31/5/2014

Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso Climtico |

UNIVERSIDAD
ALAS
PERUANAS
CURSO DE MICROBIOLOGA - INFORME
SOBRE UROCULTIVO

Profesor: Gerson LLallico Manzanedo
Alumno: Paul Arturo Boza Huaroc
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 2


TABLA DE CONTENIDO
Breve Marco Terico .................................................................................................................................... 6
1) Infeccin urinaria: ........................................................................................................................... 6
1.1 Definiciones.................................................................................................................................... 6
2) Agentes etiolgicos: ....................................................................................................................... 6
3) Patogenia ........................................................................................................................................ 7
4) MECANISMOS DE VIRULENCIA: ...................................................................................................... 8
5) MANIFESTACIONES CLNICAS (Anexo 1) ........................................................................................ 9
DIAGNOSTICO MICROIOLLOGICO DE LA INFECCIN URINARIA............................................................... 11
1) OBTENCION DE LA MUESTRA ....................................................................................................... 11
RECOMENDACIONES: ......................................................................................................................... 11
Mtodos para la obtencin de la muestra de orina - (Anexo 2) ........................................................ 11
Solicitud de examen al laboratorio ..................................................................................................... 12
2) TRANSPORTE DE LA MUESTRA ..................................................................................................... 12
3) PROCESAMIENTO EN LABORATORIO ........................................................................................... 12
4) Tests de screening rpidos ........................................................................................................... 13
A) Examen microscpico del sedimento urinario .......................................................................... 13
B) Tira reactiva de orina ................................................................................................................ 13
C) Tincin de Gram directa de la muestra ..................................................................................... 13
5) Urocultivo ..................................................................................................................................... 14
A) Siembra microbiolgica ............................................................................................................ 14
B) Incubacin ................................................................................................................................. 14
C) INTERPRETACIN DEL UROCULTIVO ......................................................................................... 14
INFORME SOBRE EL PROCEDIMIENTO DE PRCTICA UROCULTIVO REALIZADO EL DA 27/MAYO/2014
.................................................................................................................................................................... 15
1) EXAMEN FSICO DE LA MUESTRA DE ORINA ................................................................................ 15
2) EXAMEN DE SEDIMENTO DE LA MUESTRA DE ORINA ................................................................. 15
3) TINCIN DE GRAM EN FRESCO ..................................................................................................... 16
RESULTADO ........................................................................................................................................ 17
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 3

4) Presencia de Antimicrobiano Residual: PAR test (Ver ANEXO 7)....................... 17
RESULTADO ........................................................................................................................................ 17
5) Cultivo ........................................................................................................................................... 17
RESULTADO ........................................................................................................................................ 18
SOLUCIN DEL CUESTIONARIO .................................................................................................................. 19
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS................................................................................................................... 22
Anexos ........................................................................................................................................................ 22


U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 4



INTRODUCCIN:
En el siguiente informe de
prctica se explicara la
definicin de una infeccin
urinaria, los agentes etiolgicos,
la patogenia, mecanismos de
virulencia, manifestaciones
clnicas y el diagnostico en el
laboratorio orientado hacia la
microbiologa, y de esta forma
dar un diagnostico final.
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 5




OBJETIVOS:
Expandir y comprender los
fundamentos aplicados en
los procedimientos
aplicados en un urocultivo.

Registrar
los procedimientos que se
realizaron en la prctica el
27 de mayo del 2014.


Presentar el cuestionario
resuelto.


U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 6

BREVE MARCO TERICO
1) INFECCIN URINARIA:

Se considera infeccin urinaria a la presencia de bacterias en sectores
normalmente estriles del aparato urinario, con la consiguiente
respuesta inflamatoria. Las infecciones urinarias (IU) constituyen una
patologa muy frecuente, de elevada morbilidad, en muchos pacientes
son recurrentes o pueden determinar complicaciones graves como
sepsis o secuelas importantes, como dao renal. Desde el punto de vista
anatmico, cabe recordar la divisin del tracto urinario en dos sectores,
alto (riones, pelvis renales y urteres) y bajo (vejiga y uretra). (1)
1.1 DEFINICIONES
Bacteriuria: presencia de bacterias en la orina.

Bacteriuria sintomtica o asintomtica: segn se acompae o no
de sntomas vinculados al aparato urinario.

Bacteriuria significativa: nmero de bacterias por mililitro de orina
que se corresponde estadsticamente con una infeccin urinaria.
En los aos 50, Kass defini el recuento de 100.000 o ms
colonias por ml de orina (105 ufc/ml) como criterio de bacteriuria
significativa, o sea indicadora de IU verdadera. Este criterio fue
establecido comparando el nmero de bacterias por ml de orina
en muestras obtenidas por puncin suprapbica (PSP) y chorro
medio en mujeres con pieloniefritis sintomtica. Con el correr del
tiempo, otros autores han propuesto niveles menores para el
diagnstico de bacteriuria significativa, en ciertas poblaciones de
pacientes sintomticos, por ejemplo 103 ufc/ml y 102 ufc/ml.
Bajos recuentos bacterianos podran deberse tambin a IU por
cocos grampositivos, diuresis forzada, antimicrobianos
suministrados previamente, contaminacin de la muestra, o
muestras tomadas muy al inicio de la enfermedad. Es importante
recordar que tambin se observan recuentos bajos en IU
adquiridas por va hematgena. (1).

