UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACUTLAD DE QIMICA LABORATORIO DE FISIOLOGA (0164) PRCTICA #1- PERMEABILIDAD DE LAS MEMBRANAS CELULARES

Grupo: 7 Materia: Laboratorio de Fisiologa

SEMESTRE 2014-1

Laboratorio de Fisiologa.

Permeabilidad de las membranas celulares Objetivos: 1. Observar el fenmeno de la hemlisis y explicarlo en funcin de las diferencias de osmolaridad entre el interior y el exterior de la clula. 2. Comprobar que la osmolaridad de una solucin depende del nmero de partculas osmticamente activas y no de su concentracin 3. Determinar la relacin que existe entre el coeficiente de particin y la permeabilidad de la membrana. Explicar el fnomeno en funcin de la estructura qumica de la membrana. Diagrama de flujo:

Preparamos un tubo con 6mL de solucin salina al 0.9% y agregamos 4 gotas de sangre.Mezclamos. Observaci En un tubo de ensayo colocamos 5mL de agua destilada, en otro 5mL de agua con solucin salina y agregamos a cada uno 6 gotas de la solucin previamente preparada. Observamos.

1.

n de la hemlisis.

2. Actividad osmtica de sustancias no difusibles. 3.Actividad osmtica de sustancias difusibles.

Preparamos las soluciones indicadas en la tabla 1 y a cada tubo agregamos 5 gotas de la solucin del punto 1. Tomamos medida del tiempo transcurrido para la hemlisis y observamos.

Colocamos en un tubo 5mL de una solucin de glicerol 0.3M y en otro 5mL de una solucin .3M de sacarosa. A cada tubo aadimos 5 gotas de la suspencin del punto 1. Mezclamos y observamos.

Colocamos 5mL de una solucin de alcohol metlico en un tubo de ensayo, 5mL de alcohol etlico en otro tubo y 5mL de alcohol proplico en un tercer tubo de ensayo. Agregamos 5 gotas de la solucin del punto 1 al primer tubo, observamos y tomamos en tiempo en el que 4. ocurri la hemlisis. Velocidad de difusin Repetimos este ltimo paso para los otros dos tubos. A los tubos en los que agragamos solucin del punto 1, aadimos unas gotas de solucin neutralizadora, desechamos en la tarja y lavamos. 5. Tratamient Limpiamos y secamos el material y los desechos como lancetas o torundas y guantes los colocamos en su lugar correspondiente. o de

residuos.

RESULTADOS Experimento 1- Observacin de la hemlisis 1. Tubo con 6 ml de solucin salina (NaCl 0.15 M) y aproximadamente seis gotas de sangre. (Esta es la muestra de sangre que fue utilizada para los experimentos siguientes).

Clculo de osmolaridad: Ejemplo de los clculos realizados

Partiendo de ley de Vant Hoff y considerando la modificacin del coeficiente crioscpico la ecuacin a utilizar es:

Donde:

Tubo 1: ( )( )

Utilizando la siguiente relacin: 22.4 atm= 1 Osm

30OSm 300mOsm

2. Para distinguir el fenmeno de la hemlisis se agregaron 5 gotas de la solucin preparada en el punto 1 a: - Un tubo de ensayo con 5 ml de agua (Tubo 1) -Un tubo de ensayo con 5 ml de solucin salina 0.15 M (Tubo 2)

Imagen 1. Imagen que muestra el fenmeno de hemlisis producido en el Tubo 1 y el Tubo 2.

En el Tubo 1 fue posible observar la hemlisis de los eritrocitos ya que la concentracin de soluto dentro de la clula era mucho mayor que fuera de ella en donde solo haba agua. Este tubo a diferencia del Tubo 2 presentaba un aspecto traslcido propio de una solucin hipotnica. En el Tubo 2 no se produjo el fenmeno de hemlisis ya que la solucin salina (0.15 M) era isoosmtica e isotnica con respecto al plasma sanguneo de manera que no hubo actividad osmtica.

