NORMAS E ROTINAS OPERACIONAIS DOLABORATORIO DE NALISES CLNICAS Setor de Coleta e Recepo Procedimento Operacionais Padres (POP)1.CADASTRO E INFORMAES1.

1Identificar o paciente A chegar recepo do laboratrio, o paciente devera estar portanto requisiomedica com os exames solicitados pelo seu medico, a recepcionista ento ircadastra-lo, dando nfase ao nome, idade, sexo, endereo e/ou telefone. O cadastrodo paciente acompanha a identificao numrico controle do laboratrio. 1.2Identificao de amostra Cada cadastrado possui um numero de identificao, utilizando para etiquetasos recipientes de coleta. importante identificar sempre a parte lateral do frasco, e nunca a tampa,principalmente em frascos de urina e fezes para evitar trocas de material. 1.3Identificaes dos exames a serem realizados No laboratrio as amostras so registradas em fichas internas de seusrespectivos setores, nestas fichas constam a identificao numrica, o nome e aidade do paciente; em seguida as amostras e as fichas sero encaminhadas para osdevidos setores. 1.4Informaes ao paciente Na recepo do laboratrio o paciente ir receber as instrues de como deveproceder para coleta das amostras. Para dosagem bioqumica o paciente orientadosobre o perodo de jejum, sendo tambm necessrio o conhecimento dosmedicamentos que o paciente possivelmente esteja tomando.Quando a coleta de sangue, orienta-se o paciente quanto ao esforo fisico, opaciente deve vir ao laboratrio totalmente descansado para evitar qualquer alteraesnos resultados de seus exames. 2 COLETA DE SANGUE O sangue colhido com o objetivo de estudar as freqncias alteraes dos seuscomponentes quando o organismo acometido pr doenas. No laboratrio soexecutados exames de vrios paciente ao mesmo tempo, torna-se imprescindvel queuma sistematizao bem organizada de trabalho seja seguida, evitando-se os erros deum modo geral, a perda de tempo e, especialmente, a troca dos resultados.Cuidados tcnicos e de assepsia so tambm necessrios a fim de evitar acontaminao do paciente, do operador e do sangue colhido. A coleta feita depreferencia pela manha, com o paciente em jejum.Muitos so os meios para obteno do sangue usado para o examehematolgico, como pr exemplo, sangue o veneno, capilar, arterial, puno da medulassea de ossos como o externo, tbia, ilaco e usado na maioria das vezes o venoso e ocapilar. 2.1 Sangue Venoso

A sua obteno feita pela funo das veias mais acessveis. As que so maisfacilmente funcionadas localizam-se nas regies do antebrao (veia mediana, ceflica ebaslica), do pescoo (jugulares internas e externas) e inguinais (femural). Na criana,tambm se realiza na regio da fontanela frontal (seio longitudinal). A veia a preferidanos exames rotineiros, pois apresenta freqentemente bom calibre e sua funo pouco dolorosa. Antes da puno, avalia-se a orientao do vaso pela visualizao oupela palpao digital e fazer a agulha penetrar e aprofundar nessa direo. 2.2 Sangue capilar freqente usado em crianas quando se empregam micrometodos ou em adultospara alguns exames como estudos de plaquetas, citologia e citoquimica celular. Acoleta se faz aps puno da polpa digital dos dedos ou dos grandes artelho, nacriana. Pode-se ainda utilizar a regies laterais do calcanhar, nos recem nascidos. 3.RECEPO AO PACIENTE O paciente recebido com cortesia e cordialidade; explicando os procedimentos aosquais ele vai ser submetido, de modo a transmitir-lhe tranqilidade e segurana.A coleta chama o paciente para a coleta de sangue, e de acordo com seu cadastro,confirma o nome, a idade e os exames a sem realizados pelo paciente. A mesmasepara e identifica, na frente do paciente os tubos que sero utilizados para o material. 3.1 Condies para a coleta Sala bem iluminada e ventilada; Pia; Cadeira reta com bracadeira regulvel ou maca; Garrote; Algodo hidrfilo; lcool etlico a 70% ou lcool iodado a 1%; Agulhas e lancetas descartveis;

 Sistemas a vcuo: suporte, tubo e agulhas descartveis; Tubo de ensaio com tampa; Etiquetas para identificao de amostras; Caneta; Caixa descarpack; Jaleco e mascara; Luvas descartveis; Estantes para tubos. 3.2 Identificao da amostra Identificam-se os tubos para colocao da amostra. Escreva na etiqueta os dados dopaciente: nome, numero do registro, data da coleta. 3.3 Tecnica para Coleta de Amostra do Sangue Venoso Coloca-se a agulha na seringa sem retirar a capa protetora. No tocando naparte inferior da agulha; Movimenta o embolo e pressione-o para retirar o ar; Ajusta o garrote e escolha a veia;

