LES ANTIGENES

I INTRODUCTION II - DEFINITIONS - 1 DFINITION - 2 DFINITION - 3 NOTION DE DTERMINANTS ANTIGNIQUES OU PITOPES - 4 NOTION D'IMMUNOGNE - 5 NOTION D'HAPTNE - 6 NOTION DE SPCIFICIT ANTIGNIQUE - 7 DIFFERENTS TYPES D'ANTIGENES - 8 NOTION D'IMMUNIT - 9 NOTION D'HYPERSENSIBILIT III- PARAMETRES DU POUVOIR IMMUNOGENE III-1 PARAMTRES LIS L'ANTIGNE -1 Distance taxonomique -2 Paramtres physico-chimiques -1 taille molculaire -2 rigidit -3 complexit -3 Paramtres biochimiques -1 les protines -2 les glucides -3 les lipides -4 les acides nucliques - 4 Le catabolisme -5 Valence antignique. III-2 PARAMTRES LIS L'HTE -1 gnes Ir -2 ge III-3 PARAMTRES LIS AUX CONDITIONS D'IMMUNISATION -1 dose d'immunogne -2 voies d'administration -3 adjuvants -4 nature de l'immunisation. III-4 NOTION D'ANTIGNES THYMO-DPENDANTS ET THYMO-INDPENDANTS. IV - ANTIGENICITE - 1 ANTIGNE POLYOSIDIQUE - 2 ANTIGNES PROTIQUES RECONNUS PAR LES ANTICORPS - 3 EPITOPES T DES PROTINES ET DES POLYPEPTIDES. - 4 SUPERANTIGNE V CONCLUSION

LES ANTIGENES
I INTRODUCTION Les antignes sont des structures molculaires reconnues spcifiquement par le systme immunitaire. La notion d'antigne, reconnu spcifiquement par un organisme est purement oprationnelle et dpend de l'espce dans laquelle est introduite la molcule antignique. L'induction dlibre d'une rponse immunitaire par injection d'une substance trangre s'appelle immunisation. Nous verrons que la dose, la voie d'administration et la forme de l'antigne peuvent influencer l'induction et le type de rponse immunitaire. L'volution de celle-ci est suivie sur l'apparition d'une ou plusieurs ractions: Pour la rponse immunitaire humorale le contrle porte sur la rponse anticorps analyse partir de l'antisrum obtenu. Pour la rponse cellulaire, ce sont les rponses des lymphocytes T qui sont tudies.

Le problme structural de l'antignicit a deux volets : l'antigne d'une part, l'hte (et son gnome) dans lequel il est introduit d'autre part. On ne peut parler de l'antignicit d'une molcule donne qu'en rfrence un organisme receveur. Il n'y a pas d'antignicit en soi. La parfaite connaissance des bases chimiques et gntiques de l'antignicit est le pralable indispensable la mise au point de vaccins efficaces, c'est--dire capables d'induire une rponse immunitaire protectrice durable sans effets indsirables

II - DEFINITIONS II -1- DFINITION CLASSIQUE: On appelle antigne toute substance trangre l'organisme qui, introduite par voie parentrale, est susceptible d'induire la formation d'anticorps avec lesquels elle s'unira spcifiquement. Cette dfinition mrite d'tre corrige pour plusieurs raisons : a- L'antigne n'est pas toujours tranger l'organisme : c'est notamment le cas des autoantignes induisant des auto-anticorps parfois responsables de maladies auto-immunes. b- La voie parentrale utilise en exprimentation animale ou en vaccination humaine n'est pas la route naturelle de pntration des antignes naturels dans l'organisme : le contact se fait habituellement par inhalation ou ingestion, donc au niveau des muqueuses. Les muqueuses (pulmonaires, digestives) reprsentent une trs grande surface de contact avec l'extrieur (400 m2) et sont caractrises par la prdominance d'un isotype d'Ig, l'IgA, et des sous-populations lymphocytaires B et T adaptes cette rponse IgA. c- L'antigne ne sollicite pas le plus souvent qu'une rponse de type humoral, anticorps, mais simultanment une rponse de type cellulaire mdie par les lymphocytes T scrtant des mdiateurs locaux non anticorps de type lymphokines ou cytokines. d- Les ractions antigne-anticorps sont gnralement spcifiques (cf. infra) : il existe cependant des ractions croises au cours desquelles des molcules apparentes l'antigne d'origine peuvent ragir avec le mme anticorps. Les ractions croises peuvent tre le rsultat de trois phnomnes qui sont : - le partage d'antignes communs par deux prparations antigniques distinctes - le partage d'pitopes communs par deux molcules d'antignes distinctes 30 - la quasi ressemblance de deux pitopes II - 2 - DFINITON ACTUELLE : On appelle antigne toute espce molculaire naturelle ou synthtique capable d'induire une rponse immunitaire dans un organisme vivant et de ragir spcifiquement avec les produits de cette rponse, BCR/anticorps et rcepteur T. Dans certains cas, en fonction de la dose, du type d'antigne considr et de la voie d'introduction l'organisme dveloppe un tat dit de tolrance, correspondant une absence apparente de rponse immunitaire. Il s'agit nanmoins d'un phnomne actif, spcifique, induit par une premire exposition l'antigne. Les substances qui induisent un tel tat sont dites tolrognes par comparaison au mot antigne. On distingue une tolrance naturelle vis--vis du soi (rgle de EHRLICH "horror auto-toxicus") et une tolrance induite, contre une substance normalement antignique, grce des artifices exprimentaux. II - 3 - NOTION DE DTERMINANTS ANTIGNIQUES OU PITOPES : La plupart des antignes sont des macromolcules, protiques ou glucidiques, prsentant leur surface des reliefs, des asprits dus au repliement des chanes polypeptidiques ou glucidiques sur elle-mme : ce sont ces structures limites, appeles pitopes ou dterminants antigniques, qui sont capables de se lier de manire

strospcifique avec le site complmentaire de la molcule de reconnaissance (paratope). Un pitope correspond une zone de 1 3 nm de diamtre, soit 15 18 acides amins pour une protine, soit 5 6 oses pour un polysaccharides. Les antignes possdent habituellement leur surface un grand nombre de dterminants, qui peuvent tre diffrents les uns des autres, chacun tant capable d'induire la production d'un anticorps spcifique, ou au contraire tre des structures rptitives. En rponse l'introduction de cet antigne dans un organisme on aura donc la production d'une famille d'anticorps, chacun d'eux rpondant aux diffrents pitopes : l'antisrum obtenu est dit polyclonal. On sait maintenant fabriquer, grce la technologie des hybridomes, des anticorps monoclonaux, dirigs contre un seul et mme pitope : ils sont de plus en plus utiliss au laboratoire, eu gard leur spcificit rigoureuse, et commencent tre utiliss en thrapeutique, notamment anti-cancreuse. Les hybridomes, producteurs d'anticorps monoclonaux, sont obtenus par fusion de cellules splniques de souris, immunises par un antigne donn, avec des cellules mylomateuses murines. La fusion se fait en utilisant du polythylneglycol. Les cellules splniques sont incapables de survivre longtemps en culture, la diffrence des cellules mylomateuses dont la capacit crotre indfiniment en culture est un des caractres du phnotype malin. Les cellules splniques apportent l'hybride de fusion l'information codant pour produire les anticorps dirigs contre l'antigne d'intrt. Les cellules mylomateuses sont soigneusement slectionnes d'une part pour leur caractre non scrtant, de faon ce que les seuls anticorps produits par les cellules de fusion soit d'origine splnique, d'autre part pour leur sensibilit au milieu HAT qui permet de slectionner les seuls hybrides. Les cellules mylomateuses sont dficitaires en enzyme hypoxanthine-guanosine phosphoribosyl transfrase (HGPRT). Ce dficit enzymatique empche la transformation de l'hypoxanthine en inosine monophosphate, lequel ne peut tre obtenu que par synthse endogne qu'il est alors facile de bloquer en ajoutant de l'aminoptrine sous forme de milieu HAT (hypoxanthine-aminoptrine-thymidine). Ainsi au bout de quelques heures seuls survivront les hybrides immortaliss qui ont hrits du gne HGPRT fonctionnel des cellules splniques. Il faut aprs procder au clonage qui vise slectionner les hybrides qui produisent des anticorps contre les pitopes de l'antigne immunisant. Ce clonage se fait partir d'une cellule unique grce la mthode de dilution limite. 31 Par la suite cet hybridome peut tre cultiv, soit en flasque in vitro, soit in vivo sous forme d'ascite aprs injection intra-pritonale chez des souris histocompatibles: ceci permet d'obtenir de grandes quantits d'anticorps aprs purification partir des surnageants ou des ascites.

