NOMENCLATURA BACTERIANA : binomial

Gnero especie ( G. especie) Gnero especie ( G. Especie) Gnero especie ( G. Especie)

Principales Taxones bacterianos. Dominio: Reino: Seccin: Clase: Orden: Familia: Gnero: Especie: Morfovar: Biovar: Serovar: Fagovar: Patovar: Bacteria (Eubacteria) Proteobacteria -Proteobacteria Zymobacteria Enterobacteriales Enterobacteriaceae Escherichia coli propiedades morfolgicas propiedades bioqumicas propiedades antignicas sensibilidad a fagos propiedades patognicas

 Bacterias auttrofas: Pueden fabricar sustancia orgnica a partir de la energa de la luz del sol, pues poseen una sustancia parecida a la clorofila, y de materia inorgnica, como las plantas. Son de color verdeazulado, por eso tambin se les llama cianofceas.

 Bacterias hetertrofas: Viven a partir de sustancias orgnicas fabricadas por otros seres vivos, tal como hacen los animales.

 Bacterias saprofitas: se alimentan de sustancias en descomposicin. Tienen una gran importancia en la naturaleza, ellas realizan la putrefaccin de los restos de otros seres vivos.

Bacterias parsitas: viven a costa de otro organismo, causando numerosas enfermedades (meningitis, ttanos, lepra)

 Bacterias simbiticas: se asocian con otros organismos intercambiando funciones necesarias para la vida. Algunas viven en el aparato vivo de los rumiantes y les ayudan a digerir la celulosa. Otras viven en las races de las plantas y les consiguen nutrientes. Bacterias de la fermentacin: transforman sustancias orgnicas por medio de un proceso llamado fermentacin. As se obtiene el queso y el yogur de la leche o el vino del mosto de uva.

 Segn la fuente de carbono que utilizan, los seres vivos se dividen en auttrofos, cuya principal fuente de carbono es el CO2 , y hetertrofos cuando su fuente de carbono es materia orgnica.

Por otra parte segn la fuente de energa, los seres vivos pueden ser fottrofos, cuya principal fuente de energa es la luz, y los organismos quimitrofos, cuya fuente de energa es un compuesto qumico que se oxida.

 Las bacterias quimiohetertrofas, utilizan un compuesto qumico como fuente de carbono, y a su vez, este mismo compuesto es la fuente de energa. La mayor parte de las bacterias cultivadas en laboratorios y las bacterias patgenas son de este grupo. Las bacterias quimioauttrofas, utilizan compuestos inorgnicos reducidos como fuente de energa y el CO2 como fuente de carbono. Como por ejemplo, Nitrobacter, Thiobacillus. Las bacterias fotoauttrofas, utilizan la luz como fuente de energa y el CO2 como fuente de carbono. Bacterias purpureas. Las bacterias fotohetertrofas, utilizan la luz como fuente de energa y biomolculas como fuente de carbono. Ejemplos como Rodospirillum y Cloroflexus.

 Las bacterias pueden utilizar un sustrato mineral (littrofas) u orgnico (organtrofas). Las bacterias patgenas que viven a expensas de la materia orgnica son quimioorgantrofas.

 Ciertas bacterias precisan de unas sustancias especficas: los factores de crecimiento (indispensables para el crecimiento de un organismo incapaz de llevar a cabo su sntesis). Las bacterias que precisan de factores de crecimiento se llaman

"auttrofas auxotrofas"

Las que pueden sintetizar todos sus metabolitos se llaman "prottrofas".

Otro criterio de clasificacin de bacterias hace referencia al consumo de oxgeno:

Bacterias aerobias: son aquellas que necesitan oxgeno para su metabolismo. Realizan la oxidacin de la materia orgnica en presencia de oxgeno molecular, es decir, realizan la respiracin celular. Por ejemplo Neisseria gonorrhoeae

Bacterias anaerobias: son aquellas que no utilizan oxgeno molecular en su actividad biolgica. La obtencin de energa la realizan mediante catabolismo fermentativo.
Se pueden distinguir dos grupos dentro de ellas:

 Bacterias anaerobias facultativas: Pueden vivir en ambientes con oxgeno o sin l. Por ejemplo: Brucella abortus Bacterias anaerobias estrictas: slo pueden sobrevivir en ambientes carentes de oxgeno. Como ejemplo, Clostridium tetani.

Medios de cultivo

 Es una preparacin lquida, slida o semislida utilizada para el crecimiento, transporte o mantenimiento de microorganismos
Si se desea utilizar para el crecimiento, debe contener todos los elementos esenciales para ese microorganismo en concreto. Los medios especiales son imprescindibles para aislar e identificar los microorganismos, evaluar la sensibilidad a antibiticos, analizar el agua y alimentos, industria, etc.

