You are on page 1of 36

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS SOCPEMI 2012 En la actualidad la documentacin garantiza la fiabilidad de los resultados en el laboratorio. La exactitud y el valor clnico de las pruebas que el laboratorio realiza sobre la muestra clnica y sobre el microorganismo aislado dependen de la calidad de la muestra, del tipo de pruebas realizadas sobre la misma y de las tcnicas utilizadas para la realizacin de las pruebas. Para ello es necesario establecer normas que establezcan lo que es una prueba inadecuada y definir las pruebas adecuadas para tipos especficos de muestras. Asimismo, se deben especificar los criterios para realizar una prueba adecuada y proporcionar informacin para evitar las deficiencias en la solicitud de pruebas. La implementacin de este Manual en los laboratorios de Microbiologa Clnica ayudara que los ensayos se lleven a cabo con un alto grado de calidad y que se acompaen de una mejora en el servicio ofrecido al paciente as como de una mejora en la sistemtica de trabajo, que facilite la labor al personal del laboratorio. Siendo iniciativa de la Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa (SOCPEMI) , la de iniciar la estandarizacin de documentos como uso o consulta por parte de los que laboramos en los laboratorios de microbiologa de centros asistenciales de nuestro pas.
JUNTA DIRECTIVA:

Presidente: Vicepresidente: Tesorera: Secretario: Vocal: Vocal:

Lic.TM Mara del Carmen Quispe Manco Lic.TM Roberto Rojas Len Lic.TM Juana Mara Guzmn Ruz Lic.TM Luis Alvarado Ros Lic.TM Jos Mara Olivo Lpez Lic.TM Carlos Bentez Azabache

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL CULTIVO DE ORINA (UROCULTIVO)

AUTORES Javier Soto Pastrana Licenciado en Tecnologa Mdica Responsable Tcnico del Laboratorio de Microbiologa Integrante del Comit de Control de Infecciones Intrahospitalarias Hospital Nacional Docente Madre Nio San Bartolom Alfredo Guilln Oneeglio Mdico Cirujano Jefe de Microbiologa de la Clnica San Borja Profesor Asociado, Facultad de Tecnologa Mdica Universidad Nacional Federico Villarreal Profesor de Microbiologa Mdica Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas (UPC) Roberto Rojas Len Licenciado en Tecnologa Mdica Servicio de Microbiologa Instituto Nacional de Salud del Nio Profesor Asociado, Facultad de Tecnologa Mdica Universidad Nacional Federico Villarreal

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

SOCIEDAD CIENTIFICA PERUANA DE MICROBIOLOGIA 2012

Contenidos
1. Introduccin 2. Toma de muestra, transporte y manejo 3. Materiales 4. Procedimiento 5. Control de calidad 6. Reporte de resultados 7. Interpretacin 8. Limitaciones 9. Referencias Tablas Tabla 1 Frecuencia de agentes uropatgenos en el Hospital Nacional Docente San Bartolom. 2010, Lima Per. Tabla 2 Microbiota urinaria Tabla 3 Definiciones Tabla 4 Flujo de trabajo para el procesamiento de urocultivos Tabla 5 Reporte de aislamientos con pruebas mnimas Anexos Anexo 1 Determinacin de sustancias antibacterianas residuales en orina Anexo 2 Uso y calibracin de asas microbiolgicas Figuras Figura 1 Figura 2 Figura 3 Fotos Foto 1. Siembra por estras en biplaca de agar sangre y MacConkey de Escherichia coli. Foto 2. Siembra por estras en biplaca de agar sangre y MacConkey de Staphylococcus saprophyticus

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

I.

INTRODUCCIN

Las infecciones del tracto urinario (ITU) representan una de las primeras causas de consulta mdica y hospitalizaciones. Estudios epidemiolgicos por E. H. Kass (14) mostraron que los recuentos bacterianos mayores de 105 UFC/ml, de un cultivo puro de bacilos gram negativos en orina estaban asociados con infecciones agudas bacterianas del tracto urinario. Otros investigadores reportaron que tambin podan ser significativos los recuentos mayores de 102 UFC/ml en mujeres con disuria e ITU aguda (6, 7, 15). Para nios y pacientes cateterizados, los recuentos menores tambin pueden ser significativos (4, 16, 17); por lo que se debe realizar y reportar el recuento de colonias. La orina es un fluido corporal normalmente estril, sin embargo, es fcilmente contaminada con la microbiota del perineo, prstata, uretra o vagina al momento de obtener la muestra. El laboratorio de microbiologa debe proporcionar instrucciones detalladas para asegurar la apropiada toma de muestra, conservacin, rotulacin y transporte de la orina para su cultivo. Los agentes etiolgicos de ITU generalmente provienen de la propia microbiota intestinal del paciente, siendo Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Staphylococcus saprophyhticus y Enterococcus faecalis, los ms frecuentes en pacientes ambulatorios; y Enterobacter spp., Pseudomonas spp., Acinetobacter spp. y especies de Candida en pacientes hospitalizados. En la tabla 1, presentamos los agentes ms frecuentes en urocultivos en un hospital nacional, sin embargo, esto puede variar de establecimiento en establecimiento, segn la poblacin atendida. La tabla 2, es una lista de la microbiota frecuente en orina infectada y contaminada. Las definiciones utilizadas en urocultivos se encuentran en la tabla 3 y nos permitir interpretar mejor las solicitudes y hallazgos del urocultivo. Una de las funciones del microbilogo es determinar si el recuento de colonias es significativo y que el paciente necesita tratamiento, esto depender de diferentes factores, que estn asociados al cuadro clnico, la forma de obtencin de la muestra, tratamiento previo, entre otros. Dado de que el laboratorio generalmente solo conoce detalles como la edad, sexo y tipo de muestra del paciente, le es difcil determinar su significancia. La determinacin de la piuria, es un factor que ayuda a interpretar si el paciente tiene una ITU, pero es necesario estandarizar este procedimiento que tiene una baja reproducibilidad y es realizada e interpretada de manera diferente por los laboratorios clnicos. La finalidad de este manual es estandarizar el procedimiento para que sus resultados sean reproducibles y los mdicos tratantes interpreten adecuadamente sus hallazgos para lograr un tratamiento adecuado del paciente y evitar las recurrencias.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