2) AGENTES ETIOLGICOS:
En la gran mayora de los casos, se trata de infecciones monomicrobianas y
predominan los bacilos gramnegativos. Los agentes pueden variar segn la
edad, sexo y patologa subyacente. El agente ms frecuente es Escherichia coli.
En las infecciones de pacientes ambulatorios predomina E. coli, seguido de
Klebsiella spp., Proteus spp. y otros bacilos gramnegativos y cocos
grampositivos, como S. saprophyticus, Enterococcus spp. y Streptococcus
agalactiae. Proteus spp. Suele asociarse a anomalas de la va urinaria,
especialmente litiasis. Ms raramente Haemophilus influenzae se asla de
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 7

infecciones comunitarias. En infecciones hospitalarias, pacientes con
enfermedad urolgica subyacente o portadores de sondas, la frecuencia
relativa de E. coli disminuye y se aslan Pseudomonas spp., otros bacilos
gramnegativos no fermentadores, enterobacterias como Klebsiella spp.,
Enterobacter spp., Serratia spp. y levaduras. Suele tratarse adems de cepas
ms resistentes a los antibiticos. Infecciones por S. aureus o Salmonella spp.
Indican generalmente infeccin renal metstasica en el curso de una
bacteriemia. Cabe recordar que Mycobacterium tuberculosis tambin puede
producir infeccin renal por va hematgena. Las IU polimicrobianas son
excepcionales y se observan en sondados o pacientes con fstulas que
comunican la va urinaria con intestino o vagina. Adenovirus tipo 11 causa
cistitis hemorrgia epidmica, especialmente en nios varones. Chlamydia
trachomatis produce uretritis que ser tratada en otro captulo. El papel de
otros agentes (Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma
urealyticum) ha sido postulado, pero no del todo aclarado. (1).
3) PATOGENIA
En la gran mayora de los casos, la IU es causada por microorganismos del tubo
digestivo del propio paciente, que alcanzan el tracto urinario por la va
ascendente. Ms raramente lo hacen por va hematgena, en el curso de una
bacteriemia a partir de un foco a distancia. Una vez en la va urinaria deben ser
capaces de adherirse y multiplicarse. Como en otros casos, que se desarrolle o
no IU depende de los mecanismos de defensa del husped y los atributos
patognicos del germen. Los mecanismos de defensa del tracto urinario son los
que se enumeran a continuacin. (1).
1. El libre flujo de orina, el vaciamiento vesical peridico, determina un lavado
por arrastre que impide que grmenes con escasa afinidad por el urotelio
lo colonicen. El flujo urinario comprometido de forma mecnica o funcional
es la condicin predisponente ms comn en pacientes con infeccin
urinaria. Esta obstruccin puede deberse a clculos, hipertrofia prosttica,
etc. (1).
2. Normalmente, la vlvula vesicoureteral previene el reflujo de orina de la
vejiga hacia sectores ms altos. Alteraciones funcionales o anatmicas de
esta determinan un mayor riesgo, que se observa especialmente en la
infancia. (1).
3. La protena de Tamm Horsfall, presente en la orina, contiene numerosos
residuos de manosa que inhiben competitivamente la adherencia mediada
por los pili manosasensibles. (1).
4. La mucosa intacta es tambin una efectiva barrera frente a la colonizacin.
Algunas bacterias como S. saprophyticus requieren la presencia de fibras
de colgeno que se exponen en la superficie luego de microtraumatismos
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 8

(durante las relaciones sexuales), lo que explicara la presencia de este
agente en IU en mujeres en edad genital activa. (1).
5. Ciertas caractersticas de la orina normal como la elevada osmolaridad, el
contenido de urea y el pH cido, inhiben el crecimiento bacteriano. (1).
6. El pH cido de la vagina, determinado por la flora normal en la mujer y la
actividad antimicrobiana de las secreciones prostticas en el hombre
contribuyen tambin a dificultar la colonizacin perineal por potenciales
patgenos. (1).
ADEMS DE LOS PACIENTES CON OBSTRUCCIN AL FLUJO DE ORINA, SE
ENCUENTRAN PREDISPUESTOS:
A. LOS DIABTICOS CON DESCONTROL METABLICO, LA GLUCOSURIA
FAVORECE EL DESARROLLO BACTERIANO. (1).

B. EMBARAZADAS, YA QUE DURANTE ESA ETAPA EXISTE UN MAYOR RIESGO DE
INFECCIN URINARIA DEBIDO A FACTORES MECNICOS (DISMINUCIN DE LA
CAPACIDAD VESICAL PROVOCADA POR LA EXPANSIN DEL TERO, LA
PRESENCIA DE HIDROURTER, LA DISMINUCIN DE LA PERISTALSIS Y ATONA
URETERAL) Y TAMBIN FACTORES HORMONALES QUE DETERMINAN
CAMBIOS (METAPLASIA DE CLULAS DEL UROEPITELIO, AUMENTO DEL
TAMAO RENAL Y DISMINUCIN DE LA CAPACIDAD DE CONCENTRAR).
EVENTUALMENTE, LA PRESENCIA DE GLUCOSURIA, EN PACIENTES CON
DIABETES GESTACIONAL CONTRIBUYE TAMBIN A UN MAYOR RIESGO.
ADEMS LA ASOCIACIN DE BACTERIURIA (SINTOMTICA O NO) CON PARTO
PREMATURO Y BAJO PESO AL NACER, HA SIDO FEHACIENTEMENTE
DEMOSTRADA, POR ELLO SE RECOMIENDA LA DETECCIN SISTEMTICA DE
LA BACTERIURIA, COMO RUTINA DE EMBARAZO. (1).


