Determinacin de Nitritos

13/07/12

ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN VISIBLE (VIS) Determinacin de Nitritos (NO2)

A. FUNDAMENTO El mtodo se basa en la interaccin de la energa radiante con la materia, reforzado por la Ley de Lambert Beer, para el cual existe una relacin entre la intensidad de luz incidente con la luz, transmitida en funcin de la concentracin del analito a ser determinado.

B.

OBJETIVOS Tratamiento de la muestra de embutidos Elaboracin de la curva de calibracin para nitritos (NO2) Determinacin de la concentracin e nitritos en las muestras de embutidos y agua.

C. MARCO TERICO

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ULTRAVIOLETA-VISIBLE Por espectrofotometra visible entendemos a un mtodo especfico que es el encargado del anlisis ptico. Se trata de un sistema empleado frecuentemente en las investigaciones biolgicas. En cuanto a la operacin que emplea, se utiliza un espectrofotmetro, es decir, una herramienta que se ocupa de la comparacin en las radiaciones que absorbe o que trasmite una determinada solucin, la cual adems posee una cantidad de soluto que es desconocida, con aquellas radiaciones que, por el contrario, cuentan con una cantidad conocida de la sustancia de soluto tambin. La espectrofotometra de absorcin en las regiones ultravioleta y visible del espectro electromagntico es, posiblemente, la ms utilizada en la prctica del anlisis cuantitativo de todas las tcnicas espectroscpicas. Asimismo, puede resultar de utilidad como tcnica auxiliar para la determinacin de estructuras de especies qumicas. Se basa en la absorcin de radiacin ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energa en forma de calor, en un proceso que esquemticamente puede representarse as: X + h > X* > X + calor La cantidad de calor disipado es muy pequeo, por lo que el mtodo tiene la ventaja de originar un trastorno mnimo en el sistema que se estudia. El trmino generalmente empleado CC y Anlisis Qumico Instrumental (Prctica)

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en la medida de la radiacin absorbida es el de absorciometra, si bien, normalmente se utiliza la denominacin de colorimetra cuando se trabaja en la region visible del espectro electromagntico y se emplean aparatos que utilizan filtros (ver ms adelante) para seleccionar la radiacin utilizada*. Por otra parte, el trmino espectrofotometra suele aplicarse cuando la radiacin utilizada se extiende a las regiones ultravioleta e infrarroja, y adems, se utilizan monocromadores en lugar de filtros, as como sistemas de deteccin ms sensibles, como tubos fotomultiplicadores. En cuanto a la regin ultravioleta, hay que indicar que la zona de mayor inters en la prctica analtica ordinaria es la denominada como ultravioleta prximo (longitud de onda entre 200 y 400 nm), pues el ultravioleta lejano o ultravioleta de vaco (de 10 a 200 nm) presenta el inconveniente de que oxgeno atmosfrico absorbe en esa regin, siendo necesario eliminarlo del instrumento de medida. Debido a ello, la espectrofotometra en esa regin espectral no se ha desarrollado suficientemente.
* En sentido estricto, un colormetro es un instrumento que compara el color de una sustancia con el de una disolucin de referencia usando el ojo humano como detector, si bien, en la prctica, esta denominacin suele aplicarse a muchos fotmetros de filtro con sistemas de deteccin elctricos.

LEYES DE LA ABSORCION DE RADIACION Cuando un haz de radiacin monocromtica de una determinada longitud de onda atraviesa una capa de disolucin conteniendo una especie absorbente, la potencia (energa por unidad de tiempo y unidad de rea) del haz incidente Po se atena, disminuyendo hasta P (figura 3.1.) Se define la transmitancia, T, como la fraccin de radiacin incidente que consigue atravesar la muestra. Vara de 0 a 1 y puede expresarse tambin como porcentaje:

Un parmetro de mayor utilidad prctica es la absorbancia, A, definida como

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Obsrvese que cuando no hay absorcin de radiacin, P=Po y entonces, A=0, mientras que si se absorbe el 99 %, solo se transmite el 1%, con lo que A=2. Para una capa de disolucin absorbente de espesor infinitamente pequeo, db, (Figura 3.1.) la disminucin de la potencia radiante, dP, es proporcional a la propia potencia incidente, P, a la concentracin de la especie absorbente, C, y al espesor db: dP = k P C db Donde k es una constante de proporcionalidad. Reagrupando la ecuacin anterior e integrando, se obtiene:

donde, = k/2.3. La expresin, A=bC se denomina ley de Beer. Es fundamental en anlisis cuantitativo al relacionar la absorbancia con la concentracin. LA LEY DE LAMBERT-BEER Establece que la absorbancia est directamente relacionada con las propiedades intrnsecas del analito, con su concentracin y con la longitud de la trayectoria del haz de radiacin al atravesar la muestra. La expresin matemtica de la ley de Lambert-Beer es: A=C. .L Donde: A = Absorbancia de la muestra

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C = Concentracin del cromforo L = Longitud del paso ptico que contiene la muestra = Absorptividad molar. Depende del cromforo en si mismo, de la y de las condiciones de medida (pH, T...). Ya que

la absorbancia es adimensional las unidades son concentracin-1 longitud-1.

