RED IBEROAMERICANA DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO DE FRMACOS BASADOS EN COMPUESTOS METLICOS (RIIDFCM)

Nuestra Experiencia

Add Your Title

Estudio de complejos l j metlicos con ligandos que poseen actividad farmacolgica per se
Dra. Q.F. M.H.Torre Qumica Inorgnica (DEC), Facultad de Qumica, UDELAR Montevideo, Uruguay

Antibacterianos Antitumorales Betabloqueantes

Nuestra Experiencia

Metodologa
A.E. y termog. I.R, Raman, Masa EPR, DC, UV-Vis conductividad Rayos X SOD EPR P. magnticas ADN TLC In vitro Mssbauer Glutation perox. Ex-vivo In vivo.

Add Your Title

1. Sntesis 2. Caracterizacin 3. Estabilidad 4. Estudios bioqumicos 5.Estudios Estudioscelulares biolgicos 4. 6. Propiedades fisicoq.

Estudio de complejos l j metlicos con ligandos que no poseen actividad farmacolgica per se

Complejos con ligandos aminocidos, oligopptidos, oligop ptidos, nucleobases y otros

Antitumorales Suplementos metlicos tli (C (Cu en vacunos) Suplemento de no metales (Se en pacientes con SIRS/DOM)

Estudiamos: Estudio de complejos metlicos con potencial actividad antibacteriana

Cu(II), Co(II), Ni(II)-sulfonamidas

Fe(III)-derivados de N1,N4-dixido quinoxalinas

Estudiamos:

Sulfonamidas con grupo pirimidina

Cu(II), Co(II), Ni(II)-sulfonamidas

Fe(III)-derivados de N1,N4-dioxido quinoxalinas

Sulfonamidas con grupo piridina y piridazina

Sulfonamidas con grupo isoxazol y diazometizol

[M(sulfonamida)2(H2O)4] 2H2O

Cu(sulfadimethoxina)2DMSO

M.Torre et al., J. Inorg. Biochem.,100,1167, 2006

M.Torre et al, J. Inorg. Biochem. 102 (2008) 285

M.H.Torre, G.Facchin, E.Kremer, E.Castellano, O.Piro, E.J.Baran, J. Inorg. Biochem. 94(2003)200

[Cu2(sulfameter)4]3 .2.5H2O

Actividad antibacteriana: MIC(g/mL)

S. aureus ATCC 29213 16 32 32 >128 28 32 >128 32 32 16 16 E. coli ATCC 25922 >128 > 128 8 >128 28 32 128 128 128 >128 >128

Heterociclo

Ag. antimicrobiano Sulfameter [Cu2(sulfameter)4]3 .2.5H2O Sulfadiazina [Cu(sulfadiazina) C ( lf di i )2]H2O

Pirimidina

Sulfamerazina [Cu(sulfamerazina)2]H2O Sulfametazina [Cu(sulfametazina)2]H2O Sulfadimetoxina [Cu(sulfadimetoxina)2]H2O

J. Ellena, E. Kremer, G. Facchin, E.J.Baran, O. R. Nascimento, A.J. Costa-Filho, M.H.Torre*, Polyhedron 26 (2007) 3277-3285

Actividad antibacteriana: MIC(g/mL)

Actividad antibacteriana: MIC(g/mL)

S. aureus ATCC 29213 8 8

Het.

Ag. antimicrobiano

Heterociclo

Ag. antimicrobiano

S. aureus ATCC 29213 >128 >128 >400 >400

E. coli ATCC 25922 >128 >128 >400 >400

E. coli ATCC 25922 32 32

piridazina

Smetoxipiridazina [Cu(Smetoxipiridazina) ( p )2] ]H2O Sulfaquinoxalina [Cu(sulfaquinoxalina)2]4H2O Succinilsulfatiazol [Cu(succinilsulfatiazol)2]8H2O

Piridina

Sulfapiridina [Cu(sulfapiridina)2]H2O Sulfasalazina [Cu(sulfasalazina)]2H2O

quinoxalina

64 64 >400 >400

64 256 >400 >400

tiazol

Actividad antibacteriana: MIC(g/mL)

S. aureus ATCC 29213 >128 128 16 4 16 64 32 80 80 E. coli ATCC 25922 >128 128 128 32 16 64 32 >400 200

Actividad antibacteriana

Het.