Faz a anti-sepsia do local da coleta com algodo umedecido em lcool a 70%ou lcool iodatdo a 1%. No tocando mais o local desinfetado; Retira a capa da agulha e faz a puno; Introduz a agulha na veia mediana, basilica ou ceflica, atingida a veia, aspira osangue; Coleta-se aproximadamente 10 ml de sangue. Em crianas coleta 2 A 5 ML; Retira o garote e em seguida a agulha; Comprime o local puncionado com algodo embebido em lcool; Retira a agulha da seringa e transfere o sangue para os tubos,

quando for transferido para um tubo contendo anticoagulante. Agita suavemente para facilitar amistura do sangue como anticoagulante; Ao transferir o sangue para um tubo de ensaio sem anticoagulante. Escorrer delicadamente o sangue pela parede do tubo. Este procedimento evita a hemolise daamostra. Descarta as agulhas e seringas nas caixas de descarpack; Orienta o paciente a pressionar com algodo a parte puncionada, mantendo obrao estendido, sem dobr-lo; 3.4Tecnica para coleta de amostra do sangue capilar Faz assepsia da poupa digital com lcool iodado. Deixar secar.

Puncionar com lanceta ou agulha descartavel, desprezando-se a primeira gotade sangue e absorvendo-a com papel de filtro ou algodo seco; Sangue deve fluir espontaneamente, exercendo-se leve presso somentequando necessrio; Direciona o tubo de capilar na gota para que o sangue flua ps capilaridade; Limpar o dedo com algodo e aplicar anti-sptico. Anticoagulantes. O sangue coletado com a proporo correta de Anticoagulantes utilizados. EDTA; 1 a 2 mg para cada ml de sangue. Heparina; 1 gota (5.000 U/ml) para cada ml de sangue. Oxalato de K; 1 a 2 mg para cada ml de sangue. Citrato de sdio; 0,5 ml para 4,5 ml de sangue. 3.6 Biossegurana na coleta Todo cuidado pouco na manipulao de materiais biolgicos, tais como soro,sangue, secrees, fluidos orgnicos, tecidos, etc. Redobra-se as precaues, poisesses materiais so potencialmente infectantes e muitas vezes esto contaminadoscom agentes estiologicos diferentes do que se esta pesquisando, ou aindadesconhecidos.Usa-se sempre Equipamento de Proteo Individual (EPI): jaleco longo demangas compridas e punho retratil, luvas descartveis evita a formao e dispersesde aerossis so micro partculas solidas e liquidas com dimenses aproximadas entre0,1 e 0,5 micra que podem, no caso de conter microorganismos, permanecer emsuspenso e plenamente viveis pr varias horas.Jamais reencapa-se agulhas. Esse procedimento uma das principais causasda contaminao de profissionais de sade por microorganismos, existentes no sanguee em outros fluidos orgnicos, como por exemplo, o vrus da Hepatite B e o HIV. Aps acoleta descartado esse material diretamente em caixas descarpack.Reduz ao mximo o manuseio de resduos, em

especial os pefurocortantes.Descarta o rejeito perfurocortante diretamente em caixas descarpack. 4.EMISSAO DOS LAUDOS DOS EXAMES LABORATORIAIS Os laudos esto disponveis no prazo acertado com o paciente, se por algummotivo isto no for possvel, h uma justificativa e, sempre que possvel, o paciente informado no mais curto prazo possvel. Em caso de laudo que possa oferecer perigo iminente vida do paciente, olaboratrio informa ao mdico assistente e/ou ao responsvel pelo paciente.O laudo datado e assinado por profissional legalmente habilitado com o seunome completo e legvel, e o nmero do registro no conselho profissional. 4.1 Exames Nome do exame; Material utilizado; Mtodo; Intervalo de referencia com as respectivas unidades e valores de alerta; Informaes necessrias interpretao dos resultados, quando indicada; Concluses, quando indicadas. EXAMES DE SANGUE Acido uricoCapac. Total de lig. do ferroAlbuminaCetonemiaColesterol fracionado: HDL LDL

VLDLAldolaseCloretosFerro colher pela amanhAmilaseCreatininaTriglicridesBilirrubinasEletroforese de protenas UriaClcioFosfatase acidaColesterol ( sem fracionamento)Fosfatase alcalinaCPK totalFsforoCK MBFrutosaminaGama GTGlicoseHemoglobina glicosiladaLipasePotssioMagnsioSdioMucoproteinasTransaminases: TGO/AST; TGP/ALTVelocidade de hemossedimentao (VHS)HemogramaCurva de fragilidade osmoticaPlaquetasTempo de protrombinaTempo de tromboplastina parcial ativada PTTaReticulocitosEletroforese de hemoglobinaPesquisa de drepancitosAlfa 1 Glicoprotena acidaFator reumatoideGrupo sangneo e fator RhVDRL Protenas C reativaAnti HBsAnticorpos antireoidianos: antireoglobulina antimicrossomalAntiestreptolisina O - Monoteste - Paul Bunnell Davidsohn - Epstein Baar (IFI ou ELISA) - Anti VCA IgG e/ou IgMFanHbeAgToxoplasmose IgG/IgM - ELISA - IFI HAIHbsAg (Antigeno australia)Chagas (T. Cruzii): - IFI HAI ELISAHAV IgG/ IgMAnti HbeCitomegalovrus IgG/IgMHIV 1 e 2 EXAMES DE URINA ROTINA 1)Entrega ao paciente um frasco etiquetado com o nmero de registro do mesmo.2)Da as seguintes instrues ao paciente: 2.1 Colher a primeira urina da manh 2.2 Antes de colher a urian, fazer um asseio com gua e sabo na genitliaexterna.