La constante recibe el nombre de absortividad molar, cuando la concentracin se expresa en moles/litro y el camino ptico, b, en centmetros. La absortividad es una propiedad caracterstica de la sustancia absorbente y depende de la longitud de onda. Por ello, para aplicar la ley de Beer debe seleccionarse una determinada longitud de onda, y para este propsito se utiliza el espectro de absorcin, siendo ste una grfica que indica la variacin de la absorbancia, o de la absortividad, con la longitud de onda.

ABSORBANCIA (A) Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esta luz es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo. A mayor cantidad de luz absorbida, mayor ser la absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz ser transmitida por dicho cuerpo. Como se ve, la absorbancia y la transmitancia son dos aspectos del mismo fenmeno. La absorbancia, a una determinada longitud de onda lambda, se define como:

Donde I es la intensidad de la luz que pasa por la muestra (luz transmitida) y I0 es la intensidad de la luz incidente. La medida de la absorbancia de una solucin es usada con mucha frecuencia en laboratorio clnico, para determinar la concentracin de analitos tales como colesterol, glucosa, creatinina y triglicridos en sangre. Cada uno de estos analitos se hace reaccionar qumicamente con determinados compuestos, a fin de obtener una solucin coloreada. A mayor intensidad de color, mayor ser la absorbancia de la solucin en una determinada longitud de onda. La absorbancia es entonces directamente proporcional a la concentracin del analito en sangre.

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Para medir esta absorbancia, se hace incidir un haz de luz con determinada intensidad y longitud de onda, sobre la solucin, y se mide la luz transmitida al otro lado de la cubeta que contiene dicha solucin. Estas tcnicas estn comprendidas en el rea de la espectrofotometra.

TRANSMITANCIA (T) La transmitancia se define como la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en determinada cantidad de tiempo. Existen varios tipos de transmitancia, dependiendo de qu tipo de energa consideremos. La transmitancia ptica se refiere a la cantidad de luz que atraviesa un cuerpo, en una determinada longitud de onda. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esa luz es absorbida por el mismo, y otra fraccin de ese haz de luz atraversar el cuerpo, segn su transmitancia. El valor de la transmitancia ptica de un objeto se puede determinar segn la siguiente expresin:

I es la cantidad de luz transmitida por la muestra e I0 es la cantidad total de luz incidente. Muchas veces encontraremos la transmitancia expresada en porcentaje, segn la frmula:

Podemos hablar de transmitancia trmica como la cantidad de energa en forma de calor que atraviesa un cuerpo, en cierta unidad de tiempo. Si tenemos en cuenta un cuerpo con caras planas y paralelas, y entre sus caras hay una diferencia trmica, esta diferencia constituye la transmitancia trmica del cuerpo. La transmitancia trmica es el inverso de la resistencia trmica. Se puede definir segn la siguiente frmula:

En esta expresin tenemos que U = transmitancia en W/m2. Kelvin S = superficie del cuerpo en m2. CC y Anlisis Qumico Instrumental (Prctica)

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K = diferencia de temperaturas en grados Kelvin. El concepto de este tipo de transmitancia es aplicado en los clculos para construir aislamientos trmicos y para calcular prdidas de energa en forma de calor. Tambin se toman en cuenta estos conceptos al momento de calefaccionar una habitacin, ya que hay que calcular qu potencia se necesitar en un determinado perodo, para lograr una cierta temperatura en la habitacin, teniendo en cuenta la prdida de calor debido a la transmitancia de las paredes de la habitacin.

CURVA DE CALIBRACIN Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas de una sustancia que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia presente en una muestra incgnita. En muchas determinaciones se cumple una relacin proporcional entre la magnitud o intensidad de color que da una reaccin y la cantidad del reactivo que la provoca. Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de protenas en una solucin genera la aparicin de un color azul plido cuando es agregada a una mezcla reactiva, la presencia de 20 ug de protena dar lugar a que la solucin se torne azul ms oscuro y as sucesivamente. Dado que se ha trabajado con datos reales, los grficos que se obtienen no son tan ideales, pero esta situacin no es un obstculo ya que dentro de ciertos valores es posible trazar la recta ms probable que une una serie de puntos, con el uso de los programas de clculo de las computadoras.

Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de concentraciones posibles sino dentro de un conjunto de valores que dependen de numerosos factores dependientes del mtodo de medicin. Por otra parte, este tipo de curvas no se limita solamente a la determinacin de un elemento o compuesto qumico sino que tiene mltiples aplicaciones.

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Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones de diferentes concentraciones del mismo, determinndose para cada una de ellas el valor de absorbancia a max. Estos valores de absorbancia se representan en el eje de abscisas (eje de x) y los de concentracin en el eje de ordenadas (eje de y). Se observar que, a bajas concentraciones, el aumento de concentracin se corresponde con un incremento lineal en la absorbancia (zona de cumplimiento de la ley de Lambert-Beer). A concentraciones altas la linealidad se pierde y se observa que la lnea se aplana, por lo que las medidas son poco fiables. La representacin de Lambert-Beer, A = cl, nos permitir calcular el valor del coeficiente de extincin molar, que corresponde a la pendiente de la recta.

