AGAR CHOCOLATE

THAYER MARTIN
AGAR SANGRE
AGAR Mac Conkey
CALDO TRIPTICASA SOYA
AGAR TIOGLICOLATO
Medio bifásico Ruiz Castañeda o monofásico
subcultivos ciegos
Medios selectivos, como SS (Salmonella-Shigella), XLD (Xilosa, Lisina y
Desoxicolato) o Hektoen.
o Medios muy selectivos, como BG (Verde Brillante) o BS (Bismuto-Sulfito)
Una placa de medio CIN (cefsulodina-irgasan-novobiocina) para Yersinia.
Una placa de medio Campy-BAP para Campylobacter.
agar CLED
medio Campy-BAP
medio Chapman-Manitol (Manitol-Sal
MEDIO DE KLIGLER Ó TSI
AGAR EMB
AGAR 110
AGAR MM

BACTERIAS FERMENTADORAS DE GLUCOSA

BACTERIAS PRODUCTORAS DE ACETILMETILCARBINOL Y PRODUCTOS
NEUTROS

El agar McConkey

Es un medio diferencial utilizado para la detección, aislamiento y enumeración de bacterias coliformes y

patógenas intestinales en aguas, productos lácteos y muestras biológicas. Su acción diferencial radica en
que las bacterias hábiles de fermentar lactosa provocan un descenso de pH, junto con una absorción del
colorante, surgiendo en la colonia el color rojo. Las colonias de bacterias que no fermentan la lactosa
quedan incoloras.

En cuanto a su composición por litro observamos 17 g de pancreático digestivo de gelatina; 1.5 g de

pancreático digestivo de caseína, 1.5 de peptona de tejido animal; 10 g de lactosa; 1.5 g de sales
biliares; 5 g de cloruro Sódico; 0.03 g de rojo Neutro; 0.001g de cristal Violeta; 13.5 g de agar; y un pH
de 7.1 (+ - 0.2º a 25º)

Los materiales que se usan son el polvo para la preparación de Agar McConkey, la pesa monoplano, el
reloj de vidrio, la espátula, el matraz erlenmayer, agua destilada, la varilla de agitación, guantes de
asbesto, el mechero, fósforos, una parrilla, algodón hidrófobo, y el uso de la autoclave.

La técnica que se sigue observa la lectura del envase del polvo de la preparación de Agar McConkey, de
modo que haya por 1litro de preparación 500 gramos de polvo de preparación para después tratarlo en
la autoclave durante 15 minutos a 121ºC; la colocación del reloj de vidrio sobre la pesa monoplano y se
tara; el peso de 5gr de polvo de preparación; la introducción del polvo pesado en el matraz erlenmayer
y la limpieza del reloj de vidrio con agua destilada que igualmente ha de verterse en el interior del
matraz a fin de mayor exactitud preparativa; la conducción de la preparación a aforo de 100ml con agua
destilada; el uso de guantes de asbesto; la colocación del matraz sobre la parrilla sobre el mechero
prendido; y el batimiento de la mezcla con la varilla de agitación y sin dejar que burbujee la mezcla. Tras
la preparación y retirada de la parrilla, se procede con algodón hidrófobo al entaponamiento del matraz,
a la colocación de papel sobre la boca del matraz y a su ajuste por medio de un elástico. En el papel ha
de reflejarse por escrito el tipo de medio de cultivo para luego conducirlo y depositarlo en la autoclave
durante 45 minutos. Finalmente, y como es obvio se procederá a su retirada de la autoclave.

El agar nutriente

Es un medio con fines generales para la siembra y el crecimiento de la mayoría de los microorganismos
poco exigentes. Su composición esta a base de 3 g de extracto de Carne de buey, 5 g de peptona
trípsica de gelatina, 15 g de agar, y un pequeño montante de cloruro sódico y glucosa, y agua destilada
hasta 1000 ml

El agar Levine

Es un medio que se utiliza para el aislamiento y la diferenciación de los Escherichia coli y

enterobacterias, fermentadores de lactosa y no fermentadores de lactosa, así como para la identificación
expedita de los albicans. En su composición por litro tenemos 10 g de peptona pancreática, 10 g de
lactosa, 2 g de fosfato Dipotásico, 15 g de agar, 15 g de eosina, 0.065 g de azul de metileno y un pH de
7.1 (+ - 0.2º a 25º).

El agar Chapman

Es un medio elegido para la decteccion de Staphylococcus patógenos en muestras de alimentos y otros

materiales a través de la técnica de filtración por membrana. En su composición observamos extracto de
carne de 1g, peptona trípsica de caseína de 5g, peptona de carne de 5g, cloruro sódico de 75g, D-
manitol de 15g, rojo fenol de 25g y agar de 15g.

