Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales

Lic. PEDRO ELAS PATIO MARTNEZ Lic. EDGAR ENRIQUE RAMREZ PARRA

Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales Universidad de Santander Telfono (57) 6516500 Ext 253 Fax (57) 6516492

BUCARAMANGA 2006

Justificacin
Durante el proceso de formacin del estudiante de la UDES, los conceptos tericos requieren ser corroborados mediante la experimentacin los cuales muchos de ellos se privilegian al interior de las prcticas de laboratorio. Para dichas prcticas el alumno debe utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos qumicos los cuales son preparados por laboratoristas o docentes. La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos qumicos requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parmetros para cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de prepararlos y cuidados bsicos. El presente manual permitir a los laboratoristas o docentes tener una gua para la preparacin de las diferentes soluciones utilizadas en las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Fsicas y Naturales

Pedro Patio

CUIDADOS BASICOS Y NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL

La preparacin de las soluciones es un Proceso que requiere todos los cuidados bsicos posibles y el cumplimiento de normas de Bioseguridad personal, ya que en dicha preparacin se esta expuesto a qumicos que son altamente txicos y nocivos para la salud humana CUIDADOS BASICOS

Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente nivelada y calibrada. Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar completamente limpia. La vidriera donde se preparan los soluciones debe estar completamente limpia y en algunos casos estril. Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos oscuros para evitar procesos de oxidacin por accin de la luz. Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre, concentracin, fecha de preparacin, fecha de vencimiento y cdigo de riesgos. Siempre se deben mezclar lentamente los cidos fuertes sobre el agua. La preparaciones de cidos fuertes o reactivos voltiles debe hacerse en las campanas extractoras de gases. NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL

Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la preparacin que se realice Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que se prepare una solucin. No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.

En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de la zona de preparacin de reactivos o fuera de esta y consultar un mdico.

SOLUCIONES
AGUA DE BROMO Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de bromo en tetracloruro de carbono. Cuidados: solucin altamente txica para el organismo

Uso: Para determinacin de compuestos orgnicos ACETO-ORCEINA Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de cido Actico Glacial y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullicin por 2 minutos, dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses Cuidados: Txicos y corrosivos

Uso: Para tincin de material nuclear (cromosomas)

ACETO CARMIN Pesar 0,5 gr de carmn, adicionarle 45 ml de cido actico glacial y completar con 55 ml de agua destilada
Uso: Para tincin de material nuclear (cromosomas)

Cuidados: Txicos

y corrosivos

ACIDO CLORHIDRICO 2.5 N

Medir 20.75 ml de HCl 37%, aforar a 100 ml con H2O destilada

Cuidados: Txicos y corrosivo Uso: En pruebas de divisin celular (mitosis) ALCOHOL- CETONA Medir 70 ml de Alcohol Etlico absoluto y completar a 100 ml de solucin con Acetona pura
Cuidados: Comburente Uso: Decolorante para la coloracin de Gram

ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y completar a 100 ml con agua destilada Cuidados: Txicos corrosivos

Uso: Para titulacin cidobase y pruebas cualitativas de pH.

ACIDO SULFURICO 1 M Medir 49 ml de cido Sulfrico destilada y aforar a 1000 ml con agua

Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Para titulacin cidobase ACIDO ACETICO 1 N Medir 60.05 ml de cido actico 100% y aforar a 1000 ml con agua destilada.

Cuidados: Txicos

corrosivos

Uso: Pruebas cualitativas de pH.

AZUL DE METILENO 1% Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada hasta obtener una solucin uniforme

Cuidados: Txicos Uso : Para tincin de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos vegetales, pruebas de difusin celular

ALCOHOL ACIDO 3% Medir 97 ml de alcohol etlico absoluto, adicionarle con mucho cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de cido Clorhdrico al 37%

Cuidados: Comburente y corrosivos

Uso: Para coloracin de Microbiolgica ACIDO OXALICO 1 N Pesar 6,3 gr de cido oxlico y aforar a 100 ml con H2O destilada Uso: Para titulacin de cido-base ACIDO NITRICO 3M Medir 50 ml de Agua Destilada, adicionarle 29.1 ml de cido ntrico al 65% luego completar a 100 ml con H2O destilada

Cuidados: Txicos y corrosivos

AZUL DE BROMOTIMOL Pesar 0.1 gr. de azul de bromotimol y diluirlo en 100 ml de alcohol etlico al 20 % Uso: Indicador para titulacin cido-base

