa
e hiperplasia dos pneumcitos, arterite e ebite
nos vasos pulmonares.
As leses renais, que podem ser severas,
ocorrem em fases avanadas da infeco e se ca-
racterizam por necrose tubular, nefrite intersti-
cial, desorganizao glomerular e hipercelulari-
dade. As leses no epitlio do trato reprodutivo
de guas que abortaram incluem edema, inl-
trao de macrfagos e neutrlos, presena de
grandes fagolisossomos contendo material den-
so. O miomtrio pode conter micitos necrticos
com aglomerao de ribossomos, macrfagos e
edema. No trato reprodutivo do macho, as le-
ses so caracterizadas por vasculite necrosante
envolvendo os testculos, o epiddimo, os ductos
deferentes, as ampolas, a prstata, as glndulas
vesiculares e bulbouretrais.
5.1.4 Imunidade
Infeces naturais ou experimentais com o
EAV resultam em imunidade duradoura contra
reinfeces com diferentes cepas do vrus. An-
ticorpos com atividade neutralizante podem ser
detectados entre 7 e 14 dias ps-infeco (dpi),
coincidindo com o desaparecimento do vrus da
circulao sangnea. Altos ttulos neutralizantes
so geralmente detectados em animais com in-
feco persistente. A excreo viral pelo smen
ocorre mesmo na presena de ttulos altos de
anticorpos neutralizantes, indicando que a imu-
nidade humoral no suciente para prevenir a
replicao viral no trato reprodutivo dos machos.
Os potros nascidos de fmeas imunes so prote-
gidos da doena clnica nas primeiras semanas de
vida devido transferncia passiva de anticorpos
pelo colostro.
5.1.5 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo EAV pode
ser realizado pela deteco direta do agente, de
antgenos ou do RNA viral em tecidos ou em se-
crees provenientes de animais infectados. A
deteco de anticorpos especcos tambm pode
ser utilizada. O isolamento do vrus pode ser re-
alizado em clulas das linhagens RK-13, Vero ou,
ainda, em cultivos primrios de clulas pulmona-
res de eqinos. As amostras a serem enviadas ao
laboratrio para o isolamento do vrus incluem
suabes nasais e da nasofaringe ou amostras de
sangue com anticoagulante. Para aumentar a
probabilidade de deteco do vrus, as amostras
devem ser coletadas no incio da fase febril. Em
Arteriviridae 649
casos de aborto, o isolamento viral pode ser ten-
tado a partir da placenta, dos uidos fetais, pul-
mes, fgado e tecidos linforreticulares do feto
abortado. Alm do isolamento do vrus, a detec-
o de antgenos pela tcnica de imunohistoqu-
mica e a caracterizao das leses vasculares por
exames histolgicos tambm podem auxiliar na
conrmao da etiologia. Tcnicas moleculares,
como a RT-PCR, tambm tm sido utilizadas para
identicar a presena do vrus, especialmente em
amostras de smen.
A infeco pelo EAV freqentemente con-
rmada sorologicamente pela demonstrao de
aumento signicativo (quatro vezes ou mais) nos
ttulos de anticorpos contra o vrus. O teste de
microneutralizao na presena de complemento
amplamente utilizado, sendo um mtodo con-
vel na identicao da infeco causada pelo
EAV. Outros testes, como ELISA, soroneutraliza-
o e imunodifuso, tambm podem ser utiliza-
dos para o diagnstico sorolgico da infeco.
As manifestaes clnicas reprodutivas e
respiratrias causadas pelo EAV devem ser di-
ferenciadas daquelas causadas pelos herpesvrus
eqino (EHV-1 e 4), adenovrus eqino e inuen-
za eqina. Infeces bacterianas e causas no-
infecciosas de abortamento tambm devem ser
consideradas no diagnstico diferencial.
Vacinas para a arterite viral eqina ainda
no esto disponveis no mercado nacional. Ape-
sar de a doena estar comprovadamente presen-
te no Brasil, a vacina s poder ser registrada e
comercializada quando a doena for ocialmen-
te reconhecida pelas autoridades sanitrias. Nos
Estados Unidos e Canad, uma vacina atenuada
por passagens sucessivas em cultivo celular est
disponvel comercialmente, sendo recomenda-
da para minimizar a difuso do vrus e as per-
das econmicas decorrentes da infeco. Vacinas
inativadas tambm esto comercialmente dispo-
nveis em diversos pases europeus. No entanto,
apesar das atuais vacinas serem consideradas se-
guras e ecazes, a incapacidade de diferenciao
sorolgica entre animais vacinados e infectados
se constitui em um dos principais obstculos aos
programas de vigilncia e controle. Entretanto,
importante salientar que os garanhes podem ser
protegidos do estabelecimento da infeco per-
sistente pela vacinao, e que os testes de diag-
nstico disponveis para a deteco do vrus no
smen so capazes de detectar portadores com
um alto grau de segurana.
A maioria das medidas de controle direcio-
nada para prevenir ou restringir a disseminao
do EAV em criaes de reprodutores na tentativa
de minimizar os riscos de abortamentos, de mor-
talidade neonatal e o estabelecimento da infeco
persistente nos garanhes. Tais medidas devem
priorizar a identicao dos animais portadores e
a vacinao dos reprodutores no-infectados. Os
garanhes identicados como portadores devem
ser manejados separadamente para evitar a trans-
misso do vrus para outros animais. Outro fator
a ser considerado nos programas de controle o
risco a introduo do agente em rebanhos pelo
smen contaminado. Nesse sentido, recomenda-
se a utilizao de smen proveniente de proprie-
dades sabidamente livres do agente. Alternativa-
mente, pode-se testar o smen para a presena do
EAV antes de ser utilizado.
Em virtude da importncia econmica da
eqideocultura e da constante transferncia in-
ternacional de animais e de smen, a Organizao
Mundial de Sade Animal (OIE) impe algumas
regulamentaes ao comrcio internacional de
eqinos e smen eqino, para prevenir a disse-
minao do EAV entre pases. Resumidamente,
as normas recomendam que todos os animais a
serem comercializados e os doadores de smen
devem possuir um certicado internacional ne-
gativo para o EAV e apregoa, ainda, a vacinao
regular desde os seis meses de idade.
5.2 Vrus da sndrome respiratria e
reprodutiva dos sunos
No nal da dcada de 1980, surtos de uma
doena at ento desconhecida foram relatados
simultaneamente em granjas de sunos nos esta-
dos da Carolina do Norte, Indiana, Minessota e
Iowa, nos Estados Unidos. A sndrome consistia
em perdas reprodutivas, pneumonia ps-desma-
me em leites, retardo no crescimento e aumen-
650 Captulo 25
to nas taxas de mortalidade. Surtos, com carac-
tersticas clnicas semelhantes, foram relatados
na Europa e sia no incio da dcada de 1990. A
enfermidade foi inicialmente denominada doena
misteriosa dos sunos e sndrome respiratria e inferti-
lidade suna. A etiologia viral foi denida em 1991,
e a doena cou posteriormente conhecida como
a sndrome respiratria e reprodutiva dos sunos
(PRRS).
Atualmente, a infeco pelo PRRSV est
associada com perdas econmicas signicativas
para a suinocultura comercial de vrios pases.
Nos Estados Unidos, estima-se que a infeco
pelo PRRSV resulte em prejuzos anuais de 560
milhes de dlares indstria suincola. No Bra-
sil, um estudo sorolgico e virolgico, realizado
entre 2003 e 2005, no demonstrou a presena da
infeco pelo PRRSV em granjas de sunos. No
entanto, tendo em vista a importncia da suino-
cultura brasileira no agronegcio nacional e in-
ternacional, indispensvel um monitoramento
constante dos rebanhos, assim como de animais e
material gentico introduzidos no pas.
5.2.1 Epidemiologia
A origem do PRRSV ainda permanece in-
denida. Especula-se que esse vrus possa ter se
originado na Europa a partir do LDEV um arte-
rivrus de camundongos e que sunos selvagens
teriam servido como hospedeiros intermedirios
antes de o vrus adquirir a capacidade de infec-
tar sunos domsticos. Assim, o vrus teria sido
transferido para a Amrica do Norte pela impor-
tao desses animais em 1912. Essa hiptese po-
deria explicar o longo perodo de evoluo inde-
pendente do vrus nos dois continentes e estaria
de acordo com o momento de divergncia gen-
tica a partir de um ancestral comum, estimado ter
ocorrido ao redor de 1880. Entretanto, apesar de
diversos estudos investigando a origem do PRR-
SV, ainda no existem explicaes satisfatrias
para a emergncia quase simultnea do vrus na
Amrica do Norte e Europa.
Atualmente, acredita-se que a infeco pelo
PRRSV seja endmica na maioria dos pases pro-
dutores de sunos. Evidncias sorolgicas indi-
cam que o PRRSV j circulava em populaes
sunas vrios anos antes de a doena se tornar evi-
dente e economicamente importante. Um estudo
sorolgico retrospectivo, em amostras coletadas
no nal da dcada de 1970 e nos anos 1980, pro-
venientes do Canad, Coria, Japo e Alemanha,
demonstrou a presena de anticorpos especcos
contra o PRRSV. Alguns pases europeus (Sucia,
Sua, Noruega, Finlndia), alm de Nova Zeln-
dia, Austrlia, Brasil, Argentina e algumas reas
do Caribe, so considerados livres da infeco.
Uma anlise gentica de cepas de referncia
isoladas nos Estados Unidos e Europa demons-
trou que a identidade de aminocidos entre as
seqncias analisadas inferior a 60%. Com base
nessas diferenas, os isolados de PRRSV foram
divididos em dois gentipos: tipo I (europeu) e
tipo II (norte-americano). De um modo geral, os
isolados do gentipo I so restritos ao continen-
te Europeu, enquanto os isolados do gentipo II
so encontrados nos Estados Unidos, Canad,
Mxico e tambm em pases asiticos. Entretanto,
isolados do gentipo II j foram identicados na
Europa, apresentando um alto grau de homolo-
gia com uma vacina atenuada norte-americana
introduzida no continente em 1995. Por outro
lado, isolados do tipo I tambm j foram identi-
cados nos Estados Unidos, porm a sua origem
ainda no foi determinada.
Aparentemente, os sunos domsticos e sel-
vagens so as nicas espcies naturalmente sus-
ceptveis a infeco pelo PRRSV. Embora os su-
nos no sejam igualmente susceptveis por todas
as vias, a infeco pode ser estabelecida aps ino-
culao por via oral, intranasal, intramuscular,
intravaginal e intrauterina. Os animais infectados
excretam o vrus na saliva, em secrees nasais,
urina, smen e, possivelmente, pelas fezes. A ex-
creo pode ocorrer simultaneamente por dife-
rentes vias em baixos nveis ou, ainda, de forma
intermitente. A difuso da enfermidade atravs
da inseminao articial de grande interesse
epidemiolgico, pois o vrus pode ser detectado
no smen de machos infectados mesmo na pre-
senca de anticorpos neutralizantes e na ausncia
de viremia. Excreo viral em secrees mamrias
de fmeas gestantes foi tambm demonstrada em
estudos experimentais. Alm disso, tambm exis-
Arteriviridae 651
te a possibilidade de transmisso do vrus atravs
de fmites, vetores mecnicos etc.
O perodo que segue a exposio de animais
susceptveis ao PRRSV caracterizado por repli-
cao viral abundante em macrfagos alveolares
e teciduais. Em fases tardias da infeco, fre-
qente a ocorrncia de persistncia viral, carac-
terizada por nveis baixos de replicao, princi-
palmente em tecidos linfides. J foi possvel se
isolar o vrus de tecidos de animais experimen-
talmente infectados aos 157 dpi e demonstrar a
presena de RNA viral em tonsilas aos 257 dpi.
Dessa forma, animais com infeces persistentes
assintomticas podem se constituir em fontes de
infeco para outros animais. Eventualmente o
vrus parece ser completamente erradicado pelo
sistema imunolgico do animal persistentemente
infectado e, na maioria dos casos, isso pode levar
vrios meses.
J foi demonstrada a presena de vrus ou
de RNA viral vrios meses aps a infeco. Os
estudos que investigaram a viremia (apesar de
diferenas entre cepas do tipo europeu e norte-
americano ou entre cepas/isolados do mesmo
gentipo) demonstraram viremia detectvel at
quatro semanas pi em animais infectados. No
entanto, aps esse perodo, as amostras podem
continuar sendo positivas por PCR. Alm disso,
a deteco de animais carreadores pode ser pro-
blemtica. Um estudo demonstrou que 54/191
suabes da orofaringe de fmeas de um rebanho
foram positivas por PCR. No entanto, todas as
amostras de soro dos mesmos animais foram ne-
gativas por PCR e isolamento viral. Em um outro
estudo similar, foi isolado o vrus de 4/11 amos-
tras positivas por PCR, demonstrando que repli-
cao viral pode ocorrer na ausncia de viremia,
uma vez que 11/11 das amostras de soro foram
negativas por PCR e isolamento.
Na grande maioria dos casos, a infeco
aguda em machos clinicamente inaparente.
Nesses animais, a viremia normalmente est pre-
sente em 100% dos animais nos primeiros 10 dias
pi sendo, no entanto, detectvel at 3-4 semanas
pi. A presena de vrus no smen j foi detectada
at 92 dpi.
Resultados de diferentes estudos ainda su-
gerem que a infeco persistente em sunos adul-
tos ocorre por um perodo mais curto quando
comparado com a infeco em animais jovens.
Aps a penetrao, a replicao viral ocorre
primariamente em macrfagos locais, de onde o
vrus se dissemina e atinge rgos linfides, pul-
mes e, menos consistentemente, outros tecidos.
A viremia geralmente detectvel 24 horas pi, e
o vrus atinge ttulos mximos no sangue, nos lin-
fonodos e pulmes entre os dias 7 e 14 pi.
As manifestaes da PRRS podem variar
desde infeces subclnicas at a ocorrncia de al-
tas taxas de mortalidade nos rebanhos afetados.
A ocorrncia e severidade da doena clnica de-
pendem de vrios fatores, tais como a cepa viral e
suscetibilidade do hospedeiro, alm de infeces
concomitantes e/ou secundrias. freqente a
ocorrncia de infeces mistas com o circovrus
suino tipo 2 (PCV-2), cujas leses resultantes so
muito semelhantes. A associao entre PRRSV
e PCV-2 tambm pode resultar em pneumonia
viral mais severa, decorrente da infeco pelo
PRRSV, alm de uma replicao mais eciente e,
conseqentemente, leses mais graves associa-
das ao PCV-2.
Sinais freqentemente observados incluem
anorexia, letargia, hiperemia cutnea e cianose
das extremidades. Infeces ps-natais, com ce-
pas virulentas, geralmente resultam em aumento
de volume dos linfonodos e em pneumonia in-
tersticial, que podem ocorrer em sunos de todas
as idades. O parnquima afetado apresenta-se
ligeiramente rme e mosqueado, com colora-
o acinzentada e aspecto mido. Leses mais
severas podem estar difusamente distribudas.
Microscopicamente, o septo alveolar encontra-se
expandido por inltrao de macrfagos, linf-
citos e plasmcitos e pode estar demarcado por
pneumcitos tipo II hiperplsicos. Macrfagos
necrticos, debris celulares e quantidade abun-
dante de uido seroso podem ser encontrados
nos alvolos pulmonares. A distribuio e severi-
dade das leses variam de acordo com a viruln-
cia da cepa. Deve-se levar em considerao que
essas leses no so patognomnicas, pois outras
infeces virais e/ou bacterianas podem produ-
zir leses similares.
652 Captulo 25
A infeco de fmeas em idade reprodu-
tiva ou em gestao pode resultar em abortamen-
tos, retornos ao cio, natimortalidade e fetos par-
cialmente ou totalmente mumicados. Machos
infectados apresentam perda de libido e redu-
o na qualidade do smen devido a defeitos no
acrossoma e um decrscimo na motilidade esper-
mtica. Embora os sinais clnicos variem ampla-
mente em freqncia e severidade, a infeco de
neonatos freqentemente resulta em sinais respi-
ratrios graves e elevadas taxas de mortalidade.
Na maioria das infeces causadas por
PRRSV, os sinais clnicos associados a perdas re-
produtivas no so especcos para uma deter-
minada fase de gestao. Inicialmente, as perdas
reprodutivas foram associadas com abortamen-
tos em fases tardias. No entanto, em estudos sub-
seqentes, foram observados abortamentos nas
diferentes fases de gestao, tanto em surtos da
doena como em condies experimentais.
5.2.3 Imunidade
Diversos estudos em animais tm demons-
trado uma produo reduzida de interferon alfa
e citoquinas inamatrias em resposta infeco
pelo PRRSV. Essa resposta inata de magnitude
fraca poderia ser um dos fatores responsveis
pelo aumento da ocorrncia de infeces secun-
drias concomitantes.
A resposta imune humoral desempenha um
importante papel na preveno de reinfeces e
na reduo da excreo viral por animais infec-
tados. A transferncia passiva de anticorpos pelo
colostro tambm confere completa proteo aos
leites nas primeiras semanas de vida. Nveis
altos de proteo so geralmente observados
contra reinfeces com cepas homlogas, porm
proteo apenas parcial obtida frente a cepas
heterlogas. Imunoglobulinas especcas da clas-
se IgM podem ser detectadas entre 5 e 7 dias aps
a infeco (dpi), e IgG entre os dias 7 e 10 pi. An-
ticorpos contra as protenas estruturais e tambm
contra algumas protenas no-estruturais (princi-
palmente Nsp2) j foram detectados no soro de
animais convalescentes. Uma resposta humoral
de grande magnitude contra a protena do nucleo-
capsdeo (N) geralmente observada e tem sido
utilizada para o diagnstico da infeco.
Anticorpos com atividade neutralizante,
geralmente em baixos ttulos, so detectveis so-
mente cerca de 3 a 4 semanas aps a infeco. A
deteco de viremia, mesmo na presena desses
anticorpos, um indicativo de que os nveis in-
duzidos podem no ser sucientes para contro-
lar a replicao viral. Alm disso, concentraes
baixas de anticorpos neutralizantes podem estar
associadas com uma exacerbao da infeco,
possivelmente atravs de um mecanismo conhe-
cido como antibody-dependent enhancement (ADE).
Diferentes protenas do PRRSV podem induzir
nveis variados de resposta imune celular, que
pode ser detectada entre a segunda e oitava se-
manas aps a infeco.
Os mecanismos responsveis pela persis-
tncia do PRRSV ainda no esto completamente
elucidados. No entanto, a incapacidade do siste-
ma imunolgico do hospedeiro em desenvolver
uma resposta imune efetiva contra o vrus parece
ser um dos principais fatores responsveis pela
persistncia viral em animais convalescentes.
Alm disso, um retardo signicativo na produo
de interferon gama, bem como na produo de
anticorpos neutralizantes tem sido observados.
Esses eventos podem ser um reexo de mecanis-
mos virais de evaso do sistema imunolgico.
5.2.4 Diagnstico

A suspeita de infeco pelo PRRSV deve ser
considerada em rebanhos sunos que apresentem
problemas reprodutivos e doena respiratria
em animais de qualquer idade. Como outras in-
feces vricas e bacterianas podem causar ma-
nifestaes clnico-patolgicas semelhantes, o
diagnstico requer necessariamente a realizao
de testes laboratoriais.
Em casos de doena clnica ou perdas repro-
dutivas (abortos, natimortalidade etc.), o mtodo
diagnsitco mais indicado o isolamento do v-
rus a partir de tecidos ou secrees de animais
afetados. O isolamento pode ser realizado a partir
do soro ou de tecidos (pulmes, tonsilas e linfo-
nodos), pela inoculao do material suspeito em
Arteriviridae 653
macrfagos alveolares cultivados in vitro ou em
clulas MARC-145. No obstante, a inoculao
de homogenados de tecidos suspeitos em sunos
jovens (bioensaio) consiste no mtodo mais sens-
vel para a deteco do PRRSV nesses materiais. O
PRRSV produz efeito citoptico caracterstico em
clulas de cultivo, e a identidade do agente pode
ser comprovada por imunouorescncia (IFA) ou
por neutralizao com soro imune especco.
A tcnica de PCR em tempo real tambm
tem sido usada rotineiramente para o diagns-
tico direto da infeco, possibilitando a identi-
cao de quantidades mnimas de RNA viral em
amostras clnicas.
Em condies experimentais, a IFA em teci-
dos e/ou rgos pode ser usada. No entanto, no
rotineiramente usada para o diagnstico.
Testes sorolgicos so rotineiramente utili-
zados para o monitoramento de rebanhos e po-
dem tambm ser teis para diagnosticar eventos
de doena, pelo teste de soros pareados. Atual-
mente, um teste comercial de ELISA tem sido
amplamente utilizado para o diagnstico sorol-
gico das infeces causadas pelo PRRSV. A tc-
nica possui alta sensibilidade e especicidade,
sendo possvel a deteco de anticorpos espec-
cos contra a protena N j aos 7-10 dias ps-in-
feco (dpi). A deteco de anticorpos atravs da
tcnica de soroneutralizao (SN) tambm tem
sido utilizada. Entretanto, importante ressal-
tar que anticorpos com atividade neutralizante
somente so detectveis apenas em fases tardias
da infeco (30-60 dpi), fazendo com que o teste
seja utilizado, sobretudo com outras nalidades.
Os resultados de sorologia devem ser cuidadosa-
mente analisados, uma vez que testes sorolgi-
cos convencionais no so capazes de diferenciar
anticorpos vacinais daqueles produzidos em res-
posta a infeces naturais.
Informaes acerca do histrico clnico-epi-
demiolgico do rebanho, dados de produo,
sinais clnicos, alm de leses macro e microsc-
picas, podem auxiliar no diagnstico da enfer-
midade. O diagnstico diferencial deve incluir
outras enfermidades, como circovirose, parvovi-
rose, doena de Aujeszky, inuenza, peste suna
clssica, encefalomielite hemaglutinante e lep-
tospirose. Devido possibilidade de infeces
secundrias com outros vrus e bactrias, o diag-
nstico denitivo requer a deteco do agente, de
antgenos virais ou de anticorpos especcos para
o PRRSV nos animais infectados.
Medidas bsicas de prolaxia devem ser
tomadas no sentido de prevenir a introduo do
agente em propriedades ou reas livres e tam-
bm de evitar a reintroduo de novas cepas em
rebanhos j infectados. importante lembrar-se
de que animais infectados e smen contaminado
constituem-se nas principais fontes de infeco.
Porm, outros fatores, como insetos, gua, rao,
proximidade das granjas, movimento e transpor-
te de animais, so epidemiologicamente impor-
tantes e devem ser considerados em programas
de controle. Assim, medidas gerais de biossegu-
rana so essenciais para a prolaxia e controle
da enfermidade.
Nos Estados Unidos, vrias estratgias,
como a depopulao parcial ou completa de gran-
jas, identicao e remoo de animais infectados
e manejo preventivo de rebanhos fechados, tem
sido utilizadas visando ao controle e erradicao
da infeco.
Vacinas atenuadas e inativadas esto co-
mercialmente disponveis nos Estados Unidos e
na Europa. Em geral, essas vacinas induzem imu-
nidade protetora satisfatria contra o vrus ho-
mlogo, mas produzem nveis variveis de pro-
teo contra vrus heterlogos. Alm da eccia
discutvel, as vacinas atenuadas apresentam um
problema de segurana. A persistncia do vrus
vacinal em animais imunizados, em nveis seme-
lhantes aos de amostras virulentas, e transmisso
a animais soronegativos j foram demonstrados.
Tambm se observou a transmisso do vrus
vacinal pelo smen, bem como a ocorrncia de
infeces congnitas. Vacinas diferenciais, isto
, que permitam a distino da resposta vacinal
daquela induzida pela infeco natural tambm
no se encontram disponveis. Esses dados de-
monstram a evidente necessidade da elaborao
de uma nova gerao de vacinas para serem uti-
lizadas no controle, prolaxia e eventual erradi-
cao da enfermidade, principalmente em pases
onde a infeco endmica.
654 Captulo 25
Apesar da ausncia de atividade viral e so-
rologia positiva em sunos domsticos no Brasil,
uma legislao estabelece critrios em relao
importao e exportao de animais, alm de
transporte, coleta de material para diagnstico,
quarentena e testes de diagnstico, a m de man-
ter o rebanho suno nacional livre da infeco
pelo PRRSV.
6 Perspectivas
Apesar dos esforos direcionados ao contro-
le e prolaxia das infeces causadas pelo PRRSV
desde a sua identicao no incio dos anos 1990,
o vrus ainda continua a causar perdas econmi-
cas signicativas para suinocultura mundial. A
diculdade na obteno de vacinas mais ecazes
e seguras demonstra que muitos aspectos relacio-
nados com a biologia dos arterivrus ainda no
esto completamente elucidados. Nesse sentido,
um grande avano foi alcanado com a obteno
de clones infecciosos para o EAV e PRRSV, por
meio da tecnologia de gentica reversa. Com o
uso dessa metodologia, tem sido possvel a re-
alizao de modicaes predenidas no geno-
ma viral (delees, inseres e/ou substituies
de nucleotdeos), possibilitando, assim, estudos
dos mecanismos moleculares relacionados com
replicao, patogenia, persistncia e imunidade.
Alm disso, a tecnologia de gentica reversa per-
mite, ainda, a manipulao genmica, visando
ao desenvolvimento de cepas vacinais atenuadas
ou com alteraes em protenas virais para serem
utilizadas na prolaxia e controle das infeces
causadas pelos arterivrus.
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1 Introduo
2 Classicao
2.1 Paramyxovirinae
2.2 Pneumovirinae
3 Replicao
6 O genoma
8 Paramixovrus de interesse veterinrio
8.1 Vrus respiratrio sincicial bovino
8.1.1 Epidemiologia
8.1.3 Imunidade
8.1.4 Diagnstico
8.2 Vrus da parainuenza bovina tipo 3
8.2.1 Epidemiologia
8.2.3 Imunidade
8.2.4 Diagnstico
8.3 Vrus da peste bovina
8.4 Vrus da peste dos pequenos ruminantes
PARAMYXOVIRIDAE
Clarice Weis Arns, Fernando R. Spilki
& Renata Servan de Almeida
1

n
1
Renata Dezengrini foi a responsvel pelas sees Peste Bovina e Vrus da Peste dos Pequenos Ruminantes.
26
659
659
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672
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673
8.5 Vrus da cinomose
8.5.1 Epidemiologia
8.5.3 Imunidade
8.5.4 Diagnstico
8.6 Vrus da parainuenza canina tipo 2
8.6.1 Epidemiologia
8.6.3 Imunidade
8.6.4 Diagnstico
8.7 Metapneumovrus avirios
8.7.1 Epidemiologia
8.7.3 Imunidade
8.7.4 Diagnstico
8.8 Vrus da doena de Newcastle
8.8.1 O agente
8.8.2 Histrico e epidemiologia
8.8.4 Diagnstico
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686
1 Introduo
Os vrus da famlia Paramyxoviridae incluem
importantes patgenos do trato respiratrio de
animais e humanos. A famlia formada por
vrus envelopados, em sua maioria esfricos, com
projees glicoproticas de superfcie. Os vrions
possuem um nucleocapsdeo helicoidal que en-
volve o genoma de RNA ta simples e polarida-
de negativa. Os paramixovrus so responsveis
por algumas doenas de grande relevncia em
Medicina Veterinria, tanto por sua prevaln-
cia como pelo impacto econmico na produo
animal. Dentre os paramixovrus de importncia
veterinria, destacam-se aqueles amplamente co-
nhecidos, como o vrus respiratrio sincicial bovi-
no (BRSV), o vrus da parainuenza bovina tipo
3 (bPIV-3), o vrus da cinomose canina (CDV), o
vrus da peste bovina (Rinderpest virus, RPV) e o
vrus da doena de Newcastle (NDV). A famlia
agrega ainda outros vrus recentemente identi-
cados, muito importantes devido ao seu potencial
zoontico, como os vrus Hendra e Nipah. Esta
famlia tambm abrange alguns vrus de grande
importncia para a sade humana, como o vrus
respiratrio sincicial humano (HRSV) e o vrus
do sarampo (MV), dentre outros.
2 Classicao
A famlia Paramyxoviridae classicada na
ordem Mononegavirales, que inclui ainda as fa-
mlias Rhabdoviridae e Filoviridae. Na famlia Pa-
ramyxoviridae, esto includas duas subfamlias:
Paramyxovirinae e Pneumovirinae. A classicao
taxonmica atual dessa famlia est apresentada
na Tabela 26.1.
2.1 Paramyxovirinae
Esta subfamlia possui seis gneros, listados
abaixo, juntamente com o vrus prottipo de cada
gnero:
Respirovirus: vrus Sendai;
Morbillivirus: vrus do sarampo;
Rubulavirus: vrus da caxumba;
Henipavirus: vrus Hendra;
Avulavirus: vrus da doena de Newcastle;
Virus TPMV-like: vrus Tupaia.
2.2 Pneumovirinae
Esta subfamlia possui dois gneros:
Pneumovirus: vrus respiratrio sincicial
humano;
Metapneumovirus: vrus da rinotraquete
dos perus.
3 Replicao
Os paramixovrus podem infectar uma am-
pla gama de hospedeiros, tanto naturalmente
quanto sob condies experimentais, e a infeco
assintomtica em muitas espcies. No entanto,
as infeces de relevncia clnica so restritas a
algumas delas.
A replicao desses vrus in vitro ocorre em
vrios tipos de clulas primrias e de linhagem,
principalmente de origem pulmonar e renal, ho-
mlogas espcie de origem do vrus. neces-
sria a adaptao dos paramixovrus ao cultivo
por vrias passagens. A infeco por esses vrus
citoltica, e uma caracterstica a fuso entre
clulas, formando clulas gigantes multinuclea-
das (sinccios). A replicao ocorre no citoplasma
das clulas hospedeiras, porm os morbilivrus
podem produzir incluses intranucleares acido-
flicas. Os vrus da parainuenza e alguns morbi-
livrus possuem, ainda, a propriedade de hemad-
soro.
Os paramixovrus so sensveis a pH cido e
ao aquecimento a 56
C por 30 minutos. A exposi-

o a solventes lipdicos, detergentes no-inicos,
formaldedo e agentes oxidantes destri a infecti-
vidade viral. Os vrions so extremamente lbeis,
mas permanecem viveis a temperaturas de -50
C
ou menos por muitos meses, porm episdios de
congelamento e descongelamento podem inati-
var a infectividade. Os vrions apresentam uma
densidade de 1,18 a 1,23 g/mL, determinada por
centrifugao em gradiente de sacarose.
660 Captulo 26
P
a
r
a
m
y
x
o
v
i
r
i
n
a
e
Subfamlia Gnero Espcie Hospedeiros
Vrus da parainfluenza
bovina 3 (bPIV-3)
bovinos (e ovinos)
Vrus Sendai (SeV) ou
vrus da parainfluenza
murina 1
Respirovirus
camundongos (sunos,
ratos, hamsters e cobaias)
primatas
Salmes
Vrus da cinomose (CDV)
caninos
)
(lees, fures,
guaxinins, pandas, entre outros
Morbillivirus
Vrus da peste bovina (RPV)
bovinos (ovinos, caprinos e
sunos)
Vrus da peste dos pequenos
ruminantes (PPRV)
ovinos caprinos , (alguns
ruminantes selvagens)
Vrus da peste das focas (PDV) espcies de foca
Vrus smio tipo 10 (SV-10)
Paramixovrus do salmo
do Atlntico
Vrus da parainfluenza
humana 1 e 3 (hPIV-1 e 3)
humanos (outros primatas,
hamsters, cobaias, fures, ratos
cauda de algodo)
Morbilivrus dos cetceos (CeMV)
espcies de baleias,
golfinhos e focas
Vrus do sarampo (MV) humanos
Vrus da parainfluenza suna sunos
Rubulavrus suno (PoRV) ou vrus
La-Piedad-Michoacan-Mexico
Rubulavirus
sunos
primatas (caninos, felinos,
sunos, hamsters, cobaias)
Vrus da parainfluenza simia 5 e
41 (SV-5 e 41)
Vrus da caxumba (MuV) humanos
Vrus da parainfluenza humana 2,
4a e 4b (HPIV-2, 4a e 4b)
humanos
Vrus Mapuera (MPRV) morcegos ( ) Sturnira kikium
Yucaipa vrus galinhas
Tabela 26.1. Classificao dos membros da famlia e seus respectivos hospedeiros. Os hospedeiros
naturais estoemnegrito, e os secundrios estoentre parnteses.
Paramyxoviridae
Paramyxoviridae 661
Os paramixovrus possuem uma arquite-
tura complexa, que consiste basicamente de um
envelope lipoprotico, um nucleocapsdeo e uma
protena matriz. As partculas vricas so envelo-
padas, aproximadamente esfricas ou pleomr-
cas, com 150 a 300 nm de dimetro. Partculas
lamentosas so relativamente freqentes e po-
dem ter entre 1.000 e 10.000 nm de extenso. Nos
vrions intactos, a nica estrutura visvel por mi-
croscopia eletrnica (ME) o envelope, com 7 a
15 nm de espessura, recoberto por projees de 8
a 20 nm de extenso, constitudas pelas glicopro-
tenas de superfcie. Os paramixovrus contm
duas glicoprotenas de envelope; alguns rubula-
vrus, e todos os pneumovrus contm uma ter-
ceira protena integral de membrana. Uma delas
(HN, H ou G, dependendo do gnero) est envol-
vida na ligao aos receptores, e a glicoprotena F
responsvel pela fuso do envelope viral com a
membrana plasmtica celular durante o processo
de penetrao. A Figura 26.1 apresenta uma foto-
graa de ME e uma representao esquemtica
de um vrion dessa famlia.
O nucleocapsdeo possui simetria helicoidal,
apresenta entre 13 e 18 nm de dimetro por 600 a
1.000 nm de extenso. O nucleocapsdeo forma-
do por um complexo formado pelo genoma RNA,
conjugado com aproximadamente 2.500 cpias
da protena N (ou NP), ao qual esto associadas
300 cpias da protena P e 50 molculas da prote-
na L. O complexo ribonucleoprotena (RNA +N)
se constitui no substrato para a sntese de RNA
durante a transcrio e replicao do genoma, ou
seja, esses mecanismos ocorrem no genoma reco-
berto pelas protenas N. Alm das glicoprotenas
do envelope e das protenas do nucleocapsdeo,
os vrions contm mltiplas cpias da protena
matriz (M) que preenchem o espao entre o nu-
cleocapsdeo e o envelope (Figura 26.1). As pro-
tenas codicadas pelos paramixovrus e as suas
Subfamlia
Tabela 26.1. Continuao
Gnero Espcie Hospedeiro
Vrus Hendra (HeV) morcegos (eqinos, humanos)
Henipavirus
Vrus da doena de Newcastle
(NDV) ou paramixovrus 1
avirio (APMV-1)
Paramixovrus avirios 2 a 9
(APMV-2 a 9)
galinhas, perus, aves silvestres
Vrus respiratrio sincicial
bovino (BRSV)
bovinos (ovinos)
Vrus da pneumonia murina
(MPV)
camundongos
Vrus respiratrio sincicial
humano (hRSV)
humanos
Vrus da rinotraquete dos perus
(TRTV) ou pneumovrus avirio
(PVA)
Metapneumovirus
galinhas e perus
humanos Metapneumovrus humano
(hMPV)
P
a
r
a
m
y
x
o
v
i
r
i
d
a
e
Vrus Nipah
morcegos (sunos, humanos,
caninos e felinos)
galinhas, patos, gansos, perus, aves
silvestres e aquticas, humanos
Avulavirus
Vrus TPMV-like Vrus Tupaia (TPMV) Tupaia belangeri
P
n
e
u
m
o
v
i
r
i
n
a
e
Pneumovirus
Vrus respiratrio sincicial ovino
(ORSV)
ovinos (bovinos)
662 Captulo 26
principais atividades biolgicas esto apresenta-
das a seguir.
A glicoprotena H, HN ou G (dependendo
do vrus) responsvel pela adsoro dos vrions
superfcie das clulas hospedeiras. Essas glico-
protenas esto localizadas no envelope viral e
projetam-se externamente como espculas a partir
da superfcie dos vrions. Cada espcie de vrus
contm uma delas (H, HN ou G). A glicoprotena
H (respirovrus e morbilivrus) possui a ativida-
de de hemaglutinao. Essa atividade utilizada
na identicao de isolados e tambm em diag-
nstico. A glicoprotena HN (rubulovrus) apre-
senta atividade hemaglutinante e de neuramini-
dase. Esta ltima refere-se capacidade de clivar
o receptor celular (cido silico), prevenindo que
partculas virais se liguem em clulas j infecta-
das ou quem retidas na membrana celular du-
rante o egresso de vrions recm-formados. Para
muitos paramixovrus, a co-expresso de HN (H
para morbilivrus), juntamente com a protena F,
necessria para a formao de sinccios, suge-
rindo que as glicoprotenas HN ou H possuem
participao na atividade fusognica. Para os pa-
ramixovrus que no possuem as glicoprotenas
HN ou H, a ligao aos receptores pode ser reali-
zada pela glicoprotena G, porm acredita-se que
esta protena no seja essencial para essa funo.
Nesses vrus, a protena F pode participar da li-
gao dos vrions aos receptores.
A glicoprotena de fuso (F) responsvel
pela fuso do envelope viral com a membrana
celular, permitindo a penetrao do nucleocaps-
deo na clula hospedeira, que sintetizada como
um precursor (F0), que se torna ativo pela cliva-
gem em F1 e F2. Esta clivagem essencial para
a infectividade dos paramixovrus e exerce um
papel determinante na patogenicidade viral. A
clivagem ocorre nos estgios nais do ciclo repli-
cativo, no interior de vesculas do complexo de
Golgi, durante o transporte das protenas virais
para a membrana plasmtica. Cepas que clivam
a F0 com mais ecincia tendem a ser mais vi-
rulentas, em contraste com cepas decientes na
clivagem. Uma das caractersticas dos membros
da famlia Paramyxoviridae o no requerimento
de pH baixo para a atividade fusognica, ou seja,
a fuso do envelope com a membrana plasmtica
e a conseqente penetrao do nucleocapsdeo
ocorre na superfcie celular, em pH neutro. Por
isso so chamados vrus pH independentes.
A protena M a mais abundante dos v-
rions, preenchendo o espao entre o nucleocap-
sdeo e o envelope. A sua funo ainda no foi
completamente elucidada, mas sabe-se que essa
protena exerce um importante papel na intera-
o entre o nucleocapsdeo viral e a membrana
da clula hospedeira durante o processo de mor-
fognese, maturao e brotamento dos vrions.
Portanto, a protena M considerada essencial na
Figura 26.1. Vrions da famlia . A) Fotografia de microscopia eletrnica de um paramixovrus
humano. Nota-se o nucleocapsdeo helicoidal enovelado no interior da partcula; B) Ilustrao esquemtica de uma
partculavrica e seus componentes.
Paramyxoviridae
Glicoprotena
(HN,H ou G)
Glicoprotena F
Protena L
Protena SH
Camada lipdica
Protena M
Protena N
RNA
Nucleo-
capsdeo
Protena P
A
B
A
Fonte: A) Dra. Linda Stannard,www.uct.ac.za.
Paramyxoviridae 663
morfognese viral, interagindo simultaneamente
com as caudas citoplasmticas das glicoprote-
nas inseridas na membrana (F, HN ou G) e com
o nucleocapsdeo. Essas interaes induzem o
brotamento das novas partculas na superfcie da
clula hospedeira.
A protena N (ou NP) abundante nos v-
rions e se associa intimamente ao genoma viral,
formando o nucleocapsdeo, sendo responsvel
pela proteo do genoma contra a digesto por
nucleases. Essa protena permanece associada
com o genoma mesmo durante a transcrio e
replicao. Alm da N, as protenas P-L tambm
esto associadas com o genoma durante esses
processos. A protena N tambm participa da
morfognese das novas partculas virais, pela
interao com a protena M. A concentrao in-
tracelular de protena N parece ser o principal fa-
tor que controla a transio entre transcrio (no
incio da infeco) e replicao do genoma (em
etapas tardias do ciclo replicativo). Aproximada-
mente 80% da seqncia da protena N so muito
conservadas entre os paramixovrus.
A protena L a menos abundante dos v-
rions (~50 cpias por vrion) e representa a subu-
nidade cataltica da RNA polimerase dependente
de RNA (RdRp). A seqncia de nucleotdeos do
gene da protena L muito conservada entre os
membros de uma mesma subfamlia, o que no
se observa entre vrus de subfamlias diferentes.
Existem cinco seqncias curtas localizadas pr-
ximo ao centro do gene que apresentam uma alta
homologia, tambm com RNA polimerases de
outras famlias virais. Essas seqncias parecem
codicar domnios proticos que so essenciais
para a atividade da RpRd. A protena L exerce
a sua atividade somente quando formado um
complexo com a protena P e ambas so necess-
rias para a atividade de polimerizao do RNA a
partir de moldes de RNA conjugados com a pro-
tena N.
A protena P um componente essencial
do complexo replicase. Embora toda a ativida-
de cataltica da transcriptase viral seja atribuda
protena L, esta somente se liga ao complexo
RNA:N (denominado ribonucleoprotena; RNP)
na presena da protena P. O stio de ligao da
protena P ao complexo RNA:N, chamado de
P-carboxi (localizado na poro C-terminal da
protena), relativamente conservado entre os
membros da subfamlia Paramyxovirinae. Um me-
canismo, conhecido como edio de RNA (RNA
editing), permite que vrias protenas diferentes
sejam produzidas a partir do gene P. Uma prote-
na no-estrutural menor, chamada V, produ-
zida pelo mesmo RNA mensageiro (mRNA) por
todos os membros da subfamlia Paramyxovirinae.
Os gneros Respirovirus e Morbillivirus produzem
uma protena no-estrutural adicional, deno-
minada C, a partir de uma segunda fase aberta
de leitura (ORF) do mRNA do gene P. Prote-
nas adicionais, denominadas W (respirovrus,
henipavrus e morbilivrus), D (respirovrus), I
(rubulavrus) entre outras, podem ser formadas
pela edio do mRNA do gene P, pela adio de
1 ou 2 nucleotdeos (nt), alterando a fase de lei-
tura do mRNA e resultando em uma seqncia
diferente de aminocidos. Essas protenas, embo-
ra no essenciais replicao viral, auxiliam na
sobrevivncia do vrus in vitro e so importantes
determinantes da virulncia. A protena P, junta-
mente com a protena N, parece estar envolvida
na mudana do processo de transcrio (sntese
de mRNA) para o de replicao (sntese de RNA
genmico a partir de RNA antigenmico). Uma
regulao da sntese do RNA genmico viral tam-
bm exercida pela protena C. As protenas V,
W e C tambm possuem participao na evaso
da resposta imune inata pelo vrus. Juntamente
com a protena N, a protena P forma agregados
citoplasmticos conhecidos como corpsculos de
incluso nas clulas infectadas.
O gene M2 contm duas ORFs, que codi-
cam dois polipeptdeos, denominados M2-1 e
M2-2. Ambos esto associados ao complexo do
nucleocapsdeo dos pneumovrus e metapneu-
movrus e parecem no possuir homlogos em
outros vrus RNA de polaridade negativa no-
segmentados. A protena M2-1 est envolvida na
elongao da transcrio e participa da induo
da resposta inamatria do hospedeiro e exacer-
bao dos sinais clnicos da infeco viral. A pro-
tena M2-2 no essencial para a multiplicao
do vrus em cultivo celular, porm, a sua deleo
provoca uma reduo na ecincia de replicao.
provvel que tambm possua participao na
664 Captulo 26
mudana de replicao para morfognese viral,
que precedem o egresso dos vrions.
A protena SH (ou A) uma protena inte-
gral de membrana com a poro C-terminal, lo-
calizada na regio extracelular. Apesar de ser ex-
pressa na supercie da clula hospedeira, baixos
nveis da protena SH so detectados nos vrions.
A SH pode apresentar-se sob diversas formas, de-
pendendo de seu estado de glicosilao. Embora
a sua funo ainda no tenha sido totalmente es-
clarecida e no seja uma protena absolutamente
essencial s funes de adsoro, infectividade e
montagem das partculas virais, parece aumentar
a ecincia de fuso promovida pela protena F,
contribuindo para a formao de sinccios. Essa
protena no essencial para a multiplicao viral
em cultivo celular, porm a deleo de seu gene
resulta em reduo substancial nessas atividades.
Existem indcios tambm de sua participao na
evaso resposta imune do hospedeiro.
Os vrus respiratrios sinciciais so os
nicos paramixovrus que possuem dois ge-
nes que codicam as protenas no-estruturais
(NS), precedendo o gene da nucleoprotena. A
protena NS1 atua como um potente inibidor da
transcrio e replicao do RNA viral. Esta pro-
tena tambm pode interagir com as protenas M
e P, porm ainda no foi denido o signicado
biolgico dessa interao. A NS2 uma protena
no-essencial para a replicao do vrus in vitro.
Ambas participam da evaso viral a respostas
celulares antivirais induzidas pela produo de
interferons e .
6 O genoma
O genoma dos paramixovrus constitudo
por uma molcula de RNA linear de ta simples,
polaridade negativa, com 15 a 19 quilobases (kb).
Por possuir polaridade negativa, o genoma des-
nudo no infeccioso quando introduzido em
clulas permissivas. Os vrions podem conter,
ocasionalmente, uma cpia simples de RNA de
polaridade positiva (RNA antigenmico). O ge-
noma contm seqncias no-codicantes na ex-
tremidade 3 (chamada leader), com aproximada-
mente 50 nt, e, na extremidade 5, com 50 a 160 nt
(Figura 26.2). Essas regies so importantes para
a transcrio e replicao do genoma.
A organizao genmica e o nmero de ge-
nes dos paramixovrus variam de acordo com
a subfamlia, com pequenas variaes tambm
dentro dos gneros. Em geral, os genomas pos-
suem entre seis e dez genes (Figura 26.2). Os v-
rus da subfamlia Paramyxovirinae possuem seis
(NP, P/C/V, M, F, H e L) ou sete genes (o vrus
da caxumba possui um gene adicional, o SH). Os
vrus da subfamlia Pneumovirinae possuem dez
(vrus respiratrio sincicial, vrus da pneumonia
murina) ou oito genes (pneumovrus avirio). A
maioria dos mRNA contm apenas uma ORF e
traduzida em uma protena, porm, em alguns
vrus, os mRNA possuem mais de uma ORF, re-
sultando na produo de mais de um produto.
Os mRNA dos diferentes genes so transcritos
individualmente a partir do RNA genmico.
Cada gene contm sinais para o incio e trmino
da transcrio, presentes nas regies intergni-
cas, que possuem entre 1 e 56 nt.
Os paramixovrus so agrupados na classe
V, conforme a classicao de Baltimore (1971)
com relao s estratgias de replicao. De for-
ma similar aos outros vrus dessa classe, todos
os processos relacionados com a replicao viral
ocorrem no citoplasma da clula hospedeira. Em
cultivos celulares, o ciclo replicativo geralmente
se completa em 14 a 30 horas, mas pode ter du-
rao inferior. Cepas virulentas do NDV podem
completar o ciclo replicativo em aproximada-
mente 10 horas.
Os vrions ligam-se a receptores celulares
especcos (CD46 e CD150 para o vrus do sa-
rampo, provavelmente glicosaminoglicanos ou
molculas semelhantes a heparina para os pneu-
movrus, cido silico para os demais) e pene-
tram na clula por fuso do envelope viral com
a membrana plasmtica na superfcie celular,
em condies de pH neutro. Para que a prote-
na precursora F0 exera sua funo fusognica,
necessria a sua prvia clivagem em F1 e F2 por
proteases celulares. Clulas infectadas podem se
fusionar, formando sinccios ou clulas gigantes
multinucleadas caractersticas, que podem pro-
duzir necrose tecidual in vivo. Uma vez no cito-
plasma, o nucleocapsdeo (RNA:N) transcrito
Paramyxoviridae 665
progressivamente a partir da extremidade 3 pelo
complexo polimerase viral (protenas L e P).
A transcrio dos genes dos vrus RNA de
polaridade negativa no-segmentados ocorre
de forma individual, ou seja, cada gene possui
sinais para a iniciao e trmino da transcrio.
Com isso, cada gene transcrito e resulta em um
mRNA individual. Os mRNAs contm 5 cap na
extremidade e so poliadenilados, sendo traduzi-
dos em protenas pelos ribossomos celulares. As
etapas de transcrio e traduo prosseguem at
que ocorra o acmulo das protenas virais no cito-
plasma das clulas infectadas. Em um determina-
do momento, por mecanismos ainda no identi-
cados, o complexo polimerase cessa a produo
de mRNAs individuais e passa a transcrever
o genoma em toda a sua extenso, produzindo
cpias de RNA de sentido antigenmico (polari-
dade positiva). As protenas N e P parecem de-
sempenhar um papel importante nessa transio
entre transcrio e replicao, fazendo com que
o complexo replicase no reconhea os sinais de
terminao existentes nas regies intergnicas e
realize a transcrio integral do genoma e sntese
da cpia antigenmica (RNA +). Esta cpia an-
tigenmica serve de molde para a produo de
molculas de RNA de sentido genmico (RNA -).
medida que so sintetizadas, as molculas de
RNA de sentido negativo se associam com mol-
culas da protena N, formando nucleocapsdeos
helicoidais exveis que, posteriormente, se asso-
ciam com as protenas P e L. A montagem dos
nucleocapsdeos ocorre concomitantemente com
a sntese do RNA antigenmico e genmico, e os
Figura 26.2. Estrutura e organizao genmica dos vrus da famlia . As linhas finas representam o
RNA genmico; os retngulos representam os genes individuais. M) protena da matriz; H) hemaglutinina; F)
protena de fuso; L) polimerase; NP) nucleoprotena; HN) hemaglutinina-neuraminidase; P) fosfoprotena; C/V)
produtos do gene P; SH) protena pequena hidrofbica; G) glicoprotena do envelope; NS1 e NS2) protenas no-
estruturais; M2) protena associadaaoenvelope.
Paramyxoviridae
M F H L
NP
NP
P/C/V
P/C/V
M F HN L
NP P/V M F HN SH L
Gnero Morbillivirus
Gnero Respirovirus
Gnero Rubulavirus
vrus do sarampo
vrus da parainfluenza 3
vrus da caxumba
3'
3'
N NS1 NS2 P M SH G F M2
L
NS1 NS2 N P M G SH F M2 L
N P M F M2 SH G L
Gnero Pneumovirus
Gnero Pneumovirus
Gnero Metapneumovirus
vrus respiratrio sincicial
vrus da pneumonia murina
pneumovrus avirio
3'
3'
3'
S
u
b
f
a
m
l
i
a
P
n
e
u
m
o
v
i
r
i
n
a
e
S
u
b
f
a
m
l
i
a
P
a
r
a
m
y
x
o
v
i
r
i
n
a
e
5
5
5
5
5
3'
5
666 Captulo 26
RNAs virais somente so encontrados como nu-
cleocapsdeos no interior da clula.
A primeira etapa da morfognese envolve
a associao entre as protenas N e o genoma,
seguido da adio do complexo L-P. A segunda
etapa da montagem ocorre na membrana plas-
mtica. As glicoprotenas HN (ou as equivalentes
nos outros vrus) e F (tambm a SH) produzidas
no retculo endoplasmtico (RE) e modicadas no
complexo de Golgi so transportadas em vescu-
las trans-Golgi at a membrana plasmtica, onde
so inseridas. Durante este transporte, a prote-
na precursora F0 clivada em F1 e F2, evento
essencial para a infectividade da prognie viral.
As etapas seguintes da morfognese so pouco
conhecidas. Acredita-se que mltiplas cpias da
protena M sejam transportadas at a membrana
plasmtica, onde se associariam com as caudas
citoplasmticas das glicoprotenas ali inseridas.
Os nucleocapsdeos, ento, interagiriam atra-
vs da protena N com as molculas da protena
M, resultando na sua protuso e brotamento na
membrana plasmtica e no egresso dos vrions.
A Figura 26.3 representa um esquema do ciclo re-
plicativo dos paramixovrus.
8 Paramixovrus de interesse
veterinrio
As duas subfamlias dos paramixovrus
abrigam vrus associados com doenas importan-
tes em animais. Esses vrus e as doenas que eles
causam sero abordados a seguir.
Figura 26.3. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo da familia . 1) Ligao aos receptores; 2)
Penetrao por fuso do envelope viral com a membrana plasmtica; 3) Transcrio dos mRNA pelo complexo
polimerase; 4) Traduo das protenas virais pelos ribossomos celulares; 5) Sntese de RNA antigenmico e
replicao do RNA genmico pelo complexo polimerase; 6) Processamento e transporte das protenas do envelope e
inseronamembrana plasmtica; 7) Morfognese; 8) Egresso.
Paramyxoviridae
A A A A A A
N P L C V M
Sntese RNA
genmico
(+)
(-)
(-)
Transcrio
A
A
A
Traduo
Traduo
ED
HN
G
SH
RE Golgi
1
2
3
4
4
5
6
6
7
8
Paramyxoviridae 667
8.1 Vrus respiratrio sincicial bovino
Os vrus respiratrios sinciciais (RSV) foram
descritos, pela primeira vez, em 1955, durante
um episdio de doena respiratria em chimpan-
zs de um laboratrio em Washington (USA). O
agente viral isolado nessa ocasio e, inicialmente,
denominado chimpanzee coryza agent, foi, poste-
riormente, renomeado como respiratory syncytial
virus (RSV), baseado no seu efeito citoptico ca-
racterstico em cultivo celular. Diversos estudos
subseqentes levaram ao estabelecimento da im-
portncia do RSV como agente de doena respi-
ratria em crianas no mundo inteiro, e o agente
passou a ser conhecido com vrus respiratrio
sincicial humano (human respiratory syncytial vi-
rus, HRSV). Mais de uma dcada aps, um vrus
estreitamente relacionado ao HRSV foi isolado de
bovinos em um episdio de doena respiratria
severa na Sua e no Japo, sendo denominado
vrus respiratrio sincicial bovino (bovine respira-
tory syncytial virus, BRSV).
Atualmente, o BRSV possui distribuio
mundial e est associado com doena respirat-
ria severa em bovinos jovens, caracterizada por
bronquiolite e pneumonia intersticial. um dos
agentes envolvidos no complexo respiratrio
bovino, responsvel por grandes perdas econ-
micas, principalmente em bezerros com idade
inferior a um ano. Outros agentes virais, como o
herpesvrus bovino tipo 1 (BoHV-1), vrus da pa-
rainuenza bovina (bPI-3) e vrus da diarria vi-
ral bovina (BVDV), e bacterianos (Pasteurella sp.)
tambm so freqentemente associados com este
complexo respiratrio.
O BRSV pertence famlia Paramyxoviridae,
subfamlia Pneumovirinae, gnero Pneumovirus,
e possui relao antignica com o HRSV e com
os vrus respiratrios sinciciais ovino e caprino
(ORSV e CRSV). O BRSV possui vrias similari-
dades com o HRSV, especialmente no que se refe-
re estrutura e morfologia dos vrions, organiza-
o genmica e propriedades antignicas.
Os membros da subfamlia Pneumovirinae
diferem dos demais paramixovrus pela ausncia
das protenas neuraminidase e hemaglutinina no
envelope viral; em certas dimenses das proje-
es de superfcie e no dimetro do nucleocaps-
deo. Os vrions do BRSV so pleomrcos, enve-
lopados e com dimenses variveis. As partculas
esfricas medem entre 80 e 350 nm de dimetro, e
as partculas lamentosas medem entre 60 e 100
nm. Os vrions so muito sensveis a pH cido
e so facilmente inativados pelo aquecimento a
56C por 30 minutos. A exposio a dietilter,
clorofrmio e outros solventes apolares tambm
destri a infectividade viral. O vrus extrema-
mente lbil sob condies ambientais com tempe-
ratura elevada, mas permanece estvel sob tem-
peraturas de -50C ou menos por muitos meses.
Episdios de congelamento e descongelamento
tambm so deletrios para a infectividade viral.
O genoma do BRSV possui aproximada-
mente 15.000 nt, que codicam 10 polipeptdeos.
As duas principais glicoprotenas do envelope
so: a protena G (responsvel pela ligao aos
receptores celulares) e a protena F (responsvel
pela fuso e penetrao do vrus na clula e pela
formao de sinccios). Outra protena de su-
perfcie a protena hidrofbica pequena (small
hydrophobic protein, SH). A estrutura e funo das
protenas M, N, fosfoprotena P, protenas M2 e L
parecem ser semelhantes s descritas para o res-
tante da famlia.
As diferenas antignicas entre os isolados
de BRSV, detectadas pelo uso de anticorpos mo-
noclonais, levaram classicao antignica des-
sas amostras em subgrupos, denominados A, AB
(ou intermedirio) e B. No entanto, alguns isola-
dos no se enquadram em nenhum desses gru-
pos. As implicaes prticas dessa diversidade
quanto patogenicidade e imunoprolaxia ainda
no foram devidamente estudadas.
8.1.1 Epidemiologia
O BRSV possui distribuio mundial, mas
uma estimativa precisa da ocorrncia da infeco
difcil, uma vez que outros patgenos virais e
bacterianos podem estar envolvidos nos casos de
doena respiratria. A diculdade de isolamento
do agente tambm diculta o diagnstico, bem
como a ocorrncia de infeces subclnicas. Em
regies endmicas, surtos de doena respiratria
ocorrem, muitas vezes, esporadicamente, envol-
vendo apenas grupos de animais mais suscet-
veis. Em surtos naturais, a doena clnica rara-
mente observada em animais com idade inferior
668 Captulo 26
a duas semanas, sendo mais severa em bezerros
entre um e cinco meses de idade. A doena in-
comum entre animais com idade superior a nove
meses, mas pode, ocasionalmente, ocorrer em
animais adultos.
No Brasil, o vrus foi detectado pela primei-
ra vez por Gonalves et al. (1993), em amostras de
pulmes de bezerros do estado do Rio Grande do
Sul (RS). O isolamento e a identicao viral fo-
ram realizados por Arns et al. (2003), a partir de
amostras de secrees naso-traqueais de animais
com sinais respiratrios procedentes do RS. Em
um estudo mais abrangente, foram isoladas e ca-
racterizadas cinco amostras do BRSV oriundas de
rebanhos leiteiros e de corte dos estados do RS e
Minas Gerais. Todas as amostras analisadas per-
tencem ao subgrupo B.
Embora a forma de transmisso do BRSV
durante a infeco natural no seja completamen-
te denida, sugere-se que seja necessrio o conta-
to prximo entre animais. Dados experimentais
demonstraram que a transmisso por aerossis
pode ocorrer a curtas distncias. Animais expos-
tos experimentalmente a aerossis contendo o v-
rus e aps inoculao intratraqueal apresentam
leses muito semelhantes s observadas a campo,
o que sugere que a inoculao por aerossol simu-
le a forma natural da infeco.
Em climas temperados, a maioria dos surtos
associados ao BRSV ocorre no incio do inverno,
embora episdios severos da doena j tenham
sido relatados no vero. No se sabe como o
BRSV se mantm entre os surtos, e possvel que
o vrus permanea circulante em baixos nveis
entre os animais soropositivos. O reaparecimen-
to do vrus em rebanhos fechados pode tambm
ser explicado pela persistncia do agente em
animais infectados, uma vez que a aplicao de
corticosterides em animais soropositivos resul-
ta em um aumento de quatro vezes nos ttulos
de anticorpos. Alteraes climticas podem au-
mentar a incidncia da infeco, principalmente
o clima mido e a presena de vento, assim como
fatores que afetam a atividade mucociliar, como
nveis elevados de amnia no ambiente. Embora
boas condies e manejo adequado dos animais
reduzam a incidncia de infeces pelo BRSV, re-
banhos em excelentes condies nesses aspectos
tambm podem apresentar surtos severos. Isto
sugere que o BRSV pode causar doena sem a
ocorrncia de fatores ambientais predisponentes.
A morbidade da infeco pode atingir 80 a
100% dos animais. No entanto, a taxa de mortali-
dade raramente excede 5 a 10%, dependendo das
condies sanitrias do rebanho.
e patologia

Embora a patogenia das infeces pelo BRSV
no tenha sido totalmente esclarecida, diversas
evidncias indicam a importante participao de
mecanismos imunomediados. A infeco pelo
BRSV aumenta a aderncia e colonizao bacte-
riana e altera os mecanismos especcos e inespe-
ccos de defesa do trato respiratrio. Por essas
razes, estima-se que muitas pneumonias bacte-
rianas se desenvolvam aps infeces virais.
Aps a penetrao pela via respiratria,
o BRSV replica nas clulas epiteliais da mucosa
nasal, faringe, traquia e pulmes. O vrus apa-
rentemente no produz viremia e raramente foi
detectado fora do sistema respiratrio. Antgenos
virais podem ser detectados na mucosa da naso-
faringe dois dias aps infeco experimental, bem
como nos linfonodos traqueobronquiais. As clu-
las pulmonares somente aparecem infectadas en-
tre 4 e 13 dias aps a infeco. As clulas epiteliais
dos bronquolos so as primeiras a serem infecta-
das, seguidas pelas clulas alveolares. Antgenos
virais podem tambm ser detectados em macr-
fagos alveolares, embora o papel dessas clulas
na patogenia seja controverso. provvel que
pelo menos um subgrupo de macrfagos alveo-
lares possam ser permissivos replicao viral
e, portanto, possam contribuir para a patognese
da infeco. Alm disso, os macrfagos ativados
liberam citocinas que potencialmente contribuem
para as leses. O pico de excreo viral em secre-
es nasais ou pulmonares e em clulas pulmo-
nares ocorre entre quatro e oito dias aps a infec-
o. Em bovinos infectados experimentalmente,
o vrus foi isolado de secrees nasais 24 horas
ps-infeco, e o RNA viral foi detectado em se-
crees nasais pela reao em cadeia da polime-
rase acoplado transcrio reversa (RT-PCR) at
17 dias ps-infeco. O vrus pode ser detectado
em clulas oriundas de lavado pulmonar aos dois
Paramyxoviridae 669
dias aps a infeco. Nos tecidos traqueais, o v-
rus foi detectado precocemente s 24 horas aps
a infeco, foi isolado no dia quatro e continuou
sendo detectado alm dos 10 dias subseqentes.
Os sinais clnicos aps a infeco natural in-
cluem pirexia (>39,5C), descarga nasal, tosse, ta-
quipnia, respirao bucal e abdominal, ensema
pulmonar e subcutneo e ocasionalmente morte.
Infeces bacterianas secundrias, especialmente
por Pasteurella multocida, Streptococcus pneumoniae
e Mycoplasma bovis, so freqentemente detecta-
das em surtos de BRSV. Quando no ocorrem
infeces bacterianas secundrias, os animais se
recuperam em duas a trs semanas aps a infec-
o.
Os achados de necropsia incluem pneumo-
nia intersticial multifocal, ensema alveolar dis-
seminado com focos de atelectasia, e ensema in-
tersticial em graus moderados. Uma caracterstica
marcante da doena o espessamento dos septos
interlobulares. Pequenas franjas conjuntivas so
evidenciadas nos bordos do pulmo e do um
aspecto fosco a essas regies. Alguns relatos des-
crevem uma hipertroa marcante do miocrdio
do ventrculo direito.
As mucosas da cavidade nasal, traquia e
brnquios dos animais infectados podem apre-
sentar-se hipermicas, especialmente nos estgios
iniciais da infeco. O septo interlobular muitas
vezes aparece espessado, devido ao edema pro-
nunciado causado por obstruo dos brnquios,
que pode levar dispnia severa. As pores
dorsal e crnio-dorsal dos pulmes podem se
apresentar normais em muitos casos, mas podem
tambm estar marcadamente distendidas, devido
ao edema e ensema intersticial e alveolar seve-
ros. Os linfonodos regionais do trato respiratrio
podem estar aumentados e edematosos.
No exame histopatolgico, possvel se ob-
servar clulas sinciciais em grande quantidade,
localizadas principalmente nos bordos dos l-
bulos pulmonares, nos alvolos, bronquolos e,
por vezes, em vasos linfticos. As clulas sinci-
ciais apresentam um nmero varivel de ncleos
dispostos centralmente. H presena de ensema
alveolar crnico com bordos de septos alveola-
res rompidos em forma de clava, por vezes in-
tercalados com reas de atelectasia, hipertroa
da camada muscular peribronquiolar e focos
de metaplasia escamosa do epitlio bronquial e
bronquiolar. So observadas ainda alteraes in-
amatrias mononucleares com reas focais de
inltrado eosinoflico. Bronquite, peribronquite e
bronquiolite so igualmente achados histolgicos
caractersticos aps a infeco natural pelo BRSV.
Outras importantes alteraes histopatolgicas
incluem o espessamento da parede alveolar, pro-
liferao do epitlio bronquiolar com perda de
clios, epitelizao alveolar, formao de mem-
branas hialinas, edema e exsudato nos espaos
alveolares, bronquiais e bronquiolares, colapso
de alvolos, inltrao de neutrlos, linfcitos
e eosinlos.
8.1.3 Imunidade
A protena F considerada a mais imunog-
nica do BRSV, superando a protena G na indu-
o de anticorpos neutralizantes e na imunidade
mediada por linfcitos T citotxicos. A protena F
ainda induz a produo de anticorpos inibidores
da fuso, que esto relacionados com proteo
frente infeco. A imunizao de animais com
as protenas F, G e N expressas separadamente
no vrus vaccinia conferiu proteo contra o de-
sao com o BRSV. Um estudo realizado em ani-
mais experimentalmente infectados demonstrou
que a imunidade humoral contra a protena F
mais duradoura e de maior intensidade do que
a induzida pela protena G. Anticorpos contra as
protenas P, M e M2 tambm esto presentes em
infeces naturais.
Os anticorpos maternos contra as protenas
F, G e N presentes no soro de bezerros no con-
ferem proteo frente infeco pelo BRSV, mas
podem reduzir a severidade da doena. Esses
anticorpos causam um decrscimo na replicao
viral nos pulmes aps o desao. A sua presena
ainda suprime a resposta imune humoral local e
sistmica infeco. Desse modo, a vacinao de
animais jovens pode ser prejudicada pela presen-
a de anticorpos maternos.
Estudos em bovinos tm demonstrado que
a infeco pelo BRSV induz uma resposta imu-
nolgica predominantemente de linfcitos T au-
xiliares do tipo Th2, que so caracterizadas pela
670 Captulo 26
produo de interleucinas (IL) 4 e 10. Estas IL
estimulam a produo de anticorpos, incluindo
a classe IgE, que, por sua vez, estimulam o re-
crutamento de eosinlos para o parnquima
pulmonar. O quadro de intensa bronquiolite evi-
denciado nas infeces pelo BRSV pode ser par-
cialmente explicado pela resposta eosinoflica.
8.1.4 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo BRSV deve
se basear na deteco de antgenos virais em
amostras clnicas, alm da sorologia. Os mtodos
de escolha para a deteco de antgenos do BRSV
em amostras de pulmo so as tcnicas de imu-
nouorescncia (IFA) e imunoperoxidase (IPX).
O exame de secrees nasais pode se constituir
em uma alternativa para o diagnstico no animal
vivo. O lavado broncoalveolar pode ser mais in-
dicado do que os suabes nasais para a demons-
trao de antgenos.
A fragilidade dos vrions do BRSV torna o
isolamento em cultivo celular trabalhoso e fre-
qentemente infrutfero, requerendo repetidas
passagens at o aparecimento de efeito citoptico.
Cuidados especiais na conservao de amostras,
incluindo a coleta estril, manuteno dos esp-
cimes sob refrigerao (evitar o congelamento a
-20C) e envio imediato ao laboratrio aumentam
as chances de isolamento do vrus. Tambm re-
comendvel a coleta de suabes nasais ou lavados
broncoalveolares de diferentes animais do reba-
nho. Em casos de necropsia, a coleta de reas pul-
monares adjacentes s reas mais afetadas e de
reas com aspecto saudvel tambm aumentam
a probabilidade de deteco do vrus.
Para o diagnstico sorolgico, as tcnicas
de ensaio imunoenzimtico (ELISA) e soroneu-
tralizao (SN) tm sido amplamente utilizadas.
O diagnstico tambm pode ser realizado pela
deteco do RNA viral em amostras clnicas por
RT-PCR.
O controle da enfermidade depende de co-
nhecimentos sobre a prevalncia e epidemiologia
do vrus. Os programas de controle so basea-
dos em melhorias de manejo, biossegurana, no
controle do trnsito de animais e na utilizao de
vacinas.
Existe uma grande carncia de vacinas pro-
tetoras contra o BRSV. Vacinas apropriadas de-
vem ser capazes de conferir proteo mesmo na
presena de anticorpos maternais, proteger con-
tra todos os subtipos e prevenir as manifestaes
clnicas. Vrias vacinas inativadas e atenuadas
esto disponveis comercialmente. No entanto, o
desao experimental e a campo tm demonstra-
do resultados inconclusivos quanto sua eccia.
Recentemente, uma vacina, utilizando o BoHV-1
como vetor para a protena G do BRSV, reduziu
os sinais clnicos e a excreo viral aps o desao.
A protena G, como antgeno alvo de uma vacina
de DNA, tambm apresentou sucesso frente ao
desao.
O desenvolvimento de vacinas contra as in-
feces pelo BRSV e HRSV foi, em parte, prejudi-
cado por um fato inusitado ocorrido na dcada
de 1960. O uso de uma vacina contra o HRSV,
inativada pela formalina, exacerbou a enfermi-
dade induzida pelo vrus de campo e causou
mortes em um grande nmero de crianas. A
interao com a formalina provocou alteraes
conformacionais nos antgenos vacinais, levando
formao de imunocomplexos que resultaram
no desencadeamento de uma reao de hipersen-
sibilidade do tipo III.
Alm desses problemas, a imunidade de
curta durao, conferida aps a infeco natural,
deixa dvidas sobre a durabilidade da proteo
conferida pelas vacinas. Outra exigncia de difcil
resoluo a necessidade de que a vacina induza
imunidade protetora contra as diferentes varian-
tes antignicas encontradas a campo.
8.2 Vrus da parainuenza bovina tipo 3
O bPIV-3 um membro da famlia Para-
myxoviridae, subfamlia Paramyxovirinae, gnero
Respirovirus, responsvel por infeces respirat-
rias em bovinos e ovinos. O vrus foi isolado pela
primeira vez nos EUA, em 1959, a partir de se-
crees nasais de bovinos com sinais clnicos do
quadro denominado febre do transporte.
Os vrions possuem sete protenas, codica-
das pelo genoma RNA de ta simples e polarida-
de negativa, constitudo por, aproximadamente,
Paramyxoviridae 671
15.000 nt. A glicoprotena HN (hemaglutinina-
neuraminidase) est envolvida na ligao aos
receptores e egresso do vrus, conferindo-lhe a
propriedade de aglutinar hemcias de bovinos,
cobaias, sunos, humanos e aves. A protena F
est envolvida na penetrao e transmisso do
vrus entre clulas. As protenas HN e F esto as-
sociadas com a patogenia da infeco e so res-
ponsveis pela formao de sinccios em clulas
de cultivo, o que constitui o efeito citoptico do
vrus. Essas protenas so importantes para a in-
duo de anticorpos neutralizantes e inibidores
da hemaglutinao. Alm de bovinos, o vrus
pode infectar naturalmente outras espcies, in-
cluindo ces, eqinos, macacos e humanos.
O bPIV-3 estreitamente relacionado com o
vrus da parainuenza humana tipo 3 (HPIV-3),
apresentando semelhanas genticas e antigni-
cas importantes. Estudos de proteo demons-
traram aproximadamente 25% de neutralizao
cruzada entre esses vrus.
8.2.1 Epidemiologia
A distribuio do bPIV-3 mundial e a pre-
valncia de anticorpos especcos alta na po-
pulao bovina. No Brasil, a infeco endmica
com altas taxas de soropositividade nos rebanhos.
Estudos realizados no RS indicam uma prevaln-
cia de anticorpos superior a 80% em gado de lei-
te e corte, demonstrando a ampla disseminao
do agente. Apesar das evidncias sorolgicas da
presena do vrus no Brasil, raramente tem sido
relatado o isolamento do agente. O vrus foi iso-
lado de um animal com doena respiratria no
RS e de um surto de abortos em bovinos no esta-
do de Gois. A prevalncia alta da infeco, as-
sociada aos raros relatos de doena respiratria
nos rebanhos, sugere que a maioria das infeces
inaparente.
A disseminao do vrus no rebanho ocor-
re aparentemente por contato direto e indireto.
Fatores predisponentes para a infeco incluem
o estresse (vacinao, desmame, transporte),
excesso de lotao e ventilao inadequada, es-
pecialmente em rebanhos leiteiros estabulados.
Os ovinos tambm so susceptveis infeco e,
possivelmente, participam da epidemiologia da
infeco, atuando como disseminadores do vrus
para os bovinos.
A doena caracterizada por baixa morbida-
de; a mortalidade rara. Taxas mais altas de mor-
bidade e mortalidade podem ocorrer em casos de
co-infeces com agentes virais ou bacterianos. A
faixa etria mais afetada a de dois a seis meses
de idade, acompanhando o declnio da imunida-
de passiva. No entanto, j foram relatados casos
em animais mais jovens.
e patologia
Aps a penetrao pelas vias areas supe-
riores, o vrus replica no epitlio nasal, farngeo
e traqueal. Durante a infeco do trato respira-
trio inferior, o vrus pode infectar pneumcitos
do tipo II, causando leses nos alvolos pulmo-
nares.
Em infeces naturais, os sinais clnicos mais
freqentemente observados so: dispnia, tosse,
descarga nasal serosa ou mucopurulenta, lacri-
mejamento, conjuntivite, inapetncia e tempera-
tura elevada. Esses sinais so tpicos da febre do
transporte. Em bezerros infectados experimen-
talmente, a doena caracterizada por febre, hi-
pertermia, lacrimejamento, descarga nasal serosa
abundante, depresso, dispnia e tosse. Muitos
animais apresentam sinais brandos, recuperan-
do-se em poucos dias, porm a infeco pode re-
sultar em pneumonia intersticial, afetando geral-
mente os lobos pulmonares anteriores. Sons de
crepitao em lobos pulmonares diafragmticos
podem ser auscultados em casos mais graves,
com presena de ensema. A doena geralmente
evolui para a cura espontnea. No entanto, um
tratamento de suporte para possveis infeces
secundrias, incluindo antibiticos, pode ser ne-
cessrio em casos mais graves. O aborto uma
conseqncia espordica da infeco em vacas
gestantes.
Os achados de necropsia incluem pneumo-
nia exsudativa, que atinge preferencialmente as
pores craniais e ventrais dos lobos pulmonares.
Bronquite e bronquiolite com inltrado plasmo-
citrio esto presentes ao exame histopatolgico.
Hiperplasia e necrose do epitlio bronquiolar
672 Captulo 26
tambm podem ser observadas. A infeco pro-
vavelmente induz uma imunossupresso loca-
lizada, o que favorece a instalao de infeces
bacterianas secundrias.
8.2.3 Imunidade
Anticorpos com atividade neutralizante,
especialmente da classe IgG2, e anticorpos inibi-
dores da hemaglutinao so detectveis no soro
de animais convalescentes. A proteo contra o
aparecimento de sinais clnicos induzidos por
reinfeces pelo bPIV-3 est associada com altos
ttulos de anticorpos neutralizantes e presena de
resposta imune celular de memria. A imunida-
de de mucosas, especialmente aquela mediada
por IgA, parece ser importante na proteo con-
tra reinfeces. No entanto, a imunidade geral-
mente passageira, e os animais podem se tornar
susceptveis reinfeco aps alguns meses.
8.2.4 Diagnstico
O bPIV-3 deve ser considerado em casos de
doena respiratria em bovinos jovens. A suspei-
ta clnica deve ser conrmada por testes labora-
toriais. O diagnstico laboratorial baseia-se no
isolamento do vrus em cultivo celular, a partir
de secrees nasais de animais doentes. O vrus
pode ser recuperado de secreo nasal de 7 a 9
dias ps-infeco. O vrus produz citomegalia,
arredondamento celular e formao de sinccios
em clulas primrias ou de linhagem bovina,
efeito caracterstico dos membros da famlia Pa-
ramyxoviridae.
A identicao do vrus pode ser realizada
por IFA de clulas inoculadas com o material
suspeito. O mtodo clssico de identicao a
hemaglutinao (HA) com eritrcitos de cobaias,
seguida de inibio da hemaglutinao (HI) com
anti-soro especco. Outro mtodo clssico de
diagnstico a reao de hemadsoro em culti-
vo celular. As tcnicas moleculares (RT-PCR) tm
sido utilizadas para a deteco do agente e seus
produtos. A sorologia pareada tambm pode au-
xiliar o diagnstico da infeco aguda. As tcni-
cas de eleio para a sorologia so a HI com eri-
trcitos de cobaias, a SN e ELISA.
A preveno da enfermidade deve se base-
ar em medidas de higiene, manejo, controle do
trnsito de animais, quarentena e vacinao. Va-
cinas vivas e inativadas esto disponveis para o
controle das infeces pelo bPIV-3. Essas vacinas
geralmente contm outros agentes virais e bac-
terianos associados com doena respiratria em
bovinos. A relao custo-benefcio do seu uso
em situaes epidemiolgicas em que a doena
rara, como no Brasil, deve ser considerada. Ati-
vidades de manejo que evitem a superlotao,
cuidados com mudanas bruscas de temperatura
e administrao adequada de colostro podem au-
xiliar na preveno da doena.
8.3 Vrus da peste bovina
A peste bovina (rinderpest) foi descrita
pela primeira vez na sia, no sculo IV. A doena
causada por um Morbillivirus que, nos sculos
XVIII, XIX e XX, causou epidemias devastado-
ras na Europa e na frica subsaariana. Um surto
ocorrido, em 1920, na Europa, motivou a criao
da OIE (Ofce International des Epizooties) em Pa-
ris. Casos da doena foram relatados em regies
da frica, do Oriente e da sia, no entanto est
em processo de erradicao nesses locais. Acre-
dita-se que outros morbilivrus, como o CDV e o
vrus do sarampo, tenham se originado a partir
do vrus da peste bovina h mais de 5.000 anos.
Os vrions so sensveis a maioria dos desinfetan-
tes (fenol, hidrxido de sdio, solventes lipdicos,
entre outros), mantm a viabilidade por longos
perodos em tecidos congelados e so estveis
sob pH 4 a 10.
Esse vrus pode infectar todas as espcies
da ordem Artiodactyla, incluindo ovinos, capri-
nos, sunos, cervdeos, camelos, antlope africa-
no, hipoptamos e outros animais selvagens. Os
bovinos e bfalos esto envolvidos com maior
freqncia nos surtos da doena febril e fatal, mas
a doena menos severa nas outras espcies. Em
sunos, a infeco pode ser assintomtica e, em
reas endmicas, pode-se observar doena mais
branda em bovinos e bfalos. A morbidade em
Paramyxoviridae 673
populaes susceptveis de aproximadamente
100%, e a mortalidade pode atingir 90 a 100%.
A transmisso do vrus d-se pela ingesto
e/ou contato com gua e alimentos contamina-
dos com excrees e secrees de animais infec-
tados. O agente penetra no hospedeiro provavel-
mente pela via oral e/ou nasal. Dois dias antes de
apresentar sinais clnicos, os animais j excretam
o vrus em grande quantidade. O vrus replica
inicialmente em linfonodos farngeos, mandibu-
lares e tonsilas, disseminando-se pelo organismo
por viremia. Aps um perodo de incubao de
trs a cinco dias, os animais apresentam hiper-
termia. A fase de leses nas mucosas ocorre em
seguida, com inamao e eroses na mucosa
dos tratos digestivo e respiratrio, descarga nasal
mucopurulenta e diarria aquosa, s vezes, com
sangue. So observados, ainda, arqueamento do
posterior e rpida perda de peso, leucopenia e
imunossupresso. Fmeas prenhes podem abor-
tar. Durante a necropsia, observa-se necrose das
placas de Peyer, congesto e hemorragias no epi-
tlio intestinal, aumento e edema nos linfonodos
e eroses nas mucosas oral e nasal.
O diagnstico laboratorial pode ser reali-
zado a partir de urina, sangue, secrees nasais,
orais e fezes coletadas de animais doentes; ou de
linfonodos e bao coletados de animais recente-
mente mortos. Em reas endmicas, o diagnsti-
co freqentemente realizado pelos sinais clni-
cos severos.
O isolamento e identicao do vrus po-
dem ser realizados pela inoculao do material
suspeito em clulas primrias ou de linhagem de
origem bovina, ovina, suna e tambm em clulas
Vero. A inoculao de ovos embrionados ou de
animais de laboratrio (coelhos, camundongos e
cobaias) tambm pode ser realizada. A deteco
de antgenos por IFA, IPX, imunoeletroforese ou
imunodifuso em gel de gar (IDGA) tambm
indicada. A deteco do RNA viral por RT-PCR
representa uma alternativa rpida e sensvel de
diagnstico. Tcnicas sorolgicas (ELISA, SN)
podem ser empregadas no soro de animais que
sobreviveram por um perodo suciente para
produzir anticorpos.
Em pases livres, a preveno e o controle
da doena so direcionados para evitar a intro-
duo do agente. Quarentena, o abate de animais
suspeitos e proibio da importao de produtos
de origem animal no-cozidos de reas de risco
so as medidas adotadas em reas livres. A peste
bovina uma doena de noticao obrigatria,
segundo a OIE. Vacinas atenuadas so aplicadas
em animais nas reas em que a doena end-
mica, e a imunidade pode permanecer por vrios
anos.
8.4 Vrus da peste dos pequenos
ruminantes
A peste dos pequenos ruminantes (pest ds
petit ruminants) uma doena sistmica e conta-
giosa de ovinos e caprinos, clinicamente seme-
lhante peste bovina. A doena causada por
um Morbillivirus (PPRV) relacionado antigenica-
mente com o vrus da peste bovina. No entanto,
ao contrrio da peste bovina, grande parte das
infeces por este vrus subclnica. A infeco
tem sido descrita no oeste da frica, na Pennsula
Arbica, Oriente Mdio e na ndia. Alm dos ovi-
nos e caprinos, espcies de ungulados selvagens
e uma espcie de cervdeo (Odocoileus virginia-
nus) so susceptveis ao vrus. Os bovinos e su-
nos geralmente desenvolvem infeces inaparen-
tes. Em reas endmicas, a peste dos pequenos
ruminantes uma importante causa de impacto
econmico.
A transmisso do vrus ocorre por contato
direto ou indireto com excrees e secrees de
animais infectados, pelas vias oral e/ou nasal.
Durante um perodo de incubao de trs a dez
dias, o vrus replica nos linfonodos regionais e
produz viremia. Na viremia, que dura dois ou
trs dias, o vrus se dissemina para o bao, me-
dula ssea, trato gastrintestinal e respiratrio,
alm dos tecidos linfides. Os sinais clnicos in-
cluem hipertermia, anorexia, letargia, gengivite,
estomatite, conjuntivite, diarria e desidratao.
Abortos podem ocorrer em fmeas prenhes.
Broncopneumonia, com infeces secundrias,
tambm pode ser observada. Na necropsia, ob-
serva-se estomatite erosiva necrosante na mu-
cosa oral, conjuntivite catarral profusa, reas de
necrose na mucosa nasal, eroses e hemorragias
no intestino, necrose e ulcerao nas placas de
674 Captulo 26
Peyer, congesto e aumento de volume no bao e
nos linfonodos. Vulvovaginite erosiva, pleurite e
hidrotrax tambm tm sido descritos.
O diagnstico laboratorial da infeco pode
ser realizado a partir de secrees (oral, nasal e
ocular), sangue, linfonodos mesentricos, bao,
pulmes e linfonodos bronquiais. Para a detec-
o de antgenos virais, utilizam-se as tcnicas
de IDGA, imunoeletroforese, IFA, ELISA e IPX.
O isolamento viral pode ser realizado em clulas
primrias de rim bovino e na linhagem Vero. A
deteco de partculas virais por ME e a ampli-
cao de RNA por RT-PCR tambm podem ser
utilizadas, alm de testes sorolgicos como a SN,
ELISA e IDGA.
Algumas vacinas tm sido utilizadas para
limitar a disseminao da infeco. O controle
baseado em medidas para impedir a introduo
de animais infectados em reas livres.
8.5 Vrus da cinomose
A infeco pelo vrus da cinomose (CDV)
ocorre em candeos domsticos e selvagens, alm
de outros mamferos das famlias Felidae, Muste-
lidae, Procyonidae e Viverridae. Porm, a sua maior
importncia na rotina veterinria est relaciona-
da com as manifestaes clnicas em ces doms-
ticos. O CDV um membro do gnero Morbillivi-
rus e antigenicamente relacionado com o vrus
do sarampo, com o vrus da peste dos pequenos
ruminantes e com o vrus da peste bovina, estes
dois ltimos ainda no relatados no Brasil. A ci-
nomose apresenta sinais clnicos sistmicos, que
podem ser acompanhados de sinais neurolgi-
cos.
Os vrions do CDV possuem as protenas F
e H no envelope, e a protena H a responsvel
pelo tropismo do vrus no organismo, possuindo
funo importante na sua neuroinvasividade. O
envelope lipoprotico viral facilmente destru-
do por desinfetantes, e o vrus muito sensvel s
condies ambientais de temperatura e radiao
solar.
Somente um sorotipo do CDV tem sido des-
crito, porm tem sido demonstrado que os iso-
lados de campo apresentam uma variabilidade
antignica considervel. Os isolados do CDV
tambm apresentam variaes de patogenicida-
de e virulncia nos hospedeiros.
8.5.1 Epidemiologia
A infeco pelo CDV enzotica no mun-
do inteiro, com a doena ocorrendo com maior
freqncia em ces jovens no-vacinados. Falhas
vacinais, associadas com esquemas de vacinao
inadequados ou mesmo com vacinas comerciais
de baixa qualidade, podem resultar na ocorrncia
de doena mesmo em ces vacinados. Em outros
pases a situao semelhante. Pases desenvol-
vidos que reduziram a incidncia da doena pela
vacinao massiva ainda apresentam surtos es-
pordicos de cinomose.
O contato direto com as secrees nasais,
orais e urina de animais infectados se constitui na
principal forma de transmisso do CDV. A disse-
minao do vrus a curtas distncias por aeros-
sis tambm parece ocorrer com certa freqncia.
A transmisso por fmites e no ambiente nosoco-
mial tambm tem sido descrita. Aps a infeco,
os animais excretam o vrus nos uidos corporais
por perodos prolongados.
Grande parcela dos ces infectados no de-
senvolve a forma clnica da infeco. Entretanto,
existem amostras de CDV com vrios nveis de
patogenicidade. Este fato, associado com fatores
do hospedeiro, como idade, status imunolgico e
infeces secundrias, podem inuenciar na ma-
nifestao das diferentes formas clnicas da do-
ena.
Outro aspecto importante da biologia do
CDV a gama crescente de espcies de mamferos
que se infectam naturalmente. Os danos ecolgi-
cos associados com essas infeces puderam ser
observados nos surtos de cinomose com elevadas
taxas de mortalidade em lees e hienas no Par-
que Nacional do Serengueti (Tanznia, continen-
te africano). A infeco pelo CDV fatal tambm
para outros animais domsticos, como os fures.
A infeco de gatos domsticos parece no ser
patognica, embora o CDV possa causar doena
grave em grandes felinos selvagens. O controle
desse vrus se torna difcil pelo grande nmero
de espcies selvagens que podem ser infectadas,
incluindo animais da famlia Canidae (lobos, ra-
Paramyxoviridae 675
posas, coiotes, dingo e chacal), Procyonidae (mo-
pelada, coati e panda), Mustelidae (ferret, marta,
texugo, cangamb e lontra), Viverridae (civet) e
da famlia Felidae (leopardo, lees, tigres e gue-
pardos). Surtos de enfermidade com alta mortali-
dade em focas e outros mamferos marinhos tm
sido descritos no mar Mediterrneo e atribudos
ao CDV e a outros vrus relacionados.
e patologia
Aps a inalao das partculas vricas, o
CDV replica no epitlio e em macrfagos do trato
respiratrio superior e, a seguir, alcana os linfo-
nodos regionais. Em um perodo de at uma se-
mana aps a infeco, o vrus carreado por lin-
fcitos e se dissemina pelos rgos linfides. Essa
fase denominada viremia primria, e respon-
svel pelo primeiro pico febril. A progresso da
infeco depende da resposta imune do animal. A
maioria dos ces desenvolve uma resposta imune
celular e humoral ecaz e no manifesta sinais cl-
nicos da doena. Os ces infectados que no con-
seguem montar uma resposta eciente acabam
por apresentar a doena em diferentes nveis de
gravidade, em at trs semanas aps a infeco.
Nestes animais, o vrus carreado por linfcitos
e moncitos, produzindo a viremia secundria
(segundo pico de febre) e se disseminando para a
pele e para os tratos digestivo, respiratrio, uro-
genital e sistema nervoso. As manifestaes cl-
nicas apresentam correlao com os rgos e/ou
tecidos afetados. A patogenia da infeco pelo
CDV est ilustrada na Figura 26.4.
Clulas mononucleares carreiam o CDV
para o SNC, por diferentes vias: atravs da bar-
reira hematoenceflica, pelo uido cefalorraqui-
diano e/ou pelo epndima dos ventrculos. A
grande variedade de sinais neurolgicos da cino-
mose est relacionada com as leses multifocais
no SNC. Os stios de predileo do vrus so: a
substncia branca do cerebelo, periventricular e
ao redor do quarto ventrculo, a medula ssea
e a via ptica. Geralmente, a desmielinizao
a leso predominante, decorrente da replicao
viral na substncia branca. Alguns estudos de-
monstram que, inicialmente, a infeco pelo CDV
promove uma disfuno metablica nas clulas
que produzem a mielina. No entanto, durante a
inamao crnica, as leses so decorrentes do
processo inamatrio, com a destruio dessas
clulas por macrfagos e por anticorpos.
A infeco do sistema reticuloendotelial e
de linfonodos caracterizada pela hiperplasia
e formao de clulas gigantes multinucleadas
nesses rgos. No SNC, ocorre encefalite no-
supurativa. No sistema respiratrio, pode ser
observada pneumonia intersticial. A deteco de
corpsculos de incluso eosinoflicos intracito-
plasmticos e intranucleares, denominados cor-
psculos de Lenz, pode ser realizada nos tecidos
em que ocorreu a replicao viral. Essas incluses
so detectadas com maior freqncia em clulas
sangneas, astrcitos, neurnios e no epitlio da
bexiga, associadas com desmielinizao e altera-
Figura 26.4. Patogenia da cinomose canina. O CDV
penetra geralmente pela via oronasal e replica
inicialmente nos epitlios e em macrfagos das vias
areas superiores, faringe e tonsilas. A replicao
primria seguida de viremia que permite a
disseminao sistmica do vrus e infeco de uma
variedade de linfonodos e acmulos linfides, levando a
um quadro de imunossupresso. Em ces que no
conseguem montar uma resposta imune eficiente, o
vrus produz uma viremia secundria, dissemina-se e
replica em vrios tecidos, incluindo clulas epiteliais da
pele, dos tratos digestivo, respiratrio e urinrio, no
sistema nervoso central (SNC) e no sistema retculo-
endotelial. Esses animais podem apresentar uma
variedade de manifestaes clnicas, relacionadas com
os rgos e tecidos afetados. Aincapacidade de erradicar
ovrus poderesultar empersistnciaviral noSNC.
Fonte: adaptada do site: www.bakerinstitute.vet.cornell.edu.
676 Captulo 26
es em astrcitos no sistema nervoso. Inltrado
mononuclear perivascular pode ser observado
na substncia cinzenta do SNC. Na necropsia, o
crebro apresenta malcia e, ao exame microsc-
pico, o cerebelo e pores mais basais do encfalo
apresentam leses de necrose; raramente o crtex
atingido.
A forma aguda da doena mais comum em
animais com idade entre quatro e seis meses, pela
perda da imunidade passiva. Observa-se apa-
tia, secreo nasal e ocular serosa a seromucosa
e imunossupresso. A infeco na pele produz
pstulas abdominais e, no tegumento, resulta em
hiperqueratose do focinho e das almofadas plan-
tares, causada pela infeco das clulas basais do
epitlio. A replicao viral no sistema respirat-
rio inferior, quando associada com infeces bac-
terianas secundrias, pode causar pneumonia in-
tersticial. Conjuntivite purulenta outro achado
freqente. Diarria com fezes amolecidas ob-
servada pela infeco do trato digestrio. A do-
ena hiperaguda se manifesta com sinais graves
de ataxia e alteraes do comportamento em ces
jovens, sendo associada com a vacinao com pa-
tgenos imunossupressores, como o parvovrus
canino (CPV-2), ou mesmo pela reverso da vaci-
na atenuada virulncia.
O CDV pode produzir uma infeco grave
do SNC, caracterizada por encefalite e desmieli-
nizao. Essa patologia pode estar associada ou
no com as manifestaes sistmicas e caracteri-
za-se por inamao da substncia cinzenta no
crebro e cerebelo. Alm da forma aguda, uma
forma crnica progressiva da enfermidade re-
conhecida em ces adultos (trs a oito anos de
idade). Nestes casos, as alteraes so restritas ao
SNC. Os sinais neurolgicos, tambm presentes
na forma aguda, incluem hipersalivao, mioclo-
nias, tremores, incoordenao, diminuio dos
reexos pupilares, paresia do posterior, que pode
evoluir para tetraplegia. Outros sinais mais gra-
ves podem ocorrer, incluindo epilepsia, delrio
e vocalizaes, estupor e coma. Outra forma de
apresentao da cinomose a encefalite do co
velho, que geralmente acomete ces com idade
superior a oito anos.
Manchas marrom-escuras circundando o
esmalte dos dentes de animais infectados ainda
lhotes tambm so achados relativamente fre-
qentes. Essa alterao resultante da infeco
das clulas que produzem o esmalte e deno-
minada hiperplasia de esmalte. A infeco de
cadelas prenhes pode resultar em transmisso
transplacentria do vrus, podendo causar abor-
tos, natimortos, nascimento de lhotes fracos e
imunossuprimidos.
8.5.3 Imunidade
A sobrevivncia do animal depende funda-
mentalmente do desenvolvimento de uma res-
posta imune celular efetiva. A resposta imune
humoral tambm importante, pois ces com
ttulos medianos de anticorpos (entre 16 e 64)
parecem estar protegidos contra a doena aguda.
Ttulos de anticorpos inferiores a 16 no prote-
gem os ces, porm interferem com o sucesso da
vacinao. A imunidade passiva declina entre a
8
a
e 14
a
semanas de vida dos lhotes, deixando-
os susceptveis infeco. Antes disso, a imuni-
dade passiva pode comprometer o sucesso da
vacinao, pela inativao do vrus vacinal pelos
anticorpos. Diferenas antignicas entre isolados
de campo e cepas vacinais tm sido implicadas
como causa de falhas vacinais. Essas falhas resul-
tam na ocorrncia de cinomose mesmo em ces
vacinados.
8.5.4 Diagnstico
A ocorrncia de leses cutneas e doena
respiratria em ces jovens, associadas ou no
com sinais neurolgicos, so sugestivos de cino-
mose. Uma linfopenia pode estar presente no he-
mograma de animais doentes.
O diagnstico laboratorial pode ser realizado
pela deteco de antgenos do CDV em esfrega-
os de clulas da conjuntiva ou de fossas nasais,
na capa ogstica e no sedimento urinrio pelas
tcnicas de IFA e IPX ou, ainda, pela deteco do
genoma viral nessas amostras por RT-PCR.
O isolamento viral no muito utiliza-
do para o diagnstico, pois o CDV necessita de
adaptao aos cultivos celulares por vrias pas-
sagens. O vrus replica em clulas primrias e
de linhagem de origem canina, como a MDCK, e
de fures (ferrets). Outras clulas susceptveis in-
cluem a linhagem Vero e broblastos de embrio
de galinha.
Paramyxoviridae 677
Partculas virais podem ser detectadas nas
fezes por microscopia eletrnica. O diagnstico
post-mortem pode incluir as tcnicas descritas aci-
ma, para a deteco de antgenos virais nos teci-
dos, e ainda a histopatologia.
O diagnstico sorolgico em um nico teste
no possui signicado clnico. Este apenas ter
importncia se realizado em amostras pareadas
de soro. Kits de ELISA, para deteco de IgM, tm
sido utilizados em clnicas, e o resultado positivo
indicativo de infeco presente ou recente.
A vacinao com cepas atenuadas do CDV,
em formulaes mono ou polivalentes, a estra-
tgia mais utilizada no combate a cinomose. Em
geral, as vacinas inativadas no induzem res-
posta satisfatria; porm novos testes realizados
com adjuvantes tm surtido resultados promis-
sores. Vacinas vivas, contendo o vrus atenuado
do sarampo, so utilizadas com relativo sucesso
em pases da Europa. Essas vacinas no sofrem
a interferncia da imunidade passiva. Vacinas
com vrus vivo modicado e vacinas recombi-
nantes, utilizando um poxvrus avirio como
vetor do DNA complementar (cDNA) dos genes
das protenas H e F do CDV, esto disponveis
comercialmente (Figura 26.5). Recomenda-se a
primovacinao aos 60 dias de idade, trs refor-
os mensais e revacinao anual. Para lhotes
oriundos de mes sabidamente no-imunizadas
e tambm em situaes de risco (canis, colnias,
pet shops), pode-se antecipar a primovacinao. O
H
H
F
F
Genes da
protenas
H e F
Sntese
de cDNA
cDNA
Vrus da cinomose (CDV) Poxvrus do canrio
3
Multiplicao
Imunizao
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
|
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Figura 26.5. Vacina recombinante contra o vrus da cinomose (CDV). Os genes das glicoprotenas H e F so
sintetizados como cDNA e inseridos no genoma do poxvrus do canrio. Este vrus vetor amplificado em cultivo
celular e, ento, utilizado para imunizar os ces, nos quais expressa as protenas heterlogas. Os ces imunizados
desenvolvem resposta imunolgica contra as protenas do vrus vetor e contra as glicoprotenas H e F, conferindo
proteocontra oCDV.
678 Captulo 26
sucesso das vacinas disponveis depende da va-
riabilidade antignica existente entre isolados do
CDV, alm da qualidade dos imungenos e da
resposta dos indivduos vacinados.
A induo de encefalite aps a vacinao
com as vacinas vivas disponveis est associada
com a imunossupresso. Os sinais neurolgicos
geralmente ocorrem entre 7 e 14 dias aps a ad-
ministrao da vacina, porm o grau de imunos-
supresso e a presena de outras infeces podem
agravar o quadro, tornando-o sistmico. Deve-se
evitar a vacinao de fmeas lactantes em contato
com seus lhotes no-imunizados, especialmen-
te aquelas sem histrico de vacinao. Deve-se
tambm evitar o contato de lhotes com outros
ces at a segunda imunizao. Alguns estudos
tm demonstrado que as revacinaes poderiam
ser realizadas em intervalos maiores que um ano,
pois os ces vacinados apresentam ttulos dura-
douros contra o vrus homlogo.
As pessoas envolvidas nos cuidados am-
bulatoriais com animais doentes devem utilizar
medidas de proteo (luvas descartveis, esteri-
lizao e descarte de fmites, higiene pessoal e
do ambiente com desinfetantes), associadas com
o isolamento dos animais, prevenindo a dissemi-
nao da enfermidade no ambiente residencial e
nosocomial.
Diversos protocolos teraputicos, incluindo
a suplementao com vitamina B, aplicao de
corticosterides, soro hiperimune, drogas antivi-
rais e outros medicamentos tm sido utilizados
para minimizar os efeitos da infeco neurolgi-
ca. Porm, nenhum desses protocolos demons-
trou ecincia comprovada sobre o desfecho da
enfermidade. A cinomose permanece sendo uma
doena de prognstico desfavorvel, com altas
taxas de mortalidade, dependendo da cepa viral
e da idade dos ces. Muitos animais que se recu-
peram da doena aguda permanecem com seqe-
las neurolgicas graves.