C. NIOS PORTADORES DE REFLUJO VESICOURETERAL Y OTRAS ANOMALAS. SE
ESTIMA QUE HASTA UN 50% DE LOS NIOS CON IU TIENEN REFLUJO. (1).

D. PACIENTES CON VEJIGA NEURGENA EN LOS QUE EL INCORRECTO VACIADO
DETERMINA ORINA RESIDUAL VESICAL QUE SE COLONIZA FCILMENTE. (1).
4) MECANISMOS DE VIRULENCIA:

Las cepas de E. coli uropatgenas (UPEC) suelen diferir de otras cepas de E. coli
que integran la flora fecal y no se encuentran como agentes de IU (no
uropatgenas). Cepas de UPEC demuestran una mayor capacidad de
adherencia a clulas del epitelio vaginal y urinario, resistencia al poder
bactericida del suero, produccin de hemolisina, y mayor produccin de
antgeno capsular (antgeno K). Pertenecen adems a un limitado nmero de
serogrupos (O1,O2, O4, O6, O7, O8, O9, O11, O18, O22, O25, O62 Y O75) .
La adherencia es importante no solo en la infectividad, sino que ciertas cepas
exhiben una mayor capacidad de producir IU altas. La adhesin est mediada
por ligandos especficos que se unen a receptores del husped. Esos ligandos
son pequeas protenas localizadas en los pili. (1).
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 9

Pili tipo 1: presente en muchas enterobacterias, se une a residuos mansidos
presentes en las clulas del husped. Esa unin puede ser inhibida
competitivamente por la manosa, por lo que se denominan manosas sensibles.
Se cree que no son las adhesinas ms importantes. Fimbrias P: no se inhibe su
unin por manosa, por lo que se denominan manosa resitentes. Son expresadas
por el 90% de las cepas que causan infecciones altas. Anticuerpos anti fimbrias
P impiden el desarrollo de pielonefritis en modelos animales. Otras adhesinas
manosarresistentes como adhesinas X, han sido identificadas. La adhesin
mediante fimbrias probablemente tambin est presente en infecciones
causadas por Klebsiella spp. o S. saprophyticus. Una vez que la bacteria logra
adherirse intervienen otros factores. La hemolisina, presente en cepas UPEC,
sera importante en el dao celular y en lograr que exista hierro disponible para
la bacteria. La aerobactina es un siderforo, protena que proporciona hierro a
la bacteria. El antgeno K, como en otros casos, su cpsula inhibe la fagocitosis.
La endotoxina o LPS contribuye a la inflamacin a nivel renal y a las
manifestaciones sistmicas en pacientes spticos.
La ureasa, producida por Proteus spp., es una enzima que desdobla la urea
presente en la orina en amonio y dixido de carbono, determinando una
elevacin del pH urinario. El medio ms alcalino da como resultado la
precipitacin de sales de calcio y magnesio y la formacin de clculos, que a su
vez sirven como reservorio de bacterias. Tambin producen ureasa aunque en
menor cantidad, Klebsiella spp. y S. saprophyticus. Las cepas aisladas de
pacientes con IU y patologa urolgica subyacente suelen exhibir menos
atributos de virulencia. (1).

5) MANIFESTACIONES CLNICAS (ANEXO 1)
Clsicamente la presencia de fiebre y dolor en una o ambas fosas lumbares se
considera indicadora de pielonefritis, en tanto la disuria y la polaquiuria seran
propias de la cisititis. Debido a diferencias teraputicas y pronsticas de las
infecciones altas y bajas, se han hecho numerosos esfuerzos en intentar
localizar la altura de la infeccin sin que ninguna tcnica fuera lo
suficientemente prctica para su uso rutinario. Si bien los signos y sntomas
pueden sugerir la localizacin de la infeccin (alta o baja), no son especficos. Es
bueno entonces recordar que las manifestaciones clnicas no siempre permiten
establecer un diagnstico preciso de localizacin. En base a la presencia o
ausencia de condiciones subyacentes que favorezcan la infeccin es clsico
clasificar a las IU en complicadas y no complicadas. (2).
CISTITIS AGUDA: OCURRE PRINCIPALMENTE EN MUJERES JVENES SIN
PATOLOGA SUBYACENTE. SE MANIFIESTA POR ARDOR MICCIONAL, DISURIA,
POLAQUIURIA, EVENTUALMENTE HEMATURIA Y DOLOR SUPRAPBICO. EL
DIAGNSTICO DIFERENCIAL SE DEBE ESTABLECER CON OTRAS CAUSAS DE
DISURIA (VAGINITIS Y URETRITIS). SE ESTIMA QUE ENTRE 10% Y 35% DE LAS
PACIENTES CON ESTE CUADRO CLNICO PRESENTAN ADEMS INFECCIN
RENAL OCULTA. (2).
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 10