2.3 Desprezar as primeiras pores da urina e colher o restante no frasco coletor recebido do Labortorio. 2.4 Trazer imediatamente para o Laboratorio dentro do laboratrio dentro dohorrio previsto para recebimento de material ( 7:30 s 10:00 hs, manh ). Obs: Paciente Os sexo feminino no devem colher urina no perodo menstrual. 3) Paciente feminino no deve coletar a urina no dia em que fizer Exame deContedo vaginal, pois a paciente dever estar sem asseio e para a coleta de urinater que assia-se antes. EXAMES PARASITOLGICO FEZES 1)Entrega ao paciente um frasco etiquetado com o numero de registro domesmo.2)Colher o material e trazer para o Laboratorio no horrio estipulado( 7:30 s 10:00 hs).3)Se houver dificuldade de colher o material pela manha no dia do examemarcado, pode colher na vspera e colocar na geladeira o frasco coletor. EXAMES DE SECREO VAGINAL E SECREO URETRAL 1)Se a paciente tambm tiver que realizar exame de URINA, o exame deSecreo devera ser realizado no outro dia.2)Para fazer exame de Secreo Vaginal a paciente deve vir aoLaboratorio sem tomar banho ou sem realizar qualquer tipo de asseio.3)No manter relao sexual 24 hs antes da realizao do exame,abstinncia sexual de 24 hs. 5.ENTREGA DE RESULTADO 1)Os exames de paciente particulares e SUS ficam no arquivo colocadosem ordem alfabtica.2)Os exames de paciente atendidos pelo hospital so entregues ao mesmocolocados no pronturio.3)Observa-se o nome completo, idade do paciente.4)Confere se o nome do paciente no exame com o nome que est narequisio.5)Retira-se o resultado e entrega ao paciente 6.EXAMES INCOMPLETOS 1) O exame s ser liberado quando o paciente trouxer o restante do material paracomplementar os tipos de exames que constam da requisio mdica. 2)

Solicitamos ao paciente que traga no mximo ate 48 hs. Aps as analisesefetuadas, o exame liberado normalmente.

Setor de Lavagem e EsterilizaoPROCEDIMENTO OPERACIONAIS PADRES (POP) A importancia de uma boa descontaminao de materiais ( ESTERILIZAO) peaimprescindvel para um melhor desempenho dos trabalhos a serem executados em umlaboratrio de analises clinicas. O processo de esterilizao o comeo de tudo, sem amesma os resultados no sero satisfatorios. Faremos uma descrio dos mtodos queso utilizados para a esetrilizao dos materiais do laboratorio. 1 OBJETIVOS1.1Gerais Tomar conhecimento dos cuidados na manipulao de materiais contaminados.Devemos tambem ter o conhecimeto de lavagem, secagem empacotamento eesterilizao de materiais reaproveitaveis. 1.2Especificos Uns dos objetivos mais importantes, o conhecimento de como se deve usar asmaquinas, como: AUTOCLAVE, ESTUFA DE SECAGEM E ESTERILIZAO ETAMBM O DEIONIZADOR.2.EQUIPAMENTO BSICOS Autoclave Estufa de secagem Estufa de esterilizao Deionizador OBS: H de se destacar tambm os materiais usados no processo de lavagem.

Soestes: Sabao Hipoclorito 1%3 METODO PARA ESTERILIZAR MATERIAIS: 1.O 1 passo colocar o material contaminado (cogulos e urina) so colocadosem frascos plsticos contendo hipoclorito a 1%, pr duas horas vida mdia dohipoclorito.2.2 passo os materiais reutilizveis ex: vidrarias so colocados no hipoclorito a1% pr 30 minutos,3.3 passo sabo dextran pr mais 30 minutos,4.4 passo lava-se em gua corrente pr 30 minutos,5.5 passo mais 30 minutos de molho em gua deionizada,6.6 passo so colocados na estufa de secagem.

