Laboratorio No.

4 Biotecnologa agrcola

AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATGENOS

Prof. Diana Crdenas Caro

Yenny Lorena Patio Ramrez. Cd.1610312 Luisana Cristina Villamizar Flrez. Cd.1610250 Ana Mara Arismendy Pabn.Cd.1610319

INTRODUCCION Para controlar una enfermedad es indispensable conocer su agente causal. De lo contrario cualquier estrategia de control podra ser infructuosa o eventualmente agravar el estado sanitario del cultivo. Si no se conoce el fitopatgeno (causante de la enfermedad en la planta) podra estarse utilizando un mecanismo inapropiado contra algo desconocido. Un correcto dignostico provee una cantidad considerable de informacin bsica para seleccionar mtodos acordes al organismo o condicin que esta causando el problema. Un dignostico preciso se inicia siempre con una muestra representativa y la observacin apropiado del entorno de la planta. En el laboratorio la muestra es sometida a diferentes anlisis en busca de evidencias, pistas o la identificacin definitiva del agente causal. En el procedimiento se incluyen exmenes macroscpicos, microscpicos, cultivo, pruebas bioqumicas, serlogicas, o patolgicas. En muchos casos los simples exmenes preliminares responden a la incgnita, pero a veces se requiere realizar procedimientos especficos para obtener el resultado preciso.

OBJETIVOS Objetivo general: Realizar el dignostico de enfermedades en plantas ocasionadas por hongos. Objetivos especficos: Conocer y describir los principales sntomas de enfermedades fngicas en las plantas. Realizar los procedimientos preliminares de identificacin del agente causal de la enfermedad vegetal. Proponer algunos controles para las enfermedades encontradas. Equipos, Materiales y otros Reactivos. Estudiante: Muestras de rganos de plantas con lesiones, deformaciones de tejido, decoloraciones, pudriciones as (llevar en cmara hmeda segn el tem 4 Metodologa),Frutos de naranja con pudricin y con moho verde, Frutos de fresa con pudricin y moho gris, Bulbos de cebolla con pudricin y moho blanco, Hojas y tallos de plantas de tomate con lesiones de color marrn y con moho del mismo color, Hojas de rosa con presencia de polvo blanco, Hojas de planta de tomate con lesiones redondeadas de color marrn, Hojas de plantas de papa con lesiones de color negro, Plntulas de hortalizas (repollo, brcoli, coliflor, apio, tomate o pimentn) con pudricin en el cuello del tallo y presencia de moho blanco.Bistur estril 1

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(hojilla), cinta transparente, guantes, cofia, tapabocas, bata, cuaderno de laboratorio, portaobjetos y cubreobjetos, alcohol de 90 . Laboratorio: Cajas de agar PDA, Hipoclorito de sodio y alcohol, Agua destilada, Azul de lactofenol, Incubadora, Microscopio y estereoscopio, Mechero METODOLOGA Tomar la muestra de la planta infectada y colocarla en un recipiente con algodn embebido en agua, taparlo con vinipel con el objeto de que se desarrolle el hongo y no se afecten sus estructuras. Observacin directa por presencia de signos en el tejido: Utilizando tincin simple con azul de lactofenol, observe las estructuras al microscopio describiendo el gnero al cual pertenece el agente causal de la enfermedad. Aislamiento del agente causal a partir de tejido enfermo: Realizar pequeos cortes de la zona de avance de la infeccin, donde el patgeno est en activo desarrollo. Los trozos son desinfectados superficialmente con alcohol de 70 y luego con una solucin de hipoclorito a 1% durante 2 minutos, enjuagados 2 veces con agua destilada estril y sembrados en cajas de Petri con medio de cultivo para hongos PDA. Se incuban a 28C por 4 a 7 das. Identificacin microscpica de los aislamientos: Realice montajes con tincin azul de lactofenol y observe al microscopio para describir las estructuras

que permitan identificar el gnero del hongo causante de la enfermedad. PROCEDIMIENTO Tomamos los frutos y cortamos con el bistur las partes infectadas. Remolacha, Papaya, Guanbana, Cacao. Realizamos la observacin directa por presencia de signos en el tejido, para ello identificamos diferentes estructuras en el microscopio. Finalmente realizamos el aislamiento del agente causal a partir de tejido enfermo, realizando la siembra en cajas de petri con el medio de cultivo PDA, el utilizado para el aislamiento de hongos. RESULTADOS OBSERVACIN DIRECTA POR PRESENCIA DE SIGNOS EN EL TEJIDO Observacin macroscpica Remolacha