FASE PREANALITICA
II. TOMA DE MUESTRA, TRANSPORTE Y MANEJO Es responsabilidad del Jefe del Laboratorio de Microbiologa, en la instruccin del personal de salud sobre la apropiada toma de muestra. A. Toma de muestra
1. Muestra obtenida del chorro medio

a. Preparacin en mujeres (1) Separar los labios mayores, lavar la vulva completamente desde adelante hacia atrs utilizando dos torundas de algodn embebidas en jabn, en forma sucesiva. Prestar especial atencin al meato uretral. No utilizar jabones con desinfectantes (benzalconio, hexaclorofeno u otro similar), porque una sola gota de residuo puede esterilizar la orina antes de que la muestra llegue al laboratorio. (2) Luego con dos torundas de algodn adicionales y agua o solucin salina estril lavar la vulva. Comentario: La recoleccin de muestras de orina de chorro medio debera ser evitada durante la menstruacin b. Preparacin en varones (1) no circuncidados. Retraer el prepucio y lavar el glande y pene completamente, de manera sucesiva con dos torundas embebidas con jabn, prestando especial atencin al meato uretral. Luego enjuague el glande con agua o solucin salina estril, sucesivamente con torundas de algodn adicionales. (2) circuncidados, no requieren mayor preparacin c. Recoleccin de la muestra. Despus de 1 o 2 segundos de iniciada la miccin, acercar el frasco estril en la direccin del chorro de orina para obtener la muestra, instruir al paciente que no debe parar y recomenzar la miccin del chorro medio durante la recoleccin. Comentario: Nunca obtener orina del bacn, del urinario o papagayo. No se observ diferencia en las tasas de contaminacin cuando un frasco nuevo no estril, se utiliz para la recoleccin de orina.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

2. Muestra obtenida de paciente con sonda Foley

a. Limpiar con algodn embebido en alcohol la porcin distal de la sonda b. Usando una aguja y jeringa, colectar la orina a travs de la sonda y colocar su contenido en un frasco estril. No obtener orina a partir de la bolsa colectora por que suele estar contaminada.
3. Muestra obtenida por catter vesical

a. Un catter vesical es insertado por un profesional de la salud, para obtener orina directamente de la vejiga. b. Este procedimiento debe ser realizado con una tcnica asptica, para evitar el riesgo de introducir microorganismos en la vejiga. c. Desechar los 15 a 30 ml iniciales de orina y enviar el chorro siguiente para el cultivo.
4. Muestra obtenida por puncin suprapbica

a. La obtencin de orina por aspiracin suprapbica directamente de la vejiga, es realizada por el mdico o personal de salud entrenado. Este mtodo es el preferido para nios, para pacientes en los cuales la interpretacin de los resultados de orina emitida es difcil, o cuando se sospechan bacterias anaerobias como causa de la infeccin. b. La vejiga debe estar llena y palpable antes de la aspiracin. c. Desinfectar la piel sobre la vejiga. d. Hacer una puncin a travs de la epidermis encima de la snfisis pubiana. e. Aspirar usando una aguja y jeringa. Coloque la muestra de orina en un recipiente estril antes de su envo al laboratorio. La jeringa unida a la aguja no debe ser aceptada por ser un agente punzocortante y representar un riesgo biolgico para el personal. f. B. Momento de la toma de muestra
1. Obtener la primera muestra de la maana siempre que sea posible.

Permitiendo que la orina permanezca en la vejiga durante toda la noche o por lo menos 4 h, de esta forma se disminuir el nmero de resultados falsos negativos.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

2. En pacientes con sintomatologa de ITU se pueden aceptar

muestra en cualquier momento del da, teniendo en cuenta que sus recuentos pueden ser menores de 105 UFC/ml.
3. No forzar la ingesta de lquidos para tratar de obtener la orina del

paciente, lo cual puede diluir la orina y disminuir el recuento de colonias.


4. Es preferible que el paciente no est tomando antibiticos al

momento de la toma de muestra, ya que los cultivos pueden resultar negativos. C. Transporte de la muestra
1. La orina debe ser transportada inmediatamente al laboratorio

despus de su obtencin, pudiendo permanecer a temperatura ambiente hasta 2 h, Si la orina no puede ser procesada se puede conservar hasta 24 h en refrigeracin despus de su obtencin. NO CONGELAR la muestra. D. Rotulacin de la muestra y solicitud enviada
1. Rotular el frasco de orina con informacin del paciente y la hora de

su obtencin. En el petitorio del laboratorio debe indicarse los siguientes datos mnimos: edad, sexo, tipo de muestra, tratamiento previo a las 24 h y otros datos de acuerdo a la poblacin en estudio. Comentario: Cuando se solicitan el cultivo para levaduras, inocular 10 l por placa y mantener los cultivos de 48 h para detectar levaduras con recuentos bajos. E. Criterios de rechazo
1. Solicite una nueva muestra de orina cuando la muestra ha sido

conservada por ms de 2 hrs a temperatura ambiente. 2. Toda muestra que no est adecuadamente rotulada ser rechazada. 3. Rechazar orinas de 24 hrs de coleccin. 4. Rechazar muestras de orina obtenidas con el mismo mtodo de coleccin dentro de las 48 hrs de recepcin de la primera muestra. Llamar a esta una muestra duplicada. 5. No se recomienda el uso de bolsas colectoras de orina en pacientes peditricos, por dificultades en su interpretacin, salvo cuando los resultados son negativos. 6. Las puntas de sonda Foley son inaceptables para cultivo. 7. Rechazar orina de la bolsa colectora de un paciente con sonda Foley. 8. Rechazar muestras que llegan en frascos abiertos y derramados.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

9. Rechazar muestras con solicitud de cultivo anaerbico, cuando no

son tomadas por puncin suprapbica. 10. Si una muestra mal tomadas, transportada, o manipulada no puede ser reemplazada, se debe colocar al final del reporte que la calidad de la muestra no era la adecuada y a quien se le inform. Generalmente, las muestras de orina de pacientes hospitalizados son fciles de obtener.