Matrias da microbiologia1. Os materiais contaminados so colocados na autoclave pr 45 minutos 121C 2. Depois que sair do autoclave, devemos seguir os mesmos passos a partir do 3descrito acima; 3. Aps a secagem, leva o material para o balco de empacotamento e l,definitivamente separado. Ex: plstico, vidro, etc. 4. Depois de separado, o material colocado na estufa de auto preciso paraesterilizao com fita teste. Deve-se salientar que materiais plsticos no devem ir paraa estufa de esterilizao, pois a mesma os danificar, devido sua alta temperatura quegira em torno de 180C. O temo que o material deve ficar na estufa de esterilizao de 2 hs. E com relao ao material plstico este e embalado e colocado na autoclavede 15 a 20 minutos. OBS: Para identificarmos um material autoclavado devemos verificar a fitateste, esta deve estar com listras queimadas. Com todos esses passos, ns faremosuma boa esterilizao, pois a mesma os danificar, devido sua alta temperatura quegirar em torno de 180C. O tempo que o material deve ficar na estufa de esterilizao de 2 hs. E com relao ao material plstico este e embalado e colocado na autoclavede 15 a 20 minutos. importante compreender a importancia da esterilizao em todo o processode trabalho em Laboratorio, bem como o uso de equipamentos essenciais(

AUTOCLAVE, ESTUFA DE ESTERILIZAO E SECAGEM E DEIONIZADOR), eprocedimentos de lavagem e descontaminao de materiais. 4. DESCARTE DE MATERIAL CONTAMINADO Deve haver POP para o descarte de material contaminado gerado no laboratorio, queso aqueles despejos em estado slido, semi-solido, liquido ou pastoso, apresentandocaractersticas de toxidade e/ou atividade biologica, que podem afetar direta ouindiretamente os seres vivos ou causar contaminao das aguas, do ar e do solo. Procedimento para com os materiais. Agulhas (e capilares de hematcrito): Uma vez terminada a coleta dosangue-amostra so desprezadas em caixas descarpack Seringas: Aps o termino da coleta do material, tambem so descartaveis emcaixas escarpack. Algodao, gaze, papeis e material afins: Apos o uso devem ser descartadosem sacos de lixo branco

e reforados para posterior coleta pr servio especializados. Swabs, especulos, espatulas, abaixadores de lingua, etc.: Proceder daforma descrita acima. Urina: Acrescentar uma parte de soluo de hipoclotito de sodio a 1%. Deixaem contatoo pr 2 horas descarta no esgoto sanitario. Os frascos devem ser descaratados em sacos de lixo brancos reforados para posterior coleta pr serviosespecializados. Fezes:

descarta em saco de lixo reforados. Sangue, coagulos e semelhantes: colocar todo o sangue e seus derivadosem um recipiente de plastico resistente. Adicionar soluo de hipoclorito de sdio.Deixar em contato pr 2 horas. Devido decomposio do hipoclorito em contato com osangue, deve-se adicionar mais hipoclorito, at no haver qualquer formao deespuma. Meios de cultura e despejos e bactriologicos: Dispensa o material o, aesterilizao em autoclave e descartar em lixo especial. Lminas e lamnulas: No so descartas. Ao recuper-las so submetidas aum tratamento hipoclorito de sdio a 1% pr 30 minutos. Apos o processo, proceder alavagem e recuperao.

PROCEDIMENTO DE ROTINAHEMATOLOGIA MANUAL HEMATOLOGIA A hematologia compreende o estudo das celulas sanguineas e coagulao.Normalmente, os constituintes do sangue (hemacias, leuccitos e plaquetas)permanecem em equilibrio sempre constante devido ao sistema hematopoitico, comfuno de formao hemoltica ou de destruio das clulas sanguineas. (O. LIMA,1992) OBJETIVOS O estudo no Laboratrio de hematologia consiste em analisar clulassanguineas e a coagulao atraves de exames hematolgicos, podendo assimqualificar e diferenciar as clulas sanguineas.Esses testes realizados possibiltam um diagnostico mais conclusivo, auxiliandoclnico no tratamento de uma patologia pr deficiencia hematologica. HEMATCRITO

Consiste em determinar em porcentagem a concentrao de eritrcitos emdados volume de sangue no coagula. a razo entr o voluem deeritrcitos em relaoao volume do sangue total. (O. LIMA, 1992) MATERIAIS E MTODOS Tubo capilar Bico de bunsen Centrfuga para microhematcrito Tabela para microhematcrito O tubo de microhematcrito preenchido por capilaridade at da capacidade docapilar. A extremidade vazia vedada pela chama do bico de bunsen. Colocar oscapilares na centrifuga para microhematcrito, com o cuidado de coloca a parte abertacontra o apoio de borracha para evitar quebras e extravasamentos. A ponta selada ficavoltada para fora. recomendvel um centrifugao a 3.000 RPM/5 minutos.Aps a centrifugao, o tubo apresenta uma coluna de sangue, incluindo oplasma e uma coluna de eritrcitos. Devem ser medidos com o auxlio da tabela. HEMOGLOBINA (Hb) o principal componente dos eritrcitos. um conjugado de protenas queserve como transporte de O2 e CO2. (O. LIMA, 1992) MATERIAIS E MTODOS Tubos para centrfuga Padro (HiCN Cianetohemoglobina) -