El agar Papa Dextrosa

Es un buen medio para cultivar y enumerar levaduras y mohos partiendo de alimentos y demás
materiales. Así tenemos como muy ricos para el crecimiento de levaduras y mohos por su bajo rango de
pH, los hidratos de carbono por ej. En cuanto a su composición observamos 15g de agar, 20 g de
dextrosa y 4 g de infusión de patata.

El Agar Salmonella-Shigella

Es utilizado para el aislamiento de salmonelas y de Shigella de heces, de comestibles y de otros

materiales. En su composición por litro se observa 5 g de peptona de casina y carne, 5 g de extrato de
buey, 10 g de lactosa, 8.5 g de citrato de sodio, 8.5 g tiosulfato sodico, 1 g de citrato de hierro, 8.5 g de
sales Biliares, 0.025 g de rojo neutro- 0.025g 15 g de agar y 0.3 mg de verde brillante.

El agar Sabouraud
Esgrimido en la localización y aislamiento de hongos en muestras por la técnica de filtración por
membrana. Para que se de el crecimiento selectivo de hongos sobre bacterias en la muestra tiene que
darse una reacción ácida. En su composición por litro observamos 5 g de digestivo pancreático de
caseína, 5 g de peptona tejido digestivo, 40 g de dextrosa y 15 g de agar.

El agar Sangre

Medio de cultivo con fines generales para una gran amenidad de microorganismos circunscribiendo los
exigentes. Con el añadido de sangre, viene bien en el empleo de las reacciones hemolíticas. Este medio
esta libre de azucares reductores. En su composición por litro se le observa 15 g de digestivo
pancreático, 5 g de peptona de soja, 5 de cloruro sódico y 15 g de agar

El caldo Nutriente:

Es un medio muy generalista, asi es muy empleado para el crecimiento de microorganismos exigentes y
no exigentes. Asmismo, anotamos como los Clostridios y anaerobios adquieren crecimiento igualmente
en el momento que se incuban bajo condiciones de anaerobiosis. En su composición por litro se observa
17 g de digestivo pancreático de caseína, 3 g de digestivo papaico de harina de soja, 2.5 g de dextrosa,
5 g de cloruro sódico, y 2.5 g de fosfato Dipotásico.

El crecimiento de microorganismos en los distintos medios diferenciales

Observemos los casos del Staphylococcus aureus que crece en el agar Chapman, en el agar sabouraud y
en el caldo nutriente, mientras que no lo hace en el agar sangre, agar nutriente, agar mcconkey, agar
levine, agar papa dextrosa y agar salmonella-shigella. La escherichia coli que crece en el agar
sabouraud, agar sangre, caldo nutriente, agar nutriente, agar McConkey y agar levine, mientras que no
crece en el agar Chapman, agar papa dextrosa y agar Salmonella-Shigella.

El Agar Salmonella Shigella , también conocido como Agar SS, es utilizado para el aislamiento de
especies
de Salmonella y Shigella a partir de muestras clínicas y de alimentos.
El Agar Salmonella Shigela es una modificación del Agar Desoxicolato y Citrato descrito por Leifson. El
Agar Salmonella Shigella tiene un desempeño superior a otros medios para el aislamiento de especies de
Salmonella y Shigella. Ewing y Bruner encontraron que el Agar SS tiene la ventaja de que puede ser
utilizado con inóculos grandes de muestras clínicas en las que se pretende poner de manifiesto la
presencia de especies de Salmonella y Shigella caudill reporta resultados muy satisfactorios con el uso
del
Agar SS para el aislamiento de Shigella hormaeche y col. usaron el Agar SS junto con otros medios para
el aislamiento de Shigella como el agente causal de diarreas infantiles.
En este medio las sales biliares No. 3 y el verde brillante actúan como inhibidores de bacilos Gram
positivos, de la mayoría de bacilos coliformes y del swarming en Proteus spp., mientras que permiten el
crecimiento de Salmonella spp. El tiosulfato de sodio y el citrato férico permiten la detección de la
producción de H2S. La lactosa proporciona la fuente de carbohidratos, el rojo neutro y el verde brillante
actúan como indicadores de pH y el agar es agregado como agente solidificante.
pH 7.0 ± 0.2°C
Método:
Suspender 60 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa
disolución y hervir durante un minuto. Enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas Petri
estériles. No esterilizar en autoclave.
Procedimiento:
1. Recolectar las muestras en contenedores estériles o con hisopos estériles transportados en un
medio de transporte.
2. Sembrar las muestras por el método de la estría para obtener colonias aisladas,
3. Incubar las placas a 35-37 °C durante 24 a 48 horas y examinar el crecimiento.
Algunas cepas de Siguella spp. son inhibidas en este medio por lo que es recomendable utilizar
medios adicionales.
Las enterobacterias pueden ser diferenciadas en base a su capacidad de fermentar la lactosa . Las
especies de Salmonella y Shigella son no fermentadoras de la lactosa y forman colonias incoloras en el
Agar SS. Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro de hidrógeno desarrollan colonias
con
centro obscuro.
Los coloformes son parcialmente inhibidos. E. Coli produce colonias de color rosa a rojo y pueden
presentar una zona de precipitado. Las colonias de Enterobacter aerogenes son cremosas de color rosa.
Citrobacter y Proteus spp. Pueden crecer produciendo colonias con centros de color gris o negro debido a
la producción de H2 S. Enterobacter faecalis es parcialmente inhibido presentando colonias incoloras.
Almacenamiento: 2-30°C.
Caducidad: 5 años en frasco cerrado.
Presentación: Frasco con 450 g
Caja con 20 sobres para un litro
Medio preparado en paquete con 10 placas