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Caractersticas: Hongo blanco algodonoso. Presencia de un hongo negro, tambin de aspecto algodonoso. Papaya

Nombre del hongo: Rhizopus sp. Caractersticas: Hifa no septada o hialina. Color negro o verde pardo. Se observa el esporangiforo. Produce esporas sexuales y asexuales. Naranja

Caractersticas: Hongo gris de aspecto algodonoso, que presenta un hongo blanco en el centro de este. Cacao Nombre del digitatum. hongo: Penicillum

Caractersticas: Hifas septadas hialinas. Los conidiforos son simples o ramificados, que terminan en racimos de fiales en forma de botella. Conidias sueltas. Papaya Caractersticas: el tejido enfermo presenta hongo de color balnco Observacin microscpica: Remolacha Nombre del hongo: Clodosporium cladosporoides Carartersticas: Hifa no sepatada. Color verde oscuro. Se observa el esporangiforo. Se trata de conidios hialinos, multicelulares y con forma caracterstica de media luna.

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Cacao

Hongo blanco de textura algodonosa. Se observa el agente causal Rhizopus sp. Papaya

Nombre roreri

del

hongo:

Monilopthora

Caractersticas: Hifas septadas hialinas siempre phialides. Conidias sueltas, hialinos, pigmentados, globosos o cilndricos. AISLAMIENTO DEL AGENTE CAUSAL A PARTIR DE TEJIDO ENFERMO: OBSERVACIN MACROSCPICA: Remolacha

Caractersticas: Hongo Blanco algodonosa. Hongo blanco aterciopelada. Naranja de textura

de textura

Caractersticas: Se observan colonias de distintos tipos de hongos: Hongo verde claro de textura algodonosa. Hongo verde oscuro de textura algodonosa. Elevacin.

Se observa un hongo blanco de textura algodonosa que cubre toda la superficie del fruto. Cacao

Caractersticas 4

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Hongo verde oscuro de textura algodonosa. Hongo blanco de textura algodonosa que se extiende sobre la caja de petri. OBSERVACION MICROSCOPICA Remolacha

Caractersticas: se observa el agente causal de la pudricin en la naranja, Penicillium digitatum Cacao

Caractersticas: se observa el agente causal de la moniliasis, Monilopthora roreri Caractersticas: se observa claramente el agente causal de la enfermedad, Rhizopus sp. Papaya DISCUSIONES RESULTADOS DE LOS

Caractersticas: se observa el agente causal de la enfermedad, Clodosporium cladosporoides Naranja

En los resultados obtenidos en el laboratorio se observo que en las cajas sembradas con agar PDA las cuales tenan tejidos enfermos de cacao; se presento crecimiento de un hongo el cual se observa micelio de color blanco y manchas de color marrn en diferentes partes del fruto del cacao; despus de sacar las cajas de Petri con los tejidos enfermos se observo crecimiento del micelio de color blanco, la moniliasis se presenta principalmente en cultivos que no tengan buen ndice de humedad, sombra, estn sometidos a descensos bruscos de temperatura, mal drenaje del suelo y falta de poda. En la caja de Petri con tejidos enfermos de papaya se observo crecimiento del micelio de color blanco y textura algodonosa del hongo Cladosporium cladosporoides; este hongo generalmente se encuentra en el suelo, plantas pero casi 5