Nutrientes
1- Fuente de energa luz qumica

2- Macronutrientes H K O Mg C Na N 95% Ca S Fe P 3- Micronutrientes (elementos traza) Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W 4- Factores de crecimiento Vitaminas Purinas y pirimidinas Aminocidos

Macronutrientes
Fuente de carbono - CO2 - Compuestos orgnicos Carbohidratos, azcares, protenas, aminocidos, lpidos, cidos grasos, glicerol NH4, NO3-, N2 Protenas, peptonas, aa, bases pricas y pirimdicas, urea Fosfatos Esteres del cido fosfrico Sulfuros y sulfatos Aminocidos sulfurados, vitaminas

Fuente de nitrgeno

- Inorgnica - Orgnica

Fuente de fsforo Fuente de azufre

- Inorgnica - Orgnica - Inorgnica - Orgnica

Tipos nutricionales

Fuente de energa

Fuente de C

Ejemplos

Cianobacterias, Luz CO2 bacterias Fotoauttrofos prpuras y verdes Compuestos Algunas Luz orgnicos bacterias Fotohetertrofos prpuras y verdes Compuestos Algunas Eubacterias y Quimioauttrofos o inorgnicos CO2 ej.: H2, NH3, muchas Archaea littrofos NO2-, H2S La mayora Quimiohetertrofos Compuestos Compuestos Eubacterias, orgnicos orgnicos algunas Archaea o hetertrofos

Condiciones para el crecimiento microbiano Medios de cultivo

Nutrientes
agua fuente de energa

Crecimiento
temperatura
pH

fuentes de C, N, otros elementos

micronutrientes, factores de crecimiento

Condiciones de cultivo

luz

aireacin
actividad de agua potencial redox

Factores de crecimiento
Microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases pricas y pirimdicas

* aminocidos esenciales * vitaminas

ADN, ARN
sntesis proteica coenzimas

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su composicin qumica:
Sintticos o definidos Medios complejos

Medios definidos o sintticos

Para preparar los medios de cultivo definidos o sintticos (ej el medio Koser para la utilizacin del citrato) se utilizan componentes de alta pureza (CO2, a menudo incorporado como carbonato o bicarbonato como fuente de carbono, nitrato o amonio como fuente de nitrogeno, sulfato, fosfato y diversos minerales) por lo que se conoce su composicin qumica (cualitativa y cuantitativamente).

Medios indefinidos o complejos

Cuando no es decisivo conocer la composicin exacta del medio de cultivo se utilizan medios indefinidos, naturales o complejos, como el Agar nutritivo preparados con mezcla de nutrientes como peptonas, extracto de carne, extracto de levadura, agar, agua,etc

Caldo nutritivo Caldo de triptona y soja Agar Mac-Conkey

 Peptonas: hidrolizados de protenas obtenidos de la digestin proteoltica de parcial de carne, casena, harina de soja, gelatina u otras fuentes proteicas. Sirve como fuente de carbono, nitrgeno y energa. Agar: polmero sulfatado extrado de algas rojas compuesto principalmente por Dgalactosa, 3,6 -anhidro-Lgalactosa y cido Dglucurnico. La mayora de los microorganismos no pueden degradarlo.

Extracto de carne y levaduras: son medios lquidos de carne de vacuno y levadura de cerveza respectivamente. El extracto de carne contiene aminocidos, pptidos, nucletidos, cidos orgnicos vitaminas y minerales. El extracto de levadura es una fuente excelente de vitaminas del complejo B y compuestos de nitrgeno y carbono.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su naturaleza fsica (consistencia)
lquidos Slidos

Semi-slidos

 Los medios de cultivo slidos (como el TSA) contienen el agente solidificante (generalmente agar al 1.5-2%) . Los medios de cultivo lquidos (como el agua de peptona) no llevan adicionados agentes solidificantes. Los medios de cultivo semislidos (como el Agar de Hugh-Leiffson contienen el agente solidificante en menor concentracin que los slidos (<1.5%).

S. epidermidis en agar sangre

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su funcin
Comunes Enriquecidos

Selectivos
Inhibidores Selectivos

De transporte

Segn su uso en el laboratorio

1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales.
1) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores.

3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. 5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. 6) Medios de transporte: se usan cuando se transcurre cierto tiempo entre la toma de una muestra y su procesamiento. Incluye compuestos que aseguran la supervivencia de las clulas hasta que sean sembradas en un medio de cultivo adecuado.

Medios enriquecidos
Ejemplos: Agua peptonada alcalina favorece el desarrollo de Vibrio cholerae tolerante a pH alto e inhibe otros microorganismos presentes en la misma muestra. Caldo selenito contiene selenito de sodio que favorece la proliferacin de especies como Salmonella y Shigella pero inhibe otras enterobacterias. Caldo EC a 44.5C, una temperatura que favorece a Escherichia coli y no a otras bacterias.