8.6 Vrus da parainuenza canina tipo 2
O vrus da parainuenza canina tipo 2
(CPIV-2) um membro da famlia Paramyxoviri-
dae, subfamlia Paramyxovirinae, classicado no
gnero Rubulavirus, assim como o vrus da ca-
xumba. O CPIV-2 possui relao antignica com
o vrus dos smios tipo 5 (SV-5) e com o HPIV-2.
Em associao com outros agentes, como a Bor-
detella bronchiseptica, o adenovrus canino tipo 2
(CAV-2), o herpesvrus canino (CHV-1), o reov-
rus canino (CRV) e o Mycoplasma sp., o CPIV-2
tem sido envolvido na etiologia da doena co-
nhecida como traqueobronquite infecciosa canina ou
tosse dos canis. O CPIV-2 foi isolado pela primei-
ra vez, em 1967, nos Estados Unidos, a partir de
amostras clnicas de ces com essa doena.
8.6.1 Epidemiologia
Estima-se que 70% dos ces urbanos possu-
am anticorpos contra o CPIV-2. Esse vrus, assim
como os outros agentes da traqueobronquite in-
fecciosa canina, dissemina-se por via area e pelo
contato direto ou indireto. A transmisso ocorre
principalmente em ambientes de convvio entre
ces, com superpopulao e estresse. Reinfeces
com ou sem sinais clnicos podem ocorrer com
freqncia.
A infeco apresenta distribuio mundial.
No existem dados publicados sobre a prevaln-
cia de anticorpos ou isolamento do vrus no Bra-
sil. No entanto, doena com sinais clnicos seme-
lhantes aos da tosse dos canis so freqentes na
rotina clnica, principalmente no inverno e afe-
tando ces com idade entre seis meses e um ano.
e patologia
Aps a transmisso, o vrus replica no epi-
tlio da nasofaringe e se dissemina pelo trato
respiratrio, infectando o epitlio pseudo-estra-
ticado da traquia, onde se desencadeia um
processo inamatrio. Nesse perodo, entre um
e seis dias aps a infeco, iniciam os sinais clni-
cos. Os sinais mais freqentes incluem tosse seca
e ruidosa, engasgos, letargia, apatia, conjuntivite
e tonsilite. A recuperao geralmente ocorre en-
tre 7 e 14 dias.
Em casos mais severos, pode ocorrer hiper-
termia, apatia e perda do apetite, com pneumo-
nia e tosse produtiva, decorrentes de infeces
bacterianas secundrias. Na presena de infeco
Paramyxoviridae 679
secundria por Bordetella sp., o quadro clnico
pode persistir por at 30 dias.
A encefalite pelo CPIV-2 em caninos e ou-
tros animais, tais como ferrets, geralmente des-
considerada na prtica clnica. No entanto, exis-
tem evidncias do envolvimento deste agente em
doena com sinais neurolgicos indistinguveis
aos da cinomose.
8.6.3 Imunidade
A infeco induz a rpida produo de anti-
corpos neutralizantes e inibidores da hemagluti-
nao. Imunidade humoral de mucosas (mediada
por IgA secretria), alm da celular, so impor-
tantes para minimizar os sinais da infeco pelo
CPIV-2, protegendo contra novas exposies ao
agente.
8.6.4 Diagnstico
O diagnstico clnico baseia-se nos sinais cl-
nicos e deve ser conrmado por exames comple-
mentares, como a radiograa torcica (espessa-
mento da traquia e de brnquios), hemograma
e bioqumica srica.
O diagnstico laboratorial especco pode
ser realizado pelo isolamento do vrus a partir
de secrees de animais doentes em clulas de li-
nhagem caninas. A presena de antgenos virais
em secrees nasais pode ser evidenciada pela
tcnica de IFA. Como a traqueobronquite uma
doena multicausal, deve-se tambm investigar a
presena de outros agentes concomitantes, deter-
minando-se ainda o prognstico da doena.
O uso de antiinamatrios no-esteroidais
e xaropes auxiliam na recuperao do animal. A
administrao de antibiticos ecazes contra Bor-
detella spp., tais como sulfas e quinolonas, mini-
mizam as infeces secundrias. Outras medidas
de suporte, como alimentao adequada, repou-
so e evitar a exposio ao frio tambm so impor-
tantes na recuperao.
Vacinas vivas e inativadas contra o CPIV-2
e outros agentes da tosse dos canis so comercia-
lizadas, para aplicao intranasal e parenteral,
respectivamente. As vacinas atenuadas conferem
imunidade de mucosas, porm o co pode apre-
sentar sinais clnicos brandos da doena aps a
vacinao. A primovacinao deve ser realizada
aos 60 dias de idade, seguida por trs reforos
mensais. Uma dose anual de reforo recomen-
dada. A vacinao no previne a infeco nem
os sinais clnicos, mas a doena em animais va-
cinados geralmente mais branda. A ventilao
adequada de canis, higienizao adequada e a
preveno de superpopulao so importantes
na preveno da disseminao da infeco.
8.7 Metapneumovrus avirios
Os metapneumovrus avirios (AmPVs),
como o pneumovrus avirio (APV) e o vrus da
rinotraquete dos perus (turkey rhinotracheitis vi-
rus, TRV) esto associados com infeces agudas
do trato respiratrio superior de perus e com do-
ena respiratria e a sndrome da cabea inchada
em galinhas.
O APV, que anteriormente era classicado
no gnero Pneumovirus, foi reclassicado dentro
do gnero Metapneumovirus por apresentar o ge-
noma com oito genes organizados em uma ordem
diferente dos outros 10 gneros de pneumovrus
de mamferos. Esses vrus no apresentam ativi-
dade hemaglutinante e de neuraminidase, sendo
incapazes de aglutinar eritrcitos de mamferos e
aves. So sensveis ao ter, clorofrmio e so ina-
tivados a 56C por 30 minutos.
As glicoprotenas F e G do APV so as mais
imunognicas. A glicoprotena G a protena
mais varivel dos vrions, e estudos da sua se-
qncia em diferentes isolados evidenciam a
existncia de subgrupos distintos. As protenas
N e F so essenciais para a replicao do vrus
e so altamente conservadas entre os diferentes
isolados e entre os diferentes subgrupos de PVA.
Inicialmente, acreditava-se que havia apenas um
sorotipo de PVA, contendo dois subgrupos (A e
B) que podiam ser diferenciados pela anlise da
seqncia de nucleotdeos ou por anticorpos mo-
680 Captulo 26
noclonais. Posteriormente foram identicados
quatro subgrupos distintos (A, B, C e D), sendo
os tipos A e B os mais prevalentes. O subgrupo
C foi identicado apenas nos Estados Unidos da
Amrica; e o subgrupo D surgiu isoladamente em
um surto de rinotraquete em perus na Frana.
Os primeiros relatos da doena causada
pelo APV em produes avcolas datam do nal
dos anos 70, na frica do Sul, associados com ri-
notraquete em perus. Esse quadro, popularmen-
te conhecido na frica do Sul como Dikkop (cara
inchada), foi denominado posteriormente de sn-
drome da cabea inchada (SHS).
No incio da dcada de 1980, a ocorrncia
concomitante de um surto de doena respiratria
em perus e de SHS em galinhas de propriedades
prximas levou a suspeita de que a rinotraquete
dos perus e a SHS possuam a mesma etiologia.
O APV possui distribuio mundial e surtos e
sorologia positiva j foram relatados em vrios
pases, tanto em perus como em galinhas de corte
e poedeiras.
8.7.1 Epidemiologia
A origem do APV ainda obscura, embora
os primeiros relatos da doena na frica do Sul
sugiram que o vrus possa ser um patgeno natu-
ral de aves silvestres daquele pas.
Estudos realizados no Brasil, em 1992, indica-
ram uma prevalncia de 65-70%. Estudos poste-
riores detectaram anticorpos para o APV em fran-
gos de corte, matrizes e poedeiras nas regies Sul,
Sudeste e Nordeste, demonstrando a ampla distri-
buio da infeco no pas. O isolamento do APV
foi realizado a partir de perus e galinhas comer-
ciais com sinais respiratrios; e os isolados foram
identicados como pertencentes ao subgrupo A.
As perdas econmicas devido a SHS em
frangos de corte situam-se em torno de 1 a 3%
em condies favorveis; e de 20 a 30% quando
ocorrem complicaes respiratrias ou infeces
bacterianas secundrias.
A transmisso do APV ocorre por contato
direto e indireto entre aves, por aerossis e atra-
vs de rao, gua e cama contaminados. A trans-
misso geralmente associada ao contato ntimo
com superfcies contaminadas bem como a fato-
res ambientais favorveis. Em condies de baixa
umidade, m ventilao, calor intenso e poeira,
a disseminao da doena entre galinhas criadas
em cama rpida (cerca de 24 horas). No caso
de aves criadas em gaiolas, em boxes ou galpes
separados, a disseminao da doena pode ser
lenta (cerca de 1 a 2 semanas).
As aves mais susceptveis so os perus jo-
vens e as matrizes pesadas, principalmente na
primeira semana de produo, seguido de fran-
gos de corte e poedeiras. O curso da SHS em gali-
nhas varia de cinco a dez dias, sendo no mximo
de seis semanas, com morbidade extremamente
varivel (1% a 90%). A morbidade e mortalida-
de variam de acordo com a presena e o tipo de
agente secundrio, sistema de criao, manejo e
condies ambientais. No caso de frangos de cor-
te, dependendo do agente secundrio, a mortali-
dade pode atingir 20% do plantel. J entre matri-
zes, a mortalidade varia de 1 a 5% e se restringe
quelas que apresentam a cara inchada.
Em perus, o perodo de incubao de apro-
ximadamente trs a cinco dias. A disseminao
do APV em plantis de perus ocorre de forma r-
pida, sendo que, em 24 a 48 horas, todo o plantel
pode estar contaminado, e poucos animais so
poupados da infeco. A infeco pode durar de
sete a dez dias, observando-se um abrandamen-
to gradativo dos sinais clnicos. A rinotraquete
dos perus apresenta-se de forma aguda e muito
contagiosa. A morbidade em perus elevada, po-
dendo chegar a 100%. A mortalidade varivel,
dependendo da presena de infeces bacteria-
nas secundrias.
e patologia
O vrus replica inicialmente nas clulas epi-
teliais ciliadas que revestem a mucosa dos con-
dutos nasais, laringe e traquia. Com a infeco,
as clulas perdem a atividade ciliar. Em perus,
podem-se observar incluses citoplasmticas eo-
sinoflicas nessas clulas.
O vrus j est presente no trato respirat-
rio entre quatro e seis dias antes do aparecimen-
to dos sinais clnicos. O APV alcana o oviduto
atravs da corrente circulatria, aps a replicao
Paramyxoviridae 681
primria no trato respiratrio, e replica no epit-
lio do trato reprodutivo. Os sinais clnicos prova-
velmente so reexos dos danos provocados pela
multiplicao do vrus no epitlio ciliado, tanto
na traquia como no trato reprodutivo.
Acredita-se que a maioria das infeces seja
assintomtica ou restrita a sinais clnicos leves
(aumento de secrees e espirros devido a um
processo de hiperplasia glandular). Isto se deve
ao fato de que, em condies normais, h uma re-
posio eciente das clulas que revestem as mu-
cosas. Fatores que comprometem a habilidade de
reparao epitelial ou que contribuem para um
aumento da atividade secretria, como o estresse,
poeira, concentrao de gases ambientais, depri-
mem as defesas locais ou o sistema BALT (tecido
linfide associado aos brnquios), permitindo a
instalao de agentes bacterianos secundrios.
Isto leva a um processo inamatrio intenso,
principalmente nos condutos naso-lacrimais, nos
quais se observa secreo muco-catarral, lacrime-
jamento e blefarite. A persistncia de colonizao
bacteriana leva ao acometimento do tecido sub-
cutneo da regio submandibular do tecido s-
seo do crnio e, ao nal, afeco das meninges,
que a fase que caracteriza a SHS.
As principais alteraes histopatolgicas
demonstram inicialmente uma injria do epit-
lio respiratrio, com reduo da atividade ciliar,
e, nalmente, uma perda progressiva dos clios,
congestionamento subepitelial e hiperplasia das
clulas epiteliais. Nas clulas ciliadas, so obser-
vados corpsculos citoplasmticos acidlos.
Freqentemente so observadas celulite, perios-
tite e osteomielite dos ossos da cabea. Em mui-
tos casos, ocorrem tambm otite externa e interna
e meningite.
No crebro, observam-se gliose, hiperemia,
concentrao perivascular de leuccitos e em me-
nor grau, hemorragias. Alteraes degenerativas
podem ser observadas somente nas clulas de
Purkinje do cerebelo. Tambm so observados
hiperemia renal e glomerulonefrite. As aves in-
fectadas apresentam uma degenerao marcante
dos folculos ovarianos mais desenvolvidos e dos
vulos maduros.
Os sinais clnicos iniciais em frangos de corte
incluem corrimento nasal, tosse ou espirros dis-
cretos, tumefao periocular e reduo de apetite.
O quadro evolui para um hiperemia da conjunti-
va, com edema da glndula lacrimal. Aps 12 a 24
horas, as aves apresentam um edema subcutneo
na cabea, que se inicia ao redor dos olhos, aumen-
tando sobre toda a cabea e descendo para o tecido
submandibular e nuca. Aps 72 horas, os animais
apresentam sinais neurolgicos caracterizados por
apatia, leve torcicolo e movimentos repentinos na
cabea. Esse quadro pode se agravar durante os
dias subseqentes, podendo ocorrer diculdades
motoras.
Em matrizes, os primeiros sinais so falhas
respiratrias brandas, rinite e conjuntivite, segui-
das por incoordenao motora, torcicolo e opist-
tono, edema facial uni e bilateral atingindo toda a
cabea. Durante os primeiros estdios da doena,
as galinhas arranham a face com o p, o que leva
ao aparecimento de um prurido localizado.
A queda na produo de ovos tambm tem
sido associada com a SHS. As aves mais suscept-
veis so os perus jovens e matrizes pesadas, prin-
cipalmente na primeira semana de produo. Do
ponto de vista clnico, a doena pode se manifes-
tar sob as formas aguda e subaguda, acometendo
geralmente o trato respiratrio superior, princi-
palmente os cornetos nasais e traquia. Na forma
aguda inicial, as aves apresentam uma prostrao
profunda, aspecto comatoso ou estado de apatia
(as aves cam paradas durante 3 a 5 horas sem
ingerir alimentos ou gua), indo a bito por ina-
nio ou desidratao.
8.7.3 Imunidade
Tanto as infeces naturais como experi-
mentais induzem a formao de anticorpos, de-
tectveis aproximadamente trs semanas aps a
inoculao/infeco. Os anticorpos neutralizan-
tes alcanam seu nvel mximo em cinco a seis
semanas ps-infeco. Anticorpos so detectados
em vrias categorias de animais, sem associao
com doena clnica, reforando a hiptese de que
a maioria das infeces so subclnicas.
A exposio do trato respiratrio a patge-
nos resulta na produo de anticorpos locais das
classes IgA e IgG, que so responsveis pela neu-
tralizao do agente. Os anticorpos podem ser
682 Captulo 26
detectados a partir de cinco dias aps o apare-
cimento dos sinais clnicos, pelo uso de tcnicas
como o ELISA, SN e a imunouorescncia indi-
reta (IFI). Em infeco experimental de pintos
livres de patgenos especcos (specic pathogen
free, SPF) foi possvel detectar anticorpos a partir
do 15
o
dia ps-inoculao, e os nveis persistiram
at quatro semanas. A ativao do sistema imune
local e a produo de anticorpos circulantes so
mecanismos importantes para a proteo aps o
desao viral, mas a imunidade celular apresenta
uma importncia maior na defesa contra o APV.

8.7.4 Diagnstico
O quadro clnico pode apresentar variaes,
dependendo das condies ambientais e das in-
feces secundrias, e no existem sinais patog-
nomnicos. Portanto, necessrio que seja reali-
zado o diagnstico laboratorial.
A conrmao da infeco pelo APV depen-
de da demonstrao do vrus ou antgenos virais;
ou de anticorpos especcos no soro. Mtodos so-
rolgicos, como a SN, IFA e ELISA, so os mto-
dos de escolha para diagnstico da infeco.
Em geral, o vrus mais dicilmente isolado
de frangos do que de perus. Acredita-se que este
fato possa se dar em razo do curto tempo de re-
plicao do agente nos tecidos alvo, no estando
mais presente por ocasio do aparecimento dos
sinais clnicos. O isolamento viral raramente
bem-sucedido em aves com sinais clnicos seve-
ros, provavelmente devido a infeces secund-
rias. A replicao viral nos tecidos alvo tambm
pode no estar no pico no momento da coleta.
O isolamento pode ser realizado em cultivos
primrios de embrio de galinha, em ovos em-
brionados, em cultivos de anel de traquia (TOC)
e em linhagens celulares (principalmente Vero e
CER [chicken embryo related]). As clulas inocula-
das apresentam efeito citoptico (ECP) com for-
mao de sinccios. Nos anis de traquia, ob-
servada uma ciliostase (reduo dos movimentos
ciliares). O sucesso do isolamento viral depende
da quantidade de partculas virais viveis pre-
sentes na amostra enviada ao laboratrio e da
utilizao de tcnicas adequadas.
O uso da RT-PCR na deteco do APV em
perus e galinhas apresenta como vantagem a ca-
pacidade de detectar pequenas quantidades de
vrus, sem a necessidade de testes preliminares
ou conrmatrios. Por ser altamente especca,
a reao em cadeia da polimerase (PCR) no
afetada pela presena de outros patgenos. Essa
tcnica pode ser de suma importncia para a ca-
racterizao molecular de isolados virais e em es-
tudos epidemiolgicos. As tcnicas de RT-PCR,
nested-PCR e PCR em tempo real apresentam
uma sensibilidade pelo menos 100 vezes maior
do que o isolamento viral.
O material para o diagnstico (traquia,
pulmo, cabea e ou swab naso-traqueal) deve ser
enviado refrigerado, o mais rpido possvel para
o laboratrio, no sendo necessrio o pr-conge-
lamento.
As boas prticas de manejo e biossegurana
so fundamentais para o controle de surtos cau-
sados pelo APV, especialmente em perus. Fato-
res, como: o sistema de criao, idade das aves,
infeces bacterianas ou virais secundrias, m
ventilao, contaminao ambiental, poeira, alta
densidade populacional e oscilaes de tempe-
ratura, devem ser observados para o controle e
preveno dessas enfermidades.
Uma boa ventilao e troca de cama favore-
cem a reduo dos nveis de amnia. A amnia
pode contribuir para a replicao rpida do v-
rus, pois pode propiciar injria no epitlio ciliar,
facilitando a replicao e disseminao do vrus
para outros tecidos.
As vacinas inicialmente foram desenvolvi-
das para uso em perus, mas tambm provaram
ser teis no controle da infeco pelo APV em ga-
linhas. Os programas de vacinao tm sido roti-
neiramente utilizados em pases onde o APV est
presente em criaes de perus e galinhas. A prti-
ca de vacinao de aves comerciais tem auxiliado
na reduo das perdas econmicas por minimi-
zar a doena clnica, mortalidade e as perdas por
queda na postura.
Vacinas com o vrus atenuado ou inati-
vado quimicamente tm sido utilizadas. Vacinas
com o vrus vivo atenuado dos subtipos A e/ou
B tm sido aplicadas em perus e em galinhas, iso-
ladamente ou combinada com outras vacinas. A
Paramyxoviridae 683
recomendao de um programa de vacinao de-
pende de cada empresa e da situao particular
de cada granja. Entretanto, de modo geral, reco-
menda-se a primovacinao com vacinas vivas
atenuadas, para estimular clones de clulas de
memria, obtendo, assim, uma resposta mais efe-
tiva. A revacinao deve ser realizada com uma
vacina inativada. Embora a vacina no proteja
completamente os animais, os sinais respirat-
rios sero mais brandos em caso de infeco.
8.8 Vrus da doena de Newcastle
A doena de Newcastle (ND) uma impor-
tante doena de aves causada pelo paramixovrus
avirio sorotipo 1 (APMV-1), tambm conhecido
como vrus da doena de Newcastle (NDV). Pela
sua importncia sanitria estratgica, a ocorrn-
cia de um surto da ND pode resultar na interrup-
o da exportao regional ou nacional da carne
de frango, causando grandes perdas econmicas
para a regio ou pas afetado. Vrias espcies de
aves silvestres e domsticas podem servir de re-
servatrios do NDV e parecem se constituir em
fontes dos diferentes tipos de vrus que, freqen-
temente, so encontrados nas outras espcies.
A ND um dos principais problemas sanit-
rios da avicultura industrial. uma enfermidade
viral aguda, altamente contagiosa, que acomete
aves comerciais e outras espcies avirias, produ-
zindo sinais respiratrios freqentemente acom-
panhados de manifestaes nervosas, diarria e
edema da cabea. As manifestaes clnicas e a
mortalidade variam de acordo com a virulncia
da amostra viral envolvida.
8.8.1 O agente
O NDV pertence ao gnero Avulavirus, esp-
cie paramixovrus avirio sorotipo 1 (APMV-1).
No gnero Avulavirus, existem ainda outros oito
sorotipos virais designados de 2 a 9. Os vrions
do NDV so pleomrcos e, muitas vezes, esf-
ricos, com o dimetro de aproximadamente 180
nm. O NDV inativado aps trs horas a 56C
ou 30 minutos a 60C, e por ao de pH cido. Os
vrions so sensveis ao ter e so inativados por
desinfetantes contendo formol e/ou fenol, porm
podem sobreviver por longos perodos a tempe-
ratura ambiente, especialmente nas fezes.
A variao antignica do NDV pode ser
detectada pelos testes de HI. Uma das variaes
mais notveis tem ocorrido no vrus responsvel
pela panzootia em pombos. Este vrus, citado
como pigeon APMV-1 (PPMV-1), diferente
do vrus padro nos testes de HI, mas no difere
substancialmente dos vrus utilizados nas vaci-
nas convencionais no-protetoras. Nos ltimos
anos, as amplas variaes antignicas e genticas
do vrus evidenciaram a grande diculdade em
compreender a epidemiologia da ND.
Os isolados do NDV so classicados de
acordo com a sua patogenicidade. As amostras
velognicas apresentam alta virulncia; as amos-
tras mesognicas possuem virulncia moderada e
as lentognicas so pouco ou nada virulentas. Os
mtodos disponveis para essa classicao per-
mitem a distino entre amostras com diferena
acentuada no potencial patognico, porm podem
produzir resultados discrepantes com amostras
de virulncia semelhante. As amostras de NDV
usadas em vacinas atenuadas so lentognicas e
apresentam variaes individuais de virulncia
para o trato respiratrio da galinha.
8.8.2 Histrico e epidemiologia
Os primeiros surtos da ND ocorreram em
aves domsticas no ano de 1926, em Java, na In-
donsia, e em Newcastle-upon-Tyne na Inglater-
ra (1927). Entretanto, relatos mais antigos indi-
cam que esta doena j ocorria na Europa pelo
menos desde 1912. No Brasil, a primeira descri-
o da doena foi realizada em 1953, quando foi
realizado o isolamento da amostra M33 na cidade
de Macap, Amap. A origem do surto foi prova-
velmente a importao de carcaas congeladas de
frango dos Estados Unidos. A partir desta data, a
doena passou a ser relatada em todo o territrio
nacional, ocasionando graves perdas econmicas
para a avicultura do pas.
Desde 2002, o Ministrio da Agricultura e a
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVI-
SA) vm realizando inquritos epidemiolgicos
sistemticos em aves silvestres e migratrias, nos
684 Captulo 26
quais foram isoladas amostras altamente pato-
gnicas do NDV nas regies Norte, Nordeste e
Sul. No pantanal mato-grossense, foram isoladas
amostras patognicas de NDV de diferentes aves
silvestres, muitas delas vivendo em estrito conta-
to com aves domsticas e comerciais.
Aps cinco anos sem registros de focos, o
Brasil voltou a registrar surtos da ND em criaes
comerciais, em 2006, no Rio Grande do Sul. A
eventual ocorrncia da doena no pas acarreta a
imediata suspenso das exportaes de produtos
avcolas, com graves prejuzos para a avicultura
nacional. No Brasil, a ND controlada pela vaci-
nao, mas existem reas declaradas livres, nas
quais a vacinao no mais praticada. Surtos da
ND so noticados esporadicamente no Brasil,
principalmente em criaes domsticas de fundo
de quintal ou em galinhas criadas de forma semi-
intensiva e no comercial.
A ND endmica em muitos pases, mas
muito difcil de se avaliar a sua real prevaln-
cia no mundo. Em alguns pases onde a doena
ocorre, no h dados sobre a sua distribuio e
abrangncia, nem se ocorre somente em criaes
domsticas ou tambm em criaes comerciais.
Mesmo em aves com nalidade comercial, a esti-
mativa da distribuio geogrca do NDV torna-
se confusa devido ao uso de vacinas vivas, con-
tendo cepas virais consideradas virulentas em
outros pases. Mesmo em pases livres da doena
por muito tempo, o monitoramento sistemtico
ocasionalmente revela infeces com sinais leves,
provocadas por amostras no-virulentas, propa-
gadas presumivelmente por aves silvestres. A
forma altamente patognica da ND representa
um problema srio para a avicultura comercial,
tanto por ser considerada uma doena enzotica
em vrios pases, quanto por ser a causa de epi-
zootias freqentes na frica, sia, Amrica Cen-
tral e em regies da Amrica do Sul. Na Europa,
a ocorrncia da doena parece ser espordica, a
despeito dos programas de vacinao.
Aves domsticas e silvestres so suscept-
veis ao NDV, as galinhas (Gallus gallus) esto en-
tre as mais susceptveis e as aves aquticas esto
entre as menos suscetveis. O NDV j foi isola-
do em mais de 241 espcies, abrangendo 27 das
50 ordens de aves existentes. Algumas espcies
(psitacdeos e aves selvagens) parecem possuir o
potencial de portadoras, podendo excretar cepas
virulentas do NDV. Os mamferos podem atuar
como vetores mecnicos do vrus. Alm de poder
carrear mecanicamente o agente, o homem pode
apresentar a doena sob a forma de conjuntivite
branda.
A principal via de transmisso do vrus por
contato direto ou indireto, por aerossis ou por
transmisso area; por pessoas, equipamentos,
gua e vacinas contaminadas. O vrus excreta-
do durante a fase de incubao, na fase clnica e
na convalescena da doena e est presente no ar
expirado, nas secrees respiratrias, nas fezes,
nos ovos e em vrios tecidos das aves doentes.
e patologia
A patogenia da infeco pelo NDV pode ser
dividida de acordo com a virulncia da amostra
viral envolvida e com os sinais clnicos. Os v-
rus patognicos produzem a forma lentognica,
que se caracteriza por infeco subclnica ou si-
nais respiratrios moderados; a forma mesognica
apresenta sinais respiratrios e ocasionalmente
neurolgicos; e a forma velognica a forma mais
severa e est associada com mortalidade elevada.
Esta forma dividida em neurotrpica (sinais res-
piratrios e neurolgicos) e viscerotrpica (leses
hemorrgicas no intestino). Portanto, as cepas do
NDV que so realmente importantes do ponto de
vista clnico-patolgico e epidemiolgico so as
velognicas viscerotrpicas e/ou neurotrpicas.
A patogenia desse vrus est associada com o seu
tropismo pelos diferentes tecidos do hospedeiro
e com a virulncia da cepa.
A base molecular da virulncia do NDV
determinada principalmente pela seqncia de
aminocidos no stio de clivagem da glicoprote-
na F, e pela presena de proteases celulares ne-
cessrias para a ativao do precursor (F0) desta
protena. A protena F sintetizada como uma
precursora (F0), que clivada em F1 e F2 por pro-
teases celulares. Essa clivagem necessria para
a infectividade dos vrions e ocorre com mais e-
cincia em molculas de F0 que possuem vrios
aminocidos bsicos no stio de clivagem. Cepas
Paramyxoviridae 685
virais contendo esta caracterstica podem ter a
sua F0 clivada em uma variedade de tecidos e,
por isso, so mais virulentas. Ao contrrio, nos v-
rus lentognicos, a clivagem ocorre somente com
a protease reconhecendo uma simples arginina
(protease do tipo tripsina). Por isso os vrus len-
tognicos esto restritos a determinados tecidos
do hospedeiro, nos quais enzimas tipo tripsina
esto presentes, como no trato digestivo e respi-
ratrio. J, os vrus patognicos, podem replicar
em uma variedade de tecidos e rgos, resultan-
do em infeco sistmica.
Os sinais clnicos observados na ND no
so patognomnicos, e a infeco pode variar de
subclnica at doena com mortalidade de 100%.
Em termos gerais, a doena caracterizada por
depresso, anorexia, diarria, prostrao, edema
de cabea e barbela; sinais neurolgicos como pa-
ralisia, tremores, torcicolo e opisttono; alm de
sinais respiratrios como tosse e espirros. Aves
de postura podem apresentar reduo da produ-
o de ovos.
Os variantes virulentos do NDV podem re-
plicar em aves vacinadas, mas os sinais clnicos
so bastante reduzidos, de acordo com o nvel de
anticorpos presentes.
Da mesma forma, nenhuma leso macro ou
microscpica pode ser considerada patognom-
nica para todas as formas da ND. As carcaas de
aves que morrem em conseqncia da doena por
cepas virulentas esto geralmente desidratadas, e
as leses macroscpicas variam com o vrus. Os
vrus virulentos panzoticos da ND produzem
leses hemorrgicas no trato intestinal. Alguns
autores tm relatado leses no pr-ventrculo,
enquanto outros relatam um envolvimento mais
proeminente do duodeno, jejuno e leo.
Em casos de envolvimento respiratrio, as
leses esto geralmente presentes no trato respi-
ratrio e os achados incluem congesto e leses
hemorrgicas, alm de aerossaculite. As leses in-
amatrias mais freqentes na traquia incluem
tumefao da mucosa, hiperemia, edema e inl-
trado de linfcitos; e a sua intensidade est as-
sociada com a virulncia das amostras. As leses
microscpicas no tm signicado diagnstico.
Na maioria dos tecidos e rgos afetados, obser-
vam-se: hiperemia, necrose, inltrado celular e
edema. Leses macroscpicas no sistema nervoso
central so pouco freqentes mesmo em aves que
desenvolvem sinais neurolgicos. Quando ocor-
rem, essas alteraes so de uma encefalomielite
no-purulenta.
Surtos com amostras velognicas viscero-
trpicas iniciam com apatia, sinais respiratrios e
debilidade, nalizando com prostrao e morte.
Edema na cabea e ao redor dos olhos podem ser
observados, e a mortalidade pode atingir 100%
em aves no-vacinadas. Aves acometidas por v-
rus velognicos neutrotrpicos apresentam do-
ena respiratria severa acompanhada de sinais
neurolgicos. Dessa forma, a infeco pelo NDV
em aves domsticas varia desde inaparente at
formas mais severas, sendo as ltimas caracteri-
zadas por sinais respiratrios, digestivos e neu-
rolgicos. A produo de ovos reduz-se drastica-
mente em aves adultas, podendo estender-se por
semanas. A morbidade pode chegar a 100%, mas
a mortalidade atinge at 50% em aves adultas
e at 90% em aves jovens. Amostras de patoge-
nicidade mdia geralmente causam doena res-
piratria, com rara ocorrncia de envolvimento
neurolgico. Nesses casos, a mortalidade geral-
mente baixa, exceto em aves muito susceptveis
ou com infeces concomitantes.

8.8.4 Diagnstico
O carter estratgico do NDV, determinado
pela OIE, requer um diagnstico rpido e conclu-
sivo da enfermidade. Em casos suspeitos e visan-
do reduzir o risco de disseminao e difuso do
vrus, recomenda-se a realizao de necropsia por
um prossional no prprio local, com colheita e
remessa de material para o laboratrio ocial. O
material a ser enviado deve incluir fezes, suabes
traqueais ou cloacais e tecidos de animais necrop-
siados, devendo-se eleger aqueles com alteraes
aparentes. Esse material deve ser conservado re-
frigerado se o processamento for realizado den-
tro de 48 horas, ou congelado se a realizao dos
testes for demorar mais.
O diagnstico denitivo da infeco obtido
pelo isolamento e identicao do vrus em ovos
embrionados a partir de suabes traqueais ou clo-
acais, ou de macerados de rgos. Ovos SPF com
686 Captulo 26
embries de nove dias so inoculados com 0,1 mL
da suspenso na cavidade alantide e, aps cinco
a sete dias, o lquido colhido e testado pela tc-
nica de HA com eritrcitos de galinha. O agente
hemaglutinante detectado , ento, identicado
por HI com anti-soro especco, que ainda permi-
te diferenci-lo da inuenza aviria. Esse mtodo
demonstra a presena do agente, mas no indica
se o vrus patognico ou no.
O diagnstico completo da doena requer a
determinao da virulncia do vrus, que pode
ser obtida pelo seqenciamento de genes ou por
testes in vivo. Dentre os testes in vivo, recomenda-
se o que determina o ndice de patogenicidade
intracerebral (IPIC). Este teste se baseia na inocu-
lao do lquido alantide fresco no crebro de 10
pintinhos SPF de um dia. Cada ave examinada
a intervalos de 24 horas, durante oito dias, e clas-
sicada em diferentes graus: zero (se normal), 1
(se doente) e 2 (se morta). Os vrus mais virulen-
tos chegam CPI mxima de 2.0, enquanto os v-
rus lentognicos resultam em valores prximos
a zero.
Alm do isolamento em ovo embrionado, o
diagnstico da infeco pelo NDV pode ser rea-
lizado por RT-PCR a partir de RNA extrado das
amostras clnicas enviadas para o laboratrio.
Vrias viroses avirias devem ser conside-
radas no diagnstico diferencial: como clera,
inuenza, metaneumovrus, vrus da bronquite
infecciosa; vrus da laringotraquete aviria, en-
tre outras. Doenas de origem bacteriana a serem
consideradas incluem a micoplasmose, psitacose,
pasteurelose, entre outras.
A avicultura industrial investe considervel
esforo na preveno da ND pelo uso sistemtico
de vacinas, biosseguridade e aplicao de legis-
lao especca. Apesar disso, a doena continua
se constituindo em uma ameaa concreta para
a avicultura, pois vrias espcies animais no-
vacinadas podem servir de reservatrios para o
agente. Por isso, necessrio um monitoramen-
to sistemtico e contnuo para avaliar a condio
sanitria dos plantis avcolas. Esse tipo de mo-
nitoramento tem permitido que a ND, alm de
outras doenas, seja prontamente identicada e
controlada.
A vacinao contra a ND protege as aves das
conseqncias clnicas da doena, mas no impe-
de a replicao e excreo viral. Dessa forma, o
controle efetivo da infeco deve incluir tambm
boas prticas de manejo e medidas de biossegu-
ridade.
A ocorrncia de focos da doena exige o
isolamento completo das propriedades afetadas,
limpeza e desinfeco das instalaes, controle
de trfego humano, entre outras medidas.
Atualmente, as empresas brasileiras, na
maioria das regies, utilizam a vacinao siste-
mtica contra a ND. Os esquemas de vacinao
utilizados em reprodutoras e em aves de postu-
ra so variados e dependem de cada empresa.
Geralmente so aplicadas vacinas atenuadas na
recria, seguido de uma revacinao com uma va-
cina inativada algumas semanas antes da transfe-
rncia para a produo. Algumas empresas ainda
realizam um reforo com vacinas atenuadas du-
rante a fase de produo (40, 50 e 60 semanas).
Em relao vacinao em frangos de corte, no
existe um consenso entre as empresas avcolas.
As amostras lentognicas utilizadas na for-
mulao vacinal no Brasil so a La Sota (LS), Uls-
ter (UL) e VG-GA (VG). As amostras vacinais so
preparadas em ovos embrionados de galinhas
SPF. A aplicao das vacinas atenuadas pode ser
feita por instilao nasal ou ocular, com o aux-
lio de um conta-gotas, ou pela via oral atravs da
gua de bebida. Pintos de sete a 10 dias de idade
recebem 100 L em uma das narinas ou no olho;
ou duas gotas, uma em cada narina ou olho.
Como medida de reforo, recomenda-se revaci-
nar as aves periodicamente, com intervalos de
trs a quatro meses. A vacina produz imunidade
somente aps 21 dias, e a durao da imunidade
varia de acordo com a idade das aves e o nmero
de vacinaes.
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RHABDOVIRIDAE
Luis L. Rodriguez
1
, Paulo Michel Roehe,
Helena Batista & Gael Kurath
1
1
Seo geral da famlia e VSV (LLR); raiva (PMR e HB); rabdovrus de peixes (GK). Traduo da parte geral, VSV
e rabdovrus de peixes: Renata Dezengrini.
27
691
691
692
693
695
695
696
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699
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711
713
713
714
715
716
717
717
718
1 Introduo
2 Classicao e taxonomia
5 Rabdovrus de interesse veterinrio
5.1 Vrus da estomatite vesicular
5.1.1 Epidemiologia
5.1.3 Imunidade
5.1.4 Diagnstico
5.2 Vrus da raiva e lissavrus relacionados
5.2.1 O agente
5.2.2 Estrutura do vrion
5.2.3 Replicao viral
5.2.4 Variaes antignicas
5.2.5 Epidemiologia
5.2.7 Diagnstico
5.2.9 Tratamento
5.3 Rabdovrus de peixes
5.3.1 Histrico e classicao
5.3.2 Epidemiologia
5.3.4 Imunidade
5.3.5 Diagnstico
1 Introduo
A famlia Rhabdoviridae (ordem Mononegavi-
rales) abriga vrus que infectam uma grande va-
riedade de espcies, incluindo artrpodes, plan-
tas e vertebrados. Dentre os vrus de vertebrados,
existem rabdovrus que infectam mamferos,
aves e peixes. A famlia possui alguns vrus de
grande importncia para a sade humana e ani-
mal. O vrus da raiva (RabV) causa uma das do-
enas mais temidas e fatais de todos os tempos, e
o vrus da estomatite vesicular (VSV) est asso-
ciado com surtos de repercusso econmica im-
portante em eqinos e em animais de produo.
Os primeiros relatos da raiva ocorreram h mais
de 2.700 anos, quando j era descrita como uma
doena grave, caracterizada por hipersalivao,
alteraes no comportamento e morte inevitvel.
A raiva tem tambm um impacto importante em
medicina veterinria, tanto pela sua ocorrncia
urbana em ces, como pela sua ocorrncia em
espcies silvestres, como o mo-pelada (Procyon
cancryvorus), esquilos, candeos silvestres, mor-
cegos, mangostas (Cynictis penicillata), os quais
representam um risco iminente de infeco para
humanos. Os morcegos hematfagos, como o
Desmodus rotundus, tambm carreiam o vrus da
raiva, podendo transmiti-lo a animais domsti-
cos e, ocasionalmente, para humanos. Em certas
regies, relativamente freqente a ocorrncia
de casos espordicos ou de surtos de propores
variveis em animais de criao, principalmente
em bovinos. Outra doena relevante em medici-
na veterinria a estomatite vesicular (VS), que
afeta os bovinos, sunos e eqinos. Em bovinos
e sunos, a VS apresenta caractersticas clnicas
muito semelhantes febre aftosa (FMD). Por-
tanto, os surtos de VS resultam em signicativas
perdas econmicas conseqentes da interdio e
quarentena, at que se proceda ao diagnstico di-
ferencial para descartar a FMD.
Devido sua ampla distribuio na nature-
za e capacidade de infectar vrias espcies de
mamferos, peixes e plantas, existem muitos ra-
bdovrus com potencial patognico ainda desco-
nhecido. Alguns rabdovrus tm sido identica-
dos como patgenos emergentes em humanos e
animais, como o Australian bat lyssavirus e o vrus
Chandipura, um vrus reemergente causador de
encefalite em crianas na ndia. Outros rabdov-
rus provavelmente sero descobertos no futuro,
adicionando-se, assim, mais patgenos nesta im-
portante famlia viral.
Este captulo abordar as caractersticas ge-
rais da famlia Rhabdoviridae, a sua taxonomia,
estrutura e organizao genmica e estratgia
de replicao. Alm disso, sero abordadas com
mais detalhes as doenas por rabdovrus mais
relevantes para a medicina veterinria: a raiva, a
estomatite vesicular e as produzidas por rabdo-
vrus de peixes.
2 Classicao e taxonomia
Os rabdovrus so classicados em seis g-
neros e dois deles contm apenas vrus de plantas
(Tabela 27.1). Como os outros membros da ordem
Mononegavirales, os rabdovrus possuem como
genoma uma molcula de RNA linear de senti-
do negativo, que possui pelo menos cinco genes,
Figura 27.1. Relao filogentica entre os vrus
pertencentes aos trs gneros da famlia
associados comdoenas emmamferos.
Rhabdoviridae
Vesiculovirus
Ephemerovirus
Lyssavirus
BEFV
Chandipura
Isfahan
COCV
VSAV
IN98COE
NJ95COB
SVCV
Raiva
692 Captulo 27
na ordem 3-N-P-M-G-L-5. Cada gene anque-
ado por seqncias conservadas de iniciao e
terminao da transcrio, compostas de aproxi-
madamente 10 nucleotdeos (nt). A organizao
genmica, a estrutura e morfologia dos vrions,
juntamente com a estratgia de replicao e as re-
laes sorolgicas se constituem nas bases para
a sua classicao. A Figura 27.1 apresenta a re-
lao logentica entre os vrus dos trs gneros
que infectam mamferos. A Tabela 27.1 apresenta
a classicao taxonmica resumida da famlia.
As partculas dos rabdovrus possuem um
formato de basto (do grego, rhabdus = basto),
com dimenses entre 100 e 430 nm de extenso
por 40 a 100 nm de dimetro (Figura 27.2A, B). Os
vrions so compostos por uma estrutura helical
interna (ribonucleoprotena, RNP), que contm o
genoma. A protena do nucleocapsdeo (N), a fos-
foprotena (P) e a polimerase viral (L) envolvem
o RNA genmico e constituem o ribonucleocap-
sdeo. A protena da matriz (M) est associada
intimamente com a RNP, constituindo-se na base
estrutural que confere aos vrions o formato de
projtil. Uma membrana lipdica derivada da c-
lula hospedeira, contendo trmeros da glicopro-
tena de superfcie (G), forma o envelope viral.
O genoma dos rabdovrus consiste de uma
molcula de RNA de ta simples linear de pola-
ridade negativa, com 11.000 a 15.000 nt (Figura
27.2C). A organizao do genoma e a ordem dos
genes so muito conservadas. O genoma possui
uma pequena seqncia leader no-traduzida com
40 a 50 nt na extremidade 3, seguida por um sinal
conservado de iniciao da transcrio; e pelos
genes N, P, M, G e L. Esses genes so separados
por regies intergnicas conservadas. Prximo a
extremidade 5 existe uma seqncia trailer de 40
a 50 nt, parcialmente complementar regio 3
leader. As regies leader, trailer e as seqncias
intergnicas possuem funes importantes na re-
gulao da transcrio e replicao viral. Alguns
rabdovrus possuem genes adicionais, como al-
guns vrus de plantas, que possuem um gene ex-
tra entre os genes P e M; e alguns rabdovrus de
peixes possuem genes adicionais entre duas regi-
es do genoma, P-M e G-L. Alguns vesiculovrus
e lissavrus codicam ainda algumas protenas
no-estruturais, pequenas e bsicas, em uma se-
gunda seqncia aberta de leitura (ORF) do gene
da protena P.
Espcie/tipo Hospedeiro(s) Gnero
Doena de importncia
veterinria
Vrus da estomatite
vesicular (VSV)
Mamferos, peixes,
insetos
Estomatite vesicular, viremia
primaveril das carpas etc.
Vrus da raiva (RabV) Mamferos, insetos
Raiva, lissavrus dos morcegos
australianos.
Vrus da febre efmera
dos bovinos (BEFV)
Mamferos, insetos
Febre efmera de bovinos,
doena do rio Adelaide.
Vrus da necrose
hematopoitica
(IHNV)
Peixes
Vrus da necrose
amarela da alface
Plantas Nenhuma.
Vrus do tomate ano
Vesiculovirus
Lyssavirus
Ephemerovirus
Novirhabdovirus
Cytorhabdovirus
Nucleorhabdovirus
Necrose hematopoitica,
septicemia hemorrgica.
Plantas Nenhuma.
Tabela 27.1. Classificao taxonmica dos membros da famlia , comespcies hospedeiras e doenas
deimportncia veterinria.
Rhabdoviridae
Rhabdoviridae 693
A infectividade dos rabdovrus razoavel-
mente estvel sob condies ambientais, espe-
cialmente sob pH alcalino. No entanto, os vrions
so termolbeis e sensveis radiao solar e ul-
travioleta (UV). Na prtica, o VSV pode ser facil-
mente inativado por desinfetantes baseados em
detergentes.
O ciclo replicativo descrito a seguir baseia-
se no vrus da estomatite vesicular (VSV), o pro-
ttipo da famlia. O ciclo inicia com a interao
da glicoprotena G do envelope viral com recep-
tores na superfcie celular (fosfatidil-serina, por
exemplo). Essa interao resulta na adsoro e
penetrao dos vrions por endocitose (Figura
27.3). No interior da vescula endoctica, sob pH
cido, a protena G promove a fuso do envelope
viral com a membrana do endossomo. O comple-
xo ribonucleoprotena (RNA+N+L+P) liberado
no citoplasma e a ta simples de RNA negativo
transcrita pelo complexo polimerase que est
presente no vrion. As protenas do nucleocaps-
deo devem estar intimamente associadas com o
RNA para que ocorra a transcrio e a replicao.
O complexo polimerase ativo requer a associao
de trs unidades da fosfoprotena (P) com uma
unidade da protena L (large).
N P M G L 3 5
leader
trailer
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
kb
Glicoprotena (G)
matriz (M)
Protena
Fosfoprotena (P)
Ribonucleocapsdeo
(RNP)
Polimerase (L)
RNA
Nucleoprotena (N)
A
B
C
Figura 27.2. Estrutura dos vrions e do genoma dos membros da famlia . A) Fotografia de microscopia
eletrnica do vrus da estomatite vesicular, VSV; B) Estrutura de uma partcula vrica e seus componentes; C)
Estruturae organizaodogenoma.
Rhabdoviridae
Fonte:- A) Dr David Sander, ICTVdB.
694 Captulo 27
A transcrio do genoma dos rabdovrus
regulada por um mecanismo simples e eciente,
em que o nvel de expresso de cada gene deter-
minado pela sua distncia em relao ao promo-
tor nico, localizado prximo extremidade 3.
Esse mecanismo denominado de atenuao da
transcrio, e o gradiente de produo de trans-
critos ser na ordem N>P>M>G>L. Portanto, a
protena do nucleocapsdeo (N) a protena mais
abundante e a polimerase (L) a menos abundan-
te. Cada RNA mensageiro (mRNA) monocistr-
nico (codica apenas uma protena) e possui uma
estrutura cap na extremidade 5 e uma cauda poli-
A na extremidade 3. O gene P de alguns vrus
uma exceo, pois codica duas protenas bsicas
pequenas em uma segunda ORF (Figura 27.3).
Seqncias conservadas das regies intergnicas
contm sinais para a terminao da transcrio,
adio de cap e poliadenilao. Uma seqncia de
40 a 50 nt na extremidade 3 transcrita, mas no
recebe cap ou poli-A. Esse transcrito, denomina-
do RNA leader, produzido em grande quantida-
de e transportado para o ncleo da clula, onde
inibe a transcrio dos genes celulares.
O transcrito leader seguido pelo mRNA da
protena N, que recebe o cap pelo complexo poli-
merase do vrion. Na extremidade nal do gene
N e de todos os cinco genes, encontra-se a seqn-
Ncleo
Citoplasma
N
P
M
G
L
2
1
3
5
6
7 8
9
11
4
10
Figura 27.3. Ilustrao esquemtica do ciclo replicativo do vrus da estomatite vesicular (VSV), prottipo da famlia
. Aps a ligao aos receptores especficos (1), os vrions so internalizados por endocitose (2), que
seguida de fuso do envelope com a membrana endossomal, sob pH baixo, e da liberao do nucleocapsdeo no
citosol (3). Segue-se a transcrio individual dos genes (4) e traduo (5), resultando na produo das protenas virais
N, P, M, G e L (6). A polimerase viral (L), com a participao da protena P, realiza a sntese da molcula de RNA
complementar (7) e, a seguir, a sntese de cpias genmicas (8), que permanecem associadas com as protenas que
compem a ribonucleoprotena (RNP). Os nucleocapsdeos (RNA+protenas) recm-formados so transportados at
a membrana plasmtica (9), onde interagemcoma protena Me comas caudas da glicoprotena G(10), resultando no
brotamentoe egressodaprognie viral (11).
Rhabdoviridae
Rhabdoviridae 695
cia 5-AGUUUUUUUCAUA -3, que sinaliza o
nal da transcrio e a poliadenilao do mRNA.
A cauda poli-A , provavelmente, sintetizada
pela polimerase viral, que utiliza a seqncia de
sete bases Uracil como molde para iniciar a poli-
merizao da seqncia de Adeninas. A sntese
dos quatro mRNA subseqentes ocorre de forma
idntica.
A traduo dos mRNA est associada com o
processo de transcrio, e a quantidade de cada
protena reete a abundncia relativa de cada
mRNA. Aps a traduo das protenas virais pe-
los ribossomos, o complexo polimerase realiza a
transio do modo de transcrio para o modo
de replicao do genoma, sintetizando cadeias
completas do RNA com sentido positivo. Essas
cpias de RNA conjugam-se com a protena N
e servem de molde para a sntese de cpias de
RNA de sentido genmico.
Os mecanismos envolvidos na troca da
transcrio para a replicao no esto completa-
mente elucidados, mas a quantidade de protena
N parece desempenhar uma funo importante.
Aps a sntese de cpias negativas do RNA, es-
sas podem servir para transcrio e replicao ou
podem, ainda, ser encapsidadas nas partculas
virais, pela interao da protena N com a pro-
tena da matriz (M). O brotamento na membrana
plasmtica mediado pela interao da M com a
glicoprotena G (gG). A gG sintetizada no ret-
culo endoplasmtico, transportada pelo comple-
xo de Golgi e inserida na membrana plasmtica
na forma de trmeros. Aps a insero, esses tr-
meros interagem com os ribonucleocapsdeos re-
cm-formados para formar vrions maduros, que
brotam da superfcie celular adquirindo o enve-
lope lipoprotico. A Figura 3 apresenta de forma
esquemtica e simplicada o ciclo replicativo do
VSV.
In vitro, o VSV replica em uma variedade
de clulas primrias e de linhagem de vrias es-
pcies animais, incluindo invertebrados e ver-
tebrados. A maioria das linhagens celulares de
mamferos suporta a replicao do VSV, mas a
susceptibilidade varia amplamente entre diferen-
tes linhagens.
Em geral, as clulas BHK-21 so utilizadas
para se obter altos ttulos virais, enquanto as clu-
las Vero so utilizadas para isolamento do vrus.
Clulas de origem aviria, como clulas de em-
brio de galinha, tambm so susceptveis e pro-
duzem altos ttulos do VSV. Este vrus tambm
replica em cultivos de clulas de peixes e rpteis.
Da mesma forma, o vrus capaz de replicar em
vrias linhagens celulares derivadas de insetos,
como do Aedes aegypti. Em geral, a replicao na
maioria das clulas de insetos no-citoltica,
contrastando com a replicao rpida e altamente
ltica observada em clulas de mamferos.

5 Rabdovrus de interesse veterinrio
Este captulo descreve em maiores detalhes
trs grupos de rabdovrus que so relevantes para
a sade animal: o vrus da estomatite vesicular
(VSV), o vrus da raiva e lissavrus relacionados,
alm dos rabdovrus que infectam peixes.
5.1 Vrus da estomatite vesicular
A estomatite vesicular (VS) uma enfer-
midade caracterizada pelo desenvolvimento
de leses vesiculares na boca, lngua, tetos e na
banda coronria dos cascos de bovinos, eqinos
e sunos. O vrus da estomatite vesicular (VSV)
encontra-se amplamente distribudo nas Amri-
cas. Em bovinos e sunos, a doena clinicamente
indistinguvel da febre aftosa, uma das doenas
animais de maior importncia econmica. Por
isso, os surtos de VS resultam em perdas vulto-
sas, principalmente pelas quarentenas exigidas
at que se realize o diagnstico laboratorial e se
descarte a febre aftosa.
As primeiras descries de doena vesicu-
lar em eqinos (provavelmente a VS) ocorreram
no sculo XIX, no sudeste dos EUA e na Amri-
ca Central. Em 1862, foi relatada a ocorrncia de
uma doena vesicular e febril em eqinos do exr-
cito americano durante a guerra civil. A primeira
grande epizootia de VS, descrita em detalhes nos
EUA, ocorreu em 1916, acometendo um grande
nmero de eqinos, mulas e bovinos. Epizootias
de VS continuaram a ocorrer no Sudoeste dos
EUA, com intervalos de aproximadamente 10
anos. Porm o agente etiolgico foi descrito pela
696 Captulo 27
primeira vez em Indiana, em 1926, recebendo o
nome de vrus da estomatite vesicular de Indiana
(VSIV). No ano seguinte, um agente sorologica-
mente relacionado ao VSIV foi isolado de bovi-
nos em Nova Jersey, sendo denominado vrus da
estomatite vesicular de Nova Jersey (VSNJV). Es-
tudos subseqentes demonstraram que esses v-
rus so sorologicamente distintos, sendo, assim,
classicados em sorotipos separados.

5.1.1 Epidemiologia
Distribuio geogrca
O VSIV e o VSNJV so endmicos do Nor-
te e Oeste da Amrica do Sul (Bolvia, Colmbia,
Equador, Peru e Venezuela), na Amrica Central
at o Sul do Mxico, com surtos descritos nessas
regies praticamente a cada ano. A maioria dos
surtos (80%) causada pelo VSNJV, mas o VSIV
circula nessas reas e, ocasionalmente, os dois so-
rotipos podem ser encontrados simultaneamen-
te. No Norte do Mxico e Sul dos EUA, a ocor-
rncia da VS espordica, com surtos descritos
no sudoeste americano a intervalos de oito a 10
anos, com durao de um a dois anos. No Brasil,
esses dois vrus no foram detectados, mas surtos
de estomatite vesicular tm sido descritos e so
causados por vrus relacionados sorologicamen-
te ao VSIV. Esses vrus foram classicados como
Indiana 2 (VSIV-2), com o prottipo vrus Cocal
(COCV); e Indiana 3 (VSIV-3), que possui como
prottipo a cepa Alagoas (VSAV). A maioria dos
casos no Brasil causada pelo VSIV-3, enquanto
o VSIV-2 ocorre apenas esporadicamente, e mais
ao Sul do Pas. O VSIV-2 tem sido descrito oca-
sionalmente na Argentina, onde o ltimo surto
foi relatado em 1986. A Figura 27.4 apresenta a
relao logentica entre diferentes isolados e
tipos do VSV obtidos de diferentes localizaes
geogrcas.
Espectro de hospedeiros e ciclo
natural
Como outros vesiculovrus, o VSV pode
infectar vrias espcies de hospedeiros, incluin-
do insetos, pssaros e mamferos. Existem evi-
dncias sorolgicas da infeco de mamferos
silvestres, como os ratos-de-algodo (Sigmodon
ssp), ratos-de-arroz (Oryzomis ssp) e camundon-
gos-de-campo (Peromyscus ssp e Reithrodontomys
ssp); alm de mamferos como morcegos (vrias
espcies), macacos (Alloata palliatta); veados-da
cauda-branca (Odocoileus virginianus) e sunos
Raiva
Piry PMG
NJ89GAS
NJ95NME
NJ88CRB
IN3 ALAGOAS
IN3 MINAS GERAIS
IN3 ESPINOSA
IN3 ANEGRAS
IN2 MARAB
IN194GUB
IN 85CLB
IN198COE
IN-1
IN2 COCAL
IN2 MAIPU
IN2 SALTO
IN2 RANCHARIA
In2 PARAN
IN2 SCAT970
IN2 SCAT969
V
S
I
V
-
3
V
S
I
V
-
2
V
S
I
V
V
S
N
J
V
100 substituies
Figura 27.4. Relao filogentica entre diferentes
isolados e tipos do VSV obtidos de diferentes locais nas
Amricas.
Rhabdoviridae 697
selvagens (Sus scrofa). A infeco de animais sil-
vestres parece ser assintomtica, no entanto, le-
ses vesiculares pequenas tm sido descritas em
sunos selvagens. Em contraste, animais doms-
ticos, como os bovinos (Bos taurus e Bos indicus),
eqdeos (cavalos, mulas e burros), sunos, oca-
sionalmente cameldeos (Lama glama), ovinos e
caprinos infectados, freqentemente apresentam
sinais clnicos. A ocorrncia de doena vesicular
em eqinos um importante achado para a sua
diferenciao de febre aftosa.
Existem evidncias consistentes de que o
VSV um arbovrus, ou seja, que transmitido
por insetos. Vrias espcies de insetos podem ser
infectados pelos VSVs, e essa infeco tem sido
detectada especialmente durante os surtos. Trs
espcies de insetos: as moscas-de-areia (Lutzomyia
ssp), as moscas-pretas (Simulium sp) e os perni-
longos (Culicoides sp) so considerados vetores
biolgicos do vrus, pois so capazes de replicar
e transmitir o VSV a espcies susceptveis, tais
como: camundongos, sunos, bovinos e eqinos.
No entanto, ao contrrio dos outros arbovrus, o
VSV parece no produzir viremia em seus hospe-
deiros naturais (sunos, bovinos, cavalos, veados
e sunos selvagens) aps infeco experimental.
Recentemente foi demonstrado que pode ocorrer
transmisso do VSV entre moscas infectadas e
no-infectadas ao se alimentarem em um mesmo
animal no-virmico. Esse mecanismo poderia
explicar a transmisso do VSV durante os surtos,
mesmo na ausncia de hospedeiros mamferos
virmicos. Uma ilustrao simplicada da hist-
ria natural do VSV com os provveis hospedeiros
naturais e acidentais est apresentada na Figura
27.5.
Ocorrncia em reas endmicas
Em reas endmicas, localizadas em regi-
es tropicais e subtropicais das Amricas, os in-
tervalos entre os surtos so inferiores a um ano.
Bovinos, sunos, eqinos (sem viremia)
Hospedeiros terminais?
Espcies naturalmente infectadas
Cervdeos
Sunos silvestres
Pssaros
Lagartos
Roedores
Morcegos
Hospedeiros naturais?
?
?
?
Figura 27.5. Provvel ciclonatural dovrus daestomatite vesicular (VSV).
698 Captulo 27
Vrios estudos realizados em reas endmicas
da Costa Rica demonstram que o pico dos sinais
clnicos ocorre nas estaes chuvosas ou secas,
dependendo da zona ecolgica. Os casos clni-
cos ocorreram com maior freqncia em vacas
em lactao, causados pelo VSNJV (90%) e pelo
VSIV (10%). A maioria dos animais adultos, prin-
cipalmente aqueles que desenvolveram a doen-
a clnica, apresentou ttulos altos de anticorpos
neutralizantes contra o VSNJV (93%) e contra o
VSIV (25%). No foram detectadas evidncias de
mutaes que alterassem o perl antignico da
glicoprotena viral, embora alguns animais afeta-
dos possussem altos ttulos de anticorpos neu-
tralizantes contra o vrus homlogo previamente
aos sinais clnicos.
Nessas reas endmicas, muitos animais
tornam-se soropositivos durante os perodos de
atividade viral sem manifestarem sinais clnicos
da doena. Por isso, acredita-se que a circulao
do vrus nessas reas pode ocorrer na completa
ausncia de sinais clnicos nos animais de cria-
o. Animais silvestres, como veados, primatas,
sunos, morcegos e pssaros residentes nessas
reas, freqentemente possuem anticorpos neu-
tralizantes contra o VSV, porm o papel desses
animais no ciclo natural do vrus ainda no foi
esclarecido.
Uma endemia da infeco pelo VSV ocorre
na ilha inabitada de Ossabaw, na costa da Ge-
rgia, USA. Nessa ilha no existem bovinos ou
eqinos, mas uma grande populao de sunos
silvestres, que possui anticorpos contra o VSV e
que, ocasionalmente, apresenta leses vesiculares
tpicas de VS. Estudos entomolgicos demonstra-
ram que moscas-da-areia que habitam essa rea
carreiam o mesmo VSNJV que infecta os sunos
silvestres. Alm disso, a poca de soroconverso
desses animais ao vrus geralmente coincide com
os picos populacionais desses insetos.
Ocorrncia em reas no-endmicas
Em reas no-endmicas, surtos da doena
ocorrem em ciclos de um a dois anos com inter-
valos de oito a dez anos. A ocorrncia no-end-
mica da VS mais bem caracterizada acontece no
Oeste dos EUA, com grandes epizootias a cada
10 anos. Destacam-se as de 1916, 1925, 1937, 1945,
1956, 1965, 1972, 1982, 1995 e 2004, algumas des-
sas se estendendo por at dois anos. Os surtos t-
picos iniciam no Sudoeste dos EUA, nos estados
do Texas, Arizona ou Novo Mxico na primavera
(abril a maio), progredindo na direo norte, se-
guindo rios e vales, atingindo estados do Noroes-
te, como Utah, Colorado, Wyoming, Nebraska e
Montana no vero (agosto) e desaparecendo com
as primeiras geadas (outubro a novembro). Esse
padro de ocorrncia, aliado presena do vrus
em insetos hematfagos, como as moscas-pretas
(Simulium sp) e pernilongos (Culicoides sp), suge-
re que as picadas de insetos so a principal forma
de transmisso.
No entanto, em 1982, um surto de grandes
propores, no Oeste dos EUA, persistiu durante
os meses de inverno at 1983. Esse surto foi as-
sociado com a movimentao de animais infec-
tados para leiles, demonstrando a necessidade
de estabelecimento de quarentenas em eventos
futuros. A exemplo do restante das Amricas, a
maioria dos surtos nos EUA tem sido associada
com o VSNJV. No entanto, o VSIV ressurgiu, em
1997, aps 30 anos de aparente ausncia.
Epidemiologia molecular
Os surtos de VS em reas endmicas so es-
tacionais e ocorrem virtualmente todos os anos.
A anlise logentica dos vrus associados com
esses eventos demonstrou que vrias linhagens
virais causam surtos simultaneamente, em dife-
rentes regies endmicas. Ao contrrio, as epi-
zootias em reas no-endmicas so causadas
geralmente por uma nica linhagem viral, com
pouca ou nenhuma variao gentica ao longo
do surto, e cada surto , geralmente, causado
por uma linhagem diferente. Esses padres de
ocorrncia sugerem que os surtos em reas no-
endmicas resultam da introduo de linhagens
virais nicas a partir de reas endmicas, que se
disseminam durante o surto e se tornam poste-
riormente extintas.
O VSV muito varivel e a sua diversidade
gentica pode ser observada entre os isolados de
Rhabdoviridae 699
campo em toda a sua distribuio geogrca. O
gene mais conservado o da protena do nucleo-
capsdeo (N), enquanto o mais divergente o da
fosfoprotena (P), com 40 e 70% de divergncia
de nucleotdeos entre sorotipos, respectivamen-
te. A evoluo do VSV na natureza parece ser re-
lacionada com a sua localizao geogrca, pois
diferentes grupos genticos do vrus esto asso-
ciados com diferentes regies. Existem evidn-
cias de que fatores ecolgicos presentes nesses
locais inuenciam a evoluo do vrus. Em reas
endmicas, algumas linhagens do VSV parecem
ser mantidas por longos perodos de tempo em
zonas ecolgicas especcas. Apesar da presena
de altos ttulos de anticorpos neutralizantes nas
populaes que vivem em reas endmicas, alte-
raes antignicas relevantes (antigenic drift) no
tm sido relatadas para o VSV.
Em animais de criao, a maioria das infec-
es naturais pelo VSV parecem ser assintom-
ticas, pois grande parte dos animais apresenta
soroconverso sem manifestar sinais de doena.
Estudos epidemiolgicos tm demonstrado que
o estado siolgico (ex. gestao, lactao, ida-
de) pode inuenciar o desenvolvimento de sinais
clnicos. Nesse caso, os fatores do hospedeiro
provavelmente determinariam as conseqncias
clnicas da infeco. A transmisso pela picada
de insetos parece resultar em doena mais grave
quando comparada com a transmisso iatrog-
nica. As glndulas salivares dos insetos contm
substncias que regulam negativamente a res-
posta imune do hospedeiro, principalmente a
resposta inata. Alm disso, extratos de glndulas
salivares de insetos potencializam a multiplica-
o viral em cultivos celulares e em camundon-
gos inoculados.
A VS em bovinos, eqinos e sunos carac-
terizada por leses vesiculares na boca (lngua,
lbios, gengivas), nos tetos e epitlio da banda
coronria dos cascos, que surgem dois a quatro
dias aps a inoculao do vrus. Os bovinos e
eqinos raramente apresentam leses em mais
de um local, enquanto os sunos freqentemente
desenvolvem vesculas em vrios stios. Depres-
so, febre, laminite e salivao excessiva so fre-
qentemente observadas antes da formao das
vesculas. Em vacas leiteiras, a produo de leite
pode reduzir signicativamente ou at mesmo
cessar. Em gado de corte com leses graves na
boca, a perda de peso pode atingir 140 quilos. A
mastite uma conseqncia comum da infeco,
devido reteno de leite (pela dor durante a or-
denha) e por infeco bacteriana secundria. Na
maioria dos casos, h remisso das leses dentro
de sete a dez dias.
Durante um surto ocorrido no estado do Co-
lorado, EUA, em 1982, foram estudados 13 reba-
nhos leiteiros, nos quais foram afetados 378 de
um total de 2.400 animais. As leses foram assim
distribudas: somente leses orais (263 animais ou
69,3%); leses somente nos tetos (87 animais ou
23%); leses orais e nos tetos (22 animais ou 5,8%)
e leses apenas nos cascos (7 animais; 1,9%).
Em humanos, a infeco pelo VSV seme-
lhante gripe, com um perodo de incubao de
24 a 48 horas. Na maioria dos casos, h letargia,
mialgia, cefalia, fotofobia e sintomas de resfria-
do. A recuperao clnica ocorre dentro de uma a
duas semanas. Em reas endmicas, uma parcela
da populao rural pode apresentar anticorpos
contra o vrus sem manifestar sinais clnicos com-
patveis com a doena.
Alguns estudos tm identicado genes virais
determinantes de virulncia in vitro e in vivo. Por
exemplo, a protena M parece modular a resposta
imune inata em clulas infectadas e tem sido as-
sociada com o aumento da virulncia de isolados
em camundongos de laboratrio. Os sorotipos
VSNJV e VSIV apresentam diferenas importan-
tes de virulncia; o tipo Indiana produz doena
mais grave e se dissemina com maior rapidez por
contato entre sunos, e a gG parece ser um impor-
tante determinante da virulncia.
5.1.3 Imunidade
Trs principais componentes da resposta
imune atuam na proteo contra o VSV: a imu-
nidade no-especca ou inata (interferon e xi-
do ntrico, por exemplo), a imunidade humoral
(anticorpos) e a imunidade celular (linfcitos ci-
totxicos). O interferon parece desempenhar um
700 Captulo 27
papel importante na sobrevivncia de camun-
dongos inoculados com o VSV. Aliado ao fato de
que a protena de matriz inibe a ao do inter-
feron, esses dados sugerem que essa substncia
represente um importante mecanismo de defesa
contra a infeco viral. Anticorpos neutralizantes
contra a glicoprotena do VSV so produzidos ra-
pidamente e em altos ttulos aps a infeco na-
tural ou experimental e, provavelmente, desem-
penhem um papel importante na proteo contra
o VSV. O mecanismo exato da proteo conferida
pelos anticorpos no est completamente eluci-
dado, pois complexos de vrus e anticorpos man-
tm a capacidade de ligao clula-alvo, porm
no so infecciosos. A maioria dos bovinos, eqi-
nos e sunos de regies endmicas possui anticor-
pos neutralizantes anti-VSV. No entanto, parece
que a presena de anticorpos neutralizantes no
suciente para prevenir a doena clnica. A repli-
cao viral, que ocorre predominantemente nos
epitlios, poderia ser uma explicao para esse
fato.
Experimentos em bovinos e sunos tm de-
monstrado a proliferao de clulas mononucle-
ares do sangue perifrico em resposta a antgenos
do VSV. Essa resposta pode ser detectada trs se-
manas aps a inoculao em sunos ou ps-vaci-
nao em bovinos; e pode durar at seis meses.
No entanto, o papel da resposta imune celular
na proteo contra o VSV questionvel, pois os
animais de laboratrio, desprovidos de resposta
citotxica direta ou indireta, mas capazes de mon-
tar resposta humoral, sobrevivem infeco.

5.1.4 Diagnstico
O diagnstico diferencial extremamente
importante, principalmente para distinguir a VS
da febre aftosa. Os mtodos de diagnstico utili-
zados incluem o isolamento viral, a deteco de
antgenos por ELISA, a xao do complemento
e a imunouorescncia (IFA). Alm desses, a de-
teco de anticorpos por soroneutralizao (SN)
e determinao de IgM por ELISA so tambm
utilizados. A deteco de IgM em nveis altos in-
dica infeco recente. Outros mtodos de detec-
o viral incluem a RT-PCR (transcrio reversa
e reao da polimerase em cadeia), alm do RT-
PCR em tempo real. Amostras de epitlio e ui-
do vesicular so as indicadas para o diagnstico.
Alternativamente, quando as leses vesiculares
esto ulceradas ou erosivas, pode-se coletar sua-
bes. O meio de transporte deve conter pH neutro,
enviando-se as amostras em gelo, evitando-se
congel-las.