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no es nocivo al se humano; sus hifas se encuentran organizadas en pequeas cadenas que son ovaladas. En la caja de Petri con tejidos de remolacha se observo crecimiento del micelio de Rhizopus sp el cual era de verde claro y textura algodonosa; en su observacin microscpica se observa un condioforo llenos de pequeas espora; Rhizopus generalmente se encuentra en plantas marchitas o con cierto grado de pudricin. Las enfermedades en plantas con este hongo se caracterizan por presentar en la parte inferior del captulo, manchas acuosas irregulares, de tamao variable que posteriormente son de color marrn. La consistencia del receptculo se torna esponjosa y se cubre de micelio y esporangios de color gris negruzco o negro, fcilmente visibles en las partes infectadas.

se caracteriza por ser un hongo que se encuentra en la carne, el cuelo, plantas, textiles y pinturas; es un hongo que no son patgenos para los humanos salvo en algunos casos que es capaz de desencadenar reacciones alrgicas a algunas personas sensibles. Las esporas de Cladosporium se encuentran formando simples o ramificadas cadenas que pueden tener forma ovoide, oblonga o esfrica. En la observacin microscpica de tejidos enfermos de remolacha se observo la presencia del hongo Rhizopus sp; el cual se encuentra clasificado dentro de las clase de los Zygomicetes debido a que producen esporas asexuales no mviles contenidas en cuerpos fructferos denominados esporangios. Sexualmente producen esporas denominadas zigosporas. En la observacin microscpica de tejidos enfermos de cacao se encontro presencia del hongo Moniliopthera roreri; el cual se caracteriza por ser la plaga que ms ataca a cultivo de cacao, pero nicamente ataca a la mazorca del cacao es decir el fruto; sus conidias se encuentran distribuidas como en pequeas cadenas de forma ovalada. En la observacin micrscpica de tejidos de naranja se encontro la presencia del hongo Penicillium digitatum el cual se caracteriza por ser el hongo que mas coloniza frutas ctricas en especial la naranja en la cual se observa un moho verde; que es el micelio del hongo; microscpicamente se observaron las hifas septadas hialinas del hongo.

En la caja de petri que contenia tejidos enfermos de naranja se observo crecimiento del micelio del hongo Penicillium digitatum el cual era de color blanco y textura algodonosa; este hongo causa pudriciones en los ctricos sobre todo la naranja; este hongo crea un moho verde; este patgeno ataca a la ruta solo si esta presenta algn tipo de herida o lesin en su superficie, difcilmente se propaga por contacto; las fuentes de infeccin puede suelo, del aire, envases, etc. CONCLUSIONES En la realizacin de la prctica de laboratorio se observo microscpicamente la presencia de el hongo Cladosporium cladosporoides en tejidos enfermos de papaya y tomate de rbol; Cladosporium 6

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CUESTIONARIO 1. Cules sntomas reconoci en las muestras recolectadas? Pudricin blanda bacteriana. Tizn tardo Pudricin casera

Penicillum digitatum, es un hongo que crece muy rpido y es uno de los ms frecuentes que causa pudriciones en frutos. Ataca principalmente frutos de naranja, en los cuales causan lesiones graves. Cultivo que ataca: Naranja. Enfermedad: Moho verde de los citrus. Agente causal: Penicillum digitatum

2. Cules microorganismos encontr? Rhizopus oligosporus es un hongo de la familia de las Mucoraceae, ampliamente usado como levadura (cultivo arrancador) para la produccin casera de tempeh. Las esporas producen un micelio blanquecino, esponjoso, uniendo a los granos de soja y creando una "torta" comestible de granos de soja parcialmente fermentados. Rhizopus oligosporus produce un antibitico inhibidor de bacterias grampositivas, incluyendo a la potencialmente daina Staphylococcus aureus y a la benfica Bacillus subtilis (presente en natt), an despus de que Rhizopus se consuma. Algunas spp de Rhizopus son agentes oportunistas de cigomicosis humana. Pueden causar serias (y con frecuencia fatales) infecciones en humanos y en animales debido a su rpido crecimiento a relativamente altas temperaturas. Algunas especies son patgenos vegetales. Dos son usados en fermentacin: Rhizopus oligosporus, en la produccin de tempeh, un alimento fermentado derivado de grano de soja; R. oryzae se usa en la produccin de bebidas alcohlicas. Fruto que ataca: Meln

Fusarium sp, es un hongo que causa graves daos en diferentes cultivos, especialmente en cultivo de manzana, pera, aguacate, pltano y maiz.