BARFOED Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H2O, luego adicionarle 1.8 ml de cido actico glacial

Cuidados: Txicos y corrosivos

Uso: Diferenciacin los Monosacridos reductores de los Disacridos reductores BIAL Pesar 1.5 gr. de orcinol y disolverlo en 500 ml de HCl concentrado y aadir 20 gotas de Fe Cl3 1%

Cuidados: Txico y corrosivo

Uso: Para identificar pentosas BIURET Pesar 3 gr. de CuSO4 .5H2O, adicionarle 9 gr. de tartrato de sodio y potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Aadir 5 gr. de KI y completar a 1000 ml con NaOH . (NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua) Uso: Para determinacin de protenas(Enlace peptdico)

Cuidados: Txico y corrosivo

BENEDICT Solucin A: Pesar 173 gr. de Citrato de sodio, adicionarle 100 gr. de Na2CO3 completar a 800 ml de H2O destilada. Filtrar y completar hasta 850 ml de H2O. Solucin B: Pesar 17.3 gr de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua destilada Disolver suavemente la solucin B en la A agitando continuamente. Uso: Para determinacin de carbohidratos reductores

Cuidados: Txico y corrosivo

BUFFER DE FOSFATOS Solucin I: Pesar 13.8 gr. De NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de H2O destilada Solucin II: Pesar 35.85 gr. De Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de H2O destilada Mezclar 212.5 ml de solucin I + 37.5 de solucin II y aforar a 500 ml con H2O destilada

Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA

corrosivos

BUFFER LISIS II Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M pH 8.0 y adicionarle 0.438 gr NaCl y aforar a 1000 ml con agua destilada

Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA

corrosivos

BUFFER LISIS I Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100, adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. pH 7.5 y 5 ml de MgCl2 1M aforar a 1000ml con H2O destilada destilada. (Tris-HCl 10mM. PH 7.5)=0.15756 gr 100 ml s/n Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x 100+ 5 ml tris + 2.5 ml Mgcl2 1M).

Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA

corrosivos

BFER DE EXTRACCIN Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 100 mM, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mM, BMercaptoetanol 10 mM y SDS 1.3%. Completar con agua destilada en baln aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar

Cuidados: Txicos
Uso: Extraccin de DNA

corrosivos

BFFER DE DILUCIN (TE) Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl pH 8.0 50 mM, EDTA 10 Mm Completar con agua destilada en baln aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar

Cuidados: Txicos corrosivos Uso: Extraccin de DNA

BFFER TBE 5X Mezclar las siguientes sustancias: Pesar 54 gr. de Tris Base, adicionarle 20 ml de EDTA 0.5 M y 27,5 gr de cido Brico Completar con agua destilada en baln aforado a la cantidad necesaria, posteriormente autoclavar

Cuidados: Txicos corrosivos Uso: Extraccin de DNA

BUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA Solucin A : Fosfato cido de disodio (Na2HPO4 ) 0.2 M Solucin B : cido ctrico (C6H8O7. H2O) 0.1 M BUFFER pH 5.0 (515 ml S/N A + 485 ml S/N B). BUFFER pH 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B) BUFFER pH 8.0 (972,5 ml S/N A + 27.5 ml S/N B). CLORURO DE SODIO 0.1 M Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membranas

DAMASHECK Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15 gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H2O destilada. Adicionarle 3 gotas de formol 37 % Uso: Para recuento de reticulocitos | DRABKIN Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de bicarbonato de sodio (NaHCO3) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio (K3Fe(CN)6) Completar a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Para Recuento en Hematolgico

Cuidados: Txicos

corrosivos

2,4 DINITROFENILHIDRIZINA Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H2SO4 concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol absoluto, decantar y utilizar el filtrado. Uso: Indicador

Cuidados: Txicos

DISOLUCION DE FERROCIANURO Pesar 1.65 gr. de K3(Fe(CN)6) recristalizado, adicionarle 10.6 gr. carbonato de sodio anhdrido y aforar a 1000 ml de H2O destilada. Guardar en frasco oscuro (duracin 2 meses) . Uso: Indicador

Cuidados: Txicos

ETANOL 0.6 M Medir 34.9 ml de alcohol etlico absoluto y completar a un 1 litro de solucin con H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membrana. ERLICH (PRUEBA) cido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solucin de NaNO3 0.5% y Na2CO3 FOUCHER 25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H2O y 10 ml de cloruro frrico al 10 %

FEHLING

A y disolverlo en 500 ml

Pesar 34.6 gr. de CuSO4 .5 H2O (vitriolo azul) de H2O destilada

Cuidados: Txicos Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para determinacin de azucares reductores
FEHLING B

Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le aaden 62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H2O

Cuidados: Txicos

y corrosivo

Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinacin de azucares reductores FENOLFTALEINA Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico al 96 % Uso: Indicador cido-Bsico Cuidados: Txicos

GLUCOSA 0.1 M Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membrana. GLICEROL 0.6 M Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Uso: Para Fenmenos de membrana.