Bien que plus spcifiques que les antisrums polyclonaux, les antisrums monoclonaux, dirigs contre un pitope unique, donnent justement plus facilement lieu des ractions croises : en effet leur cible peut tre plus facilement partage par deux molcules diffrentes, que l'ensembles des dterminants reconnus par la population htrogne d'anticorps d'un antisrum polyclonal. L'ensemble des pitopes reconnus dfinit ce que l'on appelle le rpertoire immunologique qui est valu 108 pour les lymphocytes B et 105 pour les lymphocytes T II - 4 - NOTION D'IMMUNOGNES : Ce terme dsigne les substances antigniques capables d'induire in vivo une rponse immunitaire et de ragir spcifiquement, in vivo et in vitro avec les molcules de reconnaissance ainsi induites. Par contre au sens strict du terme, l'antigne dsigne cette mme substance mais tudie in vitro, du point de vue du laboratoire. Donc, bien que tous les immunognes soient des antignes, tous les antignes ne sont pas des immunognes. En d'autres termes l'antignicit est la proprit d'un pitope de se lier au paratope de l'anticorps ou du TCR. II - 5 - NOTION D'HAPTNE : Du grec "hapten" (attacher) la notion d'haptne a t introduite en 1921 par LANDSTEINER pour qualifier des substances non antigniques par elles-mmes, mais pouvant le devenir lorsqu'elles sont couples des macromolcules porteuses ("carrier"). Ce sont donc des substances qui ne possdent qu'une seule des deux proprits nonces cidessus, la capacit de se combiner spcifiquement avec une molcule de reconnaissance ; prises isolment elles sont incapables d'induire une rponse immunitaire. Cependant, une fois celle-ci mise en place, par un artifice de couplage, elles peuvent, isolment, se combiner aux molcules de reconnaissance. Les macromolcules naturelles peuvent tre assimiles, dans une certaine mesure, un complexe haptne-porteur o la grosse masse de la molcule, dans la profondeur, est de type porteur hrisse d'asprits de formes diverses (les pitopes) et de petites dimensions rpondant une sorte d'haptnes naturels. Au dbut du sicle l'tude des antignes ne pouvait tre faite avec les antignes naturels, beaucoup trop complexes pour la biochimie de l'poque. En 1921 LANDSTEINER individualisait la notion d'haptne en constatant qu'un extrait alcoolique de rein de cheval n'tait pas immunogne chez le lapin alors que l'immunisation par un broyat de tissu rnal de cheval aboutissait la formation d'anticorps chez le lapin dont certains reconnaissaient l'extrait alcoolique. La substance prsente dans l'extrait alcoolique, qu'il appelait haptne, ncessitait donc le couplage une autre molcule au sein du broyat pour induire la formation d'anticorps mais, une fois ceux-ci forms, tait capable de se lier eux.

Les progrs de la chimie ont permis, ds les annes trente, de synthtiser des antignes artificiels consistant en un noyau protique, xnognique ou autologue, bon immunogne, comme par exemple l'albumine bovine ou les gammaglobulines, sur lesquelles sont greffs diffrents radicaux chimiques simples. Le rapport haptne-porteur est critique : on a ainsi calcul que pour l'albumine il est de dix haptnes par molcule. Le couplage de l'haptne au porteur peut se faire par simple contact (pour les drivs nitrophnols) ou ncessite la prsence d'un agent de liaison, qui permet la fixation de l'haptne aux groupements ractifs du porteur (-NH2, -COOH et -SH). Diffrents agents sont utiliss (glutaraldhyde, sels de diazonium, benzoquinones, carbodiimides, isocyanate, N-hydroxysuccimide, etc...). L'haptne libre, aprs couplage, est limin par dialyse ou chromatographie. L'immunisation en prsence d'adjuvant de Freund permet d'obtenir des antisrums contenant des anticorps antihaptne, antiporteur et anti-"lien". Les deux derniers sont limins par passage de l'antisrum sur des immunoadsorbants constitus de l'haptne coupl des porteurs diffrents. 32 La raction haptne-anticorps est le modle le plus pur de la raction antigne-anticorps. Elle peut tre tudie par des mthodes physiques (dialyse l'quilibre, extinction de fluorescence, ultracentrifugation), immunochimiques (prcipitation, inhibition de la prcipitation), srologique (inhibition de l'hmagglutination passive). A l'exclusion de la prcipitation qui ncessite le couplage de l'haptne au porteur toutes les autres mthodes utilisent l'haptne isol. On observe une rponse anti-haptne secondaire optimale si ce dernier est coupl au mme porteur lors de l'immunisation primaire et secondaire. Ceci traduit l'effet-porteur. Ceci peut tre observ avec un haptne, le dinitrophnol (DNP) coupl diffrents porteurs (albumine bovine [BSA], ovalbumine [OVA]). On observe que la rponse anti-DNP est maximum lorsqu'on utilise le mme conjugu haptne-porteur pour l'immunisation primaire et secondaire. L'effet-porteur peut tre contourn en immunisant l'animal contre le second porteur avant le rappel. C'est l'amorage par le porteur ("carrier priming"). L'utilisation des haptnes a permis trs rapidement de mettre en vidence le trs grand pouvoir discriminant de reconnaissance du systme immunitaire. En effet, celui-ci est capable de reconnatre des noyaux benzoques diffremment substitus comme l'illustre la figure ci-dessous : sur le noyau benzoque on fixe en ortho, mta ou para divers radicaux : on produit l'antisrum originel contre la formule comprenant en position mta le radical SO3 et on compare l'intensit de la raction antigne-anticorps produite par l'antisrum