FASE ANALITICA
III. MATERIALES A. Medios de cultivo
1. Agar Sangre 2. Agar MacConkey 3. Agar CLED (Cistena Lactosa Deficiente en Electrolitos)

Comentario. Su uso permite la deteccin de colonias E. coli enanas, que pueden pasar desapercibida en agar MacConkey as tambin impide el velamiento producido por colonias de Proteus spp.
4. Agar chocolate: empleado para muestras de orina de rin o

muestras colectadas quirrgicamente por cistoscopia.


5. Medios cromognicos para urocultivo que permite la deteccin rpida

de los uropatgenos ms comunes y a su vez infecciones mixtas. B. Coloracin de Gram


1. Cristal violeta 2. Lugol de Gram 3. Alcohol acetona 4. Safranina

C. Suministros
1. Mtodo del asa

a. Use asas de nicrom o de plstico descartables estriles. Tamaos (1) Asa de 1 l para deteccin de recuento de colonias mayores de 1,000 UFC/ml. (2) Asa de 10 l para la deteccin de recuento de colonias entre 100 y 1,000 UFC/ml.
2. Mtodo de la micropipeta

a. Usar una micropipeta calibrada de 1 a 10 L

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

b. Puntas de pipetas estriles Comentario. Se recomienda utilizar micropipetas diferentes para cada volumen, porque ir de un extremo al otro del rango, tiende a descalibrar el instrumento. IV. PROCEDIMIENTO A. Mtodos microscpicos y otros mtodos directos El laboratorio debe determinar cul es el mejor mtodo para la deteccin de piuria, de acuerdo a la poblacin que atiende y para lo cual se tiene los varios procedimientos. La presencia de muchas clulas epiteliales escamosas y diferentes morfotipos microbianos sugieren contaminacin.
1. Examen directo

a. Colocar 10 l de orina bien mezclada sin centrifugar sobre una lmina portaobjetos, colocar un cubreobjetos y observar a 400x b. La presencia de ms de 5 leucocitos por campo es considerado como indicativo de piuria. Nota: este resultado tiene una especificidad de 90% para predecir una infeccin urinaria asociada a catter con ms de 105 UFC/mL, pero una sensibilidad de solo 37%.
2. Sedimento urinario

a. Centrifugar 10 ml de orina x 5 min. a 400 G, este procedimiento debe estar estandarizado para dar resultados confiables. b. La presencia de ms de 10 leucocitos por campo es indicativo de piuria Comentario: una limitacin del anlisis del sedimento urinario es ser operador dependiente. Comentario: estn disponibles sistemas comerciales basados en citometra de flujo entre otros, para la deteccin de piuria.
3. Coloracin de Gram:

a. Colocar 10 l de orina bien mezclada sin centrifugar sobre una lmina portaobjetos, y deje que se seque al aire sin extenderla. Fijar con metanol. b. Determinar el nmero de organismos por campo de aceite de inmersin. Un organismo observado a 1,000x correlaciona con un recuento de colonias de 105/ml de orina.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Comentario: La tincin de Gram es til para determinar rpidamente el tipo y el recuento de bacterias y clulas en la orina y debe ser realizada cuando sea solicitada. Para los pacientes hospitalizados, la coloracin de Gram de la orina puede ayudar a diagnosticar la causa de la sepsis antes que los cultivos de sangre den positivos B. Mtodos de cultivo
1. Usar biplacas con Agar Sangre y Agar MacConkey (ver foto 1) 2. Para las muestras de orina emitidas por chorro medio y los

obtenidos por catteres, cultivar 1 l de orina. Para las otras muestras cultivar 10 l. Comentario: El recuento de colonias se debe realizar en el agar sangre. Las dems placas deben ser estriadas de tal forma que se obtengan colonias aisladas para reducir al mnimo los resultados falsos negativos de los cultivos, debido a la inhibicin antimicrobiana. Si el recuento de colonias no puede ser realizado debido a una abrumadora propagacin de Proteus, una estimacin del recuento se puede hacer de las placas de aislamiento.
3. Mtodos de inoculacin para el recuento de colonias

a. Mtodo del asa calibrada (1) Usando un asa calibrada flameada y enfriada o una descartable, mantener el asa verticalmente, y sumergir solamente el aro por debajo de la superficie de la muestra de orina, sin centrifugar y bien mezclada (figura 1). (2) Llevar una asada de la orina bien mezclada sobre la placa de agar sangre haciendo una lnea recta a lo largo y por el centro del agar y estriar la orina mediante una serie de pases en ngulos de 90 a travs del inculo (mtodo solo para 1 l).Ver figura 2. (3) Para el aislamiento de colonias usar Agar MacConkey siguiendo el procedimiento anterior. (4) Cuando se utilizan 10 l de muestra tomar una asada de orina bien mezclada para inocular y estriar en cuadrantes las placas de agar, como se indica en la figura 3. b. Mtodo de la micropipeta

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

(1) Con una pipeta y punta estril, aspirar la cantidad necesaria de orina bien mezclada y colocarlo en un extremo de la placa, dejar que la gota escurra hacia el otro lado. (2) Estriar como en el caso anterior
4. Incubar en ambiente aerbico durante toda la noche de 35 a 37 C.

a. Realizar cultivos anaerbicos solamente cuando sea solicitado en aspiracin suprapbica, cuando se sospecha en una fstula vesiculoentrica y cuando se observen diferentes morfotipos bacterianos en el examen directo pero no crecen en cultivo aerbico. b. Si es conveniente, incubar el Agar Sangre en 5% de CO2 para mejorar el desarrollo de los organismos gram-positivos y bacterias dependientes de CO2.
5. Lectura de los medios de cultivo

a. Examinar los cultivos que han sido incubados durante toda la noche, pero hacer la lectura final a las 24 hrs. b. En los siguientes caso se debe incubar el cultivo hasta por 48 horas: (1) Muestra colectada por una tcnica invasiva, tal como aspiracin suprapbica o por cateterizacin. (2) Presencia de pequeas o escasas colonias que son apenas perceptibles. (3) El resultado del cultivo no correlacionan con los hallazgos de la coloracin de Gram o el cuadro clnico (por ejemplo, el paciente tiene piuria estril o sntomas sin un cultivo positivo). (4) El paciente est inmunocomprometido, incluyendo pacientes trasplantados. (5) Cultivos de levaduras o de hongos que sean solicitados o pacientes en riesgo de tener infeccin por hongos por ejemplo UCI neonatal. c. Para los cultivos positivos, examinar los medios de cultivo para la cuantificacin y tipo morfolgico de los organismos presentes. (1) Con un asa de 1 l, una colonia equivale a 1,000 UFC/ml.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