Em rebanhos ou reas de ocorrncia da VS, a
interdio e quarentena devem ser estabelecidas
para evitar a disseminao da infeco. Nos reba-
nhos atingidos, as medidas prolticas incluem o
controle de insetos, limpeza e desinfeco dos re-
cipientes de alimentos e gua, equipamentos de
ordenha e utenslios que podem veicular o vrus
entre os animais. Como a escaricao da pele
parece ter inuncia na penetrao do vrus, pas-
tagens altas e feno grosseiro devem ser evitados.
Vrias vacinas inativadas, contendo os dois
sorotipos (NJ e IN1), tm sido utilizadas na Am-
rica Central e do Sul. Apesar da eccia dessas
vacinas no ter sido testada, as vacinas bivalen-
tes, contendo adjuvante oleoso, aplicadas a cada
seis meses, tm reduzido signicativamente a
incidncia da doena. Outros imungenos, como
vacinas de subunidade e vacinas com o vrus vac-
cinia como vetor da glicoprotena G, tm apresen-
tado sucesso limitado em triagens laboratoriais,
porm no tm sido testadas a campo.
5.2 Vrus da raiva e lissavrus
relacionados
A raiva, palavra derivada do snscrito, que
signica fazer violncia, uma das doenas
mais documentadas na histria. A doena j era
reconhecida h pelo menos 4.000 anos, e muitos
dos primeiros registros relacionavam a infeco a
mitos e crenas religiosas. Na obra Ilada, Home-
ro referiu-se provavelmente raiva quando men-
cionou que Sirius, a estrela mais brilhante do co
da constelao de Orion, exercia uma inuncia
maligna sobre a sade das pessoas. Demcrito re-
gistrou pela primeira vez a raiva canina, cerca de
500 anos a.C. Aristteles mencionou a loucura
dos ces, mas acreditava que a enfermidade no
Rhabdoviridae 701
fosse transmitida ao homem. A infecciosidade da
saliva de ces raivosos foi documentada pelo es-
critor romano Cardanus. Este e outros escritores
romanos descreveram o material infeccioso pre-
sente na saliva como um veneno, cuja palavra
correspondente em latim vrus; porm, o con-
ceito contemporneo do termo vrus vai muito
alm do sentido em que foi utilizado naqueles
tempos. Somente no sculo 19 foi demonstrado
que a raiva era uma doena contagiosa, quando
Zinke (1804) provou que a saliva de um co infec-
tado, colocada sobre uma ferida aberta de um co
normal, era capaz de transmitir a doena.
As descobertas de Louis Pasteur represen-
taram um marco importante em vrios aspectos
da microbiologia, especialmente para o estudo da
raiva. Entre 1881 e 1885 ele desenvolveu o mto-
do de passagens do vrus da raiva em coelhos,
originando o que foi denominado vrus xo,
ou seja, uma amostra que, quando inoculada,
apresentava um perodo de incubao xo (7-8
dias) e causava morte dos coelhos ao 11-12 dia.
Essa amostra foi a base para que Pasteur e seus
colaboradores desenvolvessem a primeira vacina
contra a raiva. Para tanto, buscando inativar o
agente pelo calor brando, Pasteur mantinha me-
dulas de coelhos dessecando em estufa a 37C.
Aps 9 a 10 dias de incubao, a patogenicidade
do agente era reduzida.
Pasteur elaborou, ento, um esquema de va-
cinao, no qual o co a ser vacinado era inocu-
lado com suspenses de tecido gradativamente
menos dessecadas. A srie de injees iniciava
com suspenses de medulas dessecadas por 9-
10 dias e, assim, progressivamente com material
dessecado por 8, 7, 6, 5, 4, 3 e 2 dias. Esse proce-
dimento foi, em 1885, aplicado no menino Joseph
Meister, que sobreviveu a uma agresso de um
co raivoso (o menino apresentava mordidas em
vrias partes do corpo, inclusive na cabea). Os
procedimentos criados por Pasteur foram adota-
dos por muitos anos e, apesar das inmeras mo-
dicaes ao longo dos anos, serviram de base
para muitos processos de atenuao e vacinao
ainda hoje amplamente utilizados.
Em 1903, Adelchi Negri descreveu os cor-
psculos de incluso intracitoplasmticos carac-
tersticos em neurnios, os quais eram quase sem-
pre detectados em animais infectados pelo vrus
da raiva. Na verdade, o dr. Negri acreditava que
as incluses fossem o agente causador da raiva,
que ele imaginava tratar-se de um protozorio.
Ele descreveu o achado de incluses redondas ou
ovais, que denominou Negri body, ou corpscu-
los de Negri, com tamanho variando entre 0.25 a
27 m, encontradas freqentemente nas clulas
piramidais dos cornos de Amon e nas clulas de
Purkinje do cerebelo, podendo ser encontradas
em clulas da medula e outros gnglios nervosos.
As incluses podem ser visualizadas por colora-
es de Mann, Giemsa ou pelo mtodo de Seller,
onde aparecem com uma colorao carmim ou
magenta, contendo em seu interior grnulos mais
escuros, basoflicos. A identicao desses cor-
psculos foi, por muitos anos, at o advento da
imunouorescncia, a principal ferramenta utili-
zada no diagnstico rpido da raiva. A partir dos
anos 1960, a imunouorescncia direta tornou-se,
em funo de sua grande sensibilidade e especi-
cidade, o principal mtodo de diagnstico rpido
de raiva, assim permanecendo at o presente.
5.2.1 O agente
O vrus da raiva (RabV) pertence a ordem
Mononegavirales, a qual compreende todos os
vrus que possuem genoma formado por uma
nica molcula de RNA, de polaridade negativa
(ICTVdB, 2007). Dentro dessa ordem, o RabV
classicado na famlia Rhabdoviridae, no gnero
Lyssavirus (ICTVdB, 2007), juntamente com ou-
tros vrus denominados vrus relacionados
raiva, os quais apresentam semelhanas antig-
nicas com o RabV. Posteriormente, pelo uso de
mtodos de anlise logentica, o gnero Lyssa-
virus foi subdividido em seis gentipos distin-
tos, sendo o RabV classicado como gentipo 1
e prottipo do gnero. Os demais lissavrus so
classicados em outros seis gentipos distintos.
Os gentipos 5 e 6, correspondentes aos lissav-
rus de morcegos europeus, foram subdivididos
em subtipos. Alm desses, outros quatro novos
gentipos foram propostos, representados pelos
vrus Aravan, Khujand, Irkut e West Caucasian,
todos isolados de morcegos. Os membros do g-
nero Lyssavirus esto listados na Tabela 27.2. Em
702 Captulo 27
relao patogenicidade e imunogenicidade, o
gnero foi subdividido em dois logrupos: o -
logrupo I compreende todos os vrus que causam
encefalites fatais semelhantes raiva em huma-
nos; o logrupo II formado pelos vrus Mokola
e Lagos bat, que so menos patognicos para
humanos, embora o Mokola j tenha sido detec-
tado em casos de encefalite.
O RabV envelopado e, como tal, sensvel
a detergentes e solventes lipdicos. Sua resistn-
cia fora do hospedeiro baixa, e rapidamente
inativado a temperaturas altas, sendo destrudo
a 50C durante 15 minutos. sensvel ao desse-
camento, luz solar, radiao ultravioleta, hipo-
clorito de sdio, soda custica a 2%, solventes de
gorduras (ter, clorofrmio) e formalina. O vrus
se mantm estvel por longos perodos a 4C, po-
rm se conservado a -20C em tecidos mergulha-
dos em glicerina tamponada (pH 7,2-7,6), o vrus
se mantm por vrios anos. A -70C ou tempera-
turas mais baixas, o vrus se mantm vivel inde-
nidamente.
A multiplicao do RabV em cultivos celula-
res representou um grande avano nas pesquisas
e no desenvolvimento de vacinas. Uma grande
variedade de cultivos de clulas neurais e no-
neurais, incluindo pelo menos duas dezenas de
cultivos primrios e outras tantas linhagens hete-
roplides, so utilizadas. As clulas de linhagem
de rim de hamster BHK-21 (de baby hamster kid-
ney) so freqentemente utilizadas para o cultivo
do RabV com diversas nalidades, sendo usadas
inclusive para a produo de vacinas para ani-
mais. As clulas de rim de macaco-verde africano
(VERO) e as linhas de clulas diplides humanas
WI-38 e MRC-5 so usadas para produo de va-
cinas para uso humano. As clulas de linhagem
derivadas de neuroblastomas tm sido freqen-
temente utilizadas para diagnstico e isolamento
de amostras de campo. Uma linhagem de glio-
ma de rato, denominada C6, tem sido utilizada
por pesquisadores brasileiros. O RabV no causa
efeito citoptico quando cultivado em clulas in
vitro, o que torna necessrio algum tipo de teste
complementar para o acompanhamento da evo-
luo da infeco nas clulas. Isso geralmente
feito por testes que dependem de anticorpos li-
gados a substncias uorescentes ou a enzimas,
como a peroxidase.
5.2.2 Estrutura do vrion
Os vrions apresentam a forma caracterstica
da famlia, que lembra um projtil de revlver,
com cerca de 75 nm de dimetro e comprimen-
to entre 100 e 300 nm. A partcula apresenta-se
Gentipo
Gentipo 1
Nomenclatura Distribuio geogrfica
Vrus da raiva (RabV)
Lagos bat
Mokola
Arayan
Khujand
Irkut
West Caucasian
(Morcegos)
Duvenhage
Lissavrus europeu de morcegos 1 (EBL) 1)
Mundial
frica
frica
frica
Europa
Europa
Austrlia
Gentipo 2
Gentipo 3
Gentipo 4
Gentipo 5
Gentipo 6
Gentipo 7
Novos gentipos
propostos
Lissavrus europeu de morcegos 2 (EBL) 2)
Lissavrus australiano de morcegos (ABL)
Tabela 27.2. Membros do gnero classificao genotpica e distribuio geogrfica. Lyssavirus:
sia Central
Rhabdoviridae 703
como um denso cilindro formado pelo genoma
disposto em formato de mola e envolto em uma
protena denominada nucleoprotena (N). Este
conjunto forma, junto com molculas de outras
trs protenas estruturais (P, M e L), o nucleocap-
sdeo, que apresenta simetria helicoidal. O nucle-
ocapsdeo, por sua vez, envolto em um envelo-
pe, que deriva das membranas celulares. Nesse
envelope, esto inseridos trmeros de molculas
da glicoprotena G, que atravessa o envelope e
projeta suas espculas para a parte externa do v-
rion.
O genoma viral uma cadeia de RNA de
ta simples, com um tamanho aproximado de 12
kb e com uma massa molecular de 4,6 x 10
6
kDa.
O genoma codica cinco protenas, na seguinte
ordem: a nucleoprotena (N), a fosfoprotena (P,
previamente denominada M1), a protena da ma-
triz (M, previamente denominada M2), a glico-
protena (G) e a RNA polimerase dependente de
RNA (L). O gene conta ainda com duas regies
intergnicas no-codicantes, situadas entre os
genes que codicam M e G e entre os genes que
codicam G e L. Esta ltima foi previamente cha-
ma da pseudogene, mas trata-se de uma regio
no-codicante, indicativa de relaes evolutivas
com outros vrus de genoma de RNA no-seg-
mentado de polaridade negativa, como os mem-
bros da famlia Paramyxoviridae.
A glicoprotena G (525 aminocidos, 65-70
kDa) responsvel pela adsoro do vrus c-
lula hospedeira e pela fuso do envelope viral
membrana citoplasmtica, alm de participar do
processo de brotamento de novos vrions. Alm
disso, a gG a maior responsvel pela induo
de anticorpos neutralizantes, principalmente por
sua poro externa do envelope, denominada
domnio antignico ou ectodomnio. A gG tam-
bm capaz de estimular, em conjunto com as
protenas N e P, clulas T auxiliares e citotxicas,
gerando uma resposta imune celular. Alguns s-
tios de G so relacionados com a patogenicidade
de amostras de vrus. A protena N (450 amino-
cidos, 58-62 kDa) tambm capaz de induzir
anticorpos neutralizantes, apresentando ainda
eptopos importantes para o reconhecimento de
linfcitos T. A protena N a mais conservada
dentre as protenas dos lissavrus, est intima-
mente associada ao RNA viral, protegendo-o da
ao de ribonucleases. A N desempenha outras
atividades importantes: fundamental na regu-
lao da transcrio do RNA viral, participando
ativamente na encapsidao de novas molculas
de RNA genmico sintetizadas e no transporte
axoplsmico intraneuronal.
A protena L (2128 aminocidos, 190 KDa),
uma subunidade da RNA polimerase viral, que
complementada com P e N para formar o com-
plexo que transcreve o genoma. Alm dessa ati-
vidade, a L detm ainda vrias outras atividades
enzimticas, como a formao do cap, metilao,
poliadenilao e atividade de protena quinase,
alm de estar envolvida na inicializao da cadeia
de RNA. A protena L ativada pela interao
com P (298 aminocidos, 35-40 KDa). Esta, por
sua vez, a menos conservada entre os lissavrus.
A protena P liga-se dinena intracitoplasmtica
e est envolvida no transporte axonal do vrus.
A protena M (203 aminocidos, 22-25 KDa), por
sua vez, preenche o espao entre o ribonucleo-
capsdeo e o envelope, e promove a montagem
das partculas, aproximando membranas, RNP e
G, exercendo um papel ativo no brotamento dos
novos vrions.
5.2.3 Replicao viral
A adsoro do vrus clula hospedeira
mediada pelos trmeros da gG, que interagem
com os receptores celulares e promovem a fuso
e internalizao dos vrions. No descrito um
receptor especco para o RabV e, possivelmente,
diferentes receptores so utilizados em diferentes
clulas para ocorrer a penetrao do vrus. Alguns
estudos evidenciaram a adsoro aos receptores
de acetilcolina; outros observaram que oligossa-
cardeos e lipoprotenas, como o cido silico de
gangliosdeos, podem tambm ter participao na
adsoro. As molculas de adeso neurais (neural
cell adhesion molecules ou NCAM), assim como a
protena denominada receptor de neurotronas
p75 (p75NTR) foram tambm apontadas como
possveis receptores para o RabV. Aps a adsor-
o clula hospedeira, o vrion penetra na clula
por fagocitose, sendo englobado por uma vescu-
la formada pela membrana celular. Essas vescu-
las so ricas em uma protena denominada clatri-
na. Eventualmente, a vescula contendo o vrion
704 Captulo 27
funde-se com lisossomos, liberando a RNP no ci-
toplasma celular e permitindo que seja iniciado o
processo de transcrio e replicao viral.
Uma vez no interior da clula, o genoma
de polaridade negativa inicialmente transcrito
e ocorre a produo de protenas. Para tanto, a
RNA polimerase viral transcreve o genoma em
um RNA lder e cinco mRNAs, todos os cinco
com cap e poli-adenilados, tal como os mRNA
celulares. A transcrio diminui sua ecincia em
cerca de 30% nas junes dos genes N-NS, NS-
M e M-G, resultando em um efeito cumulativo
na expresso gnica, ou seja, a expresso mais
eciente na extremidade 3 do genoma. Como
descrito anteriormente, esse processo denomi-
nado atenuao da transcrio. Os mensageiros
so traduzidos nas protenas N, P, M, G e L em
ribossomos livres no citoplasma. A protena G,
que requer glicosilao, recebe carboidratos no
retculo endoplasmtico rugoso e transportada
via complexo de Golgi para a membrana citopls-
mtiica. A replicao do genoma viral ocorre so-
mente aps a traduo dos mRNAs. A proporo
entre a quantidade de RNA e da protena N no
interior do citoplasma regula o processo de troca
do processo de transcrio para replicao. O pri-
meiro passo na replicao a sntese de cpias de
polaridade positiva (ou antigenmica) de todo o
genoma viral. Para que estas sejam geradas, os si-
nais de transcrio representados por cdons de
parada e continuao de leitura so ignorados;
a RNA polimerase reconhece a extremidade 3 e
sintetiza uma cpia complementar com a exten-
so do genoma. Essas cpias positivas serviro
de molde para a sntese de novos genomas (de
polaridade negativa) que iro fazer parte dos no-
vos vrions.
Durante a montagem, um complexo forma-
do pelas protenas N, P e L promove a encapsida-
o dos novos genomas. A protena M envolve a
RNP; esse complexo vai para uma rea da mem-
brana citoplasmtica (ou vesculas membranosas
internas) e M inicia o enovelamento da part-
cula, conferindo-lhe o formato de mola, que
caracteriza a disposio helicoidal da RNP. A se-
guir, as partculas ligam-se membrana celular
em regies onde foram inseridos trmeros da gG,
originando o envelope viral. Esse processo no
produz lise das clulas infectadas; em cultivos
in vitro, as clulas infectadas podem permanecer
por longos perodos viveis e liberando novos v-
rions por brotamento.
5.2.4 Variaes antignicas
O RabV tem sido considerado como um
vrus bastante estvel. Algumas das amostras
de vrus vacinais ainda hoje utilizadas so deri-
vadas do vrus isolado por Pasteur no nal do
sculo XIX. Uma amostra do RabV de Pasteur
foi submetida a 3.080 passagens em coelhos at
1953, e foram evidenciadas poucas alteraes em
sua patogenicidade. No obstante, essa estabili-
dade no absoluta. Os mtodos ento dispon-
veis baseados essencialmente na inoculao de
animais de experimentao eram muito pouco
sensveis para a deteco de variaes mais sutis.
Apesar disso, j na dcada de 1950, os estudos
de Fuenzalida e Palcios (1955) apontavam para
diferenas antignicas signicativas entre amos-
tras do RabV. Nos anos 1980, com a aplicao de
anticorpos monoclonais (AcMs) para o estudo do
RabV, as variaes antignicas tornaram-se mais
evidentes. Esses estudos revelaram que amos-
tras de vrus originrias de diferentes espcies
hospedeiras naturais apresentavam variantes
com caractersticas antignicas particulares, su-
gerindo a ocorrncia de adaptaes de amostras
do vrus a um determinado hospedeiro. Essas va-
riantes so bastante estveis, pois a passagem de
amostras em um hospedeiro terminal no modi-
ca suas caractersticas antignicas (por exemplo,
amostras de RabV isoladas de bovino geralmente
apresentam perl de amostras isoladas em mor-
cegos hematfagos).
A caracterizao antignica de amostras do
RabV realizada por testes de imunouorescn-
cia indireta, nos quais a reatividade dessas amos-
tras (multiplicadas em camundongos ou cultivos
celulares) determinada frente a painis de AcMs
contra antgenos da protena N. No Brasil, dois
painis de AcMs tm sido utilizados. Um deles
constitudo por oito AcMs preparados contra di-
versas amostras de RabV, fornecido pelo Center
for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta,
USA, e preestabelecido pela OPAS para o estu-
Rhabdoviridae 705
do de amostras isoladas nas Amricas. Com esse
painel, foram identicadas, no Brasil, as varian-
tes 2 (principalmente em ces, com perl tpico
de amostras de raiva urbana), 3 (identicada em
morcegos Desmodus rotundus), 4 (de morcegos in-
setvoros Tadarida brasiliensis), 5 (de morcegos he-
matfagos da Venezuela, isolada de uma raposa
ou cachorro-do-mato Cerdocyon thous no Brasil)
e 6 (isolada de um morcego insetvoro Lasiurus
cinereus), alm de algumas amostras com pers
atpicos que no puderam ser enquadradas nes-
sa classicao. O outro painel composto por
14 AcMs anti-N preparados contra antgenos de
diferentes lissavrus (Labos bat, Mokola, Duve-
nhage e Danish bat), por King (1991), no Central
Veterinary Laboratory (hoje denominado Central
Veterinary Agency), Weybridge, Gr-Bretanha. O
mesmo foi ampliado pela incluso de outros dois
AcMs preparados no Brasil contra antgenos da
amostra CVS de RabV. Quatro AcMs desse pai-
nel permitiram a diferenciao entre variantes de
morcegos hematfagos, morcegos no-hematfa-
gos, ces, e um outro grupo incluindo uma amos-
tra de co, um isolado de um caso humano e uma
amostra padro do RabV, denominada PV.
Estudos sobre variantes antignicas tm sido
complementados por anlises genmicas, possi-
bilitando a identicao de variantes genotpicas
do RabV. Esses estudos tm conduzido a uma
profunda reavaliao do conhecimento a respei-
to da epidemiologia da infeco e da distribuio
do vrus na natureza.
5.2.5 Epidemiologia
O RabV est presente em todos os conti-
nentes, com exceo da Austrlia e Antrtica.
Alguns pases (Inglaterra, Irlanda, Japo e pases
escandinavos) obtiveram sucesso na erradicao
da doena. J os lissavrus de outros gentipos,
apresentam distribuio geogrca bem mais li-
mitada (Tabela 27.2). At o presente, nas Amri-
cas, todas as amostras do gnero Lyssavirus isola-
das pertencem ao gentipo 1, que compreende a
totalidade das amostras clssicas do vrus.
O hospedeiro natural ou reservatrio natural
a espcie na qual o vrus capaz de se perpetu-
ar sem a necessidade da sua reintroduo a partir
de outras espcies. Os hospedeiros naturais so
os principais vetores da infeco, sendo capazes
de transmitir o vrus entre indivduos da mesma
espcie e tambm a outras espcies envolvidas.
Essas, quando eventualmente infectadas, geral-
mente so hospedeiros nais ou terminais
da infeco, pois o ciclo terminado por ocasio
da morte do hospedeiro, usualmente sem haver
chance para nova transmisso.
Ciclos da raiva
Na natureza, o RabV mantido por ciclos
ocasionalmente inter-relacionados, denominados
ciclos urbano e silvestre, areo e rural. Ciclo ur-
bano refere-se raiva em ces e gatos doms-
ticos; ciclo areo refere-se raiva em morcegos,
sendo os demais ciclos denominados ciclos ter-
restres. Ciclo rural refere-se raiva dos herb-
voros, que envolve principalmente os bovinos e
eqinos, e na qual o principal vetor o morcego
hematfago. O termo silvestre refere-se raiva
associada a espcies silvestres, e pode englobar o
ciclo areo. O ciclo urbano tem sido controlado
por meio de vacinao de animais de companhia
de vrias regies do Brasil. Porm os ciclos silves-
tre e rural ocorrem em diversas regies. No ciclo
silvestre, o vrus pode utilizar diferentes espcies
como reservatrio, que podem variar em funo
da fauna da regio geogrca considerada. As-
sim, na Europa, o principal reservatrio natural
do vrus em seu ciclo silvestre a raposa-verme-
lha (Vulpes vulpes); na Amrica do Norte, so as
raposas-vermelhas, os gambs (Mephitis mephitis)
e guaxinins (Procyon lotor), que so tambm hos-
pedeiros naturais do vrus. Na Amrica Latina,
os morcegos hematfagos Desmodus rotundus so
os principais hospedeiros silvestres do vrus (Ta-
bela 27.3). Em funo de seus hbitos alimenta-
res, os morcegos hematfagos so os principais
transmissores da infeco a bovinos. No obstan-
te, na indisponibilidade de bovinos para sua ali-
mentao, os morcegos D. rotundus podem atacar
outras espcies na busca de alimento, inclusive
humanos. Em um episdio, morcegos hemat-
fagos foram responsveis por uma epidemia de
raiva humana, entre pessoas com o costume de
dormir ao ar livre em redes, tornando-se presas
706 Captulo 27
fceis para morcegos hematfagos. As duas ou-
tras espcies de morcegos hematfagos conheci-
das, Diphylla ecaudata e Diaemus youngi, alimen-
tam-se geralmente de sangue de aves, embora D.
ecaudata j tenha sido observado alimentando-se
de sangue humano. Ambas as espcies podem ser
contaminadas pelo RabV, mas a sua participao
na manuteno da infeco no ciclo silvestre da
raiva no signicativa.
A epidemiologia da raiva vem sendo exami-
nada, e animais soropositivos de vrias espcies,
sem a presena de sinais clnicos, tm sido iden-
ticados. Esses estudos tm includo mangostas,
morcegos hematfagos e insetvoros, guaxinins,
gambs, raposas, hienas, chacais e ces selvagens
e domsticos na Etipia.
Slvio Torres e Queiroz de Lima (1936) e Pa-
wan (1936) j haviam registrado a possibilidade
de morcegos hematfagos tornarem-se portado-
res da infeco; porm, em funo dos mtodos
disponveis poca, as evidncias apresentadas
deixaram margem a dvidas. No obstante, mais
recentemente, na Etipia, isolou-se repetidamen-
te vrus infeccioso de ces assintomticos, assim
como na Nigria, adicionando ainda mais evidn-
cias possibilidade de ocorrncia de infeces
no-fatais. O RNA viral foi detectado em hienas
na frica, sugerindo a ocorrncia de amostras de
baixa patogenicidade nesta espcie. Assim, ape-
sar de ainda no estar completamente esclareci-
da a interao do vrus com seus hospedeiros,
em algumas espcies animais, o vrus capaz de
perpetuar-se, seja por causar infeces no-fatais,
seja por manter-se no hospedeiro tempo sucien-
te para permitir que o animal infectado transmita
a infeco a outros hospedeiros em sua comuni-
dade, antes de sua morte.
A maioria das infeces pelo vrus da raiva
ocorre por transmisso percutnea, atravs da
mordedura de animais infectados. A transmis-
so por via area pode ocorrer raramente, mas
no tem signicncia epidemiolgica para o ciclo
da infeco. O contato com ferimentos abertos e
membranas mucosas pode, ocasionalmente, le-
var transmisso do vrus, assim como procedi-
mentos mdicos, como transplantes de crneas e
outros rgos (transmisso iatrognica). Foram
relatados casos de raiva humana na Europa e
EUA, onde a infeco ocorreu pelo transplante
de rgos slidos (rins, pulmes, fgado e pn-
creas) provenientes de doadores com encefalite
de origem desconhecida. Esse fato salienta a im-
portncia da incluso de testes especcos para o
diagnstico de raiva em potenciais doadores de
rgos, particularmente se apresentaram sinais
de comprometimento neurolgico.
5.2.5.1 Situao da raiva no Brasil
Raiva urbana
A raiva, no Brasil, apresenta-se em nveis
distintos nas diferentes regies do pas. Na re-
gio Sul, a raiva urbana tem sido controlada. Os
ltimos casos em humanos nos estados do Rio
Grande do Sul e Santa Catarina ocorreram em
1981. No Paran, o ltimo caso humano foi re-
gistrado em 1987. Porm, casos de raiva urbana
associados com outras fontes de transmisso tm
ocorrido na regio Sul ocasionalmente. Em 2001,
no Rio Grande do Sul, um felino foi infectado por
uma variante de origem de morcegos no-hema-
tfagos. Em 2007, um caso de raiva foi relatado
em um co infectado com uma variante freqen-
temente detectada em morcegos insetvoros. No
obstante, apesar desses episdios isolados de
contaminao com amostras originrias de ou-
tros hospedeiros naturais, as variantes do RabV
que tem como hospedeiro natural o co, no tm
sido detectadas em populaes caninas na regio
Sul.
Tabela 27.3. Principais reservatrios da raiva silvestre e
distribuio geogrfica.
Regio Reservatrios
Raposa vermelha
( ) Vulpes vulpes
Europa
Coiote ( ), texugo
( ), guaxinim (
), gamb ( )
Canis latrans
Meles meles Procyon
lotor. Mephitis mephitis
Estados Unidos
Morcego hematfago (
), raposa (
), jaritatacas ( sp ),
guaxinins ( ),
sagis ( sp.), diversas
espcies de morcegos no-hemat-
fagos e candeos selvagens
Desmodus
rotundus Dusicyon
vetulus Conepatus .
Procyon cancrivorous
Calithrix
Amrica Latina
Rhabdoviridae 707
As demais regies do pas ainda apresentam
casos de raiva urbana, porm o nmero est em
declnio. Ocorreu um decrscimo nos casos noti-
cados de raiva entre caninos e felinos no Brasil
entre 1997-2006 (Tabela 27.4). At 2003, os ces
eram os principais vetores da raiva para humanos,
porm, a partir deste ano, os casos em humanos
causados por ces foram suplantados pelas in-
feces transmitidas por morcegos (Tabela 27.5).
Observa-se no perodo uma signicativa reduo
dos casos de raiva urbana provocados por ces e
gatos. At 2003, os ces foram responsveis pela
transmisso de 119 (84%) de 141 casos humanos.
Em 2004 e 2005, os casos noticados de raiva hu-
mana transmitida por morcegos hematfagos
apresentaram um incremento importante em de-
corrncia de surtos ocorridos na regio Amaz-
nica, e esses morcegos tornaram-se os principais
transmissores da infeco a humanos. Como con-
seqncia, em 2005, observou-se o maior nmero
de casos de raiva humana registrados no decnio.
Dos 80 casos noticados no trinio 2004-2006,
morcegos hematfagos foram implicados em 66
(82,5%) ao passo que ces estiveram envolvidos
somente em 12 episdios (15%).
1997
Tabela 27.4. Casos notificados de raiva em animais no Brasil no decnio 1997-2006 (no computados os registros de
raiva bovina)
1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006
Caninos 945 1746 970 761 657 617 289 104 93 97
Gatos 65 165 93 69 27 67 21 10 10 7
Morcegos
no-hemat.
0 0 0 20 27 2 8 30 136 25
Morcegos
hematfagos
0 0 4 8 72 12 11 19 60 50
Morcegos
no-ident.
0 0 6 2 2 55 94 38 0 0
Animais
Silvestres
36 36 37 61 144 89 155 124 251 208
Tabela27.5. Casos deraiva emhumanos e espciedeanimal transmissor noBrasil (1997-2006)
Bovino
Co
Morcegos no-
hematfagos
Gato
Morcegos espcie
indeterminada
Guaxinim
( sp.) Procyon
1997
-
17
3
1
1998
-
19
2
1999
-
21
-
2000
-
24
1
2001
-
18
1
2003
-
14
-
2002
-
6
-
2004
1
5
1
2005
-
1
-
2006
1
6
-
TOTAL
2
131
8
6
1
Espcie
transmissora
Morcegos
hematfagos
- - - - - 3 3 22 42 2 72
- - - - - - - - - - -
- 4 2 - - - - - - -
- - - - - - - - -
Macaco - 3 - 1 2 - - - 1 - 7
708 Captulo 27
Raiva em morcegos e animais
silvestres terrestres
A noticao dos casos de raiva em mor-
cegos aumentou signicativamente nos ltimos
anos, no perodo de 1997-2006 (Tabelas 27.4 e
27.5). Aumentaram ainda os registros de casos
em animais silvestres terrestres nesse perodo.
Particularmente preocupantes so os registros de
casos em morcegos no-hematfagos, pois sua
adaptao ao ambiente urbano pode dar margem
a infeces humanas. Apesar disso, at o presente
ainda no foi registrado no Brasil nenhum caso
de raiva humana transmitida por morcegos no-
hematfagos (Tabela 27.5).
Raiva dos herbvoros
Alm dos problemas causados sade p-
blica, a raiva traz srios prejuzos econmicos
pecuria nacional, e tem sido responsvel, nos
ltimos dez anos, por mais de 23.000 casos noti-
cados em herbvoros. Salienta-se que a subnoti-
cao de casos de raiva em herbvoros uma re-
alidade, de forma que praticamente impossvel
determinar o nmero preciso de perdas associa-
das doena. Os casos noticados de raiva dos
herbvoros no Brasil no decnio 1997-2006, repor-
tados aos rgos ociais, so apresentados na Ta-
bela 27.6. Na regio Sudeste, ocorreu um aumen-
to nos casos de raiva noticados em herbvoros,
provavelmente em funo de uma maior eccia
na noticao. Na regio Nordeste, os casos em
ovinos e caprinos representam uma parcela sig-
nicativa dos casos de raiva em herbvoros.
e patologia
O perodo de incubao da raiva muito va-
rivel aps infeces naturais. Muitos fatores po-
dem estar associados a um perodo de incubao
mais ou menos prolongado, tais como a amostra
de vrus envolvida, o local da mordedura (quan-
to mais prximo do sistema nervoso central, mais
rpido o transporte do vrus), a carga viral inocu-
lada, a suscetibilidade da espcie exposta e imu-
nidade do animal agredido. Geralmente, o pero-
do de incubao de 14 dias a 12 semanas, porm
perodos superiores a um ano j foram relatados.
No hospedeiro infectado, o vrus pode repli-
car nas clulas musculares, prximas ao local da
inoculao, antes de invadir o sistema nervoso
central (SNC). Esta multiplicao importante
para a posterior invaso do SNC, porm, ocasio-
nalmente, pode ocorrer o transporte direto do v-
rus sem a replicao prvia no local de entrada.
O vrus pode utilizar uma combinao de siste-
mas para atingir o SNC, envolvendo o uxo axo-
plsmico retrgrado (provavelmente utilizando
o sistema motor celular envolvendo a dinena,
passagem clula-clula via junes sinpticas e
passagem direta do vrus atravs de conexes in-
tercelulares). No SNC, o vrus replica e se disse-
mina via nervos perifricos, de forma centrfuga,
para os tecidos no-neurais do organismo. An-
Tabela27.6. Casos deraiva dos herbvoros notificados noBrasil, por regio, nodecnio 1997-2006.
Norte
Nordeste
1997
68
1998
74
1999
61
2000
2676
2001
235
2003
662
2002
346
2004
185
2005
138
2006
nd*
TOTAL
4445
Regies
406 269 374 302 198 226 226 257 309 nd 2567
Nordeste
406 269 374 302 198 226 226 257 309 nd 2567
Sudeste
2335 2360 2666 2835 1324 863 1201 512 500 nd 14596
Sul
48 81 52 77 60 140 193 147 158 nd 956
Centro-Oeste
94 240 254 409 697 761 824 725 806 nd 4810
2951 3024 3407 6299 2514 2652 2790 1826 1911 961** 27374 TOTAL
nd* : no disponvel, ** total de casos registrados em 2006 (SIEPI, 2007).
Rhabdoviridae 709
tgenos podem ser detectados em praticamente
todos os tecidos de animais infectados. O vrus
replica nas glndulas salivares, e a excreo pela
saliva o principal mecanismo de disseminao e
perpetuao do mesmo na natureza, permitindo
a inoculao pela barreira cutnea e a introduo
do RabV nos tecidos do novo hospedeiro aps a
mordedura.
A apresentao clnica da raiva pode ser mui-
to varivel, pois os sinais de comprometimento
neurolgico podem se apresentar de forma dis-
tinta. As apresentaes clssicas da doena so as
formas furiosa e/ou paraltica. A forma furiosa
mais freqente em caninos, que apresentam alte-
raes de comportamento como inquietao (hi-
perexcitabilidade, agressividade), fotofobia, sali-
vao, insnia e ocasionalmente febre. Na forma
paraltica, o animal apresenta diculdade de de-
glutio, pela paralisia muscular; podendo haver
alterao do tom de voz do animal. Com o pro-
gresso da doena, os membros posteriores tam-
bm podem car paralisados. Ocorre a evoluo
do quadro em quatro a cinco dias, com desfecho
fatal. A paralisia do maxilar inferior promove a
impossibilidade de deglutio, e a salivao tpi-
ca da forma paraltica da doena. Pode-se obser-
var ainda um aumento do limiar de sensibilidade
a tranqilizantes e sedativos e, se anestesiados,
os ces podem apresentar alucinaes e convul-
ses no perodo ps-anestsico. A morte sbita
do animal tambm relatada, sem que ocorra a
manifestao de qualquer sinal clnico.
Em bovinos, a forma paraltica a apresenta-
o mais comum. A paralisia aguda, progressiva,
cida, manifestada inicialmente nos membros
posteriores, o sinal mais aparente. Podem ocor-
rer ainda sinais indicativos de comprometimento
dos nervos lombares e sacrais, como constipao,
tenesmo, paramose em machos e gotejamento
de urina. Em eqinos, relatada a leso no lo-
cal de inoculao do vrus; hiperexcitabilidade e
paralisia da faringe, esfago e dos membros pos-
teriores.
Durante vrios anos, acreditou-se que a in-
feco com o RabV em morcegos era freqente-
mente subclnica. Entretanto, na dcada de 1980,
foi evidenciado que os morcegos, assim como
outros mamferos, desenvolvem sinais clnicos
tpicos da raiva, com perodo de incubao va-
rivel, apresentando como desfecho a morte. A
constatao de morcegos soropositivos sem si-
nais clnicos aparentes sugere que deve haver ou-
tros tipos de interao vrus-hospedeiro que no
conduzam invariavelmente a morte. Entretanto,
a ocorrncia de portadores ou infeces subclni-
cas em quirpteros , ainda, questo de debate.
O perodo de incubao da raiva em morcegos
extremamente mutvel, variando de semanas
a perodos maiores que um ano. Os principais
sinais da doena em morcegos hematfagos so:
atividade alimentar diurna, hiperexcitabilidade
e agressividade, incoordenao motora, tremo-
res musculares, paralisia e morte. Nos morcegos
no-hematfagos, ocorre geralmente paralisia
sem agressividade e excitabilidade, e os espci-
mes so encontrados em locais no-habituais.
Nestas espcies, em infeces experimentais, o
perodo de incubao pode variar entre duas a
25 semanas.
O exame histopatolgico do encfalo de ani-
mais que morrem devido infeco pelo RabV
revela meningite e encefalomielite no-supurati-
va. Podem ainda ser detectados os corpsculos de
Negri, considerados patognomnicos da infeco.
As alteraes patolgicas so mais facilmente ob-
servadas quando os tecidos so colhidos aps a
morte do animal em conseqncia da infeco. Se
o animal for sacricado em estgios precoces da
enfermidade, as leses e os corpsculos de Negri
podem no ser evidentes. As seces do encfalo
mais indicadas para o exame histopatolgico in-
cluem os cornos de Amon, crtex cerebral, tronco
cerebral, cerebelo e medula espinhal.
5.2.7 Diagnstico
O diagnstico da raiva no deve ser basea-
do apenas em observaes clnicas, especialmen-
te porque outras enfermidades podem originar
sinais semelhantes. Paralelamente ao exame
clnico, fundamental a anlise da situao epi-
demiolgica, a histria da infeco na regio, a
presena de possveis vetores contaminados e a
possibilidade da introduo de animais oriundos
de reas endmicas. A associao desses dados
permitir um diagnstico presuntivo, que deve
ser conrmado por testes laboratoriais.
710 Captulo 27
Diagnstico virolgico
O tecido de eleio para o diagnstico de
raiva o encfalo dos animais suspeitos. Em
eqinos, alm do encfalo, recomenda-se enviar
ao laboratrio fragmentos de medula. As regies
do encfalo, preferencialmente submetidas para
diagnstico, incluem pores do cerebelo, cr-
tex e circunvolues do hipocampo (ou cornos
de Amon). Animais pequenos (p. ex.: morcegos,
gambs, sagis) devem ser remetidos inteiros ao
laboratrio. A cabea do animal suspeito tambm
pode ser remetida ao laboratrio. As amostras
devero ser remetidas sob refrigerao. Em locais
em que no h condies de manter o espcime
refrigerado, recomenda-se a imerso de fragmen-
tos de tecido em Lquido de Valle (glicerina 50%
tamponada com tampo fosfato: KH
2
PO4 1,80 g;
K
2
H2PO4 2,30 g; glicerina neutra, 50%; H
2
O q.s.p.
1000 mL; pH 7,4-7,8). Nesse lquido, o vrus pode
ser detectado se mantido por alguns dias.
O diagnstico de raiva na primeira metade
do sculo 20 baseou-se fundamentalmente na
pesquisa das incluses ou corpsculos de Negri
no encfalo de animais infectados. Essa prova
apresenta sensibilidade e especicidade baixas,
pois as incluses so detectadas em mdia em 60
a 70% (amplitude de 40 a 90%) dos casos positi-
vos. A variao na sensibilidade para a deteco
de incluses tambm ocorre em relao espcie,
como para os eqinos, em que a eccia da detec-
o de corpsculos de Negri menor.
Em 1958, a tcnica de imunouorescncia
direta (IFD) foi adaptada para a deteco de ant-
genos do RabV. A IFD realizada em impresses
de tecido fresco sobre lminas de microscopia e
permite a obteno do resultado em poucas ho-
ras. A IFD chega a atingir sensibilidade e especi-
cidade prximas a 100% em relao inoculao
em camundongos. Essas qualidades, aliadas
rapidez na obteno dos resultados, tornaram a
IFD a tcnica de eleio para o diagnstico rpi-
do de raiva. Para assegurar sua preciso, a IFD
acompanhada por um teste de conrmao bio-
lgica, no qual o material suspeito inoculado
por via intracerebral em camundongos lactentes.
Os camundongos inoculados desenvolvem sinais
neurolgicos e morrem entre 8 e 23 dias aps a
inoculao. A conrmao da causa mortis feita
atravs de nova IFD no tecido enceflico dos ca-
mundongos inoculados. Para reduzir a utilizao
de animais, h uma tendncia para a substituio
da inoculao de camundongos pela inoculao
em cultivos celulares. Diversas linhagens celula-
res so suscetveis ao RabV, sendo as clulas de
origem de rim de hamster (baby hamster kidney,
BHK) e clulas de linhagens de neuroblastoma
(NA ou N2A) as mais utilizadas para ns de
diagnstico.
Mtodos moleculares vm conquistando es-
pao no diagnstico e caracterizao do RabV. A
maioria deles baseia-se na transcrio reversa de
determinado segmento do genoma viral, segui-
da de amplicao pela reao da polimerase em
cadeia (RT-PCR). Os amplicons podem ter sua
especicidade conrmada com a aplicao de
sondas. Os fragmentos de DNA assim gerados
(amplicons) podem ser clivados com enzimas de
restrio, clonados ou, ainda, seqenciados para
estudos mais detalhados, como a caracterizao
genmica das amostras isoladas.
Diagnstico sorolgico
O diagnstico sorolgico, ou seja, baseado
na identicao de anticorpos especcos anti-
RabV, pode ser utilizado com vrios objetivos.
Freqentemente tem sido empregado para ava-
liar a capacidade imunognica de vacinas anti-r-
bicas, bem como para avaliar o status sorolgico
de populaes submetidas vacinao. A eleva-
o dos ttulos de anticorpos no lquido cefalor-
raquidiano considerada diagnstica em casos
suspeitos e muito utilizada para o diagnstico
intra vitam em humanos. Testes sorolgicos igual-
mente tm sido utilizados para buscar evidncias
de circulao do vrus em populaes no-vaci-
nadas. Assim, entre muitas aplicaes, os testes
sorolgicos tm tambm contribudo para que
muitos dos conceitos sobre a epidemiologia da
raiva sejam reavaliados.
A tcnica de eleio para a deteco de an-
ticorpos contra o RabV a soro-neutralizao
(SN). Nessa prova, uma quantidade determinada
de vrus homogeneizada com diluies do soro
a ser testado. Se este possuir anticorpos espec-
Rhabdoviridae 711
cos, o vrus ser neutralizado. Para evidenciar
a multiplicao viral, camundongos ou cultivos
celulares so inoculados com as misturas vrus/
diluies de soro. A SN utilizada tambm para
vericar os ttulos de anticorpos neutralizantes
em humanos submetidos vacinao pr-exposi-
o. Por comparao com um soro de referncia,
possvel determinar quantas unidades interna-
cionais (UI) de anticorpos neutralizantes uma de-
terminada amostra de soro apresenta.
Outra prova sorolgica similar bastante uti-
lizada o teste rpido de inibio de focos uo-
rescentes (RFFIT, de rapid uorescent focus inhibi-
tion test). Nessa prova, a neutralizao do vrus
pelo soro revelada pelo bloqueio da reao de
um conjugado uorescente (igual ao utilizado na
prova de IFD descrita acima).
Ensaios imunoenzimticos do tipo ELISA
tambm tem sido empregados na deteco de an-
ticorpos contra o RabV. Entretanto, esses testes
freqentemente apresentam problemas de espe-
cicidade.
Alm dos mencionados acima, uma grande
variedade de testes sorolgicos foi ou vem sen-
do avaliada para a deteco de anticorpos contra
o RabV, incluindo a contra-imunoeletroforese, a
inibio da imunoperoxidase e a citometria de
uxo. Entretanto, at o presente, nenhum deles
foi capaz de suplantar em eccia a SN, que per-
manece como teste sorolgico de eleio.
A preveno da raiva baseia-se na vacinao
de hospedeiros e no controle de reservatrios. As
principais medidas de controle do ciclo urbano
da raiva so a vacinao de caninos e felinos e a
captura e eliminao de ces errantes. O nmero
de casos de raiva canina no pas tem diminudo
signicativamente, o que aumenta a importn-
cia das aes de vigilncia epidemiolgica, a m
de prevenir a reintroduo da doena, pois estes
animais constituem uma das principais fontes de
vrus para humanos. Caso sejam identicados
novos focos, o controle desses tem sido baseado
na vacinao em massa, focal e perifocal, com
vacinas inativadas. Em municpios onde a raiva
est controlada, o servio de vigilncia deve ser
mantido, o que inclui o exame anual de casos sus-
peitos de raiva canina em um nmero equivalen-
te a 0,2% da populao canina total do municpio,
permitindo, assim, uma avaliao da manuteno
do status de rea indene.
A raiva dos herbvoros controlada pela
vacinao de animais em reas endmicas e pelo
controle das populaes de morcegos hematfa-
gos. Para a vacinao, utiliza-se vacinas inativa-
das, que representam atualmente 95% das vacinas
para bovinos comercializadas no Brasil (estimati-
va de mais de 100 milhes de doses/ano).
Para o controle das populaes de morcegos
hematfagos, so geralmente empregados mto-
dos baseados na aplicao tpica de uma pasta
contendo uma substncia anticoagulante, em
morcegos capturados e, posteriormente, libera-
dos para retornar a sua colnia. Como morcegos
tm o hbito de higienizao pela lambedura m-
tua, o anticoagulante aplicado pode levar eli-
minao de vrios indivduos da mesma colnia.
Outros mtodos incluem a aplicao de pastas
com anticoagulante em bovinos, em feridas de
mordeduras de morcegos, por via intramuscular
ou intraruminal, porm no so rotineiramente
utilizados. O controle da raiva em quirpteros
em regies sinantrpicas tem se tornado alvo da
preocupao dos rgos de vigilncia sanitria.
As estratgias propostas para o combate raiva
em quirpteros urbanos foram recentemente dis-
cutidas no II Seminrio de Manejo de Quirpte-
ros em reas Urbanas, em So Paulo. Dentre as
vrias propostas elaboradas, destacam-se as se-
guintes, que pretendem promover: a) a interao
entre rgos de vigilncia e de controle ambien-
tal; b) pesquisa em quirpteros; c) capacitao
para o trabalho com morcegos; d) formao de
uma rede de laboratrios regionais habilitados
prtica com quirpteros; e) incrementar estudos
sobre a quiropterofauna; e f) conscientizao da
populao sobre o problema.
5.2.9 Tratamento
Em humanos
O tratamento da raiva apresenta uma pecu-
liaridade: a vacinao, na maioria dos casos, no
aplicada preventivamente (com exceo de pro-
ssionais de risco) e sim terapeuticamente. Isso
712 Captulo 27
possvel em funo da lenta evoluo da infec-
o, ou seja, pelo perodo de incubao prolon-
gado, que permite que o hospedeiro desenvolva
uma resposta imune protetora quando vacinado
aps a exposio ao RabV. Conforme a gravidade
da leso e o histrico do animal agressor, diferen-
tes medidas devem ser tomadas com o intuito de
que a pessoa exposta no desenvolva a doena
(Tabela 27.7).
A Organizao Mundial de Sade recomen-
da que o tratamento mais ecaz contra a raiva
lavar e enxaguar a ferida ou ponto de contato
com bastante gua e sabo e, aps, colocar etanol,
tintura ou soluo aquosa de iodo sobre o feri-
mento. A vacina contra a raiva deve ser aplica-
da em caso de exposies de nvel 2 ou 3. Soro
anti-rbico (imunoglobulina anti-rbica) deve ser
administrado a todos aqueles que sofreram expo-
Natureza da
exposio
Sem leso, contato
indireto
Agressivo Nenhum.
Lambedura
a) sem leso cutnea
b) com pele esfolada ou
arranhada, ou com
mucosas intactas
Tabela27.7. Indicaes para otratamentoanti-rbiconohomem. Recomendaes daOrganizaoMundial daSade
No momento
da agresso
Durante um perodo de
10 dias de observao
Condio do animal agressor
Tratamento recomendado
(alm do tratamento local)
____
Agressivo Nenhum. ____
Sadio Iniciar a vacinao aos primeiros
sinais de raiva no animal.
Sinais clnicos de raiva
ou diagnstico de raiva
confirmado
Sinais clnicos
de raiva
Iniciar a vacinao imediatamente,
suspender o tratamento caso o
animal estiver sadio cinco dias aps
a exposio.
Sadio
Agressivo, fugido,
ou no se conhece
Iniciar a vacinao imediatamente. ____
Mordeduras
a) superficiais a) Sadio
Iniciar a vacinao aos primeiros
sinais de raiva no animal agressor.
Sinais clnicos de
raiva ou diagnstico
de raiva comprovado
b) Sinais clnicos de
raiva
Iniciar a vacinao imediatamente,
suspender o tratamento caso o
animal estiver sadio cinco dias aps
a exposio.
Sadio
c) Agressivo, fugiu, foi
morto ou no se
conhece
Iniciar a vacinao imediatamente. ____
A) Sadio b) graves (mltiplas ou
na face, cabea,
pescoo ou dedo)
d) Silvestre Soro, imediatamente seguido de
vacinao.
____
b) Sinais clnicos de
raiva
c) Raivoso, fugiu foi
morto ou no se
conhece
d) Silvestre
Sinais clnicos de
raiva ou diagnstico
de raiva comprovado
Soro, deve-se injetar no mnimo 40
unidades internacionais por kg de
peso corporal em dose nica.
Tambm pode ser infiltrado 5 ml de
soro no tecido afetado, seguido de
completa limpeza do ferimento.
Imediatamente iniciar a vacinao ao
primeiro sinal clnico de raiva no
animal agressor.
Soro, imediatamente seguido de
vacinao. A vacina pode ser
interrompida se o animal estiver
normal cinco dias aps a exposio.
Rhabdoviridae 713
sio de nvel 3, assim como para exposies de
nvel 2 em pacientes imunodeprimidos. O fecha-
mento da ferida (sutura) deve ser evitado, mas,
se necessrio, deve-se administrar soro anti-rbi-
co previamente, alm de tratamento para ttano
e outros antimicrobianos que possam ser neces-
srios. Em caso de exposio a animais suspeitos,
deve-se buscar imediatamente identicar, captu-
rar ou matar o animal envolvido. No caso de uma
exposio de nvel 3, o tratamento ps-exposio
deve ser iniciado imediatamente, podendo ser
interrompido se o animal for um co ou gato e
permanecer sadio aps 10 dias de observao.
Amostras de tecidos devem ser coletadas dos
animais mortos e enviados ao laboratrio compe-
tente para diagnstico.
Os gastos orados para tratamento anti-r-
bico nos pases da Amrica Latina excluindo o
Brasil foram da ordem de 11 a 22 milhes de
dlares. No Brasil, somente em 2004, foram gas-
tos cerca de 28 milhes de dlares em vacinas de
animais de estimao e humanas, soro anti-rbi-
co, diagnstico, pessoal, treinamento de pessoal e
campanhas de vacinao de ces. Nessas estima-
tivas, no foram computados os dados referentes
raiva bovina que, segundo levantamento reali-
zado em 1985, foi responsvel por perdas estima-
das em 100.000 cabeas de gado, com um custo
de 30 milhes de dlares.
Uma paciente se recuperou aps o desenvol-
vimento dos sinais clnicos de raiva em Wiscon-
sin, EUA, cerca de um ms aps ter sido mordida
por um morcego no-hematfago. No havia a
suspeita inicial de raiva, a paciente no recebeu
nenhum tipo de tratamento especco ps-expo-
sio, porm desenvolveu ttulos crescentes de
anticorpos no soro e lquido cefalorraquidiano;
em nenhum momento foi isolado vrus nem foi
possvel identicar a presena genoma viral por
mtodos moleculares. O tratamento da paciente
consistiu em terapia de suporte e medidas neu-
roprotetivas, com a induo de coma e respirao
forada. Ribavirina foi administrada por via in-
travenosa. Durante sete dias de coma induzido, a
paciente apresentou um aumento gradativo nos
ttulos de anticorpos anti-rbicos, embora sem
conrmao virolgica. Acredita-se que este seja
o sexto caso humano de recuperao da raiva
sem que o paciente tenha recebido nenhum tipo
de tratamento ps-exposio, porm desenvol-
vendo uma resposta imune especca. O prog-
nstico, neste caso, reservado, pois somente um
dos demais cinco pacientes que se recuperaram
da raiva sem tratamento ps-exposio no apre-
sentou seqelas.
Tratamento de animais suspeitos
O tratamento de animais suspeitos de raiva
contra-indicado em funo do risco que repre-
sentam para a transmisso do vrus a humanos.
Animais suspeitos de raiva devem ser isolados e
mantidos em observao em local seguro por um
perodo prolongado.
5.3 Rabdovrus de peixes
Dentre as doenas vricas mais importantes
de peixes, vrias so causadas por membros da
famlia Rhabdoviridae. A comisso de doenas de
peixes da OIE (Ofce International des pizooties)
lista trs espcies de rabdovrus de noticao
obrigatria, que exigem comunicao em 24 ho-
ras aps a conrmao do diagnstico. Essas es-
pcies incluem o vrus da necrose hematopoitica
infecciosa (IHNV), vrus da septicemia hemorr-
gica (VHSV) e vrus da viremia primaveril das
carpas (SVCV). Esses vrus causam infeces agu-
das com alta mortalidade em peixes encontrados
na natureza ou em criatrios. Outros rabdovrus
de peixes incluem o Rhabdovirus hirame (HIRRV)
e outros que tm sido isolados de infeces cr-
nicas ou assintomticas. Neste captulo, so revi-
sadas as quatro espcies de rabdovrus de peixes
mais estudadas e relevantes, ilustrando aspectos
importantes sobre os rabdovrus como patgenos
veterinrios em ecossistemas aquticos.
5.3.1 Histrico e classicao
A primeira descrio de uma doena severa,
chamada de infectious dropsy of carp, foi publicada
em 1930, porm surtos de doena semelhante ha-
viam sido descritos no incio do sculo em carpas
cultivadas em lagoas e, possivelmente, a infec-
o j ocorria em 1727. Pesquisas realizadas nos
anos 1980 demonstraram que o agente etiolgico
dessa enfermidade o SVCV. Epidemias em sal-
714 Captulo 27
mondeos, cuja etiologia atualmente atribuda
ao IHNV e VHSV, foram descritas inicialmente
entre 1940 e 1950. Porm, especula-se que epide-
mias da doena produzida por esses agentes j
ocorriam no incio do sculo. Devido contnua
ocorrncia e importncia econmica dessas epi-
demias, o SVCV, IHNV e VHSV tm sido estuda-
dos em nvel biolgico e molecular. J o HIRRV
foi descrito inicialmente em 1984, e muito pouco
se conhece sobre esse vrus. O estabelecimento
de linhagens celulares de tecidos de peixes que
amplicam ecientemente esses vrus, a partir de
1960, permitiu avanos importantes, facilitando a
pesquisa em Virologia de peixes nos ltimos 50
anos.
Taxonomicamente, os rabdovrus de peixes
so classicados em um de dois grupos antigni-
cos, baseados nas propriedades das protenas e
em anlises logenticas de seqncias de genes.
O gnero Novirhabdovirus abriga o IHNV, o VHSV
e o HIRRV, alm de outros rabdovrus de peixes
menos caracterizados. O segundo grupo inclui o
SVCV e vrios rabdovrus emergentes de peixes
que so muito relacionados aos rabdovrus de
mamferos, e pertencem ao gnero Vesiculovirus.
5.3.2 Epidemiologia
Distribuio geogrca e espectro de
hospedeiros
Como grupo, os rabdovrus de peixes pos-
suem uma ampla distribuio geogrca e uma
ampla gama de hospedeiros (Tabela 27.8). A in-
feco por esses vrus descrita na maioria dos
pases em que a criao de peixes realizada em
larga escala, incluindo a sia, Europa, Amrica
do Norte, Rssia e Austrlia. Atualmente existem
poucas evidncias da presena dos rabdovrus em
peixes nas Amricas Central e do Sul e na frica.
No entanto, o desenvolvimento das criaes de
peixes nessas regies provavelmente ser acom-
panhado do surgimento ou relato desses agentes.
Historicamente, a infeco pelo IHNV era limita-
da aos salmondeos, incluindo espcies de truta
e salmo do pacco, encontradas na costa oeste
da Amrica do Norte. Porm, esse vrus foi in-
troduzido acidentalmente no Japo nos anos 60
e na Europa nos anos 80 pelo transporte de ovas
e de alevinos infectados. Essa transferncia inter-
continental permitiu o estabelecimento da infec-
o pelo IHNV como endmica e epidmica no
Japo, na Europa e Amrica do Norte.
O VHSV foi originalmente descrito como
um patgeno de trutas arco-ris de gua fresca
(Oncorhynchus mykiss) em criaes do oeste eu-
ropeu, porm, aps os anos 1990, esse vrus tem
sido descrito em uma ampla variedade de esp-
cies de peixes marinhos nos oceanos Atlntico
Norte e Pacco Norte. Um pequeno nmero de
casos tambm tem sido descrito em criatrios de
peixes no Japo. Ao longo do sculo 20, o SVCV
foi descrito somente em peixes ciprindeos, como
carpas cultivadas (Cyprinus carpio) na Europa,
sia e em vrios outros pases da Europa Orien-
tal. Em 2002, o primeiro diagnstico conrma-
do de infeco pelo SVCV na Amrica do Norte
ocorreu em uma fazenda de peixes koi. Essa do-
ena foi descrita posteriormente em vrios esta-
dos dos EUA. O momento e a rota de introduo
do SVCV na Amrica do Norte no so conhe-
cidos, porm possvel que tenha ocorrido pelo
comrcio de peixes ornamentais. A distribuio
do HIRRV restrita ao Japo, sendo descrito em
peixes achatados, como o linguado-oliva (Parali-
chthys olivaceous) e o ayu (Plecoglossus altivelis).
IHNV Amrica do Norte,
Europa e sia
Vrios gneros da
famlia Salmonidae
Gnero Novirhabdovirus
Vrus Local Hospedeiros
VHSV Amrica do Norte,
Europa e Japo
Salmonidae
Gadidae
Clupeidae
Esocidae
Pluronectidae
(trutas)
(bacalhaus)
(arengues)
(lcios)
HIRRV Japo Plecoglossidae
Pleuronectidae
Bothidae
(ayus)
(flounders)
Vrus semelhantes aos do gnero Vesiculovirus
Vrus Local Hospedeiros
SVCV e vrus
emergentes
semelhantes
aos vesiculo-
vrus
Amrica do
Norte, Europa
e sia
Cyprinidae
Esocidae
Salmonidae
Percidae
(carpas)
(lcios)
(trutas)
(perches)
Tabela 27.8. Principais rabdovrus de peixes com a sua
distribuio geogrfica e espcies susceptveis
Rhabdoviridae 715
Ciclo natural de infeco
Os surtos de doenas pelos rabdovrus so
mais graves em peixes jovens, e a maioria das es-
pcies hospedeiras torna-se mais resistente do-
ena clnica com a idade. Porm, peixes maiores
e inclusive adultos em desova podem ser infecta-
dos e atuar como carreadores do vrus. Os rabdo-
vrus de peixes podem ser transmitidos horizon-
talmente entre peixes, pela gua contaminada; e
verticalmente, dos adultos para a prognie, com
o vrus associado s ovas. A importncia relati-
va dessas duas vias de transmisso permanece
obscura, mas acredita-se que a transmisso verti-
cal seja rara, e que a transmisso horizontal pela
gua seja a principal forma de disseminao dos
vrus.
Surtos de doena ocorrem com maior fre-
qncia em criatrios do que em peixes de vida
livre, provavelmente pela densidade elevada, o
que favorece uma maior ecincia de transmis-
so. No entanto, alguns surtos de infeco pelo
IHNV, VHSV e SVCV tm sido descritos em po-
pulaes de vida livre. Os peixes que sobrevivem
infeco podem ser carreadores do vrus por
longos perodos ou erradicar o agente do orga-
nismo. Para o VHSV, a existncia de um grande
nmero de reservatrios (peixes marinhos), tem
sido documentada, porm, at ento, no foram
descritos possveis reservatrios e vetores para
os outros rabdovrus de peixes.
A temperatura um importante fator para a
ocorrncia de surtos. Os surtos da infeco pelo
SVCV possuem sazonalidade, ocorrendo ge-
ralmente quando a temperatura da gua atinge
entre 10 e 16C na primavera, no ocorrendo em
temperaturas acima de 18C. As epidemias cau-
sadas pelo IHNV e pelo VHSV ocorrem em tem-
peraturas mais frias, entre 10 e 12C, no ocor-
rendo acima de 15C. Partculas vricas livres na
gua podem persistir viveis por dias a semanas,
com maior viabilidade sob temperaturas baixas e
alta salinidade.
Epidemiologia molecular
Variaes entre isolados dos rabdovrus de
peixes tm sido caracterizadas com base no per-
l das protenas virais, reaes sorolgicas com
anticorpos monoclonais e policlonais e por tipi-
cao gentica. A anlise logentica e tipica-
o gentica parcial das seqncias dos genes G e
N do IHNV, VHSV e SVCV permitiu a denio
de genogrupos distintos dentro de cada espcie.
Em concordncia com estudos anteriores, essas
anlises demonstram que a relao entre os isola-
dos correlacionada com a origem geogrca. O
IHNV possui trs genogrupos, cada um com uma
distribuio geogrca diferente na Costa Oeste
dos EUA. Esses genogrupos possuem, ainda, al-
guma correlao com a espcie hospedeira entre
os salmondeos. O VHSV possui trs genogrupos
principais na Europa e um quarto na Amrica do
Norte, existindo alguma correlao entre os ge-
nogrupos e a origem marinha ou de gua doce
dos seus hospedeiros. Tanto o IHNV quanto o
VHSV demonstram evidncias de evoluo viral
especca dentro da piscicultura intensiva.
A anlise de vrios isolados de SVCV permi-
tiu a formao de quatro subgrupos, e a anlise
conjunta com outros rabdovrus de peixes seme-
lhantes aos vesiculovrus demonstrou a existncia
de trs outros subgrupos, correlacionados com
a localizao geogrca e a espcie hospedeira.
Para cada uma dessas espcies de vrus, a alta re-
soluo conferida pelo seqenciamento de genes
permitiu a criao de marcadores genticos, que
podem ser utilizados para a investigao de traje-
trias migratrias, a fonte do vrus em surtos e o
seu padro de evoluo ao longo do tempo.
e patologia
As doenas causadas pelos rabdovrus de
peixes so caracterizadas por septicemia hemor-
rgica aguda, com degenerao tecidual e necro-
se em vrios rgos. O vrus penetra no peixe
pelas brnquias, pele ou cavidade oral, replica de
forma transitria nas clulas endoteliais e atinge
a circulao sangnea, disseminando-se pelo or-
ganismo. Exames histopatolgicos demonstram
leses extensivas e necrose em rgos hemato-
poiticos, incluindo os rins, o fgado, bao e, com
menor freqncia, o corao. A necrose dos rins
produz insucincia, perda da regulao osmti-
716 Captulo 27
ca e freqentemente morte. Durante a infeco, o
vrus excretado pela urina e pelo material fecal
na gua circundante. Alm disso, o VHSV pode
ser tambm excretado por lceras de pele.
Os sinais clnicos da doena aguda podem
incluir o escurecimento da pele, exoftalmia, pet-
quias na pele da base das nadadeiras, edema ab-
dominal e fezes mucides de colorao clara. Po-
rm, muitos peixes morrem sem a apresentao
de sinais externos visveis e, por isso, freqente-
mente, a primeira indicao de uma epidemia
o aumento sbito na mortalidade de peixes. Os
sinais internos incluem anemia, edema, hemor-
ragias petequiais disseminadas nos rgos, no
tecido adiposo e na musculatura. Os peixes infec-
tados podem apresentar letargia e anorexia, com-
portamento natatrio anormal e incapacidade de
manter a posio vertical do seu eixo menor. A
forma aguda da doena observada com maior
freqncia em lhotes (alevinos); os peixes maio-
res podem apresentar a infeco crnica sem si-
nais aparentes ou mortalidade. A infeco pelo
IHNV e pelo VHSV apresenta ainda uma forma
nervosa, quando a infeco atinge o encfalo e
causa um comportamento errtico hiperativo.
Em infeces experimentais, a mortalidade
inicia aproximadamente cinco a sete dias aps a
exposio gua contaminada, persistindo por
trs a quatro semanas. A ocorrncia, durao e
severidade dos surtos de doena dependem da
combinao de fatores virais, do hospedeiro e do
ambiente, incluindo a temperatura, a idade e o
tamanho dos peixes, a densidade e o nvel de es-
tresse. As infeces por rabdovrus podem pre-
dispor os peixes a infeces bacterianas secund-
rias, que podem contribuir para a morbidade e
mortalidade.
5.3.4 Imunidade
A resposta imunolgica dos peixes contra
as infeces por rabdovrus envolve mecanismos
inespeccos e, subseqentemente, a resposta
imune adaptiva, com o desenvolvimento de an-
ticorpos neutralizantes. Existem indicaes ainda
do envolvimento de resposta imune celular, no
entanto, a funo potencial de linfcitos citotxi-
cos no conhecida. Isso se deve principalmente
falta de anticorpos marcadores e linhagens ce-
lulares necessrios para a investigao da imuni-
dade celular. Aps a exposio aos rabdovrus, a
primeira linha de defesa do organismo a imu-
nidade inata, envolvendo o interferon (IFN) e ge-
nes induzidos pelo IFN, anlogos aos conhecidos
em mamferos. Sabe-se, desde os anos 1970, que a
infeco pelo VHSV em peixes estimula a sntese
de IFN, que apresenta um pico trs dias aps a
infeco, e esse IFN possui uma ampla atividade
antiviral. Os peixes possuem, ainda, outros com-
ponentes da imunidade inata, incluindo o com-
plemento, receptores toll e genes induzidos por
vrus que so especcos de peixes. Esses genes
so induzidos rapidamente aps a infeco viral
ou vacinao. A secreo mucosa de peixes pos-
sui atividade antiviral natural, que pode ser evi-
denciada previamente induo de anticorpos.
O desenvolvimento de nveis detectveis de
anticorpos sricos e de mucosas ocorre aps trs
a dez semanas, e o pico ocorre em alguns meses.
O tempo para o desenvolvimento inuenciado
pela temperatura, com o desenvolvimento mais
rpido em temperaturas mais altas. Os peixes
geralmente possuem um subtipo principal de
imunoglobulina e o soro contm mais anticorpos
ligantes do que neutralizantes. A neutralizao
viral necessita de componentes do sistema com-
plemento; anticorpos especcos para a glicopro-
tena G demonstraram ser necessrios e sucien-
tes para uma imunidade protetora.
A importncia dos anticorpos neutralizantes
para a imunidade contra os rabdovrus de peixes
tem sido demonstrada pela transferncia passiva
de soro de peixes convalescentes para peixes sus-
ceptveis e soronegativos, conferindo imunidade
frente ao desao com doses letais de vrus. Peixes
sobreviventes de epidemias de infeces por rhab-
dovrus desenvolvem imunidade protetora con-
tra a exposio subseqente, possuindo ttulos de
anticorpos especcos que declinam lentamente
com o tempo. A temperatura ambiental possui
funo importante na interao entre os rabdo-
vrus de peixes e os hospedeiros. A ocorrncia
de epidemias dessas infeces em temperaturas
baixas se deve, em parte, supresso da resposta
imune, enquanto o contrrio acontece em tempe-
raturas mais elevadas, nas quais o sistema imune
Rhabdoviridae 717
estimulado e a mesma infeco viral pode ser
controlada pelo hospedeiro.
5.3.5 Diagnstico
O diagnstico das infeces pelos rabdov-
rus de peixes deve iniciar com a coleta de amos-
tras clnicas para os exames virolgicos de rotina.
Os tecidos para a coleta dependem do tamanho
do peixe: para alevinos e peixes pequenos, coleta-
se todo o animal, enquanto para peixes adultos,
coleta-se os rins, bao e uido reprodutivo, prin-
cipalmente. Pode-se fazer um pool de amostras de
at cinco peixes ou, ainda, examinar-se amostras
individuais. Essas amostras devem ser transpor-
tadas a 4C em gelo, no-congeladas, e devem
ser processadas em 48 a 72 horas. Diluies de
homogeneizados de tecidos, smen ou uido
ovariano so inoculadas em monocamadas de
linhagens celulares susceptveis, e o vrus de-
tectado pelo efeito citoptico caracterstico aps
dois a cinco dias, podendo levar duas semanas. O
IHNV, o VHSV e o HIRRV so incubados a 15C,
e o SVCV incubado entre 22 e 25C.
O efeito citoptico caracterstico de cada
um dos vrus e resulta na formao de agregados
em forma de cachos de uva por clulas arredon-
dadas, formao de placas e, eventualmente, a
destruio da monocamada. Aps a deteco do
efeito citoptico, a identicao do agente pode
ser realizada por neutralizao com soro poli-
clonal ou monoclonal especco. Esse mtodo
convel, sensvel e preciso, porm demorado,
necessitando de duas a oito semanas para o diag-
nstico nal. Para a identicao rpida, mto-
dos alternativos, como a IFA, PCR ou RT-PCR,
tm sido utilizados. Outros mtodos de deteco
e identicao dos rhabdovrus incluem testes
sorolgicos, como ELISA, immunoblots, imuno-
histoqumica (IHQ) e RT-PCR, em tecidos inclu-
dos em parana.
Para o IHNV, VHSV e SVCV, o exame de
vrios isolados por mtodos sorolgicos tem de-
monstrado que cada espcie constituda por um
sorotipo nico, portanto, anticorpos policlonais
podem detectar todos os isolados na maioria dos
mtodos. A deteco de anticorpos especcos no
soro tambm pode ser til como um indicativo de
exposio prvia ao vrus. Tcnicas para deteco
de anticorpos no soro incluem a neutralizao vi-
ral (dependente de complemento) e ELISA.
At o presente no existe tratamento para
as infeces causadas pelos rabdovrus de pei-
xes. A preveno deve se basear na aplicao de
medidas rgidas de biossegurana nos criatrios,
evitando a introduo do agente. Essas medidas
incluem o uso de ovas ou estoques de peixes cer-
ticados como livres de patgenos, e a criao de
peixes jovens em gua livre de contaminao por
vrus, como gua de poos, gua tratada com luz
ultravioleta, clorada/desclorada ou tratada com
oznio. Os rabdovrus de peixes so inativados
por esses tratamentos e tambm por compostos
contendo iodo (iodforos) ou hipoclorito (alve-
jante). Solues de iodforos so utilizadas com
freqncia em fazendas de peixes e em incubat-
rios para desinfetar redes, equipamentos, botas,
luvas e outros. A desinfeco de ovas de peixes
com iodforos (100 mg.Lt
-1
) efetiva, inativando
aproximadamente 99,98% do IHNV. Portanto,
a desinfeco de ovas com iodo uma prtica
padro e que, se aplicada de forma apropriada,
apresenta sucesso na eliminao da transmisso
vertical em estabelecimentos de cultura de pei-
xes.
Outras prticas, tais como: evitar a mistura
de ovas de vrias fmeas durante a postura e a
distribuio de estoques de peixes em pequenas
lagoas, no mantendo todos em uma mesma la-
goa, so alternativas que evitam perdas em larga
escala devido a epidemias. A seleo de peixes
resistentes aos rabdovrus tem sido conduzida
com algum progresso, demonstrando que exis-
tem bases genticas de resistncia infeco. Fi-
nalmente, em escala global, o reconhecimento da
disseminao acidental dos rabdovrus de peixes
para outros continentes, no sculo passado, per-
mitiu a aceitao de regulamentaes internacio-
nais, requerendo a inspeo sanitria dos peixes
para prevenir o transporte de patgenos atravs
de peixes cultivados. Porm o transporte de pei-
xes ornamentais permanece sem regulamentao
e representa uma importante fonte para a disse-
minao desses vrus.
718 Captulo 27
Atualmente no existe nenhuma vacina co-
mercial para uso em larga escala na preveno da
infeco pelos rabdovrus de peixes. No entanto,
o desenvolvimento de vacinas de DNA tem se
demonstrado rpido e promissor. Vacinas tra-
dicionais atenuadas ou inativadas tm sido tes-
tadas por dcadas para esses vrus. Vacinas e-
cazes foram desenvolvidas, porm o seu uso foi
limitado pelo custo, eccia inconsistente ou pela
incerteza quanto segurana.
Com a aplicao da biologia molecular, va-
cinas de subunidades proticas e de peptdeos
foram desenvolvidas, mas a eccia foi incon-
sistente, impedindo a comercializao em larga
escala. Em 1995, a primeira descrio de uma
vacina de DNA, expressando a glicoprotena G
do IHNV, abriu novas perspectivas para a vaci-
nologia de vrus de peixes. Desde ento, vacinas
de DNA contra o IHNV, o VHSV e o HIRRV tm
demonstrado ser excepcionalmente ecazes, ga-
rantindo proteo de 80 a 100% dos peixes contra
o desao com doses letais sob vrias condies
ambientais. Essas vacinas consistem de plasm-
deos, molculas simples de DNA circular, que
contm somente um gene viral, portanto, so se-
guras e estveis, alm de ecazes. Uma vacina de
DNA contra o IHNV foi licenciada, em 2005, no
Canad, e outros pases devem liberar o comrcio
medida que esta vacina encontre maior aceita-
o. Limitaes atuais aplicao dessas vacinas
na aqicultura so os requerimentos regulatrios
de licenciamento e a necessidade do desenvolvi-
mento de mtodos mais ecientes de introduo
do DNA nos animais. Alm das vacinas de DNA,
tem ressurgido o interesse em melhoria das vaci-
nas inativadas.
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723
724
725
725
725
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741
742
1 Introduo
2 Classicao
3.1 Propriedades gerais
3.2 O envelope
3.2.1 O genoma
3.3 Os nucleocapdeos
3.3.1 O genoma
4 Replicao
4.2 Transcrio
5 Gentica dos vrus da inuenza
6 Infeces de importncia em veterinria causadas por ortomixovrus
6.1 Inuenza eqina
6.1.1 Epidemiologia
6.1.3 Imunidade
6.1.4 Diagnstico
6.1.5 Prolaxia e controle
6.2 Inuenza suna
6.2.1 Caractersticas do vrus
6.2.2 Epidemiologia
6.2.4 Imunidade
6.2.5 Diagnstico
6.3 Inuenza aviria
6.3.2 Epidemiologia
6.3.4 Imunidade
6.3.5 Diagnstico
6.4 Inuenza em aves silvestres
6.5 Vrus da inuenza H5N1
6.6 Inuenza em ces, felinos e outros mamferos
6.6.1 Epidemiologia
6.6.3 Diagnstico
6.6.4 Controle e preveno
742
742
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744
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751
752
752
753
1 Introduo
A famlia Orthomyxoviridae abriga impor-
tantes patgenos humanos e animais, associados
essencialmente com infeces respiratrias. A
denominao da famlia deriva do latim e ree-
te uma importante caracterstica biolgica desses
vrus, pois myxo signica muco, e ortho signica
verdadeiro. Ou seja, so os verdadeiros vrus do
muco, em uma referncia sua propriedade de
penetrar atravs do muco e infectar clulas do
epitlio respiratrio. Essa denominao foi utili-
zada para diferenci-los de outra famlia de vrus
associados com infeces respiratrias, a Para-
myxoviridae. Essas famlias compartilham algu-
mas propriedades biolgicas, mas so diferentes
do ponto de vista estrutural e gentico.
Os ortomixovrus causam as infeces res-
piratrias de pessoas e animais conhecidas como
gripe ou inuenza. Assim, so conhecidos como
vrus da inuenza ou vrus da gripe. A inuenza
a principal doena respiratria humana e um
dos principais problemas de sade pblica no
mundo inteiro, alm de ser uma importante causa
de perdas econmicas em animais de produo.
Historicamente os vrus da inuenza tm sido
envolvidos em epidemias de grandes propores
que ceifaram a vida de milhes de pessoas. Pela
sua constante evoluo gentica e antignica, es-
ses vrus so considerados uma das principais
ameaas sade pblica mundial.
Os vrions dos ortomixovrus so grandes,
pleomrcos, com envelope e contm sete ou oito
molculas de RNA de polaridade negativa como
genoma. A natureza segmentada do genoma pro-
porciona condies para a ocorrncia de recom-
binaes do tipo ressortimento. Nesses eventos,
ocorre a redistribuio de segmentos genmicos
entre duas cepas virais originando outro vrus,
com gentipo e fentipo mistos. Esse mecanismo
gentico permite aos vrus da inuenza evoluir
rapidamente, e tem sido responsabilizado pelo
surgimento de cepas altamente virulentas as-
sociadas com doena severa e alta mortalidade,
principalmente em humanos.
Outra caracterstica marcante dos vrus da
inuenza a alta variabilidade antignica das gli-
coprotenas de superfcie. Essa variabilidade per-
mite ao vrus persistir indenidamente na popu-
lao, atravs de mutaes e seleo de variantes,
que no so neutralizadas pelos anticorpos pro-
duzidos pelo hospedeiro. A grande variabilidade
antignica, principalmente dos vrus humanos,
constitui-se em um obstculo quase intranspon-
vel para a produo de vacinas permanentes e de
uso universal.
Os hospedeiros naturais dos vrus da in-
uenza so aves aquticas e migratrias de v-
rias espcies. Nesses animais, o vrus replica no
intestino sem produzir sinais clnicos e excre-
tado em altos ttulos nas fezes. Curiosamente, o
vrus se mantm muito estvel geneticamente
nesses hospedeiros, provavelmente por ausn-
cia de presso imunolgica seletiva. No entanto,
a ocorrncia ocasional de ressortimento de seg-
mentos genmicos entre cepas diferentes ou de
outras mutaes pode resultar em alteraes
marcantes no fentipo viral, com o surgimento de
variantes capazes de infectar humanos e outros
mamferos. Aps a sua transferncia para novos
hospedeiros, esses vrus geralmente apresentam
uma rpida evoluo gentica atravs de muta-
es. Esses variantes podem tambm apresentar
virulncia aumentada para os seus hospedeiros
naturais e para aves domsticas.
Acredita-se que os vrus da inuenza que
infectam humanos e animais domsticos prova-
velmente se originaram de ancestrais oriundos
de aves aquticas e migratrias, em um passado
recente ou remoto. Ou seja, os vrus da gripe so
potencialmente zoonticos, ao contrrio do que
era historicamente considerado. Por essa razo,
considera-se que as aves aquticas se constituem
em um imenso reservatrio de vrus da inuen-
za, podendo transmiti-los a pessoas, mamferos e
aves domsticas. Um exemplo recente foi o sur-
gimento de variantes avirias do gentipo H5N1
altamente patognicas para humanos e para ou-
tros mamferos. Outro exemplo da habilidade
desses vrus de cruzar a barreira de espcies o
vrus H3N8, que foi transmitido de eqinos para
ces, nos quais produz doena severa.
Aps a adaptao aos seus novos hospedei-
ros, os vrus se tornam relativamente espcie-es-
peccos e apresentam uma capacidade restrita
de infectar espcies heterlogas. Essa barreira in-
724 Captulo 28
terespcies, no entanto, parece ser tnue e tempo-
rria, e os vrus podem, ocasionalmente, evoluir e
se tornar capazes de cruzar a barreira de espcies
e infectar outros hospedeiros. Esses exemplos
ilustram a contnua evoluo desses agentes, o
que torna a sua biologia e epidemiologia fasci-
nantes, ao mesmo tempo em que impe barreiras
enormes para o seu controle.
Este captulo abordar as caractersticas ge-
rais da famlia e os vrus de interesse veterin-
rio. Grande parte dos conhecimentos adquiridos
sobre essa famlia foi obtida de estudos com os
vrus da inuenza A humana. Por isso, a parte
geral deste captulo utilizar informaes obtidas
a partir desses estudos. Ao nal do captulo, ser
abordada, resumidamente, a infeco pelo vrus
H5N1, que adquiriu virulncia mesmo para as
aves e, ocasionalmente, transmitido para pesso-
as, quando causa doena severa e freqentemen-
te fatal. A possibilidade da disseminao desse
vrus na populao humana representa um risco
real para a sade pblica mundial.
2 Classicao
De acordo com o ICTV (Comit Internacio-
nal para a Taxonomia de Vrus), a famlia Or-
thomyxoviridae dividida em quatro gneros:
Inuenza A: abriga vrus que infectam
uma variedade de espcies de aves, de mamfe-
ros e humanos. So os principais componentes
desta famlia, pela sua distribuio e importncia
sanitria. Possuem oito segmentos genmicos e
duas glicoprotenas principais de superfcie: HA
(hemaglutinina) e NA (neuraminidase). Essas
glicoprotenas apresentam uma notvel variabi-
lidade antignica;
Inuenza B: vrus que infectam apenas
humanos. Tambm possuem oito segmentos ge-
nmicos e duas glicoprotenas principais (HA e
NA). Essas glicoprotenas, no entanto, apresen-
tam pouca variabilidade antignica quando com-
paradas com o gnero anterior;
Inuenza C: abriga vrus que tradicional-
mente s eram identicados em humanos, porm
a infeco natural j foi demonstrada tambm em
sunos. Esses vrus raramente esto associados
com doena nos seus hospedeiros. Possuem sete
segmentos genmicos e apenas uma glicoprote-
na multifuncional no envelope (HEF);
Thogotovirus: abrange vrus encontrados
em carrapatos, sem envolvimento com doena
em vertebrados at o presente.
Os vrus dos gneros A, B e C podem ser di-
ferenciados entre si de acordo com as proprieda-
des antignicas das protenas do nucleocapsdeo
(NP) e da matriz (M1). Os vrus da inuenza A
apresentam uma grande variabilidade antignica
e podem ser classicados em subtipos de acordo
com a reatividade sorolgica das glicoprotenas
HA e NA.
At o presente, j foram identicados 16
diferentes tipos de HA e nove tipos de NA, que
permitem a formao de centenas de possveis
subtipos H/N. No entanto, apenas alguns sub-
tipos j foram reconhecidos como patognicos
para cada espcie. Dentre esses, destacam-se os
tipos H1N1, H2N2 e H3N2 em humanos; H7N7 e
H3N8 em eqinos; H1N1 e H3N2 em sunos. As
aves aquticas abrigam um repertrio inumer-
vel de possveis combinaes H/N. Os subtipos
H5N2 e H7N1 so os principais vrus encontra-
dos nos surtos de doena em aves domsticas.
Recentemente, alguns vrus do subtipo avirio
H5N1 se tornaram virulentos, inclusive para al-
gumas espcies de aves silvestres. Esses vrus
foram transmitidos para aves domsticas e para
humanos, causando centenas de mortes, princi-
palmente na sia. Esse vrus tambm foi trans-
mitido para outros animais domsticos, como
felinos. Vrus avirios dos subtipos H9N2 (Chi-
na e Hong Kong, 1999) e H7N7 (Holanda, 2003)
tambm foram recentemente transmitidos para
humanos e aves domsticas, porm com conse-
qncias menos graves.
A nomenclatura dos isolados e cepas dos v-
rus da inuenza segue um padro universal, con-
siderando o tipo de vrus (A, B e C), hospedeiro
de origem (quando no for de humanos), origem
geogrca, nmero da cepa, ano de isolamen-
to e o subtipo da HA e NA (entre parnteses).
Exemplos: inuenzavrus A/Hong Kong/1/68
(H3N2) vrus isolado de humanos durante a
pandemia de 1968; ou inuenzavrus suno A/
swine/Iowa/15/30 (H1N1) cepa de referncia
do vrus da inuenza suna.
Orthomyxoviridae 725

Os ortomixovrus apresentam vrions gran-
des, envelopados e pleomrcos. As partculas
vricas podem apresentar formas esfricas com
contorno pouco regular (80-120 nm de dimetro),
formas lamentosas (20-50 x 200-300 nm) ou for-
ma de rim (Figura 28.1). Os vrions obtidos aps
mltiplas passagens em ovos embrionados ou em
cultivo celular apresentam uma morfologia mais
homognea e medem entre 80 e 120 nm; enquan-
to os isolados recentes apresentam um polimor-
smo marcante. Os vrions so sensveis a tempe-
raturas elevadas, apresentando curta viabilidade
em condies ambientais. A infectividade ina-
tivada em 30 minutos a 56C ou sob pH 3; e so
sensveis a solventes lipdicos (ter/clorofrmio)
e detergentes.

3.2 O envelope
O envelope lipdico apresenta aproximada-
mente 500 projees (espculas) de 10 a 14 nm,
formadas pelas glicoprotenas HA e NA. As pro-
jees so formadas por homotrmeros da HA e
homotetrmeros da NA, na proporo de 4:1 ou
5:1. As projees formadas pela HA so mais lon-
gas do que as formadas pela NA, que apresentam
uma aparncia de cogumelo. As glicoprotenas
HA e NA so tpicas protenas integrais de mem-
brana, apresentando uma regio externa grande,
uma regio transmembrana hidrofbica e uma
pequena cauda interna. A orientao dessas gli-
coprotenas, no entanto, inversa: a HA apresen-
ta a extremidade amino orientada para o exterior,
enquanto a NA possui essa extremidade orienta-
da para o interior do vrion. Outro componente
do envelope a protena com atividade de canal
de ons (M2), que est presente em um nmero
pequeno de cpias (Figura 28.1).
A HA uma protena multifuncional, res-
ponsvel pela ligao dos vrions aos receptores
celulares (cido silico) e pela fuso do envelo-
pe com a membrana endossomal, permitindo a
penetrao dos nucleocapsdeos no citoplasma.
Possui, ainda, a propriedade de aglutinar eritr-
citos de animais (atividade hemaglutinante) e
contm os principais epitopos que so alvos de
anticorpos neutralizantes. Essa variabilidade an-
tignica, juntamente com a variao observada
na NA, responsvel pela habilidade do vrus
persistir na populao apesar da resposta imu-
nolgica montada pelos hospedeiros. A variabi-
lidade antignica da HA tambm utilizada para
classicar os isolados de campo em subtipos, ou
seja, os subtipos so denidos de acordo com a
reatividade da sua HA com anti-soro especco
de cada subtipo.
726 Captulo 28
A HA sintetizada como um polipeptdeo
nico (HA0), que clivado durante o transporte
das glicoprotenas para a membrana plasmtica
no nal do ciclo replicativo. Essa clivagem, que
essencial para a infectividade dos vrions, origina
dois polipeptdeos (HA1 e HA2), que permane-
cem unidos por pontes dissulfeto, formando a
protena funcional HA. Nessa molcula, a HA1
abrange a regio globular externa, que possui os
stios de ligao aos receptores e os principais
epitopos alvos de anticorpos neutralizantes (Fi-
gura 28.2). As variaes nesses epitopos so as
responsveis pela grande variabilidade antigni-
ca do vrus da inuenza A. A HA2 possui a forma
de haste e localiza-se logo abaixo da HA1. Esse
polipeptdeo apresenta uma regio transmem-
brana e uma regio intermediria, que contm o
peptdeo fusognico. Esse peptdeo responsvel
pela fuso do envelope com a membrana celular.
A fuso do envelope viral com a membrana do
endossomo se constitui em uma etapa essencial
para a penetrao do vrus na clula e prece-
dida por alteraes conformacionais drsticas na
HA, induzidas pelo pH baixo nos endossomos.
A NA se organiza em tetrmeros e est pre-
sente no envelope em menor abundncia do que
a HA. A neuraminidase se constitui na segunda
protena responsvel pela classicao do vrus
em subtipos. Essa protena tambm possui uma
regio alongada (haste), cuja extremidade est
associada com a membrana, e uma regio globu-
lar que responsvel pela sua atividade biolgica
(Figura 28.2). A NA responsvel pela clivagem
do cido silico das glicoprotenas celulares, mas
o signicado biolgico dessa atividade no ciclo
replicativo do vrus ainda no bem conhecido.
Essa atividade poderia facilitar a penetrao dos
vrions atravs da camada de muco presente so-
bre a mucosa respiratria at alcanar o epitlio.
Tambm tem sido sugerido que essa atividade
importante para a liberao dos vrions da su-
perfcie celular durante o egresso, sem a qual os
vrions cariam agregados na membrana. A NA
tambm contm determinantes antignicos sujei-
tos a variaes freqentes, o que contribui para a
variabilidade antignica desses vrus.
A M2 uma protena integral de membra-
na presente em poucas cpias no envelope viral.
Essa protena est presente em arranjos tetra-
mricos que ultrapassam toda a espessura da
membrana, formando uma espcie de canal que
permite a comunicao entre os compartimentos
interno e externo (Figura 28.2). De fato, a M2 fun-
ciona como um canal de ons que possui um pa-
pel importante em duas etapas distintas do ciclo,
durante a penetrao e, posteriormente, duran-
te a maturao dos vrions. A primeira funo
exercida durante a internalizao dos vrions, no
interior de endossomos acidicados. A estrutura
da M2 se abre e permite a penetrao de ons H+
para o interior dos vrions. A acidicao interna
do pH favorece a dissociao dos ribonucleocap-
sdeos da protena da matriz, facilitando, assim,
o desnudamento. A segunda atividade da M2
ocorre na fase nal do ciclo, durante o transporte
das glicoprotenas em vesculas do aparelho de
Golgi para a membrana plasmtica, onde ocorre-
r o brotamento dos nucleocapsdeos. Nessa eta-
pa, o canal formado pela M2 (que est inserida
na membrana das vesculas) se abre e permite a
sada de ons H+ das vesculas para o citoplasma.
Assim, o pH no interior dessas vesculas se man-
tm alto, prevenindo a ocorrncia prematura das
alteraes conformacionais da HA.
A M1 o componente mais abundante dos
vrions, apresentando aproximadamente 3.000
cpias por vrion. A camada formada por essa
protena est intimamente associada com a face
interna do envelope e medeia as interaes entre
o envelope e os nucleocapsdeos. A M1 desempe-
nha um papel estrutural importante, conferindo
certa rigidez estrutura dos vrions e tambm
importante durante o processo de morfognese.
3.3 Os nucleocapsdeos
No interior dos vrions, so encontrados oito
nucleocapsdeos, que se apresentam como bas-
tes helicoidais exveis, provavelmente exio-
nados e enrolados sobre si mesmos (ver Figura
28.1). Cada nucleocapsdeo contm um segmento
de RNA conjugado com mltiplas cpias da pro-
tena NP (uma molcula da NP para cada 20 nu-
cleotdeos, nt). O complexo RNA + NP denomi-
nado ribonucleoprotena (RNP) e relativamente
estvel, permanecendo razoavelmente associado
durante os processos de transcrio e replicao
do genoma. Associadas s RNPs encontram-se
trs protenas menos abundantes (30-60 cpias
por vrion), que so componentes do complexo
polimerase (transcriptase/replicase). Esse com-
plexo formado por trs protenas principais:
PB1 (polimerase bsica 1); PB2 (polimerase bsica
2) e PA (polimerase cida).

3.3.1 O genoma
O genoma dos vrus da inuenza A consti-
tudo por oito molculas lineares de RNA de sen-
tido negativo, numerados de 1 a 8. Os segmentos
1 a 6 codicam uma protena cada; os segmentos
7 e 8 codicam duas protenas cada. Os segmen-
tos genmicos apresentam a mesma organizao
geral: possuem um gene na regio central, an-
queado por seqncias no-codicantes altamen-
te conservadas nas extremidades 3 (12 nt) e 5
(13 nt) (Figura 28.3). Essas seqncias so parcial-
mente complementares e permitem a formao
das estruturas que lembram cabos de panela (pa-
3-UCGCUUUCGUCC
RNA genmico (-)
GGAACAAAGAUGA-5
Gene
12 nucleotdeos
13 nucleotdeos
Figura 28.3. Organizao dos segmentos de RNA que compem o genoma dos vrus da influenza A (famlia
). Orthomyxoviridae
728 Captulo 28
nhandles) durante a transcrio e replicao. As
regies terminais tambm possuem sinais para o
incio da transcrio e replicao. Cada segmen-
to genmico encontra-se recoberto por mltiplas
cpias da protena NP e est associado com algu-
mas cpias das protenas que formam o comple-
xo transcriptase/replicase.
Os segmentos genmicos dos vrus da in-
uenza, com os respectivos genes e as provveis
funes de seus produtos, esto apresentados na
Tabela 28.1.
4 Replicao
Os ortomixovrus se constituem em exce-
es entre os vrus RNA, pois a replicao do ge-
noma ocorre no ncleo da clula hospedeira. Os
nucleocapsdeos contm as enzimas necessrias
para a transcrio e replicao do genoma (com-
plexo polimerase PA+PB1+PB2). No entanto, o
vrus necessita subtrair componentes celulares
(oligonucleotdeos com cap) para a produo de
seus RNA mensageiros (mRNA). Durante o ci-
clo, as protenas no-estruturais (PA+PB1+PB2)
e algumas estruturais (NP, M1), produzidas no
citoplasma, so importadas para o ncleo, onde
participam de ciclos adicionais de transcrio e
replicao e, tardiamente, participam da forma-
o dos nucleocapsdeos.
Os vrus da inuenza se multiplicam com
ecincia em embries de galinha e podem ser
adaptados a replicar em broblastos de pinto e
Segmento
Gene (ORF) Protena/funo
PB2 = 2277nt
PB1 = 2271nt
PA = 2148nt
HA = 1698nt
NP = 1494nt
M1=756nt
M2=291nt
NA = 1362nt
1
2
3
4
5
6
8
7
?=27
NS1 = 690
NS2 = 363nt
Polimerase bsica 2 componente do
complexo replicase. Reconhece e
cliva oligonucleotdeos de mRNA celulares.
Polimerase bsica 1 componente do
complexo replicase. Possui atividade de
de polimerase. a replicase viral.
Polimerase cida componente
do complexo replicase. Funo
desconhecida.
Hemaglutinina principal glicoprotena do
envelope. Media a ligao aos receptores e
fuso/penetrao. Altamente varivel.
Neuraminidase glicoprotena do envelope.
Cliva a ligao com o cido silico.
Nucleoprotena conjugada com o genoma,
forma o nucleocapsdeo. Muito abundante.
M1 protena da matriz. Protena mais abundante
dos vrions. Media a interao entre o envelope e
os nucleocapsdeos. Participa da morfognese.
M2 protena integral do envelope. Canal de
ons. Essencial para o desnudamento.
NS1 protena no-estrutural. Inibe o
de mRNA celulares.
NS2 protena no-estrutural. Interage
com a M1. Envolvida com a exportao de
RNPs do ncleo.
splicing
Tabela28.1. Organizaodogenoma e produtos codificados pelovrus dainfluenzaA(famlia ). Orthomyxoviridae
em linhagens celulares de mamferos (p. ex.: c-
lulas MDCK, de origem canina). A replicao em
cultivo celular, principalmente de isolados recen-
tes, pode no produzir efeito citoptico evidente.
Assim, o vrus pode ser detectado e quantica-
do no sobrenadante dos cultivos (ou no lquido
amnitico dos ovos embrionados) pela tcnica de
hemaglutinao (HA); e pode ser identicado/
tipicado por inibio de hemaglutinao (HI)
com um soro tipo ou subtipo especco.

Os vrus da inuenza utilizam molculas de
cido silico (AS) como receptores. Essas mol-
culas esto presentes em uma variedade de glico-
protenas e glicolipdios de membrana. A ligao
dos vrions a estes componentes mediada pela
glicoprotena HA. A ligao qumica que mantm
o AS associado s glicoprotenas pode ser de dois
tipos principais: 2,3 e 2,6. O tipo de ligao do
AS responsvel pela especicidade de espcie
e de tropismo tecidual dos vrus da inuenza. A
HA de alguns vrus somente capaz de se ligar
ao AS na ligao 2,3, enquanto outros se ligam
a molculas com a conformao 2,6. A traquia
humana contm AS predominantemente com li-
gao do tipo 2,6, enquanto o intestino das aves
contm ligaes do tipo 2,3. J o trato respira-
trio dos sunos possui o AS com os dois tipos
de ligao: 2,3 e 2,6. A especicidade da HA
por ligaes 2,3 ou 2,6 um fator fundamen-
tal para a capacidade desses vrus infectar a sua
espcie hospedeira e outras espcies. Assim, os
vrus avirios que adquirem a capacidade de se
ligar ao AS na conformao 2,6 podem infectar
humanos. J os sunos podem ser ocasionalmen-
te infectados com vrus avirios e humanos, pois
possuem o AS com os dois tipos de ligao.
A ligao de uma nica molcula de HA a
uma molcula de AS de baixa anidade e, as-
sim, so requeridas mltiplas (dezenas ou cente-
nas) interaes simultneas para permitir a ad-
soro e posterior penetrao dos vrions.
Imediatamente aps a adsoro, os vrions
so internalizados por endocitose mediada por
clatrina e se localizam em vesculas endocticas
que se dirigem para o interior do citoplasma.
Durante o trnsito, as vesculas so acidicadas
gradativamente pela ao de ATPases, que bom-
beiam prtons H+ para o seu interior. Atravs
das aberturas mediadas pela M2, os prtons H+
penetram tambm no interior dos vrions. A aci-
dicao dos endossomos resulta em dois efeitos
para a penetrao do vrus. Primeiro: provoca
alteraes conformacionais na HA, que resultam
na exposio do peptdeo fusognico e fuso do
envelope com a membrana endoctica. Segundo:
o pH baixo no interior dos vrions facilita a dis-
sociao entre as RNPs e a protena M1, promo-
vendo o desnudamento parcial e permitindo a
liberao das RNPs no interior do citoplasma. A
droga amantadina utilizada como teraputico
antiviral inibe a ao da M2, resultando em pe-
netrao e desnudamento inecientes do vrus.
Drogas que previnem a acidicao dos endosso-
mos (monensina, cloroquina, cloreto de amnio)
tambm previnem a penetrao dos vrus da in-
uenza em clulas de cultivo.
Uma vez dissociados da M1 e liberados no
interior do citoplasma, as RNPs so transporta-
das para o ncleo, onde penetram ativamente pe-
los poros nucleares. As protenas que compem
o complexo RNP contm sinais de localizao
nuclear que promovem a sua importao para o
ncleo celular.

4.2 Transcrio
A transcrio dos RNA genmicos reali-
zada pelo complexo transcriptase/replicase, que
est associado com as RNPs, e cada protena deste
complexo desempenha funes diferentes. A PB1
possui atividade endonuclease, necessria para
a subtrao de oligonucleotdeos celulares que
servem de primers para o incio da transcrio. A
PB2 possui atividade polimerase e se constitui na
replicase viral, realizando as funes de transcri-
o e replicao do genoma. A funo exata da
PA no conhecida, mas esta protena um com-
ponente essencial do complexo.
A transcrio se inicia logo aps a penetrao
das RNPs no ncleo, e cada segmento genmico
transcrito individualmente, originando mRNA
com cap e poliA. A transcrio precedida pela
clivagem e subtrao de segmentos de mRNAs
730 Captulo 28
celulares. Os oligonucleotdeos subtrados cor-
respondem aos primeiros 8 a 13 nt dos mRNA e
possuem cap na extremidade 5. Essa atividade
atribuda PB1, que possui atividade endonucle-
ase, ou seja, essa enzima literalmente furta seg-
mentos de mRNAs celulares para benefcio do
vrus. Os oligonucleotdeos subtrados pareiam
com uma pequena seqncia prxima a extremi-
dade 3 do RNA genmico e servem de primers
para o incio da transcrio. Como resultado da
polimerizao a partir da extremidade 3 desses
primers, os mRNA virais sintetizados possuem a
estrutura cap, que necessria para a sua tradu-
o.
A transcrio termina 15 a 22 nt antes da ex-
tremidade 5 de cada segmento, e seguida pela
adio de uma cauda de poliA. Os mRNAs virais
no so, portanto, exatamente complementares
aos RNAs genmicos: possuem uma extenso de
8 a 13 nt em sua regio 5 e no possuem os 15-22
nt terminais, sendo substitudos por uma cauda
poliA (Figura 28.4).
Os transcritos produzidos a partir dos seg-
mentos 7 e 8 sofrem processamento por splicing e
originam mRNAs que so traduzidos em mais de
uma protena. No segmento 7, so gerados trs
mRNAs: um codica a protena M1 (dois teros
anteriores do mRNA), outro codica a protena
M2 (tero nal do gene) e um terceiro contm
uma ORF de 27 nt cuja traduo incerta. O seg-
mento 8 origina um transcrito que resulta em
dois mRNAs aps o splicing: um codica a pro-
tena no-estrutural NS1 e o outro traduzido na
protena NS2 (ver Tabela 28.1).

3-UCGCUUUCGUCC
A. RNA genmico (-)
C. RNA antigenmico (+)
GGAACAAAGAUGA-5
Cap-5---------GA
Cap-5---------GAGCGAAAGCAGG
8-13nt
8-13nt
AAA(n)-3
15-22nt
B. mRNA
Transcrio (1)
Traduo
Replicao
5-AGCGAAAGCAGG CCUUGUUUCUACU-3
2 3
Figura 28.4. Estrutura dos RNAs produzidos durante a replicao do vrus da influenza. (A) RNA genmico (vRNA);
(B) mRNA; (C) RNAantigenmico. Atranscriopara a sntese de mRNAutiliza nucleotdeos comcapsubtrados dos
mRNA celulares (1). Os mRNA apresentam uma extenso de 8-13 nt (com cap) em relao ao vRNA e os 15-22
nucleotdeos terminais so substitudos por uma cauda poliA. A primeira etapa da replicao do genoma envolve a
sntese do RNA de sentido antigenmico que exatamente complementar ao vRNA (2). A segunda etapa da
replicao envolve a sntese do vRNA a partir do RNA antigenmico (3). Note que os mRNAs diferem dos RNA
antigenmicos, pelapresenade8-13 nt adicionais comcape caudapoliA.
A replicao dos RNA genmicos (vRNA)
ocorre em duas etapas: sntese do RNA antige-
nmico ou complementar e sntese de vRNA
utilizando o RNA antigenmico como molde.
A sntese do RNA antigenmico no envolve a
subtrao de oligonucleotdeos de mRNA celu-
lares; inicia-se exatamente na extremidade 3 do
genoma e termina exatamente na extremidade 5.
Dessa forma, os RNAs antigenmicos so exata-
mente complementares aos vRNAs (Figura 28.4).
Os dois tipos de transcrio observados du-
rante a replicao desses vrus, ou seja, a trans-
crio dependente dos oligonucleotdeos com
cap (para a produo de mRNA) e a transcrio
independente de primer (para a produo de
RNA antigenmico) parecem envolver comple-
xos transcriptase/replicase diferentes. A antiter-
minao, que permite ao complexo transcriptase
seguir transcrevendo at o nal do segmento e
produzir a cpia antigenmica completa parece
ser dependente do acmulo da protena NP. Des-
sa forma, o acmulo desta protena e alteraes
especcas na composio do complexo polime-
rase seriam os responsveis pela transio entre
transcrio e replicao. Essa transio ocorre em
fases avanadas do ciclo e culmina com a produ-
o dos RNAs genmicos (tambm chamados de
vRNAs) para serem incorporados nos vrions.
Em todas as etapas da replicao, os RNAs
de sentido antigenmico e genmico so rapi-
damente conjugados com mltiplas cpias da
protena NP. As RNPs, contendo os RNA antige-
nmicos, permanecem no ncleo para servirem
de molde para a sntese de mais cpias de RNA
genmico. Em contraste, as RNPs que contm os
RNA genmicos so ecientemente exportadas
para o citoplasma, principalmente em fases tar-
dias do ciclo.

Os ortomixovrus completam a sua morfo-
gnese e so liberados das clulas hospedeiras
pelo brotamento dos nucleocapsdeos na mem-
brana plasmtica. Nesse processo, o envelope
que contm as glicoprotenas virais passa a se
constituir no envoltrio externo dos vrions. O
processo de morfognese depende da sntese e
direcionamento especcos das diferentes prote-
nas virais. As protenas NP, PA, PB1 e PB2 so
produzidas em ribossomos livres no citoplasma
e importadas para o ncleo. Em fases iniciais do
ciclo, essas protenas participam da transcrio e
replicao. Em fases tardias, associam-se com o
RNA genmico, formando as RNPs, que so ex-
portadas para o citoplasma e transportadas para
a membrana plasmtica. A M1 se conjuga com as
RNPs e participa da sua exportao para o cito-
plasma e tambm transportada para a face in-
terna da membrana plasmtica. As glicoprotenas
HA e NA e a protena M2 so produzidas em ri-
bossomos associados ao retculo endoplasmtico
(RE). Durante a sua sntese, essas protenas cam
inseridas na membrana do RE, com as regies ex-
ternas orientadas para o lmen. Nesta organela,
as protenas sofrem modicaes ps-traduo
(mais notavelmente glicosilao) e so transpor-
tadas at o aparelho de Golgi, onde sofrem pro-
cessamentos adicionais. As glicoprotenas so
transportadas at a membrana plasmtica em ve-
sculas derivadas do aparelho de Golgi. Durante
o transporte, a molcula precursora da HA (HA0)
sofre clivagem proteoltica, originando a HA1 e
HA2. Esses dois polipeptdeos permanecem uni-
dos por pontes dissulfeto e formam a estrutura
madura da HA. Nessa etapa, a M2 impede a aci-
dicao excessiva dessas vesculas, permitindo
a sada de prtons H+ para o citoplasma. Isso
evita que a HA sofra precocemente as alteraes
conformacionais necessrias infectividade viral.
Acredita-se que a trimerizao das molculas de
HA e a tetramerizao da NA ocorram durante
o transporte ou imediatamente aps a fuso das
vesculas com a membrana celular.
As vesculas contendo as glicoprotenas e a
M2, eventualmente, fusionam com a membrana
e, assim, as protenas virais do envelope tornam-
se inseridas na membrana plasmtica. Tem sido
observado que os trmeros de HA se distribuem
uniformemente, em determinadas reas da su-
perfcie celular, enquanto os tetrmeros da NA e
M2 se concentram em determinados locais.
O brotamento inicia com a interao das
RNPs com as caudas das glicoprotenas, prova-
velmente mediado pela protena M1 que reveste
732 Captulo 28
internamente a membrana nesses locais ou est
associada com as RNPs. A seguir, os complexos
contendo as oito RNPs se inserem na membrana,
adquirindo o envelope e sendo liberados da clu-
la hospedeira. Acredita-se que a atividade neura-
minidase da NA impea que os vrions egressos
quem aderidos membrana, devido ligao
da HA com molculas de cido silico.
A produo de partculas vricas infecciosas
depende da incluso de, pelo menos, uma cpia
de cada RNA genmico por vrion. possvel
que o empacotamento dos segmentos genmicos
ocorra ao acaso, sem qualquer tipo de seleo.
Partculas vricas, contendo mais ou menos de
oito segmentos, podem facilmente ser detecta-
das, o que compatvel com o empacotamento ao
acaso. Assim, se oito segmentos forem incorpora-
dos em cada novo vrion, um em cada 400 vrions
conteria o conjunto completo de segmentos. Este
nmero situa-se dentro da relao entre o total
de partculas e o nmero de partculas infeccio-
sas observada em preparaes do vrus, ou seja,
uma proporo muito grande de partculas pro-
duzidas no infecciosa, provavelmente por no
conter o conjunto completo de RNAs genmicos.
Por outro lado, evidncias indicam que pode ha-
ver algum tipo de seleo que favorece a inclu-
so consistente de alguns segmentos genmicos,
principalmente o segmento 1. Neste caso, o em-
pacotamento dos segmentos no seria totalmente
ao acaso. O ciclo replicativo dos ortomixovrus
est ilustrado esquematicamente na Figura 28.5.
5 Gentica dos vrus da inuenza
Em seus hospedeiros naturais as aves aqu-
ticas e migratrias os vrus da inuenza so ge-
neticamente estveis e apresentam taxas mnimas
de mutao e evoluo ao longo do tempo. Isso
indica uma relao ancestral e reete uma perfei-
ta adaptao do vrus com os seus hospedeiros.
No entanto, quando so transmitidos para outras
espcies (mamferos ou aves), esses vrus iniciam
um processo de rpida evoluo gentica, sobre-
tudo devido a mutaes em ponto nos genes que
codicam as glicoprotenas de superfcie.
A evoluo dos vrus da inuenza deve-se a
dois mecanismos genticos principais: mutaes
em ponto e ressortimento. As mutaes em ponto
surgem ao acaso durante a replicao do genoma
e devem-se baixa delidade da polimerase vi-
ral, que introduz nucleotdeos incorretos durante
a sntese das novas molculas de RNA. Quando
ocorrem nos genes das glicoprotenas HA e NA,
essas mutaes podem resultar em alteraes dos
stios reconhecidos por anticorpos neutralizantes.
Isso representa uma vantagem evolutiva para os
vrus mutantes, que podem escapar da neutrali-
zao e serem transmitidos a novos hospedeiros.
As alteraes antignicas nas glicoprotenas de
superfcie (principalmente a HA), causadas pelo
acmulo gradual de mutaes em ponto, so de-
nominadas antigenic drift. Essas alteraes so
responsveis pelos variantes que surgem conti-
nuamente e que permitem ao vrus da inuenza
humana se perpetuar na populao, apesar da
resposta imunolgica dos hospedeiros. Esse tipo
de evoluo parece ser mais freqente e efetivo
nos vrus da inuenza A.
A natureza segmentada do genoma desses
vrus permite a produo ocasional de recombi-
nantes que possuem segmentos de dois vrus pa-
rentais. Esse tipo de recombinao, denominada
ressortimento, pode ocorrer em infeces mistas
por vrus de um mesmo tipo (A, B ou C), e no
entre vrus de tipos diferentes (Figura 28.6). O
ressortimento permite uma evoluo rpida des-
ses vrus e tem sido associado com variantes res-
ponsveis por pandemias de grandes dimenses
em humanos, como as de 1957 e 1968.
Os recombinantes podem resultar do res-
sortimento entre vrus da mesma espcie ou
de espcies diferentes. O surgimento de vrus
recombinantes que possuem as glicoprotenas
HA e/ou NA adquiridas de um vrus de outra
Figura 28.6. Ilustrao demonstrando o ressortimento
entre dois vrus da influenza. No exemplo, um suno
infectado simultaneamente comumvrus avirio e outro
humano. A co-infeco resulta no ressortimento entre
esses dois vrus, como qual o vrus de humano adquire o
gene da hemaglutinina (HA) do vrus avirio. Esse
recombinante possui propriedades antignicas e
patognicas diferentes dos dois vrus parentais, e pode,
potencialmente, infectar aves domsticas e selvagens, e
tambm humanos. Os sunos se constituem na principal
espcie em que ocorrem esses eventos, pois podem ser
infectados tantopor vrus demamferos comoavirios.
734 Captulo 28
espcie apresenta especial interesse, pois altera
drasticamente as caractersticas antignicas do
vrus, evento denominado antigenic shift. O res-
sortimento entre vrus da inuenza tem sido res-
ponsabilizado pelo surgimento de novas cepas,
altamente patognicas e capazes de produzir epi-
demias de grandes propores, pois as popula-
es afetadas no possuem imunidade contra os
novos tipos de HA e NA presentes nesses novos
vrus. Nas epidemias de 1957 e 1968, um vrus
avirio realizou ressortimento com um vrus hu-
mano preexistente, gerando um terceiro vrus,
responsvel pelas epidemias (ver Figura 28.7). A
espcie suna mais propensa a abrigar eventos
de ressortimento entre vrus avirios e de mam-
feros, pois possui o AS nas conformaes 2,3 e
2,6, utilizadas por vrus de aves e de mamferos,
respectivamente.
Conrmando essa hiptese, recombinantes
derivados de ressortimento entre vrus avirios
e humanos em sunos foram, subseqentemen-
te, isolados de crianas na Holanda. Alm disso,
vrus contendo segmentos genmicos de vrus
avirios, humanos e sunos tm sido isolados de
sunos nos Estados Unidos desde 1998. Outros
exemplos de ressortimento em infeces naturais
Transmisso do vrus avirio
H1N1 para humanos
Gripe Espanhola
1918
Influenza Asitica
1957
Influenza Hong-Kong
1968
Nova Influenza
Pandmica
Influenza H1N1 Influenza H2N2 Influenza H3N2
Os oito segmentos
se originaram de
um vrus avirio
Novos HA, NA e PB1
avirios + cinco
segmentos de RNA
do vrus de 1918
Novos HA e P 1
avirios + cinco
segmentos de RNA
do vrus de 1918
B Oito segmentos
novos ou mais
uma derivao do
vrus de 1918
H1N1 humano H2N2 avirio
H2N2 humano H3 avirio
Vrus avirio
Ressortimento Ressortimento
Ressortimento
Vrus avirio (?)
ou
H3N2 humano
?
Figura 28.7. Mecanismos responsveis pelo surgimento de vrus pandmicos da influenza A em humanos. O vrus
que causou a gripe espanhola de 1918 (H1N1) era um vrus avirio que se adaptou a humanos (continha os oito
segmentos genmicos de vrus avirio). Os vrus associados com as pandemias de 1957 e 1968 foram originados pelo
ressortimento entre os vrus humanos ento circulantes (H1N1 e H2N2, respectivamente) e vrus avirios. Antecipa-
se que cepas capazes de causar grandes epidemias podem ser originadas por qualquer destes mecanismos. O vrus
H5N1 um dos candidatos a causar uma pandemia em humanos, caso adquira a capacidade de ser transmitido entre
pessoas.
Adaptado de Webster et al. (2006)
incluem um vrus suno H1N1, que foi isolado de
pessoas, e um H3N2, tambm suno, isolado de
perus nos EUA.
Independentemente de ressortimento, vrus
de determinadas espcies podem, ocasionalmen-
te, adaptar-se, infectar e se tornar patognicos
para outras espcies animais. Exemplos desses
eventos so abundantes na literatura. O vrus que
causou a gripe espanhola, em 1918, originou-se
de aves, e todos os segmentos genmicos tiveram
origem em um vrus avirio (Figura 28.7). Esse
vrus foi inicialmente transmitido para humanos
ou sunos, e depois se disseminou na populao
humana. Vrus da inuenza A de sunos freqen-
temente so transmitidos para humanos, com
conseqncias que variam desde infeces sub-
clnicas at doena fatal. Desde 1974, pelo menos
dez desses eventos foram bem documentados
nos Estados Unidos, Europa e Nova Zelndia. Da
mesma forma, vrus humanos podem ser trans-
mitidos para sunos, podendo disseminar-se,
proporcionando condies para a ocorrncia de
ressortimento com vrus dessa espcie. Recente-
mente, os casos de infeco de ces com o H3N8
eqino e de diversas espcies com o H5N1 avi-
rio demonstram que a barreira entre espcies
pode ser ultrapassada, mesmo sem a ocorrncia
de ressortimento entre diferentes vrus. Em re-
sumo, os vrus da inuenza A apresentam uma
especicidade de hospedeiro relativa e podem,
ocasionalmente, via ressortimento ou mutaes
em determinados genes, adaptar-se e ser trans-
mitidos a outras espcies.
6 Infeces de importncia em
veterinria causadas por ortomixovrus

6.1 Inuenza eqina
A inuenza ou gripe eqina uma enfer-
midade que afeta as vias areas superiores dos
eqinos e se caracteriza pela disseminao rpida
entre animais susceptveis. A doena ocorre ge-
ralmente sob a forma de epizootia. A gripe eqi-
na trata-se de uma das enfermidades respirat-
rias mais importantes dessa espcie devido aos
prejuzos econmicos causados, principalmente
em animais de competio. Por essas razes, a
enfermidade tem sido alvo de intensos estudos
nas ltimas dcadas. Os maiores avanos nos co-
nhecimentos sobre a inuenza eqina incluem o
reconhecimento de uma contnua variao anti-
gnica do subtipo A/equi/2 (H3N8), a emergn-
cia de um novo vrus H3N8 a partir de um pool
de genes de vrus avirios na China, e a recen-
te ocorrncia da infeco cruzada de ces com o
subtipo H3N8 nos Estados Unidos.
O vrus da inuenza eqina (EIV) clas-
sicado no gnero inuenzavirus A, juntamente
com os inuenzavrus que infectam humanos,
sunos e aves. Os inuenzavrus do tipo A so
divididos em subtipos de acordo com diferenas
antignicas nas glicoprotenas do envelope, HA
e NA. Nesse sentido, dois subtipos do EIV foram
identicados como causadores da enfermidade
em eqinos, o subtipo H7N7 ou equi-1; e o sub-
tipo H3N8 ou equi-2. O subtipo H3N8 tem sido
identicado em todos os surtos recentes, enquan-
to o H7N7 foi descrito, pela ltima vez, em 1979.
Mutaes em ponto nos genes das glicoprotenas
HA e NA do subtipo H3N8 permitem ao vrus es-
capar da vigilncia imunolgica do hospedeiro e,
conseqentemente, disseminar-se na populao.
6.1.1 Epidemiologia
Os EIVs se constituem nos principais agentes
de doena respiratria em eqinos em vrios pa-
ses. A enfermidade passou a ser diferenciada das
demais viroses respiratrias de eqdeos a partir
de 1956, quando o vrus A/equi/Prague/1/56
(H7N7) foi isolado, pela primeira vez, durante
uma epizootia na Europa Central. Posteriormen-
te, em 1963, um segundo vrus foi isolado nos Es-
tados Unidos e foi classicado como H3N8 (A/
equi/Miami/2/63). Desde ento, vrios surtos
relacionados ao EIV, principalmente ao subtipo
H3N8, tm sido descritos em cavalos, mulas e as-
nos em diversas regies, com exceo de alguns
pases, como Austrlia, Nova Zelndia e Islndia,
que permanecem livres da enfermidade.
As evidncias dos casos de inuenza eqi-
na, nos ltimos 20 anos, indicam que o subtipo
H7N7 est presente na populao em nveis mui-
to baixos ou pode at mesmo ter sido extinto. No
entanto, a maioria dos pases continua inserindo
este subtipo na formulao das vacinas, uma vez
736 Captulo 28
que variantes antignicas do vrus poderiam oca-
sionar epizootias de grandes propores.
A introduo e o uso extensivo de vacinas
inativadas na Amrica do Norte e na Europa, no
nal da dcada de 1960, reduziram a morbidade
e severidade da doena. Entretanto, a infeco
no foi controlada com sucesso. Quando uma
nova variante antignica originada, epizootias
graves ocorrem e so caracterizadas pela rpida
disseminao e por surtos explosivos, envolven-
do at 98% dos animais susceptveis expostos.
Eqinos de todas as idades so susceptveis
infeco pelo EIV, principalmente aqueles que
no tenham sofrido exposio prvia ao agente
ou que no tenham sido vacinados. No entanto,
a enfermidade tem maior prevalncia em ani-
mais com idade inferior a dois anos. Alm disso,
a enfermidade aparece com maior freqncia em
animais que so transportados por longas distn-
cias ou connados em locais pouco ventilados. O
transporte e a aglomerao dos animais em locais
escuros, com pouca ventilao, favorecem a ocor-
rncia da enfermidade.
A enfermidade caracteriza-se pela alta mor-
bidade e baixa mortalidade. A transmisso do
vrus ocorre pelo contato direto ou indireto en-
tre animais ou por meio de aerossis contendo
partculas vricas infecciosas. Eqinos em fase
de convalescena continuam excretando o vrus
nas secrees nasais por um perodo de at 10
dias. As epizootias surgem quando um ou mais
animais em fase subclnica (ou de incubao) ou
convalescente so introduzidos em uma popula-
o susceptvel. A severidade do surto depende
das caractersticas antignicas do vrus circulante
e do estado imunolgico da populao no mo-
mento da exposio.
Os surtos de inuenza podem ocorrer em
qualquer poca do ano, mas so mais comuns no
outono, inverno e primavera, devido mistura,
connamento e concentrao de animais jovens
para treinamentos, exposies ou para a venda.
O estresse induzido por essas atividades pode
aumentar a susceptibilidade infeco, bem
como, freqentemente, propicia ambientes escu-
ros e pouco ventilados que favorecem a transmis-
so do vrus.
A enfermidade encontra-se amplamente
disseminada na populao eqina do Brasil. As
evidncias da disseminao da infeco pelo EIV
no rebanho eqino brasileiro incluem o isola-
mento e a deteco de anticorpos contra o vrus.
O EIV j foi isolado de eqinos com doena res-
piratria em vrios estados brasileiros, incluindo
So Paulo, Rio de Janeiro, Mato Grosso do Sul
e Rio Grande do Sul. A caracterizao desses
isolados demonstrou que todos pertencem ao
subtipo Equi-2 ou H3N8. Alm de isolamentos,
evidncias sorolgicas da infeco conrmam a
ampla disseminao do agente no rebanho eqi-
no brasileiro. Estudos sorolgicos realizados no
Rio Grande do Sul, no Par e no Rio de Janeiro
demonstram prevalncias de 65,7, 35,79 e 42,06%,
respectivamente. Alm disso, um estudo sorol-
gico, realizado com amostras provenientes das
regies Norte, Nordeste, Sudeste e Sul, demons-
trou altos ndices de soropositividade em todas
as regies amostradas.
6.1.2 Patogenia, patologia e
sinais clnicos
A infeco natural pelo EIV ocorre pela ina-
lao de partculas vricas presentes em aerossis,
por contato direto ou indireto. A maioria das par-
tculas inaladas deposita-se sobre a camada de
muco que recobre as vias areas superiores. No
entanto, algumas partculas conseguem penetrar
mais profundamente e atingem as vias areas in-
feriores. A infeco das clulas do epitlio ciliar
e a replicao viral nessas clulas levam sua
destruio e conseqente liberao de partculas
vricas infecciosas. A prognie viral se dissemi-
na pelo trato respiratrio superior, incluindo os
seios nasais, a nasofaringe, a faringe e a traquia.
A superfcie epitelial dessas regies torna-se des-
camada e sem clios. Conseqentemente, alguns
receptores so estimulados, causando a hiperse-
creo das glndulas serosas presentes na sub-
mucosa, prejudicando a funo de proteo do
epitlio muco-ciliar. Essas alteraes permitem
a invaso por patgenos oportunistas, como o
Streptococcus zooepidemicus ou Pasteurella spp, e,
conseqentemente, a complicao da enfermida-
de.
A infeco das clulas do epitlio respiratrio
leva hiperemia, edema, necrose, descamao e
eroses focais no epitlio. Alm disso, ocorre pro-
duo de um exsudato rico em protenas nas vias
areas e nos alvolos. A interrupo da proteo
muco-ciliar resulta em falha nos mecanismos de
limpeza e, conseqentemente, no acmulo de se-
crees. A funo macrofgica alveolar tambm
ca prejudicada. A regenerao do epitlio respi-
ratrio leva pelo menos trs semanas, mesmo na
ausncia de infeces bacterianas secundrias.
A severidade e a durao dos sinais clnicos
dependem da dose e virulncia da cepa viral, das
condies ambientais e de manejo, e das defesas
do hospedeiro, principalmente da imunidade
prvia. O perodo de incubao geralmente de
um a trs dias, podendo variar de 18 horas a sete
dias. O aparecimento dos sinais sbito, sendo
a hipertermia (39,1-41,7C) o primeiro sinal cl-
nico a ser evidenciado. Essa febre pode ser bif-
sica, com durao de um a cinco dias em casos
no-complicados. A fase febril freqentemente
acompanhada por letargia, fraqueza, anorexia,
secreo nasal serosa e tosse seca. Alm disso, so
descritos secreo lacrimal, aumento de volume
dos linfonodos da cabea, edema dos membros,
laminite e pneumonia. Animais com infeces
no-complicadas geralmente recuperam-se em
duas a trs semanas. A recuperao dos animais
est diretamente relacionada com o grau de con-
taminao secundria e com o tipo de repouso ao
qual o animal submetido durante a enfermida-
de.
6.1.3 Imunidade
Uma caracterstica importante do EIV au-
sncia de proteo cruzada entre os dois subtipos,
H7N7 e H3N8. Essa caracterstica torna necess-
ria a incluso dos dois subtipos na formulao de
vacinas. A durao da imunidade protetora con-
ferida pela vacinao de trs a quatro meses, de-
pendendo do histrico prvio de vacinao e da
dose do desao. No entanto, mesmo animais que
tenham sido regular e recentemente vacinados
podem se infectar e excretar o vrus. As variaes
antignicas dos vrus de campo podem reduzir a
qualidade e a durabilidade da imunidade confe-
rida pela infeco natural ou pela vacinao, pois
anticorpos cruzados neutralizam o vrus menos
ecientemente do que anticorpos contra o vrus
homlogo.
Tem sido demonstrado que a infeco pelo
EIV induz resposta celular por linfcitos T cito-
txicos (CTL) e resposta humoral no trato respi-
ratrio de forma semelhante observada na in-
uenza humana.
6.1.4 Diagnstico
Surtos de doena respiratria em eqinos
podem ser causados por vrios agentes infeccio-
sos, incluindo o vrus da arterite, os herpesvrus,
rinovrus, adenovrus, alm de bactrias como
Streptococcus equi, S. zooepidemicus ou S. pneumo-
niae. O diagnstico presuntivo da inuenza eqi-
na, com base nos sinais clnicos e na rpida dis-
seminao, deve ser conrmado pelo isolamento
do vrus ou por de testes sorolgicos.
Tradicionalmente, a conrmao laborato-
rial de uma suspeita clnica de inuenza tem sido
realizada pelo isolamento do vrus a partir de
secrees nasais ou por testes sorolgicos. Atual-
mente existe uma ampla variedade de testes labo-
ratoriais de deteco de antgenos, cido nuclico
e clulas infectadas, que permitem a obteno do
diagnstico mais rapidamente. O isolamento do
EIV realizado pela inoculao das amostras de
secreo nasal na cavidade alantide ou amniti-
ca de ovos embrionados de galinha. O vrus pode
ser adaptado para replicar em cultivos de clulas,
incluindo de origem canina (MDCK), mas o isola-
mento inicial geralmente feito em ovos embio-
nados. Nos ovos inoculados, a presena do vrus
demonstrada pela prova de hemaglutinao,
utilizando-se eritrcitos de galinha. Para a conr-
mao da etiologia e caracterizao do vrus iso-
lado, realiza-se a prova de HI, utilizando-se um
soro imune especco.
Testes imunoenzimticos (ELISA) de captu-
ra tm sido utilizados no diagnstico da inuen-
za humana e esto sendo padronizados para a
deteco rpida de antgenos do vrus A/equi/2
em suabes nasais de animais suspeitos. A tcnica
de IFA tambm tem sido empregada para a de-
teco de antgenos do EIV em clulas do trato
respiratrio, obtidas por raspado nasal ou lava-
do traqueal. Alm desses mtodos de deteco
de antgenos, a reao em cadeia da polimerase
(PCR) tambm vem sendo utilizada para a detec-
o do cido nuclico viral.
738 Captulo 28
Os mtodos sorolgicos tambm so mui-
to usados para a conrmao do diagnstico de
inuenza. No entanto, a necessidade de coleta
de soro pareado com intervalos de 14 a 21 dias,
constitui-se em uma das principais limitaes
para a sua utilizao. Os testes utilizados para a
deteco de anticorpos contra o EIV incluem a HI,
xao do complemento (CF), soro neutralizao
(SN) e ELISA. O teste de HI o teste padro para
a deteco de anticorpos contra o EIV e permite
a diferenciao entre os dois subtipos do vrus,
uma vez que os anticorpos inibidores da hema-
glutinao so especcos para cada subtipo do
vrus.
A natureza altamente infecciosa e contagiosa
do EIV requer a realizao de quarentena de todos
os animais com sinais respiratrios por pelo me-
nos sete semanas para prevenir uma maior disse-
minao da infeco. Particular ateno deve ser
dada aos potros e animais jovens, que devem ser
mantidos afastados dos animais doentes. Alm
disso, necessrio que os equipamentos utiliza-
dos para a manipulao dos animais doentes no
sejam utilizados nos animais sadios. Os tratado-
res e veterinrios devem realizar o tratamento e
a manipulao dos animais doentes aps terem
manejado os animais sadios, evitando o contato
com os eqinos saudveis aps terem entrado em
contato com os animais doentes.
A preveno tambm pode ser feita pela
vacinao com vacinas inativadas. No entanto, a
imunidade conferida de curta durao e refor-
os freqentes so necessrios. Alguns estudos
demonstram que, no mnimo, 70% de uma po-
pulao precisa ser vacinada para que epidemias
da enfermidade sejam prevenidas. Tipicamente,
a gerao de vacinas que est disponvel atual-
mente consiste de vacinas com vrus inativado,
contendo adjuvantes para potencializar a imuno-
genicidade. Usualmente a mistura de vrus inclui
uma cepa viral do subtipo equi-1 (H7N7) e outra
do subtipo equi-2 (H3N8). A razo para incluir
mltiplas cepas na formulao das vacinas a
possibilidade de mutaes nas cepas circulantes,
resultando em variantes antignicas.
Os programas de vacinao para a inuen-
za eqina consistem em uma primeira vacinao,
seguida por uma segunda dose com trs a seis
semanas de intervalo. Alm disso, so necess-
rios reforos semestrais ou anuais, dependendo
das recomendaes do fabricante. Os surtos de
inuenza eqina no so sazonais, como na in-
uenza humana, mas so freqentemente associa-
dos a feiras e competies. Por isso, a revacinao
dos animais antes desses eventos recomenda-
da. As guas gestantes devem ser vacinadas um
ms antes do parto, e os potros devero receber
a primeira dose da vacina aps o decrscimo da
imunidade colostral, por volta dos quatro a seis
meses de idade.
Novas tecnologias esto sendo desenvolvi-
das para resolver o problema da curta durao da
imunidade conferida pelas vacinas inativadas. Na
Europa, vacinas contendo complexos imunoesti-
mulantes (ISCOMs) foram desenvolvidas, mas,
aps quatro anos de uso e testes a campo, no
foi demonstrada a sua superioridade em relao
s vacinas convencionais. Vacinas vivas atenua-
das, algumas obtidas por recombinao gentica,
tambm esto em fase de pesquisa e testes.
6.2 Inuenza suna
A inuenza suna (swine inuenza, SI) uma
enfermidade respiratria, infecciosa e aguda, cau-
sada pelo vrus da inuenza suno tipo A (SIV).
Os sinais clnicos caractersticos so: tosse, disp-
nia, febre, anorexia e prostrao, seguidos de r-
pida recuperao. A gravidade da infeco varia
de acordo com a cepa viral, idade do animal, con-
dio imunolgica e presena de infeces con-
comitantes. Os sinais clnicos e leses geralmente
apresentam rpida regresso, mas casos de pneu-
monia fatal podem ocorrer ocasionalmente.
A primeira descrio da doena data de
1918, no Meio-Oeste dos Estados Unidos, na
mesma poca em que ocorria a maior pandemia
de inuenza humana, responsvel pela morte
de mais de 20 milhes de pessoas. A doena em
sunos apresentava muitas semelhanas clnicas
e patolgicas com a inuenza humana. O iso-
lamento do agente foi realizado em 1930 e, nos
anos seguintes, foram realizados vrios estudos
sobre imunidade, transmisso, hospedeiros, rela-
es antignicas com os outros vrus da inuen-
za, formas de manuteno na natureza, entre ou-
tros. At 1975 existiam poucos relatos da doena
em outros pases alm dos Estados Unidos, mas a
partir dessa poca, vrios casos de doena clnica
e rebanhos com sorologia positiva foram descri-
tos em diferentes pases.
Os sunos so susceptveis infeco com
diferentes variantes do SIV, incluindo os vrus
H1N1, clssicos de inuenza suna circulantes
nos Estados Unidos desde o incio do sculo XX.
A espcie suna tambm susceptvel ao H1N1
recombinante (ressortante), que contm glicopro-
tenas de superfcie do vrus clssico e protenas
internas de vrus mais recentes como o H3N2 ou
H1N2. Outros subtipos isolados de sunos in-
cluem o H1N7 e H9N2.
A imunidade contra o H1N1 no protege
contra o H3N2 e caractersticas antignicas do
H1N1 clssico e das variantes de H1N1 de aves
indicam que esses vrus permanecem conserva-
dos desde sua introduo na populao suna. Os
H3N2 so vrus menos estveis, e isolados mais
recentes apresentaram algumas variaes antig-
nicas quando comparados ao prottipo. O gene
da HA do SIV no apresenta muita variao an-
tignica e uma das hipteses para esse fato a
falta de presso de seleo, j que existem sempre
muitos sunos sem imunidade prvia ao agente
na populao susceptvel.
A regio globular da HA do vrus respon-
svel pela ligao aos receptores celulares AS ou
acetil-neuramnico. O tipo de ligao do AS com a
galactose na molcula de glicolipdio difere entre
os hospedeiros dos vrus da inuenza, e o tipo de
ligao o maior determinante de especicidade
desses vrus. Em aves, o AS est ligado cadeia
de acar na posio 2,3, e os vrus isolados de
aves possuem uma HA com alta anidade para
este tipo de ligao. Na traquia de humanos, a
ligao encontrada do tipo 2,6, e os vrus que
infectam humanos tm preferncia por esse tipo
de ligao. Os sunos possuem, em seu trato res-
piratrio, molculas de AS tanto em ligao 2,3
como 2,6, e, por isso, podem potencialmente ser
infectados por vrus avirios e humanos. Por essa
caracterstica, a espcie suna considerada o re-
cipiente de ressortimento entre vrus avirios e
de mamferos.