ESPECTROS DE ABSORCIN El espectro de absorcin es una representacin grfica que indica cantidad de luz absorbida () a diferentes valores de . A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima entra dentro del rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solucin de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se obtendr el valor de al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (max). Dicho se utilizar a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El espectro de absorcin de un cromforo depende, fundamentalmente, de la estructura qumica de la molcula.

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No obstante, hay una gran cantidad de factores que originan variaciones en los valores de max y M, entre los que se incluye el pH, la polaridad del solvente o molculas vecinas y la orientacin de los cromforos vecinos; y cada uno afecta de forma particular. Por ejemplo, variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto de ste sobre la ionizacin del compuesto. A continuacin se muestran como ejemplo los espectros de absorcin de HNTS (un reactivo empleado para la determinacin de especies oxidantes) y comprobndose que por espectrotometra se puede seguir el efecto que ejercen el pH y los oxidantes.

D. PARTE EXPERIMENTAL Materiales y Equipos Fiolas Pipetas Probetas Vasos de Precipitado Bomba al bacio Kitasato Embudo de vidrio Mortero y pilon Papel filtrante Espectrofotmetro Marca Jenway Otros.

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Reactivos Solucin Patrn de NO (10 ug/ml) Solucin de Sulfanilamida (R1) Solucin de N- Naltiletilendianmida ioduro alcalino (R2) Solucin de Acido Brico al 5% Solucin de Acetato de Zinc al 30% Solucin de Ferrocianuro de Potasio al 15%

Muestras M1 = Muestra de embutido M2 = Agua de pozo M3 = Agua de cao

E. METODOLOGA 1. ELABORACIN DE LA CURVA DE CALIBRACIN PARA NITRITOS (NO2) a) En 05 fiolas de 50 ml cada una, preparar soluciones de nitritos a diferentes concentraciones, segn se indica a continuacin: b) Determinar la cantidad de alcuota requerida para cada concentracin. Medir los volmenes con una pipeta y verter en las fiolas segn sea el caso. c) Enrasar las fiolas de 50 ml con agua destilada. En caso de la fiola B (blanco) solo debe contener agua destilada. d) A cada solucin se le agrega 1 ml de R1 Y 1 ml de R2, se homogeniza y se deja 10 minutos para que estabilice la coloracin. e) Lleve las soluciones al espectofotmetro. Realice la lectura de las absorbancias en el equipo. f) Con los datos obtenidos de absorbancia y concentracin (A vs C) elabore el grafico de la curva de calibracin para nitritos. Determine la ecuacin lineal para la correccin de la recta respectiva. 2. PARA MUESTRAS DE EMBUTIDO a) Pesar 5g. del embutido elegido y triturado en un mortero. Colocar la muestra triturada en un vaso de pp. Y adicionar agua destilada hasta un enrase de 100 ml. Luego se le agrega 5 ml de cido brico al 5%. b) Se calienta a bao mara por 15 minutos aprox. Y se le adiciona 2 ml de acetato de Zinc y 2 ml. De ferrocianuro de la muestra diluida con ayuda de una bomba al vacio. c) El lquido filtrado se pasa a una probeta y se enrasa a 100 ml con agua destilada. CC y Anlisis Qumico Instrumental (Prctica)

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d) Tomar 50 ml. De la solucin en una fiola y adicionarle los reactivos R1 Y R2 1ml cada uno respectivamente. Luego homogenizar y esperar 10 minutos para la estabilizacin del color. e) Hacer la lectura de la Absorbancia junto con las de la curva de calibracin. f) En base al grafico de la curva de calibracin para nitritos determinar la concentracin correspondiente para la muestra en mg. De NO2 /kg de embutido.

3. PARA MUESTRAS DE AGUA. a) Tomar 50 ml de las muestras de agua en fiolas, adicionar 1 ml de R1 y 1ml de R2. b) Homogenizar las muestras con los reactivos adicionados y esperar a que se estabilice el color. c) Hacer las lecturas de las absorbancias en el equipo junto con las de la curva de calibracin para nitritos. d) En base al grfico de la curva de calibracin determinar la concentracin de nitritos en las muestras de agua expresados en ppm.

F. CLCULOS

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G. BIBLIOGRAFA http://www.basculasbalanzas.com/instrumentos-de-medicion/espectrofotometria-visible.html http://www.ucm.es/info/ucmp/cont/descargas/documento29009.pdf http://ocw.upc.edu/sites/default/files/materials/15014297/46338-4424.swf http://es.scribd.com/doc/28122506/EspectrofotometrIa-de-AbsorciOn-Ultravioleta-Visible http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieriaquimica/contenidos/course_files/Tema_3.pdf http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/transmitancia-y-absorbancia http://repositorio.innovacionumh.es/Proyectos/P_22CursoMateriales/Miguel_Angel_Sogorb/ Wimba/Espectroscopia_05.htm http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/meiq/perez_l_oa/capitulo8.pdf http://es.scribd.com/doc/28122506/EspectrofotometrIa-de-AbsorciOn-Ultravioleta-Visible

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