Reagente de Drabkin Tomar 3 tubos e proceder da seguinte maneira:BPAPadro - 20uL-Amostra--20 uLReag. de Drabkin5.0uL5.0uL5.0uLHogenizar. Descansar em temperatura ambiente por 5 minutos. Leitura a 540nm no espectrfotmetro. Zerar com o Branco. ESFREGAO O exame de esfregao sangneo uma parte importante da avaliaohematolgica. Para obter esfregaos satisfatrio, indispensvel que se tome certasprecaues: lminas devem estar limpas e desengorduradas; a gota de sangue no deve ser muito grande. Quanto maior a gota, mais espesso oesfregao. O ideal uma gota de 20uL; O esfregao deve ser feito rapidamente, antes que ocorre a coagulao. (O. LIMA,1992) MATERIAIS E MTODOS Lminas limpas e desengorduradas Lminas de extenso (extensora) Colocar uma gota de sangue no final de uma lmina apoiada em uma superfcieplana. Com o polegar e o indicador, segura-se o final da lmina de extenso contra asuperfcie da primeira lminas. Empurra-se a lmina de extenso a uma velocidademoderada para frente at que o sangue tenha sido espelhado em um esfregaomoderadamente delgado. As lminas devem ser secas a temperatura ambiente edepois corada para anlise ao microscpio. conveniente confeccionar vrios esfregaos ao mesmo tempo. Marcar sempre os esfregaos usando agulha ou lpis dermogrfico com o nome do paciente ea data sobre a superfcie do mesmo. COLORAO Os corantes de anilina usados em esfregaos sanguineos so de duas classesgerais:

corantes bsicos, como o azul de metileno; corantes cidos, como a eosina.O ncleo das clulas toma as cores bsicas, como o azul de metileno, enquantoque os corantes bsicos agem sobre os elementos citoplasmticos. Pertencem a estegrupo os corantes de Romanowsky. Os derivados mais usados do corante primitivo deRomanowsky so: Giemsa. Leishman, Wrigth entre outros. Nesse setor foi usado ocorante Leishman. (O. LIMA, 1992) MATERIAL E MTODOSSuporte para lminas- Corante de Leishman Colocar a lamina sobre o suporte. Verter 20 gotas do corante sobre a lamina ouo suficiente para cobri-la. O lcool metilico (metanol) da soluo corante fixa oesfregao.Deixar corar durante 15-20 minutos. Lavar em gua corrente e deixar secar.Observar ao microscpio com objetiva de imerso. CONTAGEM GLOBAL A contagem dos elementos morfolgicos do sangue (eritrcitos, leuccitos eplaquetas deve ser efetuado pala manh. Consiste em trabalhar com material aferidocom a finalidade de determinar o nmero dos elementos morfolgicos. Para isso, necessrio diluir volume conhecido de sangue com determinada quantidade de lquidodiluidor. Conta-se as clulas na rea reticulada da cmara destinada para cada tipo declulas (ver Anexos) (O. LIMA, 1992) MATERIAL E MTODOS Cmara de Contagem (Camara de Neubauer) Lquidos diluidores (hayem, Turk, Oxalato de Amnia 1%) Pipetas graduadas e automticas Lamnulas Contagem Global de Leuccitos

Valores de Referencia:5.000 10.000 mm3 0.38 mL do lquido de Turk 20uL sangue Diluio = 1/20 Depois de homogeneizar o lquido de Turk com o sangue, umedecer a cmara delquido de Turk com o sangue, baixo da lamnula, inserir com auxlio da pipeta automtica pequena quantidade da soluo diluda. Cuidado para evitar presena debolhas. Esperar 5 minutos a fim de que os glbulos se depositem. Observar aomicroscpio primeiramente com a objetiva de menor aumento e em seguida numaobjetiva de 40X. Fazer a contagem nos quadrantes destinados a leuccitos. Contagem Global de Plaquetas Valores de Referncisa:150.000 400.000 mm3 0.38 mL oxalato de amni 1% 20uL sangue Diluio = 1:20 Depois de homogeneizar o oxalato de amnia 1% com o sangue, umedecer acmara de Neubauer e cobri-la com lamnula. Pr baixo da lamnula, inserir com oauxilio da pipeta automtica pequena quantidade da soluo diluda. Cuidado paraevitar presena de bolhas. Esperar 10 minutos a fim de que as plaquetas se depositem.Esperar em cmara mida. Observar ao microscpio primeiramente com a objetiva demenor aumento e em seguida numa objetiva de 40X. Fazer a contagem nos quadrantesdestinados a plaquetas, que so os mesmo para contagem de eritrcitos. VELOCIDADE DE HEMOSSEDIMENTAO (VHS)