Experimento 2- Actividad osmtica de sustancias no difusibles En este experimento se determin la osmolaridad necesaria para que se produjera la hemlisis de eritrocitos en tres soluciones distintas pero con la misma concentracin molar. Clculo de la concentracin de diluciones: ( )( )( )( )

Clculo de osmolaridad para el NaCl:

Clculo de osmolaridad para el CaCl2:

Clculo se osmolaridad para la sacarosa:

Tabla 1. Tabla que muestra los resultados obtenidos al realizar los clculos para obtener la concentracin osmolar de las disoluciones de NaCl tomando en cuenta el coeficiente crioscpico (G). Tubo ml de (0.15 M) 1 2 5 2 ml de agua destilada 0 3 Concentracin final (M) 0.15 0.06 Osmolaridad (mOsm) 300 120 Osmolaridad G=1.8 (mOsm) 270 108

3 4 5

1.5 1 0.5

3.5 4 4.5

0.045 0.03 0.015

90 60 30

81 54 27

Tabla 2. Tabla que muestra los resultados obtenidos de la clasificacin de las disoluciones del NaCl de acuerdo a su tonicidad y concentracin osmolar comparando los tubos con los preparados en el Experimento 1. Tubo Osmolaridad (mOsm) 1 2 3 4 5 300 120 90 60 30 Tonicidad respecto al plasma Isotnica Isotnica Hipotnica Hipotnica Hipotnica Concentracin osmtica respecto al plasma Isoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica

Imagen 2. Imagen que muestra los tubos 1-5 con una solucin de NaCl y sangre, la hemolisis de eritrocitos ocurri en los tubos 3-5.

Tabla 3. Tabla que muestra los resultados obtenidos al realizar los clculos para obtener la concentracin osmolar de las disoluciones del CaCl2 tomando en cuenta el coeficiente crioscpico (G). Tubo ml de CaCl2 (0.15 M) 1 5 ml de agua destilada 0 Concentracin final (M) 0.15 Osmolaridad (mOsm) 450 Osmolaridad G=2.6 (mOsm) 390

2 3 4 5

2 1.5 1 0.5

3 3.5 4 4.5

0.06 0.045 0.03 0.015

180 135 90 45

156 117 78 39

Tabla 4. Tabla que muestra los resultados obtenidos de la clasificacin de las disoluciones del CaCl2 de acuerdo a su tonicidad y concentracin osmolar comparando los tubos con los preparados en el Experimento 1. Tubo Osmolaridad (mOsm) 1 2 3 4 5 450 180 135 90 45 Tonicidad respecto al plasma Isotnica Isotnica
Hipotnica Hipotnica Hipotnica

Concentracin osmtica respecto al plasma Hiperosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica

Imagen 3. Imagen que muestra los tubos 1-5 con una solucin de CaCl2 y sangre, la hemlisis de eritrocitos ocurri en los tubos 3-5.

Tabla 5. Tabla que muestra los resultados obtenidos al realizar los clculos para obtener la concentracin osmolar de las disoluciones de la sacarosa.

Tubo

ml de Sacarosa (0.15 M) 1 2 3 4 5 5 2 1.5 1 0.5

ml de agua destilada 0 3 3.5 4 4.5

Concentracin final (M) 0.15 0.06 0.045 0.03 0.015

Osmolaridad (mOsm) 150 60 45 30 15

Tabla 6. Tabla que muestra los resultados obtenidos de la clasificacin de las disoluciones de la sacarosa de acuerdo a su tonicidad y concentracin osmolar comparando los tubos con los preparados en el Experimento 1. Tubo Osmolaridad (mOsm) 1 2 3 4 5 150 60 45 30 15 Tonicidad respecto al plasma Isotnica Hipotnica Hipotnica Hipotnica Hipotnica Concentracin osmtica respecto al plasma Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica Hipoosmtica

Imagen 4. Imagen que muestra los tubos 1-5 con una solucin de sacarosa y sangre, la hemlisis de eritrocitos ocurri en los tubos 2-5.

Imagen 5. Imagen que muestra los tubos con soluciones de Sacarosa y Glicerol. La hemlisis ocurri en el tubo con Glicerol.

Actividad osmtica de sustancias difusibles

Coeficiente de particin

Do s 0.0097 7 sol 0.0357 9 uci 0.156 6 on es isoosmticas con respecto a los glbulos rojos (300mOsm) una difusible (Glicerol) y otra no difusible (Sacarosa). Se observ que el tubo del glicerol tena un aspecto traslcido por lo que se determin que hubo hemlisis, mientras que el tubo con la sacarosa tena un aspecto turbio lo que indicaba que no haba ocurrido hemlisis.

Tiempo (seg.)

Velocidad de difusin Tabla 7. Tabla que muestra el coeficiente de particin de tres alcoholes diferentes y el tiempo en que se produjo la hemlisis de los eritrocitos.

Grfica 1. Grfica que muestra la relacin entre el coeficiente de particin de los tres distintos alcoholes con el tiempo en que se llev a cabo la hemlisis de eritrocitos.

