Contaminacin por Plomo en el cacao y productos del cacao: Evidencia Isotpica de la contaminacin global

En este artculo nosotros presentamos las concentraciones de plomo y composiciones isotpicas desde el anlisis de los granos de cacao, sus cscaras, y los suelos de seis plantaciones de cacao, y anlisis de productos elaborados de cacao y chocolate. El promedio de concentracin de plomo de cscaras de cacao fue 0.5 ng/g, el cual es uno de los valores ms bajos reportados para una comida natural. En contraste, las concentraciones de plomo del cacao elaborado y de productos de chocolate fueron de hasta 230 y 70 ng/g, respectivamente, los cuales son coherentes con estudios de mercado que han listado repetidamente las concentraciones de plomo de productos de chocolate entre las ms altas reportadas de todos los alimentos. Una fuente de contaminacin de los productos finalizados es provisionalmente atribuida a emisiones atmosfricas de gasolina con plomo, la cual todava es usada en Nigeria. A causa de la alta capacidad de las cscaras de los granos de cacao de absorber plomo, la contaminacin de emisiones de gasolina con plomo puede ocurrir durante la fermentacin y el secado al sol de los granos sin cscara en las plantaciones de cacao. Este mecanismo es apoyado por las similitudes en las composiciones isotpicas de plomo de las cscaras de los granos de cacao de las 206 207 208 207 diferentes plantaciones. ( Pb/ Pb = 1.15481.1581; Pb/ Pb = 2.43442.4394) con aquellas de los 206 207 207 productos elaborados de cacao ( Pb/ Pb = 1.14751.1977; 208Pb/ Pb = 2.42342.4673). Sin embargo, las mucho ms altas concentraciones de plomo y la ms larga variabilidad en la composicin isotpica de plomo de los productos terminados de cacao, las cuales caen dentro del rango global de aerosoles industriales de plomo, indican que la mayor contaminacin ocurre durante el transporte y/o procesamiento de los granos de cacao y la fabricacin de productos de cacao y chocolate.

La contaminacin de plomo en los dulces es un problema de hace mucho tiempo que ha evolucionado con el tiempo. Fred Accum (1820) fue la primera persona en investigar sistemticamente la contaminacin extendida de las confiteras con venenos metlicos. Su estudio de 100 dulces vendidos en Gran Bretaa durante la primera parte del siglo 19 encontr que 59 contenan cromato de plomo, 12 contenan plomo rojo, y 10 contenan Brunswick verde (una mezcla de azul de Prussia y cromato de plomo). La mayora de plomo observado en ese momento se atribuy a la adulteracin intencional o envolturas que estaban vidriosas, coloridas, o impresas con componentes de plomo. Desde la mitad del siglo 19, varias medidas incluyendo regulaciones y educacin pblica estuvieron implementadas a minimizar la contaminacin de dulces desde tales fuentes (Nriagu 1985). Hoy, las actividades industriales dominan el flujo global de plomo en el ambiente (Flegal and Smith 1995; Nriagu and Pacyna 1988) y han llegado a ser las fuentes predominantes de contaminacin de plomo en muchos artculos de comida, incluyendo dulces. Esto sigue siendo cierto a pesar de las recientes medidas tomadas para reducir la contaminacin ambiental por plomo y para minimizar la exposicin humana al plomo que ha menorado las concentraciones de este metal en alimentos y poblaciones humanas (Egan 2002; Pirkle et al.1998; Thomas et al. 1999; von Storch et al. 2003). El enfoque especfico en la fuente de plomo del cacao, el principal material usado para hacer chocolate, comenz durante finales de 1970. A pesar de la marcada reduccin en la liberacin