(2) Con un asa de 10 l, una colonia equivale a 100 UFC / ml. (3) Cuando las colonias son demasiado numerosos para contar. (a) El mximo recuento usando el asa de 1 l es >105 UFC/ ml. (b) El mximo recuento usando el asa de 10 l es >104 UFC/ml.
6. Estudio posterior de los cultivos positivos

a. Determine el recuento de colonias de cada morfotipo en el cultivo por separado examinando el agar sangre. b. Usando las tablas 3 y 4, determinar la extensin del estudio para cada organismo. c. Para las pruebas de identificacin mnima, consulte la Tabla 5. d. No identificar microbiota urogenital normal a nivel de gnero o de especie. e. Streptococcus agalactiae debe ser reportado de mujeres en edad frtil y de diabticos conocidos, independientemente del recuento. f. Debido a que E. coli representa el 80% de los patgenos en cultivos de orina, utilice mtodos de identificacin rpida para identificar esta especie. Vase Tabla 5. g. Para la identificacin final proceder de acuerdo a mtodos establecidos en el laboratorio. h. Realizar pruebas de susceptibilidad de acuerdo a mtodos establecidos en el laboratorio.
7. Mantenga las placas con cultivo positivo a temperatura ambiente

hasta 48 h, por si el mdico solicitara algn estudio adicional.


8. Mantenga las muestras de orina en refrigeracin por lo menos 24

horas para resolver cualquier problema con la muestra o resultados del cultivo. V. CONTROL DE CALIDAD A. Inspeccione las asas calibradas no descartables peridicamente para confirmar que siguen siendo redondas y estn libres de dobleces, abolladuras, corrosin, o material incinerado. En el anexo 2 estn los procedimientos de control de calidad de asas microbiolgicas.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

B. Si utiliza asas descartables, chequear el certificado de validacin de recuento del fabricante con cada lote. El proveedor debe suministrar una copia de este certificado con cada lote de asas que venda. C. Verificar que los medios de cultivo cumplan con la fecha de expiracin y los parmetros de control de calidad de cada laboratorio.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

FASE POSTANALITICA
VI. REPORTE DE RESULTADOS A. Informar los resultados del examen directo, coloracin Gram o sedimento. B. Resultados Negativos
1. Si no se observa crecimiento sobre todos los medios de cultivo,

reportar "Urocultivo negativo.


2. Si se cultivaron 1 l, reportar "Recuento: menor de 1,000 UFC/ml". 3. Si se cultivaron 10 l, reportar "Recuento: menor de 100 UFC/ml". 4. Si solamente se observa microbiota urogenital o de la piel, reportar

como cultivo negativo y el recuento ser de 10,000 UFC/ml de microbiota urogenital normal. C. Resultados Positivos
1. Como es especificado en la tabla 3, los cultivos mixtos son

reportados con el recuento en UFC/ml, seguido por mltiple morfotipo bacteriano presente; posible contaminacin; se sugiere nueva muestra, con pronto envo al laboratorio, si est clnicamente indicado.
2. Reportar el recuento de colonias de cada patgeno por separado,

seguida por la identificacin presuntiva, mnima, o definitiva y resultados de la prueba de susceptibilidad, como se indica en la tabla 3 y 4. D. Mantener copia de los resultados en sistema manual o electrnico. VII. INTERPRETACION A. El criterio de 105 UFC/ml para significancia puede ser aplicado a la mayora de las muestras enviados para cultivo. Sin embargo, lo siguiente ser cierto.
1. Un cultivo mixto en un paciente ambulatorio no complicado

probablemente indica contaminacin.


2. Recuentos

menores (<104/ml) de bacterias comnmente encontrados sobre la piel y genital interno y externo son considerados ser contaminantes, pero en circunstancias especiales, un recuento de Enterobacteriaceae de 102 UFC/ml o ms, pueden ser considerado significativo. <105 UFC/ml en muestras emitidas con presencia de disuria y sntomas de ITU puede ser significativo.

3. Recuento de colonias

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

B. No realizar pruebas de susceptibilidad antimicrobiana directamente de la muestra de orina. Estos mtodos no estn estandarizados. C. El urocultivo con removedor de antibiticos no est estandarizado ni validado. VIII. LIMITACIONES A. Mujeres con ITU no complicada para las cuales la etiologa microbiana est establecida (p. ej. E. coli o S. saprophyticus) pueden ser tratados empricamente con una sola dosis alta o una de curso corto (3 das) de agente antimicrobiano. El cultivo de orina para identificacin y prueba de susceptibilidad del organismo causante deben ser realizados en el caso donde hay fracaso en el tratamiento y recada, sospecha clnica de pielonefritis o infeccin recurrente. B. En casos de piuria estril, la coloracin Gram es importante. Si son vistos organismos pero no cultivables y el hallazgo persiste, puede ser indicado un cultivo anaerbico. C. Resultado falso negativo es debido, en parte, a sustancias interferentes, orina diluida, bajo pH e interpretacin subjetiva del criterio de trabajo adicional del cultivo. D. El sndrome uretral agudo debido a uretritis deben ser sospechado en mujeres sexualmente activas, quienes tienen disuria y piuria pero urocultivo negativo. Se debe realizar investigacin para detectar la presencia de N. gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis y Ureaplasma urealyticum. E. Disuria tambin ocurre en pacientes con vulvovaginitis y el hisopado vaginal debe ser enviado para la deteccin de vaginosis bacteriana, candidiasis y Trichomoniosis. F. En caso de piuria estril, debe sospecharse tambin de TBC renal. La muestra para cultivo debe ser la primera orina de la maana por tres das consecutivos. No se recomienda orina de 24 h.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

IX.

REFERENCIAS
1. Albers, A. C, Fletcher. R. D. 1983. Accuracy of calibrated-loop transfer. J Clin Microbiol.