Agar sangre (=TSA = Trypticase Soja Agar)

El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un
medio de uso general que permite el crecimiento
tanto de microorganismos exigentes como no
exigentes, que incluyen bacterias aerobias y
anaerobias, aunque no es medio de elección para
anaerobios. Permite visualizar reacciones
hemolíticas que producen muchas especies
bacterianas.

Tiene por base una fuente proteica (digeridos

trípticos, digeridos proteicos de soja) con una
pequeña cantidad de hidratos de carbono
naturales, cloruro sódico y 5% de sangre.

La aportación de caseina y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en muy

nutritivo por el suministro de nitrógeno orgánico, particularmente aminoácidos y péptidos de
cadena más larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran
varíedad de gérmenes aerobios y anaerobios que crecen rápidamente, así como los del
género Candida. Tambìén permite el crecimiento de algunos gérmenes exigentes como
estreptococos, pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella.

El cloruro sódico proporciona electrolitos esenciales. La adición de sangre de carnero

desfibrinada enriquece la base y lo hace un medio adecuado para realizar la prueba del
factor CAMP.

Permite así mismo determinar la capacidad de algunas bacterias de producir enzimas

extracelulares que actúan sobre los glóbulos rojos, ya sea por lisis completa (hemólisis beta,
produce un halo transparentealrededor de la colonia hemolítica), parcial (hemólisis alfa,
coloración verdosa alrededor de la colonia) o por ausencia de alteración (hemólisis gamma).

La producción de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales

como pH o atmósfera de incubación.
Las muestras que puedan contener Brucella o Neisseria deben incubarse en atmósfera
enriquecida en CO2.

Si se añade al medio el 0,5% de telurito potásico es muy útil par el cultivo y aislamiento
selectivo de Corynebacterium diphteriae, Candida albicans, Listeria y estreptococos.

formulación (según Becton Dickinson):

Digerido pancreático de caseina 15.0 g

Digerido papaico de haba de soja 5.0 g
Cloruro Sódico 5.0 g
Agar 15.0 g
Factores de crecimiento 1.5 g
Sangre desfibrinada de carnero 50.0 ml

fotografía: Dani Val

Chocolate Polyvitex (= Agar chocolate)

Este medio utiliza la misma base que el Ágar
Sangre. Antiguamente se añadían los hematies a
la base fundida y se elevaba la temperatura para
lisarlos parcialmente y que soltasen al medio sus
componentes. Esto daba al medio su habitual color
pardo chocolate.

El Agar chocolate es un medio destinado

principalmente al aislamiento de gonococos y
meningococos, pero en el que pueden crecer
muchos otros microorganismos exigentes. Con un
medio análogo a éste es con el que Thayer y
Martin han hecho sus primeros asilamientos
selectivos de gonococos, después de añadir antibióticos.

El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para el
crecimiento: el factor X o Hemina termoestable.

Otros factores, en particular el factor V (dicotín-adenina nucleótido) termosensible, que no se

encuentran en el Agar chocolate pueden aportarse en una mezcla químicamente definida: el
PolyViteX.

El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo de la mayor parte de los gérmenes
encontrados en patología humana o veterinaria.
La siembra de líquidos cefalorraquídeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc., es favorable
en este medio, pero está particularmente indicado para aislamiento de las Neisserias
patógenas y de los Haemophilus.