PIELONEFRITIS AGUDA NO COMPLICADA: CARACTERSTICAMENTE LOS
PACIENTES SE PRESENTAN CON DOLOR EN FOSAS LUMBARES, ASOCIADO A
SNTOMAS SISTMICOS COMO FIEBRE, VMITOS, ETC., PUDIENDO O NO
PRESENTAR SNTOMAS CONCOMITANTES DE CISTITIS. EL CUADRO CLNICO
PUEDE SER DE GRAVEDAD VARIABLE, INCLUYENDO SEPSIS Y SHOCK SPTICO.
(2).

IU COMPLICADAS: EN ESTE GRUPO SE CONSIDERAN TODAS LAS INFECCIONES
EN PACIENTES DE SEXO MASCULINO Y LAS DE MUJERES CON FACTORES
PREDISPONENTES. SUELEN PRESENTARSE DE MANERA MENOS TPICA, LAS
COMPLICACIONES Y LAS FALLAS TERAPUTICAS SON MS FRECUENTES. (2).

SNDROME URETRAL AGUDO: DEFINIDO COMO EL QUE SE PRESENTA EN
MUJERES JVENES QUE TIENEN DISURIA Y PIURIA CON UROCULTIVOS CON
RECUENTOS MENORES A 105 UFC/ML. ESTE SNDROME PUEDE DEBERSE A
URETROCISTITIS (POR E.COLI, ETC.) O A OTRAS CAUSAS (VAGINITIS,
INFECCIN POR N. GONORRHOEAE, C. TRACHOMATIS O HERPES GENITAL). DE
ACUERDO A STAM Y COLS. EN ESTAS PACIENTES, RECUENTOS TAN BAJOS
COMO 102 UFC/ML SON SIGNIFICATIVOS. (2).


PROSTATITIS: LA PROSTATITIS AGUDA SE PRESENTA CON FIEBRE Y DOLOR
PERINEAL Y LUMBAR Y DOLOR A LA PALPACIN PROSTTICA. USUALMENTE ES
DEBIDA A E.COLI O MS RARAMENTE A N. GONORRHOEAE EN JVENES. LA
PROSTATITIS CRNICA SE MANIFIESTA CON SNTOMAS MENOS PRECISOS O
POR BACTERIURIA RECURRENTE. PARA EL TRATAMIENTO SE REQUIEREN
DROGAS QUE ALCANCEN BUENA CONCENTRACIN EN EL TEJIDO PROSTTICO
(TRIMETOPRIM-SULFA, QUINOLONAS FLUORADAS) POR PERODOS
PROLONGADOS. (2).

IU EN EL PACIENTE SONDADO: LUEGO DE COLOCADA LA SONDA, LA
PROBABILIDAD DE DESARROLLAR BACTERIURIA AUMENTA CON LOS DAS DE
PERMANENCIA. HABITUALMENTE EL PACIENTE EST ASINTOMTICO. SIN
EMBARGO, LA BACTERIURIA ASOCIADA A SONDA VESICAL CONSTITUYE UNA
CAUSA MUY IMPORTANTE DE INFECCIN HOSPITALARIA Y BACTERIEMIA POR
GRAMNEGATIVOS. LOS GRMENES INGRESAN A LA VA URINARIA EN EL
MOMENTO DE LA INSERCIN DE LA SONDA, POR VA PERIURETRAL O BIEN
CONTAMINANDO EL SISTEMA DE DRENAJE. POR ELLO, LAS MEDIDAS DE
PREVENCIN MS IMPORTANTES SON EXTREMAR LAS MEDIDAS DE
ANTISEPSIA AL COLOCAR LA SONDA, PREFERIBLEMENTE POR PERSONAL BIEN
ENTRENADO, MAXIMIZAR LA HIGIENE DEL REA PERINEAL Y DEL MEATO
URETRAL Y MANTENER EL SISTEMA COLECTOR CERRADO. (2).



U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 11

DIAGNOSTICO MICROIOLLOGICO DE LA INFECCIN URINARIA

1) OBTENCION DE LA MUESTRA
RECOMENDACIONES:
Preferentemente se debe obtener la primera orina de la maana (ya que se trata de
una muestra ms concentrada). De no ser posible posible, el paciente debe
abstenerse de orinar durante las 3 horas previas al examen. (2).

No forzar la ingestin de lquidos, ya que con ello se diluye la orina,
alterando el recuento.
Volumen recomendado a recolectar: 25 a 50 ml.
Volumen mnimo: 3 ml.