Medios selectivos
Cambiando pH: para favorecer el desarrollo de Lactobacillus, un gnero implicado en la produccin de yogur, se puede agregar cido actico a los medios de cultivo para obtener un pH final de 5.4, totalmente inadecuado para muchas bacterias acompaantes. Altas concentraciones osmticas: en agar sal y manitol con una concentracin de NaCl de 7.5% muy pocas bacterias pueden crecer, salvo las que presenten una elevada tolerancia a NaCl, como Staphylococcus aureus. Agregando antispticos: colorantes como verde brillante, cristal violeta y eosina, se utilizan para inhibir bacterias Gram positivos mientras los Gram negativos desarrollan sin dificultad. Las sales biliares se usan con el mismo propsito. Agregando antibiticos: en Ingeniera Gentica es prctica rutinaria la inclusin de antibiticos (ampicilina, tetraciclina) en los medios de cultivo para poner en evidencia la presencia de bacterias genticamente manipuladas. Estas clulas son resistentes a uno o ms antibiticos y pueden desarrollar en un medio que los incluye, mientras las clulas acompaantes, sensibles a los antibiticos, no pueden crecer.

Medios diferenciales
Las pruebas bioqumicas son claros ejemplos de medios de cultivo diferenciales. El agar Mac Conkey se utiliza para diferenciar bacterias fermentadoras de lactosa como aquellas que no lo son. E. coli es capaz de metabolizar lactosa.

Medios de transporte
Todd-Hewitt se utiliza para bacterias Gram positivas y/o Gram negativas. Caldo peptonado. Solucin salina isotnica.

Condiciones de cultivo
An cuando las condiciones qumicas del medio de cultivo estn cubiertas, el crecimiento y desarrollo de los microorganismos no tendr lugar si se desconocen las siguientes condiciones fsicas:

TEMPERATURA: cada especie tiene su temperatura ptima de crecimiento. * mesfilos: 35-37C * psicrfilos: 15-20C * termfilos: 50-60C

 PRESIN OSMTICA: la mayora de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl. Las halfilas superiores. requieren concentraciones

 PRESENCIA DE OXGENO: segn sus requerimientos de O2 las bacterias se clasifican en: * Aerobios estrictas: requieren oxgeno para crecer. Metabolismo respiratorio. * Microaerfilos: necesitan bajas tensiones de O2 y una atm enriquecida en CO2. Pueden realizar respiracin aerobia. * Anaerobios obligados: el O2 les resulta txico. Crecen en medios muy reducidos (sin O2). Metabolismo fermentativo. * Anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de O2 (metabolismo fermentativo) y cuando son expuestos al O2 no mueren. * Anaerobios facultativos: pueden crecer en condiciones aerobias (metabolismo respiratorio) como anaerobias (metabolismo fermentativo).

 HUMEDAD: todas bacterias necesitan un ambiente mucho ms hmedo para su desarrollo que los hongos. En condiciones ambientales adversas, algunas especies producen estructuras de resistencia a la desecacin llamadas esporas que permanecen viables durante tiempo prolongado hasta que el ambiente sea propicio para la germinacin. Producen esporas los gneros Clostridium (ej. C. tetani,, C. botulinum), Bacillus (ej. B. cereus, B. subtilis), Sporosarcina, entre otros.

 LUZ: es importante para los microorganismos fotosintticos. pH: la mayora de las bacterias crece en medio neutro o ligeramente alcalino (77.6). Excepciones son los lactobacilos (pH: 5, acidfilos), Vibrio cholerae (pH 8.6,). Los hongos crecen a pH menor que 7.

Medios de cultivo para M.O. Gram negativos

Frmula de un medio tpico base para la fermentacin

Tripticasa 10g Cloruro de sodio 5g Rojo fenol 0,018g Agua destilada cbp 1L

+
CH (Glu) 0,5% a 1%

Agar Mc Conkey

Agar EMB

Agar SS
A. Klebsiella pneumoniae B. Escherichia coli Klebsiella pneumoniae & Escherichia coli are positive for acid production from fermentation of the carbohydrate(s) present. C: Salmonella sp. D: Proteus mirabilis Both Salmonella sp. & Proteus mirabilis product hydrogen sulfide. E: Pseudomona aeruginosa The Pseudomonas colonies are nearly colorless.

Agar XLD
E. coli Klebsiella

Salmonella

Agar Verde Brillante

Las colonias tpicas de la Salmonella typhi son marrones o negras, algunas veces con brillo metlico alrededor de las colonias. Algunas cepas producen colonias verdes con poco o ningn oscurecimiento.

Agar Sulfito de bismuto

Vibrio cholereae en TCBS 24 h a 37C

Agar TCBS

Vibrio parahaemolitycus en TCBS 24 h a 37C

Medios de cultivo para M.O. Gram positivos

Agar Gelosa Chocolate

Agar Sal y Manitol

Agar Gelosa Sangre