Aislamiento e identificación de Haemophilus

Los microorganismos del género Haemophilus se cultivan en Agar chocolate con PolyVitex.
Como en el caso del gonococo el cultivo es rápido y abundante sobre todo en atmósfera rica
en C02. Estos gérmenes encuentran en este medio los factores X y V necesarios para su
crecimiento. El diagnóstico de la serie al respecto puede conducirse de la manera siguiente:

Si se siembra en cuatro medios diferentes:

- Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X

- Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V)
- Agar chocolate (factor X)
- Agar chocolate con PolyVitex (factores X y V)

El recuadro que se da a continuación indica los resultados obtenidos en estas condiciones con
los principales Haemophilus:

H. parainfluenzae crece en Trypcase soja con PolyViteX (V) y en chocolate con

PolyViteX (V yX)
H. aphrophilus crece Chocolate (X) y en chocolate con PolyViteX (V yX)
H. influenzae, H. haemolyticus, H. aegiptius crecen en los 4 medios

otras pruebas que ayudan a diferenciarlos:

H. aegiptius aglutina hematies humanos (prueba en porta), H. influenzae no los

aglutina
H. haemolyticus da hemólisis en Agar con 5% de sangre de caballo

fotografía: Dani Val

Agar Mac Conkey

El agar MacConkey II es una medio selectivo y
diferencial para la detección de organismos
coliformes y patógenos entéricos.

Actualmente existen una gran cantidad de medios

diseñados para el aislamiento, cultivo e
identificaión de bacterias entéricas. El artículo base
sobre el agar MacConkey, uno de los primeros que
se desarrollaron, fue publicado en 1905 y contenía
una descripción detallada de su composición y de
los diferentes patrones de crecimiento obtenidos. Su composición se ha modificado en
numerosas ocasiones

Se partió de la idea de que las sales Biliares precipitan ácidos y que ciertos microorganismos
entéricos fermentan la Lactosa mientras que otros no lo hacen.

La fórmula del agar MacConkey II es de 1983 y se diseñó especialmente para mejorar su

capacidad de inhibir el "swarming" de Proteus spp y para alcanzar una definitiva
diferenciación entre fermentadores y no fermentadores de la Lactosa.

Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentración de sales Biliares, que inhiben el
crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relación con otros medios
similares. Se incluye también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram
positivas, especialmente estafilococos y enterococos.

La diferenciación de organismos entéricos se lleva a cabo con la combinación de Lactosa con

el indicador Rojo neutro.Se producen colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de
fermentar la Lactosa y colonias sin color en caso contario.

LECTURA:

colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentación de la Lactosa). Salmonella,

Shigella, Pseudomonas
colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas.
E. coli (rosa/roja), E. aerogenes (rosa y mucosa)

formulación (según Becton Dickinson):

Digerido pancreático de gelatina 17.0 g

Digerido pancreático de caseina 1.5 g
Digerido péptico de tejido animal 1.5 g
Cloruro Sódico 5.0 g
Agar 13.5 g
Lactosa 10.0 g
Sales biliares 1.5 g
Rojo neutro 0.03 g
Cristal violeta 0.001 g

Caldo de Tioglicolato
Es el caldo de enriquecimiento más utilizado en Microbiología.
Contiene 0,075 % de Ágar para evitar que las corrientes de convección transporten el
oxígeno de la superficie a toda la masa del caldo. El ácido Tioglicólico actúa como agente
reductor, disminuyendo aun más el potencial de óxido-reducción del medio.

Con el agregado de muchos factores nutrientes (Caseina, extractos de Levadura y Carne,

Vitaminas, etc), el medio permite el desarrollo de la mayor parte de las bacterias patógenas.

Hay distintas fórmulas modificadas en las que se han incluido otros componentes: un
indicador de óxido-reducción (Resazurina), Glucosa, Vitamina K1 y Hemina.

Agar Schaedler
Schaedler + 5% sangre de cordero.

Este medio reductor está particularmente

adaptado al cultivo de los gérmenes anaerobios.

La presencia de factores de crecimiento tales como

el extracto de levadura, la hemina y la vitamina
K3, así como la adición de la sangre de cordero,
permiten el crecimiento de especies exigentes.

Debido al elevado contenido en glucosa de este

medio, la intensidad de la hemólisis de los
estreptococos puede disminuir.

Sembrar lo más rápidamente posible la muestra a su llegada al laboratorio. Las muestras

deben ser transportadas en un medio que garantice la anaerobiosis (Portagerm tubo o
frasco).