de plomo al ambiente, debido principalmente a la eliminacin del plomo de la gasolina (Nriagu 1990), recientes estudios de mercado todava indican contaminacin por plomo en algunos alimentos, sobre todo en cacao elaborado y productos de chocolate. Por ejemplo en el 2000 la U.S. Food and Drug Administration (FDA) Total Diet Survey (TDS), el promedio de plomo contenido para barras de dulce de chocolate (27 ng/g) fue el cuarto ms alto reportado de todos los alimentos (FDA 2000). Esta observacin fue corroborada tanto por la 20th Australian TDS, donde el chocolate de leche tiene el segundo valor ms alto de 65 alimentos, con un valor medio de 21 ng/g y un mximo de 40 ng/g (Food Standards Australia New Zealand 2003), y el reporte de 1997/1998 de New Zealand TDS, donde la concentracin de plomo en galletas de chocolate (15 ng/g) fue 3 veces mayor que las galletas saladas (5.2 ng/g) y galletas dulces simples (5.2 ng/g) (Vannoort et al. 2000). En un estudio reciente de chocolates basados en cacao vendidos en India, Dahiya et al. (2005) encontraron que las concentraciones de plomo estn en 1.92 g/g (rango, 0.05-8.3 g/g), y Onianwa et al. (1999) encontr la concentracin de plomo de cacao en polvo vendido en Nigeria est en 310 ng/g con un rango de 80-880 ng/g. Las ltimas medidas son coherentes con reportes sobre elevados niveles de plomo en el cacao por la Alianza de Productores de Cacao (COPAL), la cual tiene su sede en Nigeria. COPAL es el proveedor del 75% de todos los granos de cacao al mercado mundial (COPAL 2004). Las fuentes de plomo en los productos de cacao nigerianos, los cuales se han vuelto una preocupacin, pueden incluir plomo de suelos locales y rocas donde la planta de cacao es cultivada; las prcticas agrcolas (e.g., la aplicacin de fertilizantes, pesticidas que contienen plomo, composts y otros aditivos del suelo); plomo atmosfricamente depositado; manejo y procesamiento de los granos de cacao despus de la cosecha (incluyendo el secado al aire libre, transportacin, y almacenamiento); molienda y procesos de fabricacin (desgaste de partes de mquinas soldadas con plomo); mezclas y aditivos a los productos finales; y empacado y envoltorio del material. La presencia de concentraciones relativamente altas en un producto que es en gran medida comercializado para nios es una preocupacin especial, porque los nios son particularmente susceptibles al envenenamiento por plomo (Silbergeld 1997). El nivel mximo permisible (MPL) de plomo recientemente propuesto por el Codex Alimentarius Commission fue de 0.1 g/g para la manteca de cacao (un ingrediente clave en el chocolate) y 1.0 g/g para la pasta de cacao y el cacao en polvo (COPAL 2004b). En la India, el contenido de plomo de chocolates (1.92 g/g) excede el MPL para el cacao en polvo y la pasta de cacao. La ingesta semanal tolerable provisional (ISTP) de plomo se ha fijado en 25 g/kg del peso corporal para nios. [Organizacin Mundial de la Salud (OMS) 1993], equivalente a 3.6 g/kg del peso corporal por da. Exmenes de etiquetas en varios chocolates en polvo vendidos en los Estados Unidos muestran que el tamao de las raciones estn tpicamente en el rango de 15-25 g. Suponiendo una absorcin de 40% [Agencia para Sustancias Txicas y Registro de Enfermedades (ATDDR) 1999], por el consumo de cacao en polvo del tamao promedio de racin (20 g) con un contenido medio de plomo de 0.2 g/g, un nio que pesa 15 kg estara adquiriendo aproximadamente 3% de su ISTP de esta fuente. Al consumir cacao en polvo con el contenido mximo de plomo (0.79 g/g) reportado por Mounicou et al. (2003), un nio recibira alrededor de 12% del ISTP de esta va de exposicin. En la India el consumo de plomo en productos de chocolate representara aproximadamente el 28% de la ISTP de plomo para el nio promedio y excedera este lmite para muchos nios.