HAYEN 2.5 gr. de sulfato de sodio 0.5 gr. de cloruro de sodio 0.25 gr. cloruro de mercurio completar a 1000 ml de H2O HIDROXIDO DE SODIO 1M Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H2O destilada Nota: La disolucin del NaOH en el agua se debe realizar en la cmara extractora de gases Uso: Diferentes usos, principalmente Titilacin cido-Bsico Cuidados: Corrosivo JUGO GASTRICO ARTIFICIAL Medir 40 ml de cido Actico 0.1 N, adicionarle 15 ml de cido Clorhdrico 0.1 N y aforar a 100 ml con agua destilada Uso: Titilacin cido-Bsico Cuidados: Corrosivo

LUCAS Pesar 17 gr. de ZnCl2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en bao fro, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen y guardar en nevera. Uso: Diferenciacin de alcoholes primarios, secundarios y terciarios Cuidados: Txico y corrosivo

LUGOL Tejidos vegetales 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 100 ml de agua destilada Uso: Colorante Parsitos 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 300 ml de agua destilada

Cuidados: Corrosivo
LIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H2O destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37% MILLON Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO3 concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja sedimentar y se decanta (preparacin en cmara extractora ).

Cuidados: Corrosivo

MOLISCH Pesar 50 gr. de naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95% (estable 1 semana) Uso: Para determinacin general de Azucares Cuidados: Txico y corrosivo

MEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA) Medir 500 ml de H2O destilada y adicionar lentamente 250 ml de H2SO4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le mezcla dicromato de potasio y finalmente s afora a 1000 ml con H2O destilada. Uso: Limpieza de material con restos carbnicos

Cuidados: Corrosivo

METIL NARANJA Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico al 20 % o en 100 ml de H2O destilada Uso: Indicador cido Bsico Cuidados: Txico

NESSLER Pesar 15 gr. de HgI2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H2O. Esta disolucin se vierte en el vaso con HgI2 , disolver muy bien con agitacin. En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H2O Luego se le adiciona la otra solucin y se agita, al final decantar y separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo) Cuidados: Txico

NITRATO DE PLATA

0.1 N

Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua destilada. Uso: Determinacin de cloruros (formacin de un precipitado blanco) Cuidados: Txico y corrosivo

NYLANDER Pesar 2 gr. de nitrato dibsico de bismuto y adicionarle 4 gr. de tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve para disolucin completa de la sal , se enfra y se separa por filtracin.

NINHIDRINA 0.2% Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona Uso: Determinacin del grupo amino de aminocidos y protenas

Cuidados: Txico

y corrosivo

NEGRO DE ERICROMO Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico al 96 % (o triturarlo con solucin al 1 % de cloruro de sodio) Uso: Indicador

Cuidados: Txico

O-TOLUIDINA Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego disolverlos hasta completar a 1000 ml con cido actico al 95 %

Cuidados: Txico

ROJO CONGO 5%

destilada

Pesar 5 gr. de rojo congo y disolverlo en 100 ml de H2O

Uso: Para reconocimiento de lpidos Cuidados: Txicos ROJO DE METILO Pesar 0.1 gr. de rojo de metilo y completar a 100 ml de alcohol etlico al 96 % Uso: Indicador cido Bsico Cuidados: Txico

REACTIVO DE SCHIFF Pesar 2 gr. de fucsina bsica y disolverlo en 400 ml de H2O hirviendo, enfriar a 50 C luego aadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de metasulfito de potasio, 1 gr. de carbn activado filtrar y adicionarle 10 ml de HCl 2N Almacenar en frasco oscuro y en nevera SELIVANOFF Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de cido Clorhdrico al 20% Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa)

Cuidados: Txicos

corrosivos

SOLUCION DE RINGER(Holfretter) ( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H2O destilada Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H2O destilada (1:9)