Después de sembrar, colocar inmediatamente las placas en la jarra de anaerobiosis o bien en

sistema individual.

K-W (Kanamicina-Vancomicina)
Se utiliza para el aislamiento rápido de Bacteroides
sp.

Contiene 75 µg/ml de Kanamicina, que inhibe a la

mayoría de los bacilos aerobios, facultativos y
anaerobios excepto Bacteroides, y 7,5 µg/ml de Vancomicina, que inhibe a la mayoría de los
microorganismos GramPositivos.

Contiene también sangre "lacada" de conejo que permite la pigmentación precoz de los
Bacteroides sp pigmentados.

Muchas cepas de B. assaccharolyticus y B. gingivalis no crecerán en este medio debido a su

sensibilidad a la Vancomicina.

Las levaduras y otros microorganismos resistentes a la Kanamicina pueden crecer en este

medio, en consecuencia, debe realizarse una tinción Gram y confirmar la tolerencia al aire de
todos los organismos aislados

Thayer Martín Medio

Medio selectivo de Thayer-Martin para el aislamiento de neisserias patógenas.

Fundamento
Las dificultades que presenta la recuperación de N. gonorrhoeae y N. meningitidis de los materiales clínicos, se
deben a las exigencias nutricionales de estos microorganismos, y en los materiales de origen genital, oral o
anal, al desarrollo invasor de la abundante flora saprófita. El medio de Thayer-Martin permite el correcto
aislamiento y recuperación de las neisserias patógenas dentro de las 24 h, con una ausencia casi total de
contaminantes. El medio de cultivo se prepara a partir del Agar Base GC, con el agregado de hemoglobina, un
suplemento de enriquecimiento (Britalex) y una mezcla antimicrobiana (VCNT: Vancomicina, colistina, nistatina
y trimetoprima).

Composición

1. Agar Base GC:

Este medio de cultivo se emplea como medio basal para la preparación del medio Thayer Martin original o
modificado y agar chocolate con o sin enriquecimiento.

Fórmula (en gramos por litro)

Pluripeptona 15.0

Almidón soluble 1.0

Fosfato dipotásico 4.0

Fosfato monopotásico 1.0

Cloruro de sodio 5.0

Agar 15.0

pH final: 7.2 ± 0.2

Presentación
x 100 g Código: B02-157-05
x 500 g Código: B02-157-06
3 frascos por 50 ml doble concentración, estéril y listo para usar

2. Hemoglobina:
Polvo preparado a partir de sangre vacuna. Este enriquecimiento también es adecuado para el cultivo de
Haemophilus Influenzae y estreptococos. Se recomienda preparar una solución acuosa al 2% para agregar el
agar base GC. Puede esterilizarse en autoclave, pero en tal caso no es adecuada para la observación de la
hemólisis bacteriana.

Presentación
x 100 g Código: B01-003-05
x 500 g Código: B01-003-06
3 frascos por 50 ml de solución estéril de hemoglobina al 2%

3. Britalex:
Suplemento estéril liofilizado usado para enriquecer los medios de cultivo, para el aislamiento de bacterias
nutricionalmente exigentes. Es particularmente recomendado para enriquecer el agar chocolate para el
aislamiento de N. gonorrhoeae, N. meningitidis y Haemophilus influenzae. Se lo utiliza a una concentración final
del 1% en el medio líquido o sólido. Se lo agrega asépticamente al medio esterilizado en el autoclave y enfriado
a 50°C.

Vitamina B12 0.01

L-Glutamina 10.0

CIH Guanina 0.03

Adenina 1.0

Ac. p-aminobenzoico 0.013

L-Cistina 1.1

NAD (Coenzima I) 0.25

Cocarboxilasa 0.1

Nitrato férrico 0.02

CIH Tiamina 0.003

CIH Cisteína 25.9

Glucosa 100.0

Presentación

3 frascos por 2 ml de britalex liofilizado B03-600-21

Disolver con 2,1 ml de solvente estéril. Conservar entre 2-10°C.