MTODOS PARA LA OBTENCIN DE LA MUESTRA DE ORINA - (ANEXO 2)

Orina de segundo chorro: es la muestra ms frecuentemente procesada para
urocultivo, en especial por su fcil obtencin; sin embargo, se puede contaminar
frecuentemente con flora de la piel, uretra, y vagina en mujeres. Requiere de un
aseo genital prolijo con trulas, agua y jabn. (2).
Orina obtenida mediante recolector: no es una buena muestra, ya que
generalmente se contamina con flora perineal. Es til slo si el cultivo resulta ser
negativo o si se aisla, en recuento significativo, una especie uropatgena nica.
Para este procedimiento se recomienda el cambio de recolector cada 30 minutos
hasta obtener la muestra de orina. (2).
Orina obtenida a travs de catter vesical permanente: no es una buena muestra
excepto que el catter haya sido recientemente instalado. Generalmente los
catteres vesicales estn colonizados ya a las 48 horas de instalados y los
microorganismos aislados no necesariamente son el agente causal de la infeccin
urinaria. (2).
La superficie externa del catter debe limpiarse con una trula con alcohol 70% y
esperar que seque. La puncin se efecta en un ngulo de 30 en el sitio indicado
para ello. No debe pinzarse el catter antes de obtener la muestra. (2).
Puncin vesical: es el mtodo de referencia para la obtencin de orina a cultivar
ya que evita la contaminacin con flora uretral; sin embargo, se reserva para casos
especiales por ser un procedimiento invasor. (2).
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 12

Cateterizacin vesical transitoria: se considera una alternativa a la puncin vesical
pero es tambin un procedimiento invasor y puede generar arrastre retrgrado de
microorganismos. (2).
SOLICITUD DE EXAMEN AL LABORATORIO
El laboratorio debe educar a los mdicos clnicos para que la solicitud de
urocultivo contenga la siguiente informacin fundamental para el procesamiento y
la interpretacin de los resultados: (2).
Nombre, edad y sexo del paciente
Si es mujer, indicar la presencia de embarazo.
Existencia de patologa de la va urinaria
Mtodo empleado en la recoleccin de la muestra
Diagnstico clnico
Uso previo de antibiticos
Hora de obtencin de la muestra
2) TRANSPORTE DE LA MUESTRA
La orina es un buen medio de cultivo que permite la multiplicacin de los
microorganismos incrementando el recuento bacteriano, por lo que las muestras
deben procesarse antes de 2 horas de obtenidas. Si ello no es factible, las
muestras deben refrigerarse a 4C. Una muestra puede mantenerse refrigerada,
sin que se altere el recuento bacteriano, durante 24 horas. Los preservantes que
inhiben la multiplicacin bacteriana no han resultado mejores que la refrigeracin,
son de alto costo y tienen el inconveniente de interferir con algunas
determinaciones de la tira reactiva de orina. (2).
3) PROCESAMIENTO EN LABORATORIO

Existen diversos procedimientos de ayuda en el diagnstico de la ITU (Anexo 3).
El mtodo de referencia es el urocultivo cuyo procesamiento demora 24 a 48
horas. Se recomienda guardar las muestras de orina refrigeradas despus de ser
procesadas, hasta obtener el resultado del cultivo. En caso de resultados
discordantes se recurrir a la muestra almacenada para repetir los anlisis. (2).
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 13

4) TESTS DE SCREENING RPIDOS
A) EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO
Se Sugiere en infeccin urinaria, sin embargo, no es confirmatorio. Permite
aproximacin correcta en ~ 70%. La recomendacin es uniformar las variables
susceptibles de controlar como el volumen de la orina a centrifugar (que debe
ser idealmente de 10 a 12 ml), el tiempo de centrifugacin (5 minutos) y la
velocidad de centrifugacin 2500 rpm. (2).
Se define piuria como la presencia de ms de 10 leucocitos/l o ms de 6
leucocitos alterados por campo de 40x. La presencia de piuria indica
inflamacin del tracto urogenital. Cuando existe una infeccin, se observan las
bacterias con los neutrfilos agrupados formando placas de pus y estas son
de gran utilidad en la orientacin de una infeccin urinaria pero inespecfica.
(2).
B) TIRA REACTIVA DE ORI NA
En general son dos los parmetros tiles a evaluar en la tira reactiva o examen
qumico de orina: (2).
Presencia de leucocitos mediante la deteccin de su enzima: leucocito
esterasa. Detecta leucociturias > 10 leucocitos /l con una sensibilidad
entre 53 y 95%.
Presencia de nitritos. La mayora de las especies uropatgenas reducen
nitratos a nitritos excepto Staphylococcus saprophyticus y Enterococcus
sp. (2).
Se requieren al menos 6 horas para producir niveles detectables de nitritos,
por lo que debe realizarse en la primera miccin matinal. La sensibilidad
descrita es de ~ 80% en la primera miccin matinal disminuyendo a 30% en
otras muestras. Su especificidad es muy buena, cercana a 98%. (2).
C) TINCIN DE GRAM DIRECTA DE LA MUESTRA
Es un mtodo rpido, econmico, sensible y especfico para detectar
bacteriuria. Se recomienda realizarlo como respaldo frente a discordancias o
hallazgos especiales ms que como screening. Debe aplicarse a la muestra
recin agitada sin centrifugar, con el mismo asa de 1l (o de 10 l) empleado
en la siembra del urocultivo, depositando este volumen en un portaobjetos;
pueden colocarse hasta 10 muestras por lmina. Estas se tien y pueden ser
observadas cuando existen discordancias entre el urocultivo y el sedimento.
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 14