Una fuente potencialmente importante de contaminacin por plomo en los granos de cacao y en el cacao es el tetra etilo de plomo (TEP) aditivo en la gasolina, el cual es todava comn en muchos pases africanos (Nriagu 1992; Nriagu et al. 1996). Por ejemplo, la gasolina en Nigeria contiene 0.4-0.8 g/L de plomo, la cual est entre las ms altas del mundo (Ogunsola et al. 1994); aproximadamente 90% de la contaminacin por plomo en Nigeria se deriva de la combustin de gasolina con plomo, con un total anual estimado de emisiones de aerosoles con plomo de 2800 toneladas mtricas (Obioh et al. 1993). Estas emisiones se reflejan en la contaminacin de polvos, plantas y alimentos en Nigeria (Ajayi y Kamson 1983; Ndiokwere 1984; Nriagu 1992; Odukoya y Ajayi 1987; Ogunsola et al. 1994b; Onianwa y Egunyomi 1983) y en elevadas concentraciones de plomo en la sangre sealadas en varios estudios de gente nigeriana (Ademuyiwa et al. 2002; Nriagu 1992; Nriagu et al. 1997; Omokhodion 1994). Esta continua contaminacin de emisiones de gasolina con plomo es coherente con el reporte de Bahemuka y Mubofu (1999) que concentraciones de plomo de algunos alimentos cultivados en el continente africano todava exceden los niveles permisibles de la OMS y de Organizacin de Alimentacin y Agricultura de las Naciones Unidas de 5 ng/g. Desgraciadamente, la contribucin de diferentes plomos naturales e industriales en los granos de cacao, cacao, y productos de chocolate no ha sido resuelta. A lo mejor, en nuestro conocimiento no ha habido una revisin sistemtica de las fuentes de plomo durante la fabricacin de productos de chocolate desde la cosecha de los granos de cacao a los productos terminados. Un objetivo del presente estudio fue determinar la concentracin y composicin isotpica de plomo en los granos de cacao y en los suelos de las plantaciones de cacao de Nigeria para establecer la lnea base de concentracin de plomo de los granos y determinar la contribucin relativa de plomo del suelo a esa concentracin. Nuestro otro objetivo fue determinar la contribucin de otras fuentes de plomo en productos de granos de cacao, cacao, y chocolates, usando de nuevo la concentracin de plomo y anlisis de composicin de isotopos estables.

Materiales y Mtodos
Muestra de coleccin y preparacin. Nosotros colectamos granos de cacao y muestras de sedimentos en noviembre y diciembre de 2002 de seis plantaciones en los tres estados ms grandes productores de cacao en Nigeria (Ondo, Osun, y Ogun), que fueron identificados de las estadsticas presentes en los reportes anuales del Banco Central de Nigeria (CBN 2002). Las muestras de suelo fueron colectadas a cuatro profundidades en el perfil del suelo: 0-10 cm, 020 cm, 35-50 cm, y 85-100 cm. De cada plantacin, seis muestras separadas fueron tomadas del primer y tercer perfil, y tres muestras fueron tomadas de los otros perfiles. Las muestras de granos de cacao maduros se tomaron de cada plantacin, as como una muestra de granos de cacao que haba sido fermentada y secada en su cscara, lista para exportarse. Para crear muestras representativas para cada plantacin nigeriana, hicimos compuestos para cada perfil del suelo, de ambos tipos de granos de cacao y de las cscaras correspondientes a los granos de cacao recogidos. Este proceso proporcion compuestos homogeneizados de al menos cuatro suelos, dos muestras de granos de cacao, y dos de cscaras de granos de cacao por plantacin para el anlisis. Adems de las muestras nigerianas, granos de cacao de otros

pases y productos elaborados de chocolate incluyendo el cacao procesado fueron recogidos para su anlisis. Todo el procesamiento de las muestras fue conducido con tcnicas de limpieza de trazas de metal (Scelfo y Flegal 2000) en cuartos de limpieza de trazas de metal con aire filtrado HEPA (clase 100). Las digestiones en aqua regia (3:1 HCl: HNO3) fueron conducidas usando reactivos de grado ptimo (Seastar Chemicals Inc, Sidney, British Columbia, Canada). Los procesales en blanco y materiales de referencia del Instituto Nacional de Estndares y Tecnologa [Standard Reference Material (SRM) 1547; NIST, Gaithersburg, MD, USA] y el Consejo Nacional de Investigacin de Canad (MESS-3; Ottawa, Ontario, Canad) fueron asimilados simultneamente con todas las muestras para evaluar la eficacia del mtodo. Anlisis de