4. Mezcla antimicrobiana VCNT:

Se la utiliza en la preparación del medio T.M. como inhibidora de los organismos contaminantes. Cada ml de la
solución, agregado a 100 ml de medio de cultivo da una concentración final de:

Vancomicina 3.0 µg/ml

Colistina 7.5 µg/ml

Nistatina 12.5 U/ml

Trimetoprima 5.0 µg/ml

Presentación
3 frascos por 2 ml de vcnt en polvo. B03-605-21
Disolver con 2.1 ml de solvente estéril

Preparación
Medio Thayer Martin modificado listo para usar Fundir el contenido de un frasco de 50 ml de Agar Base GC
doble concentración y enfriarlo a 50°C. Reconstituir el Britalex y el VCNT con 2,1 ml de solvente cada uno.
Adicionar asépticamente la solución de hemoglobina, 1 ml de VCNT y 1 ml de BRITALEX a la base GC doble
concentración. Conservar el resto de VCNT y Britalex recién preparados en congelador (estable 15 días a
-20°C). Mezclar para homogeneizar. Distribuir unos 10 ml por placa y dejar solidificar. Las placas pueden
conservarse en heladera por 3 semanas, sin perder su potencia inhibidora.

Siembra
Sembrar inicialmente el material con hisopo o ansa sobre un tercio de la superficie de la placa, estriando el
resto de la superficie para obtener colonias aisladas.

Incubación
Incubar las placas a 35-36°C en recipientes con cierre hermético, en cámara húmeda y atmósfera de CO2,
durante 18 a 72 h. En la mayoría de los casos se obtiene un crecimiento precoz y abundante entre las 18 y las
24 h.

Identificación
Las colonias de gonococos y meningococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente opacas,
grisáceas, convexas, de 1-4 mm de diámetro. Luego de 48 h de incubación pueden transformarse en colonias
mucoides. Coloración de Gram: diplococos Gram negativos. Se sugiere proseguir con este esquema de
identificación.

Microorganismos T.M. T.M. A.N C22°C OXI GLU MAL

N. gonorrhoeae + + - - + + -

N. meningitidis + + - - + + +
Acinetobacter - + + + - -* -
 spp.

Neisseria spp. - + + + + V V

Moraxella spp - + V V + - -
Moraxella
(Branhamella) - + + + + - -
catarrhalis
T.M. medio Thayer Martin (CO2); A. Cho: Agar chocolate (CO2); A.N.: agar o caldo nutritivo; C22°C: desarrollo
a 22°C; OXI: oxidasa; GLU: fermentación de glucosa; MAL: fermentación de maltosa; + = reacción positiva; -
= reacción negativa; V = reacción variable. * La mayoría de las especies de Acinetobacter pueden usar glucosa
por la vía oxidativa.

Observaciones
No se recomienda el uso del medio selectivo T.M. para la siembra de LCR, ya que de estar presente, N.
gonorrhoeae y N. meningitidis u otras neisserias, será en cultivo puro. En tal caso, se recomienda agar
chocolate adicionado con Britalex.

Presentación de equipo Thayer-Martin

x 60 det Código: B08-207-45

CONTENIDO
Género Staphylococcus
Taxonomía
El género Staphylococcus ha sido encuadrado recientemente en el Volumen III de la
segunda edición del Manual Bergey de Bacteriología Sistemática, en la sección de
"Bacterias Gram positivas con bajo porcentaje de contenido en G+C". Este género
pertenece a la familia Staphylococacceae, la cual agrupa otros 3 géneros de nula
importancia médica (Gemella, Macrococcus y Salinicoccus). Dentro del género
Staphylococcus hay 48 especies, siendo las más importantes desde el punto de vista
clínico las siguientes:
· Staphylococcus aureus,
· Staphylococcus epidermidis, y
· Staphylococcus saprophyticus
El microorganismo más importante por su patogenicidad es Staphylococcus aureus que
se caracteriza por poseer una enzima que coagula el plasma: la coagulasa. Esta prueba
permite distinguir a S aureus del resto de especies de estafilococos que aparecen
clínicamente, que no poseen dicho enzima.
Los estafilococos que no pertenecen a ninguna de las especies anteriores se informan en
el laboratorio como estafilococos coagulasa negativos (SCN) y se relacionan en la tabla
siguiente para su mero conocimiento.

Características microscópicas y de tinción

Las bacterias pertenecientes a esta especie son cocos, con forma casi esférica. Forman
masas arracimadas, viéndose como bacterias Gram positivas . No tienen flagelos, no
forman esporas y excepcionalmente pueden tener cápsula.En los cultivos viejos los
estafilococos pueden aparecer como bacterias Gram negativas.
Características de cultivo
Son poco exigentes en sus necesidades; crecen bien en cualquier medio ordinario,
aunque lo hacen mejor en los medios enriquecidos. Son aerobios y anaerobios
facultativos, con una temperatura óptima entre 30-37ºC.
Una particularidad de los miembros de este género es que crecen en medios con una
concentración de ClNa que no soportan el resto de los microorganismos (bacterias
halófilas). Esto permite la creación de medios de cultivo casi específicos para los
estafilococos.