18: 40-42
2. Andreu, A., J. Cacho, A. Coira y J. A. Lepe. 2011. Diagnostico microbiolgico de las

infecciones del tacto urinario. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 29:52-57


3. Cavagnaro F. Infeccin urinaria en la infancia. 2005. Rev Chil Infect. 22:161-168. 4. Comit

de Microbiologa Clnica. Sociedad Chilena de Infectologa. 2001. Recomendaciones para el diagnostico microbiolgico de la infeccin urinaria. Rev Chil Infect. 18:57-63.

5. Coulthard MG. et al. 2010. Redefining urinary tract infections by bacterial colony counts.

Pediatrics. 125:335-341.
6. De Cueto M. 2005. Diagnostico microbiolgico de la infeccin del tracto urinario.

Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 23 (Supl. 4): 9-14


7. Burd EM, Kehl KS. A critical Appraisal of the rol of the clinical microbiology laboratory in

the diagnosis of urinary tract infections. 2011. J Clin Microbiol. 49(9 Supl):S34-S38.
8. European urinalysis group. European urinalysis guidelines. Scand J Clin Lab Invest

2000; 60: 1 96.


9. Franz, M. Horl WH. Common errors in diagnosis and management of urinary tract

infection.I: Pathophysiology and diagnostic techniques. Nephrol. 1999. Dial Transplant. 14: 2746-2753.
10. Garcia L, (Ed.). Clinical Microbiological procedures handbook. 3rd Ed. 2010. American

Society for Microbiology.


11. Graham, J. C. Galloway A. The laboratory diagnosis of urinary tract infection. 2001. J.

Clin. Pathol. 54: 911-919.


12. Heldrich, F. J., M. A. Barone. E. Spiegler. 2000. UTI: diagnosis and evaluation in

syntomatic pediatric patients. Clin. Pediatr. (Philadelphia) 39:461-472


13. Herrera, D., P. Lopez, J. L. Duque., L. Perez, R. Golding, y C. Hernandez. 2010. Asas

metalicas calibradas para microbilogos: una alternativa de fabricacin nacional. Rev. Soc. Venezol. Microbiol. 30:37-42.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

14. Hooton TM, Stamm WE. Diagnosis and treatment of uncomplicated urinary tract

infection. Infect. Dis. Clin. N. Am. 1997. 11:551-581


15. Johnson JR, Stamm WE. Urinary tract infection in women: diagnosis and treatment.

1989. Ann. Intern. Med. 111:906-917.


16. Kass EH. Asyntomatic infections of the urinary tract. 1956. Trans. Assoc. Am. Phys.

69:56-64.
17. Lifshitz E, Kramer L. Outpatient urine culture: does collection technique matter?. 2000.

Arch. Intern. Med. 160: 2537-2540.


18. Lipsky, B. A., R. C. Ireton, S. D. Fihn, R. Hackett, and R. E. Berger. 1987. Diagnosis of

bateriuria in men: specimen collection and cultural interpretation. J. Infect. Dis. 155: 847854.
19. Stamm, W. E. , G. W. Counts, K. R. Running, S. Fihn, M. Turck, and K. K. Holmes.

1982. Diagnosis of coliform infection in acute dysuric women. N. Engl. J. Med. 307: 463468.
20. Stark, R. P., and D. G. Maki. l984. Bacteriuria in the catheterized patient: what

quantitative level of bacteriuria is relevant? N. Engl. J. Med. 311:560-564.


21. Tambyah, P. A, and D. G. Maki. 2000. Catheter-associated urinary tract infection is

rarely syrnptomatic: a prospective study of 1.497 catheterized patients. ,4 rch. Intern. Med.160:678 -682.
22. Tamtlyah, P. 4. and D. G. Maki. 2000. The relationship between pyuria and infection in

patients with indwelling urinary catheters: a prospective study of 761 patients. Arch. Intern. Med. 160:73-611
23. Washington JA II, White CM, Laganiere M, Smith LH. Detection of significant

bacteriuria by microscopic examination of urine. 1981. Lab. Med. J. 12:294-296.


24. Zhang, Q, Kwoh C, Attorri S, Clarridge JE III. Aerococcus urinae in urinary tract

infections. 2000. J Clin Microbiol. 38: 1703-1705.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Tabla 1. Frecuencia de agentes uro patgenos en el Hospital Nacional Docente San Bartolom. 2010, Lima Per.
Microorganismo Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Proteus mirabilis Staphylococcus saprophyticus Enterococcus faecalis Candida albicans Pseudomonas aeruginosa Candida sp. Estafilococos coagulasa negativa Enterobacter cloacae Streptococcus agalactiae n 832 77 44 41 35 23 21 16 16 12 7 (%) 72 7 4 4 3 2 2 1 1 1 1

Fuente: Laboratorio de Microbiologa, Hospital Nacional Docente San Bartolom.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Tabla 2 Microbiota urinaria


Ampliar el estudio si el cultivo es significativo (ver tabla 4) Reportar como microbiota urogenital.

Microbiota Urogenital

Microorganismo Estreptococo grupo viridans, Neisseria spp., difteroides, Lactobacillus spp., anaerobios Difteroides, Staphylococcus spp.

Piel

Reportar como microbiota urogenital o de piel a menos que est presente en cantidades >10 veces o ms que otra microbiota. Entonces tratar como uropatgena. ID hasta nivel de especie y ATB ID y ATB de S. aureus; ID de Staphylococcus saprophyticus con disco de novobiocina para mujeres en edad frtil; ATB generalmente no es necesario para S. saprophyticus u otro estafilococo coagulasanegativo. ID de C. albicans y Candida glabrata; ID de otras a nivel de especie solo si es solicitada ID, especialmente del grupo B en mujeres en edad frtil Comprobar VRE en pacientes hospitalizados; ID a nivel de especie y ATB solo en VRE y cuando sea solicitado ID slo si el nmero es 10 veces mayor que toda la otra microbiota ID solo si el nmero es 10 veces mayor que la de toda la otra microbiota (20) (ver Tabla 5 para pruebas para la identificacin) ID y ATB si el nmero es 10 veces mayor que la de toda la otra microbiota y 100,000 UFC.

Uropatgenos Bacilos Gram-negativos Staphylococcus

Levaduras

Estreptococo beta-hemoltico Enterococcus spp.