Ag. antimicrobiano Sulfisoxazol [Cu(sulfisoxazol)2(H2O)4] 2H2O Sulfametoxazol [Cu(sulfametoxazol)2(H2O)4] 3H2O [Cu(sulfametoxazol)2]H2O Sulfametizol Cu(sulfametizol)2]H2O Sulfafenazol [Cu(sulfafenazol)2]8H2O

Isoxazol

Cu(II)

Cu(II)L
Fuera del org.

difusin

Cu(II)L

dentro del org.

Diazometizol

Reacciones txicas

Cu(II)L + RSH
Inactivos en cepas resistentes

RSSR + Cu(I) + LCompite con el PABA

Pirazol

Actividad SOD-mimtica

Estudios celulares en cultivos de MDCK

Control Complejo

Complejo
[Cu(sulfadiazine)2]H2O [Cu2(sulfameter)4]32.5H2O [Cu(sulfamethazine)2]H2O [Cu(sulfamethoxipyridazine)2] ]H2O [Cu(sulfamethoxazole)2(H2O)4] 3H2O SOD nativa

IC50(M)
66 41* 98 52 42* 0.04

Tcnica 1: Tratadas con y sin complejo Cu-sulfametoxazol (en DMSO) y revelado con NBT incubado por 4 hs.
0.10

2g/ml 1g/ml

farmacolgicamente activos, asociados con la dismutacin del radical superxido.

*Actividad SOD similar a la de complejos

Tcnica 2: Solubilizacin del NBT reducido con KOH y DMSO. Lectura en lector de micro ELISA con filtro de 600 nm.

0.08

Abs 600 nm

0.06 0.04 0.02 0.00

Medicin de Cu en los diferentes compartimentos celulares

30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0
Cu (g/100mL) Cu (g/100mL)

Estudios in vitro de permeacin y retencin cutnea

Formacin de micropartculas (PLGA) Estudios de p permeacin usando celdas de difusin Estudios de retencin cutnea usando la tcnica de tape stripping

30.0 20.0 10.0

0.0
Cultivos control Cultivos tratados con complejo Cu-sulfametoxazol Fraccin citoslica Fraccin membrana y mitocondria

Western Blott Inmunodeteccin de la Na-K-ATPasa en la fraccin conteniendo membrana plasmtica y mitocondrias.

Veremos:

Fe y quinoxalinas: por qu?

Fe est relacionado con el metabolismo del M. tuberculosis

Cu(II)-sulfonamidas

[Fe(CN)5(isoniazida)]3- actividad mayor que la isoniacida N1, N4 dioxo quinoxalinas son bio-reducibles formando productos txicos

Fe(II) o Fe(III)-derivados de N1,N4-dioxido quinoxalinas

Quinox.

Quinox. Red 1

Quinox. Red 2

Prod. txicos

Publicaciones: antitumorales (J. Inorg. Biochem. 102 (1) (2008), 119-126); antitripanosoma (Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 17(4)(2009); antitumorales (J. Inorg. Biochem., 100 (8) 1358-1367, 2006.)

N1, N4 dioxido quinoxalinas

Estructura propuesta

O R
1

Ligandos
CN

R1 H CH3
OCH3 CF3

R2 H H Cl H

R1

CN

R2 R1

H10 B10

R2

N O

NH O N

Fe
N HN NC N N O N H O CN O

N O

NH2

GA10 X10

R2 R1

Fe(III)-quinoxalinas

Antecedentes Complejos metlicos con actividad betabloqueante

Los beta bloqueantes son usados para varias enfermedades cardiovasculares (hipertensin, arritmias y proteccin del miocardio despus de infartos) g casos la actividad sobre la frecuencia En algunos y sobre la fuerza cardaca complica la terapia Se buscan nuevos frmacos que separen la actividad cronotrpica de la inotrpica Hay poco reportado

Beta-bloqueantes

Estructuras obtenidas
Na[Cu(nadolol)(CO3)]. H2O [Cu(propranolol)2] 2 H2O

[Cu(R-propranololato)2][Cu(S-propranololato)2]4H2O

Tcnica de Langendorff
Corazones de cobayos (400-600 g) T=361C Solucin de Tyrode Velocidad de flujo: 6mL/min Controles: bolus de Tyrode, DMSO y sal de cobre

NH

*
OH

I.Viera et al., Polyhedron, 2009 (aceptado)

Efecto de un bolus en la fuerza de contraccion del miocardio (A) y de la frecuencia (B)

Porcentaje de bloqueo de la adrenalina medido como la variacin de fuerza de contraccin del miocardio

[Cu(propranolol)2].2H2O (0.5 x 10-3M), propranolol (10-3 M) y CuSO4 (0.5 x 10-3M)