d'origine contre les formules chimiques trs lgrement diffrentes, obtenant le rsultat figurant dans le tableau ci-dessous : Ortho Mta Para R = ASO3H - + R = SO3 ++ +++ +/R = CO2 - - Comme on pouvait s'y attendre c'est avec la formule qui a servi l'immunisation qu'on obtient la raction la plus forte ; mais il existe aussi des ractions croises avec d'autres radicaux ; c'est toutefois la position mta qui donne les meilleurs rsultats ce qui conduit la conclusion que, plus que la formule chimique proprement dite, c'est la structure tridimensionnelle, lie la configuration dans l'espace des atomes et des nuages d'lectrons qui les entourent, qui est importante. L'ensemble de ces travaux sur les haptnes a permis de montrer que la prsence de rsidus chargs, l'orientation dans l'espace taient des facteurs qui influenaient la spcificit haptnique : l'utilisation d'nantiomres diffrents aboutit la formation d'anticorps diffrents. Ce qui est donc reconnu par le systme immunitaire c'est le groupement haptnique, ensemble constitu par l'haptne et son microenvironnement sur le porteur. Il existe mme des anticorps htroclitiques qui ont une plus grande affinit pour un haptne voisin mais distinct de celui utilis pour l'immunisation (mis en vidence dans un systme acide para-aminobenzoque (PAB) coupl aux gammaglobulines de boeuf [GGB] : l'inhibition de la prcipitation PABGGB antisrum est plus forte avec certains analogues du PAB qu'avec le PAB lui-mme). Seule une partie de l'haptne participe la constitution du dterminant antignique et se situe le plus souvent l'oppos de la liaison au porteur. Ceci est bien mis en vidence par la digoxine dont le dterminant antignique, noyau strode, est li par un sucre au porteur. Les anticorps antidigoxine prsentent une forte raction croise avec le deslanode qui possde le mme noyau strode mais un sucre diffrent et sont peu ou pas ractifs avec la digitoxine qui possde le mme sucre mais un noyau strode diffrent. Les anticorps anti-haptne ont une importance en pathologie car ils peuvent tre responsables de ractions immunoallergiques certains mdicaments, notamment la pnicilline. II - 6 - NOTION DE SPCIFICIT ANTIGNIQUE : C'est la capacit de se lier avec des molcules de reconnaissance. Le pouvoir immunognique d'une molcule (la capacit d'induire une rponse immunitaire) ne prjuge en rien de la spcificit antignique de cette dernire. La rponse immunitaire n'apparatra, toutes choses tant gales par ailleurs, que si la molcule introduite possde des pitopes distincts de ceux prsents sur les molcules constitutives des tissus de l'hte soumis l'immunisation : une molcule intrinsquement immunogne, chez deux htes distincts,

exprimera sa spcificit selon deux modes diffrents. Ceci a t dmontr en utilisant comme antigne des copolymres protiques synthtiques injects des souris de lignes pures : ainsi un copolymre form d'une arte centrale de poly-LLysine ayant des chanes latrales de poly-L-Alanine se terminant par deux acides amins particuliers, Glutamine et Phenyl33 alanine entrane une rponse dirige contre le poly-L-Ala chez les souris de race SJL et contre les acides amins Phe-Glu- chez les souris de race DBA. La spcificit antignique est donc indpendante de l'immunognicit. II - 7 - DIFFRENTS TYPES D'ANTIGNE: On peut ainsi distinguer des antignes : - naturels - synthtiques - artificiels (naturels chimiquement modifis) Parmi les antignes naturels, on distingue des : - xnoantignes : ce sont des antignes prsents chez tous les individus d'une ou de plusieurs espces distinctes de celle du sujet immunis. - alloantignes : ce sont des antignes ingalement rpartis entre les individus de la mme espce que le sujet immunis et entranant la formation d'anticorps chez un individu ne possdant pas l'alloantigne en question. Chez l'homme on peut citer deux systmes polymorphes qui tous deux participent la rponse immunitaire : le complexe majeur d'histocompatibilit et les immunoglobulines. Nous verrons, dans le cas prcis des immunoglobulines, que la substitution d'un seul acide amin suffit pour que la molcule allotypique soit antignique (cours Immunoglobulines VII-2). - autoantignes : ce sont des antignes prsents dans les cellules ou les tissus mmes du sujet immunis. La spcificit d'espce mesure la distance taxonomique (c'est--dire le degr d'loignement) entre deux espces : plus deux espces sont proches, plus grande est la probabilit des ractions croises par partage d'pitopes communs ou apparents sur des molcules constitutives identiques conserves (exemple : albumine humaine et bovine). Dans certains cas se dveloppent des anticorps, dits htrophiles, dirigs contre des antignes prsents dans des espces loignes. Ainsi l'antigne de Forssman est prsent sur les rythrocytes de chien, de mouton, de chvre, de cobaye et de cheval mais pas sur ceux de lapin, de boeuf et humains, l'exception de ceux des individus de groupe A ou AB. On peut retrouver des antignes spcifiques d'organe, parfois communs plusieurs espces diffrentes qui sont dfinis par des antisrums absorbs sur des organes diffrents de celui tudi. II - 8 - NOTION D'IMMUNIT : L'immunit est dite : - active lorsqu'elle est acquise par un organisme suite l'introduction de l'antigne qui va y induire une rponse immunitaire (vaccination, greffe de moelle osseuse

russie). - passive lorsqu'elle est acquise suite l'introduction d'effecteurs (anticorps, cellules) prforms (srothrapie). - acquise lorsqu'elle survient au cours de la vie, mme in-utro, par ducation de clones lymphocytaires. - naturelle lorsqu'elle prexiste tout contact avec l'antigne tant soit non spcifique, soit spcifique mais acquise de faon inaperue par raction croise (ex. : les antiA ou les anti-B des groupes sanguins A, B, O). II - 9 - NOTION D'HYPERSENSIBILIT : 34 La liaison de l'antigne aux molcules de reconnaissance est le plus souvent insuffisante pour entraner par l'activation isole des clones lymphocytaires spcifiques le rejet de l'antigne Ce rejet ncessite l'apport de mcanismes secondaires amplificateurs qui pour beaucoup appartiennent la rponse immunitaire naturelle : ils ont pour but de librer des mdiateurs solubles et de recruter des cellules souvent responsables de phnomnes inflammatoires. L'hypersensibilit dcrit les manifestations cliniques dclenches par le contact antigne/molcules de reconnaissance : dans une rponse immunitaire physiologique ce contact aboutit l'limination bas bruit de l'antigne. Il peut arriver cependant que cette rponse soit mal contrle et aboutisse des manifestations cliniques dont l'expression et le dlai d'apparition dpendent de la nature du mcanisme amplificateur. Ceci a permis GELLS et COOMBS de proposer, en 1967, une classification des tats d'hypersensibilit en quatre types (voir cours Introduction III-14): - hypersensibilit de type I ou anaphylactique, d'apparition immdiate, mdie par les IgE recrutant les polynuclaires basophiles et les mastocytes. - hypersensibilit de type II ou cytotoxique, d'apparition rapide o la lyse cellulaire fait suite l'activation du complment ou l'opsonisation entranant la phagocytose par les macrophages et la lyse par des cellules tueuses ("killer") par un phnomne de cytotoxicit dpendante des anticorps (ADCC). - hypersensibilit de type III par complexes immuns, d'apparition semi-tardive, recrutant les polynuclaires et le complment. - hypersensibilit de type IV, dite retarde, mettant en jeu les lymphocytes T capables de recruter d'autres cellules par l'intermdiaire des diffrentes lymphokines qu'ils scrtent.

III - PARAMETRES DU POUVOIR IMMUNOGENE La notion d'immunognicit est relative, il faut toujours la dfinir par rapport un hte dtermin et des conditions exprimentales choisies. Donc le pouvoir immunogne dune substance est relatif, il est conditionn par un certain nombre de paramtres qui peuvent tre regroups en 3 catgories : -Les paramtres intrinsques de lAg -Les paramtres lis lhte (organisme immunis) -Les paramtres lis aux conditions exprimentales de limmunisation.
Par exemple un polyoside particulier, SIII, extrait de la capsule du pneumocoque est immunogne chez l'homme et la souris alors qu'il ne l'est pas chez le lapin et le cobaye ; Cependant, dans ces deux dernires espces il se comporte comme un haptne, c'est--dire, que l'injection, quelles que soient la technique et la voie d'administration, de la capsule entire dclenche l'apparition d'anticorps anti-SIII.