6.2.2 Epidemiologia
O isolamento do vrus H1N1 (A/swine/
Iowa/15/30) e estudos sorolgicos retrospec-
tivos em humanos sugerem que o vrus de su-
nos antigenicamente semelhante ao vrus de
humanos, responsvel pela pandemia de 1918.
Estudos recentes indicam que esse vrus se origi-
nou de um vrus avirio, pois todos os seus oito
segmentos genmicos so muito semelhantes aos
encontrados em vrus de aves. A dvida que per-
manece a de quais hospedeiros foram infecta-
dos primeiro: sunos ou humanos? Desde 1918 o
agente permanece circulante na populao suna
e responsvel por doena em rebanhos sunos
na Amrica do Norte.
O vrus circula na populao suna ao lon-
go do ano, mas os surtos so mais freqentes no
nal do outono e inverno. O aparecimento da
doena est associado principalmente com a mo-
vimentao de animais e introduo de animais
nos rebanhos. A principal forma de transmisso
a direta, pela via nasofarngea, por contato com
secrees nasais de animais na fase febril da in-
feco. Em regies com alta densidade de sunos,
a disseminao aergena pode ser importante,
especialmente nas populaes sem imunidade. A
morbidade pode chegar a 100%, mas a mortalida-
de baixa (1% ou menos).
O H1N1 clssico o subtipo mais comumen-
te identicado e estima-se que 25% da populao
de sunos do mundo possua sorologia positiva
para este agente. Nos Estados Unidos, 30% dos
sunos apresentam sorologia positiva para o sub-
tipo H1N1 e, na regio Centro-Norte daquele
pas, 51% dos sunos so positivos. Na Blgica,
entre 2001 e 2003, foram identicadas matrizes
com anticorpos para dois (48%) ou trs subtipos
virais (31%) de inuenza suna. Outros subtipos
j relatados em sunos incluem o H9N2, H1N2
(derivado de vrus de aves), H1N7 (derivado de
vrus de humanos e eqinos) e H4N6. O H1N1
740 Captulo 28
foi isolado de sunos no Japo em 1978; na Fran-
a, em 1987 e 1988, e na Gr-Bretanha, em 1994.
O H3N1 e H1N7 foram isolados na Gr-Bretanha
em 1990. No Brasil, at o momento, no existem
casos conrmados de inuenza suna.
A infeco de sunos com o H3N2 de huma-
nos tambm tem sido demonstrada. O vrus A/
Hong Kong/68 foi isolado de sunos no Taiwan,
logo aps seu aparecimento na populao huma-
na.
A origem dos isolados de sunos difere entre
os continentes. O H1N1, predominante na Euro-
pa, teve origem em vrus de aves e foi introduzido
por patos selvagens na populao suna em 1979.
As diferenas entre os vrus tm implicaes pr-
ticas para a realizao do diagnstico e controle,
e, portanto, as cepas utilizadas para diagnstico
na Europa e nos Estados Unidos so diferentes.
Em geral, os vrus de inuenza de sunos
no infectam humanos. No entanto, j foram re-
latados alguns casos de infeco de pessoas que
trabalhavam diretamente com esses animais. J
foram descritos aproximadamente 14 episdios
de inuenza por vrus sunos em humanos, com
seis mortes por pneumonia. A maioria dos casos
foi de pessoas que se infectaram aps contato
prximo com sunos. Em 1976, durante um sur-
to em Nova Jersey, EUA, 500 pessoas adoeceram
com o vrus H1N1, o mesmo identicado em su-
nos na poca. No entanto, nunca foi realmente
provado que os sunos serviram de fonte de vrus
para humanos. Anticorpos contra o SIV foram
identicados em diversos pases, em pessoas que
mantinham contato prximo com sunos, mas a
ocorrncia de doena clnica no freqente. Em
um surto em Wisconsin, EUA, em 1988, foram
identicados casos de humanos infectados e evi-
dncias sorolgicas da transmisso de pacientes
para funcionrios da rea de sade que tiveram
em contato com as pessoas infectadas.
Como os sunos so susceptveis tanto aos
vrus avirios quanto aos vrus humanos, esto
freqentemente envolvidos na transmisso inte-
respcies. Os vrus da inuenza aviria no repli-
cam de forma eciente em clulas de humanos
e primatas, e os vrus de humanos no replicam
bem em clulas de aves. Entretanto, os vrus de
aves e de humanos replicam de forma eciente
em clulas de sunos, por isso a recombinao
pode ocorrer nas clulas da traquia de sunos.
Com a replicao contnua em sunos, alguns
subtipos avirios podem passar a reconhecer os
receptores de clulas humanas. Uma recente des-
coberta demonstrou que no apenas os sunos,
mas tambm os humanos possuem clulas com
os dois diferentes tipos de ligao (2,3 e 2,6).
A ligao 2,6 est presente no trato respiratrio
superior; e a 2,3, no trato respiratrio inferior.
Essa nova descoberta sugere que a transmisso
direta de vrus da inuenza de aves para huma-
nos pode ocorrer sem a utilizao do suno como
intermedirio do ressortimento gentico.
Vrios fatores podem potencialmente limi-
tar a transmisso do SIV de uma espcie para
outra, mas esses fatores no so completamente
conhecidos. As barreiras impostas pela prefe-
rncia de receptores especcos so importantes,
entretanto os mecanismos virais ainda so pouco
conhecidos.

e patologia
Os animais se infectam pela inalao de ae-
rossis ou pelo contato direto ou indireto com
animais ou secrees contaminadas. A infeco
geralmente limitada ao trato respiratrio e vi-
remia raramente detectada. A replicao viral
j foi demonstrada na mucosa nasal, tonsilas, tra-
quia, linfonodos traqueobronquiais e pulmes.
Clulas positivas para antgenos virais so encon-
tradas no epitlio bronquial aps duas horas de
infeco, e, aps 16 horas, podem ser observadas
grandes reas infectadas no epitlio bronquial.
Antgenos virais tambm podem ser detectados
nos septos alveolares aps quatro horas de infec-
o, e, aps 24 horas, aparecem numerosos focos
de infeco nas clulas dos alvolos e ductos.
Pouco se sabe sobre a patogenia da inuen-
za suna, mas estudos sugerem que a produo
de citocinas, como o fator de necrose tumoral
(TNF-), interferon- (IFN-), e as interleucinas
1 e 6 (IL-1 e IL-6) contribuam para os efeitos in-
amatrios observados nos pulmes. Os sinais
de febre, anorexia e de inamao pulmonar so
mais evidentes aps 24 horas de infeco, pero-
do que coincide com o pico de replicao viral e
produo de citocinas.
Estudos de hibridizao in-situ demonstram
que o vrus H1N2 pode ser detectado nos mes-
mos tecidos que apresentam leses. Os pulmes
so, provavelmente, os principais stios de repli-
cao do SIV. O RNA viral pode ser detectado
nas clulas epiteliais dos brnquios, bronquolos,
pneumcitos e macrfagos alveolares e intersti-
ciais, e a distribuio varia com o curso e fase da
infeco.
A deteco do H1N2 no epitlio dos brn-
quios e bronquolos sugere que as clulas epite-
liais desses locais representem os stios iniciais
de infeco, e que a replicao viral induz leso
nesses tecidos, impedindo a ao dos mecanis-
mos de defesa muco-ciliar. A associao de pa-
tgenos, como o vrus da sndrome reprodutiva
e respiratria dos sunos (PRRSV), Micoplasma
hyopneumoniae, Haemophilus spp e Pasteurella mul-
tocida, produz doena respiratria associada com
alta mortalidade.
Os sinais clnicos observados na inuenza
suna incluem anorexia, prostrao e febre. Tam-
bm so observados animais com dispnia e he-
sitao em se movimentar. A movimentao dos
animais pode ser acompanhada de tosse grave.
A perda de peso pode ser elevada, mas a morta-
lidade geralmente baixa, exceto em casos de in-
feces concomitantes. Os animais se recuperam
aps cinco a sete dias, e os sinais clnicos geral-
mente desaparecem de forma sbita.
Alm dos sinais clnicos tpicos, podem ocor-
rer infeces subclnicas. Fatores como imunida-
de, idade, presso de infeco, infeces intercor-
rentes e condies climticas podem determinar
a severidade clnica da infeco. No existem
evidncias de diferentes graus de virulncia em
infeces com diferentes subtipos virais.
As leses macroscpicas da forma no-com-
plicada da doena so geralmente de pneumonia
viral. As alteraes geralmente so limitadas aos
lobos apical e cardaco dos pulmes, entretanto,
em casos graves, mais de 50% dos pulmes po-
dem ser afetados. Pode ser evidenciado edema
interlobular, e as vias areas podem estar preen-
chidas por exsudato brinoso tingido de sangue.
Pode, ainda, ocorrer aumento de volume dos lin-
fonodos mediastnicos e bronquiais.
As alteraes histolgicas mais freqentes
so degenerao e necrose das clulas epiteliais
dos brnquios e bronquolos, que podem estar
preenchidos por exsudato. Tambm pode ocor-
rer hiperemia e dilatao dos capilares, com in-
ltrado inamatrio linfoistioplasmocitrio in-
tersticial. Essas leses so mais acentuadas com
a variante H1N1.
6.2.4 Imunidade
Nveis elevados de anticorpos tm sido de-
tectados at seis meses aps a infeco. A relao
entre a quantidade de anticorpos no soro ou nas
vias respiratrias e a resistncia infeco no
bem estabelecida, ocorrendo muitas variaes in-
dividuais dos sunos aps a exposio.
Os anticorpos maternos contra o vrus per-
sistem por dois a quatro meses, variando de acor-
do com o nvel inicial. Sunos lactentes com anti-
corpos maternos podem se infectar e excretar o
vrus, mas a gravidade dos sinais clnicos e a taxa
de excreo viral so inversamente proporcionais
ao nvel de anticorpos maternos.
Aps a queda na taxa de anticorpos ma-
ternos, os sunos podem se infectar novamente,
eliminar o vrus e apresentar sinais clnicos da
doena.
6.2.5 Diagnstico
Surtos de doena respiratria aguda em su-
nos, envolvendo um nmero elevado de animais,
devem ser necessariamente investigados para
inuenza. O diagnstico denitivo requer o iso-
lamento e identicao do vrus ou deteco de
anticorpos especcos contra o SIV.
O isolamento viral pode ser realizado a
partir de suabes, coletados do muco nasal ou do
muco da faringe. A fase ideal para a coleta dos
suabes o perodo febril, pela maior possibili-
dade de deteco do vrus. Os suabes devem ser
acondicionados em tubos e enviados ao labora-
trio no mximo 48 horas aps a coleta, em meio
de transporte apropriado. O vrus tambm pode
ser isolado do pulmo de animais que morreram
ou foram submetidos eutansia na fase aguda
da doena.
742 Captulo 28
Ovos de galinha embrionados com 10 dias
so muito utilizados para o isolamento de in-
uenza tipo A. O vrus geralmente no mata o
embrio, e o lquido alantide deve ser coletado
aps 72 horas de incubao e testado para a pre-
sena de atividade hemaglutinante com eritrci-
tos de galinha. O subtipo pode ser identicado
pela tcnica de HI.
Podem ainda ser utilizadas a imunouo-
rescncia direta (IFD) para tecidos pulmonares,
imunouorescncia indireta (IFI) em clulas do
epitlio nasal, imunoistoqumica em tecido xa-
dos (IHQ), ELISA e reao em cadeia da polime-
rase acoplado transcrio reversa (RT-PCR) em
tecidos e/ou clulas descamativas do epitlio.
Testes sorolgicos para diagnstico de infec-
o pelo SIV consistem em sorologia pareada pela
tcnica de HI, com uma coleta durante a fase agu-
da e a segunda trs a quatro semanas aps, para
investigar o aumento do nvel de anticorpos.
No existe tratamento especco para a do-
ena. Recomenda-se manter os animais em local
limpo e seco e no os transportar durante a fase
aguda da enfermidade. Expectorantes e antimi-
crobianos podem ser utilizados para a preveno
de infeces bacterianas secundrias. As medi-
das de biossegurana auxiliam na preveno da
introduo do SIV na populao suna. Como
a transmisso do vrus pode ocorrer entre dife-
rentes espcies, as medidas de biossegurana in-
cluem evitar o contato com outras espcies, espe-
cialmente aves.
Existe uma grande variao na resposta de
anticorpos e na proteo de sunos aps a vaci-
nao. Existem vacinas inativadas com os vrus
H1N1 e H3N2 nos Estados Unidos e Europa,
onde a vacinao contra o SIV uma prtica co-
mum. Os sunos devem ser vacinados aps os
10 meses de idade, pois, nos primeiros meses de
vida, pode ocorrer a interferncia de anticorpos
maternos, caso a matriz tenha sido vacinada ou
infectada previamente.
6.3 Inuenza aviria
O primeiro relato da inuenza aviria data
de 1878, na Itlia, mas o vrus s foi identica-
do em 1955. As manifestaes clnicas induzidas
pela infeco so principalmente respiratrias e
gastrintestinais. No entanto, o vrus pode produ-
zir desde infeco assintomtica at uma enfermi-
dade sistmica ou neurolgica, que pode resultar
em taxas de mortalidade de at 100%. No incio,
apenas surtos da forma severa da doena eram
registrados, mas, posteriormente, observou-se
que poderia ocorrer uma forma mais leve da do-
ena causada pelo mesmo vrus.
Atualmente sabe-se que existem cepas com
dois graus distintos de patogenicidade. As cepas
conhecidas como inuenza aviria altamente
patognicas (IAAP) so responsveis pela for-
ma severa da doena, que importante na avi-
cultura comercial de todo o mundo. Os vrus de
patogenicidade mdia (IAMP) causam infeces
que variam desde assintomticas at doena res-
piratria e gastrentrica. Na literatura cientca,
os IAMP so freqentemente denominados como
de baixa patogenicidade. No entanto, neste cap-
tulo, ser utilizado o termo ocialmente utilizado
pela OIE, isto , inuenza aviria de patogenici-
dade mdia.
Os vrus da inuenza aviria so agentes
infecciosos de grande interesse tambm para a
sade pblica por originarem vrus de alta viru-
lncia para humanos. A seguir, sero descritos al-
guns aspectos relacionados com vrus da inuen-
za aviria e da enfermidade em aves.

O vrus da inuenza das aves pertence ao
gnero Inuenza A. Como os demais vrus desse
gnero, possuem vrions pleomrcos, envelopa-
dos e RNA segmentado como material gentico.
As diferenas estruturais observadas entre as ce-
pas de alta e mdia patogenicidade esto concen-
tradas principalmente na HA. As cepas de alta
patogenicidade apresentam um nmero maior
de aminocidos bsicos na regio de clivagem da
HA0 em HA1 e HA2. Outra diferena que pode
ter conseqncias na patogenicidade das cepas
a ausncia de stios de glicosilao de amino-
cidos, que so geralmente encontrados nessa re-
gio em cepas de patogenicidade mdia.
6.3.2 Epidemiologia
Os vrus da inuenza aviria que infectam
aves domsticas so, em grande parte, remota-
mente originrios de aves silvestres. O vrus j
foi detectado em 100 espcies, pertencentes a 26
diferentes famlias e pelo menos 12 ordens. As
aves silvestres aquticas classicadas na famlia
Anatidae, ordem Anseriformes, so citadas como os
principais reservatrios do vrus na natureza. A
transmisso provavelmente ocorra pela transfe-
rncia do vrus presente em fezes contaminadas
das aves silvestres para aves domsticas, meca-
nicamente, atravs de outros animais, humanos,
alimentos ou gua. Outras fontes de infeco so
sunos infectados, aves de estimao ou aves do-
msticas endemicamente infectadas.
O vrus excretado em grandes quantida-
des nas fezes e nas secrees respiratrias das
aves infectadas durante o perodo clnico e por
um tempo varivel aps a recuperao. Em ga-
linhas, este perodo pode se estender por at 36
dias aps a infeco.
A transmisso horizontal a forma mais co-
mum de transmisso, ocorrendo de aves infecta-
das para aves susceptveis atravs de fmites ou
por via aergena. O contato com equipamentos,
roupas ou sapatos contaminados com fezes tam-
bm so importantes fontes de infeco. A trans-
misso por via aergena ocorre entre animais da
mesma criao ou, possivelmente, entre avirios
prximos, embora esta via no seja considerada a
mais importante.
Os 16 subtipos de HA e os nove subtipos
de neuraminidase (NA) j foram identicados
em aves silvestres ou domsticas em diferentes
combinaes. Os isolados mais recentes que cau-
saram doena em aves domsticas foram: H5N2,
H7N1, H7N3, H7N7, H9N2 e H5N1. At o mo-
mento, apenas os subtipos H5 e H7 esto associa-
dos com o surgimento de cepas de alta patogeni-
cidade, enquanto os demais subtipos so isolados
de surtos da doena causados por cepas de m-
dia patogenicidade. No entanto, deve-se ressal-
tar que os subtipos H5 e H7 podem tambm estar
envolvidos em surtos de mdia patogenicidade.
Alguns surtos causados por vrus desses dois
subtipos foram inicialmente de mdia patogeni-
cidade e, aps a circulao por algum tempo na
populao, o vrus sofreu modicaes genticas
e passou a apresentar alta patogenicidade.
Vinte e quatro surtos da forma altamente
patognica da doena foram descritos desde 1959
em todo o mundo, sendo que 11 tiveram, como
agente etiolgico, um vrus do subtipo H5, e 13
foram causados por um subtipo H7.
Dentre os vrus de mdia patogenicidade,
o H9N2 merece considerao especial por estar
circulando de forma endmica em vrios pases
desde a metade dos anos 1990. Entre os anos de
1994 e 2004, este vrus foi detectado na Alema-
nha, Itlia, Irlanda, frica do Sul, Estados Unidos
e Coria. Recentemente surtos de inuenza pelo
H9N2 foram descritos em galinhas no Oriente
Mdio, envolvendo o Ir, Arbia Saudita, Israel,
Jordnia, Kuwait, Lbia, Lbano, Iraque e outros
pases da sia, como China, Coria e Paquisto.
As cepas do vrus da inuenza que circu-
lam entre aves silvestres so de mdia patogeni-
cidade. A transformao de uma cepa de mdia
patogenicidade em cepa de alta patogenicidade
parece ocorrer nas aves domsticas logo aps a
sua introduo a partir de espcies silvestres. Os
mecanismos que induzem esta transformao so
complexos e no totalmente esclarecidos, mas es-
to ligados a alteraes observadas na HA aps
a aquisio de mltiplos aminocidos bsicos e
perda de stios de glicosilao. Eventos de mu-
tao ou recombinao parecem estar associados
com essas modicaes e, possivelmente, mais
de um mecanismo possa contribuir para esta al-
terao de patogenicidade.
No Brasil, no h registro recente de diag-
nstico clnico ou laboratorial da inuenza em
aves comerciais. O subtipo H3 foi recentemente
isolado de aves silvestres nos estados do Amazo-
nas e Rio Grande do Norte, entretanto no exis-
tem evidncias de transmisso desse vrus para
aves domsticas.
744 Captulo 28
e patologia
A patogenia da inuenza aviria mais co-
nhecida em aves de produo, como galinhas e
perus. A inuenza das aves conhecida como ti-
picamente de manifestaes clnicas respiratrias
e gastrintestinais. Entretanto, os sinais clnicos
podem variar amplamente, dependendo da cepa
infectante. A patogenicidade de cada isolado do
vrus da inuenza tambm pode variar de acordo
com a espcie infectada. J foram descritos isola-
dos de campo que no causaram doena em gali-
nhas, mas causaram doena grave em perus.
A infeco ocorre por inalao ou ingesto de
material contaminado, e o perodo de incubao
de um a trs dias. Aps a penetrao, a replica-
o das cepas de mdia patogenicidade restrita
s clulas dos tratos respiratrio e intestinal. As
leses causadas pelo vrus podem facilitar infec-
es bacterianas secundrias. Esta predisposio
pode estar ligada a uma depresso nas funes
dos macrfagos, induzida pela replicao viral.
As aves afetadas manifestam leses inamatrias
no trato respiratrio, principalmente nos seios
nasais, edema e congesto na mucosa traqueal
com exsudato seroso ou caseoso e, eventualmen-
te, hemorragias. Pode ocorrer tambm aero-sacu-
lite e, se houver infeco bacteriana secundria, o
quadro pode evoluir para uma broncopneumo-
nia brinopurulenta. Outras leses possveis in-
cluem enterite, leses inamatrias nos ovidutos
e regresso dos ovrios.
A infeco por cepas altamente patognicas
cursa com a disseminao sistmica do vrus e
sua replicao em vrios rgos, com conseqen-
te aparecimento de leses disseminadas. A pre-
sena de mltiplos resduos bsicos na regio da
clivagem da HA das cepas altamente patognicas
permite que a clivagem seja realizada por enzi-
mas encontradas em vrios tecidos. Isso facilita
a propagao dessas cepas por diversos rgos e
tecidos, enquanto a enzima necessria para a cli-
vagem da HA nas cepas de mdia patogenicida-
de somente encontrada nos tratos respiratrio
e intestinal.
As leses causadas pelas cepas altamente
patognicas podem apresentar variaes, mas
edema da cabea e pescoo, necrose na crista e
barbela, hemorragias e focos de necrose em ml-
tiplos rgos viscerais so freqentemente des-
critos. Aves que apresentam a forma superaguda
da doena podem morrer mesmo antes de apre-
sentar leses.
A infeco de aves domsticas com cepas de
baixa virulncia pode causar desde infeces as-
sintomticas, at manifestaes severas de doen-
a, afetando os tratos respiratrio, intestinal e uri-
nrio. Nas aves doentes, pode-se observar tosse,
espirro, estertores, lacrimao excessiva, queda
na produo de ovos, perda do apetite e diarria.
Os sinais clnicos podem ser mais severos se hou-
ver infeco secundria com outros vrus ou bac-
trias. As cepas de alta virulncia (HPAI) podem
causar morte de galinhas e perus sem outras ma-
nifestaes clnicas. Nas aves que sobrevivem por
algum tempo, podem ser observados diferentes
quadros clnicos. Entre esses, pode-se citar a per-
da do apetite, a queda de postura, espirros, tosse,
estertores, diarria, distrbios de origem nervosa
(como tremores da cabea e pescoo), torcicolo e
opisttono, edema da cabea e pescoo e cianose
da pele nas regies sem penas.
6.3.4 Imunidade
O principal mecanismo efetor envolvido na
proteo das aves contra o vrus da inuenza
representado pelos anticorpos neutralizantes. Os
anticorpos so produzidos contra vrias prote-
nas estruturais e no-estruturais, mas apenas os
anticorpos contra as protenas externas do vrus,
HA, NA e M2 possuem atividade neutralizante.
A resposta humoral de aves contra o vrus da in-
uenza ocorre de forma similar ao que ocorre com
outros vrus nesta espcie e com o mesmo vrus
em outras espcies. Aproximadamente cinco dias
aps a infeco, pode-se detectar anticorpos es-
peccos da classe IgM no soro e, posteriormente,
ocorre o aparecimento de IgG (IgY). A resposta
humoral ocorre tambm nas mucosas, mas pouco
tem sido estudado sobre este mecanismo.
O principal alvo da resposta imune humo-
ral a HA, em cuja estrutura foram identica-
dos pelo menos cinco determinantes antignicos
neutralizantes. Uma boa resposta de anticorpos
contra a HA parece ser suciente para a proteo
contra a doena, embora a presena simultnea
de anticorpos contra a HA e NA aparentemente
induz uma melhor proteo. A infeco ou vaci-
nao com um subtipo de HA ou NA induz neu-
tralizao de outros vrus do mesmo subtipo, mas
no induzem neutralizao ou proteo contra
outros subtipos. Portanto, a proteo espec-
ca para o subtipo. Anticorpos produzidos contra
a nucleoprotena (NP) e a protena M1 tambm
podem ser detectados no soro de aves vacinadas
ou infectadas. Esses anticorpos so utilizados em
testes diagnsticos para a determinao do tipo
de vrus inuenza, mas, por serem direcionados
contra protenas internas, no parecem possuir
papel importante na proteo contra o vrus.
Informaes sobre a resposta imune celular
contra o vrus da inuenza em aves so raras.
Apesar disso, evidncias indiretas demonstram
que este ramo da resposta imune tambm parti-
cipa na proteo contra o vrus. A transferncia
de linfcitos T CD8+ de galinhas inoculadas com
o vrus H9N2 e desaadas com o H5N1 protegeu
os animais contra o desao, indicando que a res-
posta imune celular importante.

6.3.5 Diagnstico
O diagnstico denitivo de inuenza aviria
obrigatoriamente realizado por um laboratrio
de referncia do Ministrio da Agricultura ou r-
go equivalente em cada pas. No Brasil, existem
vrios laboratrios ociais do Ministrio habilita-
dos para realizar o diagnstico.
deteco direta do vrus ou pelo isolamento e
identicao viral a partir do material enviado
para o laboratrio. As amostras preferenciais para
o diagnstico so secrees traqueais e cloacais
coletadas com o auxlio de suabes. Os suabes de-
vem ser transportados em meio estril, acrescido
de antibiticos. As amostras podem ser conser-
vadas a 4C se processadas em at 48 horas aps
a coleta. Aps esse perodo, recomendado que
as amostras sejam estocadas a -70C. As vsceras
de animais mortos tambm devem ser coletadas,
principalmente se houver a suspeita de infeco
com as cepas altamente patognicas. Nesses ca-
sos, traquia, pulmo, sacos areos, intestino,
rim, fgado, corao, sangue, bao e crebro so
os rgos de eleio.
A inoculao do material suspeito em ovos
embrionados de galinha, com posterior identi-
cao por tcnicas sorolgicas, o mtodo de
diagnstico mais comumente utilizado. Com
este objetivo, embries de nove a onze dias de
incubao so inoculados na cavidade alantide.
Setenta e duas horas aps a inoculao, os ovos
embrionados so resfriados a 4C por algumas
horas. O lquido alantide coletado, e a presen-
a do vrus nesse material determinada pela de-
teco de atividade hemaglutinante pelo teste de
hemaglutinao (HA).
Aps a determinao da atividade hemaglu-
tinante, o vrus deve ser identicado com relao
ao seu tipo e subtipo. A identicao do tipo viral
(A, B, C) pode ser realizada atravs do teste de
imunodifuso ou ELISA, ou, ainda, pela deteco
de antgenos virais na membrana crio-alantide
do embrio, atravs das tcnicas de IFA ou IPX.
Para a realizao desses testes, so utilizados an-
ticorpos direcionados para a protena matriz (M)
ou nucleoprotena (NP).
A identicao do vrus em subtipos rea-
lizada pelas tcnicas de inibio da hemaglutina-
o (HI) ou inibio da neuraminidase (NI) com a
utilizao de anticorpos especcos para cada um
dos tipos de HA e NA.
Testes sorolgicos podem ser tambm utili-
zados para a deteco de anticorpos no soro de
aves que foram potencialmente infectadas. Nesse
caso, os testes so aplicados em programas de vi-
gilncia e determinao de prevalncia do vrus
em populaes especcas, e no como diagns-
tico de surtos. Nesses casos, os testes recomenda-
dos so a imunodifuso, ELISA, HI e NI.
Recentemente, a tcnica de transcrio re-
versa acoplada reao de polimerase em cadeia
(RT-PCR) tem sido utilizada para a deteco do
genoma viral em amostras clnicas.
A presena do vrus da inuenza tipo A
pode ser conrmada utilizando-se oligonucleo-
tdeos nucleoprotena ou matriz-especcos. A
presena dos subtipos H5 e H7 tambm pode
ser conrmada atravs de oligonucleotdeos H5-
746 Captulo 28
ou H7 especcos. Por meio dessa tcnica e com
posterior seqenciamento dos fragmentos ampli-
cados, possvel diferenciar as cepas de alta e
mdia patogenicidade. A presena de mltiplos
aminocidos bsicos na regio de clivagem da
HA caracteriza as cepas de alta patogenicidade.
Aps o isolamento, os isolados identicados
como vrus da inuenza devem ser testados para
a determinao da sua patogenicidade. A patoge-
nicidade determinada de acordo com protoco-
los utilizados internacionalmente e descritos pela
OIE. Os isolados virais sero considerados de alta
virulncia se: a) induzirem a morte em 75% de
oito aves com idade entre 4-8 semanas; b) induzi-
rem a morte de 75% das aves, mas forem dos
subtipos H5 ou H7 e apresentarem os mltiplos
aminocidos bsicos na regio de clivagem da
hemaglutinina; e c) induzirem a morte de uma a
cinco aves e replicarem em cultivo celular sem a
adio de tripsina.

As medidas de controle e prolaxia adota-
das frente a surtos de inuenza aviria variam
de acordo com a legislao de cada pas. Medi-
das diferenciadas tambm podem ser aplicadas
considerando-se a patogenicidade da cepa in-
fectante. Os procedimentos frente a surtos com
cepas de mdia ou alta patogenicidade podem
ser distintos. Nos pases que enfrentaram essa
situao em perodos recentes, o direcionamento
geral tem sido a eliminao das aves infectadas e
tambm de outras aves em contato. No entanto,
em alguns casos, optou-se pelo controle pelo uso
de vacinao emergencial. A Organizao Inter-
nacional de Epizootias (OIE), Organizao das
Naes Unidas para a Agricultura e Alimentao
(FAO) e Organizao Mundial da Sade (OMS
WHO) apresentam medidas de preveno e
controle da inuenza aviria internacionalmente
nos seus respectivos endereos eletrnicos.
Estudos epidemiolgicos tm demonstrado
que as principais fontes do vrus para as aves do-
msticas so as aves silvestres e, num segundo
momento, as prprias aves domsticas. Portanto,
os pontos principais a serem observados para o
controle dessa enfermidade so: primeiro, evitar
a transmisso do vrus de aves silvestres para
aves domsticas e, segundo, evitar a propaga-
o do vrus entre aves domsticas caso ocorra a
introduo da infeco. De acordo com as reco-
mendaes tcnicas, o controle deve ser realizado
principalmente pelo uso de medidas rigorosas de
biossegurana.
As aves infectadas excretam grande quanti-
dade de vrus pelas fezes e secrees respirat-
rias. A transmisso ocorre principalmente pela
exposio ao material orgnico contaminado, em
equipamentos, gua, alimento, cama, veculos,
roupas e calados de pessoas que esto em conta-
to com os animais. A primeira etapa para evitar a
transmisso do vrus evitar o transporte de aves
infectadas e de material orgnico potencialmente
contaminado. Em caso de surtos, a interdio da
propriedade contaminada um procedimento
compulsrio.
Especialistas chamam a ateno para a rpi-
da adoo de medidas de controle de focos cau-
sados por vrus de mdia patogenicidade como
um dos procedimentos mais importantes para
evitar o surgimento de cepas de alta patogenici-
dade. Como j mencionado, quanto maior for a
circulao do vrus na populao avcola, maio-
res sero as chances de ocorrerem alteraes na
patogenicidade desses vrus.
A vacinao contra a inuenza aviria tem
sido realizada em situaes especcas em alguns
pases, mas a sua aplicao ainda um ponto
muito polmico. O maior argumento contra a va-
cinao comum a outras doenas de animais, ou
seja, a impossibilidade de diferenciao entre ani-
mais vacinados e animais infectados pelo vrus
de campo. Outro forte argumento contra a vaci-
nao de aves o de que algumas vacinas prote-
gem contra os sinais clnicos, mas no protegem
contra a infeco e excreo viral. Neste caso, os
vrus poderiam seguir circulando e propiciar o
surgimento de cepas altamente patognicas.
A proteo vacinal contra o vrus da inuen-
za especca para o subtipo, e qualquer subtipo
pode infectar as aves. Como seria muito difcil
prever o subtipo que ir infectar determinada po-
pulao avcola, a escolha do subtipo a ser inclu-
do na vacina mais um problema que restringe o
uso da vacinao. Existe uma poro signicativa
da comunidade tcnico-cientca que totalmen-
te contra a vacinao de aves, seja pelo risco que
isto poderia representar para humanos, como
pela diculdade de controle dessas medidas.
O uso de vacinao tem sido considera-
do como uma alternativa sob duas condies: a
vacinao proltica e vacinao emergencial.
Segundo alguns especialistas, a vacinao pro-
ltica poderia ser realizada em reas que apre-
sentam alto risco de infeco pelos subtipos H5
e H7 ou, ento, em regies que esto sob risco
de infeco com um subtipo conhecido. Em to-
dos os casos, a vacinao deve ser considerada
como um instrumento a mais a ser aplicado em
conjunto com medidas de biossegurana e com
o monitoramento da evoluo da infeco. Para
erradicar o vrus da inuenza, o sistema de vaci-
nao deve permitir a deteco do vrus de cam-
po em um lote vacinado, caso ele esteja presente.
Isso pode ser atingido utilizando-se tanto vacinas
inativadas convencionais quanto vacinas recom-
binantes. As vacinas inativadas, com o mesmo
subtipo do vrus de campo, permitem a deteco
do vrus de campo atravs da introduo de aves
sentinelas, no-vacinadas, dentro do lote vacina-
do. Estas aves so testadas regularmente para a
deteco de uma eventual soroconverso, o que
indicaria a circulao do vrus de campo naque-
la populao. Esse sistema aplicvel no campo,
mas um pouco impraticvel, uma vez que as
aves sentinelas devem ser marcadas e facilmente
reconhecidas. Esse mtodo foi utilizado na Itlia
e utilizado, atualmente, na vigilncia da popu-
lao de gansos vacinados e de patos na Frana.
Um sistema um pouco mais encorajador
baseado na deteco de anticorpos anti-NS1, que
foi recentemente desenvolvido e pode ser utiliza-
do com todas as vacinas inativadas. Esse sistema
baseado no fato de que a protena NS1 sin-
tetizada apenas durante a replicao viral ativa
e, por isso, raramente presente em vacinas inati-
vadas. As aves vacinadas com essas vacinas iro
desenvolver anticorpos apenas depois da expo-
sio ao vrus de campo. Testes em campo esto
em andamento em diferentes circunstncias, e
os resultados precisam ser validados antes desse
sistema ser recomendado.
At agora, o nico sistema que permite a de-
teco do vrus de campo na populao vacinada
que resulta na erradicao baseia-se na vacinao
heterloga e conhecido como DIVA (differentia-
ting infected from vaccinated animals). Esse sistema
foi desenvolvido para os programas de erradica-
o das diferentes cepas de vrus de mdia pa-
togenicidade do subtipo H7. A vacina utilizada
contm o vrus com a mesma HA, porm com
uma NA diferente, como o vrus de campo. Essa
estratgia de vacinao permite a deteco dos
anticorpos da neuraminidase especcos contra
o vrus de campo. Por exemplo, se a cepa do v-
rus de campo em circulao um H7N1, a vacina
utilizada dever ser um H7N3 ou uma das outras
sete combinaes possveis de NA. O monitora-
mento sorolgico baseado na protena N3 conr-
mar que o lote foi vacinado, e o baseado na pro-
tena N1 conrmar que a ave foi infectada com o
vrus de campo. As aves que formam vacinadas e
depois infectadas tambm so detectadas.
A vacinao contra o vrus da inuenza avi-
ria j foi utilizada em pases diferentes com suces-
so varivel. Vacinas inativadas e recombinantes
foram usadas no Mxico, na Itlia, no Paquisto
e nos EUA para controlar o vrus da inuenza de
mdia patogenicidade. Antes do surto causado
pelo vrus de alta patogenicidade H5N1 na sia
sudeste, algumas tentativas foram relatadas para
controlar surtos causados por vrus de alta pato-
genicidade atravs da vacinao: surto por H5N2
no Mxico (1994); H7N1 na Itlia (2000), H7N3 no
Paquisto (2003).
As prticas inadequadas de biossegurana
ou de vacinao podem conduzir transmisso
viral entre lotes e a seleo de variantes que exi-
bem a antigenic drift. Os vrus H5N2 circulantes
no Mxico apresentaram antigenic drift resultan-
do uma baixa identidade com as cepas vacinais.
O uso intenso de vacinas no Mxico resultou na
emergncia de variantes antignicas, que esca-
pam da resposta imune induzida pela vacina. O
Mxico tem vacinado as aves comerciais desde o
surto de alta patogenicidade, em 1994, sem nunca
aplicar o princpio DIVA. Embora nenhum vrus
de alta patogenicidade tenha sido relatado desde
748 Captulo 28
o incio da campanha de vacinao, os vrus de
mdia patogenicidade continuam em circulao.
Por outro lado, em Hong Kong, diversas campa-
nhas de vacinao foram realizadas aps o surto
de H5N1 (1997), conseguindo diminuir signica-
tivamente a ocorrncia do vrus da inuenza. A
vacinao sistemtica das aves importadas, as-
sim como outras medidas de biossegurana, so
importantes para evitar novos surtos.
No Brasil, a inuenza aviria uma doena
considerada extica, e o procedimento determi-
nado pelo Ministrio da Agricultura, no caso de
focos, a erradicao do vrus pela destruio
das aves infectadas. Os casos suspeitos da doena
devem ser comunicados aos rgos de vigilncia
ociais (Inspetorias Veterinrias), que enviaro
mdicos veterinrios para realizar a coleta de
material de animais suspeitos. Esse material ser
enviado para um laboratrio credenciado pelo
Ministrio para realizar o diagnstico (LARA
Campinas; EMBRAPA Sunos e Aves). No caso
da conrmao do resultado positivo, sero to-
madas as medidas descritas no manual do Pro-
grama Nacional de Sanidade Avcola (Disponvel
em: http://www.agricultura.gov.br/).

6.4 Inuenza em aves silvestres
Aparentemente as aves silvestres, principal-
mente as aquticas e migratrias, so os princi-
pais reservatrios dos vrus da inuenza aviria
circulantes no mundo. Cepas de mdia patoge-
nicidade j foram isoladas de, aproximadamente,
100 espcies de aves. Nessas espcies, vrus com
os 16 tipos de HA e com os nove possveis tipos
de NA circulam em aparente equilbrio com os
seus hospedeiros. As aves aquticas pertencentes
s ordens Anseriforme e Chradriiforme represen-
tam o maior reservatrio natural desses vrus.
O vrus j foi isolado tambm de aves terrestres,
mas essas espcies parecem no possuir um pa-
pel maior na manuteno do vrus na natureza.
Na maioria dos casos, o vrus inuenza infecta
e se perpetua nessas espcies sem causar doen-
a, ou seja, produz infeces predominantemente
subclnicas. Outro aspecto interessante na infec-
o pelo vrus da inuenza nessas espcies que
o vrus permanece geneticamente estvel, com
poucas mutaes, por longos perodos de tempo.
Isso indica que o vrus atingiu um equilbrio com
o seu hospedeiro natural.
Os patos, gansos e cisnes esto classicados
dentro da ordem Anseriforme, enquanto gaivotas,
andorinhas-do-mar e aves pernaltas esto classi-
cados na ordem Chradriiforme. Outras aves sil-
vestres das quais o vrus j foi isolado so: faises
e perdizes (Galliformes), falces (Falconiformes),
garas e bis (Ciconiiformes), tentilhes e weaver-
birds (Passeriformes), cormoro (Pelicaniformes),
pombos (Columbiformes), pica-paus (Piciformes),
mergulhes (Podicipediformes). A infeco pelo v-
rus da inuenza j foi descrita tambm em algu-
mas espcies silvestres que so criadas como ani-
mais de estimao, como os papagaios, cacatuas
e periquitos (Psitaciformes). Alm disso, espcies
silvestres, atualmente criadas como animais de
produo, como emas (Rheiformes) e avestruzes
(Struthioniformes), tambm podem ser infectadas
naturalmente.
O primeiro caso de isolamento do vrus da
inuenza de aves silvestres foi realizado na fri-
ca do Sul, no ano de 1961. Nesse caso, uma cepa
de alta virulncia causou doena e morte em um
grande nmero de andorinhas-do-mar naquele
pas. Apesar deste isolamento inicial, as evidn-
cias sugerem que cepas de alta patogenicidade
no circulam geralmente entre as aves silvestres,
uma vez que os demais isolamentos realizados a
partir de aves silvestres resultaram na deteco
das cepas de patogenicidade mdia. Com a exce-
o de alguns casos, em que provavelmente aves
silvestres se infectaram a partir de aves doms-
ticas, as cepas altamente patognicas somente
foram novamente detectadas causando doena
em aves silvestres no ano de 2002, em gansos na
China (cepa H5N1 que atualmente est causan-
do epidemia na Eursia). Alm de ser patognica
para aves domsticas, humanos e outras espcies
de mamferos, o vrus H5N1 tambm so patog-
nicos para algumas espcies silvestres.
Vrias espcies de aves das quais o vrus
H5N1 foi isolado pertencem a espcies que rea-
lizam longas migraes em diferentes pocas do
ano, principalmente no perodo de inverno, nas
regies localizadas no Hemisfrio Norte. As ro-
tas de migrao podem diferir entre as espcies,
compreendendo desde curtos movimentos lo-
cais at migraes intercontinentais. Essas rotas
migratrias no esto totalmente elucidadas, e
um dos aspectos preocupantes a possibilidade
de pontos comuns de parada existentes para as
espcies, o que permitiria um contato entre um
grande nmero de aves da mesma e de diferen-
tes espcies. Este contato poderia facilitar ao v-
rus ser carreado a regies novas onde ainda no
circula.
Estudos realizados em patos silvestres no
Canad demonstraram que a perpetuao do v-
rus inuenza nessas aves relaciona-se com a pas-
sagem do vrus de aves adultas para aves jovens
em lagos, antes da migrao. Um dos aspectos
relevantes a grande quantidade de vrus que
excretado nas fezes das aves. Essas fezes conta-
minam principalmente a gua de lagos e lagoas,
onde um grande nmero dessas aves permanece,
facilitando a transmisso pela rota fecal/oral ou
fecal/cloacal na superfcie da gua. Ficou deter-
minado que o vrus permanece vivel por um pe-
rodo de 4 dias a 22C e pelo perodo de 30 dias
a 0C.

6.5 Vrus da inuenza H5N1
A grande maioria dos vrus da inuenza A
que circulam nas populaes silvestres de aves
aquticas e migratrias apatognica e permane-
ce razoavelmente estvel geneticamente ao longo
do tempo nessas espcies. Mesmo os subtipos H5
e H7 eram considerados benignos para os seus
hospedeiros naturais at h pouco tempo. No en-
tanto, a transmisso desses vrus para outros hos-
pedeiros mamferos ou aves domsticas, por
exemplo seguida de rpida evoluo gentica
e freqentemente por aumento na patogenicida-
de e virulncia.
O vrus da inuenza aviria pode, ocasio-
nalmente, tornar-se patognico para humanos
mediante dois mecanismos genticos principais:
ressortimento, que se caracteriza pela troca de
segmentos genmicos (genes) entre dois vrus
durante uma infeco mista, ou atravs de muta-
es nos diferentes genes internos que permitam
a infeco de clulas humanas. As grandes pan-
demias de inuenza humana, ocorridas no sculo
XX, tiveram o envolvimento de vrus de origem
avcola (ver Figura 28.7). Esses vrus sofreram
ressortimento ao infectar clulas de outro mam-
fero (geralmente suno), concomitantemente com
vrus de origem humana nas pandemias de 1957
e 1968. Estudos recentes de Biologia Molecular
indicam que a pandemia de inuenza de 1918,
conhecida como gripe espanhola, foi causada por
um vrus avirio que teria sofrido algumas muta-
es e se adaptado ao organismo humano, sem o
processo de ressortimento.
At 1997, no havia evidncia de que vrus
do subtipo H5 poderiam infectar e causar doena
grave em pessoas. At ento, apenas trs casos de
transmisso direta de vrus avirios para huma-
nos haviam sido relatados, todos eles envolvendo
vrus do subtipo H7. Por isso, no se considerava
que os vrus da inuenza aviria poderiam repre-
sentar risco sade pblica. Acreditava-se que a
diferena de especicidade de receptores para os
vrus avirios e humanos se constitua em uma
eciente barreira que limitava a transmisso de
vrus entre aves e pessoas. Este conceito sofreu
uma mudana drstica com o surgimento dos v-
rus H5N1, que foram transmitidos diretamente
de aves para humanos, em 1997, em Hong Kong,
resultando na morte de seis das 18 pessoas infec-
tadas.
A origem desses vrus ocorreu poucos anos
antes, quando surgiram os primeiros vrus des-
se subtipo que foram capazes de, inicialmente,
causar doena e mortalidade em gansos e, pos-
teriormente, serem transmitidos a humanos. Es-
ses vrus de gansos adquiriram segmentos gen-
micos de protenas internas e no-estruturais de
vrus de perdizes, e o gene da NA de um vrus
de marrecos/patos e, posteriormente, dissemi-
naram-se nos mercados de aves em Hong Kong.
A erradicao de toda a populao de galinhas
domsticas de Hong Kong foi capaz de conter a
epidemia.
No entanto, outros vrus resultantes de res-
sortimento continuaram a ser gerados e dissemi-
nados a partir das populaes de gansos e mar-
recos/patos silvestres, contendo a mesma H5 e
diferentes combinaes de genes/protenas inter-
nas. Os vrus H5N1 continuaram a evoluir e, em
2002, um subtipo nico, denominado gentipo Z,
foi responsvel por grande mortalidade de aves
aquticas domsticas e silvestres em Hong Kong.
750 Captulo 28
Este vrus continuou a circular de forma end-
mica no Sul da China, principalmente em patos
e marrecos domsticos. No nal de 2003 e incio
de 2004, foram relatados surtos de infeces pelo
H5N1 simultaneamente em vrios pases asiti-
cos. O vrus foi detectado no Vietn, Tailndia,
Indonsia, Camboja, Laos, Coria, Japo e Chi-
na. Os surtos foram aparentemente controlados,
mas, em agosto de 2004, o vrus foi detectado na
Malsia.
Vrios estudos moleculares do vrus H5N1
foram realizados no perodo de 2000-2004 de iso-
lados humanos e de aves nos pases asiticos. O
seqenciamento desses isolados demonstrou que
uma srie de ressortimentos, envolvendo o vrus
inicialmente detectado em gansos, deu origem a
um gentipo de H5N1 dominante (gentipo Z)
entre galinhas e perus. A evoluo do vrus H5N1
potencializou sua virulncia e sua expanso en-
tre hospedeiros susceptveis. Foi observado um
aumento da virulncia para espcies silvestres e
tambm uma maior letalidade em camundongos
e fures infectados experimentalmente. O vrus
tornou-se infeccioso para mamferos, causando
mortes e sendo transmitido entre felinos selva-
gens como tigres e leopardos, e tambm entre
gatos domsticos.
Surtos do H5N1 foram relatados em aves
migratrias na China e na Monglia em 2005,
e o vrus foi detectado principalmente em aves
oriundas do Lago Qinghai, localizado no Oeste
da China. A propagao do vrus atravs dessas
aves para outras regies a oeste e sul considera-
da uma possibilidade. Nesse mesmo ano, o vrus
foi isolado de cisnes na Crocia e, posteriormen-
te, em 2006, no Ir, Azerbaijo, Casaquisto, Ge-
rgia e em outros 20 pases europeus.
O vrus propagou-se da sia para a Euro-
pa e frica, causando a enfermidade e levando
destruio de mais de 200 milhes de aves em v-
rios pases. At abril de 2007, a presena do H5N1
j havia sido relatada em quarenta pases desses
trs continentes. Ainda de acordo com o relato da
Organizao Mundial de Sade (OMSWHO) de
abril de 2007, 291 j foram infectadas pelo H5N1
e ocorreram 172 bitos com comprovao labora-
torial da etiologia.
At incio de 2007, apesar das centenas de ca-
sos humanos registrados e dos freqentes regis-
tros de doena causada por vrus H5N1 em aves
silvestres e domsticas de vrios pases asiticos,
frica, Oriente Mdio e Europa Oriental, no ha-
via evidncia de transmisso do vrus entre pes-
soas. Ou seja, os casos de infeco humana foram
originados da exposio direta ou indireta de
pessoas a aves infectadas. Isto explicava porque
os casos humanos se restringiam a poucas pesso-
as, geralmente membros de uma mesma famlia.
A capacidade dos vrus avirios serem transmi-
tidos entre pessoas e de replicar ecientemente
no trato respiratrio de humanos est associada
com duas protenas e funes principais: HA e
PB2. Alteraes na HA permitem ao vrus se ligar
em receptores que contm cido silico com liga-
o 2,6, que esto presentes no epitlio do trato
respiratrio superior e, assim, iniciar a infeco.
Mutaes especcas na PB2 (E para K na posio
627) aumentam a capacidade do vrus replicar
em clulas de mamferos e conferem uma vanta-
gem para a replicao sob as temperaturas mais
baixas do trato respiratrio superior. Essas duas
alteraes so provavelmente necessrias, porm
insucientes para a gerao de vrus H5N1 pan-
dmicos.
A grande preocupao de autoridades sani-
trias de todo o mundo a de que este vrus even-
tualmente adquira a capacidade de ser transmiti-
do entre pessoas como ocorre com os vrus da
inuenza A humanos podendo, ento, dissemi-
nar-se rapidamente na populao humana e cau-
sar uma pandemia mundial. Esta preocupao
reveste-se de especial signicado pela severidade
da doena causada pelo H5N1 em humanos.
6.6 Inuenza em ces, felinos e outros
mamferos

A constante evoluo do vrus da inuen-
za, por mutaes, delees e ressortimento, tem
permitido a adaptao a novos hospedeiros e a
produo de doena severa em animais e huma-
nos. A primeira descrio da infeco pelo vrus
da inuenza em ces (H3N2) data de 1975-1976,
sem a produo de sinais clnicos severos. Porm,
em 2005, foi relatada a infeco de ces pelo vrus
da inuenza eqina H3N8, ocorrendo casos fa-
tais da doena nos EUA. Em felinos domsticos, a
infeco experimental com o H3N2 de humanos,
H7N3 de perus e H7N7 de focas (Phoc vitulina) foi
demonstrada nos anos 1970 e 1980, observando-
se somente hipertermia e excreo de vrus. No
entanto, entre 2003 e 2007, foram relatados casos
de infeco pelo H5N1 em felinos domsticos e
selvagens, resultando em mortalidade.
At h pouco tempo acreditava-se que os
ces e gatos eram resistentes doena causada
pelos vrus da inuenza tipo A. Porm, feldeos
e candeos tm sido, repetidas vezes, demonstra-
dos susceptveis infeco com esses vrus.
6.6.1 Epidemiologia
As primeiras descries de infeco pelo
H5N1 em gatos domsticos foram realizadas na
Tailndia, Alemanha, ustria, China, Iraque e In-
donsia, durante surtos de inuenza aviria. Fe-
linos selvagens tambm so susceptveis infec-
o. Dois tigres (Panthera tigris) e dois leopardos
(P. pardus) morreram aps contrarem a infeco
por ingesto de carne crua de aves contaminadas.
Em um zoolgico da Tailndia, 147 tigres morre-
ram ou foram abatidos aps apresentarem sinais
clnicos de inuenza, e foi possvel demonstrar a
transmisso horizontal do vrus entre os tigres.
Em 2005, trs gatos civets morreram no Vietn
aps a infeco com o H5N1. Fures tambm so
susceptveis infeco experimental e podem
servir de modelo para estudos com o H5N1. Es-
tes animais desenvolvem sinais clnicos de infec-
o respiratria e excretam o vrus em secrees
nasais. O H3N2 tambm pode replicar em fures,
porm apresenta menor patogenicidade. Felinos
e fures podem transmitir horizontalmente o
H5N1. Essas espcies so criadas como animais
domsticos e possuem contato direto com pesso-
as, podendo servir como uma fonte eventual de
vrus para humanos.
A infeco pelo H5N1 possui importncia
pelas taxas elevadas de mortalidade e letalidade
em animais, alm de possuir potencial zoontico.
Um estudo sorolgico, realizado em Bangkok,
demonstrou 160 ces e oito gatos soropositivos
para o H5N1, indicando que esses animais foram
infectados naturalmente. Um caso fatal de H5N1
em um co que ingeriu a carcaa de um pato in-
fectado na Tailndia foi relatado em 2006. As mu-
taes e ressortimentos so comuns nos vrus da
inuenza tipo A, alertando para a possvel trans-
misso entre espcies.
Alm do H5N1, os ces so susceptveis
infeco pelos vrus H3N2 de humanos e o H3N8
de eqinos. Crawford et al. (2005) demonstraram
a ocorrncia de doena respiratria aguda seve-
ra em ces de corrida da raa greyhound na Fl-
rida, EUA. Estudos retrospectivos com amostras
de soro coletadas de ces de corrida entre 2000
e 2003 demonstraram que a infeco j ocorria
naquele perodo. Amostras de soro coletadas de
ces em hospitais veterinrios e canis em outras
regies do pas comprovaram a disseminao do
agente, a expanso geogrca e a persistncia
do vrus durante anos nessa espcie. A ecien-
te transmisso e adaptao do vrus aos ces su-
gerem que este agente pode se tornar enzotico
nessa espcie.
A infeco pelos vrus da inuenza tipo A
em candeos e feldeos pode ocorrer por contato
direto com aves infectadas ou, ainda, por conta-
to indireto com uma fonte comum, contaminada
com fezes de aves (H5N1), ou com secreo nasal
de eqinos (H3N8). A transmisso por carne crua
de aves relatada principalmente para felinos.
Nos felinos infectados, o H5N1 encontrado na
saliva, urina e/ou fezes.
A evidncia de infeco pelos vrus da in-
uenza tipo A em animais domsticos, que pos-
suem amplo contato com humanos, motivo de
preocupao para a sade pblica, pela possibi-
lidade desses animais servirem como uma fonte
adicional de vrus, permitindo a transmisso a
outros mamferos e aumentando o risco de uma
pandemia de inuenza humana.
e patologia
O perodo de incubao que se segue in-
feco geralmente curto, entre dois e cinco dias
em ces, tigres e gatos domsticos. As vias de in-
752 Captulo 28
feco so os tratos respiratrio e digestrio, e a
replicao inicial ocorre nos pneumcitos tipo II
nos alvolos pulmonares. Eventualmente, o vrus
atinge os rins, fgado, corao, encfalo, intestino
grosso, glndula adrenal, bao e pncreas de fe-
linos, o que demonstra a ocorrncia de viremia.
A excreo de vrus inicia no terceiro dia aps a
infeco e permanece por mais de sete dias nos
animais que sobrevivem. As mortes geralmente
devem-se hemorragia e necrose multifocal em
diferentes rgos, associada com leses pulmo-
nares.
Os sinais clnicos relatados em gatos e tigres
aps a infeco com o H5N1 so de hipertermia,
depresso, protuso da terceira plpebra, con-
juntivite, diculdade respiratria, descarga nasal
serosanguinolenta e ictercia em casos de hemor-
ragia difusa. Sinais neurolgicos, incluindo con-
vulses e ataxia, so consistentes com leses no
encfalo. A morte ocorre dois dias aps o incio
dos sinais em casos severos, porm infeces sub-
clnicas tambm so relatadas. As infeces por
outros vrus da inuenza tipo A em gatos produz
hipertermia e sinais brandos de infeco respira-
tria, com excreo de vrus pela secreo nasal.
Ces infectados com o H3N8 podem apre-
sentar doena respiratria aguda, caracterizada
por sinais brandos, como hipertermia e tosse por
10 a 14 dias, ou morte hiperaguda associada com
hemorragias no trato respiratrio. A taxa de mor-
talidade foi de 36% em um surto de H3N8 em ces
de corrida nos EUA. J o H5N1 pode ser detecta-
do em amostras de pulmo, fgado e rins de ces
infectados, demonstrando que esse vrus pode se
disseminar sistemicamente nessa espcie.
Na necropsia, tigres e gatos domsticos in-
fectados com o H5N1 apresentam congesto e
hemorragias petequiais nos pulmes, exsudato
serosanguinolento na traquia e nos brnquios,
efuso pleural, congesto no encfalo, conjun-
tivite, congesto renal e hemorragia intestinal.
Microscopicamente, observam-se meningoence-
falite no-supurativa, gliose, vasculite e conges-
to no encfalo, necrose multifocal no fgado, tu-
bulonefrite, depleo linfide no bao, edema e
hemorragia severa nos pulmes e outros rgos.
H, ainda, perda do epitlio alveolar e bronquio-
lar com inltrado de clulas inamatrias.
Os ces que morrem aps a infeco aguda
pelo H3N8 apresentam traquete, bronquite e
bronquiolite, inltrado de clulas inamatrias
e broncopneumonia supurativa. Um co infec-
tado pelo H5N1 apresentava congesto e edema
pulmonar, congesto no bao, fgado e rins; e, na
microscopia pneumonia intersticial, inltrado de
clulas inamatrias, necrose heptica, nefrite e
degenerao tubular.
6.6.3 Diagnstico
A suspeita clnica de infeco pelo vrus da
inuenza pode ser conrmada pela inoculao
de secrees nasais, orofarngeas, amostras fe-
cais ou suspenses de tecidos suspeitos em clu-
las MDCK ou, ainda, no saco alantide de ovos
embrionados de 10 dias. Clinicamente, a infeco
em ces muito semelhante aos sinais observa-
dos na tosse dos canis, porm a ocorrncia de
hemorragias e sinais mais severos pode diferen-
ciar a etiologia da doena. Felinos com inuenza
apresentam sinais semelhantes aos apresentados
na sndrome do trato respiratrio superior.
A conrmao laboratorial da infeco pelos
vrus da inuenza pode ser realizada por IHQ,
hemaglutinao associada com HI e RT-PCR em
tempo real. Testes sorolgicos como HI e soro-
neutralizao (SN) tambm podem ser utiliza-
dos.
6.6.4 Controle e preveno
A principal forma de prevenir a doena
evitar o contato de ces e gatos com aves e fe-
zes de animais contaminados (no caso do H5N1)
ou com eqinos e/ou utenslios e instalaes (no
caso do H3N8), nas regies onde ocorrem surtos
de inuenza aviria ou eqina. A Organizao
Mundial para Alimentos e Agricultura (FAO)
organizou uma srie de recomendaes para os
proprietrios de animais de companhia em reas
onde ocorrem surtos de gripe aviria. Em zool-
gicos, felinos selvagens devem ser alimentados
com carne de aves sabidamente negativas para
o vrus. Outros animais selvagens e marinhos,
musteldeos, sunos e gatos civets tambm podem
ser infectados pelo H5N1 e servir como fonte de
transmisso.
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As vacinas contra o H3N8 utilizadas em
eqinos podem ser adaptadas para o uso em ces.
Uma vacina recombinante, contendo o poxvrus
do canrio como vetor e expressando a HA do
vrus, foi testada e induziu ttulos mdios a altos
de anticorpos em ces, protegendo esses animais
contra a doena causada pelo H3N8.
Uma vacina recombinante, com a insero
do DNA complementar (cDNA) do gene da HA
do H5N1 em um adenovrus canino tipo 2 foi de-
senvolvida e testada na China. Ttulos de anticor-
pos inibidores de hemaglutinao de 8 e 16 foram
produzidos aps a imunizao experimental de
felinos selvagens e domsticos, abrindo perspec-
tivas para o desenvolvimento de uma vacina con-
tra o vrus da inuenza aviria H5N1 em animais
domsticos e selvagens.
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BUNYAVIRIDAE
Fernanda S. F. Vogel
1

1
Mariana S e Silva colaborou com a seo 6.2 (Hantavrus), e Eduardo Furtado Flores com as sees 6.4 (Doena
das ovelhas de Nairobi) e 6.5 (Febre hemorrgica da Crimia-Congo).
29
757
757
757
759
759
760
762
762
762
762
764
765
765
765
765
767
769
770
771
1 Introduo
2 Classicao
4 Replicao
4.2 Expresso gnica e replicao do genoma
5 Biologia e patogenia
6 Buniavrus de interesse veterinrio
6.1 Vrus da febre do vale Rift
6.1.1 Epidemiologia
6.1.3 Diagnstico
6.1.4 Tratamento
6.2 Vrus da doena de Akabane
6.3 Hantavrus
6.4 Vrus da doena das ovelhas de Nairobi
6.5 Febre hemorrgica da Crimia-Congo
1 Introduo
A famlia Bunyaviridae contm o maior n-
mero de vrus animais, abrigando centenas de es-
pcies virais isoladas principalmente de insetos.
Os vrions so grandes, envelopados e possuem
como genoma trs molculas de RNA de polari-
dade negativa. A maioria desses vrus foi isolada
de insetos ou de animais silvestres, sem estarem
necessariamente associados com doena. Alguns
buniavrus causam doena severa em humanos e
vrios deles so zoonticos. Dos cinco gneros da
famlia, apenas os membros do gnero Hantavirus
no so transmitidos por insetos, os demais so
arbovrus. Este gnero abriga o hantavrus, um
vrus zoontico cujos hospedeiros naturais so
roedores silvestres. Em humanos, a hantavirose
se manifesta sob duas formas, por apresentar ca-
ractersticas epidemiolgicas e clnicas distintas.
No sudeste asitico, a doena endmica e ma-
nifesta-se primariamente por insucincia renal
aguda, com alta morbidade e baixa mortalidade.
Nas Amricas, a doena apresenta ocorrncia es-
pordica e se manifesta por insucincia respira-
tria aguda, com altos ndices de letalidade.
No Brasil, j foram isoladas dezenas de v-
rus da famlia Bunyaviridae. Do ponto de vista
clnico e epidemiolgico, o mais importante o
vrus Oropouche, que est associado com epi-
demias na regio amaznica. Esse vrus infecta
primariamente humanos e, nessa regio, o nme-
ro de casos noticados superado somente pela
dengue, reforando a sua importncia. A enfer-
midade conhecida como febre do Oropouche e
caracterizada por febre, cefalia, mialgias, ar-
tralgias, anorexia, tonturas, calafrios e fotofobia.
Menos freqentemente, a infeco pode cursar
com sinais neurolgicos. Este vrus se mantm na
natureza atravs de dois ciclos: um urbano e ou-
tro silvestre. Embora no Brasil o mais importante
vrus dessa famlia seja o Oropouche, deve-se sa-
lientar que, para os animais, o mais importante e
patognico membro da Bunyaviridae o vrus da
febre do vale Rift (RVFV), agente restrito pratica-
mente ao continente africano.
2 Classicao
A famlia Bunyaviridae compreende mais de
300 vrus agrupados em cinco gneros: Ortho-
bunyavirus, Phlebovirus, Hantavirus, Nairovirus e
Tospovirus. Vrios membros dessa famlia esto
associados com doenas hemorrgicas severas,
como o vrus da febre do vale Rift (Phlebovirus),
vrus da febre hemorrgica da Crimia-Congo
(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, um Nai-
rovirus), Hantaan, Sin Nombre e outros vrus re-
lacionados (Hantavirus) e, mais recentemente, a
Garissa, cujo agente identicado o vrus Ngari
(Orthobunyavirus). O gnero Tospovirus abriga so-
mente vrus de plantas. Cada gnero da famlia
Bunyaviridae inclui mltiplos sorotipos. Com ex-
ceo dos hantavrus, os vrus dos outros quatro
gneros so arbovrus, ou seja, so transmitidos
por vetores (mosquitos, ebtomos ou carrapa-
tos). Os hantavrus infectam naturalmente roedo-
res silvestres e so transmitidos por contato direto
ou indireto, ou, ainda, pela inalao de aerossis
oriundos das excrees destes animais.
Os vrions dessa famlia so, aproximada-
mente, esfricos e envelopados, com 80 a 120 nm
de dimetro. A superfcie do envelope possui
projees de 5 a 10 nm, formadas pelas glicopro-
tenas G1 e G2. O interior dos vrions contm trs
nucleocapsdeos de simetria helicoidal, cada um
deles composto por um segmento de RNA conju-
gado com protenas (protena N + polimerase L)
(Figura 29.1). A composio qumica dos vrus foi
estimada em 2% de RNA, 58% de protenas, 33%
de lipdios e 7% de carboidratos.
Os buniavrus possuem um genoma seg-
mentado, composto por trs molculas de RNA
de ta simples e polaridade negativa. Em dois
gneros (Phlebovirus e Tospovirus), um desses
segmentos possui a estratgia ambissense de ex-
presso. A extenso dos trs segmentos varia en-
tre os diferentes gneros. Os dois segmentos de
polaridade negativa so denominados L (large =
758 Captulo 29
grande), com 6.875 nucleotdeos (nt) e M (medium
= mdio), com 4.458 nt (estes nmeros se referem
ao vrus bunyawera). O terceiro segmento, ambis-
sense em alguns gneros, denominado S (small =
pequeno) e possui 961 nt. Seqncias de nucleo-
tdeos complementares entre si esto localizadas
nas extremidades 5 e 3 dos RNA genmicos.
Essa complementaridade permite o pareamento
entre bases e a formao de ligaes estveis no
covalentes, conferindo a esses segmentos a topo-
logia circular (Figura 29.1). Deve-se ressaltar que
esses segmentos no so contnuos e, portanto,
no se constituem em genomas verdadeiramente
circulares apenas adotam essa topologia pelo
pareamento das extremidades. Seqncias loca-
lizadas prximas s extremidades dos RNA ge-
nmicos tambm servem como stios de reconhe-
cimento para a polimerase viral (replicase) nos
processos de transcrio e replicao.
Os vrions contm algumas cpias da repli-
case viral (polimerase de RNA dependente de
RNA), denominada L, que possui massa de 240 a
260 kDa e codicada pelo segmento genmico
de mesmo nome (L). As protenas estruturais dos
vrions so a ribonucleoprotena N (26,5 kDa), co-
dicada no segmento S, e as glicoprotenas G1 e
G2 do envelope, codicadas no segmento M. Os
RNAs genmicos esto associados com mltiplas
cpias da protena N e com algumas cpias da
protena L (RNA polimerase viral). As molcu-
las da protena L interagem com as extremidades
dos segmentos de RNA genmicos e com as mo-
lculas da protena N que recobrem o genoma,
formando os nucleocapsdeos (Figura 29.1).
Figura 29.1. Vrions e genoma da famlia . A) Fotografia de microscopia eletrnica de vrus do gnero
(vrus da febre do Vale Rift); B) Representao esquemtica de uma partcula vrica e seus componentes;
C) Estrutura do genoma. Segmentos L (grande); M (mdio) e S (pequeno). No diagrama, est representada a
organizaogenmica deumphlebovrus.
Bunyaviridae
Phlebovirus
3-
3-
3-
- 5
- 5
- 5
Segmento L
Segmento M
Segmento S
G1+G2
Membrana
lipdica
L
M
S
Nucleocapsdeos
RNA
N
P
A B
C
G1/G2 G1/G2
N
NS
L (polimerase)
Fonte: A) Dra Linda Stannard; www.uct.ac.za
Bunyaviridae 759
4 Replicao
As centenas de vrus da famlia Bunyaviri-
dae apresentam vrias propriedades biolgicas
em comum; porm, por constiturem uma popu-
lao heterognea, tambm apresentam muitas
propriedades diferentes. Com exceo dos han-
tavrus, os vrus dos outros gneros so capazes
de replicar tanto em clulas de vertebrados (ou
plantas, no caso dos tospovrus) como de artr-
podes. Os efeitos da replicao nas clulas hospe-
deiras variam com o vrus e com o tipo de clula.
Em geral, a replicao em clulas de mamferos
(e plantas) citoltica; enquanto a replicao em
clulas de artrpodes, geralmente, resulta em ci-
topatologia discreta ou ausente.
A infeco se inicia pela ligao dos vrions
com receptores na membrana celular por meio das
glicoprotenas G1/G2. Nesse processo, a G1 pa-
rece desempenhar um papel mais importante em
clulas de vertebrados; e a glicoprotena G2, nas
clulas de artrpodes. Aps a ligao, os vrions
so internalizados por endocitose e se localizam
no interior de vesculas endocticas. A fuso e pe-
netrao dependem de pH cido, que determina
alteraes conformacionais na G1 e/ou G2, fuso
do envelope com a membrana endoctica e libera-
o dos nucleocapsdeos no citoplasma. Durante
a transcrio e replicao, os segmentos de RNA
genmicos nunca so completamente desnudos,
permanecendo associados com mltiplas cpias
da protena N.
A primeira etapa aps o desnudamento par-
cial do genoma envolve a transcrio dos seg-
mentos genmicos de RNA negativo, originando
os RNA mensageiros (mRNA) que iro ser tradu-
zidos em protenas. Estes mRNA contm 5 cap e
parecem no ser poliadenilados. A traduo dos
mRNAs dos segmentos L e S ocorre em ribosso-
mos livres. As protenas N e NSs dos Phlebovirus
esto presentes no citoplasma da clula infectada
duas horas aps a infeco. Algumas protenas
sofrem modicaes aps a traduo. A tradu-
o dos mRNAs do segmento M realizada em
ribossomos associados ao retculo endoplasmti-
co rugoso (RER). A poliprotena codicada pelo
segmento M (precursora das glicoprotenas) cli-
vada, originando a G1 e G2 que, a seguir, sero
glicosiladas e modicadas no aparelho de Golgi.
Posteriormente, a transcrio completa
do genoma ir resultar na produo de RNAs
de sentido antigenmico, denominados cRNA
(RNA complementar). Esses cRNAs no contm
cap e, portanto, no podem ser traduzidos. Os
RNAs servem apenas de molde para a sntese de
cpias de RNA genmico. Todos esses processos
so realizados pelo complexo replicase (RNA po-
limerase viral + enzimas auxiliares). Etapas adi-
cionais de transcrio e traduo ocorrem aps a
replicao do genoma, amplicando a quantida-
de de RNA e protenas virais. Durante o processo
de replicao, tanto as molculas de cRNA como
o RNA genmico permanecem associadas com
mltiplas cpias da protena N.
A morfognese dos vrions ocorre em eta-
pas: inicialmente os RNAs genmicos recm-sin-
tetizados so conjugados com cpias mltiplas
da protena N, formando os nucleocapsdeos, aos
quais se juntam algumas cpias da protena L (po-
limerase). A prxima etapa envolve a interao
dos nucleocapsdeos com as caudas citoplasmti-
cas das glicoprotenas, que esto localizadas nas
membranas do aparelho de Golgi. Essa interao
resulta no brotamento dos nucleocapsdeos para
o lmen do Golgi, processo pelo qual os vrions
adquirem o envelope. Os vrions j formados so
transportados no interior de vesculas do trans-
Golgi at a membrana plasmtica, onde so libe-
rados para o meio extracelular por exocitose, sem
a necessidade de lise celular. No ciclo replicativo
de alguns buniavrus, os vrions podem realizar o
brotamento diretamente na membrana plasmti-
ca. O ciclo replicativo dos buniavrus est ilustra-
do de forma esquemtica na Figura 29.2.
760 Captulo 29
4.2 Expresso gnica e replicao do
genoma
Os segmentos L de todos os gneros e M
(com exceo dos tospovrus) possuem sentido
negativo, e a sua expresso e replicao segue os
princpios gerais dos vrus RNA de polaridade
negativa (Figura 29.3A). A polimerase viral trans-
creve o segmento de RNA genmico, produzindo
um mRNA com cap que ser traduzido em pro-
tena. A extremidade 5 dos mRNAs formada
por segmentos de mRNAs com cap subtrados
de mRNAs celulares, a exemplo do que ocorre
com os ortomixovrus. Em etapas subseqentes,
a polimerase/replicase altera o modo de sntese e
produz uma cpia de cRNA que no possui cap.
Essas molculas servem de molde para a replica-
o, resultando na sntese de cpias de RNA com
o sentido genmico (Figura 29.3A).
A estratgia de expresso do segmento S
(ambissense) apresenta diferenas importantes
em relao expresso dos outros segmentos e
do restante da famlia (Figura 29.3B). Nos phle-
bovrus, a ORF (open reading frame) do gene da
nucleoprotena N est localizada na metade do
segmento S, prxima extremidade 3, e o gene
da protena NSs est localizado na outra metade.
Esta protena no-estrutural NSs (7,4 kDa) pos-
1
2
3
Ncleo
11
5a
4
5b
10
RER
Golgi
L
M
S
5c
6
7
8
9
Figura 29.2. Ciclo replicativo dos buniavrus. 1) Ligao aos receptores celulares; 2) Internalizao por endocitose,
seguida de penetrao por fuso do envelope com a membrana endoctica; 3) Desnudamento; 4) Transcrio dos
segmentos de polaridade negativa e produo de mRNAs; 5a) Traduo dos mRNAs e produo de protenas
envolvidas na replicao do genoma e de protenas estruturais (5b, 5c); 6) Replicao do genoma; 7) Formao dos
nucleocapsdeos; 8) Transporte das glicoprotenas do envelope para o aparelho de Golgi; 9) Brotamento dos
nucleocapsdeos para o interior do Golgi; 10) Transporte dos vrions em vesculas para a superfcie celular; 11)
Egressopor exocitose.
Bunyaviridae 761
sui funo pouco conhecida. A primeira etapa
a transcrio da primeira metade do gene, origi-
nando um mRNA que codica a protena N. Este
mRNA ser traduzido em protena. A seguir, este
segmento genmico replicado em toda a sua
extenso pela RNA polimerase, originando um
RNA de sentido antigenmico (sentido positivo).
Este RNA possui duas funes: a) serve de molde
para a sntese de uma cpia de RNA de sentido
genmico (replicao) e b) a metade prxima
extremidade 5 transcrita, originando um RNA
que corresponde ao gene da protena NS. Por ser
transcrito a partir de um RNA de sentido posi-
tivo (antigenmico), esse RNA possui o mesmo
sentido do genoma (sentido negativo). No entan-
to, este RNA serve de mRNA e traduzido na
protena NS, ou seja, o segmento S codica uma
protena (N) no sentido do mRNA de sentido po-
sitivo clssico; e a protena NSs codicada por
um RNA com o sentido do genoma. Essa estra-
tgia ambissense observada no segmento S dos
phlebovrus e tospovrus e no segmento M dos
tospovrus. Neste ltimo caso, os genes das pro-
tenas G1 e G2 esto localizados na metade 3 do
genoma e as protenas so codicadas pela estra-
tgia usual dos vrus RNA de sentido negativo
(semelhante protena N do segmento S). O gene
da protena Nsm est localizado na regio pr-
xima extremidade 5 do genoma e expresso
a partir de um RNA complementar, produzido
pela transcrio da regio correspondente do
RNA antigenmico. Os arenavrus tambm uti-
lizam a estratgia ambissense para expressar as
suas protenas.
- 3
- 3
3-
3-
- 5
5-
5-
RNA genmico
mRNA
cRNA (+)
Transcrio (1)
Transcrio (3)
Replicao (2)
Traduo
Traduo
Protena N
mRNA
N
N
N
NSs
NSs
-5'
Protena NSs
B
- 3
- 3
3- - 5
5
5-
RNA genmico (-)
mRNA (+)
RNA complementar (+)
Transcrio
Replicao
Traduo
Protenas
A
Figura 29.3. Estratgia de expresso gnica e replicao do genoma dos membros da famlia A)
Estratgia de expresso do segmento L nos membros dos quatro gneros; e do segmento M para os membros dos
gneros ; B) Estratgia ambissense de expresso gnica, que ocorre
no segmento M dos tospovrus e no segmento S dos tospovrus e phlebovrus. No diagrama, est representada a
expressodosegmentoSdos phlebovrus.
Bunyaviridae.
Bunyavirus, Hantavirus, Nairovirus e Phlebovirus
762 Captulo 29
5 Biologia e patogenia
Os buniavrus utilizam uma ampla varieda-
de de hospedeiros, incluindo diferentes espcies
de mamferos (e plantas no caso dos tospovrus) e
gneros de artrpodes. Uma vez que os buniav-
rus replicam em insetos, pode ocorrer a transmis-
so transovariana nesses vetores, o que permite a
manuteno do agente durante estaes frias.
A patogenia dos buniavrus variada, uma
vez que existem diferentes grupos de vrus den-
tro da mesma famlia, mas geralmente a inocu-
lao do agente pela picada do inseto vetor de-
termina uma viremia transiente, e a replicao
e amplicao do vrus ocorre nos rgos-alvo,
que varia conforme os diferentes buniavrus. A
patogenicidade e virulncia tambm variam de
acordo com o vrus. As infeces de vertebrados
pelos buniavrus variam em severidade, incluin-
do desde infeces inaparentes at doenas seve-
ras e mesmo fatais.
6 Buniavrus de interesse veterinrio
Embora vrios membros da famlia Bunyavi-
ridae sejam capazes de infectar e causar doena em
hospedeiros vertebrados, a infeco de animais
domsticos , na maioria das vezes, acidental e
no possui importncia na manuteno desses
vrus na natureza. Alguns buniavrus possuem
importncia apenas regional e no sero tratados
neste texto. A seguir, sero apresentadas as doen-
as causadas por dois vrus que possuem alguma
repercusso como patgenos animais: o vrus da
febre do vale Rift (RVFV) e o vrus Akabane. O
RVFV um vrus zoontico, o que no tem sido
relatado para o Akabane at o presente. Ao nal,
ser apresentado o hantavrus, um vrus zoonti-
co de roedores silvestres que tem sido associado
com doena humana de grande importncia em
vrios continentes.
6.1 Vrus da febre do vale Rift
A febre do vale Rift (RVF) uma enfermi-
dade que afeta primariamente ruminantes, mas
tambm afeta humanos, podendo ser severa
nessas espcies. A morbidade e mortalidade em
animais de produo podem levar a importantes
perdas econmicas. O vrus (Rift Valley fever vi-
rus, RVFV) transmitido para os mamferos pela
picada de insetos e, por isso, considerado um
arbovrus. A infeco nos ruminantes caracteri-
zada por altas taxas de abortos, alta mortalidade
em neonatos e hepatite necrtica. Essa enfermi-
dade tambm conhecida como hepatite enzo-
tica de ovinos e caprinos.
O agente etiolgico foi isolado inicialmente,
em 1931, de uma ovelha infectada no vale Rift,
do Qunia, da a sua denominao. O RVFV
pertence ao gnero Phlebovirus. Aparentemente,
os isolados de campo no apresentam variaes
antignicas marcantes, e a deteco de diferenas
entre isolados pode exigir a anlise gentica. O
vrus sensvel a desinfetantes, solventes lipdi-
cos e a pH baixo. Sob pH neutro ou levemente
alcalino, e na presena de protenas (no soro, por
exemplo), o vrus preserva a infectividade duran-
te vrias semanas. Em aerossis, a vida mdia de
infectividade de, aproximadamente, 90 minutos
a 25C. Embora a principal forma de transmisso
seja atravs de picadas de insetos, pessoas j fo-
ram infectadas por aerossis produzidos durante
o abate, pela manipulao de fetos abortados, du-
rante necropsias e procedimentos laboratoriais.
6.1.1 Epidemiologia
O RVFV apresenta algumas peculiaridades
epidemiolgicas que favorecem a sua manuten-
o e disseminao na natureza. Esse vrus pode
ser transmitido por diferentes gneros de mosqui-
tos e tambm por ebotomdeos, alm de ser um
vrus RNA e, como tal, propenso a altas taxas
de mutao. As mutaes podem ter repercusso
antignica pequena (drifts) ou grande (shifts) e
podem determinar um fentipo de variabilidade
antignica e, assim, representar uma estratgia
de evaso do sistema imune.
A febre do vale Rift (RVF) uma zoonose
viral de grande importncia na frica. Esta enfer-
midade permaneceu restrita ao sul do Saara at
1977, quando um grande surto ocorreu no Egito.
Um dos fatores incriminados como responsvel
pela disseminao do agente foi a fonte de gua
abundante nos canais construdos para grandes
Bunyaviridae 763
represas. Embora a doena estivesse restrita ape-
nas ao continente africano, em 2000, o vrus se
disseminou pela Pennsula Arbica, produzindo
dois surtos simultneos na Arbia Saudita e no
Imen.
Historicamente, os surtos de RVF ocorrem
em diferentes regies da frica em intervalos
de 5 a 15 anos. O longo intervalo de ocorrncia
desses eventos provavelmente deve-se reduo
gradativa na susceptibilidade da populao com
o decorrer do tempo. Por muitos anos, o reserva-
trio do vrus durante os perodos interepidmi-
cos foi desconhecido. Esse desconhecimento per-
durou at que pesquisadores descobriram que
ovos do mosquito Aedes lineatopinnis, presentes
no solo dos dambos, continham o RVFV. Os dam-
bos so depresses no solo que alternam perodos
de plenitude hdrica em pocas de chuvas, com
perodos de ausncia de gua em pocas de seca.
Quando essas depresses se enchem de gua, os
ovos eclodem, e as larvas infectadas se tornam
mosquitos que contm e podem transmitir o v-
rus. Por isso, esses dambos so considerados os
reservatrios de mosquitos (e do vrus).
Ao realizarem o repasto sangneo em ru-
minantes, os mosquitos inoculam o vrus, que ,
posteriormente, amplicado no animal. Esse ani-
mal serve, ento, de fonte de infeco para veto-
res de diferentes gneros, que contribuem para
uma rpida disseminao do agente. Se a rea
que possui os mosquitos infectados apresenta
animais susceptveis, provvel a ocorrncia de
casos clnicos. Por outro lado, em muitas regies
da frica, a presena dos mosquitos e do vrus
enzotica e, assim, casos clnicos dicilmente
so observados. Nessas regies, a circulao do
vrus tem sido monitorada pelo uso de animais
sentinelas.
Nos vetores, o vrus transmitido pela via
transovariana entre geraes. Uma caracterstica
peculiar que o vrus pode permanecer latente
nos ovos dos mosquitos durante estaes secas
(perodos interepizoticos). Quando os ovos in-
fectados pela via transovariana eclodirem, daro
origem aos mosquitos transmissores do RVFV.
Na frica, os principais vetores do RVFV
so os mosquitos dos gneros Aedes, Anopheles,
Culex, Eretmapoites e Mansonia. Na Amrica do
Norte, foi demonstrado que os gneros Aedes,
Anopheles e Culex so capazes de transmitir o
RVFV experimentalmente. Tambm foi demons-
trado que o Cullex pipiens, um importante inseto
existente no Egito e que se alimenta preferencial-
mente de animais febris, pode transmitir o vrus,
o que aumenta a probabilidade de transmisso
do agente.
Os casos clnicos so observados apenas
quando existem condies propcias presena
dos vetores, aliado com a presena de hospedei-
ros susceptveis. Os surtos da enfermidade no
vale Rift, no Qunia, apresentam uma associao
estreita com a variabilidade climtica interanual
observada nessa regio.
A susceptibilidade infeco est relaciona-
da com a raa, idade e com o status imunitrio do
animal. Os ovinos e os bovinos so as espcies
preferencialmente infectadas pelo RVFV e so
considerados os grandes amplicadores dos v-
rus. A doena severa mais freqentemente ob-
servada em animais jovens, em ovelhas exticas
e em certas raas cruzadas de bovinos. Os cor-
deiros e os bezerros so altamente susceptveis, e
altas taxas de mortalidade so observadas nesses
animais. Os humanos so altamente susceptveis
a infeco pelo RVFV, e o vrus transmitido
para pessoas por meio de insetos e de aerossis.
Embora os humanos no sejam a espcie hospe-
deira natural, a viremia produzida suciente
para transmitir o vrus aos vetores. Assim, os hu-
manos podem se constituir em potenciais disse-
minadores da infeco em reas livres.
Surtos de RVF esto geralmente associa-
dos com chuvas, que favorecem a multiplicao
dos insetos vetores. Chuvas localizadas so su-
cientes para criar condies necessrias ao de-
senvolvimento de um surto. A transmisso tran-
sovariana do vrus em mosquitos infectados e a
amplicao do vrus em vertebrados asseguram
a manuteno da epidemia.
Embora os ovinos e bovinos sejam as esp-
cies de animais domsticos mais freqentemente
afetadas, o RVFV pode infectar uma variedade
de espcies, com conseqncias clnico-patolgi-
cas variveis (Tabela 29.1).
764 Captulo 29
A infeco pelo RVFV em animais no-pre-
nhes freqentemente inaparente. Surtos de abor-
to e de mortalidade neonatal so freqentemente
observados quando o vrus infecta animais pre-
nhes. Em animais idosos, pode-se observar hepa-
tite, e a evoluo da enfermidade freqentemente
resulta em morte. Em humanos, a infeco pode
causar encefalite, cegueira, febre hemorrgica. A
taxa de mortalidade pode chegar a 10%.
O perodo de incubao em animais recm-
nascidos de, aproximadamente, 12 horas. Em
animais adultos, o perodo de incubao pode
ser de mais de trs dias. Em humanos, o perodo
entre a infeco e o incio dos sinais clnicos de
4 a 6 dias.
Os sinais clnicos da infeco dependem
da espcie infectada, assim como de condies
siolgicas, como a idade e gestao. Cordeiros
podem apresentar hipertermia entre 40 e 42C,
acompanhada de anorexia. A taxa de mortali-
dade em cordeiros de at uma semana de idade
pode ser superior a 90%. Em cordeiros com mais
de uma semana, a taxa de mortalidade situa-se ao
redor de 20%. Ovinos adultos desenvolvem febre
(40-41C) com descarga nasal mucopurulenta.
Em ovelhas prenhes, os sinais mais comumente
observados so os abortos. A taxa de mortalida-
de entre as ovelhas que abortam pode chegar a
20-30%.
Os bezerros infectados pelo RVFV apre-
sentam febre (40-41C) e cam apticos. A taxa
de mortalidade pode chegar a 70%. Os bovinos
adultos desenvolvem febre, sialorria, anorexia
e fraqueza. Alguns animais podem apresentar
diarria ftida. Nessa faixa etria, a taxa de mor-
talidade raramente excede 10%. Em vacas pre-
nhes, o sinal mais evidente da infeco tambm
o aborto.
Em humanos, os sintomas so semelhantes
gripe, com febre (37,8-40C), cefalia, dores mus-
culares, fraqueza, nuseas e fotofobia. A maioria
das pessoas se recupera em 4 a 7 dias. No entan-
to, em algumas pessoas so observadas compli-
caes, como sndrome hemorrgica, ictercia e
hematemese, melena e petquias nas mucosas.
Em 2 a 4 dias aps a infeco, essas pessoas se
tornam febris e geralmente morrem. Alguns in-
divduos desenvolvem uma forma clnica de me-
ningoencefalite. Outro sinal de complicao que
pode ser observado uma retinopatia, que pode
ser detectada de 5 a 15 dias aps o pico febril. Es-
sas pessoas freqentemente iro apresentar de-
cincias visuais.
Mortalidade
ap. 100%
Doena severa
abortos
mortalidade
Infeco
viremia
Ovelhas Macacos Eqinos Cordeiros
Bovinos Camelos Gatos Bezerros
Cabras Ratos Ces Cabritos
Bfalos Esquilos Macacos Filhotes de co
Humanos Filhotes de gato
Doena severa,
viremia,
abortos
Refratrios
infeco
Cobaios
Coelhos
Sunos
Tartarugas
Sapos/rs
Camundongos
Hamsters
Camundongos silvestres
Galinhas
Canrios
Pombas
Periquitos
Tabela29.1. Espectroe hospedeiros e conseqncias dainfecodediferentes espcies animais peloRVFV.
Bunyaviridae 765
6.1.3 Diagnstico
Em reas endmicas ou de risco, deve-se
suspeitar de RVF quando so observados os se-
guintes eventos: a) altas taxas de aborto em ove-
lhas e vacas (pode atingir 100%); b) altas taxas
de mortalidade em cordeiros e em bezerros com
menos de sete dias de idade; c) fetos abortados e
neonatos com leses no fgado; d) enfermidade
semelhante gripe em humanos, particularmente
naqueles com contato com animais; e) ocorrncia
de enfermidade durante perodo de ocorrncia
dos vetores; e) disseminao rpida.
O diagnstico da infeco baseado na de-
teco de antgenos virais e na pesquisa de anti-
corpos em exames histopatolgicos. Deve-se ter o
mximo cuidado na manipulao das amostras,
uma vez que o RVFV pode infectar humanos e
casos de infeco humana adquirida durante ne-
cropsias e procedimentos laboratoriais j foram
descritos. Amostras de vrus para o isolamento
podem ser coletadas de fetos abortados ou de
animais febris. As amostras a serem coletadas
incluem o fgado, bao, sangue, crebro e soro.
Essas amostras podem ser submetidas ao isola-
mento viral, a RT-PCR por extenso ou, ainda,
imunoistoqumica. Para a conrmao sorolgi-
ca da enfermidade, pode-se realizar a sorologia
pareada, pelo uso do teste de soroneutralizao
(SN). Para pesquisa de anticorpos, a tcnica de
ELISA pode ser utilizada, tanto para deteco de
IgM como de IgG.
6.1.4 Tratamento
No existe tratamento para a RVF. No en-
tanto, estudos em macacos e em outros animais
tm demonstrado que a ribavirina uma droga
antiviral promissora para utilizao futura em
humanos. Outros estudos sugerem que o interfe-
ron, imunomoduladores e plasma sangneo de
fase convalescente podem auxiliar no tratamento
de pacientes com a RVF.
Em reas enzoticas, a vacinao o nico
mtodo de prevenir as perdas causadas pela in-
feco. A movimentao de animais dessas reas
para reas livres durante os perodos de ativida-
de dos vetores deve ser restringida para preve-
nir epizootias. O controle dos vetores em reas
epizoticas seria uma medida lgica, mas possui
pouca praticidade para reas muito extensas. Du-
rante as epizootias, todos os animais domsticos
susceptveis devem ser vacinados para prevenir
a amplicao do vrus e a conseqente reinfec-
o dos vetores.
As vacinas disponveis comercialmente
apresentam problemas de segurana e de ec-
cia. As vacinas atenuadas tm produzido abortos
ou efeitos teratognicos em fetos, alm de no
conferirem boa proteo adequada. Esses vrus
vacinais so tambm patognicos para humanos.
As vacinas inativadas so seguras, mas no
conferem proteo adequada. Recentemente, um
mutante atenuado, produzido por passagem em
clulas Vero, est sendo testado para utilizao
em humanos. Esse vrus vacinal j foi testado em
ovinos e bovinos, e no causou efeitos adversos
em cordeiros recm-nascidos, em bezerros e em
animais prenhes. Quando o vrus atenuado ino-
culado em fetos de bovinos atravs de laparos-
copia, esses fetos continuam o desenvolvimento
normal e nascem soropositivos.
As vacinas atenuadas induzem a formao
de anticorpos neutralizantes de maior magnitude
e durao do que aqueles induzidos por vacinas
inativadas. Tanto as pessoas como os animais
imunizados com vacinas inativadas necessitam
de revacinaes anuais para a manuteno dos
ttulos de anticorpos. Ttulos de anticorpos neu-
tralizantes de magnitude superior a 20 so consi-
derados protetores.
6.2 Vrus da doena de Akabane
A Akabane uma doena vrica de rumi-
nantes que determina importantes perdas econ-
micas em rebanhos reprodutores. As infeces,
que so geralmente subclnicas em animais adul-
tos, podem resultar em perdas reprodutivas gra-
ves quando ocorrem em fmeas prenhes. Essas
perdas incluem abortos, nascimento de bezerros
fracos e inviveis, alm de malformaes con-
gnitas. O agente da doena Akabane um ar-
766 Captulo 29
bovrus pertencente ao grupo Simbu, do gnero
Orthobunyavirus (vrus Akabane, AkV). Todos os
isolados do AkV apresentam alguma reativida-
de sorolgica cruzada, de forma que no existem
diferentes sorotipos. Outros vrus relacionados
com o vrus Akabane Aino, Peaton, Tinaroo e
Douglas tambm esto associados com perdas
reprodutivas. Nos EUA, uma sndrome similar
em ruminantes causada pelo vrus do vale Ca-
ch, outro buniavrus, mas que no pertence ao
grupo Simbu.
A doena de Akabane comum nos trpicos
e subtrpicos entre as latitudes 35N e 35S. en-
dmica no Norte da Austrlia e surtos ocasionais
ocorrem no Sul desse pas quando existem condi-
es para o vrus se disseminar. A enfermidade
ocorre tambm no Japo, na Coria, em Israel, no
Zimbabwe e em outros pases da frica. Evidn-
cias sorolgicas da infeco tm sido encontradas
em vrios pases da frica, sia e em vrias re-
gies da Austrlia.
O vetor artrpode do AkV ainda no foi
denitivamente identicado, mas evidncias
epidemiolgicas indicam que o vrus seja disse-
minado por mosquitos. O vrus j foi isolado de
vrias espcies de mosquitos: Aedes vexans, Culex
e Culicoides oxystoma no Japo; Anopheles funestus
no Qunia; Culicoides milnei e Culicoides imicola na
frica; Culicoides brevitarsis e Culicoides wadei na
Austrlia. O principal vetor parece ser o Culicoi-
des brevitarsis. O vrus Akabane no transmitido
por contato, nem por tecidos infectados, por ex-
sudatos ou por fmites. Alm disso, o vrus pare-
ce produzir uma infeco aguda em ruminantes,
sem a gerao do estado de portador.
O AkV capaz de infectar naturalmente
vrias espcies de ruminantes, mas as perdas re-
produtivas so observadas apenas em bovinos,
ovinos e caprinos. Em ruminantes selvagens, em-
bora existam relatos de sorologia positiva, altera-
es congnitas ainda no foram observadas. No
entanto, acredita-se que, assim como em rumi-
nantes domsticos, o vrus possa causar perdas
reprodutivas nas espcies silvestres. Anticorpos
contra o AkV j foram detectados em espcies
domsticas no-ruminantes, como eqinos e ca-
ninos. At o presente, anticorpos antivrus Aka-
bane no foram detectados em humanos.
A infeco de ruminantes adultos geral-
mente subclnica. A viremia que se segue in-
feco geralmente ocorre entre os dias um e seis
e persiste por um a nove dias. Os sinais da in-
feco so observados apenas quando animais
prenhes so infectados. Nestes, so observados
sinais de doena reprodutiva, tais como: abortos,
nascimento de bezerros fracos e inviveis, mal-
formaes congnitas e distocias. O achado mais
freqente e que mais chama a ateno o nas-
cimento de animais com malformaes. Os fetos
infectados durante o primeiro trimestre de gesta-
o geralmente so viosos e alertas, mas no ca-
minham. Embora alguns possam se desenvolver
com assistncia, so incoordenados, apresentam
ataxia e podem apresentar paralisia em um ou
mais membros. Atroa muscular, exoftalmia, ro-
tao de membro, produo excessiva de lgrima
so alguns dos sinais que podem ser observados.
Os fetos infectados no segundo tero gestacional
normalmente apresentam artrogripose. As arti-
culaes so rgidas e no fazem exo, e os ms-
culos podem estar atroados. Torcicolo, escoliose
e cifose tambm so freqentemente observados.
Alguns recm-nascidos podem apresentar anor-
malidades neurolgicas alm da artrogripose.
Os animais nascidos muito fracos geralmente
foram infectados tardiamente na gestao. Es-
tes animais podem se manter de p e caminhar,
mas apresentam anormalidades comportamen-
tais como: reexo de suco fraco ou ausente,
depresso, torpor, hiperexcitabilidade peridica,
surdez, nistagmo, incoordenao e cegueira. De-
formidades no crnio so freqentes. A maioria
dos animais que nascem assim morrem ou so
sacricados pouco tempo aps o nascimento. Em
animais que nascem com sinais mais leves, estes
se acentuam gradativamente e os animais geral-
mente morrem antes dos seis meses de idade.
As malformaes congnitas ocorrem mais
freqentemente quando os fetos so infectados
durante o primeiro tero gestacional. Em ove-
lhas, essas alteraes ocorrem quando os fetos
so infectados entre o 30 e 50 dia, dependendo
da virulncia da cepa. Em vacas, malformaes
congnitas so evidenciadas quando a infeco
fetal ocorre entre os 62 e 92 dias de gestao. Em
Bunyaviridae 767
cabras, quando a infeco fetal ocorre ao redor do
40 dia de gestao.
A maioria dos animais presentes em reas
endmicas desenvolve uma resposta imune pro-
tetora contra o vrus. Os surtos de distrbios
reprodutivos normalmente ocorrem em reas
de instabilidade, quando existem condies fa-
vorveis para a disseminao do vrus entre os
animais susceptveis. Fmeas prenhes, quando
introduzidas em reas endmicas, so muito
susceptveis. Aps a infeco inicial, no entan-
to, adquirem imunidade e esto protegidas nas
prximas gestaes. Alm disso, vacinas so dis-
ponveis em alguns pases, reduzindo o risco de
infeco em fmeas gestantes introduzidas em
reas endmicas.
O diagnstico da infeco comumente rea-
lizado por testes sorolgicos. Anticorpos podem
ser detectados no soro do feto ou dos bezerros
antes da ingesto do colostro. Outros uidos
corporais, como o liquor, tambm podem ser
utilizados para a pesquisa de anticorpos. Deve-
se salientar que a ausncia de anticorpos no soro
fetal ou de recm-nascidos no descarta a infec-
o pelo vrus Akabane. Em adultos, a sorologia
importante em reas onde o vrus no end-
mico. A ausncia de anticorpos na me descarta
a infeco no feto ou no neonato. Entre os testes
sorolgicos utilizados para o diagnstico da in-
feco, destacam-se: a SN, a imunodifuso em gel
de gar (IDGA) e a inibio da hemaglutinao
(HI).
O isolamento do vrus Akabane pode ser
realizado pela inoculao de macerados de te-
cidos em camundongos lactentes, em embries
de galinha com quatro dias ou em uma varieda-
de de cultivos celulares. O vrus identicado,
posteriormente, atravs de imunouorescncia
(IFA) ou por neutralizao com anti-soro espe-
cco. No entanto, o vrus dicilmente isolado
da placenta e dos tecidos dos fetos abortados. A
chance de isolamento aumenta quanto menor for
a imunidade do feto abortado. A partir de tecidos
maternos, o isolamento do vrus Akabane mais
difcil, porque as conseqncias da replicao vi-
ral s so evidenciadas um longo perodo aps a
infeco.
A Akabane uma enfermidade de notica-
o obrigatria. Uma vez detectada a infeco em
uma propriedade, esta entra em quarentena para
desinfeco. Como o vrus Akabane no parece
ser transmitido diretamente entre os animais, o
controle baseado no combate a vetores que pos-
suam potencial para atuarem como transmissores
do vrus. As medidas recomendadas incluem o
uso de pesticidas e procedimentos para minimi-
zar o contato de insetos com os animais. Se a de-
sinfeco for necessria, utilizam-se desinfetantes
como o hipoclorito detergentes, compostos
base de cloro, lcool, fenol e desinfetantes comer-
ciais. Para prevenir a infeco de fmeas prenhes,
as fmeas do rebanho devem ser vacinadas anu-
almente antes da estao de monta.
Diferentes vacinas so disponveis nos pa-
ses que apresentam a infeco. No Japo, uma
vacina inativada e outra atenuada esto dispo-
nveis comercialmente. Na Austrlia, est sendo
desenvolvida uma vacina inativada com resul-
tados promissores. No entanto, ainda no est
disponvel comercialmente. A vacinao deve ser
utilizada anteriormente ao potencial contato com
os vetores infectados, com o intuito de aumentar
o nvel de anticorpos circulantes e, com isso, pre-
venir a infeco fetal.
6.3 Hantavrus
A hantavirose uma enfermidade infeccio-
sa grave que afeta humanos, cujo agente possui
roedores silvestres e domsticos como hospedei-
ros naturais e reservatrios. A enfermidade apre-
senta duas formas clnicas: a febre hemorrgica
com sndrome renal (HFRS) e a sndrome pul-
monar por hantavrus (HPS), tambm conhecida
como sndrome cardiopulmonar por hantavrus
(CPSH). A HFRS foi descrita na dcada de 1950,
na Coria e Rssia, e foi chamada inicialmente de
febre hemorrgica da Coria. Os sinais clnicos
eram inicialmente semelhantes aos da gripe, se-
guidos de hipotenso, trombocitopenia e falncia
renal. Em 1993, na regio de Four Corners (Novo
Mxico, Arizona, Colorado e Utah), nos Estados
Unidos, foi descrita uma enfermidade com sinais
semelhantes aos da gripe e com comprometimen-
768 Captulo 29
to respiratrio grave, com mortalidade de at
50%, denominada HPS. O vrus envolvido com a
nova enfermidade foi classicado no gnero Han-
tavirus e denominado Sin nombre.
O agente etiolgico da enfermidade um
vrus do gnero Hantavirus. O gnero possui
grande diversidade gentica, razo pela qual iso-
lados com caractersticas diferentes tm sido res-
ponsabilizados pelos surtos ocorridos em todo o
mundo. Os principais causadores da HFRS so os
vrus Hantaan, Seoul, Puumala e Dobrava.
No Brasil, a HPS foi diagnosticada, pela pri-
meira vez, em 1993, no municpio de Juquitiba,
estado de So Paulo. A enfermidade de noti-
cao compulsria, e at 2005 j haviam sido no-
ticados 664 casos de hantavirose em humanos,
com 270 mortes, a maior parte dos casos ocorri-
dos na regio Sul do pas. At o momento no
existem relatos da HFRS no Brasil. Na Europa e
sia, os roedores das subfamlias Murinae e Ar-
vicolinae so os principais transmissores das han-
taviroses, principalmente os gneros Apodemus
e Clethionomys. Nas Amricas, os transmissores
pertencem subfamlia Sigmodontinae. No Brasil,
os roedores da espcie Bolomys lasiurus so res-
ponsveis pela transmisso nos estados de So
Paulo, Minas Gerais, Bahia, Gois, Mato Grosso
e Mato Grosso do Sul, enquanto os roedores da
espcie Oligoryzomis nigripes so os respons-
veis nos estados do Paran, Santa Catarina e Rio
Grande do Sul.
Os roedores eliminam o vrus pela urina, fe-
zes e saliva. A transmisso para humanos ocorre
principalmente pela inalao de partculas des-
secadas das fezes dos roedores contaminados.
A mordedura dos roedores infectados tambm
pode transmitir o vrus para humanos. A trans-
misso entre humanos no freqente, embora j
tenha sido relatada em um surto da HPS causado
pelo vrus Andes, na Argentina, em 1996. Entre os
roedores, a infeco caracterizada pela ausncia
de sinais clnicos, e os animais estabelecem uma
infeco persistente que se mantm por meses ou
anos. Entre os roedores, o vrus transmitido de
forma horizontal, principalmente por arranhes
e mordidas e tambm pela inalao de aerossis
com partculas virais. Estudos de prevalncia em
roedores demonstram que os machos so os prin-
cipais portadores e disseminadores da enfermi-
dade. Apesar da ausncia de sinais clnicos, in-
feces experimentais em roedores indicam que
a viremia ps-infeco pode durar duas semanas,
quando h disseminao do vrus pelos tecidos
do hospedeiro.
A patogenia tanto da HPS quanto da HFRS
caracterizada por uma resposta imune exacerba-
da, que leva liberao de citocinas envolvidas
no aumento de permeabilidade vascular. Os v-
rus possuem capacidade de se ligar em plaquetas
por receptores, levando essas plaquetas a serem
retiradas da circulao, provocando a trombocito-
penia observada nas duas apresentaes clnicas
da hantavirose. Na HPS, ocorre ainda destruio
de antgenos nas clulas endoteliais do corao
e tecidos linfides. Os pulmes apresentam inl-
trados de linfcitos T/CD8, que produzem citoci-
nas, estimulando os macrfagos a produzir TNF,
IL-1, IFN gama, que aumentam a permeabilidade
vascular, levando formao de edema pulmo-
nar.
Aps a inalao do agente, os sinais se ini-
ciam entre 15 e 20 dias. Os sintomas da forma car-
diopulmonar so febre, mialgias, cefalia, alm de
tosse seca e edema pulmonar. A HFRS apresenta
sinais de trombocitopenia, ditese hemorrgica e
insucincia renal.
deteco de anticorpos especcos, principal-
mente pela tcnica de ELISA, para deteco de
IgM, e por imunouorescncia indireta (IFA). O
isolamento viral no muito utilizado em razo
da diculdade de propagao do vrus em culti-
vo celular.
O tratamento para hantavirose de supor-
te, e a letalidade depende do vrus envolvido, do
tempo de incio do tratamento e de fatores indi-
viduais, como idade e imunidade do paciente.
Algumas vacinas inativadas contra a HFRS so
utilizadas para os vrus Seoul e Hantaan, na sia,
e, aparentemente, no promovem proteo con-
tra os hantavrus. Estudos so realizados para o
desenvolvimento de vacinas efetivas contra a for-
ma cardiopulmonar e para a produo de vaci-
nas de DNA. O controle da enfermidade deve ser
realizado principalmente com medidas de sane-
amento bsico, controle de roedores e preveno
de contato com esses animais.
Bunyaviridae 769
6.4 Vrus da doena das ovelhas de
Nairobi
A doena das ovelhas de Nairobi (Nairobi
sheep disease, NSD) uma doena viral no-conta-
giosa de ovinos e caprinos, caracterizada por gas-
trenterite hemorrgica e alta mortalidade. O agen-
te, um vrus classicado no gnero Nairovirus, da
famlia Bunyaviridae, transmitido primariamen-
te por carrapatos Rhipicephalus appendiculatus. O
vrus causador da NSD (NSDv) antigenicamen-
te distinto dos outros membros da Bunyaviridae,
sendo mais relacionado com o vrus Ganjam, que
afeta caprinos na ndia, e com o vrus Dugbe, iso-
lado de bovinos no Oeste da frica. Os vrus des-
ses trs grupos compem o gnero Nairovirus. A
infeco pelo NSDV restrita primariamente ao
Leste da frica (Knia, Uganda, Tanznia, Som-
lia), onde se encontram os habitats do carrapato
vetor. No entanto, sorologia positiva para vrus
antigenicamente relacionados, alm de casos cl-
nicos semelhantes, tambm foram relatados em
ovinos no Congo e Etipia.
Dentre as espcies domsticas, o NSDV in-
fecta naturalmente apenas ovinos e caprinos, e
tentativas de reproduzir a infeco em animais
de produo e de laboratrio falharam. Acredita-
se que uma espcie de rato africano, o Arvicatus
abysinicus nubilans, seja o hospedeiro natural do
agente. Existem algumas evidncias de infeco
em humanos com sinais clnicos semelhantes
gripe, embora o seu carter zoontico no tenha
sido bem documentado. De qualquer maneira,
prossionais e pessoas envolvidas com o manejo
e cuidados de animais doentes devem adotar me-
didas de biossegurana para evitar a exposio a
aerossis e outros materiais contaminados.
Na natureza, o vrus transmitido prin-
cipalmente por carrapatos do gnero Rhipice-
phalus appendiculatus, embora outros carrapatos
tambm possam transmiti-lo. Nos carrapatos, o
vrus transmitido de forma transestadial, e os
adultos podem abrigar o vrus por mais de dois
anos. Aps a inoculao de vertebrados duran-
te o repasto sangneo, a infeco apresenta um
perodo de incubao de 4 a 15 dias. Em ovinos e
caprinos inoculados experimentalmente, o pero-
do de incubao inferior, entre 1 e 3 dias.
A enfermidade caracterizada por gastren-
terite hemorrgica aguda, que inicia com febre
alta e se segue com depresso, declnio da tem-
peratura corporal e diarria. Corrimento nasal
mucopurulento e diculdade respiratria so
freqentemente observados. As fezes so inicial-
mente liquefeitas, mas passam a conter muco e
sangue com a evoluo da doena. Casos suba-
gudos, em que os animais apresentam fraqueza
e quadros recorrentes de diarria; e casos supe-
ragudos, em que os animais apresentam apenas
febre alta seguida de colapso e morte sbita, tam-
bm tm sido relatados. Abortos tambm podem
ocorrer associados com os surtos.
Os achados patolgicos incluem hiperemia
e petquias da mucosa do abomaso, enterite he-
morrgica no ceco e poro anterior do clon. A
mucosa do intestino grosso pode estar recoberta
com petquias e com contedo sanguinolento.
Hiperplasia generalizada nos rgos linfides
tambm um achado comum. Fmeas prenhes
podem apresentar hiperemia no trato genital,
edema e hemorragias nas membranas fetais. Fe-
tos abortados apresentam petquias e sufuses
em vrios rgos.
Em reas endmicas, a maioria da popula-
o de ovinos e caprinos imune ao vrus, e a
enfermidade acomete principalmente animais
introduzidos a partir de reas livres. De fato, os
surtos esto quase sempre associados com movi-
mento de animais susceptveis para reas de ocor-
rncia dos carrapatos vetores. pocas de chuvas
tambm favorecem a ocorrncia da doena, pela
maior populao dos vetores.
O diagnstico laboratorial pode ser realiza-
do pelo isolamento do vrus a partir de plasma
ou sangue com anticoagulante, coletado durante
a fase aguda da doena. O vrus pode ser identi-
cado por imunouorescncia (IFA) realizada em
cultivos celulares previamente inoculados com o
material suspeito. O vrus replica bem em culti-
vos celulares de origem ovina, caprina e tambm
de hamster. A inoculao intracerebral de camun-
dongos lactentes um mtodo alternativo de
diagnstico, e o vrus pode ser identicado por
IFA ou xao de complemento.
O diagnstico diferencial deve considerar
doenas como a febre do vale Rift, antrax e algu-
770 Captulo 29
mas intoxicaes, peste dos pequenos ruminan-
tes e coccidiose.
Animais que se recuperam da infeco de-
senvolvem imunidade slida, que dura, prova-
velmente, por toda a vida. Cordeiros e cabritos
recm-nascidos parecem adquirir imunidade das
mes pelo colostro, o que os protege durante as
primeiras semanas de vida. Vacinas atenuadas,
obtidas pela passagem do vrus em cultivos ce-
lulares ou por passagens em crebros de camun-
dongos tm sido utilizadas, mas o seu uso tem
sido matria de debate. A maior restrio ao seu
uso extensivo deve-se variabilidade de respos-
ta ao vrus vacinal entre raas diferentes de ani-
mais.
O controle da enfermidade baseia-se no
combate aos carrapatos, pelo uso de carrapatici-
das, e nos cuidados com animais susceptveis in-
troduzidos em reas endmicas. Nestes animais,
pode-se proceder a vacinao para evitar a ocor-
rncia da doena. Os animais de reas endmicas
geralmente possuem imunidade conferida pela
infeco natural e so pouco susceptveis enfer-
midade.