Sndrome de crecimiento en vacas, un problema geomdico en Uruguay

Complejos de Cu-AA como suplementos

Anemia
Bajo peso Deformidad sea Diarrea Di Baja produccin lctea Infertilidad Despigmentacin Infecciones

Evaluacin del estado de la regin

Localidad Alonso P. Itapebi Las Casuarinas Los Charros Lombardo San Antonio Margarita Corralito
N vacas 23 8 10 18 40 20 20 16 Cupremia 0.79 0.81 0.56 0.87 0.78 0.53 0.57 0.81 RSD 0.10 0.21 0.11 0.16 0.16 0.07 0.11 0.42

Anlisis de Cu, Mo y S en pasturas

Margarita m g/k g D M
8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 summer autumn winter spring

San Antonio m g/kg D M

25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 summer autumn winter spring summer

5.95 3.50 3.05 2.35 1.65 0.65 0.25 0.50

Cu Mo

13.32
Cu

4.47 0.66 1.36 0.36 2.49 0.39 0.70

6.05 0.84

Mo

Lombardo
4.50 4.00 3.50 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00

m g/k g D M

3.20 1.98

3.00
Cu

Programa estadstico SAS, usando el test de Tuckey con una probabilidad del 5% Valores de referencia: mg Cu/ kg DM > 10 mg Mo/ kg DM: 0.1 - 100 % S DM = 0.3 - 0.5

1.80 1.08 0.40

autumn winter

1.37 1.00

Mo

Estado marginal Estado normal 0.30 <cupremia promedio < 0.60 g/mL cupremia promedio > 0.60g/mL Muestra: 155 animales, 30% en estado marginal M.H.Torre et al. Metal Ions in Biology and Medicine, Vol 6 (2000) 537

spring

summer

0.05<%S DM<0.17

Preparacin de los suplementos de Cu

Sntesis y caracterizacin de [Cu(Gly)2H2O], [Cu(Val)2], [Cu(Phe)2], [Cu(Ile)2] [CaCuEDTA] Preparacin de los inyectables en propilenglicol, dosis 100 mg Cu/ 5 mL Seleccin de las localidades con sndrome de crecimiento [Cu(Phe)2] (vacas tratadas=20, vacas control=20, estudio de covarianza P<0.001), niveles normales de cupremia por 130 das, sin formacin de ppula
M.H.Torre et al. Livestock Production Science 95, 49-56 (2005)

Estado corporal

El ndice corporal en vacas tratadas con [Cu(Phe)2] aument de 2 o 3 a 4 en todos los casos

SIRS/DOM (Respuesta Inflamatoria Sistmica/ Disfuncin Orgnica Mltiple)

SIRS

Efecto del uso de Se en los pacientes con SIRS/DOM

Reaccin inflamatoria exagerada que compromete rganos y sistemas a distancia de la injuria inicial. El SIRS se define por dos o ms de los siguientes parmetros: Frecuencia cardaca > 90/min; Polipnea > 20/min y/ paC02 < 32 mmHg; Temperatura rectal > 38C < 36C; Leucocitosis > 12.000/mm3 < 4.000/mm3 > 10% de formas inmaduras.

El SIRS progresa a un Sndrome de DOM definido como la incapacidad potencialmente reversible de uno o ms rganos o sistemas, en mantener la homeostasis sin una intervencin teraputica.

Proyecto

Selenemias y actividad GPx promedio

0,8

Objetivo: Buscar nuevas estrategias teraputicas, sin oponerse a la teraputica convencional, que contribuyan a mejorar el pronstico de estas graves entidades. Etapas:
Evaluar el estado de Se en poblacin normal y en pacientes crticos con y sin SIRS. Suplementar los pacientes con SIRS/DOM con cido selenioso y selenito de sodio y ver si disminuye la mortandad a los 28 das.

GPx(U/mL)
0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2

Se(ug/L) Se(mg/L)
GPx(U/mL)
Se (mg/L) 80 78 76 74 72 70 68 66

82

Se

0,1 0

64 62

A) Control

B) No SIRS

C) SIRS

D) SIRS-MODS

n=32

n=10

n=11

n=8

W. Manzanares et al., Intensive Care Med.(2009) 35, 882

Suplementacin con cido selenioso

Complejos de Cu-AA, Cu-dipptidos

Baja dosis=15,2 mol/2h (bolus) y 10,12 mol/d (perfusin continua) Alta dosis=25,3 mol/2h (bolus) y 20,24 mol/d (perfusin continua) W. Manzanares et al., Nutrition (en prensa)