contenido de plomo. Analizamos las concentraciones de plomo usando los mismos protocolos delimitados para los anlisis previos de plomo en suplementos de calcio (Scelfo y Flegal 2000), con un elemento Finnegan espectrmetro de masa de plasma inductivamente acoplado de alta resolucin de sector magntico (HR-ICPMS) (Thermo Electron Corporation, Waltham, MA). Las concentraciones de plomo se obtuvieron a partir de anlisis instrumentales de los tres principales istopos del plomo (206Pb, 207Pb, y 208Pb) y del bismuto (209Bi). La suma de las intensidades de los istopos estables del plomo se normaliz al estndar interno del bismuto para corregir variaciones instrumentales en la sensibilidad. Las recuperaciones porcentuales de MESS-3 y SRM 1547 promediaron 94% y 98%, respectivamente. Mediciones isotpicas. Adems de las medidas de concentracin hechas con la HR-ICPMS, hicimos medidas isotpicas preliminares desde un escaneado instrumental de todos los istopos estables del plomo (204Pb, 206Pb, 207Pb, y 208Pb). Se encontraron correcciones de fraccionamiento de anlisis simultneos de SRM 981 (NIST; material de referencia estndar comn del plomo). Correcciones para 204Pb/206Pb, 207Pb, y 208Pb/206Pb promediaron +0.006, +0.001, y +0.003, respectivamente. Nosotros seguimos las medidas HR-ICPMS iniciales con medidas de espectrometra de masas de ionizacin trmica (TIMS) de muestras de alcuotas seleccionadas, usando un VG Sector 54WARP TIMS (GV Instruments, Wythenshawe, Manchester, Inglaterra) y protocolos establecidos (Steding et al. 2000). Antes de estos anlisis, las muestras fueron secadas y purificadas usando una resina de intercambio aninico Dowex AG1-X8 (malla 50-100) (Bio Rad Labs, Hercules, CA) y cido hidrobrmico (Seastar) de alta pureza. Las muestras de suelo fueron pasadas a travs de las columnas una vez, mientras que las otras muestras (cscaras de granos de cacao, cacao procesado, y productos de chocolate) fueron pasados a travs de las columnas una segunda vez para mejorar an ms su pureza y optimizar sus anlisis de composicin isotpica. Los eluidos se secaron y se cargaron en filamentos de renio con cido fosfrico y con un potenciador de ionizacin de gel de silicona. Los espacios en blanco se determinaron con un pico 208Pb y fue < 0.1% de las muestras analizadas. Las correcciones de fraccionamiento se calcularon a partir de anlisis simultneos de SRM 981 usando la ley lineal, con un sesgo de masa con un promedio de correccin por unidad de masa atmica de 0.0011 0.0002. La precisin de reproducibilidad para el NIST 981 fue de 0.020 para 206Pb/204Pb, 0.0005 para 206 Pb/207Pb, y de 0.0009 para 208Pb/207Pb.

Resultados y Discusin
Como se muestra en la Tabla 1, las concentraciones de plomo en los granos de cacao oscilaron de < 0.103 a 1.78 ng/g, con una concentracin media de 0.512 ng/g. Este promedio es comparable con las concentraciones de plomo ms bajas reportadas en alimentos (Flegal et al. 1990; Tahvonen y Kumpulainen 1995). Por otra parte, ese promedio se considera que es conservadoramente alto porque usa el lmite de deteccin (0.103 ng/g) para tres muestras con concentraciones de plomo por debajo de ese lmite e incluye la relativamente alta concentracin (orden de magnitud) de otra muestra (Kango Village Farm; muestra directamente tomada de la cscara) que parece ha sido contaminada con las concentraciones de las otras 11 muestras. Por lo tanto, asumimos que el promedio de concentracin de plomo en los granos de cacao de plantaciones nigerianas es <0.5 ng/g y bien puede ser < 0.1 ng/g. Aunque el contenido de plomo de los granos de cacao es tan bajo o inferior a los de cientos de diferentes alimentos en los Estados Unidos y en otros lugares, las concentraciones de plomo del cacao elaborado estn entre los ms altos de todos los alimentos. Los valores, mostrados en la Tabla 2, son similares al valor independientemente determinado (280 ng/g) por el Servicio de Anlisis de la Costa Oeste (WCAS; Santa Fe Springs, CA) para el cacao procesado (Northington J, personal de comunicacin) y el rango de valores reportados (140-297 ng/g) por Mounicou et al. (2002). Ms recientemente, Mounicou et al. (2003) report que las concentraciones de plomo en el cacao en polvo van desde 11 a 769 ng/g, con un promedio de 255 ng/g. Nuestra concentracin media, 197 ng/g, cerca del 3% de