G. vaginalis

Aerococcus urinae

Corynebacterium (ureasa positivo)

Abreviaciones: ATB, prueba de susceptibilidad antimicrobiana; ID, identificacin; VRE, enterococo vancomicino resistente.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Tabla 3. Definiciones
Trmino Bacteriuria Cistitis Cistostoma Disuria Nefrostoma Prostatitis Definicin Presencia de bacteria uropatgena en la orina Inflamacin de la vejiga Procedimiento quirrgico de insertar un tubo directamente en la vejiga a travs de la regin suprapbica para drenar orina. Dolor o ardor al orinar, una comn queja en la presentacin de ITU Procedimiento quirrgico con colocacin directa de un tubo en el rin. Infeccin de la glndula prosttica; el paciente puede presentar fiebre o ser asintomtico. Infeccin aguda del rin y pelvis renal usualmente con fiebre, escalofros y dolor lumbar; crnico; puede ser sin sntomas. Recuento de leucocitos en orina de 8-10/l (o >5/campo de alto poder en un urianlisis convencional), lo cual correlaciona con un ndice de excrecin de Leucocitos >400,000 GB/h) Inflamacin de la uretra; puede ser causada por enfermedad sexualmente transmitida o uropatgenos. Pielonefritis acompaado de bacteriemia y shock sptico. Procedimiento quirrgico que conduce a una abertura externa en la pared abdominal, usualmente hecha con una asa intestinal, para la salida de la orina. Espcimen de orina colectado con una jeringa y aguja insertada directamente a travs de la piel en la vejiga. Espcimen colectado por la insercin de un catter en la uretra.

Pielonefritis Piuria

Uretritis Urosepsis Urostoma

Aspiracin suprapbica Orina de catter

ITU No complicada Infeccin principalmente en mujeres sanas, quienes no tienen anormalidades estructurales o funcionales del tracto urinario. ITU Complicada Infeccin en un paciente con anormalidad estructural y/o funcional del tracto urinario (por ej. lesin en mdula espinal, vejiga neurognica, obstruccin del tracto urinario, etc.) que reduce la eficacia de la terapia antimicrobiana. Infeccin con > 105 bacterias/ml sin sntomas de infeccin

ITU Asintomtica

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa


Tabla 4. Flujo de trabajo para el procesamiento de urocultivos Tipo de orina Inoculacin 1 uropatgeno Chorro medio; obtenidos de pacientes ambulatorios <65 aos de edad. Estriar 1 l en AS y MAC <10,000 UFC/ml, ID mnimab, reportar como cultivo negativo No. de aislamientos 2 uropatgenos Bacterias con < 100,000 CFU/ ml, ID minima 3 uropatgenos Reportar como cultivo negativo, indicar el recuento y en observaciones "Presencia de flora mixta". Sugerir remitir una nueva muestra si fuera pertinente. 1 o 2 das (incubacin mnima, 18 h) Tiempo para reporte final

10,000 UFC/ml (o 1,000 UFC de uropatgeno/ml en mujeres de 14-30 aos de edad), ID definitivac y ATB Sonda Foley, paciente hospitalizado o geritrico ( 65 aos de edad) Estriar 1 l en AS y MAC <10,000 UFC/ml, ID mnima, reportar como cultivo negativo

Bacterias con 100,000 UFC/ml, ID definitiva y ATB

Bacterias con < 100,000 CFU/ ml, ID minima

Si no hay presencia de leucocituria Reportar como cultivo negativo, indicar el recuento y en observaciones "Presencia de flora mixta". Sugerir remitir una nueva muestra si fuera pertinente. Si el paciente tiene leucocituria, o es sintomtico o febril, seguir con el protocolo de 2 uropatgenos. Bacterias con < 10,000 CFU/ ml, ID minima

2 o 3 das (incubacin mnima, 36 h)

10,000 UFC/ml, identificacin definitiva y ATB Catter vesical; paciente peditrico cateterizado, puncin suprapbic, cultivo de levaduras Estriar 10 l en AS y MAC ACH para situaciones especiales 100 A 1,000 UFC/ml con microbiota normal de urogenital o piel, ID mnimab, reportar como cultivo negativo 1,000 UFC/ml o cualquier cultivo puro de bajo recuento de uropatgeno, ID definitiva y ATB

Bacterias con 100,000 CFU/ml, ID definitiva y ATB Bacterias con < 1,000 CFU/ ml, ID minima

2 o 3 das (incubacin mnima 48 h)

Bacterias con 1,000 UFC/ml, ID definitiva y ATB

Bacterias con 10,000 UFC/ml, ID definitiva y ATB Contactar con el mdico para determinar si se sigue con el proceso trabajo

a) La presencia de microbiota de la piel o urogenital en una cantidad 10 veces menor a los uropatogenos, es considerada como contaminacin y no debe ser considerada para el flujo de b) Para la identificacin mnima ver el cuadro respectivo

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

c) En este grupo etareo, cualquier recuento de Streptococcus grupo B se debe reportar. Descartar la presencia de S. saprophyticus, que es importante a esta edad

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Tabla 5. Reporte de aislamientos con pruebas mnimas Reporte Escherichia coli (probable) Pruebas Mnimas Colonias secas, lactosa positiva en agar MacConkey, indol positivo y oxidasa negativa (del agar sangre). Colonias lactosa negativa en agar MacConkey, superficie opaca, oxidasa positiva, indol negativo y tiene olor caracterstico de Pseudomonas. Colonias mucosas, blancas, convexas; presencia de levaduras en montaje hmedo. Colonias doradas o amarillo plido, cocos gram positivos, catalasa positiva y coagulasa en lmina positiva. Pueden ser hemolticos en el agar sangre. Colonias blancas, cocos gram positivos, catalasa positiva y coagulasa en lmina negativa. Colonias amarillas, no beta hemolticas, identificar como Staphylococcus saprophyticus (probable). Cocos gram positivos en cadenas cortas, catalasa negativa, PYR positivo. Bilis esculina rpida positiva. Cocos gran positivos en parejas y cadenas largas, catalasa negativa. Alfa hemolticas, PYR negativo. Descartar Aerococcus urinae (presencia de ttradas y racimos en la coloracin de Gram) si el nmero es significativo. Colonias puntiformes, bacilos gram positivos, catalasa negativo, alfa hemolticos. Colonias puntiformes blancas, bacilos gram positivos, catalasa positiva. Descartar Corynebacterium

Pseudomonas aeruginosa (probable)

Candida sp.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus coagulasa negativa

Enterococcus sp.

