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Aeromonas hydrophila (Falta citas de brotes). Nombre del microorganismo.

Aeromonas hydrophila. Bacteria anaerobia facultativa Gram-negativa, mvil. Crece fcilmente en agares de sangre y MacConkey. Es oxidasa positiva, indol positivo y ureasa negativa. Cerca del 90% de las cepas presenta hemlisis (Silva, 2011). Pertenece al gnero Aeromonas. Se localiza en ambientes de agua fresca y agua salobre (agua ms salada que la de ro pero menos salada que la de mar). Algunas cepas de A. hydrophila son capaces de causar gastroenteritis y otras infecciones en humanos (inmunocomprometidos). Pueden causar enfermedades en peces, anfibios y animales domsticos. Se piensa que las cepas causantes de enfermedad son slo una fraccin de la diversidad de cepas presentes en el ambiente. Sin embargo, a la fecha, resulta difcil identificar a las cepas de Aeromonas causantes de enfermedad, esto debido a la escasez de informacin sobre los genes de virulencia y mecanismos relacionados a patgenos (Janda & Abbott, 2010). El genoma completo de A. hydrophila fue secuenciado y reportado en 2006. Varios laboratorios se encuentran explorando determinada ubicacin gentica por posibles factores de virulencia (FDA, 2012).

Enfermedad y diagnstico en humanos (FDA, 2012).


Mortalidad. La tasa de mortalidad debida a gastritis es desconocida. La tasa de mortalidad por septicemia causada por Aeromonas puede ser del 33% o mayor. (Las infecciones no transmitidas por alimentos infecciones de piel o tejido suave causadas por Aeromonas, particularmente en personas inmunocomprometidas con condiciones tales como enfermas del hgado o con cncer- pueden resultar en tasas del 60% al 75%). Dosis infectiva. La dosis infectiva de este microorganismo es desconocida. Aunque ste microorganismo posee varios factores de virulencia que podran causar enfermedad en el humano, estudios de alimentacin realizados con adultos sanos y altas concentraciones del microorganismo (104 a 1010 clulas) no han provocado enfermedad. Sin embargo, se ha informado de un brote asociado con la ingesta de ensalada de camarones contaminados con A. hydrophila, con aproximadamente 107 UFC/g de alimento. Incubacin. El periodo de incubacin asociado con gastroenteritis es desconocido, aunque el comienzo de la diarrea parece ser mayor a 24 horas (Fig. 1).

Fig. 1 a) Cultivo de Aeromonas hydrophila en agar sangre de cordero 5% a las 48 horas de incubacin, b) Intensa (3 hemolisis alrededor de las colonias, c) Crecimiento en agar McConkey.

Enfermedad/complicaciones. La relacin entre A.hydrophila y la gastroenteritis en humano no ha sido aun firmemente establecida. La relacin entre el patgeno y la enfermedad en humanos bsicamente est sustentada en datos epidemiolgicos. En personas con sistema inmunolgico dbil o daado, la diarrea puede ser crnica y severa. En raras ocasiones el sndrome de disentera es severo. En personas con sistemas inmunes daados, A. hydrophila puede extenderse a lo largo del cuerpo y causar infecciones sistmicas. Ejemplos de estos riesgos incluyen personas con cirrosis o varios tipos de cncer y aquellos tratados con drogas inmunosupresoras o quienes se encuentran en tratamiento de quimioterapia. Adems de las infecciones transmitidas por los alimentos, Aeromonas spp. estn bien documentadas como agentes causantes de infecciones de heridas, por lo general relacionadas con el agua o actividades recreativas acuticas. Sntomas. Incluyen desde diarrea leve hasta disentera, incluyendo heces con sangre y moco, a sntomas de septicemia. Duracin. La gastroenteritis asociada con la forma ms leve de la enfermedad suele ser auto limitada, con diarrea acuosa presente de unos pocos das a unas semanas. Sin embargo, las personas con sndrome de disentera grave pueden tener sntomas por varias semanas. Va de entrada. Las infecciones en humanos son principalmente de adquisicin oral o cutnea, por consumo de alimentos y agua contaminados o por contacto con aguas contaminadas o animales colonizados (Silva, 2011). Ingestin de suficiente nmero de microorganismos en los alimentos (de origen animal, mariscos o procesados) o agua. (Como se ha indicado, la infeccin no resultante de la ingestin, sino de heridas abiertas, puede conducir a infecciones de los tejidos y septicemia) (Fig.2).