la ISTP de un nio tambin se compara con las concentraciones ms altas reportadas para cualquier alimento en Estados Unidos (mximo de camarones cocidos, 210 ng/g) TDS (FDA 2000). Del mismo modo, la concentracin de plomo media para 23 productos de chocolate medidos por el WCAS, 32.5 ng/g, es indicativo de contaminacin, y los valores individuales, que se muestran en la Tabla 3, son similares a la media reportada en el TDS de los Estados Unidos (27 ng/g) para una barra de leche de chocolate (U.S. FDA 2000). En particular, la concentracin promedio de plomo de estos productos de chocolate es aproximadamente 60 veces ms grande que la concentracin media de plomo de los granos de cacao nigerianos. Una comparacin de las concentraciones de plomo en el material de origen analizado y el producto terminado se muestran en la Figura 1. Los posibles orgenes de contaminacin por plomo tanto en el cacao elaborado y productos de chocolate se identifican por sus proporciones isotpicas de plomo, que tambin se muestran en las Tablas 2 y 3. La Figura 2 proporciona una comparacin de las proporciones isotpicas de plomo para productos de chocolate y cacao elaborado con las proporciones de aerosoles industriales del mundo, recopiladas por Bollhofer y Rosman (2000, 2001, 2002). El terreno muestra que las composiciones isotpicas de todos los productos de chocolate coinciden con las de los aerosoles de plomo medidas por Bollhofer y Rosman (2000, 2001, 2002), pero las composiciones isotpicas del cacao elaborado y de productos de chocolate son variables. Por consiguiente, no hay una sola fuente identificable de contaminantes de plomo ya sea en cacao procesado o en productos de chocolate, lo cual es coherente con los reportes de diferencias geogrficas de concentraciones de plomo del cacao en polvo (Mounicou et al. 2003).

Una de estas fuentes pueden ser las cscaras de los granos de cacao, que han demostrado ser muy eficientes eliminando plomo de soluciones (Meunier et al. 2003a, 2003b, 2003c, 2004). Meunier et al. (2003a, 2003b) absorcin de plomo ajenas por encima de cscaras de granos de cacao de hasta 17000 ug/g, o aproximadamente 35 millones de veces ms grande que nuestro elevado clculo de la concentracin media de plomo en granos de cacao. Estas cscaras por lo tanto pueden ser consideradas como un excelente escudo protector contra la intromisin de plomo dentro del grano procedente de fuentes externas antes que los granos sean cosechados. Por otra parte, la eliminacin de plomo resulta en un incremento en el pH (eliminacin de protones) y la liberacin de calcio, magnesio, potasio, y sodio de las cscaras de cacao (Meunier et al. 2003c). La modificacin del equilibrio inico puede resultar en la trasferencia de plomo del grano a la cscara, un proceso de descontaminacin. Debido a su capacidad para secuestrar plomo, las cscaras pueden convertirse en una fuente de contaminacin despus de que los granos sean cosechados. Ese potencial es indicado por las altas concentraciones de plomo de las cscaras de los granos de cacao listados en la Tabla 4. El promedio de nuestras mediciones de plomo en las cscaras de granos de cacao (160 ng/g) son aproximadamente 320 veces mayores que los valores medios medidos en los granos de cacao nigeriano (Figura 1). La disparidad entre los niveles de plomo en los granos de cacao y cscaras de cacao es consistente con la literatura sobre contaminacin con plomo en alimentos, que han mostrado que la contaminacin es la ms grande en la superficie de las plantas que estn sujetas al depsito directo de aerosoles industriales de plomo. Por ejemplo, hace dos dcadas se determin que las concentraciones de plomo de espinacas en los Estados Unidos eran elevadas en 30 veces a partir de un valor de referencia de 0.0015 g/g a 0.045 g/g por las deposiciones atmosfricas de plomo industrial, mientras que las concentraciones de plomo de man fueron elevadas solo en 2 veces de un valor de referencia de 0.005 g/g a 0.010 g/g de contaminacin atmosfrica. (Flegal et al. 1900). Esta fuente potencial de contaminacin se pone de manifiesto por la ausencia de un aumento mensurable en las concentraciones de plomo entre los granos muestreados directamente despus de la eliminacin de la cscara de la planta y aquellos que haban sido fermentados en hojas de banano y pltano y secados