La presencia de una bacteria/campo de inmersin tiene buena correlacin con
> 100.000 ufc/ml en ~ 85% de los casos. (2).
5) UROCULTIVO
A) SIEMBRA MICROBIOLGICA
La metodologa de la inoculacin de la muestra en medios de cultivo o
siembra microbiolgica depende de la forma de obtencin de la muestra. (2).
Para orinas de segunda miccin, recolector y catter a permanencia, las
muestras deben sembrarse con asa de 1 l en placas de agar sangre y algn
medio selectivo-diferencial: (2).
Mac Conkey; UTITM, Oxoid; CPSTM, bioMerieux. El desarrollo de una colonia
en el cultivo debe multiplicarse por 1.000. (2).
Para orinas obtenidas por cateterizacin vesical, las muestras pueden
sembrarse con asa de 10 (1 colonia = 100 ufc/ml) y 1 l (1 colonia =
1.000 ufc/ml). (2).
Para orinas obtenidas por puncin vesical, se recomienda la siembra por
inundacin en agar sangre ms un medio selectivo-diferencial para
bacilos Gram negativos o siembra directa de 100 l (1 colonia = 10
ufc/ml). (2).
B) INCUBACIN
Una vez sembradas las placas deben incubarse durante 16 a 18 horas a 35 -
37 C. (2).
Incube 48 horas aquellos urocultivos negativos con sedimento urinario
alterado. (2).
C) INTERPRETACIN DEL UROCULTIVO
Para el caso de pacientes con sntomas es suficiente con una muestra por
chorro medio para la interpretacin del estudio, y es por ello que se considera
imprescindible contar con el dato clnico. Pueden requerirse muestras
repetidas para el diagnstico de pacientes asintomticos. La especificidad
aumenta al repetir la muestra. (1).
Es fundamental saber cmo se recolect la muestra (chorro medio, puncin
suprapbica, puncin de sonda vesical, etc.), si el paciente tena o no
sntomas, el volumen sembrado y si se aisla un probable patgeno urinario o
un contaminante. Recuento de bacterias por volumen de orina: se considera
en la orina obtenida por chorro medio; en la orina de puncin vesical todo
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 15

recuento es significativo. Si se siembran 100 microlitros (ansa 0,1 ml), se
multiplica por 10 (cada colonia representa 10 colonias/ml). Si se usa un ansa
de 10 microlitros (0.01 ml) cada colonia representa 100 por ml de orina. (1).
(Ver Anexo 5).

INFORME SOBRE EL PROCEDIMIENTO DE PRCTICA
UROCULTIVO REALIZADO EL DA 27/MAYO/2014
1) EXAMEN FSICO DE LA MUESTRA DE ORINA
La muestra de orina se encontraba contenida en un frasco limpio y estril,
asegurndome que la muestra es idnea para poder procesarla.
Primeramente: Se homogenizo la muestra del frasco para luego transvasarlo a
un tubo de ensayo limpio y estril, para poder observar los siguientes
parmetros: (Anexo 6)
COLOR: AMARILLO
ASPECTO: TURBIO
2) EXAMEN DE SEDIMENTO DE LA MUESTRA DE ORI NA
En el examen de sedimento se procedi a centrifugar la muestra de orina
contenida en el tubo a 2500 rpm en un tiempo de 5 minutos.
Se decanto todo el sobrenadante quedando solo el sedimento, luego se coloc
una gota del sedimento en un portaobjeto, posterior a esto se esparce esta
gota en el portaobjeto y se coloca encima un cubre objeto.
Se observo al microscopio el sedimento de la muestra de orina a 40X y se
observo lo siguiente:
CLULAS EPITELIALES: DE 1 2 POR CAMPO EN 40 X (ESCASOS)
LEUCOCITOS: DE 1 3 POR CAMPO EN 40 X (ESCASOS)
HEMATES: MS DE 100 X CAMPO EN 40 X (ABUNDANTES)
GRMENES: ESCASOS
OTROS: NO SE ENCONTRO


*La presencia de glbulos rojos en orina se denomina hematuria e indican sangrado en algn
lugar de las va urinarias. (3).
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 16

3) TINCIN DE GRAM EN FRESCO
Cuando se menciona tincin de Gram en fresco, se hace referencia a la
coloracin aplicada a partir de la muestra de orina inicial, aquella muestra de
orina que se encuentra contenida en el envase.
A. CON UN ASA DE SIEMBRA CALIBRADA Y PREVIAMENTE ESTERILIZADA POR
CALOR, SE PROCEDIO A COGER UN POCO DE MUESTRA PARA LUEGO PONERLA
EN UNA LAMINA PORTAOBJETOS.

B. SE ESPARCE LA MUESTRA EN EL CENTRO DEL PORTAOBJETOS CON UN
DIMETRO DE 4CM DE LARGO Y 2CM DE ANCHO.


C. LUEGO SE DEJA SECAR A T AMBIENTE O SE PUEDE OPTAR POR PONERLA EN LA
CABINA DE FLUJO LAMINAR.
Fundamento sobre la tincin de Gram:
Su propsito es dividir a los microorganismos en Gram positivas y Gram
negativas. Los Gram positivas son aquellas que resisten la accin de colorante
del disolvente alcohol-acetona, tras el tratamiento con un colorante bsico y
lugol, mientras que las Gram negativas son decoloradas siendo posteriormente
teidas con un colorante de contraste como puede ser la fucsina diluida o
realizar la tincin de gran sobre clulas de cultivos jvenes ya que algunos
microorganismos son gran positivos solo en la fase de crecimiento. (3).
D. EL FROTIS CON LA ORINA DEBE DE ESTAR FIJADO Y SECO.