 a velocidade com o qual os glbulos vermelhos vo para o fundo do tubo. Osglbulos vermelhos que sedimentam porque a sua densidade maior que a doplasma. A velocidade com que eles sedimentam porque a sua densidade maior quea do plasma. A velocidade com que eles sedimentam varia, direta ou indiretamente comvrios fatores. (O. LIMA, 1992) MATERIAIS E MTODOS Tubo de Westergren Estante de westergren O mtodo de Westergren modificado produz os mesmos resultados que o mtodo deWestergren original, mas emprega sangues na coagulado com EDTA ao invs decitrato. Isso permite que o VHS seja realizado com a mesma amostra de sangue que osoutros estudos hematolgicos.

2 mL de sangue com EDTA bem misturados so diludos em 0.5 mL de cloreto desdio a 0.85% ou 0.5 mL de citrato de sdio a 3.8%. Uma pipeta de Westergren completada at a marca 0 (zero) e colocada exatamente na vertical na estante temperatura ambientem, sem vibraes ou exposio direta luz solar. Apsexatamente 60 minutos, a distancia do topoo da coluna registrda em molmetros comoo valor da VHS. Se a demarcao entre o plasma e a coluna de clulas vermelhas distinta, o nvel lido onde a densidade total aparece primeiro. Valores de Referncia: Homens: 3-15 mmMulheres: 3-20 mmCrianas: 3-12 mm CLULAS LE (Lupus Eritematoso) Um anticorpo presente na frao globulina gama do soro dos pacientes de LES,o chamado fator LE, reage com a nucleoprotena dos ncleos dos leuccitos. Oncleo do fagcito achase comprimido na periferia da clula. A maior parte da regioprotoplasmtica ocupada pela massa nuclear transformada. O citoplasma reduz-se estreita faixa na periferia do leuccitos. Na clulas LE, a estrutura da cromatina substituda pr massa arredondada, homognea, de colorao prpura, de tamanhovarivel, mas usualmente maior que a hemcia. O fagcito pode englobar mais dencleo. (O. LIMA, 1992) MATERIAL E MTODOS -

Banho Maria a 37C Toma-se o sangue sem anticoagulante e coloca-se em Banho Maria a 37C/2hs.Depois realizase o esfregao e observa-se ao microscopio. Deve-se semprerealizar o exame FAN junto com o exame de clulas LE. CONTAGEM DE RETICULCITOS Os reticulcitos so clulas vermelhas imaturas no nucleadas que contmRNA e continuam a sintetizar hemoglobina aps a perda do ncleo. O sangue incubadorapidamente em uma soluo de azul cresil brilhante ou azul metileno. No RNA precipitado como um complexo corante ribonucleoprotenas. O complexo aparecemicroscopicamente como uma rede azul escura ou grnulos azuis escuros quepermitem a identificao e contagem de reticulcitos. (O. LIMA, 1992) MATERAIS E MTODOS Esfregao sangneo Conta-se o nmero de reticulcitos em 10 campos diferentes. O esfregao feito apartir de 100uL de sangue + 1 gota de azul cresil brilhante.Valores de Referncias:0.5 - 2.0%10 campos = total / 10 = nmero % COAGULOGRAMATempo de Sangria (TS) o tempo necessario para a cessao da hemorragia, ocasionando por pequena inciso, de dimenso padronizada, praticada artificialmente. (O. LIMA, 1992) MATERIAL E MTODOS Equipamento para puno digital Papel de filtro Cronmetro

Faz-se a assepsia da polpa digital ou do lbulo da orelha com a lanceta, fazer ainciso e deixar o sangue fluir espontaneamente. Marcar no cronometro o incio nomomento do aparecimento da primeira gota. Com o papel de filtro absorver de 30em 30 segundos a gota de sangue formada sem tocar a inciso. Quando cessar o fluxo de sangue, parar o cronmetro. Quando cessar o fluxo de sangue, parar cronmetro. O intervalo decorrido entre o aparecimento da primeira e da ultima gotarepresenta do tempo de sangria.Valores de referncia:1 6 minutos Tempo de Protrombina Ativada (TAP) a prova de escolha para investigao do sistema extrnseco da coagulaosangnea. uma prova de grande valor na demonstrao de deficincia dos fatores decoagulao I, II, V, VII, X. (O. LIMA, 1992) MATERIAL E MTODOS Plasma citratado do paciente Soluo de tromboplastina Banho Maria a 37C Tubos de ensaio Soluo de cloreto de clcio a 0.025M Coloca-se 100uL do plasma citratado do paciente + 100uL da suspenso detromboplastina no tubo de ensaio. Homogeneiza, adicionar rapidamente 100uL dasoluo de cloreto de clcio. Neste instante, acionar o cronmetro. Retirar o tubo doBM e agit-lo suavemente, de 2 em 2 segundos, at o aparecimento do cogulo,parando simultaneamente o cronmetro. O tempo consumido em segundos constituio TAP.Valores de Referncia:11 13 segundos Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPA)

a melhor prova para investigar as alteraes do mecanismo da coagulaosangnea. Fatores que participam do sistema intrnseco esto envolvidos, comexceo das plaquetas e do fator XIII, bem como do fator VII, do sistema extrnseco. (O.LIMA, 1992)