Va. Se cree que la enfermedad es causada por toxinas y otros factores de virulencia producidos por Aeromonas.

Fig. 2. Fuentes ambientales de las especies de Aeromonas que pueden dar lugar a una infeccin o colonizacin en seres humanos (Janda & Abbott, 2010).

Frecuencia de la enfermedad.
La frecuencia relativa de enfermedad por A. hydrophila en los Estados Unidos es desconocida ya que el estudio de su incidencia es reciente. La mayora de los casos se presentan como espordicos. La identificacin correcta de los agentes etiolgicos asociados con la infeccin gastrointestinal es importante, ya que tan slo en Mxico se reportaron 460, 543 casos nuevos de enfermedad diarreica aguda hasta la semana siete del 20031. El estudio realizado dentro de un ciclo de evaluacin de la calidad del Programa de Evaluacin de la Calidad entre Laboratorios (PACAL, ENCB) revel que en Mxico hay dificultades para identificar Aeromonas. En esta evaluacin participaron 228 laboratorios (IMSS, ISSSTE, SSA, PEMEX, estatales y particulares), a cada laboratorio participante se le envi una muestra de A. hyrophila para su identificacin y slo 98 (43%) de los laboratorios fueron evaluados positivamente con al menos la identificacin del gnero; mientras que el resto de los laboratorios generaron resultados errneos, ya que reportaron 45 gneros bacterianos diferentes entre los que destacaron: Vibrio,
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Secretara de Salud Mxico. Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiolgica. 2003; 19: 13-15.

Pseudomonas, Pasteurella y hubo varios informes de la familia Enterobacteriaceae. Este fracaso analtico refleja la gran dificultad que se tiene, a nivel de laboratorio clnico para la identificacin del gnero Aeromonas (Castro y cols., 2003).

Poblacin blanco.
Se cree que la poblacin en general es susceptible de contraer gastroenteritis por Aeromonas, aunque se observa con ms frecuencia en nios pequeos. Personas con sistemas inmunes dbiles o principios de cncer son ms susceptibles a infecciones ms graves o sistmicas (FDA, 2012).

Brotes.
En el lapso de enero a mayo de 2011 se identificaron 3 casos de bacteriemia por Aeromonas spp. en mujeres embarazadas de Myanmar que fueron atendidas en clnicas de migrantes refugiados en la frontera de Tailandia y Myanmar. En los tres casos, las mujeres reportaron fiebre, dolor de cabeza, dolor abdominal y sangrado vaginal (CDC, 2012).. En el caso A, una mujer, de 35 aos de edad, presentaba fiebre, dolor de cabeza, dolor abdominal y sangrado vaginal; adems de taquicardia y taquipnea. Una ecografa confirm que el feto no era viable y los productos de la concepcin fueron evacuados quirrgicamente. Se le administr amoxicilina y ciprofloxacina. La paciente se recuper y fue dada de alta seis das despus. El aislamiento a partir de prueba de sangre result positivo para A. hydrophila. En el caso B, una mujer de 25 aos de edad con 12 semanas de embarazo se present en el campo de refugiados de Maela. Tena un historial de 24 horas de fiebre, escalofros, vmito, diarrea y sangrado vaginal. Una ecografa revel slo productos de la concepcin. Recibi por va intravenosa ampicilina, gentamicina y metronidazol. Despus de la remocin quirrgica de dichos productos la condicin de la paciente continu en deterioro y muri al da siguiente. El aislamiento a partir de prueba de sangre result positivo para A. veronii. En el caso C, una mujer de 50 aos en la doceava semana de embarazo ingres a la clnica Wang Pha con historial de sangrado vaginal, presentaba choque febril. Los productos de la concepcin se removieron y recibi por va intravenosa ampicilina, gentamicina, metronidazol y ceftriaxona. La condicin de la paciente mejor en los cinco das posteriores. El aislamiento a partir de prueba de sangre result positivo para A. veronii y Streptococcus pyogenes.

Alimentos asociados.
Frecuentemente se encuentra A. hydrophila se ha encontrado en pescados y mariscos. El germen muestra una amplia prevalencia en casi todos los alimentos crudos, sean de origen animal o vegetal. Aunque se han encontrado muestras de Aeromonas en agua bebible, la relacin de estas con casos de gastroenteritis es an desconocida. Sin embargo, la exposicin crnica a aguas contaminadas con Aeromonas por parte de personas inmunocomprometidas, podra resultar potencialmente en enfermedades invasivas, tales como septicemia2.