Streptococcus grupo viridans

Lactobacillus spp.

Corynebacterium spp.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

urealyticum con una prueba rpida de ureasa si el nmero es significativo.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

ANEXO I DETERMINACIN DE SUSTANCIAS ANTIBACTERIANAS RESIDUALES EN ORINA I. Principio

Determinar la presencia de sustancias antibacterianas residuales en orina. Este procedimiento se aplica en todos los casos en los que se solicite urocultivo. II. Materiales III. Pinzas Discos de papel de filtro estriles de Papel filtro Whatman N 3 o similar Placa de Agar Mueller Hinton 100 x 15 mm Tubo con solucin salina estril x 2 mL Alicate sacabocados para 6 mm de dimetro o perforador Cepa de Bacillus subtilis ATCC 6633. Hacer una suspensin de Bacillus subtilis en un tubo con solucin salina estril que sea similar al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland Sembrar la placa de agar Mueller Hinton con la suspensin de bacterias de manera similar a un antibiograma. Dejar secar a temperatura ambiente aproximadamente 15 min. Tomar con la pinza un disco de papel filtro y colocarlo en la placa sembrada segn una plantilla numerada o colocando el nmero en la parte posterior de la placa. Colocar 10 L de orina con una asa calibrada o una micropipeta Se debe colocar el nmero correspondiente a la muestra. La placa ser incubada a 35C por 18 horas en aerobiosis.

Procedimiento

IV.

Interpretacin

Se buscar la presencia de un halo de inhibicin alrededor del disco con la orina. Cualquier dimetro de halo se considerar como prueba positiva. La ausencia de halo se considera como prueba negativa. V. VI. Reporte de resultados El resultado se informa como Actividad antimicrobiana: Positiva o Negativa Comentario

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa


El medio de cultivo debe estar a temperatura ambiente y la superficie debe estar seca. No se ha determinado cual es el efecto de la demora en colocar los discos sobre el medio de cultivo sembrado. Mantener la cepa de Bacillus subtilis en un tubo o placa de agar Mueller Hinton, todas la semanas hacer una resiembra para la prueba. No utilizar el cultivo de una placa donde se haya realizado la prueba.

VII.

Referencias

1. Maturin LJ. Bacteriological Analytical Manual, Inhibitory Substances in Milk, FDA, 2001. 2. Ghosh HK. Role of bacterial growth inhibitors in urine in diagnostic culture. J Clin Pathol. 1970. 23: 627-628.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

ANEXO 2 USO Y CALIBRACION DE ASAS MICROBIOLOGICAS I. PRINCIPIO

El volumen de fluido transferido por una asa calibrada depende del volumen y la forma del recipiente que contiene el lquido y la direccin y profundidad del asa cuando es introducido en el lquido. La variabilidad de los resultados es por la tensin superficial y la superficie humedecida del asa. Lquidos en recipientes con dimetros pequeos (<1 cm) tienen alta tensin superficial, el cual resulta en una menor transferencia, dado que la fuerza vidrio-liquido y plstico-liquido (fuerza adhesiva) son mayores que las fuerzas liquido-liquido (fuerza cohesiva). Cuando el alambre por encima del aro del asa es humedecido por la inmersin profunda en el lquido, exceso de lquido drena por el alambre y aumenta el volumen transferido. Las asas cuantitativas son usadas comnmente para realizar cultivos cuantitativos y verificar el inoculo de las pruebas de susceptibilidad. Las asas cuantitativas son menos exactas que las pipetas, estas todava son una excelente manera para realizar cultivos semicuantitativos o diluciones. Las asas cuantitativas son usadas cuando el error 20% es aceptable. Las asas son calibradas por mtodo colorimtrico o por mtodo de la broca. II. TIPOS DE ASAS A. El volumen es 1 o 10 l B. Las asas reusables son hechos de alambre, usualmente platino o nicrom C. Las asas descartables son hechos de plsticos III.MATERIALES Mtodo colorimtrico A. Agua destilada B. Colorante solucin de azul de Evans al 0.75% (CAE) i. Solucin Stock 1. Adicionar 0.75 g de CAE a 100 ml de agua. 2. Filtrar la solucin con papel filtro Whatman N 40 3. Guardar a temperatura ambiente en frasco oscuro por 6 meses C. Colorante Violeta de Genciana solucin comercial al 1 2 %, solucin stock (opcional) i. Soluciones de trabajo

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

1. Prepare diluciones del colorante (azul de Evans o violeta de genciana) en agua destilada para obtener las diluciones 1:500, 1:1000, 1:2000, y 1:4000, diluyendo 1 ml de la solucin stock del colorante en 49 ml de agua destilada. 2. Diluya 1 ml de la dilucin 1:50 en 9 ml de agua destilada. Esta es una dilucin 1:500. 3. Realizar diluciones seriada al doble empezando con 5 ml de la dilucin 1:500 y 5 ml de agua destilada, para preparar el resto de las diluciones. 4. Guardar las 4 diluciones hasta por 6 meses pero prepare nueva diluciones si la lectura de algunos de ellos difiere el 3% de la lectura previa. D. SUMINISTROS i. Cubetas de vidrio cuadradas con 1 cm de trayectoria de luz. Use la misma cubeta para todas las medidas. ii. Cristalera: varias tubos limpios de 15 ml de volumen, varias pipetas de 1 y 10 ml. iii. Espectrofotmetro de buena calidad con las siguientes especificaciones: lineal hasta 2.0 de unidades de absorbancia a 350 nm; ancho de banda espectral, a 2nm (348 a 352 nm); precisin de 0.001 /h; exactitud de longitud de onda seleccionada, 1 nm. IV. CONTROL DE CALIDAD A. Consideraciones generales i. Asas reusables 1. Inspeccionar las asas calibradas regularmente para confirmar que ellos permanecen redondas y estn libres de curvas, abolladuras, corrosin o material incinerado. 2. Verificar mensualmente las asas para garantizar que el volumen transferido es exacto. ii. Verificar el volumen transferido del asa descartable tras recibir un nuevo lote de asas. El desempeo satisfactorio de varios lotes, y el certificado del fabricante de un control de calidad hecho en casa elimina la necesidad de la calibracin de rutina. B. Mtodos para la calibracin de asas

