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Tcnicas Instrumentales para la Determinacin de Capsaicinoides

Marco Fidel Mosquera Ramrez Asesorado por: G.I.P.E.L.
Universidad del Cauca Facultad De Ciencias Naturales, Exactas y De La Educacin Departamento de Qumica Qumica

OBJETIVOS
Conocer las tcnicas instrumentales documentadas hasta la actualidad para la determinacin de Capsaicinoides

Comparar tericamente los fundamentos relevantes en la deteccin de Capsaicinoides en sistemas cromatograficos

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CONTENIDO
1 2 INTRODUCCIN TCNICAS INSTRUMENTALES

3
4 5

COMPARACIONES
CONCLUSIONES BIBLIOGRAFA

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ORIGEN

INTRODUCCIN

Genero: Capsicum

Griego: Kapso Picar

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Latn: Capsa Caja

5

GENERALIDADES

INTRODUCCIN

Al igual que cualquier alimento, hay una gama de compuestos qumicos que le confieren sus caractersticas propias.

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COMPOSICIN
Capsicum

INTRODUCCIN

Capsaicinoides:

Capsinoides (CLS):

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CAPSAICINOIDES

INTRODUCCIN

fenilalquilamidas

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CAPSAICINOIDES

INTRODUCCIN

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DISTRIBUCIN

INTRODUCCIN

<1.0% w/w

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10

DISTRIBUCIN

INTRODUCCIN

90%

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11

EFECTOS Y APLICACIONES
INTRODUCCIN

1. Antioxidantes

2. Quimiopreventivos y anti cancergenos

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EFECTOS Y APLICACIONES
INTRODUCCIN

3. Anti-inflamatorios

4. Anti-microbiano

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13

EFECTOS Y APLICACIONES
INTRODUCCIN

5. Quema Grasa!!!

6. Armas No Letales

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IMPORTANCIA

INTRODUCCIN

Todos

Uso
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CAP.
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TCNICAS ESTUDIADAS

CG

Cromatogrficas Tcnicas Instrumentales

CLAR

Electroqumicas
VOC
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CROMATOGRAFA DE GASES (CG)

TCNICAS INSTRUMENTALES

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PRE-TRATAMIENTO
PMDS/DVB

TCNICAS INSTRUMENTALES

Jeringuillas de Micro Extraccin en Fase Solida

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CROMATOGRAFA DE GASES (CG)

TCNICAS INSTRUMENTALES

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DETECCIN

TCNICAS INSTRUMENTALES

CG

Espectroscopia de Masas (EM)

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FRAGMENTACIN

TCNICAS INSTRUMENTALES

Fragmentograma de masas de la Capsaicina

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CROMATOGRAMAS CG-EM

TCNICAS INSTRUMENTALES

Cromatograma Muestras de Chiles

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CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (CLAR)

TCNICAS INSTRUMENTALES

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CLAR-DETECTORES
UV

TCNICAS INSTRUMENTALES

DEQ

DAD

EM
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ESPECTROFOTOMTRICOS
TCNICAS INSTRUMENTALES
0,6

Unidades De Absorbancia (uA)

0,5

Espectro UV de 100ppm de Capsaicina

0,4

0,3

0,2

0,1

Grupo Cromforo

0,0 240 260 280 300 320 340

Longitud De Onda (nm)

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CLAR-DETECTORES
UV

TCNICAS INSTRUMENTALES

DEQ

DAD

EM
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ELECTROQUMICAMENTE

TCNICAS INSTRUMENTALES

Grupo Electroactivo
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VOLTAMPEROMETRA CCLICA (VOC)

TCNICAS INSTRUMENTALES

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CELDA ELECTROQUMICA DE TRES ELECTRODOS

TCNICAS INSTRUMENTALES

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COMPORTAMIENTO ELECTROQUMICO
1

TCNICAS INSTRUMENTALES

I
1 2 3

R
4 3 4
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30

DE VOC AL DETECTOR
E Q

TCNICAS INSTRUMENTALES

I
Proceso EQE

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DETECTOR ELECTROQUMICO (DEQ)

TCNICAS INSTRUMENTALES

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32

CLAR-DETECTORES
UV

TCNICAS INSTRUMENTALES

DEQ

DAD

EM
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CLAR-UV

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Cromatograma Oleorresina del Chile (Capsicum frutescens)

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CLAR-EM

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Cromatograma Oleorresina de Semillas de Chile (Capsicum frutescens)

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35

UV Vs. DEQ!!!
60

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Cromatograma de 100ppm Patrn CAP

40

Respuesta del Detector

20

UV 280nm DEQ +450mV

-20 0 2 4 6 8 10 12 14

Tiempo De Retencion (min)

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36

UV Vs. DEQ!!!
600

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Cromatograma de 100ppm Oleorresina De Chile

CAP

400

Respuesta del Detector (uA)

200

DHC UV 280nm NDH

-200

-400

-600 0 20 40 60 80 100 120

DEQ +450mV
140

Tiempo De retencion (min)

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PARMETROS DE SENSIBILIDAD

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Cantidad mnima Detectada con fiabilidad por un mtodo analtico

Cantidad mnima Cuantificada con fiabilidad por un mtodo analtico

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LIMITES PARA CG Y CLAR

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Tabla 01. Parmetros para Tcnicas Cromatogrficas

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LIMITES PARA VOC

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Tabla 02. Parmetros para Tcnicas Electroqumicas