6.5 Febre hemorrgica da
Crimia-Congo
A febre hemorrgica da Crimia-Congo
(CCHF) uma enfermidade zoontica causada
por um vrus do gnero Nairovirus e transmitida
por carrapatos. A enfermidade foi identicada
inicialmente na Crimia, em 1944, e, posterior-
mente, no Congo, em 1956, derivando da a sua
denominao. A doena endmica em vrios
pases da frica e sia e tem sido descrita tam-
bm em vrios pases da Europa Oriental e Orien-
te Mdio. Evidncias sorolgicas limitadas tm
indicado a sua presena tambm em Portugal,
Frana, Turquia, Egito e ndia. Em humanos, a
infeco se caracteriza por febre, sinais semelhan-
tes gripe, prurido, freqentemente seguidos
de eventos hemorrgicos e hepatite necrosante.
Embora classicamente considerada uma zoono-
se, casos de CCHF em pessoas tm sido muito
mais espordicos do que a sua ocorrncia em ani-
mais. Na natureza, o vrus infecta vrias espcies
de animais e causa febre e viremia em bovinos,
ovinos e pequenos mamferos, como lebres e co-
elhos silvestres. Sorologia positiva para o vrus
tem sido detectada em vrias espcies animais de
mamferos silvestres e cativos do Sudeste e Sul
da frica, indicando a sua ampla distribuio.
Dentre as espcies soropositivas, incluem-se bo-
vinos, ovinos, caprinos, eqinos, ces, mamferos
silvestres (74 espcies), alm de algumas espcies
de aves. Acredita-se que, na maioria, seno em
todas essas espcies, a infeco cause apenas fe-
bre transitria e, muitas vezes, pode ser absoluta-
mente subclnica.
A doena causada por um vrus pertencen-
te ao gnero Nairovirus, classicado em um dos
seis sorogrupos que formam o gnero. Vrus rela-
cionados j foram identicados no Oriente Mdio,
sia e antiga Unio Sovitica. O vrus replica em
uma variedade de clulas primrias e de linha-
gem, incluindo Vero, BHK-21 e CER, nas quais
produz citopatologia discreta e de difcil percep-
o. O isolamento e titulao do vrus geralmente
so realizados pela inoculao intracerebral de
camundongos lactentes. O carter zoontico e a
possibilidade de transmisso por contato colo-
ca o agente no nvel de biossegurana 4 (BSL-4)
dentre os agentes patognicos manipulveis em
laboratrio.
A exemplo de outros vrus do gnero, o
agente da CCHF transmitido entre animais por
carrapatos pertencentes a vrios gneros. O v-
rus j foi isolado de aproximadamente 30 esp-
cies de carrapatos. No entanto, os carrapatos do
gnero Hyalomma parecem ser os principais en-
volvidos na transmisso e manuteno do vrus
em reas endmicas, podendo ser transmitido de
forma transestadial nesses invertebrados. A dis-
tribuio geogrca da enfermidade segue fun-
damentalmente a distribuio desses vetores. O
vrus persiste nos vetores em todos os estdios de
seu desenvolvimento e transmitido aos animais
atravs da inoculao de saliva contaminada.
Mamferos infectados geralmente desenvolvem
altos ttulos de viremia durante aproximadamen-
te uma semana, perodo no qual o vrus pode ser
transmitido. Pessoas podem ser infectadas por
contato direto com sangue, tecidos ou secrees
desses animais ou, eventualmente, atravs da
picada de carrapatos. A maioria dos casos hu-
Bunyaviridae 771
manos relatados foi ocupacional, ou seja, afetou
indivduos envolvidos com atividades ligadas a
pecuria ou a matadouros. A reduzida incidncia
da doena humana, mesmo em reas endmicas
e em indivduos com alto risco de exposio, su-
gere que a maioria das infeces assintomtica.
Em pessoas, o perodo de incubao varia
de acordo com a forma de transmisso. Em indiv-
duos infectados pela picada de carrapatos, este
perodo varia entre um e trs dias; aps contato
com sangue ou tecidos contaminados, o perodo
varia entre cinco e seis dias, atingindo um mximo
de 13 dias. Os sinais iniciais so tpicos de viro-
ses como a gripe, com cefalia, mialgia, febre, dor
nos olhos, fotofobia. Nuseas, vmitos e faringi-
te so observados com freqncia. Alteraes de
comportamento, como agressividade e confuso
mental, tambm tm sido relatados. Aps dois ou
trs dias, esses sinais podem ser substitudos por
depresso, sonolncia e dor abdominal, causada
por hepatomegalia. Casos agudos graves podem
incluir eventos hemorrgicos, como petquias e
sufuses em mucosas, melena, hematria, epista-
xe e sangramento das gengivas. Nestes casos, ge-
ralmente ocorre envolvimento heptico e renal,
acompanhado de insucincia respiratria aps
o quinto ou sexto dia da doena. A mortalidade
atinge 30% dos infectados e ocorre geralmente
durante a segunda semana da doena; indivdu-
os que conseguem debelar a infeco se recupe-
ram a partir do nono ou dcimo dia.
Para o diagnstico, a enfermidade deve ser
considerada em reas endmicas sempre que
ocorrerem sinais semelhante gripe, com apa-
recimento sbito e curta durao, em pessoas
potencialmente expostas a material animal con-
taminado ou a carrapatos. O prurido, que fre-
qentemente ocorre, direciona o diagnstico,
assim como as petquias e hematemese. O diag-
nstico laboratorial realizado pelo isolamento e
identicao do vrus aps inoculao de plasma
ou sangue em clulas de cultivo e deteco de an-
tgenos virais por IFA.
O controle deve se basear no combate aos
carrapatos e na preveno da exposio humana
a animais, sangue e tecidos potencialmente conta-
minados. Indivduos constantemente em contato
com animais e subprodutos devem utilizar pro-
teo pessoal para minimizar o risco de contgio.
Vacinas inativadas de uso humano, obtidas pela
passagem do vrus em crebro de camundongos,
j foram utilizadas em reas endmicas na antiga
Unio Sovitica, mas no se encontram dispon-
veis para uso em larga escala.

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1 Introduo
2 Classicao
3 Gnero Orthoreovirus
3.1 Caractersticas do vrion e do genoma
3.3 Orthoreovirus de mamferos
3.4 Orthoreovirus avirios
4 Gnero Rotavirus
4.1 Classicao
4.2 Propriedades dos vrions, estrutura e organizao genmica
4.3 Replicao
4.4 Enfermidades causadas por rotavrus
4.4.2 Imunidade
4.4.3 Diagnstico
5 Gnero Orbivirus
5.2 O vrion, o genoma e as protenas virais
5.3 Replicao
5.4 Patogenia
5.5 Vrus da lngua azul
5.5.1 Epidemiologia
5.5.3 Diagnstico
5.6 Vrus da doena hemorrgica epizotica dos cervdeos
5.6.1 Epidemiologia
REOVIRIDAE
Amauri A. Aleri, Alice F. Aleri,
Elisabete Takiuchi & Zlia Ins Portela Lobato
30
775
775
777
777
778
779
779
780
781
782
786
788
790
790
791
792
793
793
794
796
797
798
798
800
802
802
803
803
5.6.3 Diagnstico
804
804
805
805
1 Introduo
A famlia Reoviridae composta por vrus
que infectam uma ampla variedade de hospedei-
ros, incluindo invertebrados, plantas e vertebra-
dos. As infeces de vertebrados afetam princi-
palmente os tratos gastrintestinal e respiratrio.
A denominao Reovirus derivada das palavras
Respiratory, Enteric e Orphan, sendo esta ltima
denominao (rfos) referente a vrus que no
puderam ser associados com nenhuma doena
conhecida. Embora vrios desses vrus j tenham
sido relacionados recentemente com algumas do-
enas, o nome ainda persiste.
Os vrus que compem essa famlia com-
partilham as seguintes caractersticas: a) vrions
com simetria icosadrica; b) ausncia de envelo-
pe glicoprotico; c) genoma constitudo por RNA
ta dupla (dsRNA) segmentado; d) RNA gen-
mico infeccioso somente quando associado com
as protenas virais; e) transcriptase presente nos
vrions; e f) replicao no citoplasma da clula
hospedeira.
O tipo e organizao do genoma so as prin-
cipais caractersticas em comum dos vrus inclu-
dos na famlia Reoviridae. O genoma desses vrus
constitudo por 10, 11 ou 12 molculas de dsR-
NA, ou seja, possuem o genoma segmentado. Em
geral, cada segmento genmico codica uma pro-
tena viral, mas h casos em que duas ou at trs
protenas so codicadas pelo mesmo segmen-
to. Vrus com o genoma constitudo por dsRNA
tambm podem ser encontrados em outras cinco
famlias virais. No entanto, somente duas (Reovi-
ridae e Birnaviridae) possuem vrus que infectam
vertebrados. Destas, apenas os vrus da famlia
Reoviridae produzem infeces em mamferos.
Os vrions dos membros da Reoviridae possuem
uma arquitetura complexa: so desprovidos de
envelope, possuem 60 a 85 nm de dimetro, si-
metria icosadrica e capsdeo duplo. A exemplo
da maioria dos vrus RNA, esses vrus realizam o
seu ciclo replicativo no citoplasma da clula hos-
pedeira.
A famlia Reoviridae bastante complexa com
relao s suas caractersticas biolgicas e mo-
leculares. A famlia composta por 11 gneros,
porm apenas cinco esto associados com doen-
a em vertebrados. Destes, apenas os orbivrus e
rotavrus possuem importncia em medicina ve-
terinria. No obstante, os vrus do gnero Ortho-
reovirus tambm possuem alguma importncia
veterinria e sero abordados resumidamente.
Embora compartilhem vrias propriedades
estruturais, genticas e biolgicas, os diferentes
gneros que compem a famlia Reoviridae tam-
bm apresentam diferenas importantes entre si.
Por essa razo, os gneros Orthoreovirus, Rotavi-
rus e Orbivirus sero abordados separadamente.
2 Classicao
A famlia Reoviridae composta por 11 gne-
ros, dos quais apenas cinco infectam vertebrados
(Orthoreovirus, Orbivirus, Rotavirus, Coltivirus e
Aquareovirus). Destes, apenas os gneros Orbivi-
rus e Rotavirus ocasionam infeces que, por suas
caractersticas epidemiolgicas e pela gravidade
dos sinais clnicos, so consideradas importantes
em mamferos. Alguns ortoreovrus tambm pro-
duzem infeces de alguma importncia clnica
em humanos e animais (Tabela 30.1). Fotograas
de microscopia eletrnica de vrions representa-
tivos dos ortoreovrus, rotavrus e orbivrus esto
apresentados na Figura 30.1.
O gnero Aquareovirus contm diversos v-
rus que j foram isolados de vrias espcies de
peixes de gua doce e salgada, ostras e outros
moluscos. Com base em tcnicas de hibridiza-
o (RNA-RNA), so descritas seis espcies de
aquareovrus, denominadas de A a F. Esses vrus
apresentam uma grande especicidade de hospe-
deiro, de acordo com a espcie viral. Tanto o po-
tencial patognico quanto o impacto econmico
da maioria das infeces ocasionadas pelos aqua-
reovrus ainda no esto claramente denidos.
O vrus da febre do carrapato do Colora-
do (Colorado tick fever virus, CTFV) o prottipo
do gnero Coltivirus. O CTFV tem sido isolado
de carrapatos, roedores e de seres humanos na
Amrica do Norte. Um outro vrus, denominado
Eyach, tambm isolado de carrapatos e, possivel-
mente, de seres humanos na Europa (Alemanha
e Frana), apresenta reao cruzada em testes
776 Captulo 30
de neutralizao com o CTFV. Esses dois vrus,
que so facilmente distinguveis, foram relatados
como sorotipos distintos e includos no subgrupo
A dos coltivrus.
Mais recentemente, vericou-se que vrios
isolados de coltivrus, provenientes da Indonsia
e da China, eram sorologicamente distintos dos
coltivrus do subgrupo A. Em 2001, foi propos-
Tabela30.1. Principais vrus dafamlia associados comdoenas emanimais. Reoviridae
Gnero Espcies afetadas Vrus
Orthoreovirus
Doena
Reovrus de mamferos 1-3 Isolado de vrios
mamferos
Hepatoencefalomielite
em camundongos
Reovrus avirios 1-11 Galinhas, perus e
gansos
Artrite, nefrose, enterite,
doena respiratria crnica,
miocardite
Orbivirus Vrus da lngua azul 1-25 Ovinos, bovinos e cervdeos Lngua azul
Vrus da peste eqina 1-9 Eqinos, asnos, burros e
zebras
Peste eqina
Vrus da encefalose eqina
1-5
Eqinos Aborto e encefalite
Vrus da doena epizotica
hemorrgica dos cervos 1-7
Cervos Doena epizotica
hemorrgica
Vrus Ibaraki Bovinos Doena febril aguda,
similar a lngua azul
Vrus Palyam 1-6 Bovinos Aborto, malformaes
congnitas
Rotavirus Rotavrus: vrios, geralmente
espcie-especficos
Virtualmente todas as
espcies
Enterite
Figura 30.1. Fotografias de microscopia eletrnica de vrions representativos dos gneros (A),
(B), e (C).
Orthoreovirus
Rotavirus Orbivirus
A B C
Fonte: A) Dr. Stewart McNulty; qub.ac.uk; B) Dr C. Bchen-Osmond, ICTVdB; C) www.usask.ca
Reoviridae 777
to que fosse criado um novo gnero na famlia
Reoviridae para esses isolados asiticos: Seadorna-
virus. Ento, somente os vrus com caractersticas
antignicas do subgrupo A permaneceram no
gnero Coltivirus. Nesse novo gnero, ainda no
foram descritos isolamentos em animais.
A febre do carrapato do Colorado uma
zoonose que ocorre em uma regio geogrca
bem denida na Amrica do Norte (Montanhas
Rochosas, estado do Colorado). Carrapatos do
gnero Dermatocentor andersoni atuam como ve-
tores biolgicos do CTFV, e pequenos roedores
so os reservatrios do vrus. Em seres humanos,
a doena manifesta-se sob duas formas clnicas
distintas: uma forma branda, caracterizada por
sinais clnicos inespeccos, como febre, cefalia,
mialgia e leucopenia; e outra mais grave (5% dos
casos), na qual podem ser observadas meningo-
encefalite e febre hemorrgica.
3 Gnero Orthoreovirus
Os primeiros vrus dsRNA isolados dos
tratos respiratrio e entrico de seres humanos
e animais, alguns mesmo sem vnculo com do-
enas conhecidas, foram denominados generica-
mente reovrus. Posteriormente, foram isolados
e caracterizados outros vrus com genoma dsR-
NA segmentado, com caractersticas antigni-
cas, moleculares e clnicas distintas dos reovrus
originais (p. ex.: rotavrus e orbivrus) e que, por
suas caractersticas semelhantes, tambm foram
includos na famlia Reoviridae. Com o objetivo de
diferenciar os isolados primrios (reovrus) dos
novos vrus isolados, foi adicionado o suxo or-
tho aos isolados iniciais de reovrus, que constitu-
ram, ento, o gnero Orthoreovirus. Os membros
deste gnero so comumente chamados de reo-
vrus e assim sero tratados neste texto. Ou seja,
a denominao vernacular reovrus se refere aos
membros do gnero e no aos membros da fam-
lia Reoviridae em geral.
Classicamente, o gnero Orthoreovirus
subdividido em duas espcies: ortoreovrus (reo-
vrus) de mamferos e ortoreovrus (reovrus)
avirios. Dentre os reovrus de mamferos so
descritos trs sorotipos (1 a 3), e 11 sorotipos j
foram identicados entre os reovrus avirios (1
a 11). Com base em anlises de seqncias gen-
micas e de protenas, novas espcies de Ortho-
reovirus tm sido subseqentemente descritas.
Atualmente so consideradas quatro espcies,
alm de outras cepas virais em processo de re-
conhecimento como novas espcies. Algumas
das novas espcies, como o reovrus de babuno,
encontram-se logeneticamente em uma posio
intermediria entre os reovrus de mamferos e
os avirios. Como o conhecimento acumulado
sobre essas novas espcies e cepas virais ainda
escasso e, principalmente, devido ao impacto
ainda no avaliado desses vrus na sade animal,
neste captulo sero apenas consideradas as duas
espcies clssicas de ortoreovrus: mamferos e
avirios.

3.1 Caractersticas do vrion e do
genoma
As partculas virais dos reovrus de mamfe-
ros e de aves compartilham vrias caractersticas
em comum. Os vrions no-envelopados de sime-
tria icosadrica apresentam aproximadamente
85 nm de dimetro (ver Figura 30.1). O genoma
dsRNA, com aproximadamente 23.500 pares de
bases (bp), constitudo por 10 segmentos que
podem ser agrupados em trs classes denomina-
das L (large), M (medium) e S (small), de acordo
com a respectiva massa molecular. possvel a
separao dos segmentos genmicos por eletro-
forese em gel de poliacrilamida, de acordo com
a massa. Na classe L, encontram-se os segmentos
genmicos 1, 2 e 3 (L1, L2 e L3); na classe M, os
segmentos 4, 5 e 6 (M1, M2 e M3) e, na classe S, os
segmentos 7, 8, 9 e 10 (S1, S2, S3 e S4).
O genoma dos reovrus codica 12 prote-
nas, e oito segmentos codicam apenas uma
protena e dois segmentos codicam duas prote-
nas cada. Dessas, oito protenas so estruturais
(fazem parte da estrutura do vrion) e quatro so
no-estruturais. As protenas estruturais consti-
tuem o capsdeo interno (n = 4) e externo (n = 4),
e as protenas no-estruturais, presentes apenas
nas clulas infectadas, desempenham importan-
tes funes enzimticas e regulatrias durante
a replicao viral. As protenas dos reovrus so
identicadas por letras gregas, de acordo com a
778 Captulo 30
classe de segmentos genmicos e, conseqente-
mente, de suas respectivas massas moleculares,
como (lambda) para as protenas da classe L;
(mi) para a classe M e (sigma) para a classe S
(Tabela 30.2).
Algumas caractersticas das partculas vi-
rais, como a ausncia de envelope lipoprotico e
a presena de capsdeo duplo, fazem com que os
vrions sejam muito estveis s condies do meio
ambiente. Os vrions so estveis em uma ampla
faixa de pH e resistentes a solventes de lipdios,
como o ter e o clorofrmio. Tambm devido
relativa resistncia das partculas virais, desinfe-
tantes comuns, como a formalina, lisol, derivados
fenlicos e perxido de hidrognio, devem ser
utilizados com cautela, pois, dependendo da con-
centrao e do tempo de exposio, os reovrus
podem manter a sua viabilidade. O hipoclorito
de sdio e o etanol a 95% so os desinfetantes de
eleio. Nos processos de desinfeco de instala-
es e equipamentos, deve-se sempre considerar
que os reovrus so primariamente vrus respira-
trios e entricos, e que secrees e excrees so
as fontes primrias de contaminao do ambien-
te, gua e alimentos. Os vrions so sensveis
ao da luz ultravioleta, e essa caracterstica deve
ser considerada para o manejo de vazio sanitrio
em ambientes com incidncia de luz solar direta.
Segmento
1
Genoma
Classe Nucleotdeos
2
3
4
5
6
7
8
9
10
L1
L2
L3
M1
M2
M3
S1
S2
S3
S4
3854
3916
3901
2304
2203
2241
1416
1331
1198
1196
Denominao
Protena
Aminocidos Localizao/funo
2
3
1
1
NS+
NSC
s1
s1S
s2
1267
1289
1275
736
708
721
681
455
120
418
Capsdeo interno, polimerase
de RNA dependente de RNA
Capsdeo externo, guanilil-
transferase, metiltransferase?
Capsdeo interno, protena de
ligao ao RNA, metaloproteina
Capsdeo interno, funo
desconhecida
Capsdeo externo, funo na
penetrao e ativao da
transcriptase
No-estrutural, liga-se ao RNA,
ativa a transcrio secundria
No-estrutural
Capsdeo externo, liga ao
receptor, hemaglutinina,
determinante de sorotipo
No-estrutural, funo
desconhecida
Capsdeo interno, liga-se ao RNA
sNS 366 No-estrutural, liga-se no RNA
s3
365
Capsdeo externo, liga-se ao
RNA, atua na traduo
2
Tabela 30.2. Vrus do gnero segmentos genmicos, protenas codificadas e sua localizao nos
vrions.
Orthoreovirus:
Reoviridae 779
Os reovrus podem ser amplicados em uma
srie de cultivos celulares, tanto de clulas prim-
rias quanto de linhagem. A maioria dos isolados
produz efeito citoptico, porm alguns podem ser
no-citopticos. A utilizao de enzimas proteol-
ticas (p. ex.: tripsina) no meio de cultivo aumenta
a infectividade das partculas vricas. Os reovrus
de mamferos exibem atividade hemaglutinante,
propriedade que ausente nos reovrus avirios.
A presena ou ausncia desta propriedade biol-
gica muito utilizada como indicador nas etapas
iniciais de identicao de isolados virais obtidos
a partir de casos clnicos.

3.3 Orthoreovirus de mamferos
As infeces por reovrus de mamferos so
muito freqentes, independentemente de regio
geogrca e do sorotipo viral. Inquritos soroepi-
demiolgicos em vrias espcies animais e tam-
bm em humanos demonstraram que a taxa de
adultos soropositivos alta (60-85%). Entretanto,
os relatos de doena clnica associada com esses
vrus so espordicos. Com isso, presume-se que
a grande maioria das infeces inaparente ou
subclnica.
Em humanos, a infeco por reovrus tem
sido relacionada com doenas respiratrias e en-
tricas sem gravidade, tanto em crianas como
em adultos e idosos. Os sinais clnicos mais fre-
qentemente relatados incluem cefalia, mal-es-
tar, rinite, faringite, tosse, espirro e diarria. Os
reovrus de mamferos j foram, ainda, de forma
muito espordica, implicados em infeces infan-
tis no relacionadas aos sistemas respiratrio e
digestivo, como atresia biliar extra-heptica neo-
natal, meningite assptica, exantema e adenopa-
tia cervical.
Anticorpos anti-reovrus j foram relatados
em uma grande variedade de mamferos doms-
ticos e selvagens. Sinais clnicos so esporadi-
camente relatados em animais jovens. Em eqi-
nos, a infeco tem sido relacionada com sinais
clnicos de infeco respiratria, como laringite,
rinite e tosse. Conjuntivite tambm tem sido es-
poradicamente relatada. Em bovinos, ovinos, su-
nos, ces e gatos, alm de relatos de distrbios
respiratrios, quase sempre secundrios, a infec-
o tambm tem sido relacionada com ocorrncia
de diarria. Em animais, a infeco mais impor-
tante por esses vrus ocorre em camundongos e,
por isso, essa espcie muito utilizada em estu-
dos experimentais. Sinais clnicos variados, como
diarria, oleosidade de pele e plos, sinais neu-
rolgicos (ataxia), hepatite, ictercia, miocardite
e pancreatite, so descritos em camundongos
natural e/ou experimentalmente infectados com
reovrus.
Tanto em animais quanto em seres huma-
nos, infeces bacterianas secundrias e condi-
es imunolgicas desfavorveis, como imunode-
presso por qualquer origem, podem complicar
o quadro clnico produzido pelas infeces por
reovrus, principalmente em hospedeiros jovens
e senis.

3.4 Orthoreovirus avirios
Os reovrus avirios caracterizam-se pela es-
pecicidade de hospedeiro, diversidade antig-
nica e pela ausncia de atividade hemaglutinante
na grande maioria dos isolados, o que contrasta
com a caracterstica hemaglutinante dos reovrus
dos mamferos. Dentre os reovrus avirios, so
descritos 11 sorotipos distintos que, de acordo
com a procedncia (distribuio geogrca, esp-
cie aviria e material clnico de origem), podem
apresentar considervel reatividade sorolgica
cruzada devido presena de antgenos comuns.
O isolamento dos reovrus avirios pode ser ob-
tido com relativa facilidade, pois o vrus adapta-
se a uma srie de sistemas, como ovos embrio-
nados de galinha. Nesse sistema, o material deve
ser inoculado no saco da gema ou na membrana
crio-alantide. Leses macro e microscpicas,
acompanhadas de morte, caracterizam a infeco
dos embries. Os reovrus avirios podem ser
isolados tambm em cultivo primrio de clulas
originadas de embrio de galinha, como bro-
blastos, rim, fgado e pulmo. O isolamento viral
pode ser monitorado pelo efeito citoptico, que
se caracteriza pela formao de sinccios, dege-
nerao celular e produo de incluses intraci-
toplasmticas. Clulas de linhagem contnua (ou
estabelecida) de mamferos tambm podem ser
utilizadas para o isolamento de reovrus avirios,
780 Captulo 30
destacando-se as linhagens derivadas de tecido
renal Vero, BHK-21 (clulas renais de hamster),
GBK (clula de rim bovino), CRFK (clulas de
rim felino) e PK (clulas de rim suno).
Vrias espcies de aves domsticas e sil-
vestres so susceptveis a esses vrus, porm a
infeco assume especial importncia em gali-
nhas e perus. Vrias condies intercorrentes
so necessrias para denir o curso de uma in-
feco. A presena ou a ausncia de sinais clni-
cos e mesmo o nmero de aves acometidas esto
relacionados com vrios fatores, que incluem: a)
gentica e idade do hospedeiro; b) sorotipo viral
e via de infeco; c) infeces bacterianas, para-
sitrias e virais intercorrentes, incluindo aquelas
com caractersticas imunodepressoras; d) manejo
zootcnico inadequado, acarretando em descon-
forto e estresse; e) qualidade da rao (composi-
o, presena de micotoxinas); f) falhas no mane-
jo sanitrio, entre outros. Essas condies, tanto
de forma isolada quanto em associao, podem
denir o conceito de doenas ou sndromes mul-
tifatoriais e multietiolgicas que contribuem com
a emergncia de novas doenas ou mesmo a ree-
mergncia de doenas conhecidas.
Os reovrus avirios tm sido isolados, com
maior freqncia, de uma variedade de tecidos
e rgos de aves acometidas por vrias doenas
no-relacionadas, como artrite/tenosinovite, sn-
drome da refugagem, sndrome da m-absoro,
alm de aves com problemas respiratrios e en-
tricos. Em outras condies menos freqentes,
tambm h relatos do isolamento dos reovrus
avirios, como associados com ruptura do ten-
do do gastrocnmio, osteoporose, pericardite,
miocardite, hidropericrdio, empastamento da
cloaca, mortalidade de pintinhos. Vrias dessas
condies clnicas podem ocorrer concomitante-
mente, como as sndromes da refugagem e da m-
absoro, empastamento da cloaca e aumento da
taxa de mortalidade de pintinhos. Em contraste,
os reovrus avirios tambm podem ser isolados
a partir de aves clinicamente sadias.
A entidade clnica mais bem denida e clas-
sicamente atribuda ao reovrus avirio em gali-
nhas e perus a artrite viral. A infeco natural
ocorre usualmente em aves jovens (4 a 6 semanas
de idade), mas tambm pode ser observada em
faixas etrias mais avanadas. A taxa de mor-
bidade pode ser de 100%, mas a taxa de morta-
lidade relativamente baixa (em mdia 5%). A
evoluo pode ser aguda ou crnica, e as aves
comprometidas apresentam dor articular, claudi-
cao com conseqentes diculdades de locomo-
o e alimentao. Devido perda da condio
corporal e refugagem, muitas aves so elimina-
das do lote. A intensidade dos sinais clnicos e
o nmero de aves comprometidas esto relacio-
nados com a idade da ave e com o sorotipo viral
envolvido. Fatores intercorrentes, como infeces
mistas com Mycoplasma synoviae e falhas nos ma-
nejos zootcnico, nutricional e sanitrio, tambm
podem agravar a infeco.
Os prejuzos econmicos ocasionados pela
reovirose aviria em criaes comerciais de fran-
gos de corte e de perus devem-se incapacidade
e denhamento de aves com quadro clnico de ar-
trite/tenosinovite, ao aumento da taxa de morta-
lidade e reduo da performance geral, incluin-
do ganho de peso e converso alimentar. Essas
condies ocasionam um aumento da refugagem
e perda da aceitao das aves no mercado.
4 Gnero Rotavirus
Os rotavrus membros do gnero Rotavirus
so considerados em todo o mundo como um
dos principais vrus entricos tanto para huma-
nos quanto para animais. A maioria das infec-
es agudas pelos rotavrus caracteriza-se por
sua gravidade, sendo, com freqncia, acompa-
nhadas de diarria, desidratao, desequilbrio
eletroltico e acidose. Os rotavrus esto ampla-
mente disseminados na natureza, e uma gama de
hospedeiros susceptvel infeco, incluindo
mamferos domsticos e silvestres e tambm as
aves. A infeco, quando acomete animais jovens,
geralmente acompanhada de sinais clnicos. Em
adultos, infeco com freqncia assintomtica,
porm esses indivduos podem ser portadores e
transmissores do vrus para indivduos jovens da
mesma espcie. Na dependncia da virulncia da
cepa viral infectante e em hospedeiros com po-
tencial de resposta imunolgica comprometido,
tanto por infeces imunodepressoras recorren-
tes quanto pela idade avanada, algumas infec-
Reoviridae 781
es em adultos podem ser acompanhadas por
sinais clnicos de diarria.
Os rotavrus so predominantemente es-
pcie-especcos, porm infeces heterlogas
tambm so relatadas com grande freqncia. As
infeces heterlogas so caracterizadas pela in-
feco de uma determinada espcie animal por
um rotavrus de outra espcie, como as infeces
humanas causadas por sorotipos e/ou gentipos
de rotavrus de sunos e bovinos, e vice-versa. A
primeira situao exemplica o carter zoontico
da infeco que, at recentemente, no era consi-
derado.
Em animais de produo, a infeco pelos
rotavrus assume especial importncia epidemio-
lgica e, conseqentemente, econmica na cria-
o de bovinos, sunos e frangos de corte. O rota-
vrus o principal agente etiolgico do complexo
diarria neonatal bovina e suna, de etiologia
multifatorial e multietiolgica, envolvendo fato-
res relacionados ao manejo zootcnico e sanitrio,
alm de microorganismos, como bactrias, proto-
zorios e vrus. A diarria neonatal em bovinos
e sunos o principal problema sanitrio nessa
fase da criao. Nos episdios de diarria neo-
natal, com alta taxa de morbidade, as principais
conseqncias da infeco pelo rotavrus, alm
dos sinais clnicos, concentram-se em alteraes
signicativas nas taxas de converso alimentar e
ganho de peso e em aumento nos custos de pro-
duo e da taxa de mortalidade.
A rotavirose est amplamente disseminada
nos rebanhos e/ou plantis de bovinos, sunos e
frangos de corte brasileiros. Nessas trs espcies,
a infeco mais freqente na faixa etria entre a
segunda e terceira semanas de vida. Em bovinos,
a infeco constitui-se em srio problema sanit-
rio para animais com aptido para a produo
de leite ou para carne, incluindo tanto aqueles
rebanhos manejados de forma intensiva quanto
extensiva. Com isso, a infeco assume especial
importncia para a medicina veterinria.

4.1 Classicao
De acordo com as diferenas antignicas
detectadas na VP6, que a protena mais abun-
dante dos vrions, os rotavrus podem ser classi-
cados em sete sorogrupos distintos, designados
pelas letras A a G. Os grupos A, B e C tm sido
encontrados tanto em humanos quanto em ou-
tras espcies animais; enquanto os grupos D a G
foram identicados exclusivamente em animais.
Dos sete sorogrupos dos rotavrus, somente os
grupos A, B e C produzem infeces, que, pela
sua freqncia, podem ser consideradas de im-
portncia clnica e epidemiolgica para humanos
e animais. A grande maioria dos episdios de
diarria, e mesmo as infeces subclnicas nessas
espcies, est associada com os rotavrus do gru-
po A. A infeco pelo rotavrus grupo B me-
nos freqente e, alm do homem, j foi relatada
em bovinos, sunos, ovinos e roedores. O grupo
C de rotavrus tem sido identicado em vrias
partes do mundo como causador de diarria em
humanos e animais, principalmente sunos. Em
bovinos, a identicao do rotavrus grupo C em
fezes de animais com diarria um evento raro.
Da mesma forma que a classicao em
grupos sorolgicos, o perl de migrao dos 11
segmentos genmicos de dsRNA em eletroforese
em gel de poliacrilamida (PAGE) tambm possi-
bilita a classicao dos rotavrus em sete grupos
distintos (A-G), denominados eletroferogrupos.
As variaes observadas no perl eletrofortico
das cepas ou isolados de rotavrus classicadas
em um mesmo eletroferogrupo so denominadas
eletroferotipos.
O padro eletrofortico de migrao dos 11
segmentos genmicos dos rotavrus do grupo A,
de acordo com a massa molecular de cada seg-
mento, distribudo em classes constitudas pe-
los segmentos 1 a 4 (Classe I); 5 e 6 (Classe II); 7, 8,
e 9 (Classe III) e os segmentos 10 e 11 (Classe IV).
Essa disposio freqentemente representada
como 4-2-3-2, indicando o nmero de segmentos
genmicos encontrados em cada classe do grupo
A. Uma importante caracterstica eletrofortica do
rotavrus do grupo A a migrao dos segmentos
genmicos 7, 8 e 9 em forma de trinca, uma vez
que as suas respectivas massas moleculares so
muito prximas, podendo em muitas circunstn-
cias co-migrarem em gel de poliacrilamida (Figu-
ra 30.2). Por outro lado, os rotavrus dos grupos B
a G, denominados atpicos, no apresentam essa
distribuio caracterstica em forma de trinca.
782 Captulo 30
Contudo, o perl genmico obtido por meio da
migrao em PAGE (eletroferotipo) no deve ser
utilizado como nico mtodo de classicao dos
rotavrus, pois alteraes no genoma viral, como
rearranjos e delees, podem resultar em altera-
es no padro de migrao dos segmentos.
Alm da classicao dos rotavrus em so-
rogrupos (de acordo com a reatividade sorolgi-
ca com a VP6), as protenas do capsdeo externo
VP4 e VP7 ou os segmentos genmicos que as co-
dicam permitem a caracterizao das amostras
de rotavrus em sorotipos e/ou gentipos. Dessa
forma, os rotavrus possuem um sistema binrio
de classicao, constitudo por tipos de VP4 (P
tipos protease sensvel) e tipos de VP7 (G tipo
glicoprotena). Atualmente, por meio de tcnicas
sorolgicas e/ou moleculares, so descritos mais
de 27 diferentes tipos de P (VP4) e 15 tipos de G
(VP7). Entre as mais de 405 combinaes poss-
veis entre os diferentes gentipos P (27) e G (15),
algumas so mais freqentes.

4.2 Propriedades dos vrions, estrutura
e organizao genmica
Os vrions medem aproximadamente 85 nm
de dimetro e no possuem envelope. A deno-
minao Rotavirus surgiu da palavra de origem
latina rota, que signica roda, devido aparncia
das partculas virais quando observadas sob mi-
croscopia eletrnica (ME) (Figura 30.1). O caps-
deo viral formado por trs camadas proticas
concntricas de simetria icosadrica, denomi-
nadas capsdeo externo, intermedirio e interno
Figura 30.2. Ilustrao esquemtica do padro de migrao dos segmentos genmicos dos rotavrus pertencentes aos
eletroferogrupos Aa E, aps eletroforese emgel depoliacrilamida.
Rotavrus grupo A
Tpicos
Atpicos
humanos humanos bovinos sunos B C D E
Outros grupos
-
+
1
2
3
4
5
6
7
9
10
11
longo curto
8
< < <
< <
< <
Fonte: Alfieri et al. (1996).
a b c d d e e
Reoviridae 783
(Figura 30.3). De acordo com a sua composio
protica e estrutura, trs tipos de partculas v-
ricas podem ser visualizadas sob ME. As part-
culas completas apresentam todo o conjunto de
protenas estruturais, distribudas em trs cama-
das proticas (Figura 30.3A). Partculas contendo
apenas duas camadas proticas, que podem ser
obtidas experimentalmente pela remoo da VP4
e VP7 por mtodos qumicos, tambm so obser-
vadas, porm no so infecciosas (Figura 30.3B).
A remoo da VP6, que tambm pode ser obtida
in vitro, resulta em partculas menores, no-in-
fecciosas, compostas apenas pelo ncleo ou core
(Figura 30.3C).
No interior do ncleo, encontra-se o genoma
viral, constitudo por 11 molculas de dsRNA.
Cada um dos 11 segmentos genmicos codica
pelo menos uma protena viral, totalizando seis
protenas estruturais e seis protenas no-estru-
turais. Estudos com a estirpe SA11 do rotavrus
smio identicaram uma sexta protena no-es-
trutural, codicada pelo segmento 11 do genoma,
sendo este o nico segmento que codica mais de
uma protena. A Figura 30.4 apresenta a estrutura
esquemtica do vrion, os segmentos genmicos
e as protenas codicadas por cada segmento.
Os vrions contm a atividade de RNA po-
limerase dependente de RNA e as demais fun-
es enzimticas necessrias para a replicao
viral. As protenas estruturais so designadas VP
(viral protein), seguidas por nmero seqencial
na ordem decrescente da massa molecular. No
core ou ncleo, esto presentes as protenas VP1
(125kDa), VP2 (94kDa) e VP3 (88kDa); no caps-
deo intermedirio, a VP6 (46kDa); e, no capsdeo
externo, as protenas VP4 (88kDa) e VP7 (38kDa).
As protenas no-estruturais, encontradas nas
partculas virais maduras, recebem a denomina-
o NSP (non-structural protein).
No core ou ncleo viral, as protenas VP1 e
VP3 esto diretamente associadas com o genoma.
A protena VP2, com 120 molculas por vrion,
a mais abundante do ncleo. A protena VP1
possui atividade de RNA polimerase RNA-de-
pendente, e a protena VP3 possui atividade de
guanililtransferase, estando envolvida na adio
da estrutura 5-cap aos RNAs mensageiros (mR-
NAs). O capsdeo intermedirio formado por
780 molculas da protena estrutural VP6, orga-
nizadas em 260 unidades trimricas. O capsdeo
externo composto por duas classes de protenas,
VP4 e VP7, que so responsveis pelas interaes
iniciais do vrus com a clula hospedeira. A su-
perfcie externa do vrus apresenta 780 cpias da
glicoprotena VP7, em arranjos trimricos, e 120
cpias da protena VP4, que formam 60 estrutu-
Figura 30.3. Ilustrao esquemtica da estrutura dos trs tipos de partculas vricas dos rotavrus que podem ser
visualizadas sobME.
VP4, VP7
VP6
Partcula
com capsdeo
triplo
Partcula
com capsdeo
duplo
Core ou ncleo
Protenas:
VP1, 2, 3, 4, 6, 7
Infecciosa
Protenas:
VP1, 2, 3, 6
No-infecciosa
Protenas:
VP1, 2, 3
No-infecciosa
Agentes
quelantes
(10mM EDTA)
Agentes
caotrpicos
(1,5M CaCl )
2
A B C
Fonte: adaptado de Estes (2001).
784 Captulo 30
ras dimricas semelhantes a espculas. A protena
VP4 contm um stio de clivagem pela tripsina
e, quando submetida ao tratamento in vitro com
protease, gera dois produtos: as protenas VP5
e VP8, que aumentam a infectividade do vrus.
Os genes dos rotavrus, com os seus respectivos
produtos e funes, esto apresentados na Tabela
30.3.
Os rotavrus so os nicos vrus conhecidos
de mamferos e aves que possuem 11 segmentos
de dsRNA como genoma. A extenso de cada um
dos 11 segmentos genmicos varia entre 600 e
3.000 pb, e o genoma completo apresenta aproxi-
madamente 18.600 pb. essa diferena de tama-
nho que possibilita que os segmentos genmicos
apresentem um perl de migrao caracterstico
e nico para os rotavrus quando separados por
PAGE.
O prottipo smio SA11 foi o primeiro ro-
tavrus a ter o genoma completamente seqen-
ciado. As extremidades 5 das tas genmicas
de polaridade positiva possuem uma estrutura
cap, mas diferentemente da maioria dos mRNA
celulares, no possuem as extremidades 3 po-
liadeniladas. Todos os genes dos rotavrus esto
anqueados por regies traduzidas de extenso
varivel prximo as extremidades 5 e 3. Em to-
dos os segmentos, essas seqncias no-traduzi-
das anqueiam uma nica seqncia aberta de
leitura (open reading frame, ORF), com exceo do
segmento 11, que possui duas ORFs. Quase todos
os mRNA terminam com a seqncia consenso
5-UGUGACC-3, sugerindo que se constituam
em sinais importantes para a transcrio, trans-
porte do RNA e replicao e/ou encapsidao
dos segmentos genmicos.
Segmentos
genmicos
Protenas
1 VP1
2 VP2
7
NSP2
NSP4
NSP5
NSP6
3 VP3
8 NSP3
4 VP4
9 VP7
5
NSP1
VP6 6
10
11
Figura 30.4. Eletroforese em gel de poliacrilamida, mostrando os segmentos genmicos (dsRNA) dos rotavrus
(esquerda); as protenas codificadas por cada segmento (centro) e uma ilustrao simplificada de uma partcula vrica
e os seus componentes (direita). Os segmentos esto numerados combase na migrao do genoma do rotavrus grupo
AdacepaSa11.
Reoviridae 785
O ressortimento (reassortment) uma forma
de recombinao gentica dos rotavrus pode
ocorrer quando uma clula co-infectada por
duas cepas virais distintas, de forma que a pro-
gnie viral ser constituda por uma populao
contendo diferentes combinaes dos genes pa-
rentais. A ocorrncia desse fenmeno de varia-
bilidade gentica permitida pela homologia da
seqncia consenso (5-UGUGACC-3) entre to-
dos os segmentos do genoma viral.
Os rotavrus so relativamente estveis em
condies ambientais, mantendo a sua infectivi-
dade na faixa de pH entre 3 e 9. Amostras virais
isoladas de bezerros permaneceram infectivas
durante vrios meses a 4C ou mesmo a -20C
quando estabilizadas em 1,5 mM CaCl
2
. A ausn-
cia de lipdeos na estrutura dos vrions justica a
resistncia desses vrus aos solventes orgnicos,
tais como: ter, clorofrmio ou fren. Pelos efeitos
deletrios que ocasionam na camada externa do
vrion, a formalina, o cloro, a betapropiolactona,
o etanol a 95% e o glutaraldedo so considerados
desinfetantes ecientes para esses vrus.
A complexidade molecular e antignica dos
rotavrus decorrente da diversidade genmica
gerada por trs mecanismos genticos bsicos:
mutaes pontuais, ressortimento e rearranjos
genmicos. As mutaes pontuais consistem
em alteraes na seqncia de nucleotdeos que
ocorrem durante a replicao do genoma e que
acarretam substituies de aminocidos das pro-
tenas. Essas mutaes podem alterar os stios
antignicos, resultando em cepas resistentes aos
anticorpos neutralizantes produzidos contra as
cepas parentais. O ressortimento uma forma de
recombinao que ocorre em vrus com o genoma
segmentado, decorrentes da troca de segmentos
genmicos por cepas diferentes por ocasio de
VP1
Protena
125.005
Massa (Da)
Localizao
nas partculas
12
Nmero
de cpias
RNA polimerase RNA-dependente.
Funes
Nucleocapsdeo
VP2 102.431 120 Unio ao RNA; forma o nucleocapsdeo. Nucleocapsdeo
VP3 98.120 12
Guanililtransferase; metiltransferase;
protena bsica.
Nucleocapsdeo
VP4 86.782 120 Protena de unio clula; interage com
VP6; antgeno neutralizante P-tipo.
Infectividade aumenta aps clivagem
pela tripsina, formando as protenas
Vp5 e VP8.
Capsdeo
60.000
Produto da clivagem de VP4
28.000 Produto da clivagem de VP4
NSP1 58.654 0
Associa-se ao citoesqueleto; interage
com fator 3 regulatrio de IFN.
Protena no-estrutural
VP6 48.16 780
Protena estrutural do capsdeo
intermedirio; antgeno de subgrupo.
Capsdeo
NSP3 34.600 0 Envolvida na regulao da traduo. Protena no-estrutural
NSP2 34.700 0
Acumula-se em viroplasmas; atividade
NTPase; liga-se NSP5 e Vp1.
VP7 7.368 780
Glicoprotena estrutural do capsdeo
externo; antgeno neutralizante G-tipo.
Capsdeo externo
NSP4 20.290 0
Enterotoxina; receptor para partculas.
NSP5 21.725 0 Possvel cinase autocaltica; interage
com VP2, NSP2 e NSP6.
NSP6 11.012 0 Produto do ORF2 do gene 11; interage
com NSP5; localizada em viroplasmas.
Gene Gene
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tabela30.3. Caractersticas dos segmentos genmicos e protenas codificadas pelogenoma segmentadodos rotavrus
786 Captulo 30
uma co-infeco de uma clula. Por meio desse
mecanismo, novas cepas virais podem surgir ra-
pidamente. A co-infeco celular por cepas gene-
ticamente prximas pode promover naturalmen-
te o mesmo fenmeno de forma mais eciente. As
alteraes na seqncia de nucleotdeos, identi-
cadas em pores importantes de um segmento
genmico, muitas vezes na forma de delees ou
duplicaes, so denominadas de rearranjo. Tais
alteraes determinam modicaes na massa
molecular dos segmentos de dsRNA, resultando
em um perl eletrofortico ou eletroferotipo, dis-
tinto da cepa original.
4.3 Replicao

O mecanismo de replicao dos rotavrus
tem sido elucidado a partir de estudos realizados
em clulas da linhagem contnua MA-104 (clu-
las renais de macaco rhesus). Esta linhagem celu-
lar uma das mais permissivas infeco pelos
rotavrus e tem sido amplamente utilizada para a
caracterizao desses vrus.
O monitoramento dos estgios iniciais da
replicao viral por ME revela que somente as
partculas com o capsdeo triplo, contendo a
VP4 ntegra, so capazes de penetrar produtiva-
mente nas clulas hospedeiras. A adsoro viral
superfcie celular mediada pela VP4 ou por
seu produto de clivagem (VP5). Alguns estudos
apontam tambm a participao da VP7 nas liga-
es vrion-clula. Entretanto, a penetrao dos
rotavrus nas clulas hospedeiras parece iniciar
com um processo complexo, que necessita da in-
terao dessas duas protenas (VP4 e VP7) para
estabelecer a ligao inicial.
A infeco in vivo pelo rotavrus est restri-
ta a clulas do topo das vilosidades do intestino
delgado, o que sugere a existncia de receptores
especcos nessas clulas. A infeco in vitro tam-
bm limitada a linhagens celulares epiteliais de
origem intestinal e renal. Embora grandes avan-
os no conhecimento da biologia molecular e
estrutural dos rotavrus j tenham sido obtidos,
pouco conhecido sobre os seus provveis recep-
tores. A infectividade de algumas cepas de rota-
vrus de origem animal depende da presena de
cido silico (AS) na superfcie celular. Entretan-
to, esta interao parece no ser essencial, uma
vez que j foram identicadas molculas na su-
perfcie celular resistentes a neuraminidase (AS-
independentes), que interagem com a maioria das
cepas de rotavrus de origem humana e algumas
de origem animal. Portanto, tem sido proposto
que existam, pelo menos, dois receptores para
o rotavrus: os AS-dependentes (gangliosdeos)
e os AS-independentes (integrinas). Estudos re-
centes sugerem uma interao inicial dos vrions
com o receptor AS-dependente, seguida por uma
segunda interao com um receptor AS-indepen-
dente. Aparentemente a ligao com o segundo
receptor mais especca. A interao inicial
dependente de concentraes de sdio e ocorre
na faixa de pH compreendida entre 5,5 e 8.
Aps a interao do vrion com os receptores
celulares, a partcula viral penetra no citoplasma
celular por um mecanismo ainda no completa-
mente conhecido. Entre os mecanismos propos-
tos, destacam-se a penetrao direta atravs da
membrana plasmtica aps a clivagem proteolti-
ca de VP4 e exposio do peptdeo de fuso VP5;
e a penetrao aps internalizao por endocito-
se (Figura 30.5).
Estudos realizados com a cepa OSU do ro-
tavrus suno conrmam a internalizao dos
vrions por endocitose, mediada por receptor
especco, e sugerem que o desnudamento pode
ocorrer pela ao de enzimas lisossomais. A en-
docitose constitui um modelo de entrada clcio-
dependente, sendo que a ligao aos receptores
celulares induz a formao de uma vescula en-
doctica que isola a partcula de capsdeo triplo
em um compartimento intracelular. A reduo
da concentrao de clcio no interior da vescula
endossomal ocorre por meio de difuso simples
e pode provocar alteraes conformacionais no
capsdeo, com a solubilizao das protenas do
capsdeo externo. Com a liberao dos peptde-
os do capsdeo externo, ocorre o rompimento da
membrana lisossomal, permitindo a penetrao
da partcula subviral, isenta do capsdeo exter-
no, no citoplasma (Figura 30.5). Nesse momento,
ocorre a ativao da transcriptase viral, dando
incio transcrio dos segmentos genmicos.
O ciclo replicativo ocorre integralmente no
citoplasma, independente de estruturas e me-
canismos nucleares. A sntese dos mRNA virais
modulada pela enzima viral RNA polimerase
Reoviridae 787
RNA-dependente (VP1). Os mRNA recm-trans-
critos cumprem basicamente duas funes: atuam
como mensageiros para a traduo das protenas
virais e atuam como molde para a sntese do dsR-
NA que constituir o genoma da prognie viral.
A transcrio assimtrica: todos os transcritos
sintetizados so tas de polaridade positiva que
utilizam como molde as tas negativas dos RNAs
genmicos. medida que se processa a sntese
e o acmulo das protenas virais (VPs e NSPs),
grandes incluses citoplasmticas, denominadas
viroplasmas, so formadas no citoplasma das c-
lulas infectadas.
Tem sido sugerido que todo o processo de
replicao do genoma e a formao das partcu-
las subvirais com duplo capsdeo, formadas pela
VP2 e VP6, ocorra no interior dos viroplasmas.
Embora grande parte da traduo dos mRNA
ocorra nos ribossomos livres, as glicoprotenas
VP7 (capsdeo externo) e NSP4 so sintetizadas
nos ribossomos associados membrana do re-
tculo endoplasmtico rugoso (RER), onde so
processadas e inseridas na membrana. Dessa
forma, todas as protenas se acumulam no viro-
plasma, com exceo da VP7 e NSP4 que se lo-
calizam no RER, e das protenas no-estruturais
NSP1 e NSP3, que se encontram distribudas no
citoplasma, em associao com as bras do cito-
esqueleto.
A morfognese das partculas vricas um
processo complexo que ocorre de forma coorde-
nada com a replicao. Nesse processo, ocorre a
formao de pelo menos trs estgios intermedi-
rios de replicao, que so os precursores das
partculas de duplo capsdeo. Aps a formao
das partculas com duplo capsdeo, elas passam
do viroplasma para o interior do RER adjacente.
A maturao nal dependente de altas concen-
traes de clcio para promover a estabilizao
das protenas do capsdeo externo. Durante a
passagem pelo RER as partculas virais adquirem
uma bicamada lipdica temporria. O envelope
3
4
5
1
2
Figura 30.5. Modelo para a penetrao dos rotavrus em clulas susceptveis, por meio de endocitose clcio-
dependente. 1) Internalizao por endocitose; 2) Efluxo de ons clcio do interior das vesculas; 3) Baixa na
concentrao de Ca++ e acidificao das vesculas; 4) Solubilizao do capsdeo externo (VP5, 7 e 8); 5)
Permeabilizaodamembrana, lisedavesculaendoctica, liberaodas partculas comduplocapsdeonocitosol.
Membrana plasmtica
Citoplasma
Fonte: adaptado de Ruiz et al. (2000).
788 Captulo 30
lipdico removido no interior do RER por ao
coordenada da NSP4. Em seguida, a VP7 (caps-
deo externo) adicionada para formar a partcula
viral madura (triplo capsdeo). Estudos por ME
tm demonstrado que, ao nal do ciclo replicati-
vo, a prognie viral liberada por lise celular. A
Figura 30.6 apresenta uma ilustrao esquemti-
ca do ciclo replicativo dos rotavrus.
4.4 Enfermidades causadas
por rotavrus
A primeira descrio dos rotavrus em ani-
mais foi realizada, em 1969, por Mebus e cola-
boradores, que demonstraram a presena de
partculas virais em fezes de bezerros com diar-
ria. Woode, Jones e Bridger (1975) realizaram o
Figura 30.6. Ciclo replicativo dos rotavrus. A internalizao ocorre por endocitose mediada por receptor (1), e a
penetrao ocorre aps a desestabilizao da partcula vrica e permeabilizao da membrana endoctica
desencadeadas pelo efluxo de clcio (2). A penetrao direta atravs da membrana tambm tem sido proposta (3). A
transcrio primria ocorre ainda no interior de partculas semi-ntegras (4) e resulta na produo de mRNA para a
sntese protica (5) e para a replicao do genoma (6). A replicao do genoma (6, 7) e os estgios iniciais da
morfognese (8) ocorrem no interior de estruturas denominadas viroplasmas, que contm RNAs e protenas virais e
partculas vricas em formao. As partculas com duplo capsdeo formadas no viroplasma adquirem um envelope
lipdico temporrio ao penetrarem no RER (9). A remoo do envelope (10) seguida da adio da VP7, formando o
capsdeo externo e estabilizando as partculas (11). Acredita-se que os vrions maduros sejam liberados por lise
celular (12), embora outros mecanismos j tenhamsidopropostos (13).
Ncleo
Citoplasma
1
cap AAAA
cap AAAA
cap
cap
cap
cap
cap AAAA
cap AAAA
AAAA
AAAA
AAAA
AAAA
RER
VP7
Viroplasma
(-)
(-)
(-)
cap AAAA
cap AAAA
?
1
2
3
4
5
6
7
9
10 9
11
12
13
?
Reoviridae 789
primeiro relato de rotavrus em fezes diarricas
de leites. Desde ento, os rotavrus tm sido
identicados como uma das principais etiologias
virais de diarria em animais jovens de diversas
espcies de mamferos e aves. Em medicina vete-
rinria, importncia especial atribuda aos ani-
mais de interesse econmico, principalmente os
sunos, bovinos, ovinos e eqinos. Os animais de
companhia e/ou laboratrio, como ces, gatos,
coelhos, ratos e camundongos, tambm so sus-
ceptveis infeco pelo rotavrus. As rotaviroses
tambm representam um problema sanitrio em
aves comerciais, principalmente em frangos de
corte e perus.
As taxas de morbidade e mortalidade e os
prejuzos econmicos ocasionados pelas rotavi-
roses em espcies de importncia veterinria so
variveis. Em bovinos, a diarria causada pelos
rotavrus reconhecidamente uma das principais
causas de perdas econmicas no perodo entre o
nascimento e o desmame. Estudos epidemiolgi-
cos, realizados no Brasil, Estados Unidos, Cana-
d, ndia, Austrlia e pases europeus, indicam
que as infeces por rotavrus apresentam morbi-
dade com taxas de 8 a 36%, e a mortalidade pode
atingir de 3 a 6% dos animais jovens. Bezerros na
segunda ou terceira semanas de vida so os mais
susceptveis.
Em leites, as diarrias constituem o princi-
pal problema de ordem sanitria que ocorre tan-
to em animais lactentes (maternidade) quanto em
recm-desmamados (creche). Em todos os pases
onde a suinocultura explorada de forma inten-
siva, os rotavrus so identicados como um dos
mais importantes agentes infecciosos causadores
de diarria nos perodos do pr e ps-desmame.
O primeiro ms de vida dos animais tem
sido apontado como o perodo mais crtico para
a ocorrncia das rotaviroses. Aps esse perodo,
a freqncia de episdios de diarria por esses
vrus declina vertiginosamente. A maior suscep-
tibilidade dos animais neonatos explicada pelo
fato de que a reposio do epitlio apical das vi-
losidades ocorre de forma mais lenta, facilitando
o desenvolvimento completo do ciclo replicativo
e a produo de prognie viral. Os animais adul-
tos tornam-se resistentes doena porque a re-
posio dos entercitos mais intensa e compete
com a replicao viral, de forma que somente as
cepas virais muito virulentas podem causar diar-
ria em bezerros com idade superior a seis sema-
nas. A doena clnica tambm no freqente
durante a primeira semana de vida do animal,
provavelmente devido transmisso passiva dos
anticorpos maternos e conseqente neutralizao
do vrus.
Diferentemente de outras infeces entri-
cas, em especial as bacterianas e parasitrias, as
medidas de carter higinico-sanitrio adotadas
isoladamente no so capazes de reduzir sig-
nicativamente o nmero de casos clnicos de
rotaviroses. Algumas caractersticas peculiares
dos rotavrus fazem com que as rotaviroses se
manifestem de forma diferente de outras doen-
as entricas, determinando um grande impacto
na sanidade animal, at mesmo em rebanhos de
propriedades altamente tecnicadas. Dentre es-
sas caractersticas, destacam-se: a) resistncia dos
vrions s condies ambientais e aos produtos
qumicos utilizados em desinfeco; b) alta con-
centrao de partculas virais excretadas no per-
odo agudo da doena (10
11
partculas por grama
de fezes); c) presena de infeces subclnicas e
de adultos portadores assintomticos; d) grande
variedade de hospedeiros; e) possibilidade de
transmisso entre espcies (infeces heterlo-
gas); e f) carter endmico da infeco. Medidas
relativas aos aspectos nutricionais e de carter
higinico-sanitrio no foram capazes de reduzir
signicativamente a incidncia e a gravidade das
infeces por rotavrus.
As infeces por rotavrus so amplamente
disseminadas nas populaes humanas e animais
susceptveis. A distribuio dos sorotipos e/ou
eletroferotipos de cada espcie viral, no entanto,
pode apresentar variaes, de modo que deter-
minadas regies apresentem determinados soro-
tipos em contraste com outras regies que podem
apresentar a circulao de sorotipos diferentes.
Os altos ttulos em que o vrus excretado, o pe-
rodo de excreo, a existncia de portadores e a
alta resistncia dos vrions no ambiente contri-
buem para essa ampla disseminao.

790 Captulo 30
A transmisso dos rotavrus ocorre princi-
palmente pela via fecal-oral, por meio de part-
culas virais encontradas no ambiente, na gua e
nos alimentos contaminados pelas fezes. Aps a
ingesto, as partculas virais alcanam a luz in-
testinal. Os rotavrus possuem tropismo marcan-
te pelas clulas do intestino delgado. Os vrions
penetram nos entercitos maduros, localizados
na regio apical das vilosidades intestinais. Alm
da capacidade absortiva, os entercitos maduros
ou do pice das vilosidades desempenham tam-
bm funo digestiva com a secreo da enzima
lactase.
A partir desse momento, iniciado o ciclo
replicativo no interior dos entercitos, culminan-
do com a lise e descamao do epitlio intestinal.
Os vrions liberados, aps a descamao celular,
iro infectar novos entercitos, contribuindo para
a propagao da infeco. O vrus excretado nas
fezes por at sete dias ps-infeco. Em decorrn-
cia da grande injria tecidual, a reposio celular
feita por clulas cubides, imaturas do ponto
de vista estrutural e funcional, provenientes das
criptas intestinais que no so afetadas direta-
mente pela infeco. Embora as clulas imaturas
sejam refratrias infeco viral, o que confere
infeco a caracterstica autolimitante, elas per-
dem a capacidade absortiva e digestiva.
Com base nos mecanismos siopatolgicos,
a diarria ocasionada pelo rotavrus tambm
conhecida como diarria por m absoro. Por
decincia da enzima lactase, ocorre falha na di-
gesto da lactose. Associada com a m absoro,
a lactose no digerida entra em fermentao por
ao de bactrias, intensicando a diarria devi-
do ao aumento da presso osmtica na luz intes-
tinal. Por esses eventos, as infeces pelos rota-
vrus so freqentemente denominadas curso
branco, devido presena de leite no digerido
nas fezes diarricas.
Em conseqncia das leses no epitlio, os
mediadores da reao inamatria comprome-
tem tambm as clulas das criptas; e a motilidade
intestinal pode estar inibida durante a maioria
dos casos de diarria. Quando o nmero de ente-
rcitos infectados excede o da reposio celular,
as vilosidades atroam-se, podendo fusionar-se
nos casos mais graves. Aps o perodo mdio de
incubao de 16 a 24 horas, surgem os primeiros
sinais de diarria. Alm da diarria, outros sinais
clnicos no-especcos das sndromes diarricas
incluem: depresso, anorexia, vmito, desidra-
tao, plo eriado e sinais inerentes acidose
metablica. Animais jovens podem morrer em
conseqncia da desidratao ou da infeco bac-
teriana secundria, mas a maioria se recupera em
trs a quatro dias.
Estudos realizados em camundongos de-
monstraram que a protena no-estrutural NSP4
pode atuar como uma enterotoxina e induzir
diarria quando administrada pela via intrape-
ritoneal ou intraluminal. Nesse caso, o meca-
nismo siopatolgico envolvido na evoluo do
quadro diarrico ocorreria de forma semelhante
a enterotoxina da Escherichia coli. A NSP4 intera-
ge com um receptor celular do epitlio intestinal,
ativando uma via sinalizadora da traduo, que
aumenta os nveis de Ca
2
+
intracelular. O Ca
2
+
in-
duz o aumento da permeabilidade da membrana
plasmtica ao cloro, que , ento, secretado. Esses
eventos caracterizam um quadro de diarria por
hipersecreo. A protena NSP4 pode, ainda, par-
ticipar da ativao do sistema nervoso entrico,
que estimula e aumenta a secreo de gua pelas
clulas intestinais.
Apesar dos rotavrus serem espcie-espe-
ccos, a transmisso interespcies tambm
possvel. Vrios estudos tm encontrado evidn-
cias antignicas e moleculares de recombinao
(ressortimento) in vivo de diferentes cepas de ro-
tavrus do grupo A provenientes de humanos e
de animais. Cepas virais que so geneticamente
muito relacionadas com rotavrus de origem bo-
vina, suna, canina, felina e inclusive aviria, tm
sido isoladas de crianas com infeces sintom-
ticas ou assintomticas e nosocomiais. Recipro-
camente, combinaes genotpicas, comumente
associadas com cepas de rotavrus do grupo A
de origem humana, esto sendo identicadas em
animais.
4.4.2 Imunidade
Os mecanismos imunolgicos envolvidos
na resposta s infeces pelos rotavrus ainda
no esto totalmente esclarecidos. A imunidade
Reoviridae 791
de mucosas, mediada por imunoglobulinas da
classe A (IgA secretora), parece constituir a prin-
cipal defesa orgnica contra as infeces intesti-
nais causadas por esses vrus.
As protenas do capsdeo intermedirio
(VP6) e externo (VP4 e VP7) e a protena no-es-
trutural NSP4 induzem a formao de anticorpos
neutralizantes, principalmente IgG. Entretanto, a
funo especca desse isotipo de imunoglobuli-
na na proteo contra a infeco ainda no est
claramente denida. Experimentos conduzidos
em cordeiros neonatos gnotobiticos sugeriram
que os anticorpos presentes na luz do intestino
delgado foram os determinantes primrios da
resistncia infeco pelo rotavrus, enquanto
os anticorpos circulantes falharam na proteo.
Tambm foi observada a participao efetiva de
IgG neutralizantes de origem materna na prote-
o de animais neonatos contra a doena clnica.
A importncia da imunidade celular na res-
posta imunolgica contra a infeco pelo rotav-
rus tem sido amplamente estudada em camun-
dongos, utilizados como modelos experimentais.
Nesses animais, tem sido demonstrado que: a)
anticorpos rotavrus-especcos so de impor-
tncia primria na proteo contra a reinfeco;
b) cepas homlogas de rotavrus so muito mais
potentes na induo de resposta imune humoral
local do que cepas heterlogas; c) os linfcitos T
CD8+ desempenham funo principal na reso-
luo da enfermidade, embora, de forma menos
efetiva, tambm seja demonstrada a participao
de linfcitos T CD4+; d) citocinas e clulas NK
(natural killer) tambm esto envolvidos na elimi-
nao do vrus. Em sntese, a imunidade celular
pode estar muito mais relacionada com a recupe-
rao da enfermidade do que com a preveno
da reinfeco.
Em paralelo demonstrao que a protena
no-estrutural NSP4 pode atuar como enterotoxi-
na viral e ocasionar diarria em ratos experimen-
talmente inoculados, tambm foi observado que
essa protena estimula as respostas humoral e ce-
lular, com a participao de linfcitos T citotxi-
cos. Embora existam evidncias de que a resposta
imunolgica induzida pela NSP4 no seja fun-
damental para o controle da infeco, as novas
descobertas nesse campo so fundamentais para
o entendimento dos fatores imunolgicos envol-
vidos, bem como para a denio das diretrizes
para o desenvolvimento de vacinas ecazes.

4.4.3 Diagnstico
Devido semelhana com os sinais clnicos
de infeces entricas causadas por outros entero-
patgenos, como bactrias, protozorios e vrus,
o diagnstico denitivo das rotaviroses depende
essencialmente da realizao de testes laborato-
riais. A ME muito eciente na deteco do v-
rus, uma vez que a morfologia tpica dos rotav-
rus permite a sua identicao sem a necessidade
do uso de soro hiperimune (imunomicroscopia
eletrnica). A ME tambm freqentemente uti-
lizada com o objetivo de solucionar os resultados
discrepantes de outros mtodos de diagnstico.
Entretanto, essa tcnica mostra-se invivel quan-
do o diagnstico envolve um grande nmero de
amostras a serem analisadas.
O isolamento viral em cultivo celular tem
pouco valor prtico para o diagnstico, particu-
larmente por ser uma tcnica laboriosa, demora-
da e exigir a manuteno de linhagens celulares,
que torna o procedimento oneroso. As linhagens
celulares rotineiramente empregadas para o iso-
lamento do rotavrus incluem a MA-104b e HT 29
(clula de tumor retal humano). Embora no seja
utilizada como tcnica de diagnstico de rotina,
o cultivo do rotavrus um mtodo indispens-
vel para o desenvolvimento de estudos relacio-
nados s caractersticas antignicas e moleculares
das cepas virais e para a produo de antgenos
empregados no diagnstico e na elaborao de
vacinas.
Outros mtodos tambm j foram padroni-
zados para a deteco do rotavrus, como a xa-
o de complemento, imunouorescncia (IFA),
radioimunoensaio (RIA), hemaglutinao (HA)
e aglutinao em ltex. Os testes imunoenzim-
ticos (ELISA) constituem um dos mtodos mais
difundidos no diagnstico da rotavirose animal
devido ao seu limiar de deteco, facilidade de
execuo, baixo custo e rapidez na obteno dos
resultados. Vrios testes de ELISA com anticor-
pos de captura foram desenvolvidos para o diag-
nstico do rotavrus grupo A. Kits de ELISA, em
792 Captulo 30
escala comercial, esto disponveis. Embora a
tcnica de ELISA seja altamente sensvel, de f-
cil execuo e apropriada para o processamento
de um grande nmero de amostras, o sucesso do
diagnstico diretamente dependente da quali-
dade dos anticorpos empregados.
O genoma segmentado, caracterstico dos
rotavrus, permite a aplicao da tcnica de
PAGE para a identicao desse vrus. Contu-
do, apesar de ser eciente na denio do grupo
ou do eletroferogrupo, a PAGE no possibilita a
denio do sorotipo viral. Cepas de rotavrus
de um mesmo sorotipo podem apresentar pers
eletroforticos distintos, e cepas do mesmo ele-
troferotipo podem pertencer a diferentes soroti-
pos. Os grupos B e E, encontrados em sunos, por
exemplo, apresentam eletroferotipos com a mes-
ma distribuio e so antigenicamente diferentes.
Dessa forma, a eletroferotipagem no deve ser o
nico critrio para a classicao dos grupos de
rotavrus.
Os mtodos moleculares, tais como a hibri-
dizao e a amplicao gnica por RT-PCR esto
sendo aplicados para a genotipagem de cepas de
rotavrus grupo A. Devido boa correlao com
a especicidade antignica, relacionada aos soro-
tipos, a genotipagem passou a ser utilizada como
uma tcnica alternativa sorotipagem. Alm da
genotipagem, que possibilita a caracterizao dos
genotipos G e P das cepas de rotavrus do grupo
A circulantes em uma regio ou perodo, a RT-
PCR pode ser tambm utilizada com muita eci-
ncia para o diagnstico das infeces ocasiona-
das pelos rotavrus grupos B e C.
A utilizao de RT-PCR multiplex per-
mite, ainda, a identicao de infeces mistas,
como aquelas ocasionadas por cepas de rotavrus
pertencentes a diferentes gentipos, e tambm de
infeces heterlogas, ocasionadas por recombi-
nao gentica, nas quais so identicadas asso-
ciaes de gentipos G e P no caractersticas da
espcie em estudo.
Os mtodos mais tradicionais de determina-
o do sorotipo da cepa viral infectante, como a
soroneutralizao (SN) e diferentes sistemas de
ELISA, tambm so comumente empregados nas
rotaviroses. Infeces mistas, bem como a pre-
sena de variantes antignicas, dicultam a clas-
sicao sorolgica de muitas cepas de rotavrus
grupo A por meio de sistemas de ELISA que uti-
lizam painis de anticorpos monoclonais. O uso
apenas do ELISA para a sorotipagem de cepas de
rotavrus grupo A apresenta tambm limitaes
em razo da indisponibilidade comercial de anti-
corpos monoclonais neutralizantes para a identi-
cao de alguns sorotipos G (VP7) e da maioria
dos sorotipos P (VP4).
Devido alta prevalncia da infeco na
maioria dos rebanhos de animais de produo,
no comum a realizao do diagnstico soro-
lgico. Animais adultos podem apresentar taxas
superiores a 90% de soropositividade.

A prolaxia das rotaviroses no se restringe
apenas adoo de medidas de carter higinico-
sanitrio, visto que a infeco se estabelece inclu-
sive em rebanhos de propriedades altamente tec-
nicadas e com bom manejo sanitrio. Medidas
gerais de prolaxia da infeco podem incluir: a)
isolamento dos animais infectados com o objeti-
vo de reduzir a transmisso do vrus aos animais
susceptveis; b) criao de animais de faixas et-
rias uniformes; c) desinfeco de instalaes; d)
rodzio de piquetes de paries em rebanhos bo-
vinos de criao extensiva; e) vazio sanitrio.
Nos mamferos domsticos, os anticorpos
rotavrus-especcos presentes no colostro so
particularmente importantes na proteo dos
animais neonatos. Embora a maior parte dos an-
ticorpos colostrais seja absorvida pelos animais
recm-nascidos, altos ttulos de anticorpos sri-
cos parecem no ser ecazes na proteo contra
a infeco. Porm, as imunoglobulinas presentes
na luz intestinal participam efetivamente na pro-
teo contra os rotavrus. Dessa forma, a inges-
to de colostro de boa qualidade pode prevenir
a incidncia da doena nos neonatos ou reduzir a
gravidade da diarria. Com esse propsito, pre-
coniza-se a vacinao das fmeas gestantes com
vacinas inativadas para garantir altos ttulos de
anticorpos especcos no colostro.
Contudo, tambm no campo imunoprol-
tico, as rotaviroses representam um desao para
a elaborao de imungenos capazes de induzir
Reoviridae 793
resposta imunolgica plena e duradoura. A varia-
bilidade antignica e molecular dos rotavrus, ge-
rada pelas caractersticas prprias de seu genoma
e expressas nos vrios grupos sorolgicos, soro-
tipos e mesmo variantes de sorotipos circulantes
representa um grande obstculo para a obteno
de vacinas efetivas. Devido complexidade e di-
versidade genmica dos rotavrus, ca evidente
que o prvio conhecimento dos gentipos P e G
das cepas virais circulantes em uma regio, bem
como a sua distribuio temporal, fundamental
para o planejamento de qualquer programa de
vacinao.
5 Gnero Orbivirus
Os orbivrus constituem um dos 11 gneros
da famlia Reoviridae. Os vrus desse gnero in-
fectam uma variedade de vertebrados, incluindo
ruminantes domsticos e selvagens, eqdeos,
roedores, morcegos, primatas, marsupiais e aves.
Esses vrus infectam e so primariamente trans-
mitidos por artrpodes vetores como mosquitos
e carrapatos, mas a infeco nestas espcies no
apresenta efeitos deletrios evidentes.
Com base em reatividade sorolgica, 19
espcies de orbivrus, abrangendo pelo menos
130 sorotipos, j foram denidas. Ainda assim,
existem vrios isolados no-classicados. Os so-
rogrupos, nmero de sorotipos, principais veto-
res e hospedeiros desses vrus esto listados na
Tabela 30.4.
Dentre as espcies de orbivrus importantes
na medicina veterinria, incluem-se o vrus da
lngua azul (bluetongue virus, BTV) que possui 24
sorotipos conhecidos; o vrus da doena hemor-
rgica epizotica dos cervdeos (EHDV), com dez
sorotipos; o vrus da peste eqina (african horse si-
ckness virus, AHSV), com nove sorotipos; o vrus
da encefalose eqina (EEV), com sete sorotipos, e
o vrus Palyam. Estas trs ltimas enfermidades
so exticas no Brasil e encontram-se basicamen-
te restritas aos continentes africano e asitico.

Os vrions maduros medem entre 60 e 85 nm
de dimetro, no apresentam envelope lipdico,
e as protenas que formam a partcula viral esto
dispostas em camadas concntricas que, geral-
mente, conferem uma simetria icosadrica. Os v-
rions apresentam coeciente de sedimentao de
55 S e densidade de utuao em CsCl
2
de 1,36 -
1,38 g/cm
3
. Esses vrions so resistentes a solven-
tes lipdicos, sensveis a desinfetantes base de
iodoforos e fenis. So estveis sob pH entre 6,5
e 8 e quando armazenados a temperatura de 4C,
principalmente na presena de matria orgnica.
Hospedeiros Sorogrupo
Distribuio
geogrfica
Peste eqina
Sorotipos Doena Vetor
1 a 10 Eqideos,
zebras, ces
Doena cardiopulmonar,
febre
frica, Oriente Mdio,
sia e Europa
Culicoides
Lngua azul 1 a 24 Ovinos, bovinos,
caprinos, cervdeos
Rinite, estomatite,
laminite
frica,sia,
Austrlia, Amricas
Culicoides
Doena
epizotica
hemorrgica
EHDV
(vrios
sorotipos)
Cervdeos Similar a lngua azul Amricas, Austrlia,
frica
Culicoides
Palyam
Kasba Bovinos Abortos frica do Sul Culicoides
Ibakari
Kawanabe
Bovinos Doena febril semelhante
a lngua azul, encefalite
sia, Austrlia,
Japo
Culicoides
Chuzan Bovinos Malformaes congnitas Japo Culicoides
Tabela30.4. Principais membros dognero associados comdoenas emanimais. Orbivirus
794 Captulo 30
O congelamento pode reduzir at 90% a infecti-
vidade viral, porm a infectividade preservada
quando mantidos a -70C.
O genoma desses vrus composto por 10
segmentos de dsRNA, cada um deles codicando
uma, duas ou trs protenas (geralmente uma). O
padro de migrao desses segmentos pode ser
usado para diferenciar sorogrupos dos orbivrus,
assim como diferenci-los de outros gneros da
famlia Reoviridae.
Devido natureza dos genomas segmenta-
dos e, dependendo da compatibilidade gentica,
os orbivrus podem sofrer ressortimento de seus
genes durante infeces mistas. Esses eventos po-
dem envolver vrus de um mesmo sorotipo ou di-
ferentes sorotipos. Uma alta freqncia de ressor-
timentos genmicos entre orbivrus relacionados
j foi demonstrada em hospedeiros vertebrados e
invertebrados, bem como em cultivos celulares.
Aparentemente, a freqncia de ressortimento
mais observada nos vetores artrpodes. Esse fe-
nmeno um dos responsveis pela diversidade
gentica da populao dos orbivrus na natureza.
Mltiplos sorotipos de um mesmo ou de diferen-
tes sorogrupos tm sido identicados no mesmo
inseto, indicando que vrus geneticamente distin-
tos podem estar presentes em um nico hospe-
deiro.
Tambm tm sido reportadas variaes ge-
nticas dentro de isolados do mesmo sorotipo ao
longo de um mesmo ano em diferentes re gies,
indicando que mutaes e evoluo ocorrem
tambm dentro de cada sorotipo.
Assim, os sorotipos atualmente existentes
nos diversos continentes reetem provavelmente
uma combinao de mutaes, rearranjos e co-
evolues de um pool de genes de vrus de v-
rias localidades. Essa evoluo ocorre atravs dos
tempos e resulta em uma diversidade gentica
com conseqncias epidemiolgicas e clnico-pa-
tolgicas ainda pouco conhecidas. Da mesma for-
ma, o impacto dos rearranjos dos segmentos so-
bre o fentipo viral, viremia e transmissibilidade,
presso seletiva na resposta imune do hospedei-
ro, virulncia e conseqncias do uso de vacinas
vivas multivalentes so ainda pouco conhecidos.
As duas protenas externas do capsdeo
(VP5 e VP2) so as mais variveis dentro dos so-
rotipos e entre as diferentes espcies do gnero,
enquanto as protenas no-estruturais NS1 e NS2
so altamente conservadas. Estudos baseados na
seqncia de aminocidos da protena estrutural
VP3, que altamente conservada, tm sido utili-
zados para agrupar cepas isoladas de diferentes
regies, como Amrica, frica do Sul e Austr-
lia, em sorotipos e sorogrupos. Por outro lado,
estudos baseados na seqncia da VP5 fornecem
informaes sobre o sorotipo viral. De fato, uma
comparao entre as seqncias das protenas do
BTV, EHDV e AHSV indicou que a VP3 a prote-
na mais conservada e a VP2 a mais varivel.

5.2 O vrion, o genoma e as protenas
virais
Grande parte dos conhecimentos sobre a es-
trutura das partculas vricas, biologia molecular
e replicao dos orbivrus foi obtida a partir de
estudos do prottipo do gnero, o BTV. O geno-
ma do BTV consiste de 10 segmentos de dsRNA,
divididos em trs segmentos grandes (L1 a L3),
trs mdios (M4 a M6) e quatro pequenos (S7 a
S10). O conjunto de segmentos genmicos codi-
ca sete protenas estruturais (VP1 a VP7) e trs
protenas no-estruturais (NS1 a NS3). As duas
tas de RNA que compem cada segmento ge-
nmico so exatamente complementares, embora
a extremidade 5 da ta codicante (polaridade
positiva) de cada duplex possua a estrutura cap,
enquanto a cadeia complementar no possui esta
modicao em sua extremidade. A seqncia
completa de nucleotdeos de todos os segmentos
de vrios sorotipos do BTV e de alguns represen-
tantes dos grupos da EHDV e AHSV j foi estabe-
lecida. As caractersticas de cada segmento, a(s)
protena(s) codicada(s), sua localizao e prov-
veis funes esto apresentadas na Tabela 30.5.
Os vrions do BTV medem entre 65 a 75 nm
de dimetro, no apresentam envelope lipdico,
e as protenas que formam a partcula viral esto
dispostas em camadas concntricas que conferem
a ela uma simetria icosadrica (Figura 30.7). A ca-
mada interna ou ncleo (54-58 nm de dimetro)
contm cinco protenas (VP1, VP3, VP4, VP6 e
VP7). Dentre estas, a VP7 (antgeno determinante
do sorogrupo) e a VP3 so as mais abundantes. A
Reoviridae 795
VP3 forma uma estrutura central ou subncleo,
no qual 260 trmeros da VP7 esto ancorados.
Por isso exerce uma importante funo na inte-
gridade estrutural do ncleo viral. A seqncia
de nucleotdeos que codica a VP3 altamente
conservada entre os diferentes sorotipos do vrus
e tambm muito semelhante a VP3 do EHDV e
ASFV. A VP7 a protena mais abundante que
compe o ncleo e contm os principais determi-
nantes antignicos especcos de grupo. Apesar
de fazer parte do ncleo, sabe-se que esta prote-
na est exposta em algumas regies da superfcie
viral e capaz de estimular a produo de anti-
corpos.
Localizadas no interior do subncleo, as pro-
tenas VP1, VP4 e VP6 esto presentes em peque-
nas quantidades e parecem no desempenhar um
papel importante na estrutura do ncleo. A VP1
a protena com maior massa do BTV e, com base
em sua massa, localizao, concentrao molar
no ncleo e seqncia de aminocidos, acredita-
se que seja a RNA polimerase viral. Essa protena
seria a responsvel pela transcrio e replicao
do genoma durante a replicao viral nas clulas
hospedeiras.
O ncleo icosadrico do BTV circundado
pela camada externa ou capsdeo, que composto
pelas protenas VP2 e VP5. Estas protenas so as
menos conservadas entre os diferentes sorotipos
do vrus. A VP2 o principal determinante do so-
rotipo e responsvel pelo estmulo para a pro-
duo de anticorpos neutralizantes. Alm disso,
apresenta atividade de hemaglutinao e hemad-
soro. A segunda protena do capsdeo externo
a VP5, que possui 526 aminocidos. Esta prote-
na mais varivel do que as outras protenas do
ncleo, mas mais conservada do que a VP2. A
VP5 possui uma funo importante na penetra-
o do vrus na membrana do endossomo, sendo
responsvel pela liberao do ncleo viral no ci-
Segmento
do genoma
N de
bases
Massa (Da) Protena
codificada
Localizao na
partcula viral
L1 3.954
Principais funes
VP1 149.588 Ncleo interno RNA polimerase
L2 2.926 VP2 111.112 Capsdeo externo
Ligao aos receptores celulares e
penetrao nas clulas de mamferos;
hemaglutinina; determinao do
sorotipo, principais epitopos
neutralizantes.
L3 2.772 VP3 103.344 Subncleo
Formao de estrutura para
deposio dos trmeros de Vp7.
M4 2.011 VP4 76.433 Ncleo interno
Funo enzimtica de
guanililtransferase e metiltransferase.
M5 1.639 VP5 59.163 Capsdeo externo Penetrao viral.
M6 1.770 NS1 64.445 No-estrutural Formao dos tbulos.
S7 1.156 VP7 38.548 Subncleo
Determinao do sorogrupo,
penetrao em clulas de insetos.
S8 1.124 NS2 40.999 No-estrutural
Formao de corpsculos de incluso,
ligao a RNA de fita simples.
S9 1.046 VP6 35.750 Ncleo interno
Ligao ssRNA, dsRNA,
helicase e ATPase.
S10 822
NS3 25.572
No-estrutural Auxlio no egresso das
partculas vricas.
NS3A 24.020
Tabela30.5. Caractersticas dos segmentos genmicos e das protenas codificadas pelogenomados orbivrus.
796 Captulo 30
toplasma celular. A sua conformao estrutural
indica que capaz de induzir a permeabilizao
e desestabilizao de membranas.
Trs protenas no-estruturais (NS1, NS2
e NS3) so produzidas durante a replicao do
BTV. A NS1 e NS2 so sintetizadas abundante-
mente, enquanto NS3 de difcil deteco. A se-
qncia dessas protenas altamente conservada
entre os sorotipos, o que indica a sua importncia
para a replicao desses vrus. A sntese da NS1
e NS2 coincide, respectivamente, com o apare-
cimento de duas estruturas vrus-especcas: os
tbulos e os corpsculos de incluso. Presume-se
que essas estruturas estejam envolvidas na repli-
cao e no processo de transporte das partculas
virais para a membrana celular ou na preveno
da mitose em clulas infectadas. A NS3 a pro-
tena menos abundante do BTV e a sua funo
ainda no est totalmente esclarecida, mas sabe-
se que essencial para o egresso das partculas
vricas da clula.
5.3 Replicao
A adsoro dos vrions do BTV s clulas
hospedeiras parece envolver uma interao rpi-
da e especca de algumas regies da VP2 com
componentes da membrana celular, sendo esta
protena a principal responsvel pela penetrao
do vrus nas clulas de mamferos. Acredita-se
que a VP7, localizada no core, esteja envolvida
em um mecanismo equivalente nas clulas dos
insetos vetores Culicoides. A natureza dos recep-
tores celulares que medeiam este evento ainda
est sendo esclarecida, porm sabe-se que a VP2
possui a caracterstica de se ligar a uma sialogli-
coprotena presente em eritrcitos de vrias esp-
cies animais.
Aps a ligao aos receptores por meio da
VP2, os vrions so internalizados por endocito-
se. Poucos minutos aps, os vrions podem ser
encontrados no interior de vesculas nas proxi-
midades do ncleo. Aproximadamente uma hora
ps-infeco, as partculas perdem as protenas
VP2 e VP5 do capsdeo, provavelmente pela ao
do baixo pH e pela concentrao de ctions no in-
terior dos endossomos. Este mecanismo essen-
cial para que a transcriptase viral (RNA polime-
rase) se torne ativa, o que ocorre pelo acesso de
nucleotdeos trifosfato ao genoma viral atravs
de canais localizados nas camadas que delimitam
o ncleo viral.
No citoplasma, as partculas virais semi-de-
sintegradas se ligam a bras do citoesqueleto e,
aps o incio da transcrio do genoma viral, a
sntese das protenas da clula hospedeira rapi-
VP2
VP3
VP4
VP6
VP1
VP5
VP7
dsRNA
A B
Figura 30.7. Partculas vricas dos orbivrus. A) Fotografia de microscopia eletrnica de um vrion; B) Ilustrao
esquemticadaestrutura deuma partculavrica indicandoos elementos constituintes.
Fonte: A) Dr Peter Mertens, www.iah.bbsrc.ac.uk; B) Adaptado de Roy (2001).
Reoviridae 797
damente reprimida. O primeiro polipeptdeo vi-
ral detectado duas a quatro horas ps-infeco,
e a sntese protica viral atinge o pico entre nove
e 11 horas aps, diminuindo progressivamente
at a morte celular.
A protena VP6 possui funo de helicase
e desenrola os componentes do duplex de RNA
genmico, enquanto a VP1 inicia a sntese de mo-
lculas de RNA de sentido positivo, para serem
utilizadas como mRNA para a sntese protica.
Uma vez sintetizadas, essas molculas so
modicadas pela atividade enzimtica da VP4,
sendo metiladas na extremidade 5. Os mRNA,
assim sintetizados, so exportados dos capsdeos
semi-ntegros para o citoplasma, para o incio da
traduo. A ta de RNA de polaridade negativa
sintetizada tambm pela ao da VP1, inician-
do a partir da extremidade 3 das tas positivas.
Em geral, os segmentos genmicos menores so
transcritos com maior freqncia, porm o frag-
mento que codica a protena NS1 o mais abun-
dantemente transcrito.
A condensao dos RNAs recm-produzi-
dos pela transcrio e as protenas recm-pro-
duzidas pela traduo formam os corpsculos
de incluso, onde os vrions so montados gra-
dativamente, desde ncleo at partcula viral
completa, e, subseqentemente, liberados para o
citoplasma. A VP2 e a VP5 so adicionadas aos
vrions na periferia dos corpsculos.
Os corpsculos de incluso podem ser gra-
nulares ou brilares, so encontrados dispersos
pela clula e correspondem aos stios de morfo-
gnese das partculas virais. Esses corpsculos
so compostos por ssRNA, dsRNA, ncleos e
subncleos virais, algumas protenas estruturais
(VP3, VP7 e VP5) e, principalmente, a NS2. Esta
protena pode ligar-se ao RNA viral, facilitan-
do, assim, o seu encapsidamento no interior dos
ncleos virais. Protenas estruturais e partculas
virais completas so observadas em maior con-
centrao na periferia dos corpsculos.
A NS1 produzida em grandes quantida-
des, formando os tbulos que esto presentes
em grande abundncia, predominantemente ao
redor ou nas proximidades do ncleo da clula
hospedeira. Essas estruturas so caractersticas
da infeco por orbivrus e apresentam diferen-
as em relao a sua espessura e extenso, va-
riando para cada espcie viral, o que sugere que
possuem uma funo especca para cada grupo
viral. Os corpsculos, os tbulos e as partculas
virais recm-formadas so associadas com redes
de lamentos intermedirios no citoesqueleto ce-
lular.
No processo de morfognese das partculas,
ocorre inicialmente a formao do subncleo,
que composto pela VP3, VP4, VP1 e VP6. Em
seguida, so montados e adicionados os trme-
ros de VP7, formando o ncleo viral. Acredita-se
que a NS2, com a sua capacidade de ligao ao
RNA, facilita o empacotamento dos segmentos
genmicos no ncleo viral. A seguir, as protenas
VP2 e VP5 se associam atravs da interao com
a VP7.
Vrios estudos da morfognese do BTV
tm sido conduzidos, utilizando a expresso de
protenas individuais no sistema de baculovrus.
Nesses estudos, observou-se que as protenas es-
truturais possuem a capacidade de se associarem
entre si, na ausncia do genoma, formando part-
culas chamadas de CLP (core like particles) ou VLP
(virus like particles), dependendo da combinao
das protenas produzidas.
Aps a formao do capsdeo pela adio
da VP2 e VP5 ao ncleo viral, as partculas virais
esto prontas para o seu egresso das clulas in-
fectadas. Nas fases iniciais da infeco, os vrions
podem ser liberados por brotamento atravs da
membrana plasmtica, onde adquirem um enve-
lope temporrio. Quando j h desestruturao
da membrana celular, grupos de partculas virais
se movem atravs de membrana plasmtica rom-
pida e so, assim, liberados. A protena no-es-
trutural NS3 tem sido identicada nesses stios,
sugerindo um papel importante, provavelmente
mediando a liberao das partculas por exocito-
se.