Micelio y esporas de Fusarium sp. en fruto de zapallo.

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Conidios septados de Fusarium sp. Se trata de conidios hialinos, multicelulares y con forma caracterstica de "banana" Cultivo que ataca: maz. Enfermedad: Pudricin de la raz y tallo. Agente causal: Fusarim spp Cultivo que ataca: Pltano Enfermedad: Mal de Panam Agente causal: Fusarium oxisporum f. sp Acremonium sp, hongo de morfologa simple, largo. Hialino, erecto. Phialides derivaos de hifas. El gnero Acremonium incluye patgenos, que en pocas ocasiones son patgenos de humanos.

crema o rosado a marrn o negro. Hifas son hialinas y septadas, con frecuencia cada vez marrn oscuro con la edad y en holothallic transformacin para formar cadenas de 1 - 2-celled, de paredes gruesas, oscura pigmentada arthroconidia comnmente se llama chlamydoconidia. Estos arthroconidia en realidad representan la Scytalidium anamorfo de Aureobasidium y slo son de importancia secundaria en el reconocimiento de los miembros de este gnero. Conidias se producen sincrnicamente en densos grupos de cicatrices o indistinta de corto denticles en indiferenciada, hialino a sub-hifas hialinas. Conidias son hialinas, de paredes lisas, de un solo celled (ameroconidia), elipsoidales, pero de forma y dimensiones variables (8-12 x 46 um), a menudo con un indistinto hilo (una marca o cicatriz en el punto de fijacin). Rango de temperatura para el crecimiento 2-35C; ptimo 25C; mximo 35C (superior en algunos patgenos humanos aislados). Esta especie tiene dos variedades: A. pullulans var. pullulans, con una colonia que sigue siendo de color rosa, marrn claro, amarillo o por lo menos tres semanas, y A. pullulans var. melanogenum que pronto se convierte en negro o negro-verdoso debido a la oscuridad hifas que a menudo quedan al margen en celdas separadas.

Aureobasidium pullulans, Las colonias son de crecimiento rpido, suave, cubierto con viscosa masa de conidias,

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Cultivo que ataca. Yuca Enfermedad: Pudricin Agente causal: Aureobasidium pullulans, Helminthosporium sp, es un hongo que ataca diferentes tipos de cultivos en especial de guayabo (psidium guajaval)

Algunas especies tambin atacan el maiz causando tizn tardo de las hojas del maz. 3. Qu medidas de control recomendara para estas enfermedades? Para el moho verde de los ctricos: Adelantar la cosecha de la fruta, despojando el rbol completamente. La recoleccin de la fruta vieja y manchada antes de fumigar y recoger la fruta del suelo despus de la cosecha. Desinfectar el equipo, las cajas y los vehculos. Implementar un buen control en base a incremento de la poblacin de los enemigos naturales Para el Mal de Panam en el pltano:

Uso de material de plantacin libre de enfermedad. Plantar en suelos que no alberguen la enfermedad en ese momento, o en caso de existir antecedentes de plantas afectadas, no realizar movimientos de tierra en las zonas donde se hayan detectado plantas enfermas. Realizar enmiendas al suelo si fuese necesario, principalmente aportando calcio a unos niveles adecuados (entre 1 y 2 Kgrs/planta de yeso agrcola o tiosulfato clcico a los niveles adecuados). No deshijar aquellas plantas afectadas hasta el verano, para evitar el periodo de mxima incidencia y procurando que en esta labor se rompan las mnimas races, adems de desinfectar la barreta con leja despus de cada uso. Eliminar los tratamientos nematocidas, a no ser que exista un ataque severo de nemtodos corroborado por un anlisis previo. Aplicar productos estimulantes de los mecanismos de defensa de la planta. Optimizar todas las prcticas de cultivo, especialmente el riego y el abonado.