E. SE TIE CON CRISTAL VIOLETA DURANTE UN MINUTO Y LUEGO SE LAVA CON
AGUA. (3).


F. SE APLICA COMO MORDI ENTE EL LUGOL DURANTE UN MINUTO MS. (3).

G. SE DECOLORA CON ALCOHOL HASTA QUE YA NO ESCURRE LQUIDO AZUL. (3).

H. SE LAVA CON AGUA. (3).


I. SE VUELVE A TEIR CON SAFRANINA QUE ES EL SEGUNDO COLORANTE DE
CONTRASTE DURANTE UN MINUTO. (3).

J. SE LAVA CON AGUA Y SE SECA. (3).

K. LUEGO OBSERVAR LA LAMINA CON ACEITE DE INMERSIN. (3).

U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 17

RESULTADO
Gram Negativo No se observaron estructuras bacterianas.
4) PRESENCIA DE ANTIMICROBIANO RESIDUAL: PAR TEST
(VER ANEXO 7)

A. HISOPAR SUSPENSIN DE BACILLUS SUBTILIS SOBRE UNA PLACA DE AGAR
MUELLER HINTON

B. DIVIDIRLO EN CUADRICULAS Y ENUMERAR.


C. COLOCAR UNA GOTA DE MUESTRA DE ORINA EN CADA CUADRICULA SEGN
CORRESPONDA.

D. INCUBAR A 35 C POR 24 HORAS

E. PRESENCIA DE HALOS INDICAN PRESENCIA DE INHIBIDOR DE CRECIMI ENTO
BACTERIANO
RESULTADO
PAR TEST Negativo a las 24 Horas
5) CULTIVO
A) SE COGI UN POCO DE ORINA NO CENTRIFUGADA DEL FRASCO INICIAL
CON UN ASA CALIBRADA DE 1 UL (VOLUMEN DEL ASA 0.001 ML), QUE ES
LO COMUNMENTE USADO, AUNQUE EL DIAMETRO DEL ASA PUEDE IR DE
1 UL A 10 UL.

B) SE INOCULO LA MUESTRA POR ESTRA SIMPLE EN EL MEDIO DE CULTIVO
AGAR SANGRE, SE ESTERILIZO EL ASA DE SIEMBRA AL FUEGO DEL
MECHERO DE BUSTEN, HASTA DEJAR LA PUNTA A ROJO VIVO, LUEGO SE
DEJO ENFRIAR EL ASA DE SIEMBRA POR UNOS 5 MINUTOS.
*Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos
con importancia clnica excepto el de los ms exigentes. Se prepara
aadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un
agar base rico (agar Columbia, por ejemplo). Se utiliza tambi n para ver
la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos, por lo que se
considera un medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas
extracelulares que actan sobre los glbulos rojos. Observando los halos
hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que
poseen: alfa, beta o gamma. Para leer con exactitud la hemlisis
producida, se debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 18

luz. La hemlisis de tipo alfa es una hemlisis incompleta, caracterizada
por la destruccin parcial de la membrana de los eritrocitos y prdida de
algo de hemoglobina en el agar. A simple vista este tipo de hemlisis se
detecta por la aparicin de una coloracin verdosa alrededor de la colonia.
La beta-hemlisis se caracteriza por la destruccin total de la membrana
por lo que se detecta por la aparicin de un halo transparente alrededor
de la colonia. Cuando los microorganismos no producen ningn tipo de
hemlisis se dice que son gamma-hemolticos. (3).
C) SE REPITI LOS MISMOS PROCEDIMIENTOS ANTERIORES EN EL MEDIO
AGAR MACCONKEY (Ver. Anexo 9).
Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperacin de
enterobacterias y bacilos Gram negativos entricos relacionados. Contiene
sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram
positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la nica
fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias
fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los
fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitacin de las
sales biliares por la gran cantidad de cidos formados, lo que se observa
fcilmente en el medio por la aparicin de zonas opacas alrededor de las
colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias
incoloras o transparentes. (3).

D) UNA VEZ SEMBRADAS LAS PLACAS, ESTAS FUERN INCUBADAS
A 35 - 37 C. EN 18 - 24 HORAS.

RESULTADO
Despus de 24 horas se observaron las placas de Agar Sangre y Agar
Macconkey en la zona de inoculacin y no se hallo crecimiento de colonias
bacterianas, por tal motivo se diagnostico como:
Urocultivo negativo a las 24 horas.