5.4 Patogenia
Os orbivrus so transmitidos para os hos-
pedeiros vertebrados por insetos hematfagos.
Aps a replicao primria nos linfonodos re-
gionais, os vrions se disseminam para o bao,
timo e outros linfonodos associados s clulas
798 Captulo 30
san gneas. O BTV se liga a glicoforinas na su-
perfcie dos eritrcitos de bovinos e ovinos, onde
persiste em invaginaes da membrana. Nesses
locais, os vrions permanecem protegidos dos
anticorpos circulantes por longo perodo, resul-
tando em viremia prolongada. Essa viremia de
longa durao proporciona uma contnua opor-
tunidade para a transmisso do agente.
A maioria dos orbivrus so neurovirulentos
e alguns so neuroinvasivos quando inoculados
em camundongos ou hamsters, e os fetos so par-
ticularmente susceptveis a infeco.
Uma caracterstica marcante da patogenia
da infeco por esses vrus a sua capacidade de
replicar e destruir clulas endoteliais em diferen-
tes rgos. A lise dessas clulas leva injria vas-
cular, resultando em leso dos capilares, hemor-
ragias e coagulao intravascular disseminada.
Clinicamente, observa-se edema generalizado,
hidrotrax, hidropericrdio, hemorragias gene-
ralizadas, hipotenso e choque.
A capacidade de atravessar a placenta e in-
fectar os fetos outra propriedade importante
dos orbivrus. A infeco de ovelhas e vacas, com
o BTV, e de bovinos, com o vrus de Ibaraki ou o
vrus Kasba do grupo Palyam, pode resultar em
abortos e no nascimento de produtos com anor-
malidades, incluindo hidrocefalia, artrogripose,
prognatismo, cegueira e surdez.

5.5 Vrus da lngua azul
Dentre os membros do gnero orbivrus, o
vrus da lngua azul (BTV) o que possui maior
relevncia em medicina veterinria e ser abor-
dado com detalhes.
A lngua azul (BT) uma enfermidade in-
fecciosa, no-contagiosa, associada com a infec-
o pelo BTV, transmitida por insetos vetores e
caracterizada por inamao das mucosas, he-
morragia e edema generalizados. A enfermidade
tem sido tambm denominada febre catarral do
carneiro. Os isolados do BTV podem ser agrupa-
dos em 24 sorotipos, de acordo com a sua reati-
vidade sorolgica. Variaes de patogenicidade e
virulncia tm sido observadas entre isolados de
campo, assim como diferentes padres de tropis-
mo tecidual e fetal.
O maior impacto da doena causada pelo
BTV observado na indstria ovina, j que
nesta espcie que as manifestaes clnicas da
doena ocorrem com maior freqncia e severi-
dade. As perdas por mortalidade podem chegar
a 40%, e perdas indiretas por queda de produo
no perodo de convalescena so especialmente
importantes. Para pases que produzem l de alta
qualidade, a quebra da l pode ocorrer como
conseqncia da doena, causando srios preju-
zos. Nos bovinos, a doena clnica rara e, apesar
de perdas diretas ocorrerem, principalmente em
casos de epidemias, as maiores perdas so cau-
sadas pelas restries de mercado. De fato, as
restries ao comrcio de animais e subprodutos
provavelmente so responsveis pelas maiores
perdas econmicas associadas com a infeco
pelo BTV. Por muitos anos, a infeco pelo BTV
foi considerada uma das principais barreiras para
a exportao de ruminantes dos EUA para outros
pases, sobretudo para a Austrlia, Nova Zeln-
dia e Comunidade Europia.

5.5.1 Epidemiologia
O BTV capaz de infectar naturalmente uma
variedade de ruminantes domsticos e selvagens,
incluindo ovinos, caprinos, bovinos, bubalinos,
camelos, cervdeos e outros herbvoros, como os
elefantes. A doena clnica mais comum nos
ovinos e cervdeos. Embora a infeco nos bovi-
nos seja de grande importncia epidemiolgica,
a infeco nesta espcie geralmente subclnica.
Em 1994, nos Estados Unidos, foi demonstrada
uma associao entre a administrao de vacinas
contaminadas com o BTV e morte fulminante em
ces com problemas cardacos e respiratrios. A
importncia desses achados desconhecida.
O vrus transmitido por mosquitos do g-
nero Culicoides, que possuem grande variao de
hbitos alimentares, preferncia por hospedeiros
e competncia na transmisso da infeco. No
Brasil, os mosquitos Culicoides sp. so denomi-
nados maruim, mosquitos-plvora ou mos-
quitos-do-mangue. Apesar de existirem poucos
estudos sobre esses vetores no Pas, vrias esp-
cies competentes na transmisso da doena, como
o Culicoides insignis, j foram descritas.
Reoviridae 799
Os mosquitos adquirem o vrus quando in-
gerem sangue de um hospedeiro virmico. Ape-
nas as fmeas so hematfagas e requerem pelo
menos um repasto sangneo para a concluso de
um ciclo ovariano. Por isso o pico de atividade
desses insetos est relacionado com o seu ciclo
reprodutivo. Estaes quentes e midas favore-
cem o aparecimento dos Culicoides e, conseqen-
temente, a maior transmisso do vrus. A popu-
lao desses insetos tende a diminuir no outono e
inverno, quando a temperatura mais baixa.
Aps a ingesto e adsoro na parede do in-
testino mdio do mosquito, o vrus se multipli-
ca em tecidos intestinais e em outros tecidos do
inseto, incluindo as glndulas salivares. Assim,
pode ser transmitido a um novo hospedeiro ao se
alimentar novamente.
A viremia que ocorre nos hospedeiros
essencial para a transmisso do vrus, uma vez
que, nessa fase, o vrus encontra-se associado s
clulas sangneas (principalmente moncitos,
linfcitos e eritrcitos). Nos ovinos e caprinos, a
viremia dura em mdia 50 e 28-41 dias, respecti-
vamente. Nos bovinos, a viremia pode persistir
por mais de 100 dias, sendo estes animais con-
siderados de grande importncia epidemiolgica
por servirem como reservatrios do vrus por pe-
rodos prolongados. Durante esse perodo, o vrus
circula intimamente associado com a membrana
dos eritrcitos, cando protegido dos anticorpos
neutralizantes. Vrias espcies de Culicoides com-
petentes na transmisso do BTV se alimentam
preferencialmente nos bovinos, mesmo quando
ovinos e caprinos esto presentes.
A infeco pelo BTV est distribuda nas
reas tropicais e subtropicais em todos os conti-
nentes, entre as latitudes 40N e 35S, onde est
concentrado aproximadamente 70,7% do reba-
nho ovino mundial. Essa rea inclui as Amricas,
frica, parte da Europa, sia e Oriente Mdio.
Muitos pases localizados em reas tropicais,
como a sia, Caribe e Amrica do Sul, apresen-
tam evidncias sorolgicas da presena do BTV
em ovinos e outros ruminantes, porm sem rela-
tos da ocorrncia de doena.
A distribuio geogrca da BT pode ser di-
vidida em trs reas epidemiolgicas, com o ob-
jetivo de facilitar a anlise da epidemiologia da
doena:
a) reas endmicas: onde a infeco co-
mum, mas a ocorrncia da doena clnica rara
devido presena de grande nmero de animais
soropositivos. Nessas reas, o vrus pode ser iso-
lado, com freqncia, de insetos vetores ou de
animais virmicos. A doena pode ocorrer aps a
introduo de animais virmicos infectados com
sorotipos exticos para a rea ou quando animais
susceptveis, oriundos de zonas livres da doena,
so introduzidos nessas reas;
b) reas epiendmicas: onde o nmero de
animais soropositivos varia e a ocorrncia da do-
ena geralmente localizada em reas especcas.
Casos de doena podem ocorrer em formas de
surtos espordicos, dependendo principalmente
de variaes climticas, como temperatura, umi-
dade do ar, velocidade e direo dos ventos;
c) reas livres: onde no h animais soropo-
sitivos, geralmente pela impossibilidade de so-
brevivncia dos insetos vetores.
Vrios fatores podem alterar a distribuio
do vrus dentro dessas reas, como alteraes
climticas em regies limtrofes, movimento de
animais, mudanas nas caractersticas da esta-
o chuvosa e, principalmente, movimento dos
ventos, que podem trazer os vetores Culicoides de
regies distantes. O movimento dos hospedeiros
para reas endemicamente infectadas em busca
de alimentos ou de climas mais amenos tambm
pode levar ao aparecimento de surtos localiza-
dos. Assim, essas zonas so dinmicas e repre-
sentam o resultado da interao entre o vrus, o
meio ambiente e os hospedeiros.
No passado, o BTV j havia sido esporadi-
camente detectado em alguns pases da costa do
mar Mediterrneo, mas, nas ltimas dcadas, pa-
recia estar ausente do continente. No entanto, em
2006, foi reintroduzido em vrios pases europeus
(Holanda, Blgica e Alemanha), provavelmente
a partir da frica, onde permanece endmico.
A reintroduo do vrus na Europa causou uma
grande repercusso, pelas possveis conseqn-
cias sanitrias e comerciais e tambm pelo receio
de a infeco se tornar endmica em algumas re-
gies com condies climticas propcias para a
sobrevivncia dos vetores.
Os inquritos sorolgicos, realizados no ter-
ritrio brasileiro, em bovinos, caprinos, ovinos e
bubalinos por meio da tcnica de imunodifuso
800 Captulo 30
em gel de gar (IDGA), indicam que a infeco
est amplamente distribuda em todas as regies.
Pelos dados sorolgicos obtidos associados com
a falta de relatos clnicos, acredita-se o BTV per-
petue-se de forma inaparente nos rebanhos bra-
sileiros. Os casos clnicos que ocorrem parecem
ser brandos ou de menor importncia do ponto
de vista econmico e, muitas vezes, passam des-
percebidos. As possveis explicaes para este
fato so: baixa virulncia das cepas circulantes
no pas, maior resistncia de algumas raas con-
tra a infeco ou a caracterstica endmica que a
infeco assume na maior parte do pas, onde as
condies de temperatura e umidade favorecem
a multiplicao e manuteno dos vetores.
O estado do Rio Grande do Sul apresenta
as menores taxas de prevalncia, provavelmente
devido ao clima, que no favorece a sobrevivn-
cia dos vetores, porm se mostra como rea de
risco, com um grande nmero de animais suscep-
tveis. Nos estados da regio Nordeste, onde se
encontra o principal efetivo dos rebanhos ovinos
e caprinos, assim como os estados da regio Su-
deste, que esto entre os lderes na produo de
carne e leite no Brasil, observa-se a presena dos
fatores necessrios para a ocorrncia da doena:
vrus circulando, vetores e animais susceptveis.
Em Minas Gerais, estudos recentes mostraram
uma soroprevalncia de 45 e 54% em caprinos e
ovinos, respectivamente.
At o presente, apenas dois sorotipos do BTV
foram identicados inequivocamente no Brasil.
O sorotipo 4 foi isolado, em 1980, nos EUA, de
animais que haviam sido exportados para aquele
pas. O sorotipo 12 foi identicado em 2001, no
Paran, onde caprinos, ovinos e bovinos foram
acometidos. No entanto, investigaes realizadas
em laboratrios internacionais de referncia, uti-
lizando a tcnica de SN, indicam que outros soro-
tipos podem tambm estar presentes no Brasil.
O risco de se introduzir o BTV pela importa-
o de animais considerado muito maior do que
a introduo por smen ou embries contamina-
dos. Embora a transmisso venrea, por meio de
smen contaminado e transmisso congnita do
vrus possam ocorrer, a restrio geogrca da
doena indica que esses mecanismos no so im-
portantes para a perpetuao da infeco a longo
prazo, ou seja, a principal forma de disseminao
do vrus por meio de insetos vetores.
O risco de transmisso por transferncia
de embries muito baixo, desde que as reco-
mendaes tcnicas sejam seguidas. Da mesma
forma, existem poucos relatos na literatura des-
crevendo o isolamento do BTV a partir de outras
secrees que no o smen. Portanto, no se sabe
se o vrus estaria presente em outras secrees ou
se poderia ser transmitido por via iatrognica. De
qualquer forma, esses possveis mecanismos de
transmisso provavelmente possuam importn-
cia epidemiolgica limitada.
e patologia
A replicao inicial do vrus ocorre no stio
da picada do inseto vetor, sobretudo, nas clu-
las endoteliais do sistema vascular e em clulas
do sistema linforreticular. A replicao primria
seguida por viremia associada s clulas san-
gneas (eritrcitos, leuccitos e plaquetas) e dis-
seminao do vrus para outros linfonodos, bao,
medula ssea e outros tecidos. Nesses tecidos, o
vrus se replica no sistema microvascular, resul-
tando nas alteraes patolgicas caractersticas
da doena. A maior concentrao de vrus se en-
contra nos endotlios da microvascularizao do
epitlio bucal. Uma grande variedade de rgos
pode ser afetada, incluindo pulmes, bao, cora-
o, rim e bexiga.
Acredita-se que o vrus interaja de forma
distinta com os receptores das clulas endoteliais
das diferentes espcies animais, resultando em
diferenas marcantes na patologia vascular. Isso
poderia explicar as manifestaes clnicas distin-
tas observadas entre as espcies de ruminantes
afetadas. Algumas hipteses propem que as
manifestaes clnicas nos bovinos podem estar
associadas com uma reao de hipersensibilida-
de retardada, mediada por imunoglobulinas da
classe E (IgE), devida as vrias e constantes rein-
feces pelo vrus.
Em ovinos, o perodo de incubao varia
entre cinco e dez dias. Os sinais clnicos iniciam-
se por uma elevao da temperatura corporal,
que coincide com o aumento da freqncia res-
Reoviridae 801
piratria. As manifestaes clnicas podem estar
ausentes ou se manifestarem de forma aguda.
Em reas endmicas, a doena rara, apresen-
tando-se geralmente em animais vindos de reas
livres. Como regra, o primeiro sinal o aumento
da temperatura corporal de 41 a 42C, seis a sete
dias ps-infeco. A hipertermia persiste, em m-
dia, seis a sete dias, mas este perodo pode ser
to curto quanto dois dias ou to longo quanto
11 dias. A ocorrncia de um segundo pico febril
nos dias 10-11 ps-infeco pode ser observada
em alguns casos.
Os primeiros sinais observados so: hipere-
mia no focinho, lbios e mucosa oral, que torna-
se evidente entre dois a trs dias aps a febre. A
hiperemia pode se estender para a pele, levando
quebra de l. Edema generalizado na face e
mandbula desenvolve-se 10-12 dias aps a in-
feco. Descarga nasal serosa e mucopurulenta
pode ocorrer. A presena de exsu dado seroso ou
serossanguinolento, evoluindo a mucopurulento,
de forma a bloquear a abertura das narinas e for-
ar a respirao pela boca, pode ser observada. A
lngua pode estar edemaciada e estendida para
fora da boca, mas raramente se torna ciantica,
apesar deste sinal ter sido o responsvel pela de-
nominao da doena. Ulceraes na lngua e em
mucosas podem propiciar infeces secundrias
e necrose, principalmente na regio superior do
esfago e faringe, causando vmito e aspirao
do contedo ruminal, levando pneumonia de-
bilitante.
A inamao da banda coronria imediata-
mente acima do casco, geralmente resultando em
laminite, outro achado comum, principalmente
nas fases nais de infeco. Prostao e diculda-
de de locomoo so geralmente observadas em
conseqncia das leses musculares e nos cascos.
Fraqueza muscular e, em casos extremos, torcico-
lo irreversvel e morte, podem ocorrer.
Ovelhas prenhes podem abortar em qual-
quer fase da gestao. A infeco dos fetos com
40 a 80 dias de idade geralmente apresenta, como
conseqncia, o nascimento de cordeiros com hi-
drocefalia e outras alteraes no crebro, displa-
sia da retina e outras alteraes teratognicas.
A infeco pelo BTV em bovinos muito co-
mum, mas a ocorrncia de manifestaes clnicas
considerada rara nessa espcie. A severidade da
infeco e da doena pode ser inuenciada pelo
sorotipo, dose infectante, siologia do hospedei-
ro, raa e outros fatores externos. Os surtos so
espordicos, e a morbida de varivel, situando-
se geralmente em torno de 5%. Provavelmente
menos de 1% dos bovinos infectados apresentem
sinais clnicos em decorrncia da infeco. Esses
sinais so caracterizados por febre transitria,
seguida de hiperemia e leses ul cerativas na ln-
gua, palato, gengiva, mucosa oral e lbios. O fo-
cinho apresenta uma aparncia res secada, com a
pele quebradia. Com o progresso da doena, os
animais podem apresentar claudicao devido a
inamao da regio da coroa do casco. lceras
nos tetos podem se desenvolver, com uma sub-
seqente reduo na produo de leite. Em casos
crnicos, a patologia mais pronunciada na pele,
na qual se observam edema e inltrao eosino-
flica na der me.
A infeco de vacas prenhes na primeira
metade da gestao (at 150 dias) pode resultar
em morte embrionria ou fetal ou no nascimen-
to de bezerros com malformaes neurolgicas,
como hidrocefalia e cegueira. Fetos infectados
em fases posteriores nascem normais ou podem
apresentar viremia prolongada. No entanto, ain-
da no foi comprovada a ocorrncia de animais
imunotolerantes ao vrus. Existem evidncias de
que algumas amostras do BTV ou mesmo alguns
sorotipos possuem predileo pelo tero grvi-
do e, conse qentemente, produzem infeco do
concepto.
A infeco de caprinos geralmente branda
ou inaparente, manifestando-se apenas por febre
ocasional, viremia em nveis baixos e curta du-
rao, leucopenia e hiperemia leve da conjuntiva
e mucosa nasal. Em alguns ruminantes silvestres
sobretudo cervdeos , o BTV pode produzir
manifestaes clnicas semelhantes s observa-
das na infeco aguda em ovinos.
Os achados patolgicos da enfermidade
causada pelo BTV esto relacionados com as le-
ses no endotlio vascular, que resultam na sua
fragilizao e em alteraes na permeabilidade
vascular. Essas alteraes resultam em edema,
congesto, hemorragias, inamao e necrose.
Em ovinos, a face e as orelhas se apresentam
edematosas, e as narinas podem conter exsudato.
As bandas coronrias freqentemente se encon-
802 Captulo 30
tram hipermicas. Petquias, lceras e eroses
so comuns na cavidade oral. As mucosas nasal e
oral podem estar congestas, necrosadas e cianti-
cas. Hiperemia e eroses podem ser encontradas
no retculo e omaso. Petquias, equimoses e focos
necrticos podem ser observados no corao. He-
morragia na base da artria pulmonar um acha-
do particular da doena em ovinos. Hiperemia,
hemorragia, edema em vrios rgos, hemorra-
gias focais e necrose nos msculos esquelticos
podem tambm ser observados.
Nos cervdeos, as leses mais evidentes so
petquias e equimoses disseminadas por vrios
rgos e tecidos. Animais com lceras necrticas
na cavidade oral e leses nos cascos podem ser
encontrados em casos em que o curso da doena
mais prolongado.
O exame microscpico das leses das muco-
sas demonstra inltrao de clulas mononuclea-
res, degenerao e necrose das clulas epiteliais.
Os msculos afetados apresentam edema, he-
morragia, degenerao hialina e necrose. Inltra-
o de neutrlos, macrfagos e linfcitos esto
presentes em casos agudos.

5.5.3 Diagnstico
Deve-se suspeitar de lngua azul quando os
sinais clnicos caractersticos da doena forem
observados em ovinos e bovinos, principalmente
nas estaes de maior atividade dos vetores ou
quando animais provenientes de outras regies
so introduzidos em reas endmicas.
Para o diagnstico laboratorial, amostras de
sangue total e de soro devem ser coletadas de v-
rios animais do rebanho. Bao, medula, corao
e linfonodos mesentricos so os tecidos de es-
colha a serem coletados em animais submetidos
necropsia. Sangue, soro, bao e tecido nervoso
devem ser coletados de cordeiros ou bezerros
com problemas congnitos. O material deve ser
enviado refrigerado, o mais rpido possvel, para
o laboratrio.
O diagnstico sorolgico da infeco pelo
BTV baseado principalmente nas tcnicas de
IDGA e ELISA, que identicam a exposio dos
animais a vrus do sorogrupo BTV. Esses testes
tm sido extensivamente utilizados na vigilncia
epidemiolgica e para emisso de certicados de
trnsito, cujos rebanhos so destinados expor-
tao.
Para a deteco do vrus em amostras de
sangue e tecidos, o teste in vitro mais sensvel
a inoculao intravenosa em ovos embrionados,
seguida do cultivo em clulas BHK. A identica-
o do grupo BTV geralmente realizada pela
tcnica de imunouorescncia direta (IFD) e a
tipicao sorolgica por meio da tcnica de SN,
utilizando-se uma bateria de soros dos 24 soroti-
pos existentes. O isolamento do vrus em cultivo
celular, a partir de amostras clnicas, particu-
larmente difcil, o que diculta sobremaneira o
diagnstico da infeco. Mtodos alternativos,
como a RT-PCR, tm sido utilizados para detec-
tar a presena do vrus ou do cido nuclico viral
em amostras clnicas (sangue) e em vetores.
As principais enfermidades consideradas no
diagnstico diferencial so o ectima contagioso,
febre aftosa, fotossensibilizao, diarria viral
bovina/doena das mucosas, rinotraquete infec-
ciosa bovina, estomatite vesicular, febre catarral
maligna e enfermidade hemorrgica epizotica
dos cervos.
Em reas livres, o controle da infeco pelo
BTV deve ser focado principalmente no controle
do movimento de animais, em regras rgidas de
importao e quarentena, geralmente acompa-
nhadas de dois a trs testes sorolgicos.
Uma vez que a infeco se instale em regio
livre, o diagnstico rpido, associado ao sacrif-
cio dos animais, desinfeco rigorosa e contro-
le de vetores so as medidas a serem adotadas.
Porm, como a infeco pelo BTV pode ocorrer
sem evidncias clnicas, sobretudo em bovinos, a
infeco pode se disseminar despercebida. Uma
vez estabelecida de forma endmica, a possibili-
dade de erradicao da infeco praticamente
nula. Assim, as medidas a serem adotadas obje-
tivam minimizar os prejuzos causados pela do-
ena clnica. Nesses casos, o controle pode ser re-
alizado de duas maneiras: interrompendo o ciclo
Reoviridae 803
de transmisso, por meio do controle de vetores;
ou reduzindo o nmero de hospedeiros suscept-
veis, pela vacinao.
A separao de ovinos e bovinos pode re-
duzir a possibilidade dos vetores disseminarem
a infeco entre essas espcies. Abrigar os ovi-
nos em reas protegidas de mosquitos durante a
noite, perodo de maior atividade dos vetores ou
para algumas espcies de Culicoides, e manejar as
ovelhas em reas de altitude elevada so outras
medidas que podem ser adotadas.
A reduo na populao dos vetores pode
ser obtida com uso de inseticidas, que podem ser
aplicados diretamente nos animais de forma lo-
cal ou sistmica, ou na fase aqutica do ciclo dos
vetores, visando destruio das larvas. Embora
o uso de pesticidas possa ser efetivo em reas res-
tritas, a tentativa de controlar Culicoides sp. desta
maneira no se mostra prtica para uso rotineiro,
podendo resultar em problemas ambientais, alm
de ser muito dispendiosa e economicamente invi-
vel. Alm disso, depende dos conhecimentos do
ciclo biolgico, populao e dinmica dos mos-
quitos da regio e aplicao em poca certa e com
condies climticas adequadas.
O uso da vacinao nas reas onde a BT se
constitui em problema sanitrio importante a
medida mais freqentemente adotada. Embora
a infeco de bovinos seja comum e curse com
nveis altos de viremia, em todos os pases onde
as vacinas so utilizadas, apenas os ovinos tm
sido vacinados. As vacinas comercialmente dis-
ponveis so atenuadas e geralmente polivalen-
tes, contendo os sorotipos prevalentes em cada
rea. A vacinao adotada rotineiramente em
pases como a frica do Sul, Israel e alguns esta-
dos dos EUA, onde a doena causa prejuzos para
criadores de ovinos. No Brasil, no existem vaci-
nas disponveis, pois alm da incerteza quanto a
distribuio e o impacto econmico da infeco,
os sorotipos prevalentes no pas no so conhe-
cidos.
5.6 Vrus da doena hemorrgica
epizotica dos cervdeos
A doena hemorrgica epizotica dos cer-
vdeos (EHD) uma doena viral aguda, fre-
qentemente fatal, que afeta alguns ruminantes
silvestres, principalmente os cervdeos. A doena
caracterizada pela ocorrncia de alteraes he-
morrgicas em vrios rgos e sistemas. A doen-
a causada pelo EHDV, um membro do gnero
Orbivirus da famlia Reoviridae. J foram identi-
cados nove sorotipos deste vrus (sorotipos 1-9)
e, ainda, o vrus Ibaraki (IV), que classicado
como um vrus distinto pertencente ao grupo do
EHDV. Alguns autores acreditam que o IV e o
EHDV sorotipo 2 australiano pertenam ao mes-
mo sopotipo.
Apesar de no ser uma doena de importn-
cia econmica, a EHD apresenta um importante
signicado pela alta mortalidade que causa nos
cervdeos, podendo reduzir drasticamente a po-
pulao desses animais em determinadas reas. A
doena de Ibaraki possui importncia econmica
restrita s reas de sua ocorrncia, pois, alm de
problemas reprodutivos, pode levar mortalida-
de at 10% dos bovinos acometidos.

5.6.1 Epidemiologia
O EHDV pode infectar uma grande varie-
dade de ruminantes silvestres e domsticos, mas
os sinais clnicos so observados principalmente
em cervdeos. Nos bovinos, a infeco raramen-
te acompanhada de sinais clnicos. J a doena
de Ibaraki freqentemente afeta essa espcie. Os
ovinos podem ser infectados experimentalmen-
te, mas raramente desenvolvem sinais clnicos; e
os caprinos parecem no ser susceptveis infec-
o.
A infeco pelo EHDV est presente na
Austrlia, sia e pases africanos. Na Amrica
do Norte, a infeco considerada, junto com a
lngua azul, a doena mais importante dos cer-
vdeos. Animais soropositivos para o vrus j fo-
ram identicados tambm na Amrica do Sul. A
doena de Ibaraki est restrita ao Japo, Coria e
Tailndia, apesar de bovinos soropositivos terem
sido identicados tambm na Austrlia e Indo-
nsia.
No Brasil, poucos estudos tm sido feitos em
relao ao EHDV. Apesar de o vrus no ter sido
isolado e tipicado, existem evidncias sorolgi-
cas da sua ocorrncia em cervdeos de vida livre
nos estados de So Paulo e Mato Grosso. Atravs
de testes sorolgicos, realizados em 81 cerv deos
804 Captulo 30
capturados, detectou-se 88% positivos o BTV,
74% positivos para o EHDV e 60% positivos para
os dois vrus, indicando a circulao desses vrus
no Pas.
Os vrus do sorogrupo do EHDV so trans-
mitidos por mosquitos do gnero Culicoides, que
atuam como vetores biolgicos. Nos Estados
Unidos, onde a doena ocorre freqentemente
em cervdeos, o principal vetor o C. variipennis.
Surtos das doenas causadas pelo EHDV so des-
critos principalmente no nal do vero e incio do
outono, pocas da maior populao dos vetores.
Cervdeos infectados podem permanecer vir-
micos por at dois meses, atuando nesse perodo
como reservatrios e fontes de infeco.

e patologia
O perodo de incubao da EHD de cinco
a dez dias. Nos cervdeos, os sinais clnicos so
semelhantes aos da BT, mas trs formas clnicas
da doena podem ser observadas:
a) doena hiperaguda: caracterizada por
febre alta, anorexia, fraqueza, aumento da fre-
qncia respiratria e edema acentuado na ca-
bea, pescoo e lngua. Nesta forma da doena,
os animais geralmente morrem em 8 a 36 horas e
alguns so encontrados mortos sem a observao
prvia de sinais clnicos;
b) forma aguda: os sinais mencionados so
acompanhados por extensiva hemorragia em
vrios tecidos, incluindo a pele, corao e trato
gastrintestinal. Geralmente observa-se salivao
excessiva e descarga nasal, que pode ser sangui-
nolenta. Eroses na lngua, gengiva, palato, r-
men e omaso podem ser observadas. As formas
hiperaguda e aguda apresentam altas taxas de
mortalidade;
c) forma crnica: o animal ca doente por
vrias semanas, mas se recupera gradualmente,
quando podem ser observados anis nos cascos,
causados pela interrupo do seu crescimento.
Nesta forma da doena, os animais podem tam-
bm apresentar lceras e eroses no rmen.
Em ovinos, geralmente no so observados
sinais clnicos relevantes.
A EHD raramente observada nos bovinos,
porm o sorotipo Ibaraki tem sido associado com
surtos espordicos de uma doena severa no Ja-
po. Os sinais clnicos consistem de febre, leses
erosivas e ulcerativas na cavidade oral e na mu-
cosa esofgica e edema na pele. A mortalidade
pode atingir 10% do rebanho. Leses degenera-
tivas na musculatura so encontradas no esfa-
go, laringe, lngua e musculatura esqueltica. La-
minite e problemas de casco podem tambm ser
observados. Nos animais gestantes, pode ocorrer
morte fetal e, se a infeco ocorrer entre os dias 70
e 120 de gestao, pode ocorrer o nascimento de
animais com hidrocefalia, malformaes fetais e
distrbios neurolgicos.
Os achados macroscpicos e microscpicos
da EHD so caracterizados por hemorragias, que
vo desde petquias a equimoses, e envolvem
diferentes tecidos e rgos, sendo mais freqen-
te o envolvimento do corao, fgado, bao, rim,
pulmo e trato gastrintestinal. Edema generaliza-
do e aumento do uido pericrdico so achados
freqentes. As alteraes encontradas so conse-
qncias da degenerao das clulas endoteliais
dos vasos sangneos e da interferncia no pro-
cesso de coagulao.
5.6.3 Diagnstico
Uma combinao do histrico, epidemiolo-
gia, caractersticas clnicas e achados macroscpi-
cos podem levar suspeita da EHD. No entanto,
pelas similaridades com outras enfermidades, o
isolamento e identicao do vrus so essenciais
para o diagnstico conclusivo. A ocorrncia sazo-
nal e o quadro de hemorragias generalizadas so
caractersticas que fortalecem a suspeita clnica.
No diagnstico diferencial, devem ser considera-
das a BT, febre aftosa, fotossensibilizao e febre
catarral maligna.
Na doena em cervdeos, os melhores te-
cidos para o isolamento e/ou identicao do
agente ou seus produtos so bao e linfonodos,
seguidos de fgado, pulmo e corao. O sangue
total, coletado com anticoagulantes, a amostra
indicada para a pesquisa do EHDV e do vrus
Ibaraki. O material deve ser enviado sob refrige-
rao ao laboratrio. Tecidos xados em formol,
para anlise histopatolgica, tambm podem
ser coletados. O soro, principalmente nos casos
de doena crnica, pode ser til, e, se possvel,
Reoviridae 805
o soro pareado deve ser coletado. O diagnstico
denitivo baseia-se no isolamento e identicao
do agente. Dentre os mtodos mais sensveis,
utilizados para o isolamento, esto a inoculao
intravenosa em ovos embrionados seguida da
inoculao em cultivo celular.

No existe tratamento efetivo e no h va-
cinas disponveis para a doena causada pelo
EHDV. No Japo, est disponvel uma vacina
viva atenuada contra a doena de Ibaraki.
Existem poucas medidas prticas para pre-
venir a infeco, entretanto, o controle de vetores
atravs de alteraes nas condies ambientais
que desfavoream a multiplicao dos Culicoides
e o uso de inseticidas e larvicidas so medidas
que, teoricamente, reduzem o risco da infeco.
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1 Introduo
2 Classicao
3.1 O genoma
4 Replicao
5 Retrovrus de interesse veterinrio
5.1 Vrus da leucose bovina
5.1.1 Epidemiologia
5.1.3 Diagnstico
5.2 Vrus da imunodecincia bovina
5.2.1 Epidemiologia
5.2.3 Diagnstico e controle
5.3 Vrus da pneumonia progressiva dos ovinos (Maedi-Visna)
5.3.1 Epidemiologia
5.4 Vrus da artrite-encefalite caprina
5.4.1 Epidemiologia
5.5 Vrus da adenomatose pulmonar dos ovinos
5.5.1 Epidemiologia
RETROVIRIDAE
Ana Paula Ravazzolo & Ubirajara Maciel da Costa
31
811
811
811
812
815
819
819
819
820
821
822
823
823
824
824
824
824
825
825
826
826
827
827
828
828
828
829
5.6 Vrus da anemia infecciosa eqina
5.6.1 Epidemiologia
5.7 Vrus da leucemia felina
5.7.1 Epidemiologia
5.8 Vrus da imunodecincia felina
5.8.1 Epidemiologia
5.8.3 Diagnstico
5.9 Vrus da leucose aviria
5.9.1 Epidemiologia
829
829
830
830
831
831
832
832
833
833
834
834
835
835
835
836
836
836
1 Introduo
A famlia Retroviridae composta por um
grande nmero de vrus que podem ser encontra-
dos em, virtualmente, todos os vertebrados. Os
retrovrus possuem vrions envelopados e apre-
sentam duas molculas idnticas de RNA de ta
simples linear como genoma. Os membros dessa
famlia so assim denominados por possurem
uma enzima capaz de sintetizar uma molcula de
DNA pela transcrio do seu genoma, mecanismo
chamado de transcrio reversa. A enzima que
cataliza esta reao a transcriptase reversa (RT)
um componente dos vrions e possui, ainda,
outras atividades essenciais para a replicao vi-
ral. A etapa de transcrio reversa se constitui no
evento central da multiplicao dos retrovrus. O
ciclo replicativo dos retrovrus envolve tambm
uma etapa de integrao da cpia DNA do seu
cido nuclico no genoma da clula hospedeira,
etapa essencial para a expresso gnica e para a
produo de prognie viral. Esse evento faz com
que as infeces pelos retrovrus assumam um
carter persistente, ou seja, uma vez infectados,
os hospedeiros se tornam portadores do agente
pelo resto da vida. Alguns retrovrus tambm
tm sido descritos como indutores de tumores
em humanos e animais.
Os retrovrus foram responsveis por dois
marcos importantes nas Cincias Biolgicas, am-
bos relacionados com a descrio da enzima RT
DNA polimerase dependente de RNA por
Howard Temin, em 1970, que lhe valeu o prmio
Nobel. O primeiro refere-se quebra de um para-
digma: at ento se acreditava que a transcrio
s ocorria de DNA para RNA. O segundo, basea-
do justamente nesta caracterstica, proporcionou
grandes avanos na Biologia Molecular, pela uti-
lizao de enzimas com essa propriedade na ob-
teno de DNA complementar (cDNA) aos RNA
mensageiros (mRNA).
Os retrovrus podem ser encontrados em
praticamente todas as espcies de animais do-
msticos, com signicado clnico e sanitrio va-
riveis. Dentre os retrovrus de importncia vete-
rinria, destacam-se o vrus da anemia infecciosa
eqina (EIAV), o vrus da leucose bovina (BLV),
o Maedi-Visna de ovinos, o vrus da artrite e en-
cefalite caprina (CAEV), os vrus da leucemia
(FeLV) e imunodecincia felina (FIV) e o vrus
da leucose aviria (ALV), entre outros.
Nas duas ltimas dcadas, um nmero ex-
pressivo de pesquisas relacionadas aos retrovrus
foi publicado, pesquisas essas motivadas a partir
da identicao e da importncia adquirida pelo
vrus da imunodecincia humana (HIV). Esse
vrus foi classicado no gnero Lentivirus, em
funo de sua similaridade com o vrus Maedi-
Visna.
Alm de sua importncia como patgenos
de animais, vrios lentivrus tm sido tambm
estudados como modelos para o HIV, em estudos
de patogenia e na pesquisa e desenvolvimento
de drogas antivirais e vacinas. O BLV, que um
Deltaretrovirus, tambm tem sido utilizado como
modelo para o vrus da leucemia dos linfcitos T
de humanos (HTLV).
Neste captulo, sero abordados aspectos re-
lacionados aos principais retrovrus de animais
domsticos, com nfase naqueles de maior im-
portncia em nosso meio.
2 Classicao
Segundo o Comit Internacional de Taxono-
mia Viral (International Comittee of Viral Taxonomy
ICTV), a famlia Retroviridae est dividida em
duas subfamlias, sendo cada subfamlia dividida
em gneros (Tabela 31.1). A diviso em subfam-
lias baseia-se mais em propriedades patognicas
do que em critrios moleculares. A anlise de ho-
mologia de nucleotdeos, estrutura e organizao
genmica permite a diviso em grupos. A maio-
ria dos retrovrus de importncia em veterinria
est classicada na subfamlia Orthoretrovirinae;
na subfamlia Spumaretrovirinae, os Spumavirus
ainda no foram associados com doenas.
Os vrions dos retrovrus contm duas mo-
lculas idnticas de RNA de ta simples, polari-
dade positiva, com aproximadamente 10 kb cada.
Nesse sentido, so os nicos vrus animais a pos-
surem duas cpias do genoma nos vrions e, por
isso, so ditos diplides. O genoma viral encontra-
812 Captulo 31
se altamente condensado e associado com mlti-
plas cpias da nucleoprotena (NC), formando o
ncleo ou core. Neste ncleo tambm esto pre-
sentes algumas protenas que desempenham fun-
es catalticas durante a replicao: a protease
(PR), a RT e a integrase (IN). Esse complexo est
contido em um capsdeo de forma esfrica ou c-
nica, formado pela associao de cpias mltiplas
da protena do capsdeo (CA). O nucleocapsdeo
(core + capsdeo) revestido externamente por
uma camada formada por centenas ou milhares
de cpias da protena da matriz (MA). Essa cama-
da recoberta por um envelope lipoprotico, no
qual se encontram as duas glicoprotenas virais,
a transmembrana (TM) e a de superfcie (SU). A
TM uma protena integral de membrana, ou
seja, apresenta uma regio transmembrana; a SU
est localizada externamente no vrion, associa-
da de forma no-covalente com a regio externa
da TM. As partculas vricas dos retrovrus so
liberadas das clulas infectadas ainda imaturas.
A maturao ocorre no meio extracelular, pela
clivagem dos precursores proticos e rearranjos
estruturais nas estruturas vricas internas, o que
resulta em mudanas na aparncia dos vrions
sob microscopia eletrnica. As partculas madu-
ras dos retrovrus so, aproximadamente, esfri-
cas e possuem um dimetro que varia entre 80
e 120 nm para os diferentes vrus. A Figura 31.1
apresenta uma fotograa de microscopia eletr-
nica e uma ilustrao esquemtica de partculas
vricas dos retrovrus.
3.1 O genoma
O genoma RNA dos membros da famlia
Retroviridae possui entre sete e 13 kb, dependen-
do do vrus, e contm trs genes principais: gag,
pol e env. O gene do antgeno especco de grupo
(group antigen gag) codica as protenas MA, a
NC e a CA. O gene pol codica as enzimas RT, IN
e PR. O gene env codica as protenas do enve-
lope (TM e SU). As protenas Gag, Pol e Env so
sintetizadas como poliprotenas precursoras e so
clivadas somente na fase nal do ciclo, durante
o egresso e mesmo aps, dando origem s pro-
tenas individuais. A Figura 31.2 apresenta uma
ilustrao da estrutura e organizao do genoma
dos lentivrus de pequenos ruminantes (SRLV),
e a Figura 31.3 apresenta uma comparao da
estrutura e organizao genmica (provrus) de
diferentes retrovrus.
Orthoretrovirinae
Subfamlia Gnero Espcie viral
Alpharetrovirus Vrus da leucose aviria (ALV)
Jaagsiekte (JSRV; adenocarcinoma ovino)
Gamaretrovirus Vrus da leucemia felina (FeLV)
Deltaretrovirus Vrus da leucose bovina (BLV)
Epsilonretrovirus Nenhum associado com doena animal
Betaretrovirus
Vrus da imunodeficincia bovina (BIV)
Vrus da anemia infecciosa eqina (EIAV)
Vrus da imunodeficincia felina (FIV)
Vrus da artrite encefalite caprina (CAEV)
Vrus Maedi Visna dos ovinos (MVV)
Lentivirus
Spumaretrovirinae Spumavirus Nenhum associado com doena animal
Tabela31.1. Vrus dafamlia deimportncia emMedicinaVeterinria. Retroviridae
Retroviridae 813
Figura 31.1. Vrions da famlia . A) Fotografia de microscopia eletrnica de partculas do HIV; B)
Ilustrao esquemtica de um vrion mostrando os seus componentes. RNA: genoma; NC: protena do
nucleocapsdeo; CA: capsdeo; MA: matriz; IN: integrase; RT: transcriptase reversa; PR: protease; TM: glicoprotena
transmembrana; SU: glicoprotenadesuperfcie, ENV: envelope.
Retroviridae
A
B
SU
ENV
TM
RT
IN
CA
NC
MA
RNA
PR
Fonte: A) Dept. Microbiologia, University of Otaga, Nova Zelndia. ICTVdB.
env
pol
LTR
gag
rev
LTR
tat
vif
gp160 Env
TM SU
gp 135 gp 45
.Gag-pol
IN PR
p12 p29
RT
p66/p51
P55 Gag
NC
CA
MA
p16
p25
p14
AAAA Cap
Figura 31.2. Organiza o do genoma e do provrus DNA dos lentivrus de pequenos ruminantes (SRLV ou CAEV e
MVV), comas protenas codificadas. LTR: regi o repetida terminal. Genes: gag (antgenos especficos de grupo); pro
(protease); pol (polimerase); env (envelope). Protenas: MA: protena da matriz; CA: protena do capsdeo; NC:
protena do nucleocapsdeo; RT: transcriptase reversa; IN: integrase; PR: protease; TM: protena transmembrana; SU:
glicoprotena de superfcie. Os produtos dos genes tat, vif e rev s o protenas acessrias comfun es regulatrias. Os
nmeros abaixodecadaprotena referem-se respectivamassamolecular.

814 Captulo 31
Figura 31.3 Estrutura comparativa do genoma de diferentes retrovrus de animais domsticos. ALV: vrus da leucose
aviria; BLV: vrus da leucose bovina; FeLV: vrus da leucemia felina; CAEV: vrus da artrite-encefalite caprina; EIAV:
vrus da anemia infecciosa eqina; BIV: vrus da imunodeficincia bovina; FIV: vrus da imunodeficincia felina;
LTR: regio repetida terminal. Genes gag (antgenos especficos de grupo); pro (protease); pol (polimerase); env
(envelope). Genes acessrios: tax, rex, rev, vif, tat etc.
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
LTR
gag
gag
gag
gag
gag
gag
gag
pro
pro
pol
pol
pol
pol
pol
pol
pol
env
env
env
env
env
env
env
.tax
.rex
vif
tat
tat
rev
rev
rev
.tat
rev
S2
ALV
BLV
FeLV
CAEV
EIAV
BIV
FIV
Vif A
w y
Vif
Retroviridae 815
O RNA genmico produzido pela trans-
crio do provrus integrado no cromossomo da
clula hospedeira, reao que catalisada pela
maquinaria celular de transcrio. Por isso, o ge-
noma viral contm uma estrutura cap em sua ex-
tremidade 5 e uma cauda poli-A na extremidade
3. O genoma possui seqncias envolvidas na
expresso gnica e na replicao, localizadas pr-
ximas s extremidades: as regies R (de repetida)
e U5 (nica da extremidade 5) esto prximas
extremidade 5; as seqncias R e U3 se localizam
prximas extremidade 3. O processo de trans-
crio reversa resulta na duplicao das regies
nicas (U5 e U3), o que faz com que a molcula de
DNA resultante denominada provrus conte-
nha seqncias idnticas nas duas extremidades,
as regies longas terminais (Long Terminal Repeat,
LTR). Cada LTR apresenta as seguintes seqn-
cias, nesta ordem: U3-R-U5. Na regio U3, esto
localizadas as principais seqncias de ligao
para os fatores de transcrio, enquanto o incio
da regio R corresponde ao incio da transcrio.
Essas seqncias so necessrias para a transcri-
o do provrus, que somente ocorre aps a sua
integrao ao genoma da clula hospedeira.
Alguns retrovrus, incluindo os lentivrus,
possuem genes adicionais, denominados acess-
rios ou auxiliares. Esses vrus so denominados
retrovrus complexos, enquanto aqueles que no
possuem estes genes so denominados retrovrus
simples. Os produtos desses genes participam da
regulao de diversas etapas da replicao viral.
O HIV parece conter o maior nmero de genes
acessrios. Trs desses genes foram igualmente
descritos em lentivrus de animais: os genes tat,
rev e vif. O gene tat no parece ser essencial, en-
quanto a deleo do gene rev impede a produo
de prognie viral. A funo da protena Rev con-
siste em facilitar a exportao de determinados
mRNA virais do ncleo para o citoplasma, onde
sero traduzidos. Esses mRNAs contm uma se-
qncia para a ligao da Rev (RRE rev respon-
sive element) localizada na regio central do gene
env.
4 Replicao
O ciclo replicativo dos retrovrus pode ser
dividido em duas fases. A primeira fase, que ocor-
re aps a penetrao e desnudamento, envolve a
sntese de uma cpia DNA (provrus) a partir do
genoma RNA, transporte do provrus at o inte-
rior do ncleo e a sua integrao no cromossomo
da clula hospedeira. Uma parte dessas etapas
ocorre no citoplasma; e a outra parte, no ncleo,
e so mediadas por protenas presentes nos v-
rions (RT, IN). A segunda fase envolve a sntese
e processamento de mRNAs e sntese das prote-
nas virais. Essas etapas utilizam a maquinaria ce-
lular de transcrio e processamento de mRNAs
e de sntese protica, respectivamente. A morfo-
gnese inicia pelo encapsidamento do genoma,
juntamente com as enzimas virais, por precur-
sores das protenas estruturais. A morfognese
completada pelo brotamento do nucleocapsdeo
na membrana plasmtica. O processamento nal
dos precursores proticos, dando origem s pro-
tenas estruturais maduras, ocorre j no interior
dos vrions extracelulares.
A infeco inicia pelo reconhecimento e li-
gao dos vrions superfcie das clulas-alvo.
Este evento mediado pela glicoprotena SU do
envelope, que interage com receptores espec-
cos da membrana plasmtica. Vrios receptores
para retrovrus j foram identicados, incluindo
os receptores para o FIV, FeLV e BLV. A maioria
dos retrovrus infecta clulas do sistema imuno-
lgico, como as clulas da linhagem monoctica/
macrofgica e/ou linfoctica.
A etapa seguinte consiste na fuso do enve-
lope viral com a membrana plasmtica, processo
que envolve interaes da protena TM com com-
ponentes da membrana e que resulta na liberao
do nucleocapsdeo no citoplasma. Essa fuso in-
depende da reduo de pH e ocorre na superfcie
da clula. Alm do genoma e das protenas NC e
CA, o nucleocapsdeo contm algumas molcu-
las das enzimas RT, IN e PR. A primeira etapa
aps a penetrao e desnudamento do genoma
a sntese do DNA proviral mecanismo deno-
minado de transcrio reversa. O processo se inicia
em uma seqncia denominada de stio de liga-
o do primer (primer binding site, PBS), localizada
prxima da regio U5, onde ocorre a ligao de
um RNA transportador (tRNA celular que est
presente nos vrions). Inicialmente sintetizada
a ta de DNA complementar (cDNA), iniciando
pela sntese das regies U5 e R. O DNA de ta
816 Captulo 31
simples recm-sintetizado desloca-se, ento, para
a extremidade 3 (primeiro salto), ocorrendo o
pareamento com a regio R, e a sntese prossegue
at a seqncia PBS. medida que a transcrio
avana, a ta de RNA degradada pela atividade
da ribonuclease H (RNAse H) da enzima RT, a
qual igualmente responsvel pela liberao do
primer de RNA, que possibilita a sntese da ta
complementar do DNA proviral. A seguir, ocorre
um segundo salto, com o pareamento da regio
PBS entre as duas tas, que culmina com a for-
mao da molcula de DNA de ta dupla, deno-
minada provrus.
A atividade da enzima RT parcialmente
responsvel pela variabilidade observada no ge-
noma dos retrovrus. Essa enzima comete erros
ao transcrever o RNA genmico em DNA, com
uma freqncia de um em cada 10
3
-10
4
nucleot-
deos incorporados. Isso equivale a uma mutao
em cada novo genoma produzido, considerando-
se que o genoma dos retrovrus apresenta apro-
ximadamente 10.000 nt. Esta taxa de mutao
signicativamente maior, comparando-se com as
enzimas de replicao do DNA celular, cuja fre-
qncia de erros estimada em um em cada 10
9
.
O provrus DNA de ta dupla , ento,
transportado para o ncleo da clula, onde in-
serido no cromossomo celular pela atividade da
IN. Essa enzima possui tambm atividade endo-
nuclease, que necessria para clivar o DNA ce-
lular para a integrao do provrus. A etapa de
insero resulta na incorporao denitiva de
uma cpia do genoma viral (na forma de DNA)
no cromossomo do hospedeiro e se constitui em
uma etapa essencial para o prosseguimento do
ciclo replicativo e produo de prognie viral.
Aps ser integrado no cromossomo da c-
lula hospedeira, o provrus DNA transcrito
pela RNA polimerase II e fatores de transcrio
celulares para a sntese de mRNAs destinados
produo das protenas virais. Os transcritos pri-
mrios originam duas classes de mRNA: mRNA
subgenmicos e mRNAs com a extenso total do
genoma. Os mRNA subgenmicos foram subme-
tidos a processamento por splicing, exportados
para o citoplasma, onde sero traduzidos nas
protenas do envelope (Env, que, aps clivagem,
dar origem s protenas TM e SU) e nas prote-
nas acessrias (nos retrovrus que as possuem).
Os mRNA com a extenso do genoma sero tra-
duzidos nas protenas gag e pol (precursoras das
protenas MA, NC e CA; e RT, IN e PR, respecti-
vamente), e tambm sero encapsidados em nu-
cleocapsdeos pela NC e CA. Ambas as classes de
mRNAs possuem cap na extremidade 5 e so po-
liadeniladas na extremidade 3. As etapas da re-
plicao do genoma e a estrutura das molculas
intermedirias (provrus) esto apresentadas na
Figura 31.4. As etapas tardias do ciclo, com o des-
tino dos diferentes RNA transcritos a partir do
AAAA Cap
.gag pol env
.gag pol env
.gag pol env
.gag pol env
R
R
R
R
R
R
U5
U5
U5
U5
U5
U3
U3
U3
U3
U3
Transcrio reversa (1)
Integrao (2)
Transcrio (3)
Genoma
Genoma
Provrus
Provrus Integrado
DNA
celular
DNA
celular
AAAA Cap
R R U5 U3
DNA
RNA
RNA
DNA
Figura 31.4. Etapas da replicao do genoma dos
retrovrus e estrutura das molculas intermedirias. O
genoma constitudo por duas molculas idnticas de
RNA de fita simples com 5' cap e poliA. Prximo s
extremidades, ogenoma possui duas regies repetidas R
(5' e 3') e duas regies nicas (U5 e U3). Entre essas
regies, localizam-se as seqncias codificantes: genes
gag, pol e env. A primeira etapa da replicao sntese
do provrus DNA (molcula de DNA de fita dupla
correspondente ao genoma) pela enzima viral
transcriptase reversa (1). O provrus contm as regies
U3 e U5 duplicadas nas extremidades opostas e
integrado aos cromossomos celulares pela ao da
enzima viral integrase (2). Aps a integrao, o provrus
transcrito pela RNA polimerase II celular (3),
originando mRNAs idnticos ao genoma. Esses mRNAs
servem para a traduo em protenas e tambm
constituem o RNA genmico para serem encapsidados
naprognie viral.
Retroviridae 817
provrus integrado e a morfognese dos vrions
esto apresentadas na Figura 31.5.
A transcrio do genoma dos retrovrus que
possuem genes acessrios (p. ex., os lentivrus),
ocorre em duas fases: uma fase precoce, quando
so transcritos os mRNA que codicam as prote-
nas envolvidas na regulao da replicao viral;
uma fase tardia, em que ocorre a exportao do
ncleo para o citoplasma mRNAs que sero tra-
duzidos nas protenas estruturais.
LTR LTR
Env (SU+TM)
Splicing
Exportao
Traduo
Traduo
Ncleo
Citoplasma
Transcrio
Cap gag
gag
pol
pol
AAAAA
AA
AAA
AAAAA
env
env
env
env
Gag (MA, CA, NC) Pol (PR, RT, IN)
Sem splicing
Figura 31.5. Etapas tardias da replicao dos retrovrus. O provrus DNA integrado ao cromossomo celular
transcrito pela RNA pol II celular em toda a sua extenso, gerando transcritos com cap e poli-A. Uma parte desses
transcritos exportada doncleosemsofrer e serve de mRNApara a sntese da poliprotena dogene gage das
protenas do gene pol . Aoutra parte destes mRNAs, que no sofre processamento, exportada do ncleo e servir de
RNA genmico. Em fases tardias do ciclo, uma populao de transcritos sofre e serve de mRNA para a
traduo em uma poliprotena (Env) que originar as glicoprotenas do envelope. Esta poliprotena transportada
para a membrana plasmtica, onde as protenas TM e SU so geradas por clivagem e ficam associadas membrana
que dar origem ao envelope viral. As poliprotenas dos genes gag e pol so transportadas para a membrana
plasmtica, onde interagem com o RNA genmico e com as caudas das glicoprotenas, membrana, resultando na
formao do nucleocapsdeo e brotamento das partculas vricas. A maturao completa das protenas precursoras
ocorre empartculas vricas extracelulares.
splicing
splicing
818 Captulo 31
A morfognese uma etapa pouco conhe-
cida do ciclo replicativo dos retrovrus e parece
apresentar algumas diferenas entre os vrus.
Para a maioria dos vrus, as etapas de montagem
do nucleocapsdeo (interaes RNA + NC + CA)
e brotamento na membrana parecem ocorrer si-
multaneamente. Em outros, os nucleocapsdeos
so inicialmente montados no citoplasma e trans-
portados at a membrana plasmtica, onde inte-
ragem com a protena MA e com as caudas das
glicoprotenas, resultando no brotamento e egres-
so. De qualquer forma, estes eventos ocorrem no
citoplasma, e as partculas vricas so liberadas
sem a necessidade de lise celular. Durante a mor-
fognese, so includas algumas molculas das
enzimas virais RT, IN e PR nas partculas recm-
formadas. O ciclo replicativo dos retrovrus est
ilustrado esquematicamente na Figura 31.6.
O estudo da replicao dos retrovrus pode
ser realizado in vitro, em diferentes tipos celula-
res. Por outro lado, a infeco de cada retrovrus
in vivo parece estar restrita a um determinado
hospedeiro e a poucos tipos celulares, restrio
principalmente relacionada com a presena dos
receptores virais.
Apesar de serem considerados predomi-
nantemente espcie-especcos, alguns retrov-
rus podem infectar mais de uma espcie animal.
A infeco cruzada de caprinos e ovinos pelo
CAEV e MVV foi descrita por vrios autores, que
sugeriram a denominao lentivrus de peque-
nos ruminantes (SLRV small ruminant lentivirus)
para esses vrus. Provavelmente, a proximidade
logentica entre essas espcies favorea a in-
feco cruzada. Por outro lado, estudos recentes
demonstraram que o CAEV capaz de infectar
bovinos igualmente ruminante experimental-
mente, apesar de a infeco no persistir.
A replicao de vrios lentivrus em clulas
de cultivo resulta na produo de efeito citop-
2
Transcrio
reversa
A A A A A
A A A A A
A A A A A
A A A A A
A A A A A
Integrao
Transcrio
Traduo
Traduo
Formao
do capsdeo
Brotamento
Penetrao
RER
Ligao aos
receptores
Provrus
Provrus
integrado
Maturao
Figura31.6. Ilustraosimplificadadocicloreplicativodos retrovrus.
Retroviridae 819
tico, caracterizado pela formao de clulas gi-
gantes multinucleadas ou sinccios. A replicao
in vitro de outros retrovrus pode levar morte
da clula devido ao acmulo de partculas virais
(superinfeco). Isso tem sido observado com al-
gumas cepas do ALV e em variantes do FeLV.
5 Retrovrus de interesse veterinrio
O nmero de retrovrus que infecta animais
muito grande e, por isso, de difcil enumerao
e abordagem em um livro texto como este. Por-
tanto, ser dada nfase aos principais retrovrus
que causam doenas em animais de companhia
e de produo. A ordem de apresentao ser de
acordo com a espcie animal.
5.1 Vrus da leucose bovina
O BLV (bovine leukemia virus), agente etiol-
gico da leucose enzotica bovina, classicado
como um Deltaretrovirus e apresenta muitas simi-
laridades estruturais, genmicas e de patogenici-
dade com o HTLV-1 e o HTLV-2 (human T lym-
photropic viruses 1 and 2).
Esse vrus foi descrito, pela primeira vez, em
1871, na Litunia, em um bovino com hipertro-
a de linfonodos superciais e esplenomegalia.
Depois disso, outros casos semelhantes tambm
foram descritos e, em 1917, Kenneth demonstrou
que a doena era causada por um agente infeccio-
so. Em 1976, Kettmann e colaboradores demons-
traram que as partculas virais possuam RNA
exgeno e que continham a enzima RT, permitin-
do sua classicao como um retrovrus oncog-
nico. O BLV um retrovrus complexo e, assim
como os HTLV-1 e 2, contm genes que codicam
produtos acessrios como Tax e Rex, cuja funo
est relacionada com a regulao da expresso
gnica desses vrus.
A variabilidade genmica do BLV no pare-
ce ser grande entre isolados, provavelmente de-
vido taxa de mutao de sua RT ser inferior a de
outros retrovrus. Comparativamente, o BLV te-
ria um comportamento similar ao HTLV, em que
isolados do Japo, Caribe e frica apresentam at
99% de homologia.
5.1.1 Epidemiologia
O BLV est distribudo mundialmente, com
exceo de alguns pases europeus que erradi-
caram a infeco a partir da dcada de 1980. No
Brasil, a infeco est amplamente difundida,
com nveis variveis de prevalncia entre os re-
banhos. Estudos sorolgicos j foram realizados
em praticamente todas as regies do pas, in-
dicando a ampla distribuio da infeco, com
ndices de prevalncia geralmente maiores em
gado leiteiro. Na Serra de Botucatu, SP, foi de-
tectada prevalncia de 52% entre animais e de 10
a 67% das propriedades eram positivas. No Rio
de Janeiro, 17,3% de 734 animais testados foram
positivos. Em um estudo envolvendo aproxima-
damente 10.000 amostras no Rio Grande do Sul,
detectou-se uma prevalncia de 8% de animais
soropositivos.
Em condies naturais, o vrus pode infectar
bovinos, zebunos, bfalos e capivaras. Infeces
experimentais j demonstraram a susceptibilida-
de de ovinos, caprinos e coelhos. Os coelhos po-
dem desenvolver tumores ou imunodecincia
aps um tempo varivel de incubao.
Assim como os outros retrovrus, o BLV
apresenta uma baixa transmissibilidade, ou seja,
no facilmente transmitido. A transmisso ocor-
re predominantemente entre animais do mesmo
rebanho, e incomum ocorrer entre rebanhos
vizinhos. comum a existncia de regies onde
rebanhos positivos e negativos vizinhos coexis-
tam por longos perodos, sem a disseminao do
vrus para os rebanhos livres. Essas observaes
indicam que um contato mais prximo entre os
animais necessrio para a transmisso. A trans-
misso iatrognica, pela aplicao de vacinas,
uso compartilhado de agulhas hipodrmicas,
administrao de medicamentos e aps o toque
retal contribui de forma importante para a disse-
minao da infeco dentro dos rebanhos.
O vrus est presente no sangue dos animais
infectados e transmitido por procedimentos
que envolvam a transferncia de clulas sang-
neas entre animais. Cabe lembrar que os animais
infectados tornam-se portadores pelo resto da
vida e possuem o vrus no sangue, sobretudo em
820 Captulo 31
linfcitos B. Aproximadamente 1 microlitro de
sangue de um animal com linfocitose persistente
j pode ser suciente para transmitir o vrus para
outro animal. Assim sendo, a forma iatrognica
parece contribuir de forma importante para a
transmisso do vrus. Animais submetidos a pro-
cedimentos cirrgicos ou teraputicos, como cas-
trao, descorna, tatuao, vacinaes, pequenas
cirurgias, palpao retal, injees ou colocao
de brincos, sem os devidos cuidados de prola-
xia, esto propensos a adquirirem a infeco pelo
BLV. A transmisso pela picada de insetos, como
os tabandeos, j foi relatada e parece possuir al-
guma importncia em regies com alta infestao
desses insetos. A presena do vrus j foi descrita
na glndula mamria, associada aos linfcitos,
bem como no leite, indicando a possibilidade de
transmisso atravs do leite.
Embora o vrus possa ser ocasionalmente
encontrado no smen de touros, a inseminao
articial no parece ser um meio importante de
disseminao do vrus. No obstante, centrais de
coleta de smen so desaconselhadas a manter
touros positivos. A transmisso pela monta na-
tural pode ocorrer, representando uma forma de
disseminao do vrus de touros infectados para
fmeas. Vacas positivas prenhes podem transmi-
tir o vrus para o feto; entretanto, menos de 10%
dos animais nascidos dessas fmeas so portado-
res do vrus ao nascer. Em outros trabalhos, que
analisam a transferncia de embries a partir de
doadoras infectadas pelo BLV, no foi detectada
transmisso para os embries ou para as recep-
toras.
Em pases cujos sistemas criatrios mantm
registros detalhados de produtividade, como os
EUA, Canad, Japo e Austrlia, estima-se que
os efeitos do BLV podem atingir uma reduo de
at 10% na produo leiteira.
O BLV infecta principalmente linfcitos B,
nos quais produz uma infeco persistente, em-
bora tambm possa infectar linfcitos T. A exem-
plo das infeces pelos outros retrovrus, uma
vez infectados os animais tornam-se portadores
do agente pelo resto da vida. Na maioria das
vezes, a infeco pelo BLV assintomtica, e o
reconhecimento dos animais positivos somente
possvel pela realizao de testes sorolgicos.
Entre os animais infectados, aproximada-
mente 30% desenvolvem uma linfocitose per-
sistente, sem a manifestao de quaisquer sinais
clnicos. Estima-se que entre 1 e 5% dos animais
infectados persistentemente iro desenvolver a
forma clnica da doena em algum momento de
suas vidas. A enfermidade (denominada leuco-
se) caracteriza-se pela produo de tumores de
origem linfide, como linfossarcomas ou linfo-
mas malignos, em diversos rgos. A patogenia
dos tumores no est relacionada a oncogenes
presentes no genoma viral, mas a protena viral
Tax parece ter um papel importante na sua pro-
duo.
Os sinais clnicos so variveis e esto rela-
cionados com os rgos e tecidos afetados pelos
tumores. Assim, tumores que se desenvolvem
no trato gastrintestinal podem ocasionar obstru-
es ou provocar lceras, que podem resultar em
disfunes digestivas, anorexia e perda de peso.
Tumores que atingem a medula espinhal podem
resultar em distrbios neurolgicos com manifes-
taes diversas. Alguns sinais clnicos observados
em dois grupos de animais com linfossarcoma es-
to descritos na Tabela 31.2. Aproximadamente
dois teros dos animais com tumores apresentam
tambm linfocitose persistente. A forma tumoral
do BLV afeta geralmente animais acima de dois
anos de idade, com um pico de incidncia entre
os 5 e 8 anos. Esses tumores devem ser distin-
guidos da leucose espordica bovina, que afeta
animais com idade inferior a um ano e no est
relacionada infeco pelo BLV.
Os tumores podem afetar um ou vrios lin-
fonodos, superciais ou profundos. Algumas ve-
zes, o infartamento de linfonodos superciais o
primeiro indicador clnico da ocorrncia de lin-
fossarcoma. A partir do reconhecimento clnico,
o linfossarcoma possui um curso de tempo vari-
vel, mas virtualmente sempre fatal.
Retroviridae 821
A viremia detectvel somente nas duas pri-
meiras semanas aps a infeco e, tardiamente, a
deteco de antgenos virais no sangue difcil.
Alguns trabalhos indicam que, aps a infeco
inicial, a permanncia do vrus no organismo se-
ria mantida principalmente pela diviso celular
da clula contendo o provrus e no pela re-
plicao do genoma viral via RT. Isso, de certa
forma, tambm ajudaria a explicar a menor varia-
bilidade genmica do BLV, quando comparado
com outros retrovrus (p. ex., EIAV), cuja taxa de
replicao maior no curso da infeco.
Os animais infectados desenvolvem uma
resposta sorolgica entre duas a oito semanas
ps-infeco. Os anticorpos so direcionados
principalmente contra as glicoprotenas do enve-
lope (TM, SU) e contra as protenas do capsdeo.
Os anticorpos so persistentes, porm os nveis
presentes podem variar de acordo com a condi-
o siolgica e imunolgica do animal. Um es-
tudo recente estimou o tempo mdio de sorocon-
verso em 47 dias (infeco experimental) e 57
dias (dados de infeco experimental e natural).
O provrus integrado detectado em, apro-
ximadamente, 30% dos linfcitos circulantes. A
expanso da populao linfocitria ocorre a par-
tir da proliferao policlonal de linfcitos B, com
citologia e caritipo normais.
Os achados de necropsia incluem aumento
generalizado dos linfonodos, tanto superciais
como internos. Ao corte, os linfonodos apresen-
tam uma superfcie branco-amarelada, sem dis-
tino entre a cortical e medular. Massas tumorais
com o mesmo aspecto podem ser encontradas no
corao, rins, intestinos, abomaso, medula espi-
nhal e tero. Histologicamente observa-se pro-
liferao das clulas da linhagem linfoctica e
inltrao macia dessas clulas nos rgos afe-
tados.
5.1.3 Diagnstico
Duas condies distintas devem ser consi-
deradas no diagnstico do BLV: o diagnstico da
enfermidade (leucose ou linfossarcoma) e o diag-
nstico da infeco. A suspeita da doena clnica,
Perda de peso
Sinais clnicos Grupo 1 (%)
b
- 80
Grupo 2 (%)
c
Agalactia - 77
Linfoadenopatia (aumento de volume) 58 58
Anorexia 62 52
Paralisia/paresia do posterior 16 41
Febre - 23
Exoftalmia 9 20
Dificuldade respiratria - 14
Obstruo intestinal 19 9
Anormalidade no miocrdio 64 7
Linfcitos anormais 63 -
a
Fonte: adaptado de: The CompendiumCollection, Infectious Disease in Food andAnimal Practice, 1993.
b
c
Dados de 298 animais hospitalizados.
Dados de 1.100 animais de campo.
Tabela 31.2. Sinais clnicos associados coma infeco pelo vrus da leucose bovina (BLV).
822 Captulo 31
pela observao dos sinais mencionados, deve
ser conrmada por exames histopatolgicos e so-
rolgicos; a infeco pode ser diagnosticada por
testes sorolgicos.
Dentre os sinais que mais chamam a aten-
o e levam o veterinrio a suspeitar de leucose
bovina, esto o infartamento de linfonodos su-
perciais, distrbios digestivos persistentes com
anorexia e perda de peso, presena de massas
tumorais no intestino e paralisia dos membros
posteriores. Como nenhum desses sinais pa-
tognomnico, o diagnstico requer a realizao
de testes sorolgicos e/ou histopatolgicos. Os
testes sorolgicos so realizados principalmente
para a identicao de portadores e para triagem
de rebanhos. Em animais com suspeita clnica,
um teste sorolgico positivo refora a hiptese
diagnstica, mas no capaz de fornecer o resul-
tado denitivo. O diagnstico denitivo de lin-
fossarcoma no animal vivo pode ser obtido por
exames histopatolgicos de linfonodos super-
ciais obtidos por bipsia. No animal morto, os
achados patolgicos macro e microscpicos po-
dem conrmar o diagnstico.
Os testes sorolgicos so utilizados para de-
tectar a condio de portador. O primeiro teste
sorolgico empregado para diagnstico da infec-
o pelo BLV foi a imunodifuso em gel de gar
(IDGA), utilizando a protena do capsdeo (p24)
como antgeno. O uso da glicoprotena principal
do envelope (gp51), entretanto, permitiu o au-
mento da sensibilidade desse teste. Desta forma,
os testes de IDGA atuais utilizam a glicoprotena
gp51 ou uma combinao de gp51 e p24 como an-
tgeno. A simplicidade, praticidade e custo baixo
zeram com que o teste de IDGA fosse aceito ra-
pidamente em todo o mundo, tornando-se o teste
ocial para deteco de anticorpos anti-BLV.
Como os animais infectados pelo BLV per-
manecem como portadores permanentes, todos
os animais positivos, com idade superior a seis
meses, devem ser considerados portadores e po-
tenciais fontes de infeco para outros animais.
A imunidade passiva pode inuenciar as
provas sorolgicas para o BLV, gerando resulta-
dos falso-positivos. Sorologia positiva em animais
com idade inferior a seis meses pode ocorrer em
razo da infeco ou dos anticorpos maternos ad-
quiridos passivamente pelo colostro. Os anticor-
pos passivos tendem a desaparecer at os 6 ou 7
meses de idade, e o teste de IDGA nesses animais
deve tornar-se negativo aps este perodo. Re-
sultados falso-negativos tambm podem ocorrer,
sobretudo, em fmeas prenhes nas proximidades
do parto, devido ao seqestro de anticorpos para
o colostro. O ensaio imunoenzimtico (ELISA)
tambm tem sido utilizado para deteco de an-
ticorpos anti-BLV e apresenta vantagens como a
maior sensibilidade e facilidade de automao.
Apesar de apresentar uma grande variao
de resultados entre diferentes laboratrios, o tes-
te da reao em cadeia da polimerase (PCR), que
detecta o DNA proviral, tem se mostrado til
como mtodo complementar aos testes de IDGA
e ELISA. Essa variao de resultados ocorre em
funo da variabilidade gentica do genoma viral.
O teste de PCR realizado com DNA extrado de
leuccitos em amostras de sangue coletadas com
anticoagulante. Amostras negativas no IDGA ou
no ELISA ou de animais que receberam colostro
de mes positivas podem ser testadas por PCR. A
tcnica de PCR, no entanto, no muito utilizada
na rotina e possui aplicao apenas em situaes
especiais.
Considerando-se as formas de transmisso
do BLV, possvel erradicar a infeco de reba-
nhos e populaes maiores pela adoo de prti-
cas de manejo associadas com o uso de medidas
sanitrias prolticas. A etapa inicial do progra-
ma envolve a realizao de testes sorolgicos e a
identicao dos animais soropositivos. Os ani-
mais positivos devem ser preferencialmente des-
cartados, mas podem ser mantidos no rebanho
desde que separados dos demais e submetidos a
prticas que minimizem o risco de transmisso.
Os animais positivos devem ser distinguidos dos
outros para serem facilmente reconhecidos e, as-
sim, manejados com cuidados especiais para evi-
tar a transmisso iatrognica do vrus. Bezerros
nascidos de mes positivas devem ser isolados e
testados, s podendo ser introduzidos no rebanho
negativo se mantiverem a condio soronegativa
at os 6-8 meses, ocasio do desaparecimento dos
Retroviridae 823
anticorpos passivos. A condio sorolgica dos
animais deve ser monitorada a cada seis meses,
com a qual se avalia a eccia das medidas ado-
tadas.
Como medidas de controle em rebanhos que
possuem animais positivos, citam-se:
utilizao de agulhas estreis individuais
para procedimentos prolticos, clnicos e tera-
puticos (aplicao de vacinas, antiparasitrios,
outros medicamentos, anestsicos e coleta de
sangue);
utilizao de luvas de palpao individu-
ais para cada animal;
lavagem e desinfeco de instrumentos
cirrgicos ou de procedimentos potencialmente
contaminados com sangue de animal infectado;
adoo de um programa de controle de
insetos hematfagos nas regies em que h ne-
cessidade;
uso de inseminao articial, evitando
transmisso de linfcitos infectados atravs da
monta natural;
separao dos bezerros lhos de mes po-
sitivas, no permitindo que entrem em contato
com animais negativos at que sua condio so-
rolgica para BLV possa ser denida. Pode-se co-
letar uma amostra de sangue do animal logo aps
o nascimento, antes de mamar o colostro. Caso a
amostra seja positiva, considera-se que o animal
foi infectado in utero e portador do vrus;
separao dos animais em grupos de posi-
tivos e negativos, o que favorece o manejo, pois os
animais negativos devem ser manejados antes.
As propriedades livres do vrus devem ado-
tar medidas para evitar a sua introduo. Para
isso, todos os animais adquiridos devem ser
previamente testados para o BLV. Se oriundos
de rebanhos sabidamente negativos, podem ser
incorporados ao rebanho; se oriundos de pro-
priedades de situao sorolgica desconhecida,
devem ser mantidos separados por oito semanas
e, ento, submetidos a um novo teste sorolgico.
A adoo de medidas de controle para evi-
tar a disseminao do vrus dentro do rebanho
tem surtido efeito e tem sido possvel manter
animais positivos no rebanho, com risco mnimo
de transmisso aos outros animais. Essa estrat-
gia somente deve ser adotada quando os animais
positivos possuem um alto valor gentico e eco-
nmico; do contrrio, devem ser identicados e
eliminados do rebanho.
Atualmente no existem vacinas disponveis
contra o BLV.
5.2 Vrus da imunodecincia bovina
O BIV (bovine immunodeciency virus) foi
isolado, pela primeira vez, por Van der Maaten
e colaboradores, em 1972, a partir de um bovino
com suspeita de linfossarcoma. Durante aproxi-
madamente 15 anos, pouca importncia foi dada
ao BIV, pois esse vrus aparentemente no estava
relacionado com nenhuma enfermidade. Com a
descoberta de que a sndrome da imunodeci-
ncia humana adquirida (AIDS) era causada por
um lentivrus, o BIV e outros vrus pertencentes
a este gnero assumiram grande importncia em
estudos de evoluo e de caractersticas biolgi-
cas e moleculares. O BIV foi classicado como um
lentivrus por possuir similaridades moleculares,
genticas, antignicas e estruturais com o HIV.
5.2.1 Epidemiologia
A presena do BIV j foi relatada em v-
rios pases, como o Canad, Costa Rica, Estados
Unidos, Frana e Itlia. Nos Estados Unidos, a
soroprevalncia da infeco bastante varivel.
Alguns estudos identicaram uma prevalncia
de anticorpos em 40% de animais de carne e em
60% de animais de leite no estado da Louisiana.
Embora os dados de prevalncia sejam escassos,
acredita-se que o BIV esteja amplamente difun-
dido na populao bovina de diferentes pases.
No Brasil, von Groll et al. (1997) relataram, pela
primeira vez, a presena do BIV pela deteco de
animais sorologicamente positivos entre animais
clinicamente sadios.
A transmisso experimental pode ser obtida
pela administrao de sangue total de um animal
infectado. Dessa forma, o uso de agulhas e ins-
trumental cirrgico contaminados, ingesto de
colostro de fmeas infectadas e a higienizao
deciente de instrumentos utilizados em prticas
invasivas, como castraes e descornas, podem
estar envolvidos na transmisso do BIV. J foi de-
824 Captulo 31
monstrada a presena do provrus do BIV em um
grande nmero de amostras de smen, podendo
essa secreo se constituir em um veculo para a
transmisso. A transmisso pela via transplacen-
tria tambm j foi demonstrada experimental-
mente.
O BIV infecta naturalmente os bovinos e
pode infectar experimentalmente ovinos, capri-
nos e coelhos.
Ainda no foi demonstrado que o BIV seja
capaz de, agindo isoladamente, produzir mani-
festaes clnico-patolgicas especcas, nem que
o vrus torne os animais infectados susceptveis
a outros agentes infecciosos. No entanto, existe
uma correlao positiva entre soropositividade
para o vrus (e a condio de portador) e reduo
na produo de leite.
Uma das primeiras descries da infeco
pelo BIV relata um bovino da raa holandesa, de
oito anos, com um aumento no nmero de leuc-
citos e perda de condio corporal. Aps a mor-
te desse animal, no foram observados tumores,
como inicialmente suspeito. Histologicamente foi
relatada uma hiperplasia folicular dos linfonodos
e leses no sistema nervoso central.
Assim como outros lentivrus, o BIV apre-
senta tropismo por subpopulaes especcas de
leuccitos. J foi identicada a presena de DNA
proviral do BIV e a produo de partculas infec-
ciosas em clulas B, T e em moncitos durante os
estgios agudos da infeco.
O BIV pode ser propagado em vrios tipos
de cultivos celulares de origem bovina, e a repli-
cao em clulas de bao e pulmo mais indi-
cada, pois o vrus capaz de replicar em altos
ttulos.
O diagnstico da infeco pelo BIV pode
ser realizado pela deteco de anticorpos, com o
uso de tcnicas como imunouorescncia (IFA)
e Western blot. Anticorpos para o BIV podem ser
detectados pelo teste de IFA, trs semanas aps
a infeco, e persistem por mais de dois anos em
animais inoculados experimentalmente.
Pela prova de Western blot, anticorpos contra
a protena do capsdeo p26 so os primeiros a se-
rem detectados, demonstrando que esta protena
imunodominante.
A deteco do provrus e do RNA genmi-
co, em clulas infectadas, pode ser realizada pelo
uso das tcnicas de PCR e transcrio reversa se-
guida de PCR(RT-PCR), respectivamente.
Considerando-se que o vrus infecta leuc-
citos, a medida mais indicada para prevenir a
transmisso evitar a transferncia de sangue de
animais contaminados para animais sadios. Alm
disso, recomendado aquecer (56C 30 min) o
leite de vacas soropositivas antes de fornec-lo
aos bezerros.
5.3 Vrus da pneumonia progressiva dos
ovinos (Maedi-Visna)
O vrus Maedi-Visna (MVV) ou vrus da
peneumonia progressiva dos ovnos (OPPV) foi
caracterizado nos anos 1960, na Islndia, em ovi-
nos que apresentavam pneumonia progressiva
e encefalite degenerativa. A presena da doena
havia sido descrita inicialmente nos anos 1930,
quando mais de 100.000 animais morreram em
decorrncia da infeco. Os termos islandeses
Maedi e Visna correspondem, respectivamente,
aos sinais clnicos observados nos animais doen-
tes: dispnia e denhamento. A denominao do-
enas causadas por vrus lentos (slow virus diseases)
foi atribuda, pela primeira vez, por Sigurdsson
(1954), que identicou a presena de um agente
viral associado a casos de Maedi-Visna.
O agente da Maedi-Visna classicado no
gnero Lentivirus e tem sido denominado, junta-
mente com o vrus da artrite-encefalite caprina,
como lentivrus de pequenos ruminantes (SRLV
small ruminant lentivirus) em funo da similari-
dade genmica, antignica e de apresentao da
doena em caprinos e ovinos.
5.3.1 Epidemiologia
Com exceo da Islndia, de onde a doen-
a foi erradicada aps o sacrifcio de milhares
Retroviridae 825
de animais, a presena do MVV j foi detectada
em diversos pases da Europa e das Amricas. A
Austrlia e Nova Zelndia so consideradas li-
vres da doena. No Brasil, a situao epidemiol-
gica da enfermidade desconhecida, no entanto,
j foram realizados alguns estudos e o seqencia-
mento e anlise logentica de pelo menos um
isolado do Sul do pas.
O MVV foi, inicialmente, associado com in-
feco de ovinos, embora, atualmente, se aceite
que possa ocorrer infeco cruzada entre ovinos
e caprinos. Diversos estudos logenticos indi-
cam para essa disseminao interespcies, princi-
palmente em pases em que as duas espcies so
criadas juntas.
O vrus excretado em secrees como par-
tculas livres ou associado com clulas como os
moncitos e macrfagos. A transmisso pode
ocorrer por contato direto ou indireto e atravs de
materiais e equipamentos compartilhados. Para o
recm-nascido, a principal fonte de contaminao
o colostro. O leite contaminado tambm pode
permitir propagao do vrus entre animais que
compartilhem o uso de ordenhadeiras e na prti-
ca de se utilizar um banco de colostro. Parece que
a maioria das infeces ocorre pela ingesto de
colostro ou leite de fmeas soropositivas. O con-
tato prolongado entre animais parece ser menos
eciente na transmisso do agente.
Considerando-se o comprometimento do
trato respiratrio, uma vez que o pulmo o
principal rgo de replicao do MVV, os aeros-
sis podem ser importantes na disseminao do
vrus. A transmisso horizontal favorecida em
animais criados em regime de connamento.
A transmisso intra-uterina no foi demons-
trada claramente e, mesmo que ela ocorra, no
parece desempenhar um papel epidemiolgico
importante. O mesmo se aplica transmisso
pelo smen contaminado.
As doenas associadas aos lentivrus apre-
sentam uma evoluo lenta e progressiva, carac-
terizadas por um longo perodo de incubao at
o aparecimento dos sinais clnicos. Na maioria
das vezes, os animais desenvolvem uma respos-
ta humoral com ttulos de anticorpos detectveis
por testes sorolgicos, mas que no resultam na
erradicao do vrus do organismo. A exemplo
dos outros retrovrus, uma vez infectado, o ani-
mal torna-se portador e fonte de contaminao
para o rebanho durante toda a sua vida.
Vrios fatores so responsveis pela persis-
tncia do vrus no organismo do hospedeiro. No
caso dos SRLV, foi demonstrada a importncia
da diferenciao/ativao dos macrfagos no
incremento da produo de partculas virais. A
restrio da replicao viral estaria relacionada
com a ausncia e/ou quantidades insucientes
de fatores de transcrio, capazes de levar snte-
se dos mRNA virais codicadores das protenas
estruturais do vrion.
As patologias pulmonares esto associadas
com a formao de folculos linfides que, atra-
vs da secreo de citocinas, contribuiriam para o
desenvolvimento da pneumonia intersticial devi-
do a uma resposta inamatria exacerbada. Alm
do pulmo, a glndula mamria pode igualmen-
te apresentar a formao de folculos linfides e
o conseqente desenvolvimento de mastite. As
manifestaes de origem neurolgica, por ence-
falite, so raras e foram descritas principalmente
na epidemia que atingiu a Islndia e que levou
morte um grande nmero de animais. Com-
prometimentos articulares (artrites) foram igual-
mente descritos, mas com menor freqncia do
que os quadros respiratrios.
Em funo dos diferentes rgos atingi-
dos pelo vrus, as manifestaes clnicas podem
variar desde diculdade respiratria, mastite
acompanhada de endurecimento da glndula
mamria, artrite, ataxia dos membros posteriores
e incoordenao. Os sinais clnicos podem levar
meses ou anos para se manifestarem; e apenas
uma parcela dos animais infectados desenvolve
a sintomatologia. Estima-se que apenas 30% dos
animais sorologicamente positivos manifestem
sinais clnicos da infeco, e as manifestaes res-
piratrias apresentam maior incidncia.
Em regies endmicas, o diagnstico pre-
suntivo pode ser realizado pelo quadro clnico,
embora apenas uma parcela dos animais apre-
826 Captulo 31
sente sinais clnicos. As principais manifestaes
clnicas em ovinos infectados pelo MVV so os
sinais respiratrios. O quadro pode progredir,
levando caquexia e morte. As fmeas podem
igualmente apresentar endurecimento do bere
devido formao de ndulos linfides. A sus-
peita clnica deve ser necessariamente conrma-
da por exames laboratoriais para a deteco de
anticorpos ou de antgenos e RNA viral. O con-
trole principalmente baseado na identicao e
segregao dos animais infectados.
Diversos testes sorolgicos so utilizados
para identicar os animais infectados, como a
IDGA, ELISA, Western blot e radioimunoprecipi-
tao (RIP). No existe, atualmente, um teste que
seja considerado padro (gold standard) para de-
terminar a sensibilidade e especicidade dos tes-
tes disponveis. No entanto, de consenso que a
utilizao de um teste sorolgico associado a me-
didas de controle permite reduzir a prevalncia
da infeco, reduzindo a disseminao do agente
no rebanho.
O isolamento viral realizado a partir de
co-cultivo de moncitos do sangue perifrico ou
de macrfagos alveolares com broblastos de
origem fetal, clulas de plexo coride ou mesmo
com cultivos primrios de membrana sinovial.
Observa-se, na maioria das vezes, a formao de
sinccios, caracterizada pela presena de clulas
gigantes multinucleadas. A replicao do vrus
em cultivo lenta, e os resultados podem levar
vrios dias ou semanas.
As tcnicas de imunohistoqumica e hibridi-
zao in situ podem ser utilizadas para demons-
trar antgenos ou cidos nuclicos virais nos
cultivos e em amostras de tecidos destinadas
histopatologia. Ainda, para deteco do provrus
ou do genoma viral, podem ser utilizadas a PCR
e a RT-PCR.
A variabilidade gentica e antignica exis-
tente entre os isolados do SRLV indica que a de-
teco de anticorpos ou do cido nuclico viral
por PCR deve considerar as caractersticas das
cepas circulantes na populao estudada.
As principais medidas de controle relacio-
nam-se com a identicao dos animais infecta-
dos e a sua separao dos no-infectados, pois
no existem vacinas para os SRLV. Uma das me-
didas mais importantes consiste na separao do
recm-nascido da fmea infectada, impedindo a
ingesto do colostro. Neste caso, pode-se proce-
der inativao do vrus, aquecendo o colostro
a 56C por 1 hora ou fornecer colostro de origem
bovina. A remoo gradativa de animais sorolo-
gicamente positivos associada com a reposio
com animais negativos, separando-se os rebanhos
positivos dos negativos, vem sendo utilizada em
diversos pases. O que determina o sucesso dos
programas de controle , em grande parte, a esco-
lha do teste diagnstico mais adequado regio,
levando-se em considerao as cepas circulantes.
Testes mais sensveis que o IDGA devem ser ado-
tados quando a prevalncia de animais soroposi-
tivos diminui no rebanho.
5.4 Vrus da artrite-encefalite caprina
O vrus da artrite-encefalite caprina (CAEV)
foi descrito, pela primeira vez, em 1980, por
Crawford e colaboradores, como sendo um retro-
vrus causador de artrite, embora a etiologia vi-
ral de encefalite em caprinos jovens j tenha sido
descrita anos antes por Cork (1974). Das duas
manifestaes clnicas inicialmente descritas, a
artrite a forma mais comum de apresentao da
doena.
A classicao do CAEV a mesma do
MVV, assim como diversos aspectos de patoge-
nia e transmisso. Assim, somente os aspectos
que diferenciam os dois vrus sero abordados
com maior nfase, a seguir.
5.4.1 Epidemiologia
O vrus j foi detectado em diversos pases,
inclusive no Brasil, pelo isolamento do agente ou
pela deteco de anticorpos. A infeco j foi de-
tectada em caprinos nos estados de Minas Gerais,
Pernambuco e So Paulo. Um inqurito sorolgi-
co, no Cear, demonstrou 1% de prevalncia en-
tre 4.019 animais e, no Rio de Janeiro, 32,1% dos
rebanhos testados possuam animais positivos.
O CAEV transmitido principalmente atra-
vs do colostro e leite, durante as primeiras ma-
madas dos recm-nascidos. A transmisso por
sangue contaminado, pelo uso de agulhas hipo-
Retroviridae 827
drmicas e de material cirrgico contaminado,
alm de feridas abertas, considerada a segunda
principal forma de transmisso. A transmisso
por contato entre animais adultos considerada
pouco importante.
A patologia mais freqente a artrite, que
se desenvolve lentamente e acomete geralmente
animais adultos, com mais de dois anos de ida-
de. A artrite afeta principalmente as articulaes
do carpo (joelhos), determinando um aumento
de volume localizado, o que determinou a ter-
minologia big knee (joelho grande). Os animais
afetados apresentam diculdade de locomoo e
perda de peso.
A inamao crnica das articulaes pa-
rece ser mediada por deposio de imunocom-
plexos (complexos antgeno-anticorpos), pois foi
evidenciada uma relao direta entre o ttulo de
anticorpos contra a protena do envelope viral e a
severidade das leses articulares. Quanto maior
o ttulo de anticorpos no soro e/ou no lquido si-
novial, mais abundantes e severas so as leses.
A encefalite tem sido descrita principalmen-
te em animais com idade inferior a seis meses,
embora animais adultos tambm possam ser al-
vos da forma neurolgica. Observa-se uma des-
mielinizao, aumento no nmero de leuccitos
no lquido cfalo-raquidiano, inltrao de clu-
las mononucleares e astrocitose na medula e no
crebro.
Alteraes na glndula mamria e pneumo-
nia intersticial tambm so manifestaes da in-
feco pelo CAEV. Observa-se o endurecimento
da glndula mamria, provavelmente associado
com a formao de folculos linfides, sendo de-
nominada em ingls hard udder (bere duro). Na
pneumonia intersticial, observa-se uma prolifera-
o de pneumcitos do tipo II e uma epitelizao
dos alvolos.
Assim como no caso do MVV, a presena de
anticorpos no signica uma resposta imune pro-
tetora. A resposta imune humoral em caprinos
infectados pode ser detectada tardiamente aps
a infeco, e a presena de anticorpos no teste de
ELISA pode ocorrer de forma intermitente duran-
te a vida do animal. Alm disso, j foi demonstra-
da a resistncia doena em animais portadores
de certos hapltipos do complexo principal de
histocompatibilidade (MHC).
A doena se manifesta principalmente em
rebanhos com alta soroprevalncia, sendo pouco
signicativa em rebanhos com baixa prevalncia
de animais soropositivos. Essa observao favo-
rece a hiptese de que no existiriam fatores de
virulncia relacionados s cepas de SRLV, uma
vez que se consegue eliminar a ocorrncia da do-
ena com a reduo dos animais soropositivos no
rebanho.
Os mtodos de diagnstico e as medidas de
controle so basicamente as mesmas preconiza-
das para os ovinos infectados pelo MVV.
Alm dos testes sorolgicos descritos para o
MVV (IDGA, ELISA, Western blot) pode-se usar
tambm a IFA indireta para deteco de anticor-
pos. Nesses testes, clulas infectadas com o vrus
servem de antgeno para a captura dos anticorpos
no soro-teste. Os antgenos dos testes sorolgicos
podem ser empregados indiscriminadamente
para os SRLV. No entanto, alguns trabalhos de-
monstraram que o uso de antgenos de CAEV
para deteco de anticorpos em caprinos aumen-
ta a sensibilidade do teste quando comparado
com antgenos de MVV.
O resultado positivo no teste sorolgico in-
dica que o animal portador do CAEV e pode
transmitir o agente a outros animais, principal-
mente durante a lactao atravs do colostro. A
ausncia de sinais clnicos irrelevante do pon-
to de vista de controle, pois acima de 90% dos
animais portadores podem no apresentar ma-
nifestaes clnicas. Se o teste for realizado em
animais com idade inferior a seis meses, poss-
vel que o resultado positivo se deva a anticorpos
maternos adquiridos pelo colostro. Nesses casos,
recomenda-se avaliar o animal novamente aps
os seis meses de idade. Nesse perodo, devem-se
minimizar as chances de transmisso do agente
a partir desse animal, que deve ser considerado
suspeito.
828 Captulo 31
Um aspecto importante a salientar o fato de
que, em funo das evidncias de infeco cruza-
da entre ovinos e caprinos, as medidas de contro-
le a serem implementadas em uma propriedade
ou regio devem considerar as duas espcies. No
entanto, na Austrlia e na Nova Zelndia, foi de-
monstrada somente a ocorrncia de infeco por
CAEV em caprinos, sem evidncias de infeco
por lentivrus em ovinos.
5.5 Vrus da adenomatose pulmonar
dos ovinos
A adenomatose pulmonar dos ovinos (SPA,
para sheep pulmonary adenomatosis) causada pelo
retrovrus de ovinos Jaagsiekte (JSRV), perten-
cente ao gnero Betaretrovirus. A denominao
Jaagsiekte foi atribuda na primeira descrio do
vrus, na frica do Sul, em 1825. A palavra Ja-
agziekte, de origem holandesa, foi proferida por
um fazendeiro para se referir a duas manifesta-
es observadas em ovinos afetados: jaag signi-
ca caar, e siekte signica doena. Os animais
doentes apresentavam-se como se tivessem sido
perseguidos ou caados, devido diculdade
respiratria. Outra denominao da doena
carcinoma pulmonar de ovinos (OPC, para ovine
pulmonary carcinoma), sendo considerada como
modelo para o carcinoma brnquio-alveolar de
humanos pelas semelhanas clnicas, macrosc-
picas e histopatolgicas dos dois tumores.
5.5.1 Epidemiologia
O JSRV apresenta distribuio mundial,
com exceo da Austrlia, onde a doena ainda
no foi descrita, e da Islndia, de onde a doena
foi erradicada. A doena ocorre de forma espor-
dica, podendo atingir at 25% de incidncia em
alguns rebanhos de alto risco em pases como o
Reino Unido, frica do Sul e Espanha. A doena
tambm j foi descrita no Chile, no Peru e no Bra-
sil, onde considerada enfermidade de notica-
o obrigatria.
No genoma dos ovinos, estima-se que exis-
tam entre 15 e 20 cpias do genoma de retrovrus
endgenos relacionados ao JSRV, alguns deles
apresentando transcrio ativa. No entanto, foi
demonstrado que o JSRV, produzido a partir de
um clone infeccioso, foi capaz de reproduzir a
doena.
A transmisso, embora ainda no totalmen-
te elucidada, parece ocorrer atravs de contato
direto e indireto com secrees do trato respira-
trio e tambm pela saliva. Os animais infectados
provavelmente excretem o vrus em secrees
respiratrias mesmo alguns dias antes do incio
dos sinais clnicos. As secrees podem formar
aerossis e aumentar o alcance da disseminao.
Tem sido demonstrado que os caprinos po-
dem se infectar naturalmente pelo JSRV, com
freqncia semelhante aos ovinos. O signicado
epidemiolgico e patolgico desses achados, no
entanto, so desconhecidos.
Os animais infectados apresentam uma in-
feco silenciosa, aparentemente sem a induo
de resposta imune humoral. Nveis baixos de
RNA e DNA proviral esto presentes, e podem
ser detectados pelo uso de tcnicas de deteco
de cidos nuclicos altamente sensveis, como a
nested PCR. As clulas envolvidas na dissemina-
o do vrus no organismo do hospedeiro seriam
principalmente as da linhagem linfide, como os
linfcitos B, e da linhagem mielide, como mon-
citos e macrfagos. A formao dos tumores est
relacionada com a transformao neoplsica de
clulas epiteliais do pulmo. O vrus replica ati-
vamente nas clulas epiteliais tumorais, origina-
das a partir dos pneumcitos tipo II e das clulas
clava bronquiolares. Antgenos virais podem ser
detectados nas clulas tumorais, embora o me-
canismo de transformao neoplsica pelo vrus
ainda no seja conhecido. Os tumores associados
com a infeco so classicados como adenomas
e adenocarcinomas. Recentemente, foi demons-
trada a capacidade da protena do envelope viral
em induzir a transformao em diferentes tipos
celulares, e a formao de tumores em camun-
dongos e ovinos recm-nascidos.
O perodo at a manifestao de sinais cl-
nicos pode variar de um a trs anos, sendo mais
curto em animais jovens. A sintomatologia clnica
Retroviridae 829
est relacionada com a produo de muco pelas
clulas tumorais, observando-se tosse e descar-
gas nasais abundantes. Pode ocorrer a obstruo
das vias respiratrias e morte por anoxia e pneu-
monia por infeces secundrias.
Devido ausncia de resposta humoral de-
tectvel, o diagnstico da infeco deve basear-se
principalmente nos sinais clnicos nas fases avan-
adas da doena. Nessa fase, freqentemente ob-
serva-se secreo nasal abundante, acompanha-
da de dispnia em graus variveis. Os achados
macroscpicos e histopatolgicos devem ser con-
siderados para a conrmao da suspeita clnica.
A deteco de cidos nuclicos virais nos tu-
mores por hibridizao in situ ou por PCR podem
ser tambm utilizados.
Aps a conrmao do diagnstico, o con-
trole da infeco pode ser estabelecido pelo isola-
mento dos animais doentes, reduzindo a incidn-
cia da doena no rebanho. Em alguns pases, o
descarte dos animais positivos (e erradicao dos
animais do rebanho) a medida indicada.
5.6 Vrus da anemia infecciosa eqina
A anemia infecciosa eqina (EIA) uma
doena infecciosa potencialmente fatal que afe-
ta os eqdeos. O EIAV (equine infectious anemia
virus) mais um membro do gnero Lentivirus.
Assim como os SRLV, o EIAV tambm apresenta
algumas caractersticas que o relacionam ao HIV.
Foram reaes sorolgicas cruzadas, observadas
entre o soro de eqinos infectados e a protena
do capsdeo do HIV, que levaram Montagnier e
colaboradores a relacionar o vrus que havia sido
recentemente isolado com os lentivrus. A ane-
mia infecciosa eqina foi inicialmente descrita
em 1843, na Frana, e sua etiologia viral foi deter-
minada em 1904, por Valle e Carr. A enfermi-
dade facilmente confundvel com outras infec-
es que cursem com febre, como a inuenza e as
encefalites eqinas.
5.6.1 Epidemiologia
A infeco pelo EIAV apresenta distribuio
mundial, com maior ocorrncia em reas tropi-
cais ou subtropicais pantanosas e que apresen-
tam populaes numerosas de vetores artrpo-
des moscas, tabandeos e mosquitos. Em reas
endmicas, a prevalncia pode atingir 70% dos
animais adultos. Estudos sorolgicos em vrios
estados brasileiros, como o Par, Minas Gerais,
Mato Grosso do Sul, Gois e Rio Grande do Sul,
demonstram a presena do EIAV na populao
eqina do pas. Em geral, os nveis de prevaln-
cia so moderados a altos em regies com po-
pulaes numerosas e permanentes dos insetos
vetores.
Os hospedeiros naturais so os eqdeos
e, at o presente, no foi demonstrada infeco
natural de outras espcies. A principal forma de
transmisso pela picada de insetos hematfa-
gos sobretudo tabandeos que exercem o pa-
pel de vetores mecnicos, carreando o vrus na
probscide. A transmisso mais freqente em
reas de grande infestao de insetos e com gran-
de concentrao de animais. A picada dos insetos
estimula um reexo defensivo dos animais, o que
freqentemente resulta na interrupo do repas-
to sangneo. Esses insetos procuram reiniciar o
repasto com a maior brevidade, freqentemen-
te o fazendo em animais que se encontram nas
proximidades e, com isso, transmitindo o agente.
A transmisso do EIAV por insetos depende da
populao e hbitos dos insetos, da densidade
dos animais, do nmero de picadas no animal e
em animais das proximidades, da quantidade de
sangue transferida entre animais, e do nvel de
vrus no sangue do animal infectado que serve de
fonte de infeco. Mosquitos e moscas tambm
podem transmitir a infeco entre animais.
Acredita-se que o homem tambm possa
desempenhar um papel epidemiolgico na trans-
misso do EIAV entre animais, pela utilizao de
agulhas, seringas e materiais cirrgicos no-des-
cartveis. Embora possua papel epidemiolgico
secundrio, a transmisso pela ingesto de leite
ou pela inseminao articial com o smen con-
taminado tambm pode ocorrer.
830 Captulo 31
O curso clnico da infeco varivel e est
relacionado com a susceptibilidade do hospedei-
ro, dose e virulncia da cepa do EIAV envolvida.
Nos dias que se seguem infeco, os animais
desenvolvem uma viremia inicial, que cursa com
hipertermia, anemia e trombocitopenia. Essas
manifestaes so geralmente observadas entre
uma a duas semanas aps infeco, e esto rela-
cionadas com a resposta imunolgica. A anemia
resultante de hemlise e fagocitose, mediada pela
presena de eritrcitos recobertos pelas protenas
do complemento (C3) e, concomitantemente, pela
reduo da eritropoiese. A trombocitopenia pare-
ce estar associada com um aumento dos nveis do
fator de necrose tumoral alfa (TNF-), que um
regulador negativo da produo de plaquetas no
plasma dos animais infectados. A hipertermia
deve-se aos nveis aumentados de TNF- e tam-
bm pela produo de interleucina 1 (IL-1) por
clulas da linhagem monoctica-macrofgica.
Acredita-se que a maioria dos animais infec-
tados apresente uma infeco subclnica, tornan-
do-se portadores assintomticos do agente. Esses
animais geralmente apresentam nveis mais bai-
xos de viremia do que aqueles que desenvolvem
a infeco ativa sintomtica. A forma inaparente
ou subclnica da infeco pode se transformar
em forma clnica aguda ou crnica devido a fato-
res como estresse, trabalho pesado ou a ocorrn-
cia concomitante de outras doenas.
Em cavalos infectados experimentalmen-
te, observa-se o estabelecimento de uma infec-
o persistente, geralmente acompanhada por
episdios de viremia, febre e anemia. Alm das
manifestaes supracitadas, os animais podem
apresentar glomerulonefrite, linfoadenopatia e
inltrao de macrfagos e linfcitos no fgado
e em outros rgos. A exemplo dos outros retro-
vrus, a infeco pelo EIAV persistente, ou seja,
os animais infectados tornam-se portadores do
agente por toda a vida. A diferena entre a in-
feco pelo EIAV daquelas causadas por outros
lentivrus o fato de o EIAV desencadear picos
de viremia, que no so observados em infeces
pelo CAEV, MVV ou FIV.
Aps a viremia primria, diferentes qua-
dros podem se desenvolver nos animais infec-
tados pelo EIAV: a) anemia profunda e morte
(forma aguda); b) recuperao e recidivas coin-
cidentes com novas viremias (forma crnica) ou,
ainda, c) o animal pode tornar-se um portador,
mas sem recidivas ou manifestaes clnicas apa-
rentes (forma inaparente). As recidivas e novas
viremias esto associadas com o surgimento de
variantes virais e, medida que o sistema imu-
ne reage infeco pela produo de anticorpos
e pela resposta celular, ocorre reduo da carga
viral no sangue, correspondendo aos perodos
assintomticos.
Na forma crnica, os episdios de febre po-
dem ocorrer a intervalos variveis, entre os quais
a temperatura volta a valores normais. Quadros
recorrentes de depresso e letargia, petquias nas
mucosas, emagrecimento progressivo, edema nas
partes baixas e anemia esto freqentemente as-
sociados com a infeco crnica.
A resposta mediada por linfcitos T citot-
xicos especcos para epitopos das protenas do
capsdeo e das glicoprotenas do envelope viral
seria a principal responsvel pela manuteno
do estado assintomtico em animais portadores.
O perodo entre uma recidiva e outra varivel,
podendo ser inferior a 30 dias.
A replicao contnua do vrus nas clulas-
alvo os moncitos/macrfagos responsvel
pela carga viral presente na corrente sangnea.
Embora ocorra uma reduo de at 700 vezes nos
ttulos virais no sangue de animais assintomti-
cos quando comparados com animais virmicos,
estima-se que a replicao viral continue nesses
perodos, nos macrfagos de diferentes rgos,
como o fgado, linfonodos e bao.
As manifestaes clnicas de hipertermia,
anemia, depresso e letargia recorrentes, em re-
as endmicas para o agente so sugestivas da in-
feco pelo EIAV e devem ser investigadas. A de-
teco de anticorpos o mtodo laboratorial mais
empregado para o diagnstico da anemia infec-
ciosa eqina. O teste sorolgico mais utilizado e
considerado o teste-padro a IDGA, tambm
Retroviridae 831
conhecido como teste de Coggins. Esse o teste
recomendado pelo Ministrio da Agricultura de
vrios pases. A suspeita clnica tambm pode ser
conrmada por outros testes laboratoriais, como
xao do complemento, inibio da hemagluti-
nao (HI), IFA e ELISA.
O teste de IDGA se constitui em um teste
simples, com boa especicidade (baixa sensibi-
lidade), que pode ser utilizado para a conrma-
o da suspeita clnica, mas que possui aplicao
mais importante no monitoramento de rebanhos
e da condio sanitria de animais submetidos
a transporte, comrcio, importao/exportao.
No Brasil, laboratrios e tcnicos interessados em
realizar o teste devem ser cadastrados no Minis-
trio da Agricultura e ser submetidos a treina-
mento especco. Somente tcnicos e laboratrios
cadastrados so legalmente licenciados para a re-
alizao do teste e emisso do laudo.
O EIAV replica em macrfagos dos eqinos
infectados, mas o isolamento viral no uma tc-
nica empregada na rotina diagnstica, embora
existam cepas laboratoriais adaptadas em cultivo
de broblastos. O vrus no induz efeito citop-
tico, e a conrmao da infeco pode ser feita
por IFA ou pela deteco de RNA viral ou DNA
proviral por RT-PCR ou PCR, respectivamente.
No existem vacinas comerciais disponveis
contra o EIAV. O controle da infeco baseia-se
na identicao e restrio ao trnsito e comr-
cio de animais positivos. Animais destinados a
comrcio, trnsito, participao em competies,
feiras e exposies devem ser necessariamente
testados e apresentar resultado negativo no teste
de IDGA. No Brasil, os animais positivos nesse
teste devem ser sacricados, conforme estabeleci-
do no Programa Nacional de Sanidade dos Eqi-
nos do Ministrio da Agricultura.
Outras medidas de controle recomendadas
so: a) isolamento dos animais positivos at o
sacrifcio; b) no compartilhar seringas e outros
utenslios que possam ser veculo de clulas in-
fectadas; c) combate a insetos vetores em reas
endmicas (invivel em grandes reas ou em
reas de grande infestao, mas vivel em insta-
laes); d) minimizar o contato de eqinos com
secrees, sangue ou outros eqinos de status
sanitrio desconhecido, at que sejam testados e
certicados livres do vrus.
5.7 Vrus da leucemia felina
O vrus da leucemia felina (FeLV) pertence
ao gnero Gamaretrovirus, cujo prottipo o v-
rus da leucemia murina (MLV). Dentre os gama-
retrovrus de mamferos, o FeLV se enquadra na
categoria dos vrus autnomos para a replicao,
enquanto os outros vrus do gnero so defecti-
vos.
Embora ainda no tenham sido descritos
sorotipos, os isolados do FeLV possuem varian-
tes ou subgrupos (FeLV-A, FeLV-B, FeLV-C e
FeLV-T), devido variabilidade das seqncias
de aminocidos das glicoprotenas do envelope.
As variaes de seqncias detectadas na prote-
na SU seriam responsveis pela utilizao de di-
ferentes receptores celulares, o que resultaria em
diferenas de tropismo e patogenia entre isolados
de campo.
5.7.1 Epidemiologia
A infeco pelo FeLV possui distribuio
mundial, e a sua prevalncia notadamente
maior em locais de grande densidade de felinos,
como os gatis e abrigos. Nesses locais, o contato
freqente e prximo entre os animais facilita a
transmisso e pode resultar em prevalncias de
at 33%. A prevalncia geralmente mais baixa,
podendo atingir nveis aproximados de 1%, na
populao geral de gatos domsticos, em que o
contato entre animais apenas casual. No Brasil,
a ocorrncia da infeco tem sido demonstrada
em felinos domsticos e selvagens em vrios es-
tudos. No zoolgico da Universidade Federal de
Mato Grosso (UFMT), 12 de 16 felinos selvagens
possuam antgenos do FeLV e, no Cear, 83%
dos gatos de rua testados foram positivos. Um
estudo em So Paulo revelou uma prevalncia
baixa (<5%).
Acredita-se que a transmisso ocorra princi-
palmente por contato direto e indireto, atravs da
saliva, sendo favorecida durante as brigas. Isso
pode explicar o porqu de gatos castrados apre-
sentarem incidncia menor da infeco. Os gatos
com infeco persistente podem excretar at 10
6