al sol (Oke Osum Farm; directamente de la cscara, 0.846 ng/g; fermentadas y secadas, 0.839 ng/g). La presencia de contaminantes de plomo en las cscaras de los granos de plantaciones de cacao se justifican por las concentraciones que observamos en los varios compuestos del perfil del suelo de este estudio (Tabla 5). El promedio de concentracin de plomo fue de 14.2 g/g, el cual es consistente con el estudio de Chukwuma (1997), quien report el valor de plomo ms bajo medido en suelos nigerianos de 10 g/g. Las proporciones de plomo isotpico de los perfiles de suelo, enumerados en la Tabla 6 y mostrados en la Figura 3, son variables, indicando que mltiples fuentes (por ejemplo, fuentes histricamente diferentes de TEP, pesticidas, fertilizantes, maquinaria) son responsables de la contaminacin observada. Aunque el rea isotpica abarcada por los perfiles del suelo coincide con las composiciones isotpicas del plomo de las cscaras de cacao y puede ser una fuente de contaminacin actual, tal como se muestra en la Figura 3, las similitudes en las composiciones isotpicas de las cscaras de los granos de cacao son indicativo de una sola fuente predominante de contaminacin por plomo en las plantaciones de cacao. En vista de los numerosos reportes publicados sobre la

predominancia de las emisiones de gasolina como una fuente de contaminacin de plomo en Nigeria, esta fuente se atribuye al TEP, aunque no fue posible obtener muestras de gasolina nigeriana para un anlisis de composicin isotpica en los Estados Unidos para este estudio. Como se muestra en la Figura 4, las proporciones isotpicas de plomo de las cscaras de los granos de cacao se superponen a las del cacao elaborado y productos de chocolate. Debido a que los lmites de la FDA para las cscaras de granos de cacao comprenden un mximo de 1.75% en productos de chocolate terminados (Beckett 2002), las concentraciones de plomo observadas para las cscaras de granos de cacao son demasiado bajas para considerarse por la contaminacin observada en los productos terminados. Acoplando la capacidad discutida anteriormente de las cascaras de los granos de cacao de absorber plomo con su composicin isotpica de plomo sugieren que una mayor contaminacin de las cascaras de los granos de cacao durante las etapas de fermentacin y secado en la plantacin es una posible fuente de algn contaminante de plomo observado en los productos finalizados. Sin embargo, la mayor propagacin de composiciones isotpicas de plomo para el cacao elaborado y los productos de chocolate indican otras fuentes de contaminacin que ocurren despus de las plantaciones de cacao. Otros estudios que investiguen el almacenamiento del grano y las fases intermedias de envo y procesamiento son necesarios para aislar la fuente predominante de plomo encontrada en los productos de cacao y chocolate. En resumen, los productos de chocolate y cacao elaborado contienen niveles relativamente altos de contaminantes de plomo en comparacin con el valor de referencia para los granos de cacao nigerianos usados para hacer esos productos. Los anlisis de composicin isotpica de los productos indican mltiples fuentes de contaminacin de origen industrial, lo cual es coherente con la observacin de que hay numerosas fuentes de contaminacin por plomo durante la produccin de cacao que todava tienen que ser identificadas (COPAL 2004a, 2004b). Similares composiciones isotpicas de plomo en las cscaras de los granos de cacao contaminadas de Nigeria, junto con la alta habilidad de las cscaras de los granos de cacao para absorber plomo, sugieren que la contaminacin durante el procesamiento de cacao en cada plantacin puede ser responsable de parte de la contaminacin en los productos de cacao; nosotros proponemos que el actual uso de gasolina con plomo en Nigeria contribuye a esa contaminacin. Sin embargo, la baja concentracin de plomo en los granos de cacao comparado con los del cacao elaborado y de productos de chocolate indica que la mayor contaminacin por plomo en estos productos se produce despus de que los granos son cosechados y secados, durante el envo de estos granos y/o la elaboracin de cacao y productos de chocolate.

Figure 1. A comparison of average lead concentrations (ng/g) for analyzed cocoa beans, cocoa beans shells, chocolate products, and manufactured cocoa