Velocidad de difusin
10 9 8 Tiempo (seg) 7 6 5 4 3 2 1 0 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 Coeficiente de particin Tiempo

DISCUSION DE RESULTADOS 1.- Observacin de la hemlisis. En ambos tubos vimos al comienzo una solucin de color rojo y de aspecto turbio. En el tubo con solucin salina observamos que su aspecto no cambi, adjudicamos esta falta de cambio a que los eritrocitos fueron colocados en una solucin isotnica e isoosmtica por lo cual no ocurri la hemlisis y se mantuvo la integridad de los eritrocitos. En el tubo con agua destilada, observamos que el aspecto turbio de la solucin cambi por un aspecto totalmente claro, de un color ligeramente rojo y traslcido, debido a que ocurri la hemlisis, porque al poner a los eritrocitos en un medio hipoosmtico, el agua fluy de un lugar de menor a mayor concentracin, entrando en los eritrocitos y provocando la hemlisis. Lo que observamos a nivel macroscpico fue resultado de slo ver hemoglobina en la sangre y creemos que los eritrocitos se hallaron en el fondo del tubo ya hemolisados. 2.- Actividad osmtica de sustancias no difusibles. Con base en los resultados obtenidos y tomando como referencia la osmolaridad de los lquidos corporales (270-300mOsm) pudimos observar que la solucin contenida en el tubo 1 es isosmtica e isotnica respecto al plasma y por est razn no hubo cambio alguno en los eritrocitos; sin embargo en el tubo 2 sucedi lo mismo, pero es evidente que la osmolaridad no es la misma, incluso es menor, razn por la cual la solucin de

ese tubo es hiposmtica pero a su vez es isotnica debido a que como se mencion anteriormente, no hubo hemolisis. En los tubos 3 a 5, claramente se observ la lisis de los eritrocitos debido a que todas las soluciones son hipotnicas, pero adems identificamos que la rapidez de la hemlisis est directamente relacionada con la tonicidad de una solucin, pues en el caso del tubo 5 (solucin que presenta la menor concentracin) la hemolisis se present despus de los 15 segundos de adicionar los eritrocitos, en el tubo 4 el tiempo fue de 30 segundos y para el tubo 3, fue ms de un minuto. 3. Actividad osmtica en sustancias difusibles. Se mezcl en 5 mL de una solucin isotnica de glicerol (0.3 M) 5 gotas de la suspensin de glbulos rojos y se not el tubo de ensaye sin turbidez, esto gracias a que la solucin de glicerol es una sustancia difusible y por lo tanto, sta entr libremente a travs de la membrana e hizo que los glbulos rojos explotaran, es decir, se produjo la hemolisis. En cambio, en 5 mL de una solucin isotnica de sacarosa (0.3 M) 5 gotas de la suspensin de glbulos rojos y se not una turbidez en el tubo de ensaye, esto quiere decir que los glbulos rojos siguen intactos, es decir, que no ocurri la hemolisis. En el anlisis de lo observado, podemos decir que la solucin de glicerol es una solucin isotnica, pero no es isoosmtica ya que si ocurri la hemlisis. Esto ocurri ya que gracias a que el glicerol es una sustancia difusible y por esta propiedad es capaz de pasar libremente a travs de la matriz lipdica sin ninguna restriccin, al hacerlo, hace que el eritrocito cambie de tonicidad y se inflame hasta reventarse (hemolisis). En caso contrario, la solucin de sacarosa es tanto isotnica como isoosmtica, ya que sta no es difusible en la membrana y por lo tanto no puede atravesar la membrana, solo de disolvente (en este caso el agua), pero como la solucin es isotnica no hay paso de ste y la clula no cambia de tonicidad.

CONCLUSIONES En la membrana celular se lleva a cabo un tipo de transporte pasivo denominado smosis, basndonos principalmente en este fenmeno, identificamos que al agregar eritrocitos en una solucin hipoosmtica se observa la hemlisis, mientras que en el caso de una solucin isoosmtica los eritrocitos no sufren modificacin alguna. La osmolaridad de una solucin depende del nmero de partculas osmticamente activas (que son incapaces de atravesar la membrana).

Uno de los parmetros utilizados para medir la difusibilidad de las sustancias a travs de la matriz lipdica de la membrana es el coeficiente de particin, ste valor nos indica que tan rpido pasan stas a travs de la membrana.

BIBLIOGRAFA -Fox, I.S. (2011). FISIOLOGA HUMANA. Mac Graw Hill. Mxico, D. F. 129-138 pp. - Ganong, W.F (1997). FISIOLOGA MDICA. Editorial El Manual Moderno. Mxico, D.F. 28-37 pp.