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CIENCIAS BIOLGICAS

ALUMNO:

tafur gonzales jairo

CURSO:

Microbiologa acutica

TEMA:

Recuento de hetertrofos

DOCENTE:

Olga Francia Arana

Lambayeque, octubre del 2012

Recuento de Bacterias Hetertrofas

INTRODUCCION

Las bacterias se dividen en dos tipos, dependiendo de su capacidad de absorber dixido de carbono del medio ambiente. La bacteria hetertrofa-HB obtiene dixido de carbono de sustancias orgnicas como carbohidratos y protenas. La mayora de las bacterias son hetertrofas, incluyendo a los patgenos humanos y a la mayora de las bacterias encontradas en los sistemas deagua potable. Muchas variedades de bacterias hetertrofas se encuentran en la naturaleza. Las bacterias hetertrofas juegan un papel vital en el reciclaje natural de sustancias. Bacterias hetertrofas son aqullas que necesitan materia orgnica como fuente de energa; Las bacterias hetertrofas sobreviven como parsitos, creciendo dentro de otros organismos y utilizando tanto los nutrientes como la maquinaria celular de la clula husped. Son las que cierran el ciclo de la materia en los ecosistemas al degradar cualquier sustancia orgnica a sus elementos inorgnicos originales. La medicin de bacterias hetertrofas en el agua potable puede proporcionar Informacin til a los operadores de plantas de agua, ingenieros sanitarios, supervisores de la calidad del agua y analistas de laboratorios de calidad del agua. Durante el tratamiento la densidad bacteriana vara y en la red de distribucin se puede monitorear el deterioro de la calidad a travs de los mtodos de recuento heterotrfico en placas. La aplicacin constante del mtodo de RHP seleccionado proporcionar datos bsicos para evaluar cambios en la calidad bacteriana del agua potable. II. OBJETIVOS Determinar la calidad higinica del agua.

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III. MARCO TEORICO

Bacterias Hetertrofas Definicin Este tipo de bacterias parasitan a los seres vivos y usan los compuestos orgnicos que estos elaboran. Dentro de este grupo existen las bacteriaspatgenas o parasitarias son las causantes de enfermedades en los seres vivos. Tambin estn aquellas bacterias de la putrefaccin o saprfitas que descomponen las sustancias orgnicas en las que viven y se valen de su materia orgnica muerta para poder alimentarse pudiendo alterar las caractersticas organolpticas del agua. Otro tipo de bacterias son las simbiticas, que viven en cooperacin con otros organismos. Por ltimo estn aquellas que realizan fermentaciones, de las que se vale el humano, como el cido actico, fermentos lcticos, entre otros. Por lo tanto, tanto las bacterias que causan como las que no causan enfermedades son hetertrofas. Medios selectivos versus no selectivos para la reproduccin de bacterias hetertrofas Los medios RHP empleados para enumerar los hetertrofos encontrados en el agua se consideran medios no selectivos porque no tienen compuestos inhibitorios ni selectivos para un determinado grupo de bacterias. Algunos compuestos que se usan en los medios selectivos son las sales biliares, sulfato de laurilo de sodio o desoxicolato de sodio (usado en medios para la deteccin de coliformes), azida de sodio (selectiva para enterococcos), colorantes (verde brillante) y antibiticos. Las condiciones de incubacin, incluida la temperatura, pueden ser selectivas y por consiguiente tales condiciones deben estar especificadas para las bacterias particulares que se procura detectar o enumerar.
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Usos del recuento heterotrfico en placas El recuento hetertrofico en placas es un procedimiento sencillo que se puede realizar por el mtodo de placa fluida, difusa o filtracin por membrana (FM) y es una herramienta muy til. Aunque no es esencial para evaluar la seguridad del agua potable, los resultados del RHP proporcionan informacin que complementa los resultados de los coliformes totales. El recuento de hetertrofos se puede usar para indicar la composicin bacteriana general del agua de la fuente y la eficacia y eficiencia de los procesos de tratamiento del agua, como la sedimentacin, coagulacin, filtracin y cloracin. El monitoreo de hetertrofos en el agua distribuida puede proporcionar informacin sobre la limpieza del sistema de distribucin, desarrollo de bacterias despus del tratamiento, efectos de los cambios de temperatura en el agua y del cloro residual en la poblacin bacteriana. IV. METODOLOGIA Existen 3 mtodos: A. Mtodo de placa fluida (MPF) El mtodo de placa fluida para el anlisis del RHP de las muestras de agua presenta algunas desventajas que limitan la recuperacin de las bacterias. Como usa agar licuado a una temperatura de 44 a 46 C estn expuestas a la presin del calor lo cual es probable que las bacterias fisiolgicamente estresadas o daadas no se desarrollen debido a alguna forma de inhibicin metablica. Otra desventaja es que mediante este mtodo slo se puede analizar un mximo de 1,0 ml de muestra.