Anlisis de alimentos.
A. hydrophila se puede recuperar de la mayora de los alimentos por inoculacin directa sobre un medio slido suplementado con antibiticos tales como ampicilina (para as reducir el crecimiento de organismos competitivos) y con almidn como nica fuente de carbohidratos. Se han desarrollado ensayos basados en PCR para detectar A. hydrophila patgenas y diferenciar cepas no patgenas de aislados patgenos (FDA, 2012). A. hydrophila se puede cultivar a partir de las heces o de muestras de sangre mediante la siembra de organismos en un medio de agar con sangre de oveja y ampicilina. La identificacin de las especies se confirma por una serie de exmenes bioqumicos. La capacidad del microorganismo para producir las enterotoxinas que se cree causan los sntomas de gastroenteritis se puede confirmar mediante ensayos de cultivo de tejidos (USDA, 1998). Aislamiento e identificacin (USDA, 1998) El siguiente mtodo describe los procedimientos para el aislamiento y posterior identificacin de Aeromonas hydrophila. 1. Aislamiento/ Identificacin. A. Equipo Incubadora, esttica 28 +/- 1C. Licuadora tipo Osterizer con cuchillas estriles y adaptadores para uso con frascos, o StomacherTM con bolsas estriles StomacherTM. Varillas de vidrio curvas estriles. B. Reactivos Diluyente del fostato de Butterfield (BPD). Aceite mineral estril. N, N-dimetil-p-fenilendiamina monohidrocloruro (1% solucin acuosa).

Leclerc, H., L. Schwartzbrod, and E. Dei-Cas. 2002. Microbial agents associated with waterborne diseases. Crit. Rev. Microbiol. 28:371409.

C. Medios Caldo de Soya Tricapsena adicionado con 10/ml de ampicilina (TSBA). Agar Almidn Ampicilina (SA). Agar Triple Azcar Hierro (TSI). Agar Nutriente. Caldo de fermentacin de manitol con indicador de Andrade. Caldo Arginina Descarboxilasa (Moeller). Caldo Ornitina Descarboxilasa (Moeller). Caldo de base Descarboxilasa (Moeller). Caldo de fermentacin de Glucosa con indicador de Andrade. Agar bilis esculina. D. Procedimiento (aislamiento). Se pueden realizar diluciones seriadas de muestras de carne y dispersarlas directamente en superficie sobre agar SA. Sin embargo la mejor recuperacin de Aeromonas se logra utilizando procedimientos de enriquecimiento, en particular cuando las aeromonas presentan dao por congelacin o son bajas en nmero. 1. Mezclar 25g de carne en 225ml de TSBA en una licuadora o StomacherTM durante 2 minutos. Incubar a 28C durante 18 a 24 horas. 2. Despus de la incubacin preparar soluciones seriadas de los cultivos de enriquecimiento en BPD. Transferir 0.1ml de las diluciones 10-4 a 10-6 sobre la superficie de las placas de SA. Separar uniformemente el inculo con barras de vidrio dobladas estriles. Las placas deben estar libres de humedad en la superficie. Incubar las placas a 28C durante 18 a 24 horas. 3. Elegir 3 colonias tpicas por muestra de las placas con agar SA y colocar en placas con agar TSI. Incubar toda una noche a 28C. Las colonias de Aeromonas generalmente tienen de 3 a 5mm de dimetro, con un color amarillo a color miel sobre agar SA. E. Procedimiento (identificacin). 1. Leer las reacciones de TSI. Las reacciones de Aeromonas en TSI son: extremo acido, gradiente cido o alcalino, H2S negativo, produccin de gas positiva o negativa. 2. Realizar la prueba de oxidasa. Aadir unas gotas de la solucin de N,N-dimetil-pfenilendiamina monohidrocloruro (preparada fresca todos los das) al agar nutriente con el cultivo en crecimiento. Las colonias oxidasa positivas desarrollan un color rosado que adquiere sucesivamente un rojo granate, oscuro y negro en 10 a 30 minutos. Todas las Aeromonas son fermentadoras y oxidasa positivas. 3. Transferir todos los fermentadores oxidasa positivas del agar TSI al siguiente medio para la confirmacin bioqumica: caldo de fermentacin de manitol, caldo arginina descarboxilasa, caldo ornitina descarboxilasa, caldo de fermentacin de

glucosa. Inocular en agar bilis esculina. Despus de la inoculacin, cubrir el medio descarboxilasa con aceite mineral estril e incubar a 28C por 48 horas. Incubar el remanente de los medios de confirmacin a 28C por 24 horas. 4. Registrar las caractersticas bioqumicas de cada aislado. Todas las Aermonas producen cido a partir del manitol y son arginina positivas, ornitina negativas. A. hydrophila puede diferir de acuerdo a ciertas caractersticas bioqumicas (Tabla 1). 5. Los aislados sospechosos de ser Aeromonas deben ser analizados con la prueba de produccin de hemolisina.
Tabla 1. Caractersticas bioqumicas para identificacin de Aeromonas