SOLUCION PATRON DE LIPIDOS Pesar 1 gr. de cido esterico y disolver en 100 ml de cloroformo Uso: Determinacin de lpidos

Cuidados: Txico

corrosivos

SOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l ) Pesar 3.6 gr. de KIO3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H2O destilada, aadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de solucin. Conservar a 4 C. Uso: Determinacin de lpidos

Cuidados: Txicos

SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS MICROSCOPICAS Proporcin 1: 3 1 ml de cido actico en 3 ml de alcohol etlico

SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO4 Pesar 0.05745 gr. de KmnO4 y disolverlo en 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra y calibracin del espectrofotmetro

Cuidados: Txicos
SOLUCION 30 ppm DE K2Cr2O7 EN KOH 0.05 N Pesar 2.8 gr. de KOH y 0.030 gr de dicromato de potasio (K2Cr2O7) y llevarlo a 500 ml de solucin con agua destilada. Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra

Cuidados: Txico

corrosivos

SOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO4 Pesar 71.8 mg de KMnO4 y llevar a 500 ml de solucin con H2O destilada Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra

Cuidados: Txico

SACAROSA 0.1 M 3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solucin con H2O destilada Conservar en Nevera a 8 grados

SUDAN III 0.2% Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etlico al 70%, se mezclan(calentando en bao de Mara a 90 grados centgrados) y se dejan en reposo durante 24 horas. Uso: Para coloracin de cutcula y gotas de grasa en clulas vegetales

Cuidados: Txico

SUDAN III 1 gr. de sudan en polvo +30 ml de cido actico y completar con 70 ml de H2O. (calentar para lograr una mejor disolucin) Uso: Para determinacin de lpidos por solubilidad en muestras biolgicas

Cuidados: Txico

SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER pH 7 Pesar 13.3 gr. de Na2HPO4 y 4.3 gr. de cido benzoito, llevar a 250 ml de H2O destilada, calentar y aadir 0.2 gr. de almidn y 5 ml de H2O destilada y completar a 500 ml con H2O destilada y conservar a 4 C. SULFATO DE COBRE (CuSO4) 2000ppm Pesar 2 gr. de CuSO4 y llevar 1000 ml de H2O destilada Uso: Elaboracin de curvas para espectrofotometra

Cuidados: Txico

SULFATO 100 ppm Pesar 0.1825 gr. de K2SO4 en un litro de H2O destilada TIONINA Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y completar a 100 ml con H2O destilada. Uso: Para coloracin de tejidos vegetales

Cuidados: Txico

TOLLENS Solucin A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada Solucin B: Preparar 20 ml de NaOH al 10% Mezclar Solucin A y Solucin B, luego adicionarle amoniaco concentrado hasta disolver el precipitado. Guardar preferiblemente en frasco oscuro Uso: Para formacin del espejo de plata

Cuidados: Txico

corrosivos

TURK
100 ml de cido actico al 3% + 3 gotas de azul de metileno TIMOL AL 1 % Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etlico absoluto Uso: Indicador de pH

Cuidados: Txico

TIMOLFTALEINA

Pesar 0.1 gr. de tiomolftaleina en 100 ml de alcohol etlico al 50 %

TANRED
Solucin A: 18 gr. KI + 200 ml de H2O destilada. Solucin B: 6.75 gr. de HgCl2 +200 ml de H2O destilada La solucin B se disuelve sobre la A, agitar hasta que desaparezca el naranja , completar con cido actico glacial hasta 500 ml.

Cuidados: Txico
VIOLETA DE METILO Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etlico al 20 % Uso: Indicador de pH

WRIGHT Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a poco 60 ml de Metanol Analtico y homogenizarlo, dejarlo en maduracin por lo menos ocho (8) das. Filtrarlo cada dos meses Uso: Colorante para identificacin de Clulas Sanguneas

Cuidados: Txico

Bibliografa
Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos qumicos 20052007. Frankfurter Strabe 250 64293 Darmstadt.GERMANY. J.T.Baker.Catalog 2004-2005.Tyco Specialty Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA. Promega, Life Science Catalog-2004 Merck, Productos de Laboratorio para la prctica-IndicadoresSustancias patrn primario. Patio, Pedro; Edgar Ramrez, Manuel de Preparacin de Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002 Plumer, David; Introduccin a la Bioqumica Prctica. McGraw Hill Products.2003