On voit donc que le pouvoir immunognique dpend de : -facteurs intrinsques ou paramtres structuraux lis la molcule d'antigne, -facteurs lis l'organisme dans lequel on l'introduit -facteurs lis aux conditions exprimentales de l'immunisation. D'une meilleure connaissance, et donc d'une meilleure matrise de ces diffrents paramtres dpend la mise au point de vaccins que l'on espre toujours plus efficaces.

III.1 - PARAMTRES LIS L'ANTIGNE : Ce sont les caractres physico-chimiques de l'antigne qui conditionnent son immunognicit. Seuls les composs organiques peuvent tre immunognes. Les composs inorganiques ne sont en principe pas immunognes : au mieux, ils peuvent se comporter comme des haptnes et tre nanmoins responsables d'eczma du cuir chevelu ou de la face par exemple (dermite de contact par rponse cellulaire T), aprs couplage des radicaux chimiques simples contenus dans certaines teintures capillaires aux 35 protines du cuir chevelu ou de la peau du visage. On peut citer comme exemples des sels de mtaux lourds (chrome, nickel), des substances vgtales ou de nombreux produits chimiques de synthse, que certains dsignent sous le terme de pro-antigne. Ces paramtres renferment la distance taxonomique, la taille (le poids molculaire), la complexit structurale, ltat physique et la capacit de mtabolisation de lAg considr. Le pouvoir immunogne est dautant plus lev que ces paramtres sont importants. Parmi les diffrents paramtres structuraux on distingue :

III - 1-1 La distance taxonomique : Encore appele distance phylognique elle correspond au degr d' "tranget" entre la molcule d'antigne et la molcule constitutive correspondante de l'organisme receveur. Plus cette distance est grande, autrement dit plus le degr d'loignement dans l'chelle d'volution des espces animales est grand entre l'espce d'o est extrait l'antigne et celle qui va tre immunise, meilleure est la rponse immunitaire.
Ainsi un antisrum anti-albumine humaine reconnat bien l'albumine humaine, moyennement celle de singe, peu celle de souris et absolument pas l'ovalbumine. De mme certaines protines, hautement conserves au cours de l'volution, sont de mauvais immunognes (ex. : le collagne).

III - 1-2 Paramtres physico-chimiques : -1 Taille molculaire : Plus le volume d'une molcule est grand, plus en principe son pouvoir immunogne est puissant. L'immunognicit commence pour des difices molculaires de taille suprieure ou gale 3-5 000 Dalton. On connat cependant des peptides de taille infrieure et nanmoins immunogne (ocytocine, vasopressine : hormones d'une dizaine d'acides amins et de 1000 Dalton). L'agrgation ventuelle des antignes est un paramtre important : ainsi seuls les agrgats d'immunoglobulines, obtenus par la chaleur, sont immunogniques. Dbarrasses des agrgats par ultracentrifugation, et donc sous forme de monomres, les immunoglobulines sont au contraire tolrogniques. -2 La rigidit (ltat physique) : Il faut que la structure molculaire de l'immunogne ne soit pas trop "molle", trop fluide car sinon la fixation sur les rcepteurs des lymphocytes qui repose sur une complmentarit tridimensionnelle, est trop lche voire impossible. Ainsi la glatine qui a pourtant un poids molculaire lev est un mauvais immunogne . A l'inverse une certaine mobilit est parfois ncessaire pour permettre le complmentarit tridimensionnelle, (bonne congruence pitope/paratope). Les pitopes immunodominants sont le plus souvent les plus mobiles.
-3 La complexit structurale :

Il faut une certaine diversit dans la structure pour obtenir l'immunognicit.

Ceci a t mis en vidence par l'utilisation de copolymres de synthse comme ceux dcrits prcdemment. L'arte centrale isole de poly-L-Lysine (polymre rptitif monotone d'un seul acide amin) n'est pas immunogne par elle-mme car elle est trop simple dans sa structure. Par contre la greffe de chanes latrales de poly-L-Alanine, et mieux encore, de chanes de poly-L-Alanine se terminant par deux autres acides amins distincts, Phe et Glu, confre une bonne immunognicit

III - 1-3 paramtres biochimiques : -1 Les protines : Ce sont les composs les plus immunognes. Les protines sont des molcules trs antigniques (immunogne) du fait de : -leurs grandes tailles -le polymorphisme de leur structure et des diffrences existant entre espces, entre individus. Les protines les plus immunognes sont celles dont : -La masse molculaire est considrable (>1000D). -La structure est complexe (les homopolymres ne sont pas immunognes, mais les htropolymres le sont). -Ltat physique sur lequel elles se trouvent, ex : lagrgation de certaine protine les rend immunognes. -Les molcules peu mtabolisables sont peu immunognes.
En exprimentation animale on utilise souvent les albumines et les immunoglobulines trangres. Il faut noter que l'hmoglobine, bien qu'assez grosse molcule avec ses chanes de globine, est un mauvais immunogne.

-2 Les glucides : polysaccharides Ils sont immunognes l'tat de polyosides. Ils se comportent comme dexcellents immunognes, nanmoins leur pouvoir immunogne est infrieur celui des protines. Les polysaccharides constituent des difices molculaires hautement diversifis la structure complexe, et donc fortement antigniques. Ils peuvent tre des polymres linaires ou branchs forms dune mme sous unit rpte le long de la chaine, ou dun nombre de sucre varis.
L'intrt qu'on leur porte vient du fait que leur structure est le plus souvent moins complexe que celle des protines et qu'ils entrent dans la composition des parois ou des capsules de nombreux microbes (polysaccharides des pneumocoques, lipopolysaccharides [LPS] des colibacilles).

-3 Les lipides : Par eux-mmes ils ne sont pas des immunognes complets, ce sont des haptnes qui ncessitent le couplage une protine porteuse ou un sucre (glycoprotine et glycolipide). Notons que les glycolipides sont immunogniques du fait de la prsence dans leur structure dune partie saccharidique.
Ainsi le cardiolipide, extrait de coeur de boeuf, a t trs utilis dans le srodiagnostic de la syphilis car il est en raction croise avec des antignes du trponme. C'est en ralit une substance complexe, lipidoprotidique o le lipide joue le rle d'haptne.

-4 Les acides nucliques : L'ADN pur, isol, n'entrane pas de rponse immunitaire exprimentale. Ils ne sont des immunognes que lorsquils sont coupls des protines
On connat cependant des maladies (lupus rythmateux aigu dissmin) qui se caractrisent par Lapparition spontane d'auto-anticorps dirigs contre le propre ADN des patients.

III - 1- 4 Le catabolisme : Rsultant de la conjonction des diffrents paramtres sus-cits, le catabolisme influe sur l'immunognicit : plus il est lent, plus la stimulation antignique perdure et plus l'immunognicit crot.

