PEMERIKSAAN BILIRUBIN DIRECT DAN BILIRUBIN TOTAL A. Tujuan B. Metode C.

Prinsip : Untuk mengetahui kadar Bilirubin Direct (D) dan Bilirubin Total (T) : Jendrassik / Grof :

Bilirubin bereaksi dengan Diazotized Sulphanilic Acid (DSA) membentuk zat warna merah azo. Absorbans zat warna ini pada 546 nm sebanding dengan konsentrasi bilirubin dalam sampel. Glucuronides bilirubin yang larut dalam air bereaksi langsung dengan DSA yang mana albumin yang terkonjugasi dalam bilirubin indirect hanya akan bereaksi dengan DSA, dibantu adanya accelerator (zat pemercepat). Bilirubin total = bilirubin direct + bilirubin indirect. D. Reaksi Bilirubin +DSA Bilirubin + accelerator E. Bahan : Serum atau plasma heparin. : Asam sulfanilic + natrium nitrit DSA DIRECT azobilirubin TOTAL azobilirubin

Hindari hemolisis. Sampel harus terlindungi dari sinar. Stabilitas : Bilirubin stabil selama 3 hari bila disimpan terlindung dari sinar pada 2-8C. F. Reagen :

1. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Total (tutup putih) Asam sulfanilic Asam hydroclorit Caffeine (accelerator) Natrium benzoate 2. 1 x 9 ml reagen T-Nitrit (tutup putih) untuk pengukuran Bilirubin Total Natrium nitrit 14 mmol/l 14 mmol/l 250 mmol/l 200 mmol/l 420 mmol/l

3. 1 x 100 ml reagen Bilirubin Direct (tutup merah) Asam sulfanilic Asam hydroclorit 4. 1 x 9 ml reagen D-Nitrit (tutup merah) untuk pengukuran Bilirubin Direct Natrium nitrit G. Alat : 0.9 mmol/l 14 mmol/l 250 mmol/l

1. Micropipet 2. Tip biru dan tip kuning 3. Tabung reaksi 4. Fotometer H. Cara Kerja a. :

Persiapan reagen dan stabilitas

1. Kedua reagen dan larutan nitrit siap pakai. 2. Stabil sampai tanggal kadaluarsa bila tidak dibuka dan disimpan pada 15-25C. b. Pemeriksaan Panjang gelombang Celah optik Suhu Pengukuran c. Prosedur : 546 nm : 1 cm : 20-25C : terhadap blanko sampel

1. Bilirubin Total Pipet ke dalam cuvet Reagen, bilirubin total (1) Reagen T-Nitrit Blanko sampel 1000 l Sampel 1000 l 40 l

Campur dengan baik, inkubasi selama 5 menit. Sampel 100 l 100 l

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 10 sampai 30 menit. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (A546)

2. Bilirubin Direct Pipet ke dalam cuvet Reagen, bilirubin direct (3) Reagen D-Nitrit Blanko sampel 1000 l Sampel 1000 l 40 l

Campur dengan baik, inkubasi selama 2 menit. Sampel 100 l 100 l

Campur, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit tepat. Ukur absorbans sampel terhadap blanko sampel (A546)

I.

Interpretasi Hasil : Linearitas : Pemeriksaan linear sampai 25 mg/dl. Untuk konsentrasi bilirubin melebihi 25 mg/dl, encerkan sampel 1 + 4 dengan garam fisiologis (0.9%) dan ulangi pemeriksaan. Kalikan hasil dengan 5.

J.

Perhitungan

Hitung konsentrasi bilirubin total dan direct dengan menggunakan faktor 13.0 Konsentrasi bilirubin (mg/dl) = A546 x 13.0 (mg/dl) x 17.1 = (mol/l) K. Nilai Rujukan Bilirubin total Pada kelahiran, sampai 5 hari, sampai 1 bulan, sampai Dewasa, sampai Bilirubin direct Dewasa, sampai 0.25 4.3 : mg/dl 5 12 1.5 1.1 mol/l 85.5 205.0 25.6 18.8