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B. Mtodo de placa difusa (MPD) Este mtodo evita la tensin del calor del agar licuado temperado usado en el mtodo de placa fluida. Por lo general, cuando se aplica un perodo de incubacin no mayor de 3 das, se produce un mejor desarrollo de la pigmentacin en las colonias de bacterias, independientemente del medio usado. Es recomendable examinar un volumen de 0,1 ml a 0,5 ml. Cuando se dispone de medios de crecimiento ms ricos. El mtodo de placa difusa no es un procedimiento nuevo. Ha sido utilizado por muchos aos y se ha demostrado que permite recuentos mayores de placas que el procedimiento de placa fluida

C. Mtodo de filtracin por membrana (PPM) La tcnica de filtracin por membrana es una de las herramientas ms verstiles para un microbilogo del agua y la mayora de los

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analistas conocen el procedimiento de filtracin por membrana para la determinacin de coliformes totales. El uso del mtodo de filtracin por membrana para el recuento de hetertrofos permite examinar grandes volmenes de aguas turbias y es particularmente til cuando el recuento es bajo. Las ventajas del procedimiento de la filtracin por membrana es que requiere menos tiempo y espacio para la incubacin y materiales. El recuento de colonias en los filtros de membrana blancos puede ser un problema debido al tamao pequeo de la colonia para algunas bacterias y la falta de contraste entre las colonias no pigmentadas y la membrana blanca. Este problema se puede resolver al ajustar la fuente de luz en un ngulo bajo a fin de crear un efecto de sombreado o al inclinar la placa y volver a enfocar el microscopio. Esta ltima manipulacin requiere un reajuste continuo del microscopio pero funciona bien para los filtros de membrana con cuadrculas.

SEGUN LA NORMA, TENDREMOS EN CUENTA LO SIGUIENTE, PARA NUESTROS CALCULOS:

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V. MATERIALES: Para la dilucin: Diluyente es SSFE. Pipetas de 10 y 1 ml. Placas estriles. Medio de cultivo: agar PLATE COUNT o agar de recuento. Muestra: Agua de Ro. VI. PROCEDIMIENTO: 1. Preparacin de materiales: rotular las placas: numero de muestra, dilucin, fecha y T en la tapa. Y tomar las caractersticas fsicas de la muestra, como: olor, color, turbidez, sedimento, pH y temperatura.

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2. Preparacin de las diluciones: La muestra inicial debe estar homogenizada y nunca en reposo.

100

102

1 ml de muestra 99 ml de SSFE

Muestra inicial

1 ml

0.1ml

1ml

0.1ml

100

10-1

10-2

10-3

ESQUEMA DE LA PREPARACION RPIDA DE DILUCIONES

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100 Para esta dilucin se tomo 1 ml de la muestra y se sembr un placa( mtodo de placa fluida) 10-1para esta dilucin se tomo 0.1 ml de la muestra y se cultivo en placa fluida 10-2 Para esta dilucin se llevo 1 ml de la muestra en 99 ml de SSFE. Una vez preparada se tomo un 1 ml de esta solucin y se sembr en placa 10-3 de la dilucin anterior se tomo 0.1 ml y se sembr en placa vertida

Uso de material estril

Preparacin de las diluciones

3. Preparacin de la muestra: Agitar la muestra, si se tiene partculas van a ir al fondo entonces los microorganismos tambin irn al fondo. Se dan movimientos fuertes 20 a 25 veces evitando la formacin de espuma y utilizar la muestra rpidamente. 4. Siembra: El medio de cultivo debe estar listo, licuado y enfriado a 45 a 48 C. Se coloca la muestra de la manera indicada segn el esquema anterior y se agrega el medio de cultivo se deja reposar 5 minutos y luego incubamos 24 horas y hacemos la primera lectura y luego se deja 48 horas ms a 35 C.