III - 1- 5 Valence antignique : Au terme de cette tude des paramtres structuraux d'une molcule d'antigne on peut dfinir la valence antignique comme le nombre d'Ac capable de se lier simultanment un Ag. Celui-ci peu tre vu comme la juxtaposition de plusieurs pitopes diffrents, capables chacun d'induire la formation d'un anticorps spcifique. La valence est au mieux gale la somme des pitopes et le plus souvent lui est infrieur notamment pour les molcules de haut poids molculaire en raison de phnomnes d'encombrement strique. Donc l'accroissement de la valence n'est pas directement proportionnel au poids molculaire :
Protine Myoglobine Srum albumine Thyroglobuline Hmocyanine Virus de la mosaque du tabac Poids molculaire (kD) 17 70 (x 4,1) 650 (x 9,3) 6 500 (x 10) valence antignique 3 6 (x 2) 40 (x 6,7) 75 (x 1,9)

40 000 (6,15)

800 (x 11)

III - 2 PARAMTRES LIS L'HTE : Un Ag donn suscite des rponses immunitaires dintensit variable dun individu lautre. Ceci est du des diffrences gntiques existant entre individus lis essentiellement aux :

III - 2 - 1 Gnes Ir : Cest un groupe de gnes codant des protines impliques dans la rponse immunitaire, notamment les molcules HLA. Depuis les travaux de BENACERRAF, on sait que certains animaux et mme certains individus au sein d'une mme espce rpondent mieux que d'autres une stimulation donne. Ayant observ ce caractre hrditaire incontestable de la rponse immunitaire BENACERRAF avait postul l'existence de gnes de rponse immunitaire (gnes Ir) que les tudes ultrieures ont identifis comme tant, en grande partie, les gnes du CMH de classe II.
En effet de la plus ou moins grande facult de liaison des peptides aux antignes HLA de classe II dpend la plus ou moins grande capacit de prsentation aux lymphocytes T et par l, l'induction de la rponse immunitaire. Il existe cependant d'autres gnes non situs sur le chromosome 6 et moins individualiss qui modulent aussi la rponse immunitaire.

III - 2 - 2 Age : L'ge de l'individu immunis est un facteur important, il conditionne, via l'tat de dveloppement physiologique de son systme immunitaire, la qualit de la rponse immunitaire. Les enfants en bas ge dveloppent des rponses immunitaires plus faibles. Il est en effet bien connu qu'il est plus facile d'obtenir un tat de tolrance chez des animaux nouveau-ns.

III - 3 PARAMTRES LIS AUX CONDITIONS EXPERIMENTALES D'IMMUNISATION :

III - 3 - 1 Dose d'immunogne : Les doses trop faible ou trop forte induisent une tolrance. Une bonne immunisation survient alors des doses intermdiaires. Pour des doses extrmement faibles, de l'ordre du nanogramme s'installe un tat de nonrponse, encore appel tolrance aux faibles doses qui est un phnomne actif, spcifique. Lors d'un deuxime contact avec le tolrogne, dans des conditions exprimentales d'immunisation normale (c'est--dire capable d'induire la production d'anticorps) l'organisme ne peut rpondre alors qu'il en est tout fait capable vis--vis d'un antigne diffrent administr la premire fois, des doses normales.

Pour une dose plus importante, de l'ordre du microgramme on aura encore une apparence de rponse nulle mais en fait l'animal commence prparer son systme immunitaire (raction cellulaire isole) : si on refait la mme injection de la mme dose un mois plus tard on verra cette fois une vritable rponse immunitaire. A ces faibles doses peu d'anticorps sont produits, mais ils sont de haute affinit et de forte spcificit et parfois d'isotypes particuliers, notamment IgE chez l'homme et IgG1 chez le cobaye, responsables d'hypersensibilit immdiate. On observe de grande variation dans les doses minimales inductrices en fonction de la nature des antignes : ainsi chez les rongeurs il faut 10-4 grammes d'albumine bovine pour voir apparatre une rponse immunitaire alors que 10-14 grammes d'endotoxines y suffisent. Pour des doses suprieures de l'ordre du milligramme et plus, la rponse augmente avec la dose mais de manire non proportionnelle. Lorsque les doses deviennent trop importantes on observe un tat de tolrance d'abord partiel, puis total, que l'on qualifie de paralysie immunitaire. III - 3 - 2 Voies d'administration : La voie d'administration dicte la localisation du contact de l'antigne avec les cellules immunocomptentes. Lors d'une immunisation par voie intra-dermique, sous-cutane ou intra-musculaire l'antigne est retrouv dans les ganglions rgionaux de drainage. Lors d'une immunisation par voie Orale : GALT Lors d'une immunisation par voie intra-veineuse, ou intra-pritonale l'organe lymphode sollicit est surtout la rate. La voie orale et la voie intra-veineuse tendent entraner un tat de tolrance. Les meilleures voies pour une rponse immunitaire positive, notamment une bonne production d'anticorps, sont les voies sous-cutanes, intra-musculaire et intra-dermique (coussinet plantaire). Elles induisent une immunisation.
La voie d'administration peut modifier le caractre immunognique d'une substance : ainsi le polymre poly D, L-Alanine (branchement d'alanine dextrogyre et lvogyre) est non immunognique chez le lapin, l'exception de l'immunisation par voie intra-dermique en diffrents endroits.

L'administration deux ou trois jours d'intervalle de deux antignes diffrents entrane une dpression de la rponse vis--vis du deuxime antigne : ce phnomne est connu sous le nom de comptition antignique.

III - 3 - 3 Adjuvants : La plupart des protines sont peu immunognes. Pour dclencher une forte rponse immunitaire un antigne protique doit tre inject en association avec un mlange appel adjuvant. Ce sont des substances inertes, non immunognes qui augmentent la rponse immunitaire de l'individu, tant humorale que cellulaire, lors de leur administration simultane avec l'antigne, en favorisant une raction inflammatoire. Ils agissent essentiellement en transformant les antignes solubles en matriel particulaire, ce qui favorise leur captation par les cellules prsentatrices et leur libration plus lente par ces dernires : tout ceci aboutit augmenter le temps de contact entre l'antigne et les cellules immunocomptentes.
Contrairement aux protines porteuses l'adjuvant ne forme pas de liaisons stables avec l'immunogne. De mme sa prsence n'est requise qu'au dbut de l'immunisation, alors que le couplage haptne-protine porteuse est ncessaire aussi bien pour la rponse primaire que pour la rponse secondaire. En exprimentation animale l'adjuvant le plus employ est l'adjuvant complet de Freund qui est interdit chez l'homme : il s'agit d'un mlange d'huile minrale, d'agent mulsifiant et de mycobactries tues (voisines du BK). La solution immunogne mlange avec cet adjuvant forme une sorte de crme qu'on injecte par voie souscutane ou intra-dermique. Les ISCOMs ("immune stimulatory complexes") sont de petites micelles d'un dtergent, le Quil A. Ces micelles dans lesquelles sont empaquetes des protines virales fusionnent avec la membrane plasmique des cellules prsentatrices d'antigne: l'antigne peut alors pntrer dans le cytosol et stimuler une rponse immunitaire, comme le ferait un virus infectant la cellule. Chez l'homme pour les vaccinations, on utilise principalement le phosphate de calcium ou l'hydroxyde d'alumine. L'antigne forme une sorte de film trs dispers la surface de ces particules inertes.

III - 3 - 4 Nature de l'immunisation : La qualit et la quantit des anticorps produits varient selon la nature, primaire ou secondaire, de l'immunisation : -l'isotype change (commutation IgM/IgG) -et la spcificit et l'affinit augmentent lors du passage la rponse secondaire.