Cu-dipeptidos

Datos estructurales en solucin

Espectros electrnicos + ecuacin de Prenesti + estructura en estado slido

[Cu(HisGly)2 (H2O)2]
Inorg. Chim. Acta 355(2003) 408

[Cu(Ala-Phe)]1/2H2O
Inorg. Chim.Acta 355(2003) 408 Inorg. Chem., 3, 45 (7)(2006)2942 J. Mol. Struct., 797(2006)179

H2O

[Cu3(Ala-Leu)3(H2O)3CO3]PF6.H2O
En estado slido En solucin

Estequiometra de enlace con ADN [Cu(dipep)]/ADN

Compound
Cu(his-ala)2(H2O)2 Cu(Phe-Phe) Cu(his-gly) Cu(his gly)2(H2O)2 Cu(Val-Phe) Cu(Ala-Val) Cu(Val-Gly) Cu(Gly-Phe) Cu(Ala-Tyr)

Interaccin Cu(AlaPhe)-ADN por CD

Cu/Bases
0.0013 0.0020 0.0033 0.0083 0.0094 0.0096 0.0010 0.0101

Compound
Cu(Phe-Ala) Cu(Ala-Ala) Cu(Phe-Leu) Cu(Phe Leu) Cu(Ala-Thr) Cu(Ala-Ile) Cu(Ala-Leu) Cu(Gly-Val) Cu(Ala-Phe)

Cu/Bases
20

0.0112 0.0115 0.0133 0.0135 0.0139 0.0200 0.0244 0.0417

(mgrados)

18 16 14 12 10 8 6 3 8 13 18 23 28 M complejo (E6) 218

Cu(H2O)62+ > 0.2

Interaccin Cu(AlaPhe)-ADN por EPR

Interaccin complejo-ADN por EPR: grfica de Peisach

A//
(mK) 25

1Bases ADN/Cu ADN/Cu=30 =30 2Bases ADN/Cu=9 3Bases ADN/Cu=2

220

0 3N1O
15

2+ 1N del ADN 2N y 1 O del dipptido 2.4 g//

2.0

2.1

2.2

2.3

Polyhedron 28 (2009) 2329

Actividad SOD mimtica

Mtodo basado en el efecto inhibitorio de la reduccin del NBT por el O2- generado por el sistema xanthina/xanthina oxidasa
Complex
Cu(Ala Gly) Cu(Ala-Gly) Cu(Ala-Ile) Cu(Ala-Val) Cu(Val-Phe) Cu(Phe-Phe)

Proliferacin celular con osteoblastos MC3T3E1

IC50 (M)
124 111 79 65 58

Complex
Cu(his gly)2(H2O)2 Cu(his-gly) Cu(Ala-Thr) Cu(Ala-Leu) Cu(Ala-Tyr) Cu(Ala-Phe)

IC50 (M)

110 100

33 22 8.4 5.0

% BASAL L

50

90 80 70 60 50 40 30
0

Cu Cu(AlaPhe) Cu(PheAla) Cu(ValGly)

10

50

100

250

500 Cu(uM)

Facchin et al., Metal Ions in Biology and Medicine, Vol 7, 11, (2002)

Proliferacin celular con lneas tumorales de osteosarcoma UMR106 cells

Necesidades

110 100 90 % BA ASAL 80 70 60 50 40 0 100 200

Cu(uM)

Bio
Cu Cu(Ala Phe) Cu(Phe

QI Q.I
300 400 500

Mdicoveterinario

Nuestro grupo

Colaboradores
De Uruguay (UDELAR): Facultad de Qumica : Dra. L. Domnguez (Farmacologa), J. Fuentes (Matemticas), N. Maay (Toxicologa) Facultad de Veterinaria (Regional Norte): Dr. Julio Irigoyen, Dr.Teresita Porochin, Lic. Vernica Di Donato Facultad de Agronoma: Silvia Saldanha Facultad de Medicina: Dra. Silvia Chifflet y Dr. Eduardo Migliaro, E. Biestro De Argentina: Dr. Enrique J. Baran Dra. Susana Etcheverry Dra. Beatriz Parajn De Brasil: Dr. Alzir A. Batista Dra. Queico Leite Dra. Juliana Maldonado Dr. Otaciro R. Nascimento Dr. Jos Antonio Costa-Filho Dr. Javier Ellena

Dra. Gianella Facchin Q.F. Ins Viera Bach. Vernica Brun Q.F. Eduardo Santi Li A Lic. Andrea d Garca G Bach. Carolina Buz Bach. Beln Tarallo Bach. Sebastin Iglesias Dr. en Medicina William Manzanares

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