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Sembrando segn tcnica de la placa fluida

Colocando inmediatamente el medio PLATE COUNT

5. Lectura: Se seleccionan las placas cuyos recuentos estn comprendidos entre 30 y 300 UFC. Si las placas tienen un recuento menor de 30 anotar el nmero de colonias y multiplicamos por la inversa de la dilucin. Si el nmero de colonias no est comprendido entre 30 y 300 y se excede de 300 seleccionar la placa cuyo recuento este prximo a 300 y multiplicar por la inversa de la dilucin. Si no han desarrollado en las placas ninguna colonia comunicamos un valor inferior a una vez a un reciproco de la dilucin ms baja. El reporte de datos se da en UFC/ml.
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Placas despus de realizar el conteo de las colonias

Dilucin 100 (Incubacin Medio Ambiente) Recuento: 784 UFC

Dilucin 100 (Incubacin Estufa 35C) Recuento: Se trabajo mal

Dilucin 10-1 (Incubacin Medio Ambiente) Recuento: 299 UFC Microbiologa acutica

Dilucin 10-1 (Incubacin Estufa 35C) Recuento: 320 UFC

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Dilucin 10-2 (Incubacin Estufa 35C) Recuento: 30 UFC

Dilucin 10-3(Incubacin 35C) Recuento: 14 UFC Microbiologa acutica

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VII. RESULTADOSDE LAS MUESTRAS ANALIZADAS

RESULTADOS DE LA MUESTRA ANALIZADA EN EL CASERIO RACA RUMI- CHONGOYAPE

Tipo de muestra: lquida, agua de ro Procedencia: Ro Lugar: Distrito de Chongoyape Muestreador: Grupo 4 Fecha: 26 de septiembre del 2012 Cantidad: 450 ml Ph: 7 Temperatura: 21C Responsable: Yesica Monteza Salazar Caractersticas Fsicas De La Muestra: Color lmpido, caracterstico, pocas partculas en suspensin. Sin sedimento sin olor

Dilucin 10o 10-1

Mtodo de recuento en placa fluida Temperatura Ambiente 789 299 Temperatura 35C Se trabaj mal 320

10-2
10-3

40
10

30
14

* No se trabajar con las ltimas diluciones ya que estn fuera del intervalo 30-300 =

=3500 UFC

3.5x103 UFC/ml

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VIII. INTERPRETACIN De acuerdo a los resultados presentados las muestras de AGUA PARA CONSUMO HUMANO, realizado y segn lo establecido en el Reglamento de los Lmites Mximos Permisibles del D.S. N 031-2010-MINSA (AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO) que establece los parmetros y lmites mximos permisibles que debe tener toda agua de consumo/uso humano: El agua muestreada y analizada en el Laboratorio de Microbiologa - Facultad de Ciencias Biolgicas de UNPRG, NO CUMPLE con la reglamentacin correspondiente en el parmetroevaluado: Recuento de hetertrofos en placa fluida; la muestra proveniente del Casero Raca rumi Chongoyape no est dentro del lmite permitido para aguas de consumo pues sobrepasa las 500 UFC/ml. X. CONCLUSIN La muestra analizada presenta un recuento de hetertrofos de 35x102 UFC/ml, y no es apta para el consumo humano. XI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioAguas.htm http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2010/ 05/PRT-712.02-072%20V%203%20Rto%20heterotrofos.pdf http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/gdwq3_es_fulll _lowsres.pdf http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT072.pdf

http://www.watersolutionsperu.com/pdf/analisis_cerper.pdf

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