III - 4 NOTION D'ANTIGNES THYMO-DPENDANTS ET THYMOINDPENDANTS En fonction de la ncessit ou non de l'aide des lymphocytes T pour la production d'anticorps on distingue des immunognes thymo-dpendants et des immunognes thymoindpendants. La plupart des antignes naturels sont thymo-dpendants. On connat cependant une minorit d'antignes dits thymo-indpendants capables de solliciter directement les lymphocytes B aprs fixation leur rcepteur de surface. Il s'agit le plus souvent d'difices - de haut poids molculaire - de structure rptitive d'un ou de quelques pitopes, - souvent de nature polyosidique - et de catabolisme lent. Deux types d'antignes thymo-indpendants sont dcrits : 1- Les antignes thymoindpendants de type 1 possdent des caractristiques physicochimiques qui en font fortes doses des stimulateurs de tous les lymphocytes B, immatures et matures. On parle alors de mitognes. Exemples : - lipopolysaccharides - flagelline polymrise - polyvinylpyrrolidone
La prolifration et la diffrenciation observes sont le rsultat d'une stimulation polyclonale, contrairement celle conscutive au contact avec un antigne spcifique. On qualifie de telles substances de mitognes, et certaines, purifies, sont utilises in vitro pour stimuler les lymphocytes B (par exemple le pokeweed mitogen). Dans le droulement normal d'une infection, la quantit d'antigne thymo-indpendant de type 1 est trop faible pour que les effets mitognes se manifestent. L'antigne n'est alors capable de stimuler que les lymphocytes B spcifiques, car les immunoglobulines de surface de ce dernier le concentre alors sur ces cellules. Cependant en l'absence de collaboration des lymphocytes T aucune commutation isotypique, ni maturation d'affinit, ni gnration de lymphocyte B mmoire n'est possible.

Ceci explique les caractristiques de la rponse immunitaire aux antignes thymoindpendants : rponse : - de type IgM, - de faible affinit - sans cellules mmoire. 2- Les antignes thymoindpendants de type 2 sont des polysaccharides structure rptitive, retrouvs dans les parois bactriennes. Ils sont dnus d'activit mitogne et ne peuvent stimuler que des lymphocytes B matures.

Exemples : - polysaccharides solubles ( ex : polysaccharide S III du pneumocoque) - dextrans - levanes - TNP-Ficoll - polymres synthtiques d'acides amins lvogyres
Une telle structure en peigne est suffisante pour s'attacher un nombre important d'immunoglobulines membranaires la surface du lymphocyte B avec pour rsultat l'obtention d'un signal d'activation suffisamment fort pour qu'il n'y ait pas besoin d'un deuxime signal d'activation fournit par les lymphocytes T sous forme de mdiateur soluble cours rayon d'action ncessaire lorsque peu d'Ig de surface sont engages dans des complexes avec un antigne thymo-dpendant aux pitopes multiples, diffrents et donc moins reprsents. Le catabolisme lent explique ; - la quasi absence de cellules mmoire lors d'une rponse immunitaire dirige contre un antigne thymo-indpendant -ainsi que l'absence de commutation de classe, l'isotype majeur tant l'IgM. En raison de ces donnes structurales il est ais de comprendre que les protines sont thymodpendantes l'exception de certaines, trs polymrises, comme la flagelline, extraite de Salmonella adlade qui sont thymo-indpendants. De mme les polypeptides synthtiques, au catabolisme trs rapide, sont thymodpendants, l'exception de leurs formes dextrogyres dont le catabolisme est lent et qui sont thymoindpendants. Les polysaccharides, la structure rptitive et au mtabolisme lent, tels qu'on en trouve dans les parois ou les capsules des micro-organismes, sont typiquement des antignes thymo-indpendants. Les haptnes artificiellement conjugus des polymres thymo-indpendants sont thymo-indpendants : la thymoindpendance n'est donc pas lie un registre d'pitopes particuliers mais bien un certain type de configuration spatiale qui permet une activation directe du lymphocyte B.

IV - ANTIGENICITE IV - 1 ANTIGNES POLYOSIDIQUES : Ce sont des antignes de structure simple compars aux protines eu gard au rle faible des structures secondaire ou tertiaire dans leur immunognicit. Il s'agit le plus souvent de dterminants squentiels, c'est--dire faits de la succession de plusieurs oses (pentoses, hexoses ou heptoses) plus ou moins substitus par des radicaux mthyl, actyl, amine ou Nactylamine sur un groupement-OH.
La rduction (composs dsoxy), l'oxydation (obtention d'acide uronique), l'existence d'nantiomres (dextrogyre ou lvogyre) et de liaison anomriques 9 ou 9 participent leur immunognicit. On parle d'oligosides pour des difices molculaires de 10 12 oses et de polyosides pour une taille suprieure. Dans ce cas la structure peut tre linaire, branche ou arborescente. Les polyosides ne sont pas directement immunognes chez le lapin et, pour certains, sont thymoindpendants chez l'homme et la souris.

Parmi les polyosides complexes on range les lipopolysaccharides (LPS) des entrobactries, les glycoprotines, les lectines.
Ainsi le srotype des salmonelles est dtermin par la composition du LPS qui comprend une partie lipidique, le lipide A possdant les proprits endotoxiniques, reli par une rgion dite rgion II constitue d'oligosaccharides monomorphes une rgion I qui contient des units rptitives d'oligosaccharides polymorphes porteurs des dterminants antigniques des srotypes O. Un srogroupe est dfini par l'association de plusieurs dterminants antigniques (ex; : srogroupe A de S. parathyphi A = dterminants 1, 2 et 12). Des expriences d'inhibition par des haptnes ont permis KABAT de dterminer la taille des pitopes oligosidiques (six sept sucres) ainsi que les spcificits antigniques de certains srotypes O de salmonelle (ex. 9-D-Glu (116)9-D Gal pour le systme 1-anti-1). 41

On dfinit un sucre immuno-dominant comme tant celui qui parmi les sucres constitutifs d'un polyoside possde le pouvoir inhibiteur le plus fort dans des expriences d'inhibition haptnique. De tels sucres immuno-dominants sont le plus souvent situs l'extrmit des chanes latrales et sont le principal point de contact de l'pitope avec le site de combinaison de l'anticorps, participant donc le plus l'nergie de la liaison antigneanticorps. Tous les sucres d'un polyoside ne sont pas immunognes ; soit parce qu'ils possdent des structures communes avec des auto-antignes (notamment sur les rythrocytes) ; soit parce qu'ils ont une structure si instable que leur catabolisme est accompli avant mme l'enclenchement de la rponse immunitaire ; soit parce qu'il y a comptition antignique entre les sucres.
Les groupes sanguins A, B, O et AB sont un exemple d'antignes polyosidiques naturels