Test (Sustrato) Gas a partir de glucosa Hidrlisis de esculina

A. hydrophila + +

A. sobria + -

A. caviae +

NOTA. La hidrlisis de esculina imparte un color caf oscuro al medio.

Tabla 2. Identificacin de las especies del gnero Aeromonas consideradas de importancia clnica.

Medidas preventivas.
Los fundamentos de la prevencin de las enteritis causadas por A. hydrophila se encuentran en el reconocimiento de las vas de contaminacin (incluida la independiente de la materia fecal), su

potencial psicrtrofo, su termosensibilidad en los alimentos y la hipersusceptibilidad de algunos grupos de poblacin. Ello implica una desinfeccin adecuada y una coccin completa de estos productos. El control de la contaminacin primaria es poco productivo debido a la amplia ubicuidad del germen. Sin embargo, en los alimentos que ya no recibirn tratamiento trmico previo al consumo, es necesario evitar la recontaminacin. Tales acciones tienen mayor significado en aquellos que sern sometidos a refrigeracin. La medida de un recalentamiento completo de los sobrantes antes de su consumo debe tambin ser satisfecha con rigor. Este sealamiento es importante ante la eventual recontaminacin y desarrollo de A. hydrophila a baja temperatura. La destruccin del microorganismo proporciona amplio margen de seguridad, ya que no se trata de una bacteria que produzca alguna toxina temoestable (Fernndez, 2000). Teniendo presente que incluso las cepas de algunas aeronnadas (incluidas las enterotoxignicas), son psicrtrofas, es evidente que la refrigeracin no es una medida suficiente por s misma para prevenir su desarrollo en los alimentos. El germen no constituye un problema en alimentos que contienen ms de 3-3.5% de NaCl en la fase acuosa, o pH inferior a 6.0 conservados en refrigeracin (Fernndez, 2000). La rigidez de las medidas anotadas debe observarse en particular ante individuos especialmente sensibles (Fernndez, 2000): Reservorio natural: ambiente acutico. No habitante normal del conducto intestinal humano. No sobrevive la coccin ordinaria. Sobrevive en alimentos congelados. Halotolerante. Mayor incidencia de casos humanos en verano. Relevancia relativa de acciones preventivas: a) Evitar la contaminacin de origen: + b) Evitar la contaminacin cruzada: +++ c) Inactivacin en el alimento: ++++ d) No consumo de alimentos crudos (individuos hipersensibles): +++

Aeromonas spp. es susceptible a nitrofuranos, azitromicina, cefalosporinas de 3 y 4 generacin, cabapenmicos, quinolonas, tetraciclinas, y usualmente resistente a ampicilina (Silva, 2011).

Bibliografa.
Fernndez , E. 2000. Microbiologa e Inocuidad de los Alimentos. Ed. Universidad Autnoma de Quertaro. p. 133-141. Janda, J.; Abbott, S. 2010. The Genus Aeromonas: Taxonomy, Pathogenicity, and Infection. Clinical Microbiology Reviews. 23: 45-47. FDA. 2012. Bad Bug Book. Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins. 2nd Edition. p.53-55.

Castro, G. y cols. 2003. La identificacin gentica de Aeromonas, una realidad y una necesidad para la Microbiologa Diagnsitca. J. Bioquimia. Mxico D.F. 28: 13-16. Silva, O. F. 2011. Retrato Microbiolgico Aeromonas spp. Rev Chil Infect 2011; 28 (2): 157-158. United States Department of Agriculture. 1998. Microbiology Laboratory Guidebook. Chapter 7. Isolation and identification of Aeromonas species from meat and poultry products. Suitable in: http://www.fsis.usda.gov/Science/Microbiological_Lab_Guidebook/index.asp Centers of Disease Control and Prevention. 2012. Emerging Infectious Diseases. Aeromonas spp. Bacteremia in Pregnant Women, Thailand-Myanmar. Suitable in: http://wwwnc.cdc.gov/eid/article/18/9/pdfs/11-1592.pdf