U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 19

SOLUCIN DEL CUESTIONARIO
1) Cules son los grmenes ms frecuentes causantes de una infeccin urinaria?
A) Escherichia Coli
B) Klebsiella
C) Proteus
D) Stafilococo
E) Enterobacter
F) Enterococos
G) Serratia
2) Cul es el punto de corte para determinar una bacteriuria significativa?
En los aos 50, Kass defini que el recuento de de 100.000 o ms colonias por
ml de orina (100.000 UFC/ml), determinaban una bacteriuria significativa. (3).
*Sin embargo al correr del tiempo, otros autores han propuesto niveles menores para el
diagnstico de bacteriuria significativa, en ciertas poblaciones de pacientes sintomticos,
por ejemplo 1.000 ufc/ml y 100 ufc/ml. Bajos recuentos bacterianos podran deberse
tambin a IU por cocos grampositivos, diuresis forzada, antimicrobianos suministrados
previamente, contaminacin de la muestra, o muestras tomadas muy al inicio de la
enfermedad. Es importante recordar que tambin se observan recuentos bajos en IU
adquiridas por va hematgena. (1).
3) Qu volumen recoge el asa calibrada en los urocultivos?
El volumen que recoge el asa calibrada es de 0.001 mL <> 1 uL.
Si: 1 mL = 1000 uL; 1 uL = 0.001 mL
4) Cules son los mtodos de toma de muestra para los urocultivos?







5) Cules son las pruebas bioqumicas mnimas, para la identificacin de
Escherichia coli?
Las pruebas bioqumicas mnimas para identificar la Escherichia coli son:

TSI Triple Agar Hierro / 1) Evala la utilizacin de azucares / 2) Formacin o
produccin de gas/ 3) Formacin o produccin de hidrgeno sulfurado. (3).
A: Acidez = Amarillo El ph baja por la utilizacin de la glucosa. (3).
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 20

K: Alcalinidad = rojo El ph se mantiene por qu no hay utilizacin de glucosa.
(3).






Lactosa

Sacarosa

Glucosa


Se da la formacin de gas: se observan burbujas (3).
La formacin de hidrgeno sulfurado: El medio se vuelve negro totalmente o
parcialmente. (3).
EL TSI: presenta como indicador el rojo de fenol. (3).

LIA Agar Lisina Hierro / Evalua la desaminacin y la descarboxilacin/
Descarboxilacin: Cuando la bacteria degrada el grupo carboxilo y es (k/K) /
Desaminacin: cuando la bacteria degrada el grupo amino y es (R/A) - (3).

SI es LIA positivo el color se acenta ms, sea se vuelve ms azul. (K/K)
(3).
Si es LIA negativo el color vira a Rojo en la superficie y Amarillo en la
base. (R/A) (3).
El LIA: Presenta como indicador el purpura de bromo cresol. (3).

Citrato de Simmons El citrato evala la utilizacin de carbono como nica
fuente de carbono: / positivo si es azul / Negativo si es verde. (3).

El Citrato de Simmons: Presenta como indicador el Azul de Bromotimol. (3).

SIM Parmetros que evala:
Sulfuro (H2S): Negro: va desde 1+ a 4+ / (3).

TSI
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 21

Indol: Se presenta como un anillo de color rojo a travs del reactivo de
Kovack/ 1) Se forma un Anillo rojo por que la bacteria posee la enzima
triptofanasa e hidroliza el triptfano del reactivo/ 2), Si el anillo se
mantiene amarillo entonces la bacteria no posee la enzima trptofanasa.
(3).

Movilidad: Evala la difusin de la bacteria si esta posee la facultad de
motilidad (flagelos). (3).
El SIM: No presenta indicador / El medio es de color amarillo claro. (3).

TSI LIA SIM Citrato de Simmons
Medios bioqumicos
mnimos para la
identificacin de
Escherichia coli.
Ver Anexo 11
Para tabla de
identificacin
bioqumica de la
Escherichia coli
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 22

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. M. Torres, A. Mattera. Infeccin urinaria. Revista. Mxico: UNAM, Microbiologa; 2006 Abril. Report
No.: ISBN 712.
2. Miembros: Stephanie Braun J., Rossanna Camponovo C., Erna Cona T., Alejandra Fernndez V.,
Patricia Garca C.. Recomendaciones para el diagnstico microbiolgico de la infeccin urinaria.
Revista. CHILE: COMITE DE MICROBIOLOGIA CLINICA. SOCIEDAD CHILENA DE INFECTOLOGIA*,
Laboratorio de Microbiologa Universidad Catlica de Chile; 2001. Report No.: 562.
3. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR, SPARE, INWOOD. MTODOS DE LABORATORIO. Segunda Edicin ed.
INTERAMERICANA , editor. MXICO; ESPAA; BRAZIL; COLOMBIA; ECUADOR; URUGUAY; VENEZUELA:
INTERAMERICANA; 1984.


ANEXOS















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ANEXO 1







ANEXO 2
Mtodos para la obtencin y clasificacin de la muestra de orina para urocultivo.







ANEXO 3
Procesamiento de la muestra en que se sospecha una infeccin urinaria.







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ANEXO 4










ANEXO 5







ANEXO 6






La muestra fue rotulada con
el nmero 2.
El color fue: Amarillo,
El aspecto fue: turbio
U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 25

ANEXO 7

U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 26

ANEXO 8



U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 27

ANEXO 9














ANEXO 10













U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 28

ANEXO 11





























U.A.P Informe Sobre Urocultivo Pgina 29
















Una de las ms grandes
cualidades del hombre es
la humildad