complexes tudis partir de la salive chez les sujets scrteurs, partir du liquide de kystes de l'ovaire qui contiennent des grandes quantits de ces groupes sanguins et plus difficilement partir des membranes de globules rouges proprement dits. Les travaux de LANDSTEINER, au dbut du sicle, ont conduit aux deux rgles fondamentales de la transfusion : - sur les globules rouges deux antignes, A et B, peuvent tre absents ou prsents, sparment ou simultanment, dfinissant respectivement les sujets de groupe O (pour "Ohne", sans), A, B et AB. - dans le srum d'un individu il existe toujours le (ou les) anticorps dirigs contre le (ou les) antignes que l'individu ne possde pas : anti-A chez un sujet B, anti-B chez un sujet A, anti-A et antiB chez un sujet O. Seuls les sujets AB n'ont pas d'anticorps et sont dits receveurs universels. Ces anticorps sont dits naturels car ils sont prsents ds la naissance. Ils rsultent d'une immunisation croise par partage d'pitopes communs entre les bactries saprophytes intestinales et les substances de groupes A et B. Les htro-anticorps anti-bactries dvelopps la naissance se rvlent tre aussi des allo-anticorps dans le systme transfusionnel. Les gnes A et B codent pour des glycosyl-transfrases. Les pitopes spcifiant chaque groupe sanguin sont des sucres complexes attachs une molcule de base commune l'ensemble des quatre groupes. Cette substance de base, appele substance pneumocoque XIV (SP XIV) car ressemblant certains polysaccharides des pneumocoques, est un sphingolipide complexe de la membrane du globule rouge. La synthse du SP XIV et celle du fucose dpendent du gne H. L'addition des radicaux N-actyl galactosamine ou galactose dpend des gnes A ou B. Il existe de trs rares individus qui ne possdent pas les gnes H : ils sont dits du phnotype Bombay, mais ils possdent les gnes A ou B ne pouvant cependant pas les exprimer en l'absence de gnes H. Groupe O :SP XIV + fucose (substance H) Groupe A :SP XIV + fucose + N-actylgalactosamine (substance A) Groupe B :SP XIV + fucose + galactose (substance B). Le systme immunitaire est donc particulirement discriminant puisqu'il est capable de reconnatre une diffrence qui ne porte que sur un seul sucre. Un deuxime exemple d'antigne polyosidique d'intrt est celui de l 'antigne galactosyl (Gal9113 Gal). Ce sucre est le produit de l'enzyme galactosyltransfrase qui est inactive chez l'homme et certains primates, alors qu'elle est parfaitement fonctionnelle dans le reste du rgne animal et chez les procaryotes. Ds les premires annes de la vie l'homme s'immunise contre cet pitope : on estime que 1 % de nos IgM sont des anticorps anti-galactosyl, constituant un des obstacles majeurs aux xnogreffes.

IV - 2 - ANTIGNES PROTIQUES RECONNUS PAR LES ANTICORPS : Les protines et les polypeptides sont des immunognes le plus souvent thymodpendants. Des traitements physiques (chaleur), chimiques capables de modifier leur conformation sont susceptibles de modifier leur immunognicit. Ce n'est cependant pas toujours le cas puisque le formaldhyde abolit la toxicit des toxines bactriennes tout en en gardant l'immunognicit permettant ainsi la fabrication de vaccins l'aide des anatoxines ainsi obtenues.
42 Les protines naturelles sont difficiles tudier car elles possdent de nombreux pitopes. Elles l'ont d'abord t aprs traitement chimique ou hydrolyse enzymatique permettant d'obtenir des peptides

naturels. L'apport des anticorps monoclonaux, des peptides de synthse, de la mutagnse dirige permettent actuellement d'affiner ces rsultats.

Rapidement on s'est aperu que des modifications chimiques, qui altrent la conformation spatiale, modifie l'immunognicit.
Ainsi, pour les gammaglobulines, plus l'agrgation augmente, plus l'immunognicit augmente : des gammaglobulines dpourvues d'agrgats sont tolrogniques (cf III-1-2-1). La dnaturation, le vieillissement diminue l'immunognicit.

Dj en 1942 LANDSTEINER en utilisant la protine fibrillaire de la soie dmontrait, par des ractions d'inhibition utilisant des peptides d'hydrolyse, que la taille de la rgion immunopotente (conditionnant l'immunognicit de manire globale par rapport aux structures fines qui dterminent la spcificit) tait d'environ huit acides amins. De plus il observait que l'acide amin terminal du peptide avait un rle critique : la substitution de la tyrosine terminale diminuait de moiti le pouvoir inhibiteur dans ce cas prcis. SELA dans les annes 1960, tudiant le lysozyme du blanc d'oeuf, petit peptide d'environ 14 kD avec quatre ponts disulfure constatait que la rduction (dissociation des ponts disulfure) abolissait la raction antigne-anticorps. Les pitopes reconnus n'existaient sur la molcule que dans sa configuration native, dpendant donc de la structure tridimensionnelle. Il les nommait pitopes conformationnels par opposition aux seuls pitopes connus l'poque, dits squentiels et rsultant de l'enchanement des acides amins.
Les travaux ultrieurs utilisant d'autres protines (ribonuclase, albumine humaine, myoglobine du cachalot) ont confirm que des acides amins loigns dans la structure primaire sont proches dans la structure tertiaire et participent ainsi la constitution d'pitopes conformationnels. On a montr galement que la nature des dterminants immunogniques peut varier selon les combinaisons d'espces. Dans quelques cas privilgis l'apport de la cristallographie aux rayons X a permis de prciser que la surface de contact entre l'pitope et le site de combinaison de l'anticorps (paratope) tait d'environ 8 900 2, comprenant 15 22 acides amins rpartis sur 2 4 segments polypeptidiques. La complmentarit prcise entre l'pitope et le paratope est assure par des changements conformationnels : il est reconnu que les dterminants antigniques majeurs (immunodominants) sont ceux qui sont exposs en surface, et ont donc la plus grande mobilit, et donc la capacit d'adaptation au paratope. L'utilisation de polypeptides synthtiques a permis d'valuer les consquences sur l'antignicit de la composition en acides amins, de leur position spatiale, de leur charge lectrique, de leur configuration optique. Elle a permis de prciser (cf supra) qu'un certain degr de complexit molculaire tait indispensable puisqu'en rgle gnrale les homo-polymres sont non immunognes l'exception de la poly-L-lysine dans certaines souches de cobaye (travaux de BENACERRAF sur les gnes Ir). De mme la position spatiale qui dicte l'accessibilit, est un facteur critique de l'immunognicit. Sur un copolymre comme celui prcdemment dcrit (cf. supra) de poly-L-Lys-poly-Ala-Tyr-Glu la rponse anti Tyr-Glu n'existe que si ces deux acides amins sont

l'extrmit de chanes latrales (poly Ala) rapproches ou l'origine de chanes latrales espaces, donc accessibles dans les deux cas. Contrairement aux protines natives, pour lesquelles l'immunognicit est proportionnelle la taille, les polypeptides de synthse se rvlent de bons immunognes partir de 4000 daltons et ce sans rapport aussi direct avec la taille. Les copolymres de forme lvogyre d'acides amins sont trs immunognes et thymo-dpendants alors que ceux qui sont dextrogyres sont peu immunognes et thymo-indpendants. L'influence de la position spatiale et l'accessibilit est montre par le fait qu'un copolymre mixte fait de 95 % d'acides amins lvogyres avec cependant 5 % d'acides amins dextrogyres l'extrmit des chanes latrales, donc trs accessibles, est peu immunogne.

Les conclusions de tous ces travaux sur l'antignicit des protines pour la rponse humorale sont les suivantes : l'immunogne doit avoir une taille minimale (1000 Daltons), prsenter une certaine complexit molculaire, possder plusieurs dterminants dont la
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taille est d'environ 10 20 acides amins et qui doivent tre accessibles. Ce sont plus souvent des dterminants conformationnels que squentiels qui doivent prsenter un certain degr de mobilit pour augmenter la complmentarit antigne-anticorps. La nature des acides amins avec leur noyau dicte ainsi, par le biais du caractre d'hydrophobicit leur position dans la chane replie et par leur chanes latrales le degr de mobilit.
Bien qu'il n'y ait pas de rgle absolue il existe maintenant des logiciels avec des algorithmes, faisant intervenir ces nombreux paramtres, qui permettent de prdire, partir de la squence primaire d'une protine, les sites potentiellement immuno-dominants, ce qui a des implications pour la ralisation des vaccins

IV- 3 - EPITOPES T DES PROTINES ET DES PEPTIDES : Contrairement aux lymphocytes B qui reconnaissent des antignes de nature diffrente (protines, lipides, polysaccharides, ADN), les lymphocytes T ne reconnaissent essentiellement, de rares exceptions prs, que des antignes issus de protines. De plus, alors que les lymphocytes B reconnaissent le plus souvent des pitopes conformationnels, donc prsents sur des molcules d'antigne sous leur forme native, les lymphocytes T ne reconnaissent que des peptides, donc des pitopes squentiels, prsents par les produits des gnes de classe I et II du CMH.
L'tude des pitopes T des protines reposent sur l'induction in vivo de rponse immunitaire cellulaire (rejet d'allo-greffe, hypersensibilit retarde), l'analyse in vitro de la rponse prolifrative aux peptides des lymphocytes T d'animaux immuniss, et celle de la spcificit des clones et hybridomes T obtenus.