Las colonias son visibles fácilmente, sobre todo en agar sangre, con forma redonda y
aplanada, bordes netos, superficie lisa y brillante, consistencia variable, sin olor y en
algunas ocasiones, hemolíticas.
Algunas cepas pueden producir un pigmento carotenoide que les da una coloración
amarillenta (S. aureus). La producción de este pigmento es mucho más evidente en agar
chocolate o a temperatura ambiente.
En caso de partir de una muestra con flora polimicrobiana, será conveniente utilizar
medios diferenciales o inhibidores que nos permitan evitar el crecimiento de aquellos
microorganismos no deseados, o visualizar mejor las colonias de S. aureus cuando éstas
aparezcan en el medio.

Entre los medios específicos para su recuperación tenemos el medio de Chapman, que
posee manitol y una alta concentración de ClNa. El ClNa impide el crecimiento de otros
microorganismos, y el manitol, al ser metabolizado por el S. aureus, proporciona un pH
ácido al medio que provoca el cambio de color del indicador rojo fenol, haciendo que
las colonias tengan un color amarillo sobre un fondo rosado (el del medio de Chapman).
El medio de Baird-Parker permite el crecimiento de estafilococos y otros gérmenes
Gram positivos, presentándose las colonias de S. aureus negras, brillantes, convexas, y
rodeadas de un halo brillante de 2 a 5 mm de diámetro.

El agar sangre con inhibidores (ANC) también se utiliza para la recuperación de este
microorganismo apareciendo las colonias de la misma manera que lo hacen en agar
sangre.
En C.L.E.D. las colonias de S. aureus aparecen con una coloración amarillenta no
debida a la pigmentación, sino a la fermentación de la lactosa que lleva incorporada el
medio y al cambio de color del indicador.
El agar DNasa contiene DNA, y se utiliza para detectar la presencia de
desoxirribonucleasa en bacterias. S. aureus producirá una lisis del DNA presente en la
placa si posee este enzima, con el consiguiente aclaramiento del medio.

Enfermedades producidas por los estafilococos

Los estafilococos son parte de la flora bacteriana normal de piel, mucosas y tracto
respiratorio superior. Sin embargo en determinadas ocasiones son capaces de
lesionar gravemente al huésped dando lugar a diversos cuadros infecciosos, entre
los cuales destacan:
- Absceso cutáneo: foco localizado de infección en la piel,
- Síndrome de piel escaldada ( dermatitis exfoliativa ),
- Bacteriemia: paso del gérmen a la sangre a partir de un foco dérmico,
- Endocarditis: infección de válvulas cardiacas,
- Osteomielitis: infección del hueso,
- Neumonía: 2ª a gripe o a bacteriemia,
- Infecciones urinarias: más frecuentes en mujeres,
- Conjuntivitis: infección de la conjuntiva, y
- Síndrome del shock tóxico: en mujeres que utilizan tampones absorbentes.
Las toxinas estafilocócas responsables de la mayor parte de los efectos
perjudiciales de estos gérmenes sobre el huésped son:
- Hemolisinas y leucocidina (actúan sobre células sanguíneas)
- Enterotoxinas (responsables de las toxiinfecciones alimentarias)
- Exfoliatina (responsable del síndrome de piel escaldada)
- Exotoxinas pirógenas (productoras de hipertermia)
- Enzimas estafilocócicas: Coagulasa, hialuronidasa y estafiloquinasa.
La inmunidad que dejan las infecciones estafilocócicas es generalmente escasa y poco
duradera.
Géneros Streptococcus y Enterococcus
Taxonomía
Los cocos Gram positivos con agrupamiento celular en cadena (estreptococos) son uno
de los gruposde bacterias más importantes que podemos encontrar en el laboratorio.
Incluidos hasta 1984 en la familia Streptococcaceae, han sufrido primero una
desaparición como familia y una posterior reaparición en 2001 con escisión en dos
familias independientes: Streptococcaceae y Enterococcaceae.
Hasta esa fecha, se consideraban miembros de la familia Streptococcaceae todos
aquellos microorganismos con morfología cocácea o cocobacilar, que daban positiva la
tinción de Gram y negativa la prueba de la catalasa.

Características microscópicas y de tinción

Los miembros de estos géneros son bacterias cocoides Gram positivas que generalmente
se presentan formando cadenas de longitud variable, sobre todo cuando se cultivan en
medios líquidos. En ciertas condiciones de crecimiento las células bacterianas pueden
alargarse, semejando bacilos al microscopio.
Cuando se realiza una tinción a partir de una colonia procedente de un medio sólido, es
muy frecuente ver agrupamientos en forma de racimos, lo cual deberemos tener muy en
cuenta para no caer en la tentación de identificarlos rápidamente como estafilococos.
Los estreptococos no tienen flagelos ni forman esporas, aunque frecuentemente pueden
presentar una cápsula .

