TEMA:

Curva de Calibracin

I.

INTRODUCCIN La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones qumicas y biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Principio de la Espectrofotometra Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe radiacin de longitudes de ondas que no pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbidas. La espectrofotometra ultravioleta-visible usa haces de radiacin del espectro electromagntico, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce tambin como rango de uv cercano , la espectrofotometra visible solamente usa el rango del campo electromagntico de la luz visible , de 400 a 800 nm.

Adems, no est de menos mencionar el hecho de que la absorcin y trasmitancia de luz depende tanto de la cantidad de la concentracin y de la distancia recorrida. Ley de Beer La Ley de Beer declara que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentracin en la solucin. Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azcar diluida y en otro tenemos un vaso con la misma cantidad de agua pero con ms azcar diluida. El detector es una celda fotoelctrica, y la solucin de azcar es la que se mide en su concentracin. Segn la ley de Beer, si hiciramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldra del otro lado seria mayor que si repitiramos esto en el segundo; ya que en el segundo,las ondas electromagnticas chocan contra un mayor nmero de tomos o/y molculas y son absorbidos por estos. Ley de Lambert En la Ley de Lambert se dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la distancia recorrida por la luz. Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pero ahora, pensemos que ambos tiene la misma cantidad de agua y la misma concentracin de azcar, pero, el segundo tiene un dimetro mayor que el otro. Segn la ley de Lambert, si hiciramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso, la cantidad de luz que saldra del otro lado seria mayor que si repitiramos esto en el segundo; ya que en el segundo, las ondas electromagnticas chocan contra un mayor nmero de tomos o/y molculas y son absorbidos por estos; de la misma forma que se explic en la ley de Beer. Ley de Bouguer-Beer-Lambert

Una ley muy importante es la ley de Bouguer-Beer-Lambert (tambin conocida como ley Lambert Bouguer y Beer) la cual es solo una combinacin de las citadas anteriormente. Transmitancia y absorcin de las radiaciones Al hacer pasar una cantidad de fotones o de radiaciones, por las leyes mencionadas anteriormente, hay una prdida que se expresa con la ecuacin: It/Io=T-kdc'' Donde It , es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda fotoelctrica (llamada radiacin o intensidad transmitida); y Io que es la que intensidad con la que sale al atravesar la celda (radiacin intensidad incidente) y la relacin entre ambas ( T) es la transmitancia. En el exponente, el signo negativo se debe a que la energa radiente decrece a medida que el recorrido aumenta. Donde k es la capacidad de la muestra para la captacin del haz del campo electromagntico, d es la longitud de la cubeta de espectrofotometra que recorre la radiacin, y c es la concentracin del soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta. La ecuacin simplificada de la ley de Beer-Lambert A = .d.c Comprende a la mnima ecuacin que relaciona la concentracin (c), la absorbancia de la muestra (A), el espesor recorrido por la radiacin (d) y el factor de calibracin (). El factor de calibracin relaciona la concentracin y la absorbancia de los estndares. La absorcin (o absorbancia) es igual a A, la es el logaritmo del reciproco de la transmitancia:1 A= log 1/T lo que es igual a: A= -log T Las ecuaciones mencionados de las leyes son validas solo y solo s: 1

La radiacin incidente es monocromtica. Las especies actan independientemente unas de otras durante la absorcin.

La absorcin ocurre en un volumen de seccin trasversal uniforme.

1. REACTIVOS KMnO4 1% Azul de Metileno 1% CuSO4 10 % Anaranjado de metilo 10 mg % 2. EQUIPOS Espectrofotometra 3. PROCEDIMIENTO a) A partir la solucin stock de permanganato de potasio al 1% hacer diluciones de 1:10 para un volumen final de 5 mL. Y proceder de acuerdo al siguiente esquema. Tubos Sol KMnO4 Agua Destilada 1 0.25 4.75 2 1 4 3 2 3 4 3 4

b) A partir de la solucin de azul de metileno 1% hacer una dilucin 1:10 para un volumen final de 5 Ml. Y preparar el siguiente batera. Tubos Sol. Diluida Agua Destilada 1 0.05 4.95 2 0.2 4.8 3 0.4 4.6 4 0.5 4.5

c) A partir de la solucin de sulfato de cobre al 10% se prepara la siguiente batera Tubos Sol. CuSO4 Agua destilada 1 0.125 4.875 2 0.25 4.75 3 1 4 4 2 3

d) Leer en el espectrofotmetro cada btera con la longitud de onda determinada en la prctica anterior y anote las lecturas para cada experimento e) Realizar los clculos correspondientes para encontrar las concentraciones de los 1,2,3 y 4 para cada batera RESULTADOS 1. Graficar las absorbancias vs. Concentracin para su respectiva longitud de onda. La prctica consiste en preparar soluciones de concentracin creciente de un colorante anaranjado de metilo y leer D.O, Y %T. Asimismo, de determinar la concentracin de un problema Procedimiento N de tubo Anaranjado de Metilo (10 mg %) mL Problema : mL Agua Destilada: mL D.O (Abs) % Transmisin Mg % de anaranjado de Metilo 1 1 4 2 2 3 3 3 2 4 4 1 5 5 6 0.5 3.5

Mezclar, Leer la longitud de onda de mxima absorvancia determinada en el experimento N 1, colocando a 0 con agua destilada

II.

MATERIALES:

Sol KMnO4 Tubo Tubo Tubo Tubo 1 2 3 4

0.25 1 2 3

Agua destilada
4.75 4 3 2

KMnO4

AGUA DESTILADA TUBOS DE PRUEBA GRADILLA ESPECTROFOTOMETRO

III.