Para la pudricin de la raz y el tallo: La baja incidencia de la enfermedad no amerita control qumico; sin embargo, se recomienda el entresaque de las plantas enfermas.

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El control de Fusarium se ha logrado satisfactoriamente mediante resistencia gentica. Actualmente se cuenta con diversos materiales comerciales que poseen resistencia a las razas 1, 2 y 3. Usar suelos con buen drenaje, semilla y plntulas libres del patgeno. Rotar los terrenos por al menos cinco aos, solarizar el suelo y/o fumigarlo. Adicionar materia orgnica (estircol y pajas o residuos de plantas que liberen productos txicos para los patgenos como la col, lechuga, neem y otros), microorganismos o agentes de control biolgico (Trichoderma lignorum (Biotrol), Gilocladium, Fusarium, Penicillium, Funiculosum, Bacillus spp, la micorriza Glomus intraradices, entre otros), tener un buen balance de nutrientes (los cuales se pueden incrementar con el uso de extractos de algas marinas) y excelente raz, tratar la madera, hilo o metales, las charolas de poliuretano y la desinfeccin de los invernaderos, entre otras.

una micotoxina producida por patulina llamado por el hongo. Si tal se ven las manzanas para jugo entonces persiste la patulina en el zumo. Por lo tanto, las manzanas con la podredumbre parda no debe ser nunca utiliza el zumo de manzana. Acremonium sp: Ataca cultivos de importancia comercial como el meln. El cultivo del meln es una planta anual, originaria de Asia occidental y frica, se cultiva para el aprovechamiento de los frutos que poseen un sabor delicioso, delicado y apetecido, especialmente en la poca de mucho calor, presentan diferentes tipos de pulpa desde color naranja, verde y salmn. Igualmente ataca cultivos como el pltano, especialmente el hartn (Musa AAB) que es un cultivo de vital importancia en el sector del Zulia. Aureobasidium pullulans: Esta presente en cultivos como el tomate de rbol, sin embargo no causa daos en este sino que sirve como controlador El tomate de rbol es una baya aromtica de forma oboidal, punteada en su extremo inferior. BIBLIOGRAFA MOHO VERDE DE LOS CITRUS. Disponible en la Word Wide Weeb.

En qu otras plantas podran estar presentes? Penicillum digitatum: Ataca ctricos en general. Variedades como Penicillium expansum causa una pudricin blanda de manzanas. Podrido La parte de la manzana contiene

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www.viarural.com.ar/viarural.com.ar/agri cultura/aa-enfermedades/penicilliumdigitatum.htm - 7k MICOLOGIA UNIVERSIDAD CHAPINGO AGRICOLA. AUTNOMA

HELMINTHOSPORIUM SP Disponible en la Word Wide web: http://images.google.com.co/imgres? imgurl=http://student.bmj.com/issues/03/ 10/education/images/view_14.jpg&imgre furl=http://student.bmj.com/issues/03/10/ education/364.php&h=215&w=312&sz= 10&hl=es&start=1&um=1&tbnid=O_vnc EKcK0e0UM:&tbnh=81&tbnw=117&pre v=/images%3Fq%3DHelminthosporium %2Bsp%26um%3D1%26hl%3Des%26sa %3DN AYRES, Antonio Juliano. CONTROL DE LA ENFERMEDAD DE LOS CTRICOS EN BRASIL ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/006/x6732s/x 6732s13.pdf MAL DE PANAM: CONTROL Y PREVENCIN. RODRGUEZ SERRANO, Miguel. Disponible en la Word Wide Web: http://isarac.mforos.com/988674/555077 4-mal-de-panama-control-y-prevencionultimo-informe-cabildo/v

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