Caracteristicas macroscópicas y culturales

Son aerobios y anaerobios facultativos, creciendo ligeramente mejor en atmósfera de
CO2 al 10%. Crecen bien a 35-37ºC, aunque algunas especies pueden hacerlo
perfectamente entre 10 y 50ºC.
Los miembros del género Streptococcus son muy exigentes en cuanto a requerimientos
nutritivos, necesitando casi siempre sangre entera o calentada para su crecimiento. En
estos medios crecen lentamente, formando colonias muy pequeñas, apenas visibles a
simple vista, planas, consistentes, que suelen acompañarse de halos hemolíticos alfa o
beta.
Sin embargo, las especies del género Enterococcus, son menos exigentes, pudiendo
desarrollarse en medios carentes de sangre.
En ocasiones se emplean caldos selectivos de enriquecimiento para potenciar el
crecimiento de esta flora y disminuir el de la acompañante. ( P. ej.: Todd Hewitt, bio-
Streptosel, caldo SF, etc.).
Pueden utilizarse también medios inhibidores compuestos por agar enriquecido mas
antibióticos que impidan el crecimiento de otros gérmenes. Un medio muy utilizado es
el agar sangre CNA (con base Columbia o TSA y Ac. nalidíxico y Colistina).

- Según sus antígenos específicos ( grupos de Lancefield):

Los estreptococos poseen unos antígenos específicos de naturaleza hidrocarbonada, que
pueden ser
puestos de manifiesto mediante diversas técnicas inmunológicas, como la aglutinación.
Los antígenos se nombran con letras del alfabeto correlativas desde la A hasta la V.
Además existe un grupo denominado de estreptococos no agrupables donde se incluyen
aquellas especies en las que no ha podido ser demostrado ninguno de estos antígenos.
Los grupos antigénicos más importantes son los grupos A, B y D, seguidos de C, F y G.
Algunos estreptococos, como S. pneumoniae no poseen antígenos de Lancefield
demostrables.
Los estreptococos no agrupables y alfa hemolíticos se conocen con el nombre de
estreptococos viridans, denominación que no identifica a una especie sino a un conjunto
de ellas.
- Según sus diferencias fisiológicas y bioquímicas:
Aquí tendríamos que establecer las diferencias entre las 65 especies que componen este
género.
Para ello se utilizan galerías de identificación específicas, como la galería API Strep que
posee más de 20 pruebas bioquímicas y permite la diferenciación de cocos Gram
positivos catalasa negativos.

Rutina de identificación de estreptococos:

• El proceso de identificación comienza con la observación de colonias formadas

por cocos Gram positivos dispuestos en cadenas cortas o pequeños
agrupamientos, que dan negativa la reacción de la catalasa.
• El medio de aislamiento es, en la mayoría de las ocasiones, agar sangre, aunque
puede ser otro sin sangre, como el medio CLED. En este segundo caso debemos
investigar el tipo de hemólisis mediante un nuevo pase a agar sangre.
• Si la hemólisis es total (beta), se efectuará un análisis antigénico para verificar la
existencia de estreptococos de los grupos A, B, C, D, F y G mediante un
procedimiento de aglutinación en placa. Si el resultado es positivo la
identificación solo requerirá una confirmación bioquímica para quedar
concluida, salvo para el grupo D, en el que será necesario establecer si el
microorganismo es o no un enterococo, asi como su especie.

Si el aislamiento primario no hubiese sido hecho en agar sangre, deberíamos resembrar

una colonia en este medio, para verificar el tipo de hemólisis producido, a la vez que en
la placa se realizan pruebas de susceptibilidad frente a bacitracina, optoquina y SXT. La
utilidad de la penicilina como diferenciadora entre los enterococos y los no enterococos
no es efectiva en la actualidad debido al elevado número de cepas de estreptococos del
grupo D resistentes a este antimicrobiano.

Prueba de la susceptibilidad a la Optoquina positiva para S. pneumoniae

Simultáneamente se inoculan medios para detectar la capacidad del microorganismo
para hidrolizar la esculina, el hipurato de sodio y el PyR.
En caso de llegar a una identificación presuntiva de Streptococcus pneumoniae, debe
hacerse la confirmación mediante una prueba de aglutinación en porta.

Agar bilis esculina positi