vrions por mL de saliva, o que constitui a princi-
pal fonte de vrus para a transmisso por contato
832 Captulo 31
direto ou por fmites. A utilizao de seringas e
outros equipamentos contaminados com sangue
tambm podem transmitir o agente. J foi des-
crita a transmisso vertical, inclusive de fmeas
apresentando a infeco latente.
A forma mais comum de apresentao cl-
nica por animais infectados pelo FeLV a imu-
nodecincia, causada principalmente por va-
riantes do subgrupo A. Os vrus desse subgrupo
so igualmente os mais descritos na transmisso
natural, na qual se classica o isolado FeLV-FAI-
DS. Alm do quadro de imunodecincia, outras
manifestaes esto associadas infeco pelo
FeLV: linfomas, leucemia, anemia e falhas repro-
dutivas.
Os sinais clnicos mais comuns so os obser-
vados em casos de imunodecincia e devem-se
a infeces oportunistas e repetidas: estomatite
e gengivite crnicas, leses de pele e abscessos
subcutneos, doenas respiratrias crnicas e
maior incidncia de peritonite infecciosa felina. A
ocorrncia de toxoplasmose tambm favorecida
pela infeco pelo FeLV.
A imunodecincia est relacionada com a
presena do antgeno viral oncovrus felino as-
sociado membrana (feline oncovirus membrane-
associated antigens, FOCMA) e ocorre por causa
da depleo das clulas linfides infectadas, pro-
vavelmente pela ao citotxica mediada por an-
ticorpos (ADCC). A leucemia e anemia so indu-
zidas a partir da transformao de clulas-tronco,
das linhagens mielides e linfides, que do ori-
gem aos linfcitos e eritrcitos. Os variantes do
subgrupo C, aparentemente gerados a partir de
mutaes de vrus do subgrupo A, parecem es-
tar associados com os casos de anemia induzidos
pelo FeLV.
Os linfossarcomas representam 30% dos
tumores em felinos, e evidncias indicam que a
maioria deles est associada ao FeLV. Esses tu-
mores podem se desenvolver em diferentes clu-
las e tecidos, como o timo, trato gastrintestinal,
sistema nervoso, pele e outros.
O contato com o FeLV, na maioria dos gatos,
leva a uma infeco aguda temporria que pode
progredir para a recuperao clnica completa
ou infeco latente. Em outras situaes, pode
ocorrer uma viremia persistente, que resulta no
desenvolvimento da doena, nas suas diversas
manifestaes fatais. Os fatores que conferem re-
sistncia ou susceptibilidade no so totalmente
conhecidos, embora tenha sido descrito que ani-
mais jovens sejam mais susceptveis do que ani-
mais adultos. A exemplo dos outros retrovrus, a
infeco pelo FeLV essencialmente persistente.
Recentemente, analisando animais vacina-
dos e no-vacinados desaados experimental-
mente, pesquisadores propuseram quatro cate-
gorias para denir as relaes do FeLV com o
hospedeiro: a) abortiva, em que no foi detectado
DNA proviral, nem antgeno viral; b) regressiva,
quando no detectado antgeno viral e a carga
proviral transitria ou baixa; c) latente, antige-
nemia transitria e carga proviral moderada e d)
progressiva, antigenemia e carga proviral eleva-
das e persistentes. As diferentes categorias obser-
vadas experimentalmente sugerem que alguns
animais, naturalmente infectados, poderiam eli-
minar o vrus e no apresentariam nenhuma sin-
tomatologia clnica. Por outro lado, animais com
infeco latente poderiam no ser detectados
atravs da antigenemia e seriam provveis fontes
de transmisso.
A deteco de anticorpos neutralizantes tem
sido associada com a recuperao dos animais
infectados. No entanto, o surgimento de anticor-
pos posterior erradicao do vrus em animais
que desenvolvem uma infeco transitria, o que
indicaria a existncia de uma resposta imune do
tipo celular.
O isolamento do vrus no muito utilizado
como mtodo diagnstico, embora antgenos vi-
rais possam ser detectados em clulas do sangue
perifrico. Conseqentemente, a tcnica mais uti-
lizada no diagnstico a IFA, em esfregaos san-
gneos, utilizando anticorpos especcos para as
protenas do capsdeo. Existem kits de ELISA e
Retroviridae 833
testes imunocromatogrcos disponveis para a
deteco de antgenos virais. Esses kits podem ser
utilizados em clnicas e consultrios e permitem
a obteno do resultado em poucos minutos, po-
rm possuem um custo relativamente alto.
Considerando os animais em que a presena
do antgeno viral no seja detectada, tcnicas mo-
leculares de deteco do genoma viral e proviral
(RT-PCR e PCR, respectivamente) podem ser ne-
cessrias. Na Sua, um estudo demonstrou que
10% dos gatos eram portadores, detectados atra-
vs da presena do provrus, embora no tenha
sido possvel detectar o antgeno viral. Recente-
mente foi descrita a utilizao de RT-PCR e PCR
para deteco de RNA viral e DNA proviral, res-
pectivamente, na saliva de animais infectados.
O controle da infeco pode ser realizado
a partir do diagnstico correto e envolve neces-
sariamente o isolamento dos animais positivos,
evitando que transmitam o agente a outros ani-
mais. Vacinas preparadas com o vrus completo
inativado obtido a partir de cultivos celulares so
disponveis comercialmente, assim como vacinas
recombinantes contendo protenas virais expres-
sas em sistemas heterlogos. O uso das vacinas
inativadas pode resultar em uma reduo de 70%
de incidncia da doena nos animais imunizados.
Alguns estudos indicam a necessidade de indu-
o de uma resposta mediada por linfcitos Tc,
como a induzida por vacinas de DNA, para a ob-
teno de uma imunidade realmente protetora.
A vacina para o FeLV foi a primeira a ser
desenvolvida e utilizada na preveno de uma
doena causada por retrovrus em mamferos. O
fato de que algumas delas sejam capazes de pro-
teger completamente o animal vacinado (infec-
o abortiva), sugere que alguns animais possam
erradicar totalmente o vrus quando infectados
naturalmente.
5.8 Vrus da imunodecincia felina
O primeiro isolamento de imunodecincia
felina (FIV) foi descrito em 1986, na cidade de
Petaluma, Estados Unidos. A presena do vrus
estava associada com um quadro de imunode-
cincia, e as caractersticas ultra-estruturais das
partculas vricas, assim como a deteco da ati-
vidade de transcriptase reversa, permitiram a sua
classicao como um retrovrus pertencente ao
gnero Lentivirus. Os isolados de campo do FIV
so agrupados em cinco genotipos (A, B, C, D e E),
com base em similaridade gentica. Os genotipos
A e C so mais freqentes na Amrica do Norte,
embora atualmente os gentipos A e B sejam os
mais detectados em todo o mundo. Filogenetica-
mente o FIV mais prximo dos lentivrus EIAV,
CAEV e MVV do que dos lentivrus de primatas,
como o HIV. Apesar disso, esse vrus conside-
rado um modelo animal adequado para estudos
de patogenia, pesquisa de drogas anti-retrovirais
e desenvolvimento de vacinas para o HIV. Isso se
deve principalmente s caractersticas semelhan-
tes dos quadros de imunossupresso observados
em gatos (FIV) e humanos (HIV).
5.8.1 Epidemiologia
O FIV apresenta uma distribuio mundial e
j foi isolado tambm de felinos selvagens, alm
de j terem sido descritos vrios isolados de ga-
tos domsticos. A soroprevalncia na populao
geral pode variar de 1 a 30%, com ndices mais
elevados entre animais que apresentam sinais de
doena. Em nveis mundiais, estima-se uma pre-
valncia de aproximadamente 12% nos felinos
domsticos. O FIV tem sido descrito em felinos
no Brasil. No Rio de Janeiro, 21% dos felinos tes-
tados eram positivos para o vrus. No Rio Grande
do Sul, Minas Gerais e So Paulo, estudos epide-
miolgicos tm conrmado a presena da infec-
o em felinos com imunodecincia ou sem si-
nais clnicos.
A infeco ocorre com maior freqncia em
gatos com mais de um ano de idade. A princi-
pal forma de transmisso parece ser pelo contato
direto, atravs da saliva, pelas mordidas durante
as brigas entre animais. Os machos se infectam
com o dobro da freqncia das fmeas, pelo seu
comportamento social e agressivo distinto. O v-
rus tambm pode ser transmitido pelo smen du-
rante a cpula e pelo leite de fmeas infectadas
(infeco pela via oral).
834 Captulo 31
A imunossupresso observada nos animais
infectados pelo FIV o resultado da depleo
dos linfcitos T auxiliares (CD4
+
), que leva a uma
inverso da relao CD4
+
/CD8
+
. O comprome-
timento do sistema imunolgico resulta no de-
senvolvimento de infeces oportunistas, que
caracterizam os estgios nais da doena (Tabela
31.3).
A disseminao do vrus no organismo do
hospedeiro ocorre principalmente pelos linfcitos
infectados e, em menor escala, pelos moncitos e
macrfagos. Estes ltimos estariam relacionados
com a persistncia do vrus nos estgios nais da
doena.
O vrus pode ser detectado em rgos linfi-
des, nos pulmes, fgado, rins e no plexo coride.
Os achados histopatolgicos associados com a
enfermidade consistem de hiperplasias no tecido
linfide associados s mucosas (MALT), nos lin-
fonodos, tonsilas, timo e medula ssea.
A presena de anticorpos contra o FIV pode
ser evidenciada por testes sorolgicos em duas a
quatro semanas aps a infeco. Os machos adul-
tos tm sido apontados como a categoria animal
de maior incidncia da infeco, provavelmente
devido aos fatores de risco para a transmisso do
agente (agressividade, brigas, contato com vrios
animais).
5.8.3 Diagnstico
A sintomatologia clnica observada em ga-
tos infectados pelo FIV inespecca e reete um
quadro geral de imunossupresso, semelhante
ao observado na leucemia pelo FeLV. Quadros
sugestivos de imunossupresso devem ser inves-
tigados para a presena de anticorpos, antgenos
ou cidos nuclicos virais.
Para a deteco de anticorpos, os testes mais
utilizados so o ELISA, IFA e o Western blot.
Animais com testes negativos devem ser testados
novamente aps 60 dias, para a conrmao do
resultado. Existem kits baseados em cromatogra-
a para o diagnstico da infeco em nvel am-
bulatorial, pela deteco de antgenos virais no
sangue total. A deteco do provrus em clulas
sangneas por PCR tambm pode ser realiza-
da, utilizando-se o DNA extrado dos leuccitos.
Essa tcnica tem se difundido nos ltimos anos e
se constitui em uma importante ferramenta para
a identicao de animais infectados. Porm, a
Infeco aguda
Forma Manifestaes clnicas
Nenhuma ou inespecfica (febre,
linfoadenopatia, diarria,
infeces respiratrias)
Durao
Semanas ou meses
Portador subclnico Nenhuma Anos
Linfoadenopatia
generalizada
Aumento generalizado dos linfonodos, sinais
inespecficos (febre, anorexia, perda de
peso), alteraes comportamentais
Anos
ARC (
)
AIDS related
complex
Linfoadenopatia, infeces crnicas
secundrias (na cavidade oral e trato
respiratrio superior)
Meses a anos
FAIDS (AIDS felina)
Infeces crnicas oportunistas e
secundrias severas, tumores e emaciao
Meses
Tabela31.3. Manifestaes clnicas e estgios dainfecopeloFIV.
a
Fonte: adaptado de Ishida e Tomoda (1990).
Retroviridae 835
utilizao da tcnica de PCR para o diagnstico
da infeco pelo FIV tem sido questionada, pela
falha na deteco de vrus com variaes gen-
micas.
Aps a identicao dos animais positivos,
o controle pode ser realizado pela sua separao
dos demais animais, reduzindo a possibilidade
de transmisso. Animais que tem acesso s ruas,
e que, portanto, entram em contato com outros
animais, apresentam uma probabilidade maior
de serem infectados. A limitao do acesso de
gatos domsticos s ruas pode reduzir o risco
de adquirirem a infeco, mas isto nem sempre
exeqvel.
Diversas vacinas experimentais tm sido de-
senvolvidas e avaliadas, incluindo vacinas com
vrus inativado, protenas recombinantes e vaci-
nas de DNA. De uma maneira geral, a diversida-
de gentica e antignica dos isolados de campo
tem dicultado o sucesso e a utilizao das vaci-
nas em larga escala. Vacinas inativadas tm de-
monstrado maior ecincia em triagens vacinais.
Uma vacina que contm dois gentipos do FIV e
protege contra um terceiro gentipo foi licencia-
da nos EUA e atualmente comercializada. No
entanto, a sua eccia em limitar a transmisso
natural do vrus na populao felina necessita de
comprovao.
Alguns estudos tm demonstrado resulta-
dos promissores com a utilizao de interferon
recombinante para o tratamento da infeco, au-
mentando a sobrevida dos animais tratados. O
tratamento de felinos infectados com o FIV e FeLV
por cinco dias, com rFeIFNw (interferon omega
recombinante felino), pela via subcutnea, au-
mentou duas vezes as chances de sobrevivncia.
Clnicos tm utilizado interferon- humano para
o tratamento de vrias doenas virais felinas, re-
latando alguns sucessos na terapia. No entanto,
ainda so necessrios estudos para a comprova-
o da eccia do interferon em espcie heterlo-
ga. Drogas que estimulam o sistema imune, como
a Immunoregulin, tambm so utilizadas. Essa
droga contm a Propionibacterium acnes, que ativa
macrfagos e estimula a produo de linfocinas
e a resposta imune celular, aumentando a ativi-
dade das clulas NK. O AZT (Retrovir), usado
no tratamento da AIDS em humanos, tambm
utilizado em gatos com sinais clnicos de FIV.
5.9 Vrus da leucose aviria
Descrito, pela primeira vez, em 1908, o v-
rus da leucose aviria (ALV) um Alpharetrovirus
causador de displasias e neoplasias do sistema
hematopoitico em aves. O termo refere-se s
manifestaes clnicas do vrus, como a leucemia,
caracterizada pela presena de linfcitos B imatu-
ros na corrente sangnea, e a invaso de rgos
perifricos como o bao, fgado, rins e sistema
nervoso por essas clulas.
Aspectos relacionados ao espectro de hos-
pedeiros susceptveis (presena de receptores),
neutralizao viral por anti-soro especco e in-
terferncia viral foram utilizados para classicar
o vrus da leucose aviria em vrios subgrupos.
Os ALV so divididos em grupos endgenos
presentes no genoma das galinhas (subgrupo E)
e grupos exgenos (subgrupos A, B, C, D e J). A
maioria dos surtos de leucose aviria tem sido
atribuda aos subgrupos A, B e J. O subgrupo J
tem sido identicado como o principal agente
causal de tumores em frangos de corte e tam-
bm o grupo de vrus que atinge o maior nmero
de linhagens de galinhas, uma vez que j foram
descritas vrias linhagens resistentes a um ou
mais dos outros subgrupos.
5.9.1 Epidemiologia
O ALV est presente de forma endmica em
praticamente todos os pases que possuem avi-
cultura comercial. A incidncia da infeco pode
variar de 3 a 20%, com a ocorrncia de surtos
espordicos. O subgrupo J j foi descrito como
ocasionando perdas de at 30% em matrizes de
corte.
A transmisso ocorre de duas formas prin-
cipais: vertical e horizontal. A transmisso verti-
cal pode ocorrer pela transferncia congnita do
vrus infeccioso e por transmisso gentica, com
836 Captulo 31
a integrao do provrus DNA nos cromossomos
dos gametas. Essas duas formas de transmisso
vertical esto associadas com quadros clnicos di-
ferentes. A primeira forma resulta no desenvol-
vimento de viremia e leucemia, enquanto a pre-
sena do provrus no gameta no induz viremia,
e a infeco geralmente latente. A transmisso
horizontal pelo contato direto ou indireto com sa-
liva contaminada pode desempenhar um papel
importante na disseminao da infeco devido
alta densidade populacional em granjas indus-
triais.
A forma mais comum de apresentao de
doena pelos animais infectados com ALV a
leucose, que acomete aves de 14 a 30 semanas de
idade, sem o desenvolvimento de sinais clnicos
especcos. As aves apresentam fraqueza, redu-
o na ingesto de alimentos e pode haver a for-
mao de tumores na bursa de Fabricius, bao,
fgado e outros rgos.
A infeco inicia-se na bursa de Fabricius,
com a formao de folculos, aproximadamente
um ms aps a infeco, caracterizados por ac-
mulo de linfoblastos (pr-B). A maioria dos fo-
lculos regride, mas alguns podero dar origem
a ndulos neoplsicos que, em seis a oito meses,
sero responsveis por metstases no fgado e no
bao. A transformao celular decorrente da in-
tegrao do provrus prximo a um proto-onco-
gene celular (c-myc).
Outras manifestaes clnicas tambm asso-
ciadas com a infeco pelo ALV so: osteopetrose,
que atinge principalmente os membros inferio-
res, e anemia. Os sinais clnicos e leses podem
aparecer associados com a leucemia e tumores.
O diagnstico de leucose aviria geral-
mente realizado por ocasio da necropsia, asso-
ciando-se os achados tumorais com o histrico e
sinais clnicos. No diagnstico diferencial, deve-
se considerar a doena de Marek.
Como testes laboratoriais a serem utilizados
para o diagnstico denitivo, podem ser citados:
a) o isolamento viral em ovos embrionados ou
em cultivos celulares, b) teste de xao do com-
plemento para deteco da protena do capsdeo
em cultivo celular inoculado (teste de COFAL),
c) ELISA, d) IFA e e) PCR para deteco do pro-
vrus, com capacidade de diferenciao entre os
subtipos.
O controle baseia-se em medidas prolticas
para evitar a transmisso horizontal onde h alta
densidade populacional (sistema all-in-all-out) e
na escolha de linhagens resistentes, o que levou
a uma diminuio signicativa de infeco por
ALV em granjas comerciais. Apesar da seleo
de linhagens resistentes, o surgimento de mutan-
tes e/ou recombinantes capazes de infectar essas
linhagens tem sido descrito.
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OUTRAS FAMLIAS VIRAIS
Fernanda Silveira Flores Vogel
1
& Eduardo Furtado Flores
1
Luiz Carlos Kreutz elaborou a seo 7.4.2 (Vrus da pancreatite necrosante dos salmes, INPV).
32
841
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1 Introduo
2 Polyomaviridae
2.1 Classicao
2.3 Ciclo replicativo
2.4 Biologia e patogenia
3 Hepadnaviridae
3.1 Classicao
4 Arenaviridae
4.1 Classicao
5 Astroviridae
5.1 Classicao
6 Filoviridae
6.1 Classicao
7 Birnaviridae
7.1 Classicao
7.4 Birnavrus de importncia veterinria
7.4.1 Vrus da doena de Gumboro
7.4.2 Vrus da pancreatite necrtica infecciosa
8 Bornaviridae
8.1 Classicao
8.5 Doena de Borna
851
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858
859
1 Introduo
Algumas famlias abrigam vrus que pos-
suem importncia limitada, como patgenos de
animais de companhia ou de criao, apresen-
tando menor relevncia em medicina veterin-
ria. Este captulo abordar, de forma sucinta, os
principais aspectos das famlias de vrus cujos
membros possuem importncia clnica limitada
em animais de interesse veterinrio. Dentre os
membros dessas famlias, alguns possuem im-
portncia como patgenos humanos; outros so
patgenos de animais de laboratrio, de inverte-
brados ou produzem doenas apenas em animais
silvestres; um terceiro grupo abrange vrus que,
aparentemente, no esto envolvidos com doen-
a em vertebrados e a sua importncia limita-se
a aspectos peculiares de sua estrutura, biologia
e ecologia.
Deve-se ressaltar que os critrios utilizados
nesta classicao so relativos, e que as linhas
que delimitam os grupos de vrus de acordo com
a sua importncia clnica so tnues, podendo ser
circunstanciais e temporrias. Certos agentes po-
dem ser considerados pouco importantes dentro
de um contexto, mas so muito importantes em
outras situaes. Da mesma forma, vrus histori-
camente considerados pouco importantes podem
adquirir importncia clnica devido a alteraes
genticas ou ecolgico-ambientais que inuen-
ciam as suas interaes com os hospedeiros, po-
dendo resultar na ocorrncia de doenas huma-
nas e animais. Um exemplo recente a adaptao
do vrus da inuenza a ces, espcie at ento
considerada refratria infeco.
Ao nal deste captulo, ser apresentada a
famlia Birnaviridae, uma pequena famlia, que
abriga pelo menos dois vrus importantes em
animais: o INPV (vrus da pancreatite necrtica
infecciosa), que infecta peixes e possui impor-
tncia em criatrios de salmes, e o IBDV (vrus
da doena de Gumboro ou doena da bursa de
Fabricius), que infecta galinhas e possui grande
importncia na avicultura comercial em vrios
pases. Outro vrus que possui importncia rela-
tiva em alguns pases o vrus da doena de Bor-
na (BDV), pertencente a famlia Bornaviridae, que
infecta principalmente, mas no exclusivamente,
eqinos.
2 Polyomaviridae
A famlia Polyomaviridae era classicada an-
teriormente como uma subfamlia da Papovaviri-
dae, cuja denominao se devia aos vrus prot-
tipos de cada subfamlia: Pa (papilomavrus de
coelhos); po (poliomavrus de camundongos);
va (agente vacuolizante, vrus smio 40, SV-40).
Atualmente, os poliomavrus e o prottipo SV-
40 so classicados separadamente, na famlia
Polyomaviridae. O interesse maior nesses vrus se
iniciou com a descoberta de que o SV-40 e outros
poliomavrus eram capazes de produzir tumores
em hamsters (por isto foram denominados peque-
nos vrus DNA tumorais). O SV-40 foi descoberto
acidentalmente como contaminante de linhagens
celulares de macacos rhesus utilizadas para a
produo de vacinas contra a poliomielite. Como
conseqncia, aproximadamente 50 milhes de
doses de vacinas produzidas contra a poliomie-
lite e utilizadas na dcada de 1950 estavam con-
taminadas com o SV-40. Posteriormente, consta-
tou-se que o SV-40 era capaz de produzir tumores
em hamsters, aumentando a preocupao sobre
uma possvel atividade tumorignica tambm
em humanos. Embora estudos extensivos reali-
zados durante dcadas no tenham sido capazes
de demonstrar associao entre o SV-40 e tumo-
res humanos, estudos recentes demonstraram a
presena de seqncias de DNA e antgenos do
SV-40 em certos tumores raros em humanos, re-
novando o interesse por este vrus.
O interesse inicial pelos poliomavrus de-
veu-se ao seu potencial oncognico. No entanto,
estes vrus foram mais estudados como mode-
los para a Virologia e Biologia Molecular do que
como patgenos humanos ou animais. Importan-
tes conhecimentos na Biologia Molecular, como a
estrutura do DNA superenrolado, origens e ini-
ciao da replicao do DNA, estrutura e funo
de promotores e enhancers, splicing alternativo e
regulao da expresso gnica, entre outros, fo-
ram obtidos a partir de estudos realizados com
esses vrus.

842 Captulo 32
2.1 Classicao
Os vrus da famlia Polyomaviridae infectam
animais e humanos, e todos pertencem ao gnero
Polyomavirus. Entre estes vrus esto: polioma-
vrus de camundongos (PyV), vrus K (camun-
dongos), vrus smio 40 (SV-40) (macaco rhesus),
agente smio 12 (SA-12) (babunos), poliomav-
rus linfotrpico (LPyV) (macaco-verde-africano),
poliomavrus bovino (BPyV), vrus vacuolizante
renal de coelhos (RKV), poliomavrus de hamsters
(HaPV), poliomavrus de ratos atmicos (ARPyV),
vrus da doena de Budgerigar edgling (BFDV)
(psitacdeos), poliomavrus JC (JCV) (humanos),
vrus BK (BKPyV) (humanos), poliomavrus B
linfotrpico, o vrus pneumotrpico de murinos
(MPtV), o Kilham poliomavrus (KPyV) e o vrus
do rim de fetos do macaco rhesus.

As principais propriedades biolgicas e
moleculares dos poliomavrus esto apresenta-
das no Quadro 32.1. Os poliomavrus so vrus
que geralmente produzem infeces subclnicas
persistentes em seus hospedeiros naturais. Al-
guns deles esto associados com a produo de
tumores em espcies heterlogas, pricipalmente
hamsters.
Os detalhes da replicao dos poliomav-
rus esto apresentados com detalhes no captulo
referente replicao dos vrus DNA. Do pon-
to de vista biolgico, importante ressaltar que
a replicao desses vrus em clulas de espcie
homloga ou heterloga pode ter conseqncias
diferentes. A infeco de clulas permissivas (es-
pcie homloga) resulta na ocorrncia de todas
as etapas do ciclo e na conseqente produo de
prognie viral infecciosa. Por outro lado, a infec-
o de clulas semi-permissivas (geralmente de
espcies heterlogas) resulta em replicao abor-
tiva, na qual ocorre apenas a expresso dos genes
iniciais, sem a replicao do genoma ou produo
das protenas estruturais (tardias). A persistncia
do genoma viral nessas clulas, associada com a
expresso contnua dos antgenos T, pode levar
imortalizao e transformao celular.
Em geral, os poliomavrus humanos e ani-
mais esto mais freqentemente associados com
infeces subclnicas e apenas esporadicamente
produzem sinais clnicos ou tumores em hospe-
deiros heterlogos. Portanto, possuem impor-
tncia limitada em medicina veterinria. Alguns,
P
o
l
y
o
m
a
v
i
r
i
d
a
e
Vrions pequenos (45 mm), icosadricos, sem envelope;
Genoma: DNA circular, fita dupla, 5 kb;
Genoma conjugado com histonas formando um minicromossomo;
Existem poliomavrus de vrios mamferos de humanos e aves;
Alguns vrus produzem tumores em recm-nascidos;
Espectro restrito de hospedeiros;
No replicam produtivamente em outra espcie;
Causam infeces inaparentes na maioria dos hospedeiros naturais;
Infeco de clulas heterlogas pode resultar em transformao;
Chamados de "pequenos vrus DNA tumorais".
hamsters
Quadro 32.1. Propriedades biolgicas e moleculares da famlia . direita: fotografia de microscopia
eletrnica devrions doSV-40.
Polyomaviridae
Outras famlias virais 843
no entanto, podem estar associados com doena
severa, como o BFDV. A Tabela 32.1 apresenta os
principais poliomavrus animais, os seus hospe-
deiros e os aspectos mais importantes da infec-
o.
Dois poliomavrus humanos j foram iden-
ticados at o presente: os vrus JC e BK. Esses
vrus infectam grande parte das pessoas durante
a infncia ou adolescncia, produzindo infeces
subclnicas ou com sinais clnicos discretos, e
permanecem latentes ou persistentes no epitlio
renal de algumas pessoas. Acredita-se que cerca
de 80% da populao mundial apresente anticor-
pos contra esses vrus. A associao desses agen-
tes com enfermidade incerta, embora o BKV j
tenha sido isolado de pacientes transplantados
imunodeprimidos e o JCV j tenha sido identi-
cado no crebro de pacientes com leucoence-
falopatia multifocal progressiva (PML). J foi
demonstrado que o JCV capaz de estabelecer
infeco latente em linfcitos, no trato urogeni-
tal e no crebro de pessoas infectadas. Em indiv-
duos imunodeprimidos, o vrus pode reativar e
produzir infeco clnica. Nestes indivduos, o
JCV pode determinar a PML, que uma enfermi-
dade degenerativa que afeta as clulas oligoden-
drticas. As pessoas doentes apresentam perda de
memria, confuso mental, desorientao, ataxia,
hemiparesia, incoordenao e anormalidades vi-
suais. A morte pode ocorrer entre trs e seis me-
ses aps o incio dos sintomas. Alm disso, o JCV
j foi encontrado associado com nefropatias em
pacientes recm-transplantados. Quanto ao BKV,
no h evidncias de que este vrus determine
infeco clnica em pessoas imunocompetentes.
Em pacientes que receberam transplante renal, o
BKV tambm incriminado como uma das cau-
sas de insucesso do transplante.
Vrus
Poliomavrus de camundongos
(PyV)
Hospedeiro Caractersticas principais
Vrus K (PyK)
Camundongos
Infeco natural de camundongos,
replica nos endotlios pulmonares
Infeco natural em camundongos
silvestres; infeco de
camundongos de laboratrios e
colnias; causa infeco renal
persistente
Vrus smio 40 (SV-40) Macacos rhesus
Infeco renal persistente em
macacos silvestres na sia
Agente smio 12 (SA-12) Baboons Infeco natural em baboons na frica
Poliomavrus linfotrpico (LPV) Macaco-verde-africano Infecta linfoblastos da linhagem B
Poliomavrus bovino (BPyV) Bovinos
Comum em bovinos;
persiste nos rins
Vrus vacuolizante renal de
coelhos (RKV)
Coelhos
Infeco natural em coelhos-
cauda-de-algodo
Poliomavrus de
(HaPV) hamsters
Hamsters
Associado com tumores
cutneos
Camundongos
Poliomavrus de ratos atmicos (ARPyV) Ratos atmicos Infecta a glndula partida
Vrus da doena de
(BFDV) Budgerigar fledgling
Psitacdeos Doena aguda e fatal em psitacdeos
Tabela32.1. Principais poliomavrus animais, hospedeiros e principais aspectos dainfeco
844 Captulo 32
3 Hepadnaviridae
A famlia Hepadnaviridae composta por v-
rus DNA pequenos, que apresentam um tropis-
mo marcante por clulas hepticas. Essa famlia
abriga um importante patgeno de humanos, o
vrus da hepatite B (HBV), que o seu prottipo.
Por isso, os hepadnavrus so genericamente de-
nominados vrus das hepatites B. O HBV con-
siderado um dos principais patgenos de huma-
nos e, em todo mundo, acredita-se que cerca de
300 milhes de pessoas estejam cronicamente in-
fectadas. Entre as conseqncias da infeco pelo
HBV, esto a hepatite aguda ou crnica, infeco
subclnica persistente, cirrose e o carcinoma he-
patocelular (HCC).
Esta famlia tambm abriga alguns vrus
de animais, como os hepadnavrus de esquilos
(ground squirrel hepatitis virus, GSHV), marmo-
tas (woodchuck hepatitis virus, WHV) e patos (duck
hepatitis B virus, DHBV). Recentemente, outros
hepadnavrus foram identicados em garas,
gansos, marsupiais e orangotangos. Os hepad-
navrus possuem tropismo marcante por clulas
hepticas, e as manifestaes clnicas da infeco
so predominantemente hepticas embora no
exclusivamente.

3.1 Classicao
Os vrus da famlia Hepadnaviridae so clas-
sicados em dois gneros, de acordo com os seus
hospedeiros naturais, a sua estrutura e organi-
zao genmica. Os Orthohepadnavirus infectam
mamferos (marmotas e esquilos) e os Avihepad-
navirus infectam aves (patos, gansos, garas e ou-
tras espcies), produzindo hepatite do tipo B em
seus hospedeiros.

As principais propriedades biolgicas e mo-
leculares dos hepadnavrus esto apresentadas
no Quadro 32.2. Dentre as propriedades biol-
gicas mais marcantes, destacam-se o hepatotro-
pismo e a capacidade de produzirem infeces
hepticas persistentes, muitas vezes, seguidas de
desenvolvimento de cirrose heptica e de carci-
noma hepatocelular.
O ciclo replicativo dos hepadnavrus nico
entre os vrus animais e inclui uma etapa de trans-
crio reversa distinta dos retrovrus. Aps a
Vrions pequenos (42-47 nm), esfricos, com envelope;
Nucleocapsdeo icosadrico;
Genoma DNA circular (3.0 to 3.3 kb), fita parcialmente dupla;
Partculas subvirais em abundncia (esfricas, filamentosas);
A polimerase viral est presente nos vrions;
O ciclo replicativo envolve uma etapa de transcrio reversa;
Parte da replicao do genoma no ncleo parte no citoplasma;
Espectro restrito de hospedeiros in ;
Hepatotropismo marcante;
Produzem infeces hepticas persistentes;
Associados com carcinoma hepatocelular (HCC).
No replicam bem em cultivo celular;
vivo
H
e
p
a
d
n
a
v
i
r
i
d
a
e
Quadro32.2. Propriedades biolgicas e moleculares dos hepadnavrus. direita: fotografia demicroscopia eletrnica
devrions e partculas subvirais esfricas e filamentosas doHBV.
Fonte: Dr Linda Stannard.uct.ac.za
penetrao na clula, transporte ao ncleo e des-
nudamento, o DNA genmico circularizado em
uma ta parcialmente dupla e convertido por
enzimas celulares e/ou pela polimerase viral em
uma molcula circular, covalentemente fechada
de ta dupla (covalently closed circle, ccc). A mol-
cula de DNA ccc serve de molde para a transcri-
o pela RNA polimerase II celular, originando
RNAs mensageiros subgenmicos (mRNA) e um
RNA mensageiro da extenso do genoma (pgR-
NA). Esses RNAs so exportados para o citoplas-
ma, onde os mRNA so traduzidos nas protenas
virais (polimerase, capsdeo e envelope). A poli-
merase recm-produzida pela traduo utiliza o
pgRNA como molde e realiza transcrio reversa,
resultando em uma cpia de DNA complementar
(cDNA), que convertida em ta dupla pela pr-
pria polimerase. Essa reao ocorre em capsdeos
recm-formados e interrompida quando ocorre
o brotamento e egresso dos vrions das clulas.
Como resultado, os vrions contm, no seu inte-
rior, uma molcula de DNA de ta parcialmente
dupla. Parte desses vrions pode reciclar para o
ncleo e reiniciar o ciclo; outra parte liberada
da clula.

A infeco pelo HBV pode ser subclnica ou
resultar em enfermidade heptica, caracterizada
por hepatite aguda a crnica, cirrose e carcinoma
hepatocelular. A maioria das pessoas infectadas
se recupera da infeco. No entanto, em algumas
pessoas, a infeco se torna persistente, determi-
nando uma doena heptica de moderada a se-
vera, com taxas de morbidade e mortalidade bai-
xas. A extenso e a severidade da infeco pelo
HBV dependem de fatores virais e do hospedei-
ro. Sabe-se que esse vrus apresenta mecanismos
de adaptao ao hospedeiro, como mutaes em
determinadas regies do genoma, favorecendo a
infeco persistente.
Aps a infeco, o incio da injria hepato-
celular ocorre pela induo de apoptose mediada
por linfcitos T citotxicos em hepatcitos in-
fectados. Durante a infeco aguda, a patologia
varia de leve a moderada. Em alguns casos, no
entanto, existe uma reao inamatria intensa,
que resulta em uma grande injria hepatocelular
e em hepatite fulminante. Por outro lado, a hepa-
tite crnica resulta da injria contnua dos hepa-
tcitos. Em pacientes assintomticos, existe certa
tolerncia aos antgenos do HBV, o que resulta
em injria leve ou ausente aos hepatcitos, pelas
clulas do sistema imune. Para um melhor escla-
recimento da patogenia do HBV, animais, como
camundongos e chimpanzs, tm sido utilizados
como modelos experimentais. Uma vacina re-
combinante, contendo a glicoprotena de super-
fcie do HBV, produzida em levedura, tem sido
utilizada em humanos. A Tabela 32.2 apresenta
os principais hepadnavrus, os seus hospedeiros
e as principais caractersticas da infeco em cada
espcie.
HBV
Hospedeiro
WHV GSHV DHBV
Humanos
Chimpanzs
Fgado
Rins
Pncreas
Leuccitos
Tropismo
Marmotas
Fgado
Esquilos
Marmotas
Patos
Gansos
Fgado
Rins
Pncreas
Leuccitos
Fgado
Rins
Pncreas
Bao
Portadores
subclnicos;
hepatite aguda e
crnica; cirose,
HCC
Manifestaes
clnicas
Portadores
subclnicos;
hepatite; HCC
Portadores
subclnicos;
hepatite; HCC
Portadores
subclnicos;
hepatite
Tabela32.2. Hospedeiros e principais aspectos dapatogenia dos hepadnavrus
846 Captulo 32
4 Arenaviridae
Os membros da famlia Arenaviridae so v-
rus que possuem roedores silvestres da Europa,
frica e Amricas como hospedeiros naturais.
Nesses hospedeiros, os arenavrus geralmen-
te produzem infeces subclnicas persistentes,
sendo continuamente excretados na saliva, urina
e fezes, condies que favorecem a sua transmis-
so e disseminao. A exposio humana usu-
almente ocupacional e freqentemente envolve
trabalhadores rurais. As conseqncias da infec-
o humana variam desde infeces inaparentes,
com sintomatologia leve a moderada, at febre
hemorrgica fatal. Por isso, esses vrus so ge-
nericamente denominados agentes de febres he-
morrgicas. Mais de 20 espcies de arenavrus j
foram identicadas em vrios continentes; todas,
provavelmente, associadas com hospedeiros roe-
dores, e algumas associadas com doena humana.
O prottipo dessa famlia o vrus da coriome-
ningite linfoctica (LCMV), um agente que infecta
roedores silvestres, colnias de roedores cativos
e, ocasionalmente, pessoas. O interesse maior no
LCMV tem sido como modelo para estudos imu-
nolgicos. Descobertas importantes, como a imu-
notolerncia, imunopatologia induzida por vrus,
reconhecimento de antgenos virais por linfcitos
T CD4+ e CD8+, atividade das clulas NK (natu-
ral killer), entre outras, vieram de estudos com o
LCMV. Os arenavrus que causam doena huma-
na devem ser manipulados em laboratrios com
estritas condies de biossegurana para evitar a
exposio (nvel 4 de biossegurana).
4.1 Classicao
A famlia Arenaviridae apresenta um nico
gnero (Arenavirus). Os arenavrus so classica-
dos em dois grupos, com base em propriedades
genticas e antignicas: os arenavrus do Novo
Mundo (Junin, Machupo, Guanarito e vrus Sa-
bi) e os arenavrus do Velho Mundo (LCMV e
Lassa vrus). O LCMV o prottipo do segundo
grupo, que tambm inclui os arenavrus da fri-
ca.
Os arenavrus do Novo Mundo so agentes
associados com febres hemorrgicas nas Amri-
cas, incluindo o vrus Junin (febre hemorrgica
argentina); Machupo (febre hemorrgica bolivia-
na); Guanarito (febre hemorrgica venezuelana)
e Sabi (febre hemorrgica brasileira). Esses e ou-
tros arenavrus foram identicados nas Amricas
do Norte, Central e do Sul em infeces persis-
tentes em vrias espcies de roedores silvestres e,
ocasionalmente, infectando humanos, nos quais
podem causar desde infeces subclnicas at fe-
bre hemorrgica fatal.
O nmero de arenavrus cresce continua-
mente medida que estudos epidemiolgicos so
realizados nos nichos ecolgicos dos seus hospe-
deiros naturais. A importncia de vrios desses
vrus recm-descobertos, para a sade humana e
animal, no entanto, difcil de ser estimada no
presente.

leculares dos arenavrus esto apresentadas no
Quadro 32.3. Os vrions envelopados contm ri-
bossomos celulares no seu interior, o que confere
um aspecto granular a sua superfcie. O genoma
composto por duas molculas de RNA lineares,
ta simples (S = 3.4 kb; and L = 7.2 kb) de po-
laridade negativa. No entanto, os produtos dos
genes localizados na metade 3 dos segmentos
genmicos so codicados no sentido genmico,
estratgia denominada ambissense. A replicao
ocorre no citoplasma, geralmente no-citoltica
e freqentemente resulta na produo de part-
culas defectivas. Como a infeco, na maioria das
vezes, no-citoltica, pode favorecer o estabele-
cimento de infeces persistentes in vivo.

Os vrions se ligam aos receptores na super-
fcie celular atravs da glicoprotena GP1 e so in-
ternalizados por endocitose. A fuso do envelope
com a membrana do endossomo dependente
de pH e mediada pela GP2, ocorrendo, ento, a
liberao dos nucleocapsdeos no citoplasma.
A protena L (RNA polimerase dependente de
RNA), que est presente no nucleocapsdeo asso-
ciada ao genoma, sintetiza o mRNA do gene da
nucleoprotena (NP) (presente no segmento S) e
do gene da protena L (segmento L). Estes genes,
portanto, so codicados pelo RNA com sentido
antigenmico. Os genes que esto localizados na
metade 3 dos segmentos genmicos (segmento
S = glicoprotenas GPG; segmento L = protena
Z) so codicados no sentido do genoma. A sua
expresso ocorre pela traduo de RNAs (com o
mesmo sentido do genoma) que so produzidos
pela transcrio do RNA de sentido antigenmi-
co. Esses RNAs seriam, por denio, de sentido
negativo, porm so traduzidos em protenas.
Essa estratgia de expresso denominada am-
bissense e tambm ocorre em alguns membros da
famlia Bunyaviridae. O precursor das GPG sofre
modicaes ps-translacionais, em que a GPG
clivada em GP1 e GP2. O RNA genmico se
conjuga com a protena NP, formando o nucle-
ocapsdeo, que transportado at a membrana
plasmtica, onde interage com as glicoprotenas
e realiza o brotamento. As molculas de GP1
formam homotetrmeros, mantidas unidas por
pontes dissulfeto. A GP2, ancorada na membra-
na, tambm forma homotetrmeros. O complexo
da GP1 e da GP2 interage e forma as projees
na superfcie dos vrions. Na morfognese das
partculas vricas, a GP2 interage com a NP. Os
vrions adquirem envelope e so liberados sem,
necessariamente, causar lise celular.

A infeco de mamferos com os arenav-
rus pode cursar de forma aguda ou crnica, com
taxas variveis de morbidade e mortalidade. Os
roedores, em particular os camundongos, cobaias
e hamsters, so excelentes modelos experimentais
para estudos da infeco. Poucas informaes es-
to disponveis a respeito da infeco de caninos,
felinos, animais de produo e de vertebrados
no-mamferos por arenavrus. Porm sabe-se
que esses animais podem potencialmente parti-
cipar da epidemiologia da infeco. Embora te-
nha sido demonstrado que o LCMV replica em
mosquitos, alm de outros arenavrus terem sido
isolados de artrpodes, o signicado epidemiol-
gico desses achados permanece incerto.
A patogenia dos arenavrus envolve uma
replicao inicial no stio de penetrao, geral-
mente nos pulmes, aps a inalao de aerossis
contaminados. Os linfonodos do hilo, tecidos
pulmonares e, mais tardiamente, outros rgos
parenquimatosos so importantes stios de repli-
cao viral.
O LCMV produz infeco e doena huma-
na, eventos que ocorrem quando roedores silves-
tres infectados entram em contato com pessoas.
Esse vrus tambm produz infeces persisten-
tes assintomticas em colnias de camundongos
e hamsters. Outras espcies, como ces, coelhos,
sunos e primatas, tambm podem ser ocasional-
mente infectadas.
Em roedores, a durao da viremia parece
estar diretamente associada com a idade em que
ocorre a infeco. Para os vrus Lassa e LCMV, foi
demonstrado que a viremia persiste por toda a
vida quando a infeco dos roedores intra-ute-
rina ou ocorre logo aps o nascimento. Quando
A
r
e
n
a
v
i
r
i
d
a
e
Vrions pleomrficos (110 a 130 nm), envelopados;
Envelope recoberto com peplmeros cubides (10-12 nm);
Os vrions contm ribossomos; aparncia de areia (areia = );
Genoma: 2 molculas de RNA fita simples, polaridade negativa;
Um dos segmentos de RNA
Dois nucleocapsdeos helicoidais; cada um com um RNA;
Polimerase viral presente nos vrions;
Replicao citoplasmtica, geralmente no-citoltica;
Infeces persistentes so freqentes .
arena
ambissense;
in vivo
Roedores silvestres so os hospedeiros naturais,
Quadro32.3. Propriedades biolgicas e moleculares dos arenavrus. direita: fotografia de microscopia eletrnica de
umvriondestafamlia.
Fonte: Scientific American.ICTVdB.
848 Captulo 32
roedores adultos so infectados, a viremia tran-
sitria. J para o vrus Junin, a infeco intra-ute-
rina determina morte fetal e aborto. A infeco
de neonatos resulta em viremia que persiste por
toda a vida; j a infeco de adultos pode resul-
tar em viremia transitria ou persistente. Conse-
qentemente, a presena da infeco persistente
decorrente da interao de vrios fatores.
5 Astroviridae
Os astrovrus so agentes muito comuns que
infectam animais e humanos, mas raramente es-
to associados com enfermidade clnica. Ocasio-
nalmente so encontrados associados com outros
agentes em casos de diarria. Esses vrus foram
descobertos, inicialmente, pelo exame ultrami-
croscpico de fezes de crianas e, posteriormente,
foram encontrados nas fezes de vrias espcies,
como ces, gatos, ovinos, bovinos, sunos, entre
outras. Em aves, manifestaes clnicas intesti-
nais e hepticas associadas com astrovrus tm
sido descritas. Patos jovens podem desenvolver
hepatite aguda fatal quando infectados. Os astro-
vrus tambm tm sido implicados como co-fa-
tores em casos de diarria em crianas em pases
subdesenvolvidos.
O nome da famlia deriva da aparncia de
estrela de cinco ou seis pontas que alguns vrions
apresentam quando examinados sob microsco-
pia eletrnica. Aspectos moleculares e biolgicos
importantes distinguem os astrovrus de outros
pequenos vrus RNA de ta simples, como os pi-
cornavrus e os calicivrus.

