1) Componentes del sabouraud (dextrosa, peptona de casena, glucosa, agar- agar y carne) a)Sabouraud Glucosado Agar Medio de cultivo

recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.). En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

b)AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patgenas y no patgenas. El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificacin a la frmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patgenos, particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentracin de dextrosa y la acidez del pH hacen a ste un medio selectivo para hongos. Con la adicin de cicloheximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Este medio es tambin utilizado para la determinacin microbiolgica en cosmticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrgeno para el crecimiento de los microorganismos, la dextrosa acta como fuente de energa y el agar es agregado como agente solidificante.

Compuestos en gramos Dextrosa 40.0 Peptona de Casena 5.0 Digerido Pancretico de Tejido Animal 5.0 Agar Bacteriolgico 15.0

pH 5.6 0.2

2) Tipos de sabouraud

a) Medios para hongos Agar glucosado de Sabouraud El Agar glucosado de Sabouraud es usado para cultivar hongos y tiene un pH bajo que inhibe el crecimiento de la mayoria de bacterias, adems tiene un antibitico (gentamicina) que inhibe especficamente el crecimiento de bacterias gramnegativas . Agar Infusin Cerebro Corazn Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad buffer. Agar papa dextrosa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras a partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos cosmticos. Agar extracto de malta Tiene un alto contenido de peptona.

b) Dentro de los medios de cultivos para hongos ms empleados est el Sabouraud cuyos ingredientes principales son maltosa y peptona,el medio De Czapex-Don compuesto por sales inorgnicas y un azcar, el medio Littman se usa para el aislamiento inicial del hongo, contiene bilis, cristal violeta y estreptomicina que inhiben el desarrollo de la mayora de las posibles bacterias contaminantes. A continuacin la composicin y preparacin de algunos medios de cultivos ms importantes para hongos: A) Sabouraud dextosa agar : (Tanto para hongos filamentosos como levaduriformes). B) Sabouraud modificado : (Para hongos filamentosos). C) Medio De Czapek-Dox : (til en la diferenciacin de algunos mohos). D) Medio De Littman : (Para siembra primaria). E) Medio de Conservacin. F) Medio De Gorodkowa : (Para esporulacin de levaduras, para observar esporas).

G) Otros medios: Agar Harina de Trigo (para hifas y Clamidosporas) Utilizaremos para realizar nuestro microcultivo. Agar Extracto de Malta (para esporulacin) Agar Zanahoria (para esporulacin). Agar Miel. Agar Harina de Maiz. Medio de Arroz. Agar Acetato, etc.

3) Utilidades del KOH El examen directo con KOH consiste en la toma de muestras: escamas, pelos o fragmentos de uas, su incubacin con hidrxido potsico al 10-30% y su posterior visualizacin en el microscopio, lo que permite observar la existencia de hifas septadas (dermatofitosis), formas levaduriformes o pseudohifas (candidiasis) que son suficientes para confirmar el diagnstico. Es el mtodo ms sencillo para saber que un hongo es el causante de la infeccin a estudiar. Esta sustancia sirve para disolver el material de fondo y as poder observar mejor los elementos fngicos, en algunos laboratorios se aade DMSO (dimetilsulfxido) en una proporcin de 60/4 lo cual facilita la absorcin del KOH. Sobre la muestra se coloca un cubreobjetos y se observa con el microscopio de luz a un aumento de 10x 20x para localizar las estructuras del hongo y luego estudiamos el campo sospechoso a un aumento de 40x. La luz se debe disminuir y el condensador se pone en una posicin baja para poder apreciar mejor los elementos fngicos los cuales no tienen color; utilizando el negro de clorazol podemos evitar este problema ya que nos da mejor contraste.

4) Como es la tcnica de sabouraud de azul de lactofenol, componentes

COMPOSION

Acido lctico Azul de Anilina Glicerina Acido Fnico Agua desionizada Tcnica 1. Tratar/aclarar la muestra durante 1 a 15 minutos, en funcin de la consistencia con 1 a 5 gotas de los lcalis. 2. Aadir agua varias veces y succionar, p. ej. con papel de filtro 3. Aadir de 1 a 2 gotas de solucin de azul de lactofenol, colocar el cubreobjetos y teir , despus de 2 minutos observar al microscopio. El material se tie por tincin en un paso. Los elementos fungosos aparecenazul oscuro. Nota En caso de material de cultivo sin tratamiento previo aadir de 1 a 2 gotas de solucin de azul de lactofenol, colocar el cubreobjetos y teir as, despus de 2 minutos observar al microscopio.