On sait dsormais que les pitopes T sur les protines sont moins nombreux que

les pitopes B et qu'ils en sont le plus souvent distincts mme si des chevauchements sont parfois possibles. Ce sont le plus souvent des dterminants squentiels et parfois mme la rponse prolifrative est aussi intense avec le peptide qu'avec l'antigne entier. L'impact de la structure tertiaire ne s'exerce que par l'influence qu'elle a sur le catabolisme protique et la slection ainsi entrane des pitopes. Ils s'organisent autour de rsidus critiques que l'on nomme acide amin immunodominant et la taille de ces squences est d'environ 10 12 acides amins.
Ceci a t confirm par lution de peptides partir des molcules du CMH : on retrouve une taille de 9 acides amins pour ceux lus des molcules de classe I, et de 13 17 acides amins pour ceux lus des molcules de classe II.

Il existe au moins deux sites fonctionnels de liaison sur les dterminants antigniques reconnus par les lymphocytes T : l'pitope qui se lie au TCR au niveau du paratope ; l'agrtope qui se lie la molcule HLA au niveau du dsotope.
Ainsi pour la rponse au cytochrome C chez la souris on a localis l'pitope immunodominant au niveau de la lysine 99 et l'agrtope au niveau de l'alanine 103. La consquence en est que des peptides drivant d'une mme protine peuvent avoir diffrentes restrictions au CMH, dues leur capacit de liaison diffrente diverses molcules du CMH.

La prsence d'un mme acide amin au site immunodominant sur des molcules d'espces diffrentes explique les ractions croises observes (prolifration de lymphocytes T murins sensibiliss la myoglobine de cachalot avec des myoglobines d'espces diffrentes ayant aussi une glutamine en position 109). Dans ce mme modle l'tude de clones T spcifiques a permis d'identifier les acides amins responsables de la restriction H2 de la rponse, donc les agrtopes : la restriction I-Ad dpend de la glutamine 109 et celle I-Ed de la lysine 140.
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Il existe galement des dterminants cryptiques totalement inaccessibles sur la molcule native ; de tels dterminants n'entranent une prolifration in vitro que des lymphocytes T sensibiliss in vivo avec le peptide et non avec la protine entire. On a montr que la capacit de stimuler des clones T tait en corrlation avec la capacit des peptides former des hlices 9 , ce qui est rapprocher de la structure du site de liaison du peptide sur le CMH, constitu de deux hlices 9 anti-parallles spares par une gouttire au fond, fait de feuillets 9 o se loge le peptide. Un deuxime facteur qui gouverne l'immunodominance T est l'amphipathicit ou

capacit de prsenter des rgions hydrophiles et hydrophobes : elles interviendraient en stabilisant le peptide dans la gouttire du CMH, en le protgeant contre la protolyse, en facilitant son incorporation dans les membranes et en favorisant une structure alpha hlicodale. Enfin, dernier facteur, il a t montr que la prsence de rsidus chargs (lysine) prs de l'extrmit C-terminale favorisait les liaisons au CMH. IV - 4 - SUPERANTIGNE A la diffrence des antignes protiques classiques, les super-antignes ne ncessitent pas d'tre apprts (trononns en oligopeptides) pour se lier au TCR. On appelle ainsi des molcules capables de se lier, sur leur versant externe, des molcules de classe II du CMH et aux chanes 9 du TCR. Cette liaison est donc distincte de celle provoque par le peptide antignique. L'activation qu'elles entranent est donc polyclonale, et intresse un plus grand pourcentage (10 15 %) de lymphocytes T que celle spcifique mdie par l'antigne. Certaines entrotoxines de staphylocoques, l'origine de toxi-infection alimentaire ou de syndrome de choc, se comportent comme des superantignes. Les superantignes ne sont pas impliqus dans les mcanismes de dfense vis--vis des agents pathognes, mais dans la gense des mcanismes immunopathologiques. Il existe galement des molcules d'origine bactrienne (protines A et G du Staphylocoque) capable de se lier au BCR indpendamment du site anticorps et d'activer de faon polyclonale les lymphocytes B. V - CONCLUSION Les molcules trangres (antignes) sont constitues, leur surface principalement, d'une mosaque de dterminants antigniques (pitopes) reconnus spcifiquement par les lymphocytes B et les lymphocytes T. Dans le cas des antignes thymodpendants, le plus frquent, il faut qu'il y ait au minimum deux pitopes, l'un "haptnique" reconnu par les lymphocytes B, l'autre de type "porteur" reconnu par les lymphocytes T. Le dterminant T porte aussi un site de liaison pour le CMH (agrtope) dont l'absence explique, chez la souris, l'existence de lignes non-rpondeuses certains antignes. Pour des raisons de physiologie de la rponse immunitaire les pitopes B sont plutt conformationnels et les pitopes T plutt squentiels. Dans tous les cas l'hydrophobicit, le degr de mobilit, la rapidit du catabolisme sont des facteurs prdominants de l'immunognicit. Dsormais ils sont tous prendre en considration lors de la mise au point d'un vaccin que l'on espre efficace, c'est--dire susceptible d'induire une protection par la mise en place d'une rponse humorale et cellulaire.
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RESUME

Les molcules trangres sont appeles antignes et se lient spcifiquement aux molcules de reconnaissance produites par les lymphocytes B et T, que sont respectivement les immunoglobulines de surface et le rcepteur T (TCR). L'antigne ne peut donc tre dfini que par rapport un hte receveur. L'immunognicit, ou capacit pour un antigne d'induire une rponse immunitaire, dpend donc la fois de l'antigne, du receveur et des conditions d'immunisation. Les antignes sont constitus, principalement leur surface, d'une mosaque de dterminants antigniques, ou pitopes, reconnus spcifiquement par les paratopes des immunoglobulines pour les lymphocytes B ou par le TCR pour les lymphocytes T. La plupart sont thymo-dpendants, ncessitant la coopration des deux sous-populations de lymphocytes pour une parfaite prise en charge par le systme immunitaire. Ceci se traduit par l'existence d'pitopes B, de type haptnique et plutt de nature conformationnelle, et d'pitopes T, de type "porteur" et de nature squentielle. Ces pitopes T, de plus, portent aussi des sites de liaison pour les antignes du complexe majeur d'histocompatibilit, ce qui explique l'existence des gnes de rponse immunitaire. Tous les paramtres qui concourent un meilleur et plus durable temps de contact pitope-paratope augmentent l'immunognicit et sont donc des facteurs prendre en considration pour l'obtention de vaccins efficaces (hydrophobicit, taille molculaire, degr de mobilit, rapidit du catabolisme de l'immunogne, ...) POUR