5.1 Classicao
Os astrovrus so classicados em dois g-
neros: Mamastrovirus e Avastrovirus. Os vrus
que pertencem ao gnero Mamastrovirus infec-
tam mamferos e incluem vrus de bovinos (dois
sorotipos US1 e US2), felinos, ovinos, sunos,
marta e humanos (oito sorotipos). As espcies de
mamastrovrus so denidas de acordo com o
hospedeiro de origem. Os Avastrovirus infectam
aves, incluindo pssaros, galinhas, patos e perus.
O vrus da nefrite aviria (ANV), que est asso-
ciado com nefrite aguda em galinhas, inclui-se
nesse gnero.
Os astrovrus so espcie-especcos e no
apresentam reatividade sorolgica cruzada. A
anlise sorolgica de vrios isolados de diferen-
tes espcies (sete de humanos, um de ovinos, um
de sunos, trs de bovinos e um de aves) no de-
monstrou relao antignica entre eles.
leculares dos astrovrus esto apresentadas no
Quadro 32.4. Esses agentes apresentam vrias
caractersticas moleculares e de replicao seme-
Quadro 32.4. Propriedades biolgicas e moleculares dos astrovrus. direita, fotografia de microscopia eletrnica de
vrus destafamlia.
Vrions esfrico-icosadricos, 28 a 30 nm, sem envelope;
Alguns vrions apresentam aparncia de estrelas (astro = estrela);
Genoma RNA linear polaridade positiva, 6.8 kb;
Protena ligada na extremidade 5'; cauda poliA na extremidade 3';
Duas protenas do capsdeo; vrias protenas no-estruturais;
Traduo parcial do genoma; produo de mRNA subgenmicos;
Replicao citoplasmtica;
Prognie viral acumula- em arranjos cristalinos no citoplasma;
A liberao de vrions ocorre por lise celular.
se
A
s
t
r
o
v
i
r
i
d
a
e
Fonte: www.epa.gov
lhantes a outros vrus RNA de polaridade positi-
va, como os calicivrus.
O ciclo replicativo dos astrovrus ainda no
foi completamente esclarecido. Porm, sabe-se
que, durante a infeco, so produzidos RNAs
subgenmicos, alm dos RNA genmicos e an-
tigenmicos. A exemplo de outros vrus RNA
de polaridade positiva, a replicao do genoma
envolve a sntese de uma molcula de RNA de
sentido antigenmico (polaridade negativa).
O genoma viral contm trs ORFs. A ORF-1a
e a ORF-1b codicam as protenas no-estrutu-
rais e esto localizadas nos dois teros prximos
extremidade 5. A ORF-2 codica a protena
do capsdeo e est localizada no tero prximo
extremidade 3. As ORF-1a e 1b esto presentes
apenas no RNA genmico e esto separadas por
um frameshift dos ribossomos. Os seus produtos
(protenas no-estruturais nsP1a e nsP1b) so
sintetizados a partir da traduo direta do RNA
genmico. Como a ORF-2 est presente tanto no
RNA genmico como nos mRNAs subgenmi-
cos, sugere-se que o papel do mRNA subgen-
mico seja a codicao para a sntese de maior
quantidade de protenas estruturais.
A ORF-1a codica uma protease, que im-
portante no processamento das protenas virais.
A ORF-1b codica a RNA polimerase viral (RNA
polimerase dependente de RNA); e a ORF-2 codi-
ca um precursor da protena do capsdeo. Esse
precursor clivado antes da formao da part-
cula vrica.
As duas protenas no-estruturais nsP1a
(protease) e nsP1b (replicase), aps o processa-
mento por proteases virais e celulares, do ori-
gem s protenas responsveis pela transcrio
do RNA genmico, produzindo o RNA de sen-
tido antigenmico. O RNA antigenmico serve
de molde para a produo de mltiplas cpias
de um RNA subgenmico (mRNA para produ-
o da protena do capsdeo) e para a produo
de RNA genmico, para ser encapsidado na pro-
gnie viral. A replicao ocorre inteiramente no
citoplasma, os vrions se acumulam em arranjos
cristalinos e so liberados aps a lise celular.
A patogenia da infeco pelos astrovrus
pouco conhecida. No entanto, a replicao des-
ses vrus no intestino tem sido associada com o
achatamento das vilosidades e a ocorrncia de
diarria. Como a replicao desses vrus ocorre
principalmente no epitlio intestinal, grandes
quantidades de partculas vricas so excretadas
nas fezes. A maioria das infeces subclnica; al-
gumas resultam em diarria discreta autolimitan-
tes principalmente em animais jovens ; e casos
de enfermidade severa so raros. Os indivduos
adultos dicilmente desenvolvem sinais clnicos
devido imunidade adquirida previamente.
Os sinais clnicos so mais freqentemente
observados em casos de infeces mltiplas. Em
infeces experimentais, sunos, felinos e bovinos
so menos susceptveis do que ovinos.
O astrovrus de peru (TAstV) produz diar-
ria, que persiste por aproximadamente oito
dias. Este mesmo vrus foi isolado de pssaros
com uma sndrome entrica denominada PEMS
(poult enteritis mortality syndrome). O vrus da ne-
frite aviria (ANV), que infecta galinhas, provoca
retardamento do crescimento e nefrite intersticial
aguda, sendo um exemplo de astrovrus que cau-
sa infeco extra-intestinal. A infeco de patos
jovens (menos de seis semanas de idade) freqen-
temente resulta em hepatite aguda, que fatal em
aproximadamente 50% dos casos.
6 Filoviridae
Os lovrus foram os primeiros vrus as-
sociados com febre hemorrgica em humanos.
Esses vrus foram inicialmente identicados em
casos da doena em laboratoristas na Alemanha,
na dcada de 1960. O vrus foi caracterizado e de-
nominado vrus Marburg, tornando-se o protti-
po dessa famlia. A origem do vrus Marburg foi,
posteriormente, determinada e, provavelmente,
ocorreu pela importao de macacos-verdes afri-
canos de Uganda. Aproximadamente uma dca-
da depois, o vrus Ebola foi reconhecido como
agente etiolgico de surtos de febre hemorrgica
no Zaire e no Sudan. Um vrus similar, denomi-
nado de Reston, foi introduzido nos EUA por
850 Captulo 32
macacos importados das Filipinas. Desde ento,
surtos espordicos de febre hemorrgica associa-
dos ao vrus Ebola tm sido descritos em vrios
pases africanos. Nesses surtos, tem sido suge-
rida a participao de um hospedeiro silvestre
como introdutor do agente na populao huma-
na. Uma vez introduzido na populao, o vrus
se dissemina geralmente por transmisso noso-
comial (agulhas, prticas parenterais no-apro-
priadas) e por contato direto. Em alguns surtos,
a taxa de letalidade pode chegar a 80%. O vrus
Ebola um dos vrus mais letais de humanos e
classicado como um agente de biossegurana
nvel 4. Embora o vrus Ebola e os demais lov-
rus apresentem um carter claramente zoontico,
os reservatrios naturais do vrus permanecem
desconhecidos e se constituem em um grande
desao para os epidemiologistas.
6.1 Classicao
A famlia Filoviridae pertence ordem Mo-
nonegavirales, juntamente com outros vrus com
genoma RNA no-segmentado de polaridade ne-
gativa. Na famlia Filoviridae, existem dois gne-
ros: os vrus semelhantes ao Ebola (Ebola-like vi-
ruses), com quatro espcies (Zaire, Sudan, Reston
e Cte dIvoire), e o gnero dos vrus semelhantes
ao Marburg (Marburg-like viruses). No existe re-
atividade sorolgica cruzada entre os vrus dos
diferentes gneros. No entanto, existem alguns
epitopos em comum entre os vrus do grupo do
Ebola.
As principais propriedades biolgicas e
moleculares dos lovrus esto apresentadas no
Quadro 32.5. Muitos aspectos estruturais e do ci-
clo replicativo so semelhantes aos das famlias
Rhabdoviridae e Paramyxoviridae, tambm compo-
nentes da ordem Mononegavirales.
O ciclo replicativo dos lovrus inicia pela
ligao da glicoprotena viral (GP) a receptores
na superfcie da clula hospedeira. Os vrions
so internalizados em vesculas endocticas, a
penetrao ocorre pela fuso do envelope com
a membrana do endossomo, e o nucleocapsdeo
liberado no citoplasma. O RNA genmico de
polaridade negativa utilizado como molde para
a sntese de mRNAs monocistrnicos indivi duais
para cada gene. Estes mRNA contm cap, so po-
liadenilados e traduzidos pelos ribossomos ce-
lulares. A transcrio e replicao so realizadas
pela enzima replicase (RNA polimerase depen-
dente de RNA) presente nos vrions. As protenas
virais podem sofrer modicaes aps a tradu-
o. A GP0 (precursora da glicoprotena) cliva-
da em GP1 e GP2, que so altamente glicosiladas.
A GP1 e a GP2 se ligam formando heterodmeros.
Trmeros destes heterodmeros formam, ento, os
peplmeros da superfcie dos vrions. A precur-
sora da glicoprotena secretada (SGP) clivada
em SGP e em um peptdeo delta, ambos secre-
F
i
l
o
v
i
r
i
d
a
e
Vrions pleomrficos, filamentosos, em forma de U ou 6;
Dimetro uniforme (80 nm); extenso pode chegar a 14.000 nm;
Nucleocapsdeo helicoidal (50 nm de dimetro) pode atingir 800 nm;
O envelope contm peplmeros (10 nm);
Genoma RNA cadeia simples polaridade negativa (19.1 kb);
RNA polimerase viral presente nos vrions;
Os vrions possuem sete protenas estruturais;
Associados com febre hemorrgica;
O vrus Ebola um dos mais letais para humanos.
Quadro 32.5. Propriedades biolgicas e moleculares dos filovrus. direita, fotografia de microscopia eletrnica de
umviriondovrus Ebola.
Fonte: Dr F. Murphy. ICTVdB.
tados. Quando a quantidade de protenas virais
no interior da clula atinge um determinado n-
vel, ocorre a troca de transcrio para replicao.
Utilizando o RNA genmico como molde, mol-
culas de RNA de sentido antigenmico (polari-
dade positiva) so sintetizadas e utilizadas como
molde para a produo de mais molculas de
RNA de sentido genmico. Estas so encapsida-
das por mltiplas cpias da nucleoprotena (NP),
formando os nucleocapsdeos, que contm ainda
a replicase. Os nucleocapsdeos recm-formados
se associam com as glicoprotenas do envelope,
que esto inseridas na membrana plasmtica da
clula, local onde ocorre o brotamento e o egresso
das partculas vricas.
Os lovrus so responsveis pela forma
mais severa de febre hemorrgica em humanos.
Embora as taxas de mortalidade em surtos na-
turais de infeco pelo vrus Ebola sejam altas, a
deteco de anticorpos em pessoas sem histrico
clnico compatvel com a doena sugere que esta
infeco nem sempre est associada com sinais
clnicos. Alternativamente, a existncia de outros
vrus antigenicamente relacionados ao vrus Ebo-
la poderia explicar a presena desses anticorpos
em populaes saudveis.
A patogenia do vrus Ebola tem sido exten-
sivamente estudada em modelos experimentais,
como macacos, cobaias e camundongos. Atual-
mente, os modelos mais utilizados so macacos
e cobaias, pois a patogenia nessas espcies parece
ser mais semelhante quela observada em huma-
nos.
Em macacos, a virulncia dos lovrus
bastante varivel, similarmente ao que ocorre em
humanos. Entre os vrus semelhantes ao Ebola,
os vrus Zaire so mais virulentos do que os Res-
ton. A infeco pelos vrus Zaire progride rapida-
mente, sendo fatal entre quatro e oito dias aps a
infeco.
Os sinais da infeco pelos lovrus incluem
febre, mialgia, calafrios e depresso, aps um pe-
rodo de incubao de 4 a 10 dias. Posteriormen-
te, os sinais clnicos reetem um envolvimento
multissistmico, o que pode determinar uma
variedade de sinais clnicos, que incluem sinais
gastrintestinais, respiratrios, vasculares e neu-
rolgicos. A sndrome hemorrgica caracteriza-
da pela presena de petquias, equimoses, tem-
po de coagulao aumentado e hemorragias nas
mucosas. O exame post-mortem revela a presena
de extensas hemorragias nas vsceras.
Vacinas contra o vrus Ebola esto em fase
de pesquisa e desenvolvimento e podem auxiliar
na reduo da morbidade e mortalidade comu-
mente associada com os surtos que ocorrem em
comunidades africanas.
7 Birnaviridae
Os membros da famlia Birnaviridae so v-
rus que infectam vertebrados, insetos, moluscos
e crustceos. Os birnavrus de maior importncia
so os que infectam aves e peixes, entre eles, o
agente da doena de Gumboro, tambm conheci-
da como doena da bursa de Fabricius. A doena
de Gumboro possui grande repercusso sanitria
na avicultura comercial de vrios pases.
7.1 Classicao
A famlia Birnaviridae apresenta trs gneros:
Aquabirnavirus, Avibirnavirus e Entomobirnavirus.
No gnero Aquabirnavirus, esto classicados v-
rus que infectam peixes, moluscos e crustceos.
Entre estes se destacam o vrus da pancreatite
necrtica infecciosa (INPV) que infecta peixes,
o vrus Tellina (TV-2) e o vrus yellowtail ascites
(YTAV). O gnero Avibirnavirus abriga os vrus
que infectam as aves (vrus da doena da bursa
de Fabricius IBDV) e o gnero Entomobirnavi-
rus congrega vrus que infectam insetos. Tanto
o INPV como o IBDV possuem diferentes soro-
tipos.
leculares dos birnavrus esto apresentadas no
Quadro 32.6. O genoma composto por duas mo-
lculas de RNA de ta dupla (segmentos A e B).
Cada segmento codica uma poliprotena, que
posteriormente clivada em produtos funcionais.
852 Captulo 32
Existe uma pequena ORF adicional presente no
segmento maior (A). As protenas do capsdeo e
as protenas no-estruturais so codicadas no
segmento A; a RNA polimerase dependente de
RNA codicada no segmento B. O segmento
A codica atravs da ORF 1 uma protena de 17
kDa (VP5), cuja funo desconhecida; a ORF 2
codica uma poliprotena de 106 kDa que pro-
cessada, originando trs protenas. O primeiro
produto a VP2, que a maior protena do caps-
deo. O segundo a protena no-estrutural (NS),
chamada de VP4, que uma protease que sofre
truncamento e clivagem adicional; e a VP3, que
a protena interna do capsdeo. A NS assim
denominada nos aquabirnavrus. Nos demais g-
neros, essa protena denominada VP4. O seg-
mento genmico B (2,8 kb) codica uma nica
protena de 94 kDa (VP1), a partir da ORF 3, que
a RNA polimerase dependente de RNA.
A replicao dos birnavrus ocorre no cito-
plasma das clulas hospedeiras. A penetrao
ocorre por endocitose e a estrutura dos vrions
desestabilizada pelo pH cido presente no inte-
rior dos endossomos. A transcrio e a replicao
do genoma ocorrem ainda no interior de capsde-
os parcialmente desintegrados ou em capsdeos
pr-formados. A primeira etapa a transcrio
das cadeias de RNA negativas pela transcriptase
presente nos vrions, formando os mRNAs para
a sntese protica. Cada segmento transcrito
em um nico mRNA, cuja traduo resulta em
uma poliprotena, que clivada logo aps a tra-
duo. O mRNA do segmento A codica quatro
protenas, sendo duas protenas estruturais do
capsdeo, uma protease e outra de funo desco-
nhecida. O segmento B codica a replicase viral.
Os RNAs de sentido positivo tambm servem
de molde para a sntese de molculas de RNA
de sentido negativo. As molculas de cadeia du-
pla (RNA positivo + RNA negativo) so, ento,
includas como genoma nas partculas vricas,
juntamente com a replicase viral. A morfognese
ocorre no citoplasma, e as partculas vricas ma-
duras so liberadas aps a lise celular.
7.4 Birnavrus de importncia
veterinria
7.4.1 Vrus da doena de Gumboro
A doena de Gumboro causada por um v-
rus da famlia Birnaviridae (infectius bursal disease
virus, IBDV), ocorre em aves jovens e apresenta a
bursa de Fabricius como rgo-alvo, sendo tam-
bm conhecida como doena infecciosa da bursa
de Fabricius (IBD). Esta enfermidade possui dis-
tribuio mundial e tem causado grandes perdas
econmicas indstria avcola em vrios pases,
por determinar mortalidade e imunossupresso
B
i
r
n
a
v
i
r
i
d
a
e
Vrions esfrico-icosadricos, sem envelope, 60 nm;
Capsdeo icosadrico, 5 protenas, 162 capsmeros;
Genoma RNA de fita dupla, 2 segmentos (A e B);
Protena (VPG) na extremidade 5'; sem poliA;
Segmento A= 3.1kb, protenas do capsdeo + protease;
Segmento B= 2.8 - replicase viral;
Replicam no citoplasma;
Transcrio/replicao no interior dos capsdeos;
IBDV= infecta linfcitos B, doena de Gumboro em aves.
Quadro32.6. Propriedades biolgicas e moleculares dos birnavrus. direita, fotografia de microscopia eletrnica de
vrions destafamlia.
Fonte: Dr S. McNulty; qub.ac.uk
nas aves infectadas. Uma importante conseqn-
cia da infeco de frangos jovens pelo IBDV a
imunossupresso. Alm disso, a infeco com ce-
pas virulentas pode determinar taxas de mortali-
dade elevadas. As medidas de controle envolvem
a vacinao e medidas gerais de biossegurana.
A doena de Gumboro foi inicialmente des-
crita, em 1962, por Cosgrove, na cidade de Gum-
boro, nos Estados Unidos, da a sua denomina-
o. Nos ltimos anos, a emergncia de variantes
antignicas e de cepas de alta virulncia, que po-
dem produzir doena clnica mesmo em animais
vacinados, tem ressaltado a importncia desta
doena. Diferentes cepas do IBDV foram identi-
cadas nos EUA (entre 1986 e 1987), na Blgica e
nos pases baixos (em 1987). As cepas de alta vi-
rulncia foram descritas na Europa em 1986. Tan-
to as cepas clssicas como as mais virulentas es-
to presentes em todos os pases, com exceo da
Amrica do Norte e da Austrlia, pois nestes dois
pases predominam as cepas variantes (maior vi-
rulncia) do IBDV.
O IBDV apresenta dois sorotipos. No soro-
tipo 1, so classicados os isolados patognicos
do IBDV, que apresentam as clulas linfides da
bursa como alvo para replicao. Os IBDV do so-
rotipo 2 so isolados de perus e, geralmente, so
apatognicos. Pelas diferenas antignicas entre
os sorotipos, os frangos expostos ao sorotipo 2
no possuem proteo contra uma infeco pos-
terior por um IBDV do tipo 1.
As galinhas so os nicos hospedei-
ros conhecidos que desenvolvem a
forma clnica da infeco pelo IBDV, porm perus
e patos tambm podem ser infectados. O vrus
trans mitido pela via fecal-oral, com a ingesto de
fezes e/ou outros materiais orgnicos contami-
nados, ou, ainda, verticalmente, via ovo. O vrus
bastante resistente s condies ambientais, so-
brevive a 60C por 60 minutos e em pH entre 3 e
9, o que representa um entrave para o combate
infeco.
Aps a ingesto de material contaminado,
o vrus pode ser detectado em macrfagos e em
clulas linfticas do duodeno, jejuno e ceco em
quatro ou cinco horas. O duodeno, jejuno e ceco
so os rgos de replicao primria do vrus,
que pode chegar ao fgado pelo sistema porta. A
presena do vrus no fgado pode ser detectada
cinco horas aps a infeco, onde as clulas de
Kpfer fagocitam uma quantidade considervel
de partculas vricas. A partir desses stios de
replicao inicial, o vrus invade a corrente san-
gnea e se dissemina por vrios rgos, incluin-
do a bursa. Neste rgo linfide, os linfcitos B
imaturos, presentes nos folculos, so as princi-
pais clulas-alvo para a replicao viral. Aproxi-
madamente 13 horas aps a infeco, a maioria
dos folculos da bursa apresenta antgenos virais.
Uma segunda viremia ocorre aproximadamente
15 a 16 horas aps a infeco. Os sinais clnicos,
quando ocorrem, so observados em 64 a 72 ho-
ras aps a infeco.
A severidade dos sinais clnicos e das leses
depende da virulncia da cepa viral, da raa (cor-
te ou postura), da idade e do status imunitrio
dos animais. O perodo de incubao da doena
muito curto, e os sinais clnicos so observados
entre dois e trs dias ps-exposio. As leses na
bursa de Fabricius so severas e geralmente per-
manentes nas aves infectadas, produzindo um
quadro severo de imunossupresso. Essas aves
apresentam maior susceptibilidade a outros agen-
tes infecciosos (adenovrus, reovrus, micoplasma
spp., E. coli, Salmonella spp., coccdeos e outros) e
no respondem adequadamente a vacinaes.
Duas formas da infeco so descritas: cl-
nica e subclnica. A forma clnica ou aguda da
doena ocorre em aves com trs a seis semanas
de idade, perodo de desenvolvimento intenso
da bursa de Fabricius. Essas aves apresentam
depresso, anorexia, diarria, penas eriadas,
tremores e desidratao por trs a quatro dias.
A forma subclnica ocorre em aves com idade in-
ferior a trs semanas e muito importante, pois
causa imunossupresso severa. As aves mais jo-
vens apresentam imunidade passiva, o que ex-
plica a menor incidncia de doena clnica nessa
faixa etria. Aves com mais de seis semanas de
idade raramente desenvolvem sinais clnicos, po-
rm produzem anticorpos contra o vrus.
Quando no h mortalidade, as aves se re-
cuperam dentro de cinco a sete dias. Freqente-
mente os lotes no so uniformes, pois h baixo
ganho de peso e menor converso alimentar.
Quando o vrus introduzido na propriedade, a
854 Captulo 32
taxa de mortalidade do surto pode ser superior a
90%. No entanto, taxas de mortalidade entre 20 e
30% so mais comuns.
Na necropsia, a atroa da bursa caracte-
rstica, os rins encontram-se aumentados, com o
acmulo de uratos e uma provvel deposio de
imunocomplexos nos glomrulos. Cepas de alta
virulncia causam leses severas na bursa e em
outros rgos linfides, como o timo, bao e a
medula ssea. As alteraes na bursa variam de
acordo com a extenso e progresso da leso. Dois
a trs dias aps a infeco, a bursa apresenta ede-
ma e um transudato gelatinoso sobre a superfcie
serosa. A partir do quinto dia aps a infeco, o
transudato e o edema comeam a desaparecer, e
a bursa retorna a sua colorao acinzentada. Nos
casos de doena aguda, petquias so observadas
nos msculos peitorais e nas coxas, pois o IBDV
interfere com mecanismos de coagulao do san-
gue. O fgado pode apresentar-se edemaciado,
e os intestinos com quantidade aumentada de
muco. Microscopicamente, a principal alterao
na arquitetura folicular da bursa ocorre em con-
seqncia da degenerao e necrose dos linfci-
tos na regio medular e da apoptose de clulas na
regio central dos folculos. Estudos demonstra-
ram que a imunodepresso induzida pelo IBDV
se deve, em parte, apoptose. Os linfcitos fo-
liculares so substitudos por heterlos, restos
celulares necrticos e por clulas reticuloendo-
teliais hiperplsicas. medida que a inamao
regride, formam-se cavidades csticas na regio
medular folicular, sinais de necrose e de fagocito-
se de clulas inamatrias e broplasia do tecido
conjuntivo interfolicular.
O diagnstico da infeco deve ser baseado
no quadro clnico, associado com as leses obser-
vadas na necropsia e no exame histopatolgico
da bursa, alm do histrico do lote. A microsco-
pia eletrnica pode ser empregada para demons-
trar o vrus nos rgos-alvo. Antgenos virais
podem ser demonstrados na bursa de Fabricius
por imunouorescncia, imunistoqumica, pre-
cipitao em gel de gar ou por testes imunoen-
zimticos. O IBDV pode ser isolado pela inocu-
lao em ovos embrionados livres de anticorpos
anti-IBDV. Anticorpos podem ser detectados por
ELISA na rotina. Para a caracterizao de isola-
dos do IBDV, utiliza-se o teste de soroneutraliza-
o (SN), que capaz de diferenciar os isolados
em sorotipo e subtipo dentro do sorotipo 1. A
tcnica de RT-PCR tem sido cada vez mais utili-
zada para o diagnstico. Quando associada com
anlise de restrio enzimtica (RFLP), permite a
identicao rpida das cepas de alta virulncia
e a caracterizao de isolados entre os seis grupos
moleculares do IBDV.
Em estdios mais avanados da infeco,
difcil conrmar o diagnstico somente pelo exa-
me da bursa atroada. Outras doenas que cur-
sam com alteraes similares, como a doena de
Marek, micotoxicoses, coccidioses, sndrome he-
morrgica, hepatite por corpsculos de incluso
e bronquite infecciosa, devem ser consideradas
no diagnstico diferencial.
Pela grande capacidade de disseminao do
IBDV, as medidas de preveno e controle dessa
enfermidade requerem uma abordagem bem co-
ordenada, envolvendo medidas de biossegurana
e vacinao. No ambiente, o vrus pode persistir
por quatro meses. A vacinao deve ser utilizada
para proteger os frangos nas primeiras semanas
de vida. Para garantir altos ttulos de anticorpos
passivos, as matrizes poedeiras devem receber
vacinas inativadas com adjuvante oleoso quando
completarem 18 semanas de vida, com revacina-
es anuais. Algumas vacinas so aplicadas pela
via oral, adicionadas na gua dos bebedouros. Os
pintos so imunizados com uma vacina atenua-
da, iniciando a aplicao com uma ou duas sema-
nas de vida, porm a proteo comprometida
nessas aves pela presena de imunidade passiva,
que pode permanecer por quatro a sete semanas
e neutralizar o vrus vacinal. A proteo dos fran-
gos frente a cepas de alta virulncia tambm pode
ser comprometida quando os antgenos vacinais
utilizam cepas altamente atenuadas. Por outro
lado, a utilizao de cepas pouco atenuadas pode
no ser segura, e os animais apresentarem infec-
o subclnica, acompanhada de leso na bursa
e imunossupresso. Vacinas recombinantes esto
em desenvolvimento, utilizando alguns poxv-
rus, herpesvrus (vrus da doena de Marek) e to-
gavrus (vrus Semliki Forest) como vetores. Va-
cinas de subunidade, utilizando a protena VP2
como antgeno, tambm esto sendo estudadas
e apresentaram uma resposta satisfatria. Vaci-
nas de DNA tambm esto em fase de pesquisa
e desenvolvimento. No entanto, nenhuma dessas
vacinas est disponvel no comrcio.
7.4.2 Vrus da pancreatite necrtica
infecciosa
A pancreatite necrtica infecciosa (infectious
necrotizing pancreatitis, INP) uma doena infec-
to-contagiosa de grande importncia na produ-
o de diferentes espcies de salmondeos em di-
versos pases da Unio Europia, sia, Amrica
do Norte e Amrica do Sul. A doena foi descrita,
pela primeira vez, nos EUA, em 1955, em trutas
de gua doce; porm, relatos compatveis com
a doena datam da dcada de 1940. Na Europa,
a doena foi descrita na Inglaterra, em 1971, em
trutas-arco-ris (Oncorhynchus mykiss).
O agente etiolgico da INP um vrus no-
envelopado, pertencente ao gnero aquabirnavi-
rus, famlia Birnaviridae. Os isolados do vrus da
INP (INPV) possuem uma grande variabilidade
antignica e podem ser classicados em dois so-
rogrupos imunologicamente distintos: sorogru-
pos A e B. A grande maioria dos isolados do v-
rus pertencem ao sorogrupo A, que possui, pelo
menos, nove sorotipos com diferentes nveis de
patogenicidade e virulncia.
O INPV transmitido horizontalmente, por
meio de fezes, urina e secrees, e tambm verti-
calmente, por meio das ovas infectadas. Algumas
espcies de aves e mamferos aquticos, caran-
guejos e protozorios podem servir como vetores
mecnicos do vrus. Experimentalmente, a doen-
a pode ser transmitida pela ingesto do vrus,
imerso em gua contaminada ou pela injeo do
vrus nos salmes.
A doena ocorre com freqncia em trutas-
arco-ris (Oncorhynchus mykiss), trutas-brool (Sal-
velinus fontinalis), trutas-marrons (Salmo trutta),
salmes do Atlntico (Salmo salar) e diversas ou-
tras espcies de salmes do oceano Pacco (On-
corhynchus spp.).
7.4.2.2 Patogenia, sinais clnicos e pa-
tologia
A infeco per se dos salmes com o aqua-
birnavrus no suciente para causar a doena.
A ocorrncia de manifestaes clnico-patolgi-
cas depende da cepa viral, do ttulo do inculo,
das condies ambientais e da idade dos peixes.
O efeito da densidade dos peixes na transmisso
e ocorrncia da doena ainda controverso. A
infeco pelo INPV em alevinos de salmondeos
cursa com alta morbidade e mortalidade. Alm
disso, desde a dcada de 1980, observou-se que a
infeco tambm tem sido fatal em salmes com
mais de dois anos de idade (juvenis). A morte
geralmente sobrevm 2 a 3 meses aps o contato
ou transferncia dos salmes com a gua do mar.
Os sinais da infeco pelo INPV caracterizam-
se por um aumento repentino e progressivo na
mortalidade diria de peixes, acompanhada de
pigmentao escurecida, exoftalmia, distenso
abdominal, hiperventilao, geralmente prxima
superfcie, e natao errtica, em espiral, sobre
seu prprio eixo. A mortalidade total pode variar
de menos de 10% at acima de 90%.
Alm disso, comum a infeco persistente
e assintomtica em salmes adultos. Nestes ca-
sos, o vrus encontra-se associado aos neutrlos
e moncitos da corrente sangnea e do rim. O
estado de portador cursa com reduo do apetite
e, conseqentemente, com reduo na produo.
Alm disso, a mortalidade em salmes com infec-
o assintomtica cinco vezes maior do que em
salmes no-infectados. Acredita-se que apro-
ximadamente 90% dos peixes que sobrevivem
infeco tornam-se portadores e mantm o INPV
por vrios anos. No entanto, a persistncia do v-
rus pode ser afetada pela espcie de salmondeo
infectada e parece diminuir gradativamente com
o tempo e com a quantidade de anticorpos neu-
tralizantes. Outras espcies de peixes tambm
podem manter o INPV no ambiente aqutico.
Condies de estresse reativam a infeco nos
peixes infectados de forma persistente.
A resistncia infeco depende da idade
e da temperatura da gua, e ocorre aproximada-
mente aos 1.500 graus-dias, valor esse obtido pela
856 Captulo 32
multiplicao da idade do peixe (em dias), pela
temperatura mdia da gua (em C) durante a
sua vida. No entanto, salmes do oceano Atlnti-
co, criados em cativeiro, so susceptveis infec-
o logo aps a transferncia da gua doce para
a gua salgada, que ocorre aproximadamente aos
dois anos de idade. A mortalidade mais rpida
e maior em temperaturas em torno de 10 a 14C;
em temperaturas acima de 14C, a mortalidade
signicante, mas reduzida.
As leses patolgicas observadas na INP ca-
racterizam-se por palidez heptica e esplnica; o
estmago e o intestino encontram-se repletos de
uido mucide; observam-se hemorragias pete-
quiais ao longo do tecido pilrico e pancretico.
As clulas acinares do pncreas apresentam ne-
crose intensiva, caracterizada por picnose, carior-
rexia, incluses intracitoplasmticas e inltrao
de macrfagos e clulas polimorfonucleares. O
piloro, a ceca do piloro e tambm o intestino an-
terior apresentam necrose intensa. H despren-
dimento do epitlio intestinal, o qual se combina
com o muco para formar um exsudato catarral
esbranquiado. Observa-se tambm degenerao
do tecido renal hematopoitico, tecido excretor e
fgado.
7.4.2.3 Diagnstico
O diagnstico da infeco pelo INPV dos
salmes baseia-se no isolamento viral em cultivo
celular, seguido da identicao imunolgica do
vrus por meio de soroneutralizao (SN), ELISA,
imunouorescncia (IFA) ou imunoperoxidase
(IPX). Mtodos moleculares de diagnstico, como
a RT-PCR, executadas diretamente em amostras
clnicas, tambm tm sido desenvolvidos e apre-
sentam alto grau de concordncia e especicida-
de. Antgenos virais tambm podem ser detecta-
dos por meio de imunohistoqumica em tecidos
preservados em formalina.
O controle da infeco se baseia na adoo
de medidas prolticas, para evitar a introduo
do agente na criao, que consistem na obteno
de ovas provenientes de matrizes livres de INPV
e a utilizao de gua de boa qualidade (isto ,
proveniente de riachos ou poos articiais), na
qual impossvel a introduo de salmon deos
(ou outras espcies de peixes) portadores do
INPV. Deve-se tambm evitar condies de ma-
nejo estressantes. Em criatrios, guas contami-
nadas podem ser tratadas com cloro, oznio e
radiao ultravioleta, porm a eccia desses
tratamentos inuenciada por diversos fatores,
como presena de matria orgnica. Alm disso,
recomenda-se a desinfeco rotineira dos ovos
com desinfetantes ionofros tamponados.
A utilizao de vacinas para o controle ain-
da incipiente. Vacinas inativadas estimulam
uma boa resposta imune quando administradas
via injeo ou imerso, mas no conferem pro-
teo quando administradas com o alimento ou
por inltrao hiperosmtica. Vacinas vivas ate-
nuadas apresentam problemas de ordem legal
relacionados ao controle da disseminao do v-
rus e interferncia com mtodos de diagnstico.
Vacinas de subunidades e vacinas recombinantes
esto sendo testadas para controle da INP, bem
como o desenvolvimento de peixes geneticamen-
te resistentes infeco pelo INPV.
8 Bornaviridae
A famlia Bornaviridae constituda por vrus
RNA de ta simples e polaridade negativa que
infectam vertebrados. O membro mais impor-
tante dessa famlia o vrus da doena de Borna
(BDV), que acomete principalmente os eqinos
e ovinos. A denominao da doena se refere
cidade alem, onde vrios cavalos morreram de
doena neurolgica em 1895. Esta enfermidade
foi, ento, denominada de doena de Borna (BD),
e o agente identicado, em 1926, foi denominado
vrus da doena de Borna (BDV). Nas ltimas d-
cadas, vrus com caractersticas semelhantes tm
sido identicados como patgenos de humanos,
porm ainda esto em processo de caracteriza-
o.
8.1 Classicao
A famlia Bornaviridae pertence ordem Mo-
nonegavirales, juntamente com os vrus das fam-
lias Filoviridae, Rhabdoviridae e Paramyxoviridae. A
famlia Bornaviridae possui um nico gnero, o
Bornavirus, cujo nico membro o BDV. Existem
diferentes isolados do BDV, obtidos de diferentes
espcies e em diferentes locais. No entanto, a an-
lise logentica revela que esses isolados so al-
tamente relacionados entre si e apresentam uma
alta reatividade sorolgica cruzada, justicando
o seu agrupamento no mesmo gnero.
Os bornavrus possuem vrions esfricos,
envelopados, com 80 a 100 nm de dimetro. Pos-
suem uma molcula de RNA de ta simples, sen-
tido negativo, de aproximadamente 8.9 kb como
genoma. A superfcie do envelope recoberta
por peplmeros de aproximadamente 7 nm. O
ncleo dos vrions (nucleocapsdeo) parece no
possuir uma forma bem denida. Ao contrrio
das outras famlias que compem a ordem Mo-
nonegavirales, os bornavrus replicam no ncleo,
apresentam unidades de transcrio sobrepostas
e alguns transcritos sofrem processamento (spli-
cing) pela maquinaria da clula hospedeira. As
propriedades gerais dos bornavrus esto resu-
midas no Quadro 32.7.
O genoma dos bornavrus (RNA de polarida-
de negativa, 8.9 kb) apresenta seis ORFs, que es-
to divididas em trs unidades de transcrio. As
outras trs ORFs so geradas por splicing. A ORF
da RNA polimerase se localiza na regio prxima
extremidade 5; a ORF da nucleoprotena est
situada prxima extremidade 3. As protenas
codicadas pelas ORFs so: ORF 1 nucleoprote-
na (p40), ORF 2 p24 uma fosfoprotena (cofator
da polimerase), ORF 3 p10, uma protena de 9
kDa cuja funo desconhecida, porm aparen-
temente um regulador negativo da polimerase
ou tem funo na importao para o ncleo das
demais protenas virais; est em posio sobre-
posta a ORF 2; ORF 4 protena da matriz (p16)
de aproximadamente 16 kDa; ORF 5 glicoprote-
na de 56 kDa, e ORF 6 RNA polimerase (p190).
As ORFs 4, 5 e 6 so geradas de uma mesma uni-
dade de transcrio, seja por sobreposio em di-
ferentes fases de leitura seja por splicing.
Os bornavrus so os nicos vrus RNA de
polaridade negativa no-segmentados que repli-
cam no ncleo das clulas hospedeiras. Estudos
tm demonstrado que tanto o RNA de polaridade
positiva como o RNA de polaridade negativa so
encontrados no ncleo, porm em localizaes
distintas. Cadeias de RNA de polaridade positi-
va esto preferencialmente localizados prximos
aos nuclolos, enquanto os de polaridade nega-
tiva podem ou no estar prximos aos nuclolo,
sugerindo um papel dessas organelas na replica-
o do BDV.
Os bornavrus penetram na clula hospedei-
ra por endocitose, seguida de fuso do envelope
Vrions esfricos, com envelope (80-90 nm);
Envelope com peplmeros (7 nm);
Capsdeo sem morfologia definida;
Genoma RNA fita simples, polaridade negativa, 8.9 kb;
Genes sobrepostos; 6 ORFs;
Alguns mRNAs sofrem
Replicao do genoma ocorre no ncleo;
Infeco geralmente no-citoltica;
splicing;
in vitro
Membro principal: vrus da doena de Borna (eqinos).
B
o
r
n
a
v
i
r
i
d
a
e
Quadro32.7. Propriedades biolgicas e moleculares dos bornavrus. direita, est uma ilustraoesquemtica de um
vrion.
Fonte: Dr W.Garten. Inst.Virol.Marburg.
858 Captulo 32
com a membrana endoctica. A gp-43 est presen-
te no envelope e na superfcie das clulas infecta-
das e provavelmente fuso. A gp-84 parece estar
envolvida na ligao do vrus aos receptores ce-
lulares.
Os detalhes da replicao dos bornavrus
no esto bem esclarecidos. Alguns pesquisado-
res sugerem que exista um mecanismo de regula-
o do genoma atravs de digesto enzimtica na
extremidade 5, envolvendo a deleo de partes
do genoma para limitar a expresso gnica. Suge-
re-se que esta estratgia seja benca aos bornav-
rus, pois permitiria o estabelecimento de infeco
persistente, sem determinar efeitos citolticos.
O BDV infecta primariamente neurnios e
clulas da glia, nas quais no produz efeito cito-
ptico aparente. Constitui-se, portanto, em um
vrus neurotrpico. O BDV apresenta nveis de
replicao e produo de prognie viral inferio-
res quando comparado com outros vrus. Ou-
tra caracterstica importante desse vrus a sua
capacidade de permanecer no sistema nervoso
central (SNC) de animais infectados em infeces
persistentes.
8.5 Doena de Borna
A doena de Borna uma enfermidade se-
vera, de curso geralmente fatal, caracterizada
pelo desenvolvimento de distrbios nervosos em
eqinos e ovinos, causada pelo BDV. A enfermi-
dade cursa com uma meningoencefalite no-su-
purativa. A importncia dessa enfermidade tem
aumentado nos ltimos anos, pois uma srie de
estudos tem demonstrado uma associao do
bornavrus com desordens neuropsiquitricas.
A distribuio geogrca da infeco pelo
BDV desconhecida. A infeco natural tem
sido descrita na Europa, na Amrica do Norte
e em parte da sia (Japo e Israel). No entanto,
deve-se considerar que a falta de reagentes para
diagnstico certamente contribui para o pouco
conhecimento sobre essa doena em muitos pa-
ses. Assim, considera-se que esse vrus possa ter
uma distribuio maior do que a relatada at o
presente.
Originalmente, o BDV foi identicado como
agente de enfermidade em eqinos. No entanto,
o vrus tambm tem sido isolado de ovinos, lha-
mas, felinos e bovinos. Vrias espcies animais
j foram infectadas experimentalmente, o que
sugere que este vrus seja capaz de infectar vir-
tualmente todos os animais de sangue quente, in-
cluindo primatas. Anticorpos anti-BDV tm sido
detectados tanto em animais como em humanos
sem sinais clnicos, o que indica que as infeces
subclnicas so, provavelmente, mais prevalen-
tes do que as clnicas. De fato, acredita-se que a
maioria das infeces pelo BDV em eqinos so
assintomticas, pois anticorpos anti-BDV so fre-
qentemente encontrados em animais sem hist-
rico clnico da enfermidade.
No se conhecem possveis reservatrios
naturais do BDV, nem a forma de transmisso.
O BDV penetra provavelmente pela via na-
sal, replica nos neurnios localizados prximos
ao stio de entrada e migra atravs de transpor-
te axonal at o sistema nervoso central (SNC),
provavelmente pelo sistema olfatrio. No SNC,
o BDV apresenta tropismo pelo sistema lmbico,
incluindo o hipocampo. O sistema lmbico est
envolvido na regulao da memria, das intera-
es ambientais e das emoes e parece ter um
papel importante em algumas desordens neu-
ropsiquitricas em humanos. Tardiamente aps
a infeco, o BDV migra via transporte axonal
antergrado para o sistema nervoso perifrico,
infectando clulas como astrcitos, oligodendr-
citos e as clulas de Schwann. rgos no-neurais
podem ser infectados posteriormente. A presena
de cidos nuclicos e de protenas do BDV em c-
lulas mononucleares perifricas (PBMC) podem
indicar uma disseminao pela via hematgena.
A infeco experimental em roedores resul-
ta em persistncia viral e est associada com a
presena do vrus na saliva, na urina e nas fezes.
Levantou-se a hiptese de que roedores pode-
riam ser os hospedeiros naturais do agente. No
entanto, o BDV ainda no foi demonstrado em
infeces naturais em roedores.
Em eqinos e em ovinos, a infeco carac-
terizada por alteraes comportamentais agressi-
vas, que progridem para a paralisia e inanio em
poucas semanas. A patogenia da infeco parece
estar ligada doena mediada pelo sistema imu-
nolgico. Os sinais clnicos mais freqentemen-
te observados em cavalos so: excitao, ataxia,
postura anormal, opisttono, nistagmo, cegueira,
paralisia e morte. Por outro lado, a infeco pode
tambm ser assintomtica, persistente ou crni-
ca.
Roedores tm sido utilizados como modelo
experimental para estudos de patogenia da infec-
o pelo BDV. Ratos adultos apresentam hipe-
ratividade, que coincide com a presena de pro-
dutos virais em neurnios do sistema lmbico e
inltrao de clulas mononucleares no crebro.
Em animais que sobrevivem infeco, embora a
inamao regrida em algumas semanas, o vrus
persiste e os animais podem apresentar diferen-
tes sinais neurolgicos associados com alteraes
no SNC. No entanto, quando ratos so infectados
quando neonatos, a doena caracterizada por
crescimento retardado, distrbios de comporta-
mento e apetite depravado. Estes animais no so
capazes de montar uma resposta imune celular
contra o vrus. Primatas infectados experimental-
mente apresentam distrbios comportamentais
nos aspectos social e sexual. Alguns destes apre-
sentam relaes anormais de dominncia e no
conseguem copular. Os macacos rhesus infecta-
dos experimentalmente se tornam inicialmente
hiperativos e, posteriormente, apticos e hipoci-
nticos.
O diagnstico diferencial de doenas neuro-
lgicas em eqinos deve, necessariamente, consi-
derar a possibilidade de doena de Borna, sobre-
tudo em reas onde a doena j foi diagnosticada.
O diagnstico laboratorial pode ser realizado
com testes sorolgicos, por imunouorescncia,
Western blot, radioimunoprecipitao e ELISA.
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A
AAV: vrus adeno-associado.
AcM: anticorpo monoclonal.
ADCC: citotoxicidade celular dependente de anticorpos.
ADE: infeco mediada por anticorpos.
AdV: adenovrus.
ADV: vrus da doena de Aujeszky (herpesvrus suno 1, SuHV-
1 ou vrus da pseudoraiva, PRV).
AE: encefalomielite das aves.
AEC: aminoetilcarbazol.
AEV: vrus da encefalomielite das aves.
AGID: imunodifuso em gar.
AHSV: vrus da peste eqina.
AIDS: sndrome da imunodecincia humana adquirida.
AIG: anemia infecciosa das galinhas.
AiV: vrus Aichi.
AIV: vrus da inuenza aviria.
AKAV: vrus Akabane.
AlHV-1: herpesvrus alcefaline (vrus da febre catarral maligna,
forma africana).
ALT: alanina aminotransferase.
ALV: vrus da leucose aviria.
AMDV: vrus da doena das martas Aleutian.
AmPV: metapneumovrus avirio.
ANV: vrus da nefrite aviria.
ANVISA: Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.
AP: fosfatase alcalina.
APC: clula apresentadora de antgeno.
APMV: paramixovrus avirio.
APV: pneumovrus avirio.
ARPyV: poliomavrus de ratos atmicos.
ARV: ortoreovrus de aves.
ARV-A: aquareovrus A.
AS: cido silico.
ASF: peste suna africana.
ASFV: vrus da peste suna africana.
ATP: adenosina trifosfato.
ATPase: atividade de hidrlise de ATP.
B
B19: parvovrus humano.
BAdV: adenovrus bovino.
BALT: tecido linfide associado aos brnquios.
BCG: bacilo de Calmette e Guerin.
BCoV: coronavrus bovino.
BCR: receptor de linfcitos B.
BD: doena de Borna.
BDV: vrus da doena da fronteira (ovinos) e tambm vrus da
doena de Borna (eqinos).
BEFV: vrus da febre efmera dos bovinos.
BEV: enterovrus bovino.
BeV: vrus Berne.
BFV: vrus da doena das penas e bicos dos psitacdeos.
BHK-21: clula de rim de hamster jovem.
BHM: mamilite herptica bovina.
BIV: vrus da imunodecincia bovina.
BKPyV: vrus BK.
BKV: poliomavrus humano
BLV: vrus da leucose bovina.
BoHV: herpesvrus bovino (1, 2, 4 e 5).
ABREVIATURAS E SIGLAS
862 Virologia Veterinria
BoRV: rinovrus bovino.
BOTV: vrus Bunyamwera.
bPI3V: vrus da parainuenza bovina tipo 3.
BPSV: vrus da estomatite papular bovina.
BPV (1-7): papilomavrus bovino.
BPV: parvovrus bovino.
BPV-1: papilomavrus bovino tipo 1.
BPyV: poliomavrus bovino.
BRSV: vrus respiratrio sincicial bovino.
BRV: ortoreovrus de babunos.
BRV: rotavrus bovino.
BrV: vrus Breda.
BSL: nvel de biossegurana.
BT: lngua azul.
BT: linhagem celular de corneto nasal bovino.
BToV: torovrus bovino.
BTV: vrus da lngua azul.
BVDV: vrus da diarria viral bovina.
C
C: capsdeo.
CA: protena do capsdeo.
CaCV: circovrus do canrio.
CAdV: adenovrus canino.
CAdV-1: adenovrus canino tipo 1.
CAdV-2: adenovrus canino tipo 2.
CAEV: vrus da artrite-encefalite caprina.
CaHV: herpesvrus canino.
Cap: 7-metil-guanina ligada na extremidade 5 do RNA.
CAR: receptor do adenovrus e do vrus Coxsackie.
CAV: vrus da anemia aviria.
CAV9: Coxsackievirus A9.
ccc: crculo covalentemente fechado.
CCHF: febre hemorrgica da Crimia-Congo.
CCHFV: vrus da febre hemorrgica Crimia-Congo.
CCoV: coronavrus canino.
CD4: marcador de linfcitos T auxiliares (Th).
CD8: marcador de linfcitos T citotxicos (Tc).
Cdk: quinases dependentes de ciclinas.
cDNA: DNA complementar
CDV: vrus da cinomose.
CEF: cultivo primrio de embrio de galinha.
CEK: clula de embrio de pinto.
CF: xao do complemento.
ChPV: Chanfnch papilomavrus.
ChPV: parvovrus das galinhas.
ChPVs: cordopoxvrus.
CID: coagulao intravascular disseminada.
CLP: partcula semelhante ao core ou ncleo viral.
CMV: citomegalovrus humano.
CnMV: vrus minuto dos ces.
CNPV: poxvrus do canrio.
COCV: vrus Cocal.
CoCV: coronavrus canino.
COPV: papilomavrus oral canino.
Cp: citoptico.
CPE: efeito citoptico.
CpHV: herpesvrus caprino.
CPIV-2: vrus da parainuenza canina tipo 2.
CPSH: sndrome cardiopulmonar por hantavrus.
CPV: parvovrus canino.
CR1, 2 e 3: regies conservadas.
CRCV: coronavrus canino respiratrio.
Cre: seqncia regulatria cis-acting.
CRFK: clula de linhagem de rim felino.
CRIB: clula de linhagem de rim bovino resistente ao BVDV.
Abreviaturas e siglas 863
cRNA: RNA complementar.
CRPV: papilomavrus dos coelhos cauda-de-algodo.
CRSV: vrus respiratrio sincicial caprino.
CRV: reovrus canino.
CSF: peste suna clssica.
CSFV: vrus da peste suna clssica.
CTFV: vrus da febre dos carrapatos do Colorado.
CTL: linfcito T citotxico.
CV-1: clula de linhagem de primatas.
CV-B5: Coxsackievirus B5 de humanos.
D
Da: dalton.
DAB: diaminobenzidina.
DAdV: adenovrus de patos.
DBP: protena de ligao ao DNA.
DC: clula dendrtica.
DeAdV: adenovrus de cervdeos.
DHBV: vrus da hepatite B dos marrecos.
DHOV: vrus Dhori.
DM: doena das mucosas.
DNA: cido desoxirribonuclico.
dNTP: desoxirribonucleotdeo.
DPV: papilomavrus de cervdeos.
DR: repetio direta.
ds: cadeia dupla (double stranded).
dsRNA: RNA de ta dupla.
DUGV: vrus de Dugbe.
dUTPase: enzima que desdobra o nucleotdeo UTP.
E
E (early): genes de expresso inicial (ou precoce).
E1 a E7: protenas iniciais.
EAdV: adenovrus eqino.
EAV: vrus da arterite eqina.
EBHSV: vrus da doena hemorrgica das lebres pardas
europias.
EBTr: clulas de linhagem de traquia de feto bovino.
EBV: vrus Epstein-Barr.
ECMV: vrus da encefalomiocardite.
ECP: efeito citopatognico ou citoptico.
ED: clula de derme eqina.
EDS: sndrome da queda da postura.
EEE: encefalite eqina do leste.
EEEV: vrus da encefalite eqina do leste.
EEPV: papilomavrus do alce europeu.
EEV: partcula vrica envelopada extracelular.
EEV: vrus da encefalose eqina.
EHD: doena epizotica hemorrgica dos cervos.
EHDV: vrus da doena epizotica hemorrgica dos cervos.
EHV: herpesvrus eqino 1, 3 e 4.
EIAV: vrus da anemia infecciosa eqina.
eIF-2: fator eucariota de iniciao.
EITB: ensaio imunoenzimtico em blot.
EIV: vrus da inuenza eqina.
ELISA: ensaio imunoenzimtico.
EMCV: vrus da encefalomiocardite murina.
EqPV: papilomavrus eqino.
EqRV: rinovrus eqino.
ERBV: vrus da rinite eqina B.
ETF: fator de transcrio dos genes iniciais.
EToV: torovrus eqino.
EVA: arterite viral eqina.
F
F: protena de fuso.
FA: Fosfatase alcalina
FAdV: adenovrus avirio.
FAIDS: sndrome da imunodecincia felina adquirida.
FAO: seo da ONU responsvel pela agricultura e alimentos.
Fc: xao do complemento.
FCoV: coronavrus entrico felino.
FCV: calicivrus felino.
FDPV: papilomavrus felino.
FeCoV: vrus da peritonite infecciosa felina.
FeHV: herpesvrus felino.
FeLV: vrus da leucemia felina.
FIP: peritonite infecciosa dos felinos.
FIPV: vrus da peritonite infecciosa felina.
FITC: isotiocianato de uorescena.
FIV: vrus da imunodecincia felina.
FluAV: Inuenzavrus A.
FluBV: Inuenzavrus B.
FluCV: Inuenzavrus C.
FMD: febre aftosa.
FMDV: vrus da febre aftosa.
FMO: falncia mltipla dos rgos.
FOCMA: antgeno do oncovrus felino associado membrana.
FPL: panleucopenia felina.
FPLV: vrus da panleucopenia felina.
FVR: rinotraquete viral felina.
FWPV: vrus da bouba aviria.
G
GAdV: adenovrus caprino.
GaHV-1, 2 e 3: herpesvrus galdeo tipos 1, 2 e 3.
gB (C etc.): glicoprotenas do envelope.
GBK: clula de rim bovino.
GDD: glicina-asparagina-asparagina.
GEH: gastrenterite hemorrgica.
GoAdV: adenovrus de gansos.
GoCV: circovrus dos gansos.
GP: glicoprotena.
GSHV: vrus da hepatite B dos esquilos.
GTPV: poxvrus dos caprinos.
H
H: hemaglutinina.
HA: teste de hemaglutinao.
HA: hemaglutinina.
HAD: hemadsoro.
HaOPV: papilomavrus oral do hamster.
HaPV: polyomavrus de hamsters.
HAV: vrus da hepatite A humana.
HBV: vrus da hepatite B humana.
HCC: carcinoma hepatocelular.
HCMV: citomegalovrus humano (HHV-5).
HCoV: coronavrus humano.
HCV: vrus da hepatite C.
HE: hemaglutinina-esterase.
HEF: glicoprotena multifuncional no envelope.
HeLA: clulas de linhagem humana.
HEV: vrus da encefalomielite hemaglutinante dos sunos.
HeV: vrus Hendra.
HFRS: febre hemorrgica com sndrome renal.
HHV: herpesvrus humanos tipos 1-8.
HI: inibio da hemaglutinao.
HIC: hepatite infecciosa canina.
HIRRV: rabdovrus hirame.
HIV: vrus da imunodecincia humana.
hPEV1: parechovrus humano 1.
hPIV: vrus da parainuenza humana
HPS: sndrome pulmonar por hantavrus.
HPV: papilomavrus humanos.
HRPO: horseradish peroxidase.
hRSV: vrus sincicial respiratrio humano.
HRV: rhinovrus humano.
HSV: vrus do herpes simplex (HSV-1 e HSV-2).
HT 29: clula de tumor retal humano.
HTLV: vrus da leucemia de linfcitos T.
HTNV: vrus Hantaan ou hantavrus.
HToV: torovrus humano.
HuCoV: coronavrus humano.
HuCV: calicivrus clssicos humanos.
HV: herpesvrus.
HVT: herpesvrus de perus.
I
IBDV: vrus da doena de Gumboro.
IBR: rinotraquete infecciosa bovina.
IBRS-2: clula de rim suno (Instituto Biolgico de So Paulo).
IBRS2: clula de linhagem de rim suno.
IBRV: vrus da rinotraquete infecciosa bovina (BoHV-1).
IBV: vrus da bronquite infecciosa aviria.
ICAM-1: molcula de adeso intercelular tipo 1.
IcHV-1: herpesvrus do catsh.
ICPs: polipeptdeos virais produzidos em clulas infectadas por
herpesvrus.
ICQ: imunocitoqumica.
ICTV: Comit Internacional de Taxonomia de Vrus.
ID: intestino delgado.
ID
50
: dose infectiva para 50% dos cultivos celulares.
IDGA: imunodifuso em gar.
IE: genes de transcrio imediata.
IFA: imunouorescncia.
IFD: imunouorescncia direta.
IFI: imunouorescncia indireta.
IFN: interferon.
IFN-: interferon alfa.
IFN-: interferon beta.
IFN-: interferon gama.
Ig: imunoglobulina.
IgA: imunoglobulina A
IHC: imunoistoqumica.
IHNV: vrus da necrose hematopoitica infecciosa.
IHQ: imunoistoqumica.
IL: interleucinas.
ILTV: vrus da laringotraquete infecciosa das aves.
IMV: partcula vrica intracelular madura.
IN: integrase.
INPV: vrus da pancreatite necrtica infecciosa.
IPB: balanopostite pustular bovina.
IPIC: ndice de patogenicidade intracerebral.
IPV: vulvovaginite pustular bovina.
IPX: imunoperoxidase.
IR: repetio invertida.
IR: regio intergnica.
IRES: stio interno de reconhecimento pelos ribossomos.
ISAV: vrus da diarria infecciosa do salmo.
ISCOM: complexo imunoestimulante.
ISH: hibridizao in situ.
ITR: repetio terminal invertida.
IV: vrus da doena de Ibaraki.
J
JCV: poliomavrus humano.
JEV: vrus da encefalite japonesa.
JSRV: vrus da adenomatose pulmonar dos ovinos (retrovrus
Jaagsiekte).
JUNV: vrus Junin.
K
kb: quilobase.
kbp: quilopares de bases.
kDa: quilodalton.
KDV: vrus kadipiro.
KIR: receptor inibidor de morte celular.
KPyV: Kilham poliomavrus.
L
L: large (grande).
L: polimerase.
L (late): genes de expresso tardia.
LACV: vrus La Crosse.
LASV: lassavrus de roedores e humanos.
LAT (LTR): transcrito associado latncia.
LC: clula de Langerhans.
LCMV: vrus da coriomeningite linfoctica.
LCR: regio longa de controle.
LD
50
: dose letal para 50% dos animais.
LDEV: vrus elevador da lactato desidrogenase.
LDL: lipoprotena de baixa densidade.
LNYV: vrus da necrose amarela da alface.
LPS: lipopolissacardeo.
LPyV: poliomavrus linfotrpico.
LSD: doena da pele nodulosa (lumpy skin disease).
LSDV: vrus da LSD.
LT: laringotraquete infecciosa das galinhas.
lT: antgeno T grande.
LTR: regio longa terminal.
LTR: transcrito relacionado com a latncia.
M
M: mdio (medium).
M: protena da matriz.
M1: protena principal da matriz.
M2: protena com atividade de canal de ons.
MA: protena da matriz.
MA-104: clulas de rim de macaco.
MAC: complexo de ataque membrana.
MACV: vrus Machupo.
MALT: tecido linfide associado com mucosas.
MARC145: linhagem derivada da MA104.
MCF: febre catarral maligna.
MCF-AO: febre catarral maligna associada a ovinos.
MCFV: vrus da febre catarral maligna.
MD: doena de Marek.
MDBK: clula de linhagem de rim bovino.
MDCK: clula de linhagem de rim canino.
mDCs: clulas dendrticas mielides.
MDCT-RP19: linhagem broblastide.
MDPV: parvovrus dos patos Muscovy.
MDV: vrus da doena de Marek (GaHV-2).
ME: microscopia eletrnica.
MeHV-1: herpesvrus melagridis tipo 1.
MEV: vrus da enterite das martas.
MHC: complexo maior de histocompatibilidade.
MHC-I: complexo maior de histocompatibilidade do tipo I.
MHC-II: complexo maior de histocompatibilidade tipo II.
MHV: vrus da hepatite murina.
miRNA: micro RNAs com atividade interferente.
MLV: vrus da leucemia murina.
MMTV: vrus do tumor mamrio do camundongo.
MNPV: papilomavrus dos Mastomys natalensis.
MNT: teste de neutralizao viral em camundongos.
MOCV: vrus do Moluscum contagiosum.
MPtV: vrus pneumotrpico dos murinos.
mRNA: RNA mensageiro.
mRNAsg: RNA subgenmico.
MRV: ortoreovrus de mamferos.
mT: antgeno T mdio.
MuLV: vrus da leucemia murina.
MV: vrus do sarampo.
MVEV: vrus Murray Valley.
MVM: vrus minuto dos camundongos.
MVV: vrus Maedi-Visna.
MYXV: vrus do mixoma dos coelhos.
N
NA: neuraminidase.
NC: protena do nucleocapsdeo.
NCP: no-citoptico.
ND: doena de Newcastle.
NDV: vrus da doena de Newcastle.
NiPV: vrus Nipah.
NK: clulas natural killer.
NLS: sinais para localizao nuclear.
nm: nanmetro.
NP (ou N): nucleoprotena ou protena do nucleocapsdeo.
NS: protena no-estrutural.
NSD: doena das ovelhas de Nairobi.
NSDV: vrus da doena das ovelhas de Nairobi.
NSp: protenas no-estruturais.
nt: nucleotdeo.
O
OAdV: adenovrus ovino.
OE: ovo embrionado.
OIE: Escritrio Internacional das Epizootias.
OMS: Organizao Mundial da Sade.
OP: uido esofgico-faringeano.
OPC: carcinoma pulmonar dos ovinos.
OPPV: vrus da pneumonia progressiva dos ovinos.
ORF: fase aberta de leitura.
ORFV: vrus do ectima contagioso dos ovinos.
ORI: origem de replicao.
ORSV: vrus respiratrio sincicial ovino.
OvHV-2: herpesvrus ovino tipo 2.
OvPV: papilomavrus ovino.
P
PA: polimerase cida.
PAdV: adenovrus suno.
PAGE: eletroforese gel de poliacrilamida.
PANAFTOSA: Centro Pan-americano de Febre Aftosa.
Pb: pares de bases.
PB1: polimerase bsica 1.
PB2: polimerase bsica 2.
PBMC: clulas mononucleares do sangue perifrico.
PBS: stio de ligao do primer.
PCNA: fator celular de processividade do complexo de
replicao.
PCR: reao da polimerase em cadeia.
PCV-1: circovrus suno tipo 1.
PCV-2: circovrus suno tipo 2.
pDCs: clulas dendrticas plasmacitides.
PDGF: fator de crescimento derivado de plaquetas.
PEDV: vrus da diarria epidmica dos sunos.
PEMSV: vrus da sndrome de mortalidade de galinhas.
PePV: papilomavrus dos psitacdeos.
PEV: enterovrus suno.
PFU: unidades formadoras de placas.
pgRNA: RNA pr-genmico.
PhAdV: adenovrus de faises.
PhCoV: coronavrus de faises.
PhDV: morbilivrus das focas.
PI: persistentemente infectado.
PiCV: circovrus dos pombos.
PIVs: vrus da parainuenza.
PK: clulas de rim suno.
PK15: clula de linhagem de rim suno.
PKR: protena quinase R.
PLSD: pseudo lumpy skin disease.
PML: leucoencefalopatia progressiva multifocal.
polyA: seqncia de adeninas.
PoV: poliomavrus de camundongos.
PoV: poliomavrus.
PoxV: poxvrus.
PPRV: vrus da peste dos pequenos ruminantes.
PPT: trato de polipurina.
PpV: papilomavrus.
PPV: parvovrus suno.
PR: protease.
PRA: ensaio de reduo de placa.
pRB: protena do retinoblastoma.
PRCoV: coronavrus respiratrio dos sunos.
PRRSV: vrus da sndrome reprodutiva e respiratria dos
sunos.
PRV: vrus da pseudoraiva (SuHV-1).
PsPV: papilomavrus dos cetceos.
PToV: torovrus suno.
pTP: precursora da protena terminal.
PTV: teschovrus suno 1.
PV: poliovrus.
PYDV: vrus do tomate pequeno amarelo.
PyV: poliomavrus de camundongos.
R
RabV: vrus da raiva.
Rb: produto do gene do retinoblastoma.
RdRp: RNA polimerase dependente de RNA.
RE: retculo endoplasmtico.
REA: anlise de restrio enzimtica.
RER: retculo endoplasmtico rugoso.
RFFIT: tcnica de inibio de focos uorescentes.
RFLP: polimorsmo de tamanho de fragmentos de restrio.
RFV: vrus do broma dos coelhos.
RHDV: vrus da doena hemorrgica dos coelhos.
RhPV: parvovrus do macaco rhesus.
RI: molcula intermediria de replicao.
RIA: radioimunoensaio.
RIP: radioimunoprecipitao.
RK13: clulas de linhagem de rim de coelho.
RNA: cido ribonuclico.
RNApolII: RNA polimerase II.
RNAse H: ribonuclease H.
RNAse: ribonuclease.
RNP: ribonucleoprotena.
RPA: protena replicativa A.
RPM: rotaes por minuto.
RPV: parvovrus do mo-pelada (racoon).
RPV: vrus da peste bovina.
RR: ribonucleotdeo redutase.
RRE: elemento responsivo ao Rev.
RRV: vrus Ross River.
RS: Rio Grande do Sul.
RSV: vrus do sarcoma Rous.
RSVs: vrus respiratrios sinciciais.
RT: transcriptase reversa.
RT-PCR: transcrio reversa seguida de PCR.
RVF: febre do vale Rift.
RVFV: vrus da febre do vale Rift.
S
S: pequeno (small).
SA-12: vrus smio 12.
SABV: vrus sabi.
SaHV-2: herpesvrus saimiri tipo 2.
SARS-CoV: coronavrus causador da pneumonia asitica, SARS.
SAT: South African Territory 1, 2 e 3.
SAV: adenovrus suno.
SCR: seqncia repetida consenso.
SDNS: sndrome da dermatite e nefropatia suna.
SFV: vrus Semliki Forest.
SH: protena hifrofbica pequena.
SHFV: vrus da febre hemorrgica dos smios.
SHS: sndrome da cabea inchada.
SI: inuenza suna.
SIN: vrus Sindbis.
SIRS: sndrome da resposta inamatria sistmica.
SIV: vrus da inuenza suna (tambm vrus da imunodecincia
dos smios).
SK6: clulas de linhagem de rim suno.
SLEV: vrus da encefalite Saint Louis.
SMDS: sndrome multissistmica do denhamento.
SMSV: vrus dos lees-marinhos de San Miguel.
SN: soroneutralizao.
SNC: sistema nervoso central.
SPA: adenomatose pulmonar dos ovinos.
SPF: livres de patgenos especcos.
SPV: parvovrus dos smios.
SRLV: lentivrus dos pequenos ruminantes.
SRSV: vrus pequenos arredondados.
ss: cadeia simples (single stranded).
ssRNA: RNA de ta simples.
sT: antgeno T pequeno.
ST: linhagem celular de testculo suno.
SToV: torovrus suno.
SU: protena de superfcie.
SuHV: herpesvrus suno.
SV-40: vrus smio 40.
SVCV: vrus da viremia primaveril das carpas.
SVDV: vrus da doena vesicular dos sunos.
SVEV: vrus do exantema vesicular dos sunos.
SwPV: poxvrus suno.
T
TAdV: adenovrus de perus.
TANV: vrus Tanapox.
Taq: polimerase do organismo Thermophilus aquatics.
TAS: seqncia associada transcrio.
TAstV: astrovrus de perus.
TBEV: vrus da encefalite transmitida por carrapatos.
TBP: protena de ligao ao TATA box.
Tc: linfcito T citotxico.
TCID
50
: dose infectiva para 50% dos cultivos celulares.
TCoV: coronavrus dos perus.
TCR: receptor de linfcitos T.
TfR: receptor da transferrina.
TGE: gastrenterite transmissvel dos sunos.
TGEV: vrus da gastrenterite transmissvel dos sunos.
TGF: fator de crescimento tumoral.
TGI: trato gastrintestinal.
Th: linfcito T auxiliar (helper).
THOV: vrus Thogoto de carrapatos.
TIC: traqueobronquite infecciosa canina.
TIF: fator ativador dos genes alfa.
TK: timidina quinase.
TM: protena transmembrana.
TNF: fator de necrose tumoral.
TOC: cultivo de anel da traquia.
TP: protena terminal.
TRHV: vrus da rinotraquete dos perus.
tRNA: RNA transportador.
TRS: seqncia de regulao da transcrio.
TS: mutantes sensveis temperatura.
TTE: triuortricloroetano.
TTV: circovrus humano (torquetenovrus).
TV-2: vrus Tellina.
U
UH: unidade hemaglutinante.
UL: regio nica longa.
UL(n): protena cujo gene est na regio UL.
US: regio nica curta.
UTR: regio no-traduzida.
UV: ultravioleta.
V
VAP: protena viral de ligao.
VCAM-1: molcula de adeso de clulas vasculares tipo 1.
VEE: encefalite eqina venezuelana.
VEEV: vrus da encefalite eqina venezuelana.
VERO: clula de rim de macaco-verde-africano.
VESV: vrus do exantema vesicular dos sunos.
VHSV: vrus da septicemia hemorrgica.
VIAA: antgeno associado com infeco viral.
VLDL-R: lipoprotena de baixssima densidade.
VLP: partcula semelhante ao vrion.
VP1, 2 e 3: protenas do capsdeo.
VP-16: transativador dos genes alfa dos herpesvrus (o mesmo
que alfa-TIF).
VPg: protena terminal.
VPs: protenas virais.
vRNA: RNA genmico.
VS: estomatite vesicular.
VSAV: vrus da estomatite vesicular Alagoas.
VSIV: vrus da estomatite vesicular Indiana.
VSNJV: vrus da estomatite vesicular New Jersey.
VSV: vrus da estomatite vesicular.
VV: vrus da vaccinia.
VWD: sndrome do vmito e denhamento.
VZV: vrus da varicela-zoster (HHV-3)
W
WB: Western blot.
WBV: vrus Wesselbron.
WDSV: vrus do sarcoma dermal de Walleye.
WEE: encefalite eqina do oeste.
WEEV: vrus da encefalite eqina do oeste.
WHV: vrus da hepatite B das marmotas.
WNV: vrus do Nilo Ocidental
Y
YFV: vrus da febre amarela.
YMTV: atapox dos macacos.
YTAV: vrus yellowtail ascites.
cido nuclico: molcula de cido deoxirribonuclico (DNA) ou
cido ribonuclico (RNA).
cido silico: sacardeo composto por nove carbonos, encontrado
em glicoprotenas e glicolipdios de membranas celulares.
utilizado como receptor por alguns vrus.
Adjuvante: substncia ou formulao utilizada em vacinas no-
replicativas para potencializar o efeito imunoestimulante do
antgeno.
Adsoro: etapa inicial do ciclo replicativo dos vrus, na qual os
vrions se ligam aos receptores celulares.
Aglutinao em ltex: tcnica de deteco de antgeno ou
anticorpos que utiliza microesferas de ltex como suporte para
a imobilizao da reao.
Ambissense: molcula de RNA que contm informao gentica
tanto no sentido do genoma quanto no sentido antigenmico.
Amostra viral: vrus de uma determinada espcie viral que foi
isolado e no caracterizado. Os termos cepa e isolado tambm so
utilizados.
Amplicon: segmento de DNA amplicado por PCR. Tambm
chamado de produto de PCR.
Anlise de restrio: anlise comparativa de molculas de DNA
com base no tamanho dos fragmentos gerados pela clivagem por
enzimas de restrio (endonucleases).
Antergrado: relativo direo do transporte neuronal: do corpo
neuronal para as extremidades dos axnios ou dendritos.
Anticorpos: classe de globulinas plasmticas com funo de
ligao a determinantes antignicos. Tambm chamados de
imunoglobulinas.
Anticorpos maternos: anticorpos recebidos da me atravs da
placenta, pelo colostro/leite ou pela gema do ovo.
Anticorpos monoclonais: populao de anticorpos altamente
especcos e homogneos, produzidos por clones de clulas
hbridas (hibridomas) obtidas pela fuso entre linfcitos B e
clulas de mieloma.
Anticorpos policlonais: populao heterognea de anticorpos
produzidos por um animal em resposta a um determinado
antgeno. So produtos de secreo de inmeros clones diferentes
de linfcitos B (plasmcitos).
Anticorpo primrio: anticorpo especco para o antgeno de
interesse, utilizado em tcnicas de deteco de antgenos.
Anticorpo secundrio: anticorpo contra imunoglobulinas (anti-
Ig) de determinadas espcies animais, utilizado em tcnicas de
deteco de antgenos.
Antgeno: macromolcula capaz de se ligar especicamente aos
receptores de clulas do sistema imunolgico.
Antgeno T: protena complexa multifuncional dos
poliomavrus.
Antigenmico: molcula de cido nuclico com sentido
complementar (inverso) ao genoma.
Anti-soro: soro de animal que contm anticorpos, geralmente
em altos ttulos, contra um determinado antgeno ou agente.
Antissense: molcula de cido nuclico cuja seqncia de
nucleotdeos complementar (sentido contrrio) a outra
determinada molcula.
Aparelho de Golgi (complexo de Golgi): organela citoplasmtica
vesicular em cujo lmen ocorrem modicaes qumicas de
protenas e metabolismo de lipdios. O aparelho de Golgi
responsvel pelo direcionamento de protenas e outras
macromolculas s diferentes organelas da clula e tambm para
exportao.
Apatognico: agente no-patognico ou atenuado.
Apoptose: mecanismo de morte celular desencadeado por uma
variedade de estmulos siolgicos ou patolgicos, que cursa
com ativao de vrios genes e culmina com a fragmentao do
DNA celular. Tambm denominada morte celular programada.
Aptido biolgica: conjunto de caractersticas fenotpicas que
favorecem a replicao e perpetuao de um agente em um
determinado ambiente biolgico.
Arbovirose: infeco vrica transmitida por artrpodes
(insetos).
Arbovrus: vrus transmitidos primariamente por artrpodes
(insetos).
rea livre: rea ou regio que no possui um determinado
agente etiolgico.
Atenuao: reduo (ou abolio) da patogenicidade de um
agente.
Atenuao da transcrio: reduo da ecincia de transcrio
medida que o complexo enzimtico avana ao longo da molcula
molde.
GLOSSRIO
Atenuado: agente etiolgico com patogenicidade reduzida.
Ativador promscuo: fator de transcrio (ou ativao) que
se liga em seqncias presentes em uma grande variedade de
promotores, ativando a transcrio dos respectivos genes.
Atividade hemaglutinante: atividade de aglutinar eritrcitos
animais.
ATPase: enzima com atividade de desdobramento de ATP para
o fornecimento de energia para processos biolgicos.
Autcrina: ao de uma substncia na prpria clula que a
produz.
Bacterifago: vrus que infecta bactrias.
Balstica: metodologia de introduo de macromolculas
em organismos uni ou multicelulares por meio de projteis
impulsionados por um equipamento apropriado.
Barreira sanitria: conjunto de medidas utilizadas em zonas
limtrofes para impedir a introduo de agentes patognicos em
determinadas reas ou populaes.
Base nitrogenada: componente dos nucleotdeos que compem
o DNA e RNA. Adenina, timina (uracil), citosina e guanina.
BCR: receptor de linfcitos B.
Brotamento: mecanismo de aquisio do envelope viral, no qual
o nucleocapsdeo projeta-se atravs de membranas celulares.
Bursa de Fabricius: rgo linfide primrio das aves que controla
o desenvolvimento e maturao de linfcitos B.
Cadeia complementar: molcula de cido nuclico cuja seqncia
de nucleotdeos exatamente complementar a de outra molcula,
de acordo com o pareamento de bases Watson-Crick (A-T, C-G).
Cadeia do processo infeccioso: srie de etapas que ocorrem
seqencialmente e continuamente na histria natural dos agentes
infecciosos na natureza.
Cadeia lagging: molcula de DNA sintetizada
descontinuamente.
Cadeia leading: molcula de DNA sintetizada continuamente.
Cap: guanina metilada na posio 7, com orientao inversa,
incorporada na extremidade 5 de RNAs mensageiros de
eucariotas e que serve de sinal para o reconhecimento e traduo
pelos ribossomos. Alguns cap possuem a segunda e terceira bases
tambm metiladas.
Capa ogstica: camada na de leuccitos que se forma entre a
coluna de eritrcitos e de plasma aps centrifugao de sangue
integral no-coagulado.
Capsdeo: camada protica que reveste externamente o genoma
viral.
Capsmero: unidade estrutural do capsdeo; aparece como
projeo ou depresso na superfcie dos vrions; pode ser
formado por uma ou mais protenas.
Caspase: famlia de proteases, algumas das quais envolvidas no
mecanismo de apoptose.
Cauda poli A: seqncia de adeninas com extenso varivel
(tipicamente 100-200) adicionada extremidade 3 de RNAs
mensageiros celulares e virais. Parece conferir estabilidade ao
mRNA e pode tambm ter participao no incio da traduo.
Caveola: estrutura vesicular envolvida na internalizao de
macromolculas e pequenas partculas por clulas eucariotas.
Clula apresentadora de antgeno (APC): clula que processa
antgenos proticos endgenos ou exgenos e apresenta a
linfcitos T, induzindo a sua estimulao.
Clula de Langerhans: clula da linhagem monoctica que atua
como APC na pele.
Clula de memria: clula linfide (T ou B) originada a partir da
expanso clonal estimulada pelo contato com o antgeno. Essas
clulas possuem longa vida e podem ser reestimuladas quando
o organismo reexposto ao antgeno especco.
Clula dendrtica: populao de clulas da linhagem mielide
ou linfide que se distribuem no sangue e em tecidos linfides e
no-linfides, cuja funo principal a captura e apresentao de
antgenos aos linfcitos.
Clula efetora: denominao dada s clulas que atuam
diretamente em determinada funo.
Clula hospedeira: denominao genrica dada s clulas que
servem de hospedeiras para a replicao de um vrus.
Clula interdigitante: clula da linhagem das clulas dendrticas
que residem no bao.
Clula M: clula especializada na produo de muco que
se localiza entre as clulas epiteliais da mucosa do intestino
delgado.
Clula natural killer: clula da linhagem linfide cuja funo
principal lisar inespecicamente clulas tumorais e clulas
infectadas por vrus, alm de produzir citocinas. Tambm
participa da lise celular dependente de anticorpos (ADCC).
Clula permissiva: clula que apresenta as condies
intracelulares necessrias para a replicao viral.
Clula primria (cultivo primrio): clula cultivada in vitro
recentemente removida de tecidos animais. capaz de um
nmero limitado de divises.
Clula semipermissiva: clula que apresenta condies
intracelulares parciais para a replicao viral ou que apresenta
condies para a ocorrncia somente de algumas etapas do ciclo
replicativo.
Glossrio 873
Clula susceptvel: clula que apresenta as condies para a
ocorrncia completa do ciclo replicativo, desde a penetrao at
o egresso da prognie viral.
Cepa ou estirpe: vrus de uma determinada espcie viral que j
foi caracterizado fenotipicamente e/ou genotipicamente.
Cepa de referncia: cepa viral bem caracterizada que
utilizada como referncia por vrios laboratrios com diversas
nalidades.
CD4: molcula de superfcie celular que atua conjuntamente com
o TCR na ligao ao MHC-II e peptdeos na superfcie de APCs,
no processo de reconhecimento de antgenos pelos linfcitos T
auxiliares. o principal marcador molecular dessta populao
de linfcitos.
CD8: molcula de superfcie celular que atua conjuntamente
com o TCR na ligao ao MHC-I e peptdeos na superfcie de
clulas infectadas por vrus e clulas dendrticas, no processo de
reconhecimento de antgenos pelos linfcitos T citotxicos. o
principal marcador molecular desta populao de linfcitos.
Chaperone: protena ou estrutura protica que assiste e auxilia
as protenas a assumirem a conformao tridimensional logo
aps a sua sntese.
Ciclinas: famlia de protenas envolvidas na regulao do ciclo
celular.
Ciclo ltico: ciclo replicativo viral que resulta na lise/destruio
da clula hospedeira.
Ciclo replicativo: srie de etapas que compem a multiplicao/
reproduo dos vrus em clulas susceptveis.
Crculo rolante: mecanismo de replicao de DNA em que a
estrutura replicativa se assemelha a um crculo em movimento.
A replicao ocorre ao longo da molcula circular de DNA,
resultando em uma molcula linear crescente que, posteriormente,
clivada nas unidades genmicas.
Cis-acting: seqncia de nucleotdeos cuja atividade exercida
na prpria molcula; geralmente serve de stio de ligao para
protenas que ativam/reprimem a transcrio ou replicao; ex.
promotores, enhancers, origens de replicao.
Cistron: gene.
Citocinas: substncias solveis secretadas por determinadas
clulas em resposta a um estmulo e que exercem funo
modulatria em outras clulas.
Citoesqueleto: rede de bras, brilas, tbulos e microtbulos
proticos que conferem a forma e uma variedade de movimentos
s clulas eucariotas, alm de servirem de elos de ligao entre os
diferentes locais e organelas no interior da clula.
Citomegalia: aumento de volume celular.
Citopatologia: patologia em nvel celular. Freqentemente
se manifesta sob a forma de alteraes estruturais e/ou
morfolgicas.
Citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC):
mecanismo de lise celular mediada por clulas, que se ligam
poro Fc de imunoglobulinas que esto ligadas a antgenos na
superfcie da clula-alvo.
Clatrina: protena estrutural da membrana plasmtica, cuja
aglomerao em certos locais antecede e media a endocitose.
Clivagem enzimtica: clivagem de uma macromolcula pela
ao de enzimas.
Cdon: seqncia de trs nucleotdeos que codica um aminocido
ou a terminao da traduo (cdon de terminao).
Cdon de iniciao: seqncia AUG que determina o local exato
do incio da traduo. Este cdon tambm codica o aminocido
metionina.
Cdon de terminao: seqncia de trs nucleotdeos que no
codica aminocidos e determina a terminao da traduo
(UGA, UAA, UAG).
Compactao gentica: capacidade de compactar o mximo de
informao gentica no genoma.
Complementao: interao entre os produtos gnicos de
diferentes vrus que permite a multiplicao de um ou mais
vrus, sem alterao do seu gentipo.
Complemento: sistema plasmtico formado por um grupo
de protenas enzimticas inativas, cuja ativao seqencial
desencadeia a formao de molculas com atividades biolgicas
diversas, principalmente relacionadas com a ativao da
inamao e combate a microorganismos.
Complexo antgeno-anticorpo: complexo molecular formado
pela ligao do anticorpo ao antgeno especco.
Complexo basal de transcrio: conjunto mnimo de fatores
de transcrio e enzima RNA polimerase necessrios para a
realizao de nveis basais de transcrio.
Complexo de ataque membrana (MAC): complexo formado
pelos componentes C5-C9 do complemento, que se insere e
forma poros nas membranas celulares e bacterianas.
Complexo de histocompatibilidade principal (MHC):
protenas de membrana celular, envolvidas na apresentao
de peptdeos endgenos (MHC-I) ou exgenos (MHC-II) para
clulas do sistema imunolgico. Identicadas inicialmente como
responsveis pela rejeio (ou no) de transplantes.
Complexo replicativo: conjunto de enzimas e fatores auxiliares
que realizam a replicao do genoma.
Complexo ribonucleoprotena: complexo formado pelo RNA
genmico e protenas associadas.
Concatmero: molcula longa de DNA formada por mltiplas
cpias de unidades genmicas contnuas. Constituem-se em
molculas intermedirias na replicao do genoma de alguns
vrus DNA.
Convalescena: fase de recuperao clnica.
Core (ou ncleo): estrutura compacta formada pelo genoma viral
geralmente conjugado com protenas.
Co-receptor: molcula de superfcie celular que participa,
juntamente com os receptores, no processo de ligao e
penetrao dos vrus nas clulas.
Corpsculo de incluso: estrutura intracelular produzida como
resultado da replicao viral. Pode ser formado por produtos
virais e/ou por estruturas celulares modicadas.
Corpsculo de Lenz: corpsculo de incluso observado em
neurnios do sistema nervoso central durante a infeco com o
vrus da cinomose.
Corpsculo de Negri: corpsculo de incluso observado em
neurnios do sistema nervoso central durante a infeco pelo
vrus da raiva.
Cristal violeta: corante utilizado para corar cultivos celulares.
Cromatina: complexo formado pelo DNA celular conjugado
com protenas nucleares denominadas histonas.
CTL: linfcito T que possui atividade citotxica.
Cultivo celular: cultivo de clulas de animais utilizado para a
multiplicao de vrus in vitro.
Dambos: depresses extensas no terreno que se enchem de gua
em pocas de chuva e secam durante a estiagem. So tpicos de
certas regies da frica.
Degranulao: liberao do contedo de grnulos
citoplasmticos.
Deleo: ausncia ou remoo de um segmento do genoma.
Dendritos: prolongamentos citoplasmticos presentes em certos
tipos de clulas, tipicamente neurnios.
Deoxirribonucleotdeo (dNTP): nucleotdeos que contm a
desoxirribose como acar. So as unidades componentes do
DNA.
Depopulao: remoo ou eliminao total da populao de
uma determinada rea.
Desnaturao: perda da conformao tridimensional natural.
Termo utilizado para protenas e cidos nuclicos.
Desnudamento: srie que eventos que ocorrem aps a penetrao
viral e que resultam na remoo parcial ou total das protenas
que recobrem o genoma, tornando-o acessvel maquinaria de
transcrio e/ou traduo.
Determinante antignico: pequena regio do antgeno que
se liga s regies variveis dos receptores de linfcitos B e T.
Tambm denominado epitopo.
Diagnstico sorolgico: diagnstico baseado na deteco de
anticorpos especcos.
Diapedese: movimentao de clulas sangneas para fora do
leito vascular e atravs dos tecidos.
Diluio limitante: diluio seriada utilizada para quanticar
unidades vricas infecciosas presentes em um material.
Diplide: organismo que contm duas cpias do genoma.
Disseminao hematgena: disseminao pelo sangue.
DNA: cido desoxirribonuclico.
DNA complementar (cDNA): molcula de DNA cuja seqncia
de nucleotdeos complementar a outra molcula de DNA ou
RNA.
DNA extracromossmico: molcula de DNA que no faz parte
do cromossomo ou genoma celular.
DNA genmico: DNA que constitui o genoma do organismo.
DNA intermedirio: molcula de DNA, complementar ao DNA
genmico, que serve de intermedirio na replicao do genoma
de alguns vrus.
DNA polimerases: enzimas que sintetizam DNA a partir de
uma molcula molde.
Doena emergente: doena que assumiu importncia
recentemente. Pode ser uma doena realmente nova, que
aumentou de incidncia ou que foi recentemente diagnosticada.
Doena espordica: doena de ocorrncia rara, imprevisvel, em
uma determinada populao.
Doena extica: doena que no existe em uma determinada
populao.
Doente: hospedeiro que apresenta sinais clnicos resultantes de
alteraes da siologia.
Doena atpica: doena cujas caractersticas clnico-patolgicas
diferem da maioria dos casos daquela enfermidade.
Domnio: regio de uma molcula de protena que possui
uma determinada funo e que assume uma conformao
independente do restante da molcula. Geralmente os diferentes
domnios de uma protena so codicados por diferentes exons.
Drift antignico: alterao antignica discreta em protenas
de superfcie de agentes infecciosos que altera o padro de
reconhecimento destes agentes pelo sistema imunolgico.
Eclipse: perodo inicial da infeco viral em cultivo celular, no
qual ocorrem as fases iniciais da replicao.
Ecossistema: conjunto de componentes fsicos e biolgicos
presentes em uma determinada rea.
Efeito citoptico (ou citopatognico): alterao morfolgica
de clulas de cultivo associada com a replicao viral. Pode
ser observado sob microscopia ou, s vezes, pelo exame visual
direto (placas).
Glossrio 875
Egresso: sada ou liberao da partcula vrica da clula
hospedeira.
Eletroferogrupo: classicao dos rotavrus em grupos, de
acordo com o padro de migrao dos segmentos genmicos em
gis de poliacrilamida.
Eletroforese em gel de poliacrilamida: mtodo de anlise de
cidos nuclicos e protenas, baseado na migrao eletrofortica
das molculas em uma matriz gelatinosa e porosa de
poliacrilamida.
ELISA: ensaio imunoenzimtico para a deteco de antgenos ou
anticorpos.
Empacotamento: mecanismo de incluso do genoma viral
nas partculas vricas recm-formadas. Tambm chamado de
encapsidao ou encapsidamento.
Encapsidao: o mesmo que empacotamento.
Endemia (enzootia): doena presente em uma determinada
populao e cuja incidncia no apresenta grandes variaes ao
longo do tempo.
Endmica: padro de ocorrncia de uma doena que ocorre
naturalmente em uma populao sem grandes variaes de
incidncia ao longo do tempo.
Endocitose: mecanismo celular de internalizao de partculas e
macromolculas por meio de invaginao progressiva e formao
de vesculas derivadas da membrana plasmtica.
Endonucleases: enzimas que clivam e degradam cidos
nuclicos, clivando as ligaes entre nucleotdeos internos da
molcula.
Enhancer: seqncia de nucleotdeos do DNA localizada a
distncias variveis dos locais de iniciao da transcrio. Serve
de stio de ligao para os fatores de transcrio. No essencial
para a transcrio basal, mas aumenta a ecincia de transcrio
a partir de um determinado promotor.
Enhancer constitutivo: enhancer cuja atividade permanente,
geralmente em nveis basais.
Ensaio de placa: ensaio biolgico realizado em tapetes celulares.
Baseia-se na capacidade de certos vrus de produzirem focos
de destruio celular. utilizado para a anlise fenotpica,
quanticao e clonagem biolgica (puricao) de vrus.
Envelope: envoltrio lipoprotico externo presente em algumas
famlias de vrus. derivado de membranas celulares e contm
protenas virais inseridas.
Epidemia: aumento signicativo do nmero de casos de uma
doena em uma determinada populao em um perodo de
tempo.
Epidemia de propagao: epidemia em que o nmero de novos
casos aumenta gradativamente ao longo do tempo.
Epidemia em ponto: epidemia caracterizada pela ocorrncia de
um grande nmero de casos em um curto intervalo de tempo.
Epissomal: livre, no integrado ao cromossomo celular.
Epitopo: o mesmo que determinante antignico.
Epizootia: o mesmo que epidemia, termo aplicado a populaes
animais.
Espcie heterloga: outra espcie, que no a espcie em
questo.
Espcie homloga: mesma espcie em questo.
Especicidade (anticorpos): propriedade de anticorpos em se
ligar apenas aos epitopos que so exatamente complementares
s suas regies variveis.
Especicidade (testes): propriedade de uma tcnica diagnstica
de identicar, detectar e diagnosticar um determinado agente
(ou anticorpos) e distingui-lo de outros agentes.
Espectro de hospedeiros: gama ou conjunto de hospedeiros que
um agente pode potencialmente infectar.
Espectrofotmetro: aparelho que mede a capacidade de diferentes
substncias de absorver luz em diferentes comprimentos de
onda. utilizado para determinar a concentrao de diversas
substncias em diferentes materiais.
Espcula (spike): projeo formada pelas protenas de superfcie
de alguns vrions. O mesmo que peplmero.
Estabilidade gentica: estabilidade (conservao) da seqncia
de nucleotdeos de um determinado genoma ao longo do
tempo.
Estacional: padro de ocorrncia de doena cuja incidncia
apresenta variaes a intervalos anuais, geralmente coincidentes
com uma determinada estao do ano.
Estrutura secundria (ou terciria): conformao bi ou
tridimensional adotada por macromolculas (protenas, cidos
nuclicos).
Eucariota: organismo cujo genoma separado do citoplasma
por uma membrana nuclear e dividido em cromossomos
individuais.
Evaso imunolgica: denominao genrica ao conjunto de
mecanismos utilizados por agentes infecciosos para se evadirem
da resposta imunolgica montada pelo hospedeiro.
Exocitose: processo celular de secreo de macromolculas,
no qual vesculas contendo essas molculas se fusionam
com a membrana plasmtica, liberando o contedo no meio
extracelular.
Exon: seqncia codicante dos genes descontnuos de
eucariotas, que so unidas entre si aps a remoo das seqncias
intervenientes (ntrons), pelo mecanismo de splicing.
Exonucleases: enzimas que degradam molculas de cidos
nuclicos a partir da remoo de nucleotdeos de suas
extremidades.
Expanso clonal: multiplicao de clulas a partir de clulas
progenitoras individuais.
Expresso gnica: termo genrico que denota a expresso ou
materializao das informaes genticas contidas no genoma.
Resumidamente, refere-se produo de protenas e s funes
decorrentes das suas atividades.
Fbrica viral: local especco no citoplasma ou ncleo onde se
acumulam os produtos virais e vrions em diferentes estgios de
morfognese. o local de replicao do genoma e produo das
partculas vricas.
Fagocitose: processo celular de internalizao de partculas
grandes, que envolve alteraes marcantes na estrutura da
membrana plasmtica, gasto de energia e reorganizao do
citoesqueleto cortical.
Fagossomo: vescula derivada da fagocitose que contm o
material fagocitado.
Fator de necrose tumoral: um tipo de interleucina secretada por
leuccitos.
Fatores de transcrio: protenas celulares que auxiliam a enzima
RNA polimerase no reconhecimento, ligao aos promotores e
incio da transcrio.
Fentipo: conjunto de caractersticas observveis de um
indivduo. o resultado da expresso do gentipo.
Fidelidade: propriedade das polimerases de DNA e RNA em
produzirem cpias exatamente complementares s molculas
utilizadas como molde.
Filamentos de actina: lamentos da protena actina que
compem o citoesqueleto.
Fita complementar (ou cadeia complementar): molcula de
cido nuclico (RNA ou DNA) cuja seqncia de nucleotdeos
exatamente complementar molcula parental que serviu de
molde para a sua produo.
Fixao do complemento: tcnica de deteco de anticorpos que
se baseia na capacidade de molculas de imunoglobulinas se
ligarem a molculas do complemento quando interagem com o
antgeno.
Flebotomdeo: espcie de inseto hematfago. Envolvido na
transmisso mecnica de alguns vrus.
Fluorescena: substncia que emite luminosidade uorescente
ao ser exposta a luz ultravioleta.
Fluxo axoplsmico: uxo de vesculas e macromolculas ao
longo do citoplasma (axoplasma) dos axnios de neurnios.
Fmite (ou veculo): qualquer objeto (ser inanimado) que serve
para transmitir um agente infeccioso entre hospedeiros.
Fonte de infeco: animal vertebrado que abriga e multiplica um
vrus, podendo transmiti-lo a outro hospedeiro.
Fosfatase alcalina: enzima utilizada em testes
imunoenzimticos.
Fragmentos de Okazaki: segmentos de DNA (100: 2.000
nucleotdeos) produzidos durante a sntese da cadeia descontnua
(lagging) na replicao semidescontnua do DNA celular e de
alguns vrus.
Frameshift: mudana de fase de leitura do RNA mensageiro
pelos ribossomos durante a traduo.
Fuso: processo de fusionamento entre membranas biolgicas
pela interao entre seus componentes. A fuso entre o envelope
viral e a membrana celular proporciona a penetrao do
nucleocapsdeo no citoplasma da clula.
Gene: seqncia de nucleotdeos nos cidos nuclicos que
codica um produto (protena).
Genes alfa (ou de transcrio imediata): grupo de genes dos
herpesvrus que so transcritos imediatamente aps a penetrao
viral na clula.
Genes beta (ou iniciais): grupo de genes de alguns vrus que so
preferencialmente transcritos em fases iniciais do ciclo, antes da
replicao do genoma.
Genes de virulncia: genes cujos produtos esto envolvidos na
determinao da virulncia de um agente infeccioso.
Gene essencial: gene cujo produto essencial para a replicao
viral em cultivo.
Genes gama (ou tardios): grupo de genes dos herpesvrus que
so transcritos somente aps o incio da replicao do genoma.
Gene no-essencial: gene cujo produto dispensvel para a
replicao viral em cultivo celular.
Genes tardios: genes que so expressos em fases tardias do ciclo,
geralmente aps a replicao do genoma.
Gentica reversa: denominao genrica para a metodologia
utilizada para estudar a gentica de organismos na ordem inversa
gentica tradicional, ou seja, parte de um determinado gentipo
e estuda as conseqncias da produo deliberada de mutaes e
outras alteraes genticas no fentipo do organismo.
Genoma: molcula de cido nuclico (DNA, RNA) que contm o
conjunto completo de informaes genticas do organismo.
Gentipo: conjunto de seqncias especcas e informaes
genticas contidas no genoma de um organismo.
Glicoprotena: protena que possui molcula(s) de acar
associada(s) covalentemente.
Golden standard: teste padro universal de um determinado
mtodo, cujos resultados servem de comparao com os
resultados de outros testes.
Glossrio 877
Granzimas: enzimas contidas em grnulos citoplasmticos de
determinadas clulas efetoras.
Hairpin: estrutura semelhante a um grampo de cabelo, formada
pelo exionamento de molculas de cido nuclico sobre si
mesmas. Geralmente ocorre prximo s extremidades das
molculas.
Haplide: organismo que contm apenas uma cpia do
genoma.
Helicases: enzimas que separam cadeias de DNA e RNA. So
necessrias para a transcrio e replicao.
Hemadsoro: atividade biolgica de protenas de alguns vrus
quando expressas na superfcie de clulas infectadas. Refere-se
adsoro de eritrcitos superfcie celular que contm essas
protenas.
Hemaglutinao: atividade biolgica de aglutinao de
eritrcitos animais por partculas vricas ou por protenas de
alguns vrus.
Hemaglutinina: protena viral responsvel pela aglutinao de
eritrcitos.
Hepatotrpico: agente que apresenta tropismo por clulas
hepticas.
Heterodmero: estrutura molecular formada pela associao de
duas subunidades (molculas) diferentes.
Hibridizao: associao entre duas molculas complementares
de cido nuclico, porm de origens diferentes.
Hibridizao in situ: tcnica de deteco de cidos nuclicos em
cortes de tecidos que utiliza o princpio da hibridizao.
Hbrido: molcula de cido nuclico de cadeia dupla cujas
cadeias componentes possuem origens diferentes. Termo
tambm utilizado para designar o organismo cujo genoma
contm informaes genticas de duas espcies heterlogas.
Histonas: protenas nucleares que se conjugam com o DNA
cromossmico, proporcionando o seu empacotamento e
compactao.
Homlogo: da mesma espcie, semelhante.
Homologia de nucleotdeos: grau de similaridade da seqncia
de nucleotdeos entre duas ou mais molculas de cidos
nuclicos.
Horseradish peroxidase (HRPO): enzima utilizada em testes
imunoenzimticos.
Hospedeiro: espcie animal que abriga e permite a multiplicao
de um determinado agente biolgico.
Hospedeiro natural (ou reservatrio): espcie animal na qual
um determinado agente mantido na natureza.
Hospedeiro terminal (acidental): espcie animal que pode ser,
ocasionalmente, infectada por um determinado agente, mas que
no o transmite, ou seja, no participa do ciclo de manuteno
do agente na natureza.
Host range in vitro: conjunto de tipos de clulas de cultivo
susceptveis infeco por um determinado vrus.
Host-range in vivo: conjunto de espcies animais susceptveis a
um determinado agente. Pode-se referir a um host range natural
(infeces naturais) ou experimental (espcies susceptveis
infeco experimental).
Iatrognico: transmisso de um agente entre hospedeiros,
decorrente da realizao de procedimentos mdicos.
Icosaedro: estrutura geomtrica que consiste de 20 faces
triangulares arranjadas ao redor da superfcie de uma esfera.
Constitui-se na simetria fundamental de vrios vrus.
Icossomos: estruturas esferides encontradas associadas aos
prolongamentos citoplasmticos das clulas dendrticas e que
contm antgenos a serem apresentados aos linfcitos.
Imortalizao: denominao dada capacidade de algumas
clulas de cultivo de se multiplicarem indenidamente.
Importinas: protenas componentes do processo de importao
de protenas e outras molculas para o interior do ncleo
celular.
Imunidade: estado de resistncia adquirida de um hospedeiro a
um agente infeccioso.
Imunidade de mucosas: conjunto de mecanismos imunolgicos
localizados nas mucosas corporais.
Imunidade de populao (ou de rebanho): nvel e abrangncia
da imunidade contra um determinado agente existente em uma
determinada populao.
Imunidade passiva: imunidade recebida passivamente atravs
da placenta, pelo colostro/leite, ou pela administrao de soro
hiperimune. essencialmente humoral (anticorpos).
Imunizao: induo de imunidade.
Imunizao ativa: induo de imunidade pela exposio do
hospedeiro ao antgeno.
Imunizao passiva: induo de imunidade pela administrao
de anticorpos pr-formados (via placentria, colostral ou soro
hiperimune).
Imunoblot: tcnica de deteco de antgenos (ou anticorpos)
realizada em impresses do material suspeito em membranas.
Imunocitoqumica: tcnica imunoenzimtica de deteco de
antgenos em clulas.
Imunocomplexo: complexo molecular formado pela conjugao
de anticorpos com o antgeno especco.
Imunocromatograa: tcnica de deteco de antgenos (ou
anticorpos) baseada em cromatograa.
Imunodifuso em gel de gar (IDGA): tcnica de deteco de
anticorpos (e antgenos) que se baseia na migrao e precipitao
dos complexos antgeno-anticorpos em uma matriz de gar.
Imunoeletromicroscopia: tcnica de microscopia eletrnica que
utiliza anticorpos especcos para melhor localizar e marcar o
antgeno alvo.
Imunouorescncia: tcnica de deteco de antgenos que
utiliza anticorpos conjugados com uma substncia que emite
luminosidade uorescente quando excitada por luz ultravioleta.
Imunogenicidade: potencial de determinado antgeno de
estimular a resposta imunolgica do hospedeiro.
Imunogold: tcnica de microscopia eletrnica que utiliza
anticorpos marcados com micropartculas de ouro para melhor
localizar o antgeno alvo no material examinado.
Imunoistoqumica: tcnica imunoenzimtica de deteco de
antgenos em cortes de tecidos.
Imunopatologia: patologia celular ou tecidual resultante da
resposta imunolgica do hospedeiro.
Imunoperoxidase: tcnica imunoenzimtica de deteco de
antgenos (ou de anticorpos) que utiliza anticorpos marcados
com a enzima peroxidase.
Inativao: supresso da viabilidade atividade qumica ou
biolgica.
Incidncia: freqncia relativa de novos casos de uma doena
em relao ao tempo.
Indene: rea livre de uma determinada doena.
Infeco: penetrao e multiplicao de um agente infeccioso em
um organismo (ou em clulas de cultivo).
Infeco abortiva: infeco que no resulta em produo de
prognie viral, geralmente pela interrupo do ciclo replicativo
em alguma etapa.
Infeco aguda: infeco de durao limitada, algumas vezes
acompanhada de altos nveis de replicao.
Infeco disseminada: infeco que atinge vrios rgos e
tecidos do hospedeiro.
Infeco latente: infeco caracterizada pela permanncia do
genoma do agente no hospedeiro, com expresso gnica limitada
ou ausente e sem produo de prognie infecciosa.
Infeco localizada: infeco limitada a determinado stio, tecido
ou rgo.
Infeco persistente ou crnica: infeco que persiste por um
longo tempo.
Infeco persistente temporria: infeco cuja replicao viral
persiste por longo tempo, porm eventualmente cessa.
Infeco produtiva: infeco que resulta na produo de
prognie viral infecciosa.
Infeco sistmica: infeco disseminada por vrios rgos e
tecidos, geralmente disseminada pelo sangue.
Infeco subclnica persistente: infeco persistente sem
manifestaes clnicas perceptveis.
Inibio da hemaglutinao (HI): tcnica de deteco
de anticorpos que inibem a atividade hemaglutinante de
determinados vrus.
Inoquidade: ausncia de atividade (biolgica) deletria ao
organismo.
Insidiosa: infeco ou doena que se dissemina rapidamente
entre hospedeiros susceptveis.
Integrao: insero de um segmento de cido nuclico na
molcula de outro cido nuclico.
Integrase: enzima que catalisa a integrao de um segmento de
cido nuclico em outra molcula de cido nuclico.
Interferncia: inibio parcial ou completa da replicao viral
por outro vrus.
Interferons: grupo de peptdeos solveis sintetizados por clulas
infectadas e por clulas do sistema imunolgico. Possuem
atividade antiviral e/ou de modulao sobre a atividade de
outras clulas.
Interleucinas: substncias solveis (geralmente peptdeos)
produzidas por leuccitos e que modulam a proliferao e
funo de outras clulas.
Intermedirio replicativo: molcula de cido nuclico que se
constitui em um intermedirio da replicao do genoma dos
vrus.
Internalizao: etapa seguinte adsoro, na qual as partculas
vricas (ou os nucleocapsdeos) so internalizadas na clula.
Introns: seqncias intervenientes, no-codicantes, presentes na
maioria dos genes de eucariotas. So removidos dos transcritos
primrios pelo mecanismo de splicing.
In vitro: em Virologia, geralmente se refere ao sistema de
multiplicao viral em cultivos celulares.
IRES (Internal Ribosomal Entry Site): estrutura secundria
encontrada prxima extremidade 5 do RNA genmico de
alguns vrus e que necessria para o reconhecimento do
RNA pelos ribossomos da clula hospedeira para o incio da
traduo.
Isolado: vrus obtido a partir de hospedeiros infectados e que
ainda no foi caracterizado. O termo amostra tambm utilizado
para designar esses vrus.
Isolamento: obteno do agente infeccioso vivel e puro.
Glossrio 879
kb: quilobase, 1.000 nucleotdeos.
kDa: unidade de massa de protenas. Corresponde a 1.000
daltons.
Lagging (strand): cadeia descontnua de DNA sintetizada durante
a replicao semidescontnua do DNA cromossmico celular e
do genoma de alguns vrus.
Latncia: o mesmo que infeco latente.
Leading (strand): cadeia contnua de DNA sintetizada durante a
replicao semidescontnua do DNA cromossmico celular e do
genoma de alguns vrus.
Lentognica: denominao dada a amostras do vrus da doena
de Newcastle (NDV) pouco patognicas.
Letalidade: medida da mortalidade entre os animais que
desenvolvem uma determinada doena.
Ligase: enzima que catalisa a ligao entre extremidades
de molculas de cidos nuclicos. Linfcitos B: populao
de linfcitos envolvidos na resposta humoral (produo de
anticorpos) e que possuem molculas de imunoglobulinas como
marcadores de membrana.
Linfcitos T auxiliares: populao de linfcitos cuja funo
principal secretar interleucinas que estimulam e modulam a
resposta imunolgica celular e humoral. Possuem molculas de
TCR e CD4 como marcadores de membrana.
Linfcitos T citotxicos: populao de linfcitos cuja funo
principal identicar e destruir clulas infectadas por vrus.
Tambm secretam algumas interleucinas. Possuem o TCR e CD8
como marcadores de membrana.
Linhagem celular: populao de clulas homogneas derivadas
de clulas removidas de animais e cultivadas in vitro.
Linhagem contnua: linhagem de clulas homogneas e bem
caracterizadas, geralmente capazes de multiplicao innita in
vitro.
Lise celular: morte e desintegrao da clula causada pela
ruptura da membrana plasmtica.
Lisossomo: vescula intracelular que contm enzimas hidrolticas
envolvidas na degradao ou digesto de material internalizado
por endocitose ou fagocitose.
Luminmetro: aparelho que quantica a emisso de
luminosidade.
Macrfago: clula derivada dos moncitos sangneos cujas
funes principais so a fagocitose, digesto e reorganizao
tecidual, secreo de citocinas, processamento e apresentao de
antgenos a linfcitos T auxiliares.
Macropinocitose: pinocitose de macromolculas ou de partculas
grandes.
Matriz: camada protica, geralmente composta por mltiplas
molculas de uma nica protena, localizada entre o
nucleocapsdeo e o envelope de alguns vrus.
Maturao: etapa nal do ciclo replicativo, na qual as partculas
recm-formadas adquirem infectividade. Em alguns vrus,
ocorre concomitantemente com a morfognese.
Membrana plasmtica: membrana celular que delimita o
compartimento citoplasmtico e o separa do meio extracelular.
Tambm denominada membrana celular.
Memria imunolgica: propriedade que permite ao sistema
imunolgico reagir de forma e magnitude diferentes em
exposies subseqentes ao um mesmo antgeno.
Mesognica: denominao dada a amostras do NDV
medianamente patognicas.
Minicromossomo: estrutura semelhante aos cromossomos
celulares, formada pela associao do genoma dos poliovrus e
papilomavrus com protenas celulares chamadas de histonas.
Mistura fenotpica: mescla de componentes fenotpicos, sem a
ocorrncia de interaes genticas.
Molde (ou modelo): molcula de cido nuclico utilizada
como modelo para a sntese de uma molcula exatamente
complementar.
Monocamada (monocapa, tapete): camada nica e plana de
clulas, geralmente achatadas, que se multiplicam aderidas
superfcie de frascos de cultivo.
Monocistrnico: segmento de DNA ou RNA que contm apenas
uma regio codicante (cistron = gene).
Moncito: clula sangnea da linhagem mielide que origina
os macrfagos.
Monmero: unidade bsica que compe as macromolculas.
Morfognese: mecanismo de montagem das partculas vricas
a partir dos componentes pr-formados. Tambm denominada
reunio.
Motif (motivo) de DNA/RNA: seqncias especcas de
nucleotdeos localizadas prximas aos locais de iniciao da
transcrio dos genes. Servem de stios de reconhecimento e
ligao para os fatores de transcrio e RNA polimerase para o
incio da transcrio.
Motif (motivo) de protena: seqncia especca de aminocidos
ou estrutura tridimensional especca correlacionada com
alguma atividade ou funo.
mRNA: RNA mensageiro, molcula de RNA intermediria na
sntese protica.
mRNA policistrnico: RNA mensageiro que contm mais de
uma regio codicante.
mRNA subgenmico: RNA mensageiro com extenso menor do
que o genoma.
miRNA: RNA pequenos produzidos durante a infeco com
alguns vrus e que interferem com funes celulares e virais.
Multiplicidade de infeco (moi): nmero aproximado
de partculas vricas infecciosas por clula contida em uma
suspenso viral inoculada em cultivo celular.
Mutao: alterao da seqncia de nucleotdeos de uma
molcula de cido nuclico em comparao com a molcula
parental.
Mutao em ponto: substituio de um nucleotdeo na molcula
de cido nuclico, comparando-se com a molcula parental.
Mutao espontnea: mutao que ocorre naturalmente,
decorrente de erros da polimerase ou por fatores externos.
Mutao induzida: mutao induzida propositalmente pelo uso
de agentes qumicos ou fsicos.
Mutao letal: mutao que resulta na inviabilidade absoluta do
organismo que a possui.
Mutao missense: mutao pontual que resulta na codicao
de um aminocido diferente do original.
Mutao nonsense: mutao pontual que resulta na criao de
um cdon de terminao da traduo.
Mutao silenciosa: mutao pontual que no resulta na
alterao do aminocido codicado.
Mutagnese direcionada: mutao introduzida articialmente,
na qual se substitui os nucleotdeos desejados.
Mutante: organismo que possui uma ou mais mutaes no
genoma.
Mutante atenuado: vrus mutante que possui patogenicidade
e virulncia reduzidos em comparao com o organismo
parental.
Mutante condicional: vrus cujo fentipo mutante se manifesta
apenas em algumas condies.
Mutante de escape: vrus que possui mutao ou mutaes
que resulta na falha de reconhecimento de suas protenas de
superfcie por anticorpos neutralizantes do hospedeiro.
Mutante de gama de hospedeiro: vrus mutante que possui a
capacidade de infectar um conjunto de espcies hospedeiras
diferente do vrus parental.
Mutante de placa pequena: vrus mutante cuja replicao em
cultivos celulares resulta em focos menores de destruio celular,
comparando-se com o vrus parental.
No-citoptico: vrus cuja replicao em cultivo celular no
resulta em citopatologia aparente.
nested PCR: variao da tcnica de PCR em que um segmento
interno do produto da primeira reao reamplicado em uma
segunda reao.
Neuraminidase: glicoprotena do envelope de alguns vrus que
cliva a ligao dos vrions ao cido silico.
Neuroinvasividade: propriedade de invadir o sistema nervoso
central a partir de penetrao e replicao inicial em stios
perifricos.
Neurovirulncia: propriedade de replicar no sistema nervoso
central e causar doena neurolgica.
Neutralizao: supresso da capacidade infectiva.
Nvel de erro limitante: freqncia de mutao limite para a
viabilidade do organismo.
Northern blot: tcnica de deteco de RNA que se baseia
no princpio da hibridizao e utiliza oligonucleotdeos
complementares a seqncias da molcula alvo como sonda.
Nt: nucleotdeo de uma molcula de cido nuclico.
Ncleo celular: compartimento de clulas eucariotas que contm
o genoma e delimitado e separado do citoplasma por uma
membrana.
Nucleocapsdeo: estrutura formada pelo genoma viral associado
com protenas e revestida externamente pelo capsdeo.
Nucleoprotenas: protenas que se conjugam com o genoma
viral, formando o core (ou ncleo).
Nucleossomo: unidade estrutural da cromatina celular, formada
pelo DNA enrolado ao redor de uma massa cilndrica formada
pelas histonas.
Ncleo viral (core): estrutura compacta formada pelo genoma
associado com protenas.
Oligonucleotdeo: molcula linear formada por um nmero
limitado de nucleotdeos ligados entre si.
Oligossacardeo: polmeros pequenos de acar.
Oncogene: gene que codica uma protena capaz de induzir
transformao tumoral em clulas.
Oncognese: induo ou produo de neoplasias.
Oncognese insercional: induo de neoplasias pela insero do
genoma viral em cromossomos celulares, alterando a expresso
de genes envolvidos na induo ou represso da formao de
tumores.
Opsonizao: revestimento de partculas por determinadas
substncias (complemento, anticorpos) e que facilita a
fagocitose.
ORF (seqncia aberta de leitura): seqncia de nucleotdeos
de um gene ou mRNA que traduzida em protena; inicia-se em
Glossrio 881
um cdon iniciador (AUG) e termina em um cdon terminador
(UAA, UAG ou UGA).
rgos linfides secundrios: rgos linfides que servem
de locais de maturao e proliferao de clulas linfides em
resposta a antgenos.
Origem da replicao (ori): seqncia especca do DNA (ou
RNA) genmico que serve de stio de reconhecimento, ligao
e incio da replicao pelo complexo enzimtico envolvido na
replicao do respectivo genoma.
Ovo embrionado: ovo de galinha com embrio em
desenvolvimento.
Ovoscpio: aparelho utilizado para se examinar ovos
embrionados em desenvolvimento.
Palindrome: seqncia de nucleotdeos cuja ordem dos
nucleotdeos individuais a mesma em ambas as direes.
Pandemia: epidemia de propores continentais ou mundiais.
Panhandle: estrutura semelhante a um cabo de panela, formada
pelo pareamento de seqncias complementares localizadas nas
extremidades de molculas de DNA e/ou RNA.
Paraendmica: doena de ocorrncia rara, espordica.
Partcula Dane: partcula vrica completa, infecciosa, do vrus da
hepatite B.
Partcula defectiva: partcula vrica anmala, no-infecciosa,
produzida no ciclo replicativo de alguns vrus. Essas partculas
geralmente contm genomas defectivos em um ou mais genes e,
por isso, so capazes de replicar autonomamente.
Partcula infecciosa: partcula vrica infectiva, vivel, capaz de
infectar e replicar autonomamente uma clula susceptvel.
Partcula viral: o mesmo que partcula vrica, vrion.
Partcula vrica: o mesmo que partcula viral, vrion.
Passagem (de clulas): refere-se a cada subcultivo das clulas
cultivadas in vitro. Os termos repique e subcultivo tambm so
utilizados.
Passagem (de vrus): refere-se a uma etapa de multiplicao do
vrus em clulas de cultivo. Inicia com a inoculao e termina
com a coleta do sobrenadante contendo a prognie viral.
Dependendo do vrus e do intervalo entre a inoculao e a coleta,
cada passagem pode abranger mais de um ciclo replicativo do
vrus.
Patogenicidade: capacidade do agente de produzir doena nos
hospedeiros.
Pb: par de bases. Refere-se a unidades formadas pelo pareamento
entre duas bases complementares em molculas de cido nuclico
(DNA, RNA) de ta dupla.
PCR: tcnica de amplicao enzimtica de seqncias especcas
de cidos nuclicos pelo uso de enzimas polimerases.
PCR em tempo real: variao da tcnica de PCR em que os
resultados podem ser obtidos medida que o processo de
amplicao ocorre e no apenas ao nal, como na tcnica
tradicional.
PCR in situ: variao da tcnica de PCR utilizada para a deteco
e amplicao de cidos nuclicos diretamente em cortes de
tecidos.
Penetrao: etapa do ciclo replicativo dos vrus em que
o nucleocapsdeo ou o genoma ultrapassam a membrana
plasmtica e ganham acesso ao citoplasma celular. Pode ocorrer
na superfcie celular ou em vesculas endocticas ou fagocticas.
Peplmero: projeo protica presente na superfcie de alguns
vrions, formada por glicoprotenas virais.
Peptdeo: molcula linear composta por um nmero limitado de
aminocidos unidos entre si por ligaes peptdicas.
Perl eletrofortico: perl de migrao de segmentos de cidos
nuclicos ou protenas em eletroforese.
Perforinas: protenas presentes em clulas NK e linfcitos
T citotxicos que, quando secretadas, produzem poros na
membrana plasmtica das clulas-alvo.
Perodo de incubao: intervalo de tempo entre a infeco de um
hospedeiro e o incio dos sinais clnicos.
Perodo de incubao extrnseco: perodo de replicao do vrus
no artrpode vetor antes de poder ser transmitido pelo vetor.
Perodo de transmissibilidade (ou comunicabilidade): perodo
de excreo do agente pelo hospedeiro infectado.
Perodo pr-patente: perodo entre a infeco e o incio da
excreo do agente pelo hospedeiro recm-infectado.
Perodo prodrmico: perodo situado no nal do perodo de
incubao, quando o hospedeiro apresenta sinais inespeccos
de doena.
Permissividade: propriedade das clulas em permitir a ocorrncia
das etapas intracelulares da replicao viral.
Placa: foco localizado de alteraes morfolgicas ou destruio
celular produzido pela replicao viral em monocamadas de
clulas.
Placas de Peyer: acmulos linfides localizados na submucosa
do intestino delgado de mamferos.
Plasmdeos: molculas extracromossmicas de DNA,
geralmente circulares, encontradas em procariotas. Replicam
independentemente do DNA cromossmico.
Plasmcitos: clulas derivadas da proliferao e diferenciao
dos linfcitos B, especializadas na secreo de imunoglobulinas.
Polaridade negativa (sentido negativo): seqncia de
nucleotdeos que complementar a seqncia do RNA
mensageiro (que, por conveno, possui polaridade positiva).
Polaridade positiva: seqncia de nucleotdeos com o mesmo
sentido do RNA mensageiro.
Poliadenilao: adio de uma seqncia de adeninas (100-200)
extremidade 3 do RNA mensageiro.
Policistrnico: segmento de DNA ou RNA que contm mais de
uma regio codicante (cistron = gene).
Polimerases: enzimas que sintetizam cidos nuclicos (RNA,
DNA) a partir de um molde.
Polimerizao: adio seqencial de nucleotdeos durante a
sntese de molculas de DNA e RNA.
Poliploidia: presena de vrias cpias do genoma em um
organismo.
Poliprotena: protena extensa que clivada medida que vai
sendo produzida, originando protenas menores com funes
diversas.
Poliribossomos: agregados citoplasmticos de vrios ribossomos,
nos quais ocorre a traduo de RNAs mensageiros.
Pontos quentes (hot spots): locais do DNA ou RNA que
apresentam uma freqncia maior de mutaes do que o restante
do genoma.
Populao: grupo de indivduos no qual se est estudando
algum aspecto relacionado sade ou doena.
Populao de risco: parcela da populao que susceptvel a um
determinado agente ou doena.
Populao local: populao restrita geogracamente, cujos
indivduos componentes interagem entre si com certa
freqncia.
Portador: hospedeiro que abriga o agente e permite a sua
multiplicao sem manifestar sinais clnicos da infeco.
Portador ativo: portador que abriga e excreta o agente.
Portador passivo: portador que abriga, mas no excreta o
agente.
Prevalncia: freqncia relativa de um fator relacionado sade
ou doena em um determinado momento em uma populao.
Primases: enzimas capazes de iniciar a sntese de DNA a partir de
um molde, propriedade inerente a algumas DNA polimerases.
Primer: oligonucleotdeo (RNA ou DNA) que serve de iniciador
para a sntese de DNA.
Primovacinao: primeira administrao de um determinado
antgeno a um hospedeiro.
Procariota: organismo cujo material gentico no se encontra
separado do restante da clula por uma membrana.
Produto de PCR (amplicon): segmento de DNA ou RNA
amplicado por PCR.
Prognie viral: populao de vrions resultantes da replicao
viral.
Promotor: seqncia de nucleotdeos do DNA localizada
prxima ao local de iniciao da transcrio. Serve de stio de
ligao para os fatores de transcrio e/ou RNA polimerase.
Proofreading: sistema de correo de erros durante a
polimerizao (sntese) de cidos nuclicos, no qual as
polimerases removem nucleotdeos errados, eventualmente
incorporados, e os substituem pelos nucleotdeos corretos.
Protease: enzima que cliva e/ou degrada protenas.
Protease de cistena: protease que cliva protenas em locais onde
existem aminocidos do tipo cistena.
Proteo cruzada: proteo contra agentes heterlogos, porm
semelhantes, produzida pela imunizao com um determinado
agente.
Protena de matriz: protena estrutural que reveste internamente
o envelope de alguns vrus, mediando as suas interaes com o
nucleocapsdeo.
Protena de fuso: protena da superfcie dos vrions responsvel
pela fuso do envelope viral com a membrana celular e
a conseqente penetrao do material gentico na clula
hospedeira.
Protena endgena: protena produzida no interior da clula.
Protena estrutural: protena viral que faz parte da estrutura da
partcula vrica.
Protena exgena: protena de origem externa clula ou
hospedeiro.
Protena heterloga: protena estranha, de organismo diferente.
Protena imunodominante: protena com capacidade superior
de estimular o sistema imunolgico.
Protena integral de membrana: protena que se encontra
inserida em membranas celulares por meio de uma regio
transmembrana.
Protena motora: protena que participa dos sistemas de
transporte de macromolculas no interior das clulas.
Protena no-estrutural: protena viral que no faz parte da
estrutura da partcula vrica.
Protena perifrica de membrana: protena que se encontra
associada com membranas, sem, no entanto, possuir uma regio
transmembrana.
Protena terminal (TP): protena ligada covalentemente
extremidade 5 do genoma dos adenovrus.
Protena truncada: protena incompleta produzida pela
terminao precoce da traduo devido presena de um cdon
de terminao na regio codicante.
Glossrio 883
Protmero: unidade estrutural dos capsdeos, forma os
capsmeros.
Prova biolgica: teste diagnstico da raiva, em que camundongos
lactentes so inoculados pela via intracerebral com um
macerado de crebro de animais suspeitos de terem contrado
a enfermidade.
Provrus: molcula de DNA de ta dupla, em que uma das
cadeias exatamente complementar ao RNA genmico dos
retrovrus.
Pseudovrion: partcula vrica incompleta, no-infecciosa, dos
poliomavrus e de outros vrus.
Quarentena: perodo de isolamento e observao clnica de
hospedeiros, para vericar se se encontram no perodo de
incubao de uma doena infecciosa.
Quasispecies: populao heterognea de variantes virais que
compem uma populao de vrus. So tpicas de vrus RNA.
Quilobase (kb): unidade de cido nuclico que equivale a 1.000
bases.
Quimiotaxia: movimentao de clulas inamatrias atravs
dos tecidos em resposta a estmulos qumicos.
Quinase: enzima que fosforila determinados substratos.
Quinesina: protena componente de um dos sistemas
intracelulares de transporte de macromolculas.
Radioimunoensaio: tcnica de deteco de antgenos e
anticorpos que utiliza anticorpos especcos conjugados com
istopos radioativos.
Reao sorolgica cruzada: reao imunolgica do soro que
contm anticorpos contra um determinado agente, com antgenos
de outro agente antigenicamente semelhante.
Rearranjo: denominao genrica para alteraes na seqncia
e estrutura de molculas de cidos nuclicos. Essa denio
abrange inseres, duplicaes, delees e outras alteraes
genticas.
Reativao: retomada da replicao produtiva aps um perodo
de infeco latente.
Reatividade cruzada: o mesmo que reao sorolgica cruzada.
Receptor viral: molcula da superfcie celular que serve de stio
de ligao para os vrions.
Recombinao: intercmbio de seqncias genmicas entre dois
ou mais genomas.
Recombinao homloga: recombinao entre molculas de
DNA com seqncias semelhantes.
Recombinao intramolecular: intercmbio de seqncias
genmicas entre locais diferentes de uma mesma molcula de
cido nuclico.
Recombinante: organismo que contm no seu genoma material
gentico heterlogo, produto de recombinao.
Recrudescncia: ressurgimento de manifestaes clnico-
patolgicos de doena.
Refratariedade: estado de resistncia absoluta de uma espcie
animal a um agente infeccioso.
Regio conservada: seqncia de nucleotdeos (ou de
aminocidos) que pouco varivel entre os vrus pertencentes a
uma mesma espcie viral (ou entre diferentes vrus).
Regio regulatria: regio do genoma que contm promotores
e enhancers e que, por isso, est envolvida na regulao da
transcrio e expresso gnica.
Regio intergnica (IR): seqncia de nucleotdeos no-
codicante situada entre regies codicantes de genomas.
Renaturao: retorno conformao e estrutura nativa original
por molculas de cidos nuclicos e protenas previamente
submetidas desnaturao.
Replicao (de cido nuclico): sntese ou duplicao de uma
molcula de cido nuclico a partir de uma molcula parental.
Replicao abortiva: replicao viral interrompida em alguma
etapa do ciclo e que no resulta na produo de prognie
infecciosa.
Replicao primria: replicao viral que ocorre no incio da
infeco de um hospedeiro, geralmente em stios prximos ao
local de penetrao.
Replicao semidescontnua: mecanismo de replicao do DNA
em que a sntese de uma das molculas realizada de forma
contnua e a outra de forma descontnua.
Replicao viral: denominao genrica para o processo de
multiplicao dos vrus.
Replicase: enzima (polimerase de RNA) envolvida na replicao
do genoma de vrus RNA.
Replicativo intermedirio: molcula de DNA ou RNA que se
constitui em um intermedirio no processo de replicao do
genoma.
Replicon: molcula de cido nuclico que contm as informaes
para a sua prpria replicao.
Reprodutibilidade: propriedade de uma tcnica diagnstica
em produzir resultados reproduzveis ou idnticos quando
repetida.
Reservatrio: o mesmo que hospedeiro natural.
Resolvases: enzimas envolvidas na fase nal da replicao
do genoma de alguns vrus, em que as molculas-lhas so
individualizadas pela clivagem de multmeros ou de molculas
complexadas.
Resposta celular: resposta imunolgica mediada por clulas
efetoras.
Resposta humoral: resposta imunolgica mediada por
imunoglobulinas.
Resposta imune: conjunto de mecanismos efetores desencadeados
em resposta estimulao antignica.
Resposta imune adquirida: resposta imune montada ativamente
pelo hospedeiro em resposta exposio ao antgeno.
Resposta imune inata: conjunto de mecanismos inespeccos que
compem a defesa do organismo contra agentes patognicos.
Resposta imunolgica: conjunto de mecanismos moleculares e
celulares produzidos pelo sistema imunolgico do hospedeiro
em resposta a exposio a um determinado agente.
Resposta primria: resposta imunolgica montada pelo
hospedeiro em uma primeira exposio a um determinado
antgeno.
Resposta secundria: resposta imunolgica montada pelo
hospedeiro em reexposies a um determinado antgeno.
Ressortimento: evento de recombinao gentica caracterizada
pela troca de segmentos genmicos entre dois ou mais vrus
durante uma co-infeco. Ocorre somente em vrus que possuem
o genoma segmentado.
Retculo endoplasmtico: compartimento intracitoplasmtico,
local de sntese de certas protenas e em cujo lmen essas
protenas sofrem modicaes.
Retrgrado: relativo direo do transporte neuronal (das
extremidades dos axnios ou dendritos para o corpo neuronal).
Reverso virulncia: reaquisio do fentipo virulento por um
mutante viral atenuado.
Ribavirina: droga que possui atividade antiviral contra alguns
vrus RNA.
Ribonuclease: enzima que cliva e degrada molculas de RNA.
Ribonucleoprotena: complexo formado por RNA genmico e
protenas virais associadas.
Ribonucleotdeo redutase: enzima envolvida do metabolismo
de nucleotdeos para a sntese de DNA.
RNA: cido ribonuclico.
RNA antigenmico: RNA com sentido contrrio (complementar)
ao RNA genmico. Tambm chamado de RNA complementar
ou intermedirio replicativo.
RNA complementar: molcula de RNA com seqncia
complementar ao genoma (tambm denominado RNA
antigenmico).
RNA de polaridade negativa: RNA cuja seqncia no permite a
sua traduo direta pelos ribossomos (no contm as seqncias
codicantes de aminocidos). Tambm denominado RNA de
sentido negativo, RNA de cadeia negativa ou simplesmente RNA
negativo. Possui seqncia complementar ao RNA mensageiro.
RNA de polaridade positiva: RNA que traduzido diretamente
pelos ribossomos; possui sentido de RNA mensageiro
(contm as seqncias codicantes de aminocidos). Tambm
denominado RNA de sentido positivo, RNA de cadeia positiva
ou simplesmente RNA positivo.
RNA genmico: cido nuclico que constitui o genoma viral.
Esse termo utilizado para diferenci-lo de outros RNAs virais
produzidos durante o ciclo replicativo e que no so includos
nos vrions.
RNA intermedirio: molcula de RNA que serve de
intermedirio na replicao do genoma. Possui polaridade
inversa do genoma.
RNA mensageiro (mRNA): RNA intermedirio da sntese
protica. Produto da transcrio e de modicaes co e ps-
transcripcionais (adio do cap, cauda poliA, splicing). RNA apto
a ser traduzido em protena
RNA monocistrnico: molcula de mRNA que possui apenas
uma seqncia codicante (ORF). Contm apenas um gene.
RNA polimerases: enzimas que sintetizam RNAs a partir de um
molde DNA ou RNA.
RNA pol II: RNA polimerase celular que realiza a transcrio
dos genes que codicam protenas.
Sazonal ou estacional: padro de ocorrncia de uma doena,
em que variaes de incidncia ocorrem a intervalos anuais,
coincidentes com as estaes do ano.
SDS-PAGE: tcnica de anlise de protenas e de cidos
nuclicos (de baixo peso molecular), que se baseia na separao
eletrofortica das molculas em um gel de poliacrilamida.
Sensibilidade: capacidade da tcnica em detectar mnimas
quantidades do respectivo alvo (protena, cido nuclico, vrus
etc.).
Sentido negativo: o mesmo que polaridade negativa (RNA).
Sentido positivo: o mesmo que polaridade positiva (RNA).
Seqncia-alvo: determinada regio de uma molcula de DNA
ou RNA a ser amplicada por PCR. a seqncia compreendida
entre os dois primers.
Seqncia cis-acting: ver cis-acting.
Seqncia consenso: seqncia de nucleotdeos predominante
(ou mais freqente) em vrios isolados, amostras ou cepas de um
mesmo vrus ou em clones de um mesmo vrus.
Seqncia conservada: o mesmo que regio conservada.
Seqncia regulatria: denominao genrica para uma
seqncia de nucleotdeos que serve para a ligao de fatores
Glossrio 885
de transcrio e enzima polimerase para o incio da transcrio.
Signicado semelhante, porm mais abrangente e genrico do
que promotor e enhancer.
Seqenciamento: determinao da seqncia de nucleotdeos
de uma molcula de cido nuclico.
Shift antignico: alterao marcante no perl antignico de um
vrus, que resulta na falha de reconhecimento por anticorpos
produzidos contra o vrus original. Geralmente surge nos vrus
da inuenza, fruto de ressortimento entre dois vrus diferentes
com troca nos genes que codicam as glicoprotenas HA e NA.
Sinal de localizao nuclear (NLS): seqncia de aminocidos
presente em algumas protenas que as direcionam para o ncleo
da clula.
Sinal mitognico: sinal qumico (mediador) que determina o
incio dos processos bioqumicos celulares que culminam com
a mitose celular.
Sinccio: massa celular multinucleada resultante da fuso de
vrias clulas.
Sistema avidina-biotina: sistema de amplicao de sinal
utilizado em testes de deteco de antgeno (e anticorpos) para
aumentar a sensibilidade. Baseia-se na grande anidade e nos
vrios stios na biotina em que se ligam molculas de avidina.
Sistema complemento: ver complemento.
Sistema heterlogo: outra espcie de organismo (bactria,
levedura, clula de inseto).
Stios de privilgio: stios ou locais no organismo que
apresentam algum tipo de restrio ao acesso de clulas e
molculas envolvidas na resposta imunolgica.
Sonda: oligonucleotdeo sinttico ou fragmento de DNA ou
RNA conjugado com um marcador radioativo ou enzimtico
utilizado para detectar seqncias especcas de cidos nuclicos
em testes de hibridizao.
Soroconverso: produo de anticorpos contra um determinado
antgeno ou agente. Termo tambm utilizado para designar
um aumento nos nveis de anticorpos contra um determinado
antgeno ou agente.
Sorogrupo: grupo de vrus que induzem em seus hospedeiros
uma reatividade sorolgica cruzada entre si e que pode ser
distinguida sorologicamente de outros grupos.
Soro-hiperimune: soro animal que contm altos ttulos de
anticorpos especcos contra um determinado antgeno ou
agente.
Sorologia: denominao genrica de mtodos destinados a
detectar anticorpos especcos contra um agente em amostras
clnicas (geralmente soro).
Soro-neutralizao (SN): teste de deteco de anticorpos com
atividade antiviral neutralizante.
Soropositivo: indivduo que apresenta anticorpos especcos
para um determinado agente. Em algumas infeces, a
soropositividade do animal indica a presena da infeco.
Soroprevalncia: prevalncia de um determinado agente na
populao determinada pela deteco de anticorpos especcos.
a freqncia relativa de animais com anticorpos contra um
agente em um determinado momento em uma populao.
Sorotipo: vrus ou grupo de vrus cujos membros apresentam
reatividade sorolgica cruzada entre si e que podem ser
distinguidos sorologicamente de outros vrus ou grupos de
vrus.
Southern blot: tcnica de deteco de DNA que se baseia
no princpio da hibridizao e utiliza oligonucleotdeos
complementares a seqncias da molcula-alvo como sonda.
Splicing: mecanismo de processamento dos transcritos primrios
(RNA) resultantes da transcrio de genes descontnuos de
eucariotas, pelo qual os introns so removidos, e os exons so
religados entre si.
Splicing alternativo: mecanismo pelo qual um transcrito pode
originar diferentes mRNAs (e diferentes protenas) pela remoo
diferencial de introns e ligao entre diferentes exons.
Suabe: dispositivo composto por uma haste com material
absorvente na extremidade utilizado para coletar secrees
orgnicas para exames.
Subclnica: sem manifestaes clnicas perceptveis.
Substrato: composto qumico utilizado em testes
imunoenzimticos, que sofre alteraes qumicas pela ao de
enzimas.
Substrato cromognico: substrato que muda de colorao pela
ao de enzimas especcas.
Substrato luminescente: substrato que emite luminosidade pela
ao de enzimas especcas.
Sulfato de heparina: molcula pequena conjugada com protenas
de superfcie de clulas de uma diversidade de tecidos. Faz parte
do (ou se constitui no) complexo molecular utilizado como
receptor para alguns vrus.
Surto: o mesmo que epidemia.
Susceptibilidade: propriedade das clulas (ou do hospedeiro)
em permitir a infeco natural e multiplicao dos vrus.
Tapete celular: monocamada formada por clulas animais sobre
a superfcie dos frascos de cultivo.
Taq polimerase: DNA polimerase do organismo Thermophilus
aquaticus amplamente utilizada para amplicao de cidos
nuclicos in vitro.
TATA box: pequena seqncia de timidinas e adeninas localizada
prxima ao stio de iniciao da transcrio de inmeros genes e
que faz parte do promotor destes genes.
Taxa de morbidade: freqncia de doena causada por um
determinado agente em relao populao de risco exposta.
Taxa de mortalidade: freqncia de morte causada por um
determinado agente em relao populao de risco exposta.
Taxa de mutao: freqncia de mutao determinada pelo
nmero de mutaes introduzidas por unidade genmica a cada
ciclo de replicao.
Tegumento: substncia protica amorfa presente entre o
nucleocapsdeo e o envelope dos herpesvrus.
TCR: receptor de linfcitos T.
Tcnica sorolgica: tcnica de deteco de anticorpos.
Telomerase: enzima que replica as extremidades do DNA
cromossmico celular.
Template (molde ou modelo): molcula de DNA ou RNA
utilizada como molde (ou modelo) pelas polimerases para a
sntese de molculas exatamente complementares (molculas-
lhas).
Tendncia secular: padro de variao de doenas cuja incidncia
varia lenta e discretamente ao longo de grandes perodos.
Termociclador: aparelho utilizado para a tcnica de PCR. Produz
ciclos contnuos, constitudos por trs etapas, com temperaturas
diferentes, que proporcionam a ocorrncia das trs reaes:
desnaturao, anelamento e extenso.
Teste de Coggins: teste de imunodifuso em gar, utilizado
como teste ocial de diagnstico da anemia infecciosa eqina.
Teste sorolgico: teste de deteco de anticorpos.
Timidina quinase (TK): enzima que fosforila a timidina para a
sua incorporao a molculas de DNA.
Ttulo: medida relativa da quantidade de vrus infecciosos ou de
anticorpos presentes em um determinado material.
Ttulo viral: medida indireta do nmero de partculas vricas
infecciosas presentes em um material.
Titulao: mtodo de determinao do ttulo viral.
Tolerncia imunolgica: ausncia de resposta imunolgica
contra determinado antgeno.
Topoisomerase: enzima que altera o estado superenrolado
do DNA, geralmente promovendo um relaxamento do
tensionamento por clivagem de uma ou das duas cadeias.
Toride: forma semelhante a um fuso, porm sem a extremidade
alada.
Traduo: decodicao do cdigo gentico pelos ribossomos,
em que cada seqncia de trs bases (cdon) convertida em
um aminocido. Processo de sntese de protenas a partir da
seqncia de nucleotdeos do mRNA.
Trans-acting: produto cuja funo exercida distncia.
Transativador: protena celular ou viral que atua estimulando
ou favorecendo a transcrio de genes.
Transcrio: sntese de molculas de RNA de sentido positivo
(mRNA) a partir de um molde RNA ou DNA.
Transcrio reversa: sntese de molculas de DNA complementar
a partir de um molde RNA.
Transcriptases: enzimas virais responsveis pela transcrio do
genoma dos vrus RNA (replicases).
Transcriptase reversa: enzima viral que sintetiza DNA a partir
de um molde RNA.
Transcrito: molcula de RNA resultante da transcrio.
Transcrito associado latncia (LAT): transcrito RNA detectado
no ncleo de neurnios durante a infeco latente pelos
alfaherpesvrus.
Transcrito primrio: produto inicial da transcrio (RNA), antes
de qualquer modicao.
Transestadial: transmisso de agentes atravs de diferentes
estgios de desenvolvimento (em organismos que as possuem
em seu ciclo de vida).
Transfeco: introduo do genoma viral em clulas por meios
articiais para permitir a replicao.
Transformao: alterao morfolgica, bioqumica ou de padro
de diviso de uma clula.
Transformao tumoral: transformao celular com
caractersticas fenotpicas de clulas neoplsicas, tumorais.
Transgnico: organismo geneticamente modicado que contm
gene(s) heterlogo(s).
Transio: substituio de uma base purnica por outra purnica;
ou de uma pirimidina por outra pirimidina.
Translocao: transposio da membrana ou da separao
fsica entre compartimentos. Penetrao do genoma viral no
citoplasma ou no ncleo.
Transmisso area: transmisso de agentes por meio de aerossis
ou de pequenas partculas transportadas pelo ar.
Transmisso direta: transmisso de agentes pelo contato entre
as superfcies corporais.
Transmisso horizontal: transmisso de agentes entre
indivduos, proporcionada pela convivncia e contato.
Transmisso iatrognica: transmisso de agentes entre
hospedeiros por procedimentos mdicos.
Transmisso indireta: transmisso de agentes entre hospedeiros
por intermdio de seres animados ou de objetos inanimados.
Glossrio 887
Transmisso perinatal: transmisso de agentes da me para a
prognie durante ou nas proximidades do parto.
Transmisso transovariana: transmisso de agentes dos
progenitores para a prognie por meio dos gametas.
Transmisso transplacentria: transmisso de agentes da fmea
para os embries ou fetos atravs da placenta.
Transmisso vertical: transmisso de agentes dos progenitores
para a prognie.
Transporte antergrado: transporte de macromolculas do corpo
neuronal em direo s extremidades dos axnios ou dendritos.
Transporte axoplasmtico rpido: transporte rpido de
macromolculas ao longo de axnios.
Transporte retrgrado: transporte de macromolculas das
extremidades dos axnios ou dendritos em direo ao corpo
neuronal.
Transverso: mutao que resulta na substituio de uma purina
por uma pirimidina ou vice-versa.
Tripsina: enzima utilizada para individualizar clulas de tecidos
e de cultivo.
Tropismo: predileo de um vrus por determinadas clulas,
tecidos ou rgos.
Ubiquitina: protena celular utilizada como marcador para
protenas destinadas degradao.
Unidade formadora de placa: unidade de medida referente
quantidade de partculas infecciosas presentes em uma
suspenso viral.
Unidade transcripcional: segmento de DNA que abrange
a regio transcrita por um evento de iniciao, elongao e
terminao de transcrio.
UTR (NTR): regio no-traduzida do genoma.
Vacina: preparao de antgenos utilizada para induzir resposta
imunolgica especca no hospedeiro.
Vacina atenuada: vacina que contm o agente vivel, porm
com patogenicidade e virulncia reduzidas.
Vacina atenuada por deleo: vacina replicativa que contm
o agente atenuado pela deleo de genes envolvidos com a
virulncia.
Vacina com marcador antignico: vacina que induz uma
resposta sorolgica diferencivel da resposta induzida pela
infeco natural.
Vacina de protenas recombinantes: vacina constituda por
protenas virais produzidas em organismos recombinantes
(bactrias, leveduras).
Vacina de peptdeos sintticos: vacina constituda por peptdeos
sintticos (pequenas seqncias de aminocidos) correspondentes
aos epitopos imunodominantes do agente de interesse.
Vacina deletada: vacina que contm o agente com deleo em
um ou mais genes.
Vacina diferencial: o mesmo que vacina com marcador
antignico.
Vacina de DNA: vacina composta por molculas de DNA que
contm o gene da protena contra a qual se deseja produzir
resposta imunolgica.
Vacina inativada: vacina que contm o agente inativado,
invivel, no-replicativo.
Vacina monovalente: vacina que contm antgenos de apenas
um agente.
Vacina multivalente: vacina que contm antgenos de vrios
agentes.
Vacina morta: o mesmo que vacina inativada.
Vacina no-replicativa: vacina que no contm o agente
replicativo.
Vacina polivalente: o mesmo que vacina multivalente.
Vacina viva modicada: o mesmo que vacina atenuada.
Vacinao: imunizao ativa pela administrao de preparaes
de antgenos.
Vacinao perifocal: vacinao realizada em populaes de
indivduos localizadas ao redor de um foco de uma doena
infecciosa, para impedir que o agente se dissemine a partir do
foco.
Vacolo: vescula intracelular.
Vacuolizao: formao de vacolos intracelulares.
Variao antignica: variao nos componentes de superfcie
(epitopos) que so reconhecidos pelos mecanismos efetores do
sistema imunolgico (anticorpos e linfcitos T).
Variao cclica: variao na incidncia de uma determinada
doena que ocorre ciclicamente a intervalos maiores do que um
ano.
Variante viral: vrus com alguma diferena fenotpica em relao
ao vrus parental.
Variolao: procedimento emprico de imunizao de pessoas
contra a varola, em que crostas e lquido de vesculas de pessoas
doentes eram administrados a indivduos susceptveis para
imuniz-los.
Vazio sanitrio: perodo em que uma determinada rea,
propriedade ou instalao deixada sem animais para se
assegurar da inexistncia de possveis agentes patognicos
anteriormente presentes.
Veculo: o mesmo que fmite.
Velognica: denominao dada a amostras muito patognicas
do NDV.
Vetor bacteriano: bactria utilizada para carrear genes
heterlogos (virais) com ns vacinais.
Vetor biolgico: inseto que participa biologicamente da
transmisso de um agente infeccioso. O agente geralmente
amplicado ou desenvolve alguma fase do seu ciclo no
organismo do vetor para, ento, ser transmitido.
Vetor mecnico: inseto que participa apenas mecanicamente da
transmisso de um agente infeccioso.
Vetor vacinal: organismo que carreia genes heterlogos (de
outro organismo) e utilizado para imunizar hospedeiros.
Via de excreo: via pela qual os agentes infecciosos so
excretados do hospedeiro.
Via de penetrao: via pela qual os agentes infecciosos penetram
no hospedeiro.
Vigilncia epidemiolgica: conjunto de atividades utilizadas
para monitorar continuamente a situao epidemiolgica de
uma determinada doena em uma populao.
Viremia: presena de vrus no sangue.
Viremia ativa: viremia derivada da replicao viral em tecidos
do hospedeiro.
Viremia passiva: viremia derivada da introduo direta dos
vrus no sangue.
Viremia primria: viremia que se segue replicao primria.
Ocorre precocemente durante a infeco.
Viremia secundria: viremia derivada da replicao viral
nos rgos e tecidos-alvo. Ocorre mais tardiamente durante a
infeco.
Vrion: unidade estrutural dos vrus; partcula vrica completa,
infecciosa. Tambm denominada partcula viral.
Viroplasma: local intracelular de replicao e morfognese dos
vrus. O mesmo que fbrica viral.
Virose: denominao genrica das doenas causada por vrus.
Virossomo: estrutura citoplasmtica grande onde ocorrem vrias
etapas do ciclo replicativo dos reovrus. Contm protenas e
cidos nuclicos virais, capsdeos em diversas fases de maturao
e membranas celulares.
Virulncia: propriedade que se refere gravidade da doena
causada pelo agente.
Vrus atenuado: vrus com patogenicidade e virulncia reduzidas
(ou abolidas).
Vrus citoltico (ou ltico): vrus cuja replicao resulta em lise e
destruio celular.
Vrus citopatognico (ou citoptico): vrus cuja replicao
resulta em patologia celular (citopatologia).
Vrus com marcador antignico: vrus que possui uma
composio protica diferente do vrus parental e que, por isso,
induz no hospedeiro uma resposta sorolgica que pode ser
distinguida da resposta montada contra o vrus parental.
Vrus de campo: o vrus original que circula na natureza.
Constitui-se no vrus parental com o qual os mutantes e variantes
so comparados.
Vrus DNA: vrus que possuem o cido desoxirribonuclico
(DNA) como genoma.
Vrus emergente: vrus que assumiu importncia recentemente.
Vrus helper: vrus que complementa determinadas funes e
permite a replicao de vrus defectivos.
Vrus heterlogo: vrus de outra espcie viral ou outra cepa.
Vrus homlogo: vrus da mesma espcie viral e/ou mesma
cepa.
Vrus pH-dependente: vrus cuja fuso e penetrao na clula
hospedeira dependem da reduo do pH, ocorrendo em
compartimentos intracelulares.
Vrus pH-independente: vrus cuja fuso e penetrao na clula
hospedeira ocorrem independentemente de reduo de pH.
Vrus RNA: vrus que possuem o cido ribonuclico (RNA)
como genoma.
Vrus temperatura sensvel (TS): variante viral que no replica
com ecincia sob a temperatura corporal.
Vrus vetor: vrus utilizado para carrear informao gentica
(genes) de outros vrus ou organismos.
Vitronectina: componente protico de membranas plasmticas
celulares, utilizado como receptor ou co-receptor por alguns
vrus.
Zoonose: doena infecciosa transmissvel entre os animais e o
homem.
Western blot: tcnica imunoenzimtica de deteco de
protenas.

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