 MATERIAL E MTODOS Plasma citratado do paciente Soluo de tromboplastina parcial Banho Maria a 37C Cronmetro Tubos de ensaio Soluo de cloreto de clcio a 0.025 M Coloca-se 100uL de cefalina + 100uL plasma citratado do paciente. Homogeneiza eencuba em Banho Maria a 37C/3 min. Aps esse tempo, adicionar rapidamente100uL da soluo de cloreto de clcio. Neste instante, acionar o cronmetro. Agit-lo suavemente, de 5 em 5 segundos. Ao fim de 30 segundos, retirar o tubo do BM eagit-lo suavemente, observando o aparecimento do cogulo, parandosimultaneamente o cronmetro. O tempo consumido em segundos constitui o TTPA.Valores de Referncia:35 45 segundos CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCCITOS Consiste em determinar a proporo existente entre as distintas variedades deleuccitos. A contagem diferencial de leuccitos dos mais valiosos mtodos entre osexames citolgicos do sangue. (O. LIMA, 1992) MATERIAL E MTODOS Esfregaos corados

Deve-se observar a lmina prximo cauda o esfegao onde quase no seencontra roleaux e facilita a contagem. Total de 100 clulas.

FIBRINOGNIO MATERIAIS E MTODOS Tubo capilar Plasma Microcentrfuga Tabela de Hct Banho Maria a 56 Aspira-se o plasma no tubo capilar e encuba-se em Banho Maria a 56C/15 minutos.Leva-se centrfuga para microhematcrito por 5 minutos / 3000 RPM. Faz-se a leiturana tabela para Hct e multiplica o resultado por 92.Valores de Referncia:200 400 mg/dL INDCES HEMATIMTRICOS VCM = Hct / Hem x 100 u3HCM = Hb/ Hem x 100 pgCHCM = Hb / 100%

PROCEDIMENTO DE ROTINA SOROLOGIAMANUAL

No trimestre final pode ocorrer HCG negativo em caso de aborto, com a placentainativa. Doenas trofoblsticas liberam grande concentrao de HCG. Pesquisa de HCG em homens: suspeita de CA de testculo.Urobilinognio 2,5 mL de urina0,5 mL reativo de ErlichPositivo se forma colorao vermelha. Caso de positivo, realizar diluiosucessivas, comeando com 1,0 mL de urina + 9,0 mL de gua destilada. Diluio de1/10, 1/20, 1/40, 1/80, 1/160.Adiciona 1,0 mL de reativo de Erlich.

Resultado:Urobilinognio: 1/? EU (Unidade Erlich)Pigmentos Biliares 1,0 mL cido ntrico1,0 mL de urina, pelas bordas do tubo, vagarosamente.Positivo se formar um halo verde.Pesquisa de Sangue Oculto Centrifugar 10 mL de urina a 2000 RPM pr 5 minutos.Desprezar todo o sobrenadanteAcrescentar 6 gotas do Reativo de BenzidinaPositivo se formar um colorao de azul a verde. Reativo de Benzidina: Uma porode Benzina1,0 mL H2O2

1,0 mL de cida actico 50%Homogeneizar

Preparar o reativo somente na hora do uso. HCG de 24 horasSucessivas diluio a comear de 1 / 2.

Resultado:Volume de 24 hs x ultima diluio positiva x 2,5 = ? UI/24 horas

 LQUIDO CORPORAIS (STRASINGER, 1998)ANLISES DO LCRA) Exame fsico Aspecto:Antes de centrifugar: vermelho / turvoDepois de centrifugar: deve diferenciar o LCR

Para diferenciar Puno Traumtica de hemorragia Intracraniana.1)Aps centrifugaoPT: forma sedimento (boto de hemcias e sobrenadante lmpido)HI: no forma sedimento.2)Distribuio desigual de sangue nos tubosPT: a quantidade de sangue vai diminuindo nos tubos.HI: Os trs tubos permanecem vermelho por igual.3)Formao de coguloPT: no forma coguloHI: forma cogulo B) Exames microscpico a) Contagem Global- Leuccitos:--- mm- Hemcias: 0-5 / mm; RN.: at 100/mm