PARTE EXPERIMENTAL
EXPERIMENTO 2: Demostracin de la ley de Lambert y Beer. Se utiliza cuatro tubos de ensayo para preparar la solucin .

Luego se procedi a leer la muestra problema y cada una de las soluciones hechas, en el espectrofotmetro:

Y se obtuvieron los siguientes resultados: Muestra problema ABSORBAN CIA M.PROBLEMA 1 0.128 nm TRANSMITA NCIA 74.5 % 86.6 %

0.063 nm M. PROBLEMA 2 ABSORBANCI A 0.115 nm Tubo 1

TRANSMITAN CIA 76.7 % 42.6 % 18.9 % 8.3 %

Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

IV. CUESTIONARIO

0.37 nm 0.722 nm 1.082 nm

1.- CALCULAR LA CONCENTRACIN DE LAS MUESTRAS PROBLEMAS La frmula para hallar la concentracin es: A= E x B x C Donde: A: Absorvancia

E: 2.2 ( para todos los valores ) B: 1cm ( para todos los valores ) C: Concentracion Para la muestra problema 1: 0.128 = 2.2 x 1 x C 0.128/2.2 = C ---- C= 0.0581 Para la muestra problema 2: 0.063 = 2.2 x 1 x C 0.063/2.2= C ---- C= 0.0286 5.ESPECTRO DE ABSORCION DEL KMnO4 LONG. DE ONDA 0 320 350 380 410 440 470 500 530 550 570 % TRAMITANCIA 100% 0% 0% 46.30% 75.60% 75.30% 56.50% 18.20% 16.40% 10.40% 24.70% ABSORBANCIA 0 0 0 0.329 0.12 0.124 0.297 0.739 1.083 0.984 0.608

7. EN LA GRAFICA 2 OBTENIDA, HALLE LA CONCENTRACIN DE LA MUESTRA PROBLEMA POR EXTRAPOLACIN. [MP1]= 0.128 A [MP]=[0.01][0.128] [MP]=[0.01][0.128] [MP]=[0.01][0.128] [MP]=[0.01][0.128] / / / / [0.115] = 1.11 x 10-2 [0.37] = 3.46 x 10-3 [0.722] = 1.77 x 10-3 [1.082] = 1.18 x 10-3

[MP2]= 0.063 A

[MP]=[0.01][0.063] [MP]=[0.01][0.063] [MP]=[0.01][0.063] [MP]=[0.01][0.063]

/ / / /

[0.115] = 5.47 x 10-3 [0.37] = 1.70 x 10-3 [0.722] = 8.72 x 10-4 [1.082] = 5.82 x 10-4

8. Una muestra de solucin de permanganato dio una lectura de 0.162. Hallar su concentracin.

[KMnO4 1 x 10-2M] --- 0,420 X --- 0,162 X = [1 x10-2 M] x 0,162 ------------0,420 X = 3.86 x 10
-3

M de concentracin

Tubo Tubo Tubo Tubo

1 2 3 4

ABSORBANCIA 0.115 nm 0.37 nm 0.722 nm 1.082 nm

TRANSMITANCIA 76.7 % 42.6 % 18.9 % 8.3 %

V.

CONCLUSIONES:

Se ha llegado a la conclusin de que la espectrofotometra es un mtodo analtico indirecto porque se basa en la medicin de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para la identificacin de un analito en una muestra problema. La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a que es sencillo, especfico y sensible. La espectrofotometra ultravioleta-visible usa haces de radiacin del espectro electromagntico, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a

400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro. Por medio de esta prctica se logr observar la relacin que existe entre la absorbancia de una solucin y su concentracin, que a medida que disminuye la concentracin de una sustancia, tambin disminuye su absorbancia y por lo tanto, en caso contrario, para la transmitancia, conforme disminuye la concentracin de una sustancia, aumenta su transmitancia. Tambin como ya se mencion se logro comprobar experimentalmente que la absorbancia equivale al logaritmo del inverso de la transmitancia y que por lo tanto esto es igual a la densidad ptica para cada sustancia como se muestra en las frmulas investigadas en la teora. Por lo tanto con este tipo de experimentacin se pueden observar los comportamientos que rigen a las frmulas tericas. Se pudo observar la variacin de la absorbancia con respecto a la concentracin madre que preparamos. Se estudiaron los fundamentos de los mtodos espectroqumicos, as como la ley de absorbancia. Tambin se aplico lo que es la ley de Beer que se puede utilizar de diferente manera como las absortividades molares, tambin se puede utilizar el valor de la absorbancia medida para conocer las concentraciones, si es que se conocen la absortividad y la longitud de la trayectoria de la radiacin. La absorbancia esta relacionada linealmente con la concentracin de las especies absorbentes y con la longitud de la trayectoria de la radiacin. La relacin lineal entre la absorbancia y la longitud de la trayectoria de la radiacin a una concentracin fija, es una generalizacin para la que hay pocas excepciones. De los resultados obtenidos de la rectas de regresin notamos q el valor de R2 son aproximadamente la unidad lo q nos da una buena aproximacin a la recta pronosticada. Esto es, tenemos una buen recta de calibracin para calcular la concentracin de una muestra problema cuya matriz es similar a la preparadas en nuestro laboratorio.

VI.

Bibliografia http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa

http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa www.scribd.com/doc/8553130/Espectrofotometria http://es.wikipedia.org/wiki/Ley_de_Beer-Lambert FISICOQUIMICA DE CHANG, RAYMOND Bioqumica de Lehninger Principios de Bioqumica