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Procedimiento de calibracin por el mtodo colorimtrico i. Colocar el espectrofotmetro en modo absorbancia, usando una longitud de onda de 600 nm. ii. Calibrar a cero con agua destilada iii. Medir y anotar la absorbancia de cada dilucin del colorante (1:500, 1:1000, 1:2000, 1:4000) iv. Graficar la densidad ptica (eje vertical) contra cada una de las concentraciones de las diluciones (eje horizontal) en la hoja de trabajo (ver grafica ). Dibujar una sola lnea que ms se acerque a los cuatro puntos para construir la curva de calibracin. v. Usando el asa de 1l, transferir 10 asadas de la solucin colorante stock elegido a 10 ml de agua destilada. Despus mezclar completamente, medir y anotar la absorbancia de esta solucin. La absorbancia debera corresponder a la dilucin 1: 1000 en la curva de calibracin. vi. Preparar y evaluar tres soluciones de prueba adicionales para un total de cuatro lecturas. Anotar las lecturas en la hoja de trabajo y determinar el promedio. Luego calcular el porcentaje de inexactitud siguiendo las instrucciones de la hoja de trabajo. vii. Si el promedio de las lecturas es mayor de 20% de la dilucin de la solucin stock 1:1000, el asa es inexacta. Seguir con la accin correctiva. viii. Para calibrar el asa 10 l, transferir 10 asadas de la solucin stock del colorante elegido en 100 ml de agua destilada usando el asa de 10 l. Despus mezclar completamente, medir y anotar la absorbancia de esta solucin. Prepare y evale tres soluciones de prueba adicional para un total de cuatro lecturas. Luego calcule el porcentaje de inexactitud siguiendo las instrucciones de la hoja de trabajo. La lectura final debera ser la misma que la del asa de 1l, por ejemplo 20% de la dilucin 1:1000 de la solucin stock. C. Accin correctiva i. Si la carga del asa no cae dentro del lmite de tolerancia especificado, el asa puede ser descartado y reemplazado o reparado y calibrarlo nuevamente. ii. Reparar mediante inmersin en arena fina para remover depsitos, y limpiarlo humedeciendo con alcohol y luego flamearlo.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

iii. Las asas pueden ser retornados a su dimetro calibrado usando brocas de 1.5 mm de dimetro para asas de 1l y brocas de 4 mm de dimetro para asas de 10l. Las asas arregladas deben ser calibradas antes de ser puesto en servicio nuevamente. iv. Para las asas descartables inexactas, contactar con el proveedor para reemplazarlos. V. PROCEDIMIENTO PARA EL USO DEL ASA A. Para asas reusables, flamear e y enfriar antes de la primera y despus de cada transferencia. Use una nueva asa descartable no humedecida para cada transferencia. B. El lquido debera estar en un recipiente de boca ancha (dimetro >1 cm). C. Rotar la muestra en el recipiente para mezclar la suspensin bacteriana de manera uniforme. D. Mantener el asa verticalmente, e introducirlo el aro del asa justo por debajo de la superficie del lquido. Evitar alguna burbuja en el menisco del lquido. E. Verificar para asegurar que ninguna burbuja estn dentro del asa. F. Mover el asa hacia arriba y hacia abajo solamente. G. Transferir el contenido del asa a la placa contactando el lquido sobre la superficie del agar en la placa, hasta que el lquido ya no sea visible en el asa. Diseminar con el asa o, para una mayor exactitud, diseminar con una varilla doblada (asa de Drigalski). VI. LIMITACIONES Asas cuantitativa, tanto descartables y reusables, serian groseramente inexactas si burbujas estn presentes en la pelcula del lquido transferido. Evitar la formacin de burbujas cuando se agita el lquido. Inspeccionar cuidadosamente que el asa cargada no presente burbujas. Remover las burbujas por flameo (asas reusables), reemplazando (asas descartables) o por reinmersin (para cualquiera de las asas). VII. REFERENCIAS 1. Albers AC, Fletcher RD. 1983. Accuracy of calibrated-loop transfer. J Clin Microbiol. 18:40-42. 2. Clarridge JE, Pezzlo MT, Vosti KL. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of urinary tract infections. 1978. Weissfeld AS (Coordinating ed.). American Society for Microbiology, Washington, D. C.

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

HOJA DE TRABAJO 1 Calibracin colorimtrica de asas cuantitativa

Volumen del asa Fecha de puesto en uso Fabricante del asa

Fecha Iniciales del operador N de lote

Muestra N 1

Absorbancia

Clculos

Promedio menos la Absorbancia estndar diluida 1:1000 Divide (a) por la estndar de absorbancia 1:1000 % de inexactitud: multiplicar (b) por 100 El valor (c) debe ser 20%:

(a)

2 3 4

(b) (c) %

Es aceptable? SI / NO

Suma de las 4 lecturas Promedio (dividir entre 4)

Accin Correctiva: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ Revisado por: ___________________________________ Fecha: ___________________

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Figuras

Figura 1. Usando un asa calibrada flameada y enfriada o una descartable, mantener el asa verticalmente, y sumergir solamente el aro por debajo de la superficie de la muestra de orina, sin centrifugar y bien mezclada

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Figura 2. Llevar una asada de la orina bien mezclada sobre la placa de agar sangre haciendo una lnea recta a lo largo y por el centro del agar y estriar la orina mediante una serie de pases en ngulos de 90 a travs del inculo (mtodo solo para 1 l).

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

Figura 3. Cuando se utilizan 10 l de muestra tomar una asada de orina bien mezclada para inocular y estriar en cuadrantes las placas de agar, como se indica en la figura.

Foto 1. Siembra por estras en biplaca de agar sangre y MacConkey de Escherichia coli.

Foto 2. Siembra por estras en biplaca de agar sangre y MacConkey de Staphylococcus saprophyticus

Sociedad Cientfica Peruana de Microbiologa

EMPRESAS AUSPICIADORAS