Homogeneizar o material e preencher a cmara de Fuchs Rosenthal.Contar todos os quadrantes e dividir o nmero de clulas contadas por 3.b)Contagem DiferencialConcentrar o material e fazer esfregao com a cmara de Suta.Corar com Leishman, Wright ou Giemsa.Contar 100 Clulas:- neutrfilos (Meningite bacteriana)- linfcitos (Menegite viral)eosinofilos (Neurocisticercose)- moncitos (Meningite turbelosa e fngida) C)Exame qumico Glicose (60% glicose plasmtica)Protena: 15 - 40 mg/dL - ESPERMOGRAMAA) Fases 1 fase: Liquefao primria ou virtual2 fase: Coagulao (durao at 30 minutos)3 fase: Liquefao secundaria. Ausncia dessa fase INFERTILIDADE B) Contagem Global Homogeneizar a amostra e diluir em 1/40 (3.9 mL solvente fisiolgico + 100uLde esperma).Preencher a cmara de Neubauer.Contar SPTZ em objetiva de 40 X nos quadrantes laterais e central, multiplicar onmero o contado por 80.000.Se a quantidade de SPTZ for muito elevado, contar apenas o quadrante centrale multiplicar por 400.000.Resultados expressos em mL. V.R.: 60 milhes/mL

C) Viabilidade Em um tubo, colocar uma gota de esperma e acrescentar 2 gotas de eosina +2gotas de nigrosina.Confeccionar esfregao e secar rapidamente.Verificar a quantidade de SPTZ vivos

(brancos) e mortos (vermelhos) - Objetivade imerso.Vivos: mais do que 70%Mortos: menos do que 30%.

PROCEDIMENTO DE ROTINAPARASITOLOGIA

TESTE DE COMPATIBILIDADE ( PROVA CRUZADA MAIOR )

TECNICA: ALBUMINA BOVINA 22% 1 FASE 1.Prepare suspenses de hemcias lavadas (5%): do concentrado de hemacais aser transfundido e do paciente (recepto);2.Identifique 2 tubos: Prova cruzada e AC (Auto controle);3.Coloque em cada tubo 2 gotas do soro do paciente (receptor);4.Adicione 1 gota da suspenso de hemcias do concentrado a ser transfundidoao tubo de prova cruzada e 1 gota da suspenso de hemcias do paciente aotubo AC;5.Homogenize e centrifugue durante 15 seg\3400 RPM;6.Proceda a leitura, ressuspendendo o boto de hemcias delicadamente sobreaglutinoscpio e anote os resultados. 2 FASE 1.Adicione a cada tubo 2 gotas de albumina bovina 22%;2.Homogenize e centrifugue 15 seg\3400 RPM;3.Proceda leitura e anote os resultados. 3 FASE 1.Incube os tubos: prova cruzada e AC, em banho maria 37C\30 min;2.Aps incubao, centrifugue os tubos 15 seg.\3400 RPM;3.Proceda leitura e anote os resultados. 4 FASE 1.Encha os tubos com soluo salina (0,9%) ate 1 cm da borda;2.Centrifuge os tubos durante 30 seg\3400 RPM;

3.Esvazie os tubos por inverso e repita as operaes dos itens da 4 fase (1 e 2)por mais 2 vezes, escorrendo o sobrenadante em um pano;4.Adicione a cada tubo 2 gotas do soro reagente antiglobulina humanapoliespecifica.5.Homogenize e centrifugue 15 seg.\3400 RPM;6.Proceda a leitura e anote os resultados;7.Adicione 1 gota de suspenso de hemcias controle de COOMBS, centrifuguee proceda leitura.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS DO TESTE DE COMPATIBILIDADE 1.A positividade apenas no tubo de prova cruzada em qualquer fase do teste indicapresena de anticorpos (s) irregular (es);2.A positividade no tubo AC (Auto controle) indica provvel presena de autoanticorpo.3.Sempre que a prova cruzada apresentar incompatibilidade, ou seja, apresentar positividade, o (s) anticorpo (s) deve (m) ser identificado (s);4.Suspenso de hemcias controle de COOMBS deve apresentar aglutinao,caso contrario a prova de compatibilidade deve ser invalidada. OBS: No confundir a positividade do teste controle de COOMBS, com a ltima faseda prova de comaptibilidade.

TESTE DE COOMBS DIRETO O teste de COOMBS direto demonstra hemcias sensibilizadas por anticorposou complemento, utilizado no estudo de: Anemia hemoltica auto-imune, doenas hemoltica do recm nascido e reaohemoltica transfusional. Procedimento tcnico: 1.Prepare uma suspenso de hemcias lavadas (5%), do sangue a ser testado;2.identifique um tubo de hemlise CD;3.Coloque no tubo 1 gota da suspenso de hemcias (5%);4.Adicione a este tubo 2 gotas dos soro reagente anti-globulina humanapoliespecifica;5.Centrifugue o tubo durante 15 seg\3400 RPM;6.Proceda leitura, ressuspendendo o boto de hemcias do fundo do tubodelicadamente, anote os resultados.INTERPRETAOA ocorrncia de aglutinao, determina a positividade do teste.