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COMPARACIN DE TCNICAS

COMPARACIN INSTRUMENTAL

Tabla 03. Parmetros para Todas las tcnicas analizadas

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41

CONCLUSIONES

42

CONCLUSIONES

43

BIBLIOGRAFA
Electroqumica : 1. Roohollah Torabi Kachoosangi, Gregory G. Wildgoose and Richard G. Compton Carbon nanotube-based electrochemical sensors for quantifying the heat of chilli peppers: the adsorptive stripping voltammetric determination of capsaicin Analyst, 2008, 133, 888895 2. Yavuz Yardim. Sensitive Detection of Capsaicin by Adsorptive Stripping Voltammetry at a Boron-Doped Diamond Electrode in the Presence of Sodium Dodecylsulfate Electroanalysis 2011, 23, No. 10, 2491 2497 3. Veronika Supalkova, Ales Horna, Helena Stavelikova, Ladislav Havel. Study of Capsaicin Content in Various Parts of Pepper Fruit by Liquid Chromatography with Electrochemical Detection Acta Chim. Slov. 2007, 54, 5559 4. Yu Ya, Leixing Mo, Tianshun Wang. Highly sensitive determination of capsaicin using a carbon paste electrode modied with amino-functionalized mesoporous silica Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2012) Articulo Aceptado para publicacin
44

BIBLIOGRAFA
Tcnicas Cromatogrficas: 1. Gerardo F. Barbero, Miguel Palma, Carmelo G. Barroso Determination Of Capsaicinoids In Peppers By Microwave Assisted Extractionhigh-performance Liquid Chromatography With uorescence Detection. Analytica Chimica Acta 578 (2006) 227233 2. Gerardo F. Barbero, Miguel Palma, Carmelo G. Barroso Fast Determination Of Capsaicinoids From Peppers By High-performance Liquid Chromatography Using A Reversed Phase Monolithic Column Food Chemistry 107 (2008) 12761282 3. Irena Perucka, Wies Aw Oleszek Extraction And Determination Of Capsaicinoids In Fruit Of Hot Pepper Capsicum Annuum L. By Spectrophotometry And High-performance Liquid Chromatography Food Chemistry 71 (2000) 287291 4. A.L. Kurian And A.N. STARKS HPLC Analysis Of Capsaicinoids Extracted From Whole Orange Habaero Chili Peppers Journal Of Food Science
45

BIBLIOGRAFA
5. Ana Garce S-claver, Maria S. Arnedo-andre S, Javier Abadia. Determination Of Capsaicin And Dihydrocapsaicin In Capsicum Fruits By Liquid Chromatography-electrospray/Time-of-flight Mass Spectrometry J. Agric. Food Chem., Vol. 54, No. 25, 2006 6. Jochen Pauwels, Ward Dautry, Larissa Van Den Bossche. Optimization And Validation Of Liquid Chromatography And Headspace-gas Chromatography Based Methods For The Quantitative Determination Of Capsaicinoids, Salicylic Acid, Glycol Monosalicylate, Methyl Salicylate, Ethyl Salicylate, Camphor And L-menthol In A Topical Formulation Journal of pharmaceutical and biomedical analysis 60 (2012) 5158 7. Araceli Pea-alvarez, Erika Ramrez-maya, Lus ngel Alvarado-surez. Analysis Of Capsaicin And Dihydrocapsaicin In Peppers And Pepper Sauces By Solid Phase Microextractiongas Chromatographymass Spectrometry. J. Chromatogr. A 1216 (2009) 28432847
46

LOGO

LOGO

Ph. D. Germn Cuervo Ochoa

Ph. D. Olga Lucia Hoyos Saavedra

Qco. Omar Miguel Portilla

Ph. D. Luis Alberto Lenis

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TCNICAS DE IONIZACIN

TCNICAS DE IONIZACIN

POLARIDAD VS IONIZACIN

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ANALIZADORES

ANALIZADOR DE TIEMPOS DE VUELO (TOF)

ASISTENCIA COMPUTACIONAL

Cromatografa Gaseosa (CG)

Cromatografa Liquida De Alta Resolucin (CLAR)

Cromatografa Liquida (LC)

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Sensibilidad

LOD 3 Sbl/m

LOQ 10 Sbl/m

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CAPSAICINA

TOXICIDAD CAP

(4,5-dimetoxibencil)-4-meiloctamida DMBMO

Oxidacin catalizada Por Hierro

La peroxidacin lipdica se relaciona con la formacin de radicales libres reactivos e inestables a nivel de membrana celular

CLAR-MS

COMPOSICIN QUMICA

Son Amidas
Son los responsables del Sabor Picante

Condensacion con acidos Grasos

2. COMPOSICIN QUMICA

Variedad
Poco Picantes Picantes Suaves Fuertemente Picantes

[Capsaicinoides]
0.003-0.01% 0.01-0.3% >0.3%

70

3. CAPSAICINA
Biosintesis

4. ELECTROQUIMICA
Como Ocurre???

72

4. ELECTROQUIMICA
Como Ocurre???

73

II. TCNICAS INSTRUMENTALES

Las Columnas

GC HPLC
74

CLAR-DETECTORES
Ultravioleta (UV)

75

CLAR-DETECTORES

Arreglo de Diodos (DAD)

76

CLAR-DETECTORES
Deteccin Electroqumica (ECD)

77

Detector de Masas (MS)